JP6764790B2 - 視神経脊髄炎の治療に対する高可溶性アクアポリン−４細胞外ループペプチド免疫化 - Google Patents

視神経脊髄炎の治療に対する高可溶性アクアポリン−４細胞外ループペプチド免疫化 Download PDF

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Description

関連出願の相互参照
本発明は、２０１４年５月１９日付出願の「視神経脊髄炎の治療に対する高可溶性アクアポリン−４細胞外ループＣペプチド免疫化」と題される米国仮特許出願番号第６２／０００，３５６に対する優先権及び米国特許法第１１９条（ｅ）の利益を主張する。上述の特許出願の全内容は、この参照により本明細書に援用される。
参照による援用
本明細書において引用又は参照される全ての文書、及び本明細書において引用される文書において引用又は参照される全ての文書は、本明細書又は本明細書において参照により援用される任意の文書において言及される任意の製品に関する任意の製造業者による指示書、説明書、製品仕様書、及び製品シートと共に、参照により本明細書に援用され、本明細書の実施において採用され得る。
連邦支援による研究
この成果は、国立衛生研究所神経疾患及び脳卒中研究所による助成金ＮＳ０７８５５５によって支持された。政府は、本発明において一定の権利を有する。
技術分野
本発明は、概して神経障害及びその治療に関し、特に、抗原に基づくペプチド及び視神経脊髄炎（ＮＭＯ）を治療するための該ペプチドを含む医薬組成物に関する。
デビック症候群としても知られる視神経脊髄炎（ＮＭＯ）は、重篤な脱力、麻痺、呼吸不全、腸及び膀胱の機能の喪失、失明、及び早期死亡をもたらす、破壊的で生命の危険のある非常に希少な神経疾患である。再発性の及び同時に起こる炎症、並びに視神経（視神経炎）及び脊髄（脊髄炎）の脱髄からなる不均一な状態として特徴づけることができ、これらの組織に対して特徴的なＮＭＯ病変の形成を引き起こす。ＮＭＯを有する患者は、終生繰り返される自己免疫による攻撃のエピソードを有し、大半の患者はそれぞれの攻撃が神経障害を付加するため、累積的な障害を伴う、予測できない再発性の一連の疾患を経験する。ＮＭＯは、単相性と再発性の両方の形態を有するが、再発性の形態は９０％超の症例を含む。ＮＭＯは、１００，０００の集団当たり推定有病率０．３２〜２．５である奇病であり、アメリカ合衆国においておよそ４，０００名がこの病気に冒されている。
ＮＭＯは自己免疫障害とされる。該疾患は、障害の特徴である関連する炎症及び脱髄プロセスを引き起こす、視神経及び脊髄の星状細胞に位置する星状細胞水チャネルタンパク質であるアクアポリン−４（ＡＱＰ４）に対する自己免疫反応を含むと考えられる。しかしながら、自己免疫原性のプロセスの正確な性質は十分に理解されていない。
残念なことに、ＮＭＯに対する治癒はない。現在の管理は、主に攻撃の頻度及び重症度を減らそうとする試みで免疫抑制を使用することに焦点を当てる。医師は、一般的に、攻撃を停止するための副腎皮質ステロイド薬（例えば、メチルプレドニゾロン）と後の攻撃を予防するための免疫抑制薬（例えば、アザチオプリン）の組み合わせによってＮＭＯの初期の攻撃を治療する。これらのアプローチにもかかわらず、多くは四肢の障害、可動性の低下、及び失明を伴ったままである。特に、発病から５年以内に、ＮＭＯ疾患を有する患者のおよそ６０％は少なくとも一方の目の永続的な失明を有し、５２％は四肢の少なくとも１つに永続的な脱力を有する。死亡率は、通常、頚髄における横断性脊髄炎による呼吸不全に起因して２５％〜３２％である。
使用可能な治療がないこと、及びＮＭＯに対する治癒がいまだ得られないという事実を考慮すると、当該技術分野においてこの状態を治療及び／又は改善する新たな改良された治療法が必要とされている。本発明は、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）の治療及び／又は改善のため新たに発見された標的、またそれに対する組成物及び方法を提供することによって、この必要性に対処する。
本発明は、部分的には、ＡＱＰ４ノックアウトマウスにおいて病原性Ｔ細胞増殖を誘発することができる独特のアクアポリン−４ペプチド（ループＣ配列、例えばＬＶＴＰＰＳＶＶＧＧＬＧＶＴＭＶＨＧＮ（配列番号８）を含むフラグメント（複数の場合がある）を含むループＣ配列）の同定に関する。この予想外で以前に知られていなかった観察は、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）の治療及び／又は改善のための抗原に基づくペプチド薬の基礎を形成する。したがって、本発明は、ＮＭＯを有する個体における免疫化及び／又は耐性の誘導のための医薬組成物に関する。さらに、本発明は、治療的有効量のループＣ及び／又はループＣ配列含有ペプチド（複数の場合がある）、又は治療的有効量のその変異体及び／又はフラグメントを被験体に投与する又は免疫することによってＮＭＯ患者を治療及び／又は免疫する方法に関する。治療は、リツキシマブ等の薬物による免疫抑制の状況で行われてもよく、単剤療法として行われてもよい。投与は、経口、静脈内、皮下、又は動脈内を含む任意の好適な手段によってもよい。また、免疫は、ループＣ及び／又はループＣ配列含有ペプチドをコードする核酸分子を使用する方法によって考えられる。したがって、また本発明は、ループＣ及び／又はループＣ配列含有ペプチドをコードする核酸分子、並びに個体において抗原として発現されるようにかかる分子を投与するための製剤及び医薬組成物に関する。治療剤製品（複数の場合がある）に加えて、本発明は、少なくとも一部は、ＮＭＯ病のマーカーとして被験体（例えばヒト被験体）においてループＣ活性化Ｔ細胞の存在に関する診断試験に関する。
述べられるように、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）は、主に脊髄及び視神経を標的とする再発性自己免疫疾患であり、麻痺及び失明をもたらす。ＮＭＯは、星状細胞水チャネルであるアクアポリン（ＡＱＰ４）に対する抗体と関連する。後ＡＱＰ４抗体が動物モデルにおいて悪化する病因において病原性の役割を有することが示されたが、ＮＭＯにおけるＴ細胞の正確な役割はわからないままである。しかしながら、Ｔ細胞は、活性なＮＭＯ病変において容易に検出可能であり、ＡＱＰ４応答性Ｔ細胞は高親和性高ＡＱＰ４ ＩｇＧ１抗体の産生に必要である。
最近、ＮＭＯ患者が、抗ＡＱＰ４抗体によって標的化される３つの細胞外ドメインを含む、幾つかの別々のＡＱＰ４の決定的要因に対してＴ細胞反応性を有することがわかった。しかしながら、あるとしても、かかるＴ細胞が疾患の病因において役割を有するかどうかは理解されていなかった。
本発明は、炎症の誘発及び視神経及び脊髄に対する応答の指揮におけるＡＱＰ４応答性Ｔ細胞の潜在的病原性を調査するためマウスにおいてＡＱＰ４応答性Ｔ細胞を作製しようとした。実施例に記載されるように、Ｃ５７ＢＬ６バックグラウンドと戻し交雑された（１４回の交雑）ＡＱＰ４ノックアウトマウスを、ＡＱＰ４の３つの細胞外ループ、すなわちループＡ、Ｃ、及びＥに対応するペプチドで免疫した。
ロバストなＴ細胞応答は、著しいＴ細胞応答、またループＣ含有ペプチドＬＶＴＰＰＳＶＶＧＧＬＧＶＴＭＶＨＧＮ（配列番号８）について観察された表現型（例えば、脊髄炎症に起因する麻痺、視神経炎症）の発現と共に、ループＣペプチドに対してのみ見られたが、いずれのマウスも検出可能な抗ＡＱＰ４抗体を産生しなかった。ループＣ及び／又はループＣ配列含有ペプチドＡＱＰ４応答性Ｔ細胞を野生型マウスに養子移植したところ、９日以内にミエリンタンパク質に対するＴ細胞によって誘導される実験的な自己免疫脳脊髄炎（ＥＡＥ）のモデルに類似する尾及び後肢の脱力を呈した。Ｔｈ１７表現型に対して極性化されたＡＱＰ４応答性Ｔ細胞は、脊髄に加えて視神経において炎症を引き起こす可能性がより一層高かった。組織学は脱髄、Ｔ細胞浸潤、並びに一部の脳の関与も含む脊髄及び視神経全体の小グリア活性化を示した。他の実質臓器におけるＡＱＰ４の広範な発現にもかかわらず、ＣＮＳ外の炎症はこのモデルでは観察されなかった。上記研究の意義は、もっぱら視神経及び脊髄に対する炎症の誘発及び局在の両方における、具体的にはＣループペプチドに対する、特にループＣ配列含有ペプチドＬＶＴＰＰＳＶＶＧＧＬＧＶＴＭＶＨＧＮ（配列番号８）に対するＮＭＯのＡＱＰ４応答性Ｔ細胞の中心的な免疫病原性の役割を指摘し、Ｃループペプチド、任意に配列番号８並びにそのフラグメント、変異体及び誘導体等の特異的Ｃループペプチド（複数の場合がある）、及びＡＱＰ４応答性Ｔ細胞を新たな治療標的として、またＮＭＯに対する診断試験用として示唆する。
したがって、或る一つの態様では、本発明は、治療的有効量のアクアポリン−４（ＡＱＰ４）水チャネルのループＣペプチド、又は治療的に有効なそのフラグメント若しくは変異体を含む、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）を治療するための医薬組成物を提供する。
さらに別の態様では、本発明は、治療的有効量のアクアポリン−４（ＡＱＰ４）水チャネルのループＣペプチド、又は治療的に有効なそのフラグメント若しくは変異体を投与することを含む、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）を有する個体を治療する方法に関する。
さらに他の態様では、本発明は、免疫原的有効量のアクアポリン−４（ＡＱＰ４）水チャネルのループＣペプチド、又は免疫原的に有効なそのフラグメント若しくは変異体を投与することを含む、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）を有する個体において耐性応答を誘導する方法を提供する。
さらに他の態様では、本発明は、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）を有する個体を治療するための医薬キットであって、治療的有効用量のアクアポリン−４（ＡＱＰ４）水チャネルのループＣペプチド、又は治療的に有効なそのフラグメント若しくは変異体と、前記個体を治療するための指示書を備える医薬キットに関する。
さらに他の態様では、本発明は、ＮＭＯ病のマーカーとして、ループＣ配列に対して反応するＴ細胞、すなわち、ループＣ配列含有ペプチド、例えばＬＶＴＰＰＳＶＶＧＧＬＧＶＴＭＶＨＧＮ（配列番号８）に対して反応するＴ細胞に対する診断試験に関する。
特定の実施形態では、アクアポリン−４（ＡＱＰ４）水チャネルのループＣペプチドは、配列番号１、又はそれと少なくとも９０％の配列同一性を有するポリペプチドである。
さらに他の実施形態では、アクアポリン−４（ＡＱＰ４）水チャネルのループＣペプチドは、配列番号１、又はそれと少なくとも５０％、若しくは少なくとも５５％、若しくは少なくとも６０％、若しくは少なくとも７０％、若しくは少なくとも７５％、若しくは少なくとも８０％、若しくは少なくとも８５％、若しくは少なくとも９０％、若しくは少なくとも９５％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するポリペプチドである。
他の実施形態では、アクアポリン−４（ＡＱＰ４）水チャネルのループＣペプチドは配列番号１の変異体である。
或る一つの態様では、本発明は、治療的有効量の、配列番号８と整列させた場合に配列番号８の１７以上のアミノ酸残基を持つ５０又はアミノ酸以下の長さのペプチドを含む、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）を治療するための医薬組成物を提供する。
さらに別の態様では、本発明は、治療的有効量の、配列番号８と整列させた場合に配列番号８の１７以上のアミノ酸残基を持つ５０又はアミノ酸以下の長さのペプチドを投与することを含む、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）を有する個体を治療する方法に関する。
さらに他の態様では、本発明は、免疫原的有効量の、配列番号８と整列させた場合に配列番号８の１７以上のアミノ酸残基を持つ５０又はアミノ酸以下の長さのペプチドを投与することを含む、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）を有する個体において耐性応答を誘導する方法を提供する。
さらに他の態様では、本発明は、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）を有する個体を治療するための医薬キットであって、治療的有効量の、配列番号８と整列させた場合に配列番号８の１７以上のアミノ酸残基を持つ５０又はアミノ酸以下の長さのペプチドと、前記個体を治療するための指示書を備える医薬キットに関する。
特定の実施形態では、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）は単相性視神経脊髄炎（ＮＭＯ）である。他の実施形態では、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）は再発性視神経脊髄炎（ＮＭＯ）である。
さらに他の実施形態では、ループＣ配列含有ペプチドは、配列番号８の１７以上の連続するアミノ酸残基を含む。該ペプチドは、配列番号８であってもよく、又は１個若しくは２個の変異残基を含む配列番号８であってもよく、特定の実施形態では、１個の変異残基を含む配列番号８であってもよい。該ペプチドは配列番号８であってもよい。
さらに他の実施形態では、治療的有効量は耐性応答を誘導するのに十分である。
他の実施形態では、本発明の組成物は免疫抑制療法をさらに含んでもよい。或る場合では、免疫抑制療法は、糖質コルチコイド剤、細胞増殖抑制剤、抗体、イムノフィリン作動剤、インターフェロン、オピオイド、ＴＮＦ結合タンパク質、及びミコフェノール酸から選択されてもよい。さらに他の場合では、免疫抑制療法は、アルキル化剤、ナイトロジェンマスタード（シクロホスファミド）、ニトロソウレア、白金化合物、メトトレキサート、アザチオプリン、メルカプトプリン、フルオロウラシル、タンパク質合成阻害剤、ダクチノマイシン、アントラサイクリン、マイトマイシンＣ、ブレオマイシン、ミトラマイシン、ＩＬ−２受容体に対する抗体、ＣＤ３に対する抗体、ムロノナブ−ＣＤ３、シクロスポリン（Ｓａｎｄｉｍｍｕｎｅ（登録商標））、タクロリムス（Ｐｒｏｇｒａｆ（登録商標））、シロリムス（Ｒａｐａｍｕｎｅ（登録商標））、ＩＦＮ−ベータ、インフリキシマブ（Ｒｅｍｉｃａｄｅ（登録商標））、エタネルセプト（Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標））、アダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ（登録商標））、フィンゴリモド、レフルノミド、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））、ＭａｂＴｈｅｒａ（登録商標）、又はＺｙｔｕｘ（登録商標））、エクリズマブ（Ｓｏｌｉｒｉｓ（登録商標））、インターフェロンベータ−１ａ（Ａｖｏｎｅｘ（登録商標））、ナタリズマブ（Ｔｙｓａｂｒｉ（登録商標））及びマロノニトリルアミド（ＭＮＡ）から選択されてもよい。
別の実施形態では、本発明の医薬キットは免疫抑制療法をさらに含んでもよい。或る場合では、免疫抑制療法は、糖質コルチコイド剤、細胞増殖抑制剤、抗体、イムノフィリン作動剤、インターフェロン、オピオイド、ＴＮＦ結合タンパク質、及びミコフェノール酸から選択されてもよい。さらに他の場合では、免疫抑制療法は、アルキル化剤、ナイトロジェンマスタード（シクロホスファミド）、ニトロソウレア、白金化合物、メトトレキサート、アザチオプリン、メルカプトプリン、フルオロウラシル、タンパク質合成阻害剤、ダクチノマイシン、アントラサイクリン、マイトマイシンＣ、ブレオマイシン、ミトラマイシン、ＩＬ−２受容体に対する抗体、ＣＤ３に対する抗体、ムロノナブ−ＣＤ３、シクロスポリン（Ｓａｎｄｉｍｍｕｎｅ（登録商標））、タクロリムス（Ｐｒｏｇｒａｆ（登録商標））、シロリムス（Ｒａｐａｍｕｎｅ（登録商標））、ＩＦＮ−ベータ、インフリキシマブ（Ｒｅｍｉｃａｄｅ（登録商標））、エタネルセプト（Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標））、アダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ（登録商標））、フィンゴリモド、レフルノミド、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））、ＭａｂＴｈｅｒａ（登録商標）、又はＺｙｔｕｘ（登録商標））、エクリズマブ（Ｓｏｌｉｒｉｓ（登録商標））、インターフェロンベータ−１ａ（Ａｖｏｎｅｘ（登録商標））、ナタリズマブ（Ｔｙｓａｂｒｉ（登録商標））及びマロノニトリルアミド（ＭＮＡ）から選択されてもよい。
特定の実施形態では、ＡＱＰ４のループＣペプチド及び／又は、配列番号８と整列させた場合に配列番号８の１７以上のアミノ酸残基を持つ５０又はアミノ酸以下の長さのペプチドは、該ペプチドを投与されたマウスにおいて神経学的症状を誘導し、神経学的症状は脊髄炎症による麻痺、又は視神経炎症による視力障害であってもよい。本発明の医薬組成物、方法、免疫化組成物又は医薬キットは、マウスにおいて配列番号９が誘導するよりも大きな神経学的症状を誘導するペプチドを含んでもよい。
本発明の別の態様は、被験体においてＮＭＯを検出する方法であって、被験体からＴ細胞及び／又は抗体含有試料を得ること、前記試料と、配列番号８特異的抗体−配列番号８ペプチド複合体の形成を可能とする、又は配列番号８特異的な方式でＴ細胞活性化を可能とするのに十分な量で配列番号８又はそのフラグメント若しくは変異体からなるペプチドとを接触させること、並びに特異的な方式でＴ細胞活性化を検出するか、又は配列番号８特異的抗体−配列番号８ペプチド複合体の形成を検出し、Ｔ細胞活性化又は前記配列番号８特異的抗体−配列番号８ペプチド複合体の形成が、上記被験体がＮＭＯを有することを示し、それによって被験体においてＮＭＯを検出すること、を含む方法を提供する。
或る一つの実施形態では、Ｔ細胞及び／又は抗体含有試料は血液試料である。別の実施形態では、該試料は血漿試料又は他の試料である。
本発明の別の実施形態では、本発明の方法は、被験体にＮＭＯ療法を投与すること、任意に免疫抑制療法及び／又はＡＱＰ４ワクチン若しくは免疫耐性療法を投与することをさらに含み、治療的有効量の、配列列番号８と整列させた場合に配列番号８の１７以上のアミノ酸残基を持つ５０又はアミノ酸以下の長さのペプチドを投与することを含んでもよい。
本発明の別の態様は、被験体においてＮＭＯを検出するキットであって、被験体の試料と接触させた場合にＴ細胞活性化を誘導し、配列特異的な方式のＴ細胞活性化によって被験体におけるＮＭＯを示す、配列番号８と整列させた場合に配列番号８の１７以上のアミノ酸残基を持つ５０又はアミノ酸以下の長さのペプチドと、その使用に関する指示書を備えるキットを提供する。
或る一つの実施形態では、上記ペプチドは配列番号８である。
本発明の更なる態様は、配列番号８と整列させた場合に配列番号８の１７以上のアミノ酸残基を持つ５０又はアミノ酸以下の長さのペプチドをマウスにおいて神経学的症状を作り出すのに十分な量でマウスに投与することによって誘導されるＮＭＯモデルマウスを提供する。
本発明の別の態様は、本明細書に記載されるＮＭＯモデルマウスに試験化合物を投与すること、及び該試験化合物の存在下で、任意に適切な対照と比較して、ＮＭＯモデルマウスにおいてＮＭＯの神経症状の改善を同定することにより、該試験化合物を候補ＮＭＯ治療薬として同定すること、を含む候補ＮＭＯ治療化合物を同定する方法を提供する。上記試験化合物は小分子であってもよく、抗体（ヒト化形態及び／又はそのフラグメントを含む）若しくは他の生物学的製剤（ｂｉｏｌｏｇｉｃ）であってもよい。
すなわち、本発明は、以下の（１）から（８７）に関する。
（１）治療的有効量のアクアポリン−４（ＡＱＰ）水チャネルのループＣペプチド、又は治療的に有効なそのフラグメント若しくは変異体を含む、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）の治療用医薬組成物。
（２）前記視神経脊髄炎（ＮＭＯ）が単相性視神経脊髄炎（ＮＭＯ）である、前記（１）に記載の医薬組成物。
（３）前記視神経脊髄炎（ＮＭＯ）が再発性視神経脊髄炎（ＮＭＯ）である、前記（１）に記載の医薬組成物。
（４）アクアポリン−４（ＡＱＰ４）水チャネルのループＣペプチドが配列番号１であるか、又はそれと少なくとも９０％の配列同一性を有するポリペプチドである、前記（１）に記載の医薬組成物。
（５）前記治療的有効量が耐性応答を誘導するのに十分である、前記（１）に記載の医薬組成物。
（６）前記組成物が免疫抑制療法をさらに含む、前記（１）に記載の医薬組成物。
（７）前記免疫抑制療法が、糖質コルチコイド剤、細胞増殖抑制剤、抗体、イムノフィリン作動薬、インターフェロン、オピオイド、ＴＮＦ結合タンパク質、及びミコフェノール酸からなる群から選択される、前記（６）に記載の医薬組成物。
（８）前記免疫抑制療法が、アルキル化剤、ナイトロジェンマスタード（シクロホスファミド）、ニトロソウレア、白金化合物、メトトレキサート、アザチオプリン、メルカプトプリン、フルオロウラシル、タンパク質合成阻害剤、ダクチノマイシン、アントラサイクリン、マイトマイシンＣ、ブレオマイシン、ミトラマイシン、ＩＬ−２受容体に対する抗体、ＣＤ３に対する抗体、ムロノナブ−ＣＤ３、シクロスポリン（Ｓａｎｄｉｍｍｕｎｅ（登録商標））、タクロリムス（Ｐｒｏｇｒａｆ（登録商標））、シロリムス（Ｒａｐａｍｕｎｅ（登録商標））、ＩＦＮ−ベータ、インフリキシマブ（Ｒｅｍｉｃａｄｅ（登録商標））、エタネルセプト（Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標））、アダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ（登録商標））、フィンゴリモド、レフルノミド、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））、ＭａｂＴｈｅｒａ（登録商標）、又はＺｙｔｕｘ（登録商標））、エクリズマブ（Ｓｏｌｉｒｉｓ（登録商標））、インターフェロンベータ−１ａ（Ａｖｏｎｅｘ（登録商標））、ナタリズマブ（Ｔｙｓａｂｒｉ（登録商標））及びマロノニトリルアミド（ＭＮＡ）である、前記（６）に記載の医薬組成物。
（９）免疫原的有効量のアクアポリン−４（ＡＱＰ４）水チャネルのループＣペプチド、又はその免疫原性のフラグメント若しくは変異体を含む、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）を有する患者を免疫するための免疫化組成物。
（１０）前記視神経脊髄炎（ＮＭＯ）が単相性視神経脊髄炎（ＮＭＯ）である、前記（９）に記載の免疫化組成物。
（１１）前記視神経脊髄炎（ＮＭＯ）が再発性視神経脊髄炎（ＮＭＯ）である、前記（９）に記載の免疫化組成物。
（１２）アクアポリン−４（ＡＱＰ４）水チャネルのループＣペプチドが配列番号１、又はそれと少なくとも９０％の配列同一性を有するポリペプチドである、前記（９）に記載の免疫化組成物。
（１３）前記治療的有効量が耐性応答を誘導するのに十分である、前記（９）に記載の免疫化組成物。
（１４）前記組成物が免疫抑制療法をさらに含む、前記（９）に記載の免疫化組成物。
（１５）前記免疫抑制療法が、糖質コルチコイド剤、細胞増殖抑制剤、抗体、イムノフィリン作動剤、インターフェロン、オピオイド、ＴＮＦタンパク質、及びミコフェノール酸からなる群から選択される、前記（１４）に記載の免疫化組成物。
（１６）前記免疫抑制療法が、アルキル化剤、ナイトロジェンマスタード（シクロホスファミド）、ニトロソウレア、白金化合物、メトトレキサート、アザチオプリン、メルカプトプリン、フルオロウラシル、タンパク質合成阻害剤、ダクチノマイシン、アントラサイクリン、マイトマイシンＣ、ブレオマイシン、ミトラマイシン、ＩＬ−２受容体に対する抗体、ＣＤ３に対する抗体、ムロノナブ−ＣＤ３、シクロスポリン（Ｓａｎｄｉｍｍｕｎｅ（登録商標））、タクロリムス（Ｐｒｏｇｒａｆ（登録商標））、シロリムス（Ｒａｐａｍｕｎｅ（登録商標））、ＩＦＮ−ベータ、インフリキシマブ（Ｒｅｍｉｃａｄｅ（登録商標））、エタネルセプト（Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標））、アダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ（登録商標））、フィンゴリモド、レフルノミド、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））、ＭａｂＴｈｅｒａ（登録商標）、又はＺｙｔｕｘ（登録商標））、エクリズマブ（Ｓｏｌｉｒｉｓ（登録商標））、インターフェロンベータ−１ａ（Ａｖｏｎｅｘ（登録商標））、ナタリズマブ（Ｔｙｓａｂｒｉ（登録商標））及びマロノニトリルアミド（ＭＮＡ）である、前記（１４）に記載の免疫化組成物。
（１７）治療的有効量のアクアポリン−４（ＡＱＰ４）水チャネルのループＣペプチド、又は治療的に有効なそのフラグメント若しくは変異体を投与することを含む、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）を有する個体を治療する方法。
（１８）前記視神経脊髄炎（ＮＭＯ）が単相性視神経脊髄炎（ＮＭＯ）である、前記（１７）に記載の方法。
（１９）前記視神経脊髄炎（ＮＭＯ）が再発性視神経脊髄炎（ＮＭＯ）である、前記（１７）に記載の方法。
（２０）アクアポリン−４（ＡＱＰ４）水チャネルのループＣペプチドが配列番号１、又はそれと少なくとも９０％の配列同一性を有するポリペプチドである、前記（１７）に記載の方法。
（２１）前記治療的有効量が耐性応答を誘導するのに十分である、前記（１７）に記載の方法。
（２２）前記組成物が免疫抑制療法をさらに含む、前記（１７）に記載の方法。
（２３）前記免疫抑制療法が、糖質コルチコイド剤、細胞増殖抑制剤、抗体、イムノフィリン作動剤、インターフェロン、オピオイド、ＴＮＦ結合タンパク質、及びミコフェノール酸からなる群から選択される、前記（２２）に記載の方法。
（２４）前記免疫抑制療法がアルキル化剤、ナイトロジェンマスタード（シクロホスファミド）、ニトロソウレア、白金化合物、メトトレキサート、アザチオプリン、メルカプトプリン、フルオロウラシル、タンパク質合成阻害剤、ダクチノマイシン、アントラサイクリン、マイトマイシンＣ、ブレオマイシン、ミトラマイシン、ＩＬ−２受容体に対する抗体、ＣＤ３に対する抗体、ムロノナブ−ＣＤ３、シクロスポリン（Ｓａｎｄｉｍｍｕｎｅ（登録商標））、タクロリムス（Ｐｒｏｇｒａｆ（登録商標））、シロリムス（Ｒａｐａｍｕｎｅ（登録商標））、ＩＦＮ−ベータ、インフリキシマブ（Ｒｅｍｉｃａｄｅ（登録商標））、エタネルセプト（Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標））、アダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ（登録商標））、フィンゴリモド、レフルノミド、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））、ＭａｂＴｈｅｒａ（登録商標）、又はＺｙｔｕｘ（登録商標））、エクリズマブ（Ｓｏｌｉｒｉｓ（登録商標））、インターフェロンベータ−１ａ（Ａｖｏｎｅｘ（登録商標））、ナタリズマブ（Ｔｙｓａｂｒｉ（登録商標））及びマロノニトリルアミド（ＭＮＡ）である、前記（２２）に記載の方法。
（２５）免疫原的有効量のアクアポリン−４（ＡＱＰ４）水チャネルのループＣペプチド、又は免疫原的に有効なそのフラグメント若しくは変異体を投与することを含む、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）を有する個体において耐性応答を誘導する方法。
（２６）前記視神経脊髄炎（ＮＭＯ）が単相性視神経脊髄炎（ＮＭＯ）である、前記（２５）に記載の方法。
（２７）前記視神経脊髄炎（ＮＭＯ）が再発性視神経脊髄炎（ＮＭＯ）である、前記（２５）に記載の方法。
（２８）アクアポリン−４（ＡＱＰ４）水チャネルのループＣペプチドが配列番号１、又はそれと少なくとも９０％の配列同一性を有するポリペプチドである、前記（２５）に記載の方法。
（２９）治療的有効量が耐性応答を誘導するのに十分である、前記（２５）に記載の方法。
（３０）前記組成物が免疫抑制療法をさらに含む、前記（２５）に記載の方法。
（３１）前記免疫抑制療法が糖質コルチコイド剤、細胞増殖抑制剤、抗体、イムノフィリン作動剤、インターフェロン、オピオイド、ＴＮＦ結合タンパク質、及びミコフェノール酸からなる群から選択される、前記（３０）に記載の方法。
（３２）前記免疫抑制療法がアルキル化剤、ナイトロジェンマスタード（シクロホスファミド）、ニトロソウレア、白金化合物、メトトレキサート、アザチオプリン、メルカプトプリン、フルオロウラシル、タンパク質合成阻害剤、ダクチノマイシン、アントラサイクリン、マイトマイシンＣ、ブレオマイシン、ミトラマイシン、ＩＬ−２受容体に対する抗体、ＣＤ３に対する抗体、ムロノナブ−ＣＤ３、シクロスポリン（Ｓａｎｄｉｍｍｕｎｅ（登録商標））、タクロリムス（Ｐｒｏｇｒａｆ（登録商標））、シロリムス（Ｒａｐａｍｕｎｅ（登録商標））、ＩＦＮ−ベータ、インフリキシマブ（Ｒｅｍｉｃａｄｅ（登録商標））、エタネルセプト（Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標））、アダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ（登録商標））、フィンゴリモド、レフルノミド、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）、ＭａｂＴｈｅｒａ（登録商標）、又はＺｙｔｕｘ（登録商標））、エクリズマブ（Ｓｏｌｉｒｉｓ（登録商標））、インターフェロンベータ−１ａ（Ａｖｏｎｅｘ（登録商標））、ナタリズマブ（Ｔｙｓａｂｒｉ（登録商標））及びマロノニトリルアミド（ＭＮＡ）である、前記（３０）に記載の方法。
（３３）視神経脊髄炎（ＮＭＯ）を有する個体を治療するための医薬キットであって、治療的有効量のアクアポリン−４（ＡＱＰ４）水チャネルのループＣペプチド、又は治療的に有効なそのフラグメント若しくは変異体と、前記個体を治療するための指示書を備える、医薬キット。
（３４）前記キットが免疫抑制療法をさらに備える、前記（３３）に記載の医薬キット。
（３５）前記免疫抑制療法が、糖質コルチコイド剤、細胞増殖抑制剤、抗体、イムノフィリン作動剤、インターフェロン、オピオイド、ＴＮＦ結合タンパク質、及びミコフェノール酸からなる群から選択される、前記（３４）に記載の医薬キット。
（３６）前記免疫抑制療法がアルキル化剤、ナイトロジェンマスタード（シクロホスファミド）、ニトロソウレア、白金化合物、メトトレキサート、アザチオプリン、メルカプトプリン、フルオロウラシル、タンパク質合成阻害剤、ダクチノマイシン、アントラサイクリン、マイトマイシンＣ、ブレオマイシン、ミトラマイシン、ＩＬ−２受容体に対する抗体、ＣＤ３に対する抗体、ムロノナブ−ＣＤ３、シクロスポリン（Ｓａｎｄｉｍｍｕｎｅ（登録商標））、タクロリムス（Ｐｒｏｇｒａｆ（登録商標））、シロリムス（Ｒａｐａｍｕｎｅ（登録商標））、ＩＦＮ−ベータ、インフリキシマブ（Ｒｅｍｉｃａｄｅ（登録商標））、エタネルセプト（Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標））、アダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ（登録商標））、フィンゴリモド、レフルノミド、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）、ＭａｂＴｈｅｒａ（登録商標）、又はＺｙｔｕｘ（登録商標））、エクリズマブ（Ｓｏｌｉｒｉｓ（登録商標））、インターフェロンベータ−１ａ（Ａｖｏｎｅｘ（登録商標））、ナタリズマブ（Ｔｙｓａｂｒｉ（登録商標））及びマロノニトリルアミド（ＭＮＡ）である、前記（３４）に記載の医薬キット。
（３７）治療的有効量のアクアポリン−４（ＡＱＰ４）水チャネルのループＡ及び／又はＢペプチド、又は治療的に有効なそれらのフラグメント若しくは変異体をさらに含む、前記（１）又は（９）に記載の組成物。
（３８）治療的有効量の第２のＮＭＯ治療を投与する工程をさらに含む、前記（１７）又は（２５）に記載の方法。
（３９）治療的有効量のアクアポリン−４（ＡＱＰ４）水チャネルのループＡ及び／又はループＢのペプチド、又は治療的有効量のそれらのフラグメント若しくは変異体投与する工程をさらに含む、前記（１７）又は（２５）に記載の方法。
（４０）配列番号８と整列させた場合に配列番号８の１７以上のアミノ酸残基を持つ、治療的有効量の５０又はアミノ酸以下の長さのペプチドを含む、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）を治療するための医薬組成物。
（４１）前記視神経脊髄炎（ＮＭＯ）が単相性視神経脊髄炎（ＮＭＯ）である、前記（４０）に記載の医薬組成物。
（４２）前記視神経脊髄炎（ＮＭＯ）が再発性視神経脊髄炎（ＮＭＯ）である、前記（４０）に記載の医薬組成物。
（４３）前記ペプチドが配列番号８の１７以上の連続するアミノ酸残基を含む、前記ペプチドが配列番号８を含んでもよい、前記ペプチドが配列番号８であってもよい、前記（４０）に記載の医薬組成物。
（４４）前記治療的有効量が耐性応答を誘導するのに十分である、前記（４０）に記載の医薬組成物。
（４５）前記組成物が免疫抑制療法をさらに含む、前記（４０）に記載の医薬組成物。
（４６）前記免疫抑制療法が、糖質コルチコイド剤、細胞増殖抑制剤、抗体、イムノフィリン作動剤、インターフェロン、オピオイド、ＴＮＦ結合タンパク質、及びミコフェノール酸からなる群から選択される、前記（４５）に記載の医薬組成物。
（４７）前記免疫抑制療法がアルキル化剤、ナイトロジェンマスタード（シクロホスファミド）、ニトロソウレア、白金化合物、メトトレキサート、アザチオプリン、メルカプトプリン、フルオロウラシル、タンパク質合成阻害剤、ダクチノマイシン、アントラサイクリン、マイトマイシンＣ、ブレオマイシン、ミトラマイシン、ＩＬ−２受容体に対する抗体、ＣＤ３に対する抗体、ムロノナブ−ＣＤ３、シクロスポリン（Ｓａｎｄｉｍｍｕｎｅ（登録商標））、タクロリムス（Ｐｒｏｇｒａｆ（登録商標））、シロリムス（Ｒａｐａｍｕｎｅ（登録商標））、ＩＦＮ−ベータ、インフリキシマブ（Ｒｅｍｉｃａｄｅ（登録商標））、エタネルセプト（Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標））、アダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ（登録商標））、フィンゴリモド、レフルノミド、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））、ＭａｂＴｈｅｒａ（登録商標）、又はＺｙｔｕｘ（登録商標））、エクリズマブ（Ｓｏｌｉｒｉｓ（登録商標））、インターフェロンベータ−１ａ（Ａｖｏｎｅｘ（登録商標））、ナタリズマブ（Ｔｙｓａｂｒｉ（登録商標））及びマロノニトリルアミド（ＭＮＡ）である、前記（４５）に記載の医薬組成物。
（４８）配列番号８と整列させた場合に配列番号８の１７以上のアミノ酸残基を持つ５０アミノ酸以下の長さの免疫原的有効量のペプチドを含む、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）を有する患者を免疫する免疫化組成物。
（４９）前記視神経脊髄炎（ＮＭＯ）が単相性視神経脊髄炎（ＮＭＯ）である、前記（４８）に記載の免疫化組成物。
（５０）前記視神経脊髄炎（ＮＭＯ）が再発性視神経脊髄炎（ＮＭＯ）である、前記（４８）に記載の免疫化組成物。
（５１）前記ペプチドが配列番号８の１７以上の連続するアミノ酸残基を含む、前記ペプチドが配列番号８を含んでもよい、前記ペプチドが配列番号８であってもよい、前記（４８）に記載の免疫化組成物。
（５２）前記治療的有効量が耐性応答を誘導するのに十分である、前記（４８）に記載の免疫化組成物。
（５３）前記組成物が免疫抑制療法をさらに含む、前記（４８）に記載の免疫化組成物。
（５４）前記免疫抑制療法が、糖質コルチコイド剤、細胞増殖抑制剤、抗体、イムノフィリン作動剤、インターフェロン、オピオイド、ＴＮＦ結合タンパク質、及びミコフェノール酸からなる群から選択される、前記（５３）に記載の免疫化組成物。
（５５）前記免疫抑制療法がアルキル化剤、ナイトロジェンマスタード（シクロホスファミド）、ニトロソウレア、白金化合物、メトトレキサート、アザチオプリン、メルカプトプリン、フルオロウラシル、タンパク質合成阻害剤、ダクチノマイシン、アントラサイクリン、マイトマイシンＣ、ブレオマイシン、ミトラマイシン、ＩＬ−２受容体に対する抗体、ＣＤ３に対する抗体、ムロノナブ−ＣＤ３、シクロスポリン（Ｓａｎｄｉｍｍｕｎｅ（登録商標））、タクロリムス（Ｐｒｏｇｒａｆ（登録商標））、シロリムス（Ｒａｐａｍｕｎｅ（登録商標））、ＩＦＮ−ベータ、インフリキシマブ（Ｒｅｍｉｃａｄｅ（登録商標））、エタネルセプト（Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標））、アダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ（登録商標））、フィンゴリモド、レフルノミド、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）、ＭａｂＴｈｅｒａ（登録商標）、又はＺｙｔｕｘ（登録商標））、エクリズマブ（Ｓｏｌｉｒｉｓ（登録商標））、インターフェロンベータ−１ａ（Ａｖｏｎｅｘ（登録商標））、ナタリズマブ（Ｔｙｓａｂｒｉ（登録商標））及びマロノニトリルアミド（ＭＮＡ）である、前記（５３）に記載の免疫化組成物。
（５６）配列番号８と整列させた場合に配列番号８の１７以上のアミノ酸残基を持つ５０又はアミノ酸以下の長さのペプチドを投与することを含む、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）を有する患者を治療する方法。
（５７）前記視神経脊髄炎（ＮＭＯ）が単相性視神経脊髄炎（ＮＭＯ）である、前記（５６）に記載の方法。
（５８）前記視神経脊髄炎（ＮＭＯ）が再発性視神経脊髄炎（ＮＭＯ）である、前記（５６）に記載の方法。
（５９）前記ペプチドが配列番号８の１７以上の連続するアミノ酸残基を含む、前記ペプチドが配列番号８を含んでもよい、前記ペプチドが配列番号８であってもよい、前記（５６）に記載の方法。
（６０）前記治療的有効量が耐性応答を誘導するのに十分である、前記（５６）に記載の方法。
（６１）前記組成物が免疫抑制療法をさらに含む、前記（５６）に記載の方法。
（６２）前記免疫抑制療法が、糖質コルチコイド剤、細胞増殖抑制剤、抗体、イムノフィリン作動剤、インターフェロン、オピオイド、ＴＮＦ結合タンパク質、及びミコフェノール酸からなる群から選択される、前記（６１）に記載の方法。
（６３）前記免疫抑制療法がアルキル化剤、ナイトロジェンマスタード（シクロホスファミド）、ニトロソウレア、白金化合物、メトトレキサート、アザチオプリン、メルカプトプリン、フルオロウラシル、タンパク質合成阻害剤、ダクチノマイシン、アントラサイクリン、マイトマイシンＣ、ブレオマイシン、ミトラマイシン、ＩＬ−２受容体に対する抗体、ＣＤ３に対する抗体、ムロノナブ−ＣＤ３、シクロスポリン（Ｓａｎｄｉｍｍｕｎｅ（登録商標））、タクロリムス（Ｐｒｏｇｒａｆ（登録商標））、シロリムス（Ｒａｐａｍｕｎｅ（登録商標））、ＩＦＮ−ベータ、インフリキシマブ（Ｒｅｍｉｃａｄｅ（登録商標））、エタネルセプト（Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標））、アダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ（登録商標））、フィンゴリモド、レフルノミド、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）、ＭａｂＴｈｅｒａ（登録商標）、又はＺｙｔｕｘ（登録商標））、エクリズマブ（Ｓｏｌｉｒｉｓ（登録商標））、インターフェロンベータ−１ａ（Ａｖｏｎｅｘ（登録商標））、ナタリズマブ（Ｔｙｓａｂｒｉ（登録商標））及びマロノニトリルアミド（ＭＮＡ）である、前記（６１）に記載の方法。
（６４）配列番号８と整列させた場合に配列番号８の１７以上のアミノ酸残基を持つ５０又はアミノ酸以下の長さのペプチドを投与することを含む、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）を有する個体において耐性応答を誘導する方法。
（６５）前記視神経脊髄炎（ＮＭＯ）が単相性視神経脊髄炎（ＮＭＯ）である、前記（６４）に記載の方法。
（６６）前記視神経脊髄炎（ＮＭＯ）が再発性視神経脊髄炎（ＮＭＯ）である、前記（６４）に記載の方法。
（６７）前記ペプチドが配列番号８の１７以上の連続するアミノ酸残基を含む、前記ペプチドが配列番号８を含んでもよい、前記ペプチドが配列番号８であってもよい、前記（６４）に記載の方法。
（６８）前記治療的有効量が耐性応答を誘導するのに十分である、前記（６４）に記載の方法。
（６９）前記組成物が免疫抑制療法をさらに含む、前記（６４）に記載の方法。
（７０）前記免疫抑制療法が、糖質コルチコイド剤、細胞増殖抑制剤、抗体、イムノフィリン作動剤、インターフェロン、オピオイド、ＴＮＦ結合タンパク質、及びミコフェノール酸からなる群から選択される、前記（６９）に記載の方法。
（７１）前記免疫抑制療法がアルキル化剤、ナイトロジェンマスタード（シクロホスファミド）、ニトロソウレア、白金化合物、メトトレキサート、アザチオプリン、メルカプトプリン、フルオロウラシル、タンパク質合成阻害剤、ダクチノマイシン、アントラサイクリン、マイトマイシンＣ、ブレオマイシン、ミトラマイシン、ＩＬ−２受容体に対する抗体、ＣＤ３に対する抗体、ムロノナブ−ＣＤ３、シクロスポリン（Ｓａｎｄｉｍｍｕｎｅ（登録商標））、タクロリムス（Ｐｒｏｇｒａｆ（登録商標））、シロリムス（Ｒａｐａｍｕｎｅ（登録商標））、ＩＦＮ−ベータ、インフリキシマブ（Ｒｅｍｉｃａｄｅ（登録商標））、エタネルセプト（Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標））、アダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ（登録商標））、フィンゴリモド、レフルノミド、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）、ＭａｂＴｈｅｒａ（登録商標）、又はＺｙｔｕｘ（登録商標））、エクリズマブ（Ｓｏｌｉｒｉｓ（登録商標））、インターフェロンベータ−１ａ（Ａｖｏｎｅｘ（登録商標））、ナタリズマブ（Ｔｙｓａｂｒｉ（登録商標））及びマロノニトリルアミド（ＭＮＡ）である、前記（６９）に記載の方法。
（７２）視神経脊髄炎（ＮＭＯ）を有する個体を治療するための医薬キットであって、配列番号８と整列させた場合に配列番号８の１７以上のアミノ酸残基を持つ５０又はアミノ酸以下の長さの治療的有効用量のペプチドと、前記個体を治療するための指示書を備える、医薬キット。
（７３）前記キットが免疫抑制療法をさらに含む、前記（７２）に記載の医療キット。
（７４）前記免疫抑制療法が、糖質コルチコイド剤、細胞増殖抑制剤、抗体、イムノフィリン作動剤、インターフェロン、オピオイド、ＴＮＦ結合タンパク質、及びミコフェノール酸からなる群から選択される、前記（７３）に記載の医療キット。
（７５）前記免疫抑制療法がアルキル化剤、ナイトロジェンマスタード（シクロホスファミド）、ニトロソウレア、白金化合物、メトトレキサート、アザチオプリン、メルカプトプリン、フルオロウラシル、タンパク質合成阻害剤、ダクチノマイシン、アントラサイクリン、マイトマイシンＣ、ブレオマイシン、ミトラマイシン、ＩＬ−２受容体に対する抗体、ＣＤ３に対する抗体、ムロノナブ−ＣＤ３、シクロスポリン（Ｓａｎｄｉｍｍｕｎｅ（登録商標））、タクロリムス（Ｐｒｏｇｒａｆ（登録商標））、シロリムス（Ｒａｐａｍｕｎｅ（登録商標））、ＩＦＮ−ベータ、インフリキシマブ（Ｒｅｍｉｃａｄｅ（登録商標））、エタネルセプト（Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標））、アダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ（登録商標））、フィンゴリモド、レフルノミド、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）、ＭａｂＴｈｅｒａ（登録商標）、又はＺｙｔｕｘ（登録商標））、エクリズマブ（Ｓｏｌｉｒｉｓ（登録商標））、インターフェロンベータ−１ａ（Ａｖｏｎｅｘ（登録商標））、ナタリズマブ（Ｔｙｓａｂｒｉ（登録商標））及びマロノニトリルアミド（ＭＮＡ）である、前記（７３）に記載の医療キット。
（７６）治療的有効量のアクアポリン−４（ＡＱＰ４）水チャネルのループＡ及び／又はループＢのペプチド、又は治療的に有効なそのフラグメント若しくは変異体をさらに含む、前記（４０）又は（４８）に記載の組成物。
（７７） 治療的有効量の第２のＮＭＯ治療を投与する工程をさらに含む、前記（５６）又は（６４）に記載の方法。
（７８）治療的有効量のアクアポリン−４（ＡＱＰ４）水チャネルのループＡ及び／又はループＢのペプチド、又は治療的に有効なそのフラグメント若しくは変異体を投与する工程をさらに含む、前記（５６）又は（６４）に記載の方法。
（８０）前記ＡＱＰ４のループＣペプチド、又は配列番号８と整列させた場合に配列番号８の１７以上のアミノ酸残基を持つ５０又はアミノ酸以下の長さの前記ペプチドが、脊髄炎症に起因する麻痺及び視神経炎症に起因する視力障害からなる群から選択される神経学的症状を前記ペプチドが投与されたマウスにおいて誘導する、上記前記のいずれかに記載の医薬組成物、方法、免疫化組成物又は医薬キット。
（８１）前記ペプチドがマウスにおいて、対応する量の配列番号９が適切な対照マウスにおいて誘導するよりも大きな神経学的症状を誘導する、前記（７９）に記載の医薬組成物、方法、免疫化組成物、又は医薬キット。
（８１）被験体においてＮＭＯを検出する方法であって、
ａ）被験体からＴ細胞及び／又は抗体含有試料を得ること、
ｂ）前記試料と、配列番号８特異的抗体−配列番号８ペプチド複合体の形成を可能とする、又は配列番号８特異的な方式でＴ細胞活性化を可能とするのに十分な量で配列番号８又はそのフラグメント若しくは変異体からからなるペプチドとを接触させること、並びに ｃ）Ｔ細胞活性化又は配列番号８特異的抗体−配列番号８ペプチド複合体の形成を検出し、Ｔ細胞活性化又は前記配列番号８特異的抗体−配列番号８ペプチド複合体の形成が、前記被験体がＮＭＯを有することを示し、それによって被験体においてＮＭＯを検出すること、
を含む、被験体においてＮＭＯを検出する方法。
（８２）前記Ｔ細胞及び／又は抗体含有試料が血液試料である、前記（８１）に記載の方法。
（８３）前記被験体に対するＮＭＯ療法、任意に免疫抑制療法及び／又はＡＱＰ４ワクチン若しくは免疫寛容療法の投与をさらに含み、任意に、配列番号８と整列させた場合に配列番号８の１７以上のアミノ酸残基を持つ５０又はアミノ酸以下の長さの治療的有効量のペプチドの投与を含む、前記（８１）に記載の方法。
（８４）被験体においてＮＭＯを検出するキットであって、配列番号８と整列させた場合に配列番号８の１７以上のアミノ酸残基を持ち、被験体の試料と接触させた場合にＴ細胞活性化を誘導し、それにより被験体におけるＮＭＯを示す５０又はアミノ酸以下の長さのペプチドと、その使用のための指示書を備える、被験体においてＮＭＯを検出するキット。
（８５）前記ペプチドが配列番号８である、前記（８４）に記載のキット。
（８６）配列番号８と整列させた場合に配列番号８の１７以上のアミノ酸残基を持つ５０又はアミノ酸以下の長さのペプチドのマウスへの投与によって誘導されるＮＭＯモデルマウス。
（８７）候補ＮＭＯ治療化合物を同定する方法であって、前記（８６）に記載のＮＭＯモデルマウスに試験化合物を投与すること、及び前記試験化合物の存在下において任意に適切な対照と比較される前記ＮＭＯモデルマウスの神経症状の改善を同定し、それによって前記試験化合物を候補ＮＭＯ治療薬として同定することを含む、候補ＮＭＯ治療化合物を同定する方法。
適用可能であるか、具体的に放棄されない限り、本明細書に記載されるいずれか１つの実施形態は、その実施形態が本発明の異なる態様のもとに記載されていても、任意の他の１又は複数の実施形態と組み合わせ可能であると考えられる。
これらの及び他の実施形態が開示され、又は以下の詳細な説明から明らかであり、またそれにより包含される。


例として与えられるが、記載される具体的な実施形態のみに本発明を限定することは意図されない以下の詳細な説明は、添付の図面と併せて最もよく理解され得る。
ヒトアクアポリン−４ペプチド、アイソフォームＡ（ＮＢＣＩ参照配列：ＮＰ＿００１６４１．１）（配列番号１）のタンパク質配列。図は、ループＡ（ＧＴＥＫＰＬＰＶ）（配列番号５）、ループＣ（ＴＰＰＳＶＶＧＧＬＧＶＴＭＶＨＧＮＬＴＡＧ）（配列番号６）、及びループＥ（ＧＮＷＥＮＨ）（配列番号７）のアミノ酸配列を示す。 ヒトアクアポリン−４ペプチド、アイソフォームＡ（ＮＣＢＩ参照配：ＮＭ＿００１６５０．４）（配列番号２）をコードするヌクレオチド配列（ｃＤＮＡ）。 ヒトアクアポリン−４、アイソフォームＢ（ＮＢＣＩ参照配列：ＮＰ＿００４０１９．１）（配列番号３）のタンパク質配列。 ヒトアクアポリン−４ペプチド、アイソフォームＢ（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００４０２８．３（配列番号４）をコードするヌクレオチド配列（ｃＤＮＡ）。 ラット、マウス、及びヒトに由来するＡＱＰ４のアミノ酸配列アラインメントであり、細胞外ループＡ、Ｃ及びＥを示す（本明細書に援用されるＰｉｓａｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．ｂｏｉｌ．Ｃｈｅｍ．，Ｍａｒ．１８，２０１１；２８６（１１）：９２１６−９２２４を参照されたい）。 ＡＱＰ４ループＡ（ＧＴＥＫＰＬＰＶ）（配列番号５）、ループＣ（ＴＰＰＳＶＶＧＧＬＧＶＴＭＶＨＧＮＬＴＡＧ）（配列番号６）、及びループＥ（ＧＮＷＥＮＨ）（配列番号７）、またループＣ配列含有ペプチド１３５〜１５３（ＬＶＴＰＰＳＶＶＧＧＬＧＶＴＭＶＨＧＮ）（配列番号８）に対するアミノ酸配列を提供する。 図７Ａは、ＡＱＰ４のループＣ配列含有ペプチド配列番号８に対するロバストな反応を反映するＴ細胞増殖アッセイを示す。ミエリン−オリゴデンドロサイト糖タンパク質（ＭＯＧ）ペプチド３５〜５５で免疫した２匹の対照マウス（ｗｔ−ＭＯＧ）に由来するＴ細胞は、ＭＯＧ抗原の存在下（赤色バー）でのみトリチウム標識チミジンの取込みによって測定される増殖活性を示した。ＡＱＰ４のペプチドで免疫された野生型マウス（ｗｔ−ＡＱＰ４）に由来するＴ細胞は、いずれのＡＱＰ４抗原に対しても応答しなかった。ＡＱＰ４ヌルマウス（ＫＯナイーブ）に由来するＴ細胞は、そのマウスが上記ペプチドによって免疫されない限りＡＱＰ４ペプチドのいずれにも生得的に応答しなかった（Ｋ０１−ＡＱＰ４及びＫ０２−ＡＱＰ４）。試験したペプチドのうち、細胞外ループＣの配列を含むペプチドである配列番号８は、ループＣ配列含有ペプチド（茶色バー）又はループＣ配列含有ペプチドを含んだＡＱＰ４ペプチドのミックス（黄色バー）に対して免疫されたＡＱＰ４ヌルマウスに由来するＴ細胞においてのみロバストな反応を生じた。結果は、３連の反応の平均＋ＳＥＭで示される。図７Ｂは、ＡＱＰ４ループＣ配列含有ペプチド（ＡＱＰ４１３５−５３）対非刺激（ＮＳ）に暴露された、Ｔｈ１７極性化（Ｔｈ１７−ｐｏｌ）及び非極性化（ｕｎｐｏｌ）細胞培養物におけるＩＬ−１７及びインターフェロン−ガンマ（ＩＦＮ−γ）サイトカイン産生細胞の数を特定するため使用したＥＬＩＳＰＯＴアッセイの結果を示す。非極性化ＡＱＰ４応答性Ｔ細胞は、未刺激の対照と比較して有意水準のＩＬ−１７及びＩＦＮ−γの両方を発現した。Ｔｈ１７表現型への極性化の後、ＩＬ−１７産生細胞の数はほぼ２倍になったのに対し、ＩＦＮ−γ産生細胞の数は検出不可能に近かった。しかしながら、ＩＬ−１７産生細胞の頻度もまた、未刺激の培養において増加した（一方、ＩＦＮ−γ産生細胞は低いままであった）。 図８Ａは、ＡＱＰ４のループＣペプチドに対して免疫されたＡＱＰ４ヌルマウスに由来するＴ細胞の養子静脈内移植の行動評価を提供する。行動スコアは、神経障害の程度を点数化する５ポイントのＥＡＥスケールである（０は障害無し、５は死亡）。培養細したＡＱＰ４再刺激、Ｔｈ１７極性化ＡＱＰ４応答性Ｔ細胞によって養子移植された野生型マウス（三角）は、尾及び後肢の脱力を発現させた（ＥＡＥスコア１．０〜２．０、ｎ＝４）。ＡＱＰ４ペプチドによって再刺激されなかった（四角、ｎ＝５）、又は非特異的タンパク質で刺激された（円、ｎ＝６）ＡＱＰ４応答性Ｔ細胞の移植は、行動表現型を示さなかった。図８Ｂは、毎日の体重を示し、Ｔｈ１７極性化ＡＱＰ４応答性の及びＡＱＰ４再刺激したＴ細胞（三角）を受けたマウスにおいては典型的な体重減少を実証したが、未刺激の（円）又は非ＡＱＰ４特異的再刺激Ｔ細胞（四角）を受けたマウスにおいては体重減少は示されなかった。 図９Ａ〜図９Ｌは、非極性化ＡＱＰ４応答性Ｔ細胞を受けた野生型マウスに由来する組織（図９Ａ、図９Ｄ、図９Ｇ、図９Ｊ）対Ｔｈ１７極性化ＡＱＰ４応答性Ｔ細胞を受けた野生型マウスに由来する組織（図９Ｂ、図９Ｃ、図９Ｅ、図９Ｆ、図９Ｈ、図９Ｉ、図９Ｋ、図９Ｌ）の組織学を示す。図９Ａは、ＣＤ３＋Ｔ細胞に対して染色された脊髄実質が、図９Ｂと比較して稀な散在性細胞（矢印）を示したことを示す。図９Ｂは、著しい血管周囲のＣＤ３＋Ｔ細胞浸潤を示した、Ｔｈ１７極性化ＡＱＰ４応答性Ｔ細胞の野生型レシピエントに由来する脊髄切片である。図９Ｃは、白質神経線維束（周囲）内の脱髄領域（濃淡領域の矢印）は炎症性病変内で明らかであったことを示す。図９Ｄは、ＣＤ３＋Ｔ細胞に対して染色された視神経の縦断切片が、図９Ｅと比較して稀な散在性細胞（矢印）を示したことを示す。図９Ｅは、著しい血管周囲のＣＤ３＋Ｔ細胞浸潤（矢印）を示したＴｈ１７−極性化ＡＱＰ４応答性Ｔ細胞の野生型レシピエントに由来する視神経切片である。図９Ｆは、白質神経線維束（周辺）内の脱髄領域（濃淡を指す矢印）は炎症性病変内で明らかであったことを示す。図９Ｇは、図９Ｈと比較して、ＣＤ３＋Ｔ細胞に対して染色された脳実質は稀な散在性細胞（矢印）を示したことを示す。図９Ｈは、第３脳室周辺のこの病変のように（矢印）著しいＣＤ３＋Ｔ細胞浸潤を実証したＴｈ１７極性化ＡＱＰ４応答性Ｔ細胞の野生型レシピエントに由来する脳切片を示す。図９Ｉは、ＡＱＰ４応答性Ｔ細胞が、広範な炎症及び脱髄にもかかわらず（脊髄由来の代表的な切片を示す）、病変又は正常な外見の脊髄、視神経若しくは脳のいずれにおいてもＡＱＰ４染色を変更しないようであった。図９Ｊは、実質臓器におけるＡＱＰ４の発現にもかかわらず、稀なＡＱＰ４応答性ＣＤ３＋Ｔ細胞は、非極性化及びＴｈ−１７極性化の野生型レシピエントの両方においてこれらの臓器全体に点在して現れたことを示す。非極性化に由来する肺はＣＤ３＋細胞を指す矢印と共にここに示される。図９Ｋは、場合によってＣＤ３＋細胞（矢印）を含む正常な肺を示したＴｈ１７極性化レシピエントに由来する肺切片を示す。図９Ｌは、Ｔｈ１７極性化マウスに由来する筋肉は炎症の証拠を示さなかったことを示す（矢印は稀なＣＤ３＋Ｔ細胞を示す）。 Ｔｈ１７極性化ＡＱＰ４応答性Ｔ細胞の野生型レシピエントの脊髄（ｎ＝８）、視神経（ｎ＝６）、及び脳（ｎ＝８）におけるＣＤ３細胞の盲検定量（ｂｌｉｎｄｅｄ ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ）が、非極性化マウスに対するものと比較してこれらの組織において５倍超の免疫反応性（＊＊ｐ＜０．０１）を実証したことを示す。
本発明は、部分的には、特有のアクアポリン−４ペプチド（ループＣ）の同定、及び特に、ＡＱＰ４ノックアウトマウスにおいてＴ細胞産生を誘発することができる配列番号８のループＣ配列含有ペプチドに関する。この予想外で以前には知られていなかった観察結果は、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）の治療及び／又は改善に対する抗原に基づくペプチド薬デザインの基礎を形成する。したがって、本発明はＮＭＯを有する個体における免疫化及び／又は耐性の誘導に対する医薬組成物に関する。さらに、本発明は、被験体に治療的有効量のループＣ及び／又はループＣ配列含有ペプチド、又は治療的に有効なその変異体及び／又はフラグメントを投与する又はそれらで免疫することによってＮＭＯ患者を治療する及び／又は免疫する方法に関する。治療は、任意にリツキシマブ等の薬物による免疫抑制状況下で行われてもよく、単剤療法として行われてもよい。投与は、経口、静脈内、皮下、又は動脈内を含む任意の好適な手段によってもよい。また、免疫化は、ループＣ及び／又はループＣ配列含有ペプチドをコードする核酸分子を使用することによって検討される。したがって、本発明は、ループＣ及び／又はループＣ配列含有ペプチドをコードする核酸分子にも関し、またかかる分子が個体において抗原を提示するようにかかる分子を投与するための製剤及び医薬組成物に関する。
実施例に記載されるように、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）の正確な動物モデルを作製することを目的として、本発明者らは、ＡＱＰ４の様々な細胞外ペプチドで免疫されたアクアポリン−４（ＡＱＰ４）ノックアウトマウスが、ＡＱＰ４の第２の細胞外ループであるループＣに対応する単一のペプチドに活発に応答し、配列番号８のループＣ配列含有ペプチドに対して顕著に応答したことを見出した。ＡＱＰ４ノックアウトマウスがＡＱＰ４の標的を欠くことから、これらのマウスにおいてはこれらのＴ細胞は疾患を引き起こさなかった。しかしながら、野生型マウスに養子移植された場合、これらのＡＱＰ４応答性Ｔ細胞は、症候的な視神経炎及び横断性脊髄炎を引き起こした。これらの結果は、ループＣ、特に配列番号８のループＣ配列含有ペプチドが、Ｃ５７ＢＬ／６マウス上のＡＱＰ４ノックアウトにおけるＴ細胞応答の誘発においてＡＱＰ４ペプチドのうち独特であり、野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおける脊髄及び視神経の炎症攻撃を開始可能であったという観察結果を強調した。脊髄及び神経組織の病理学的評価は、軽度の神経症状をもたらすリンパ球とのロバストな髄膜反応を識別した。これらの細胞をＴｈ１７表現型に対して極性化した場合、得られた表現型は、ヒトＮＭＯに類似するパターンの視神経及び脊髄の実質組織を含むより重篤な炎症反応であった。この研究の意義は、主に視神経及び脊髄に対する炎症の誘発及び局在化の両方におけるＮＭＯのＡＱＰ４応答性Ｔ細胞の中枢免疫病原性の役割を指摘し、それによりＮＭＯを治療するための新たな標的が同定された。理論に束縛されることを望むものではないが、自己応答性Ｔ細胞と抗体応答の両方を賦活する条件下で、ループＣに対応するペプチド及び／又はＡＱＰ４の配列番号８等のループＣ配列含有ペプチド、又はそのフラグメント、変異体若しくは誘導体に易罹患性の人を暴露することによって治療してもよい。ＡＱＰ４に対するＴｈ１７応答は、実施例で実証されるようにより劇症型の疾患を引き起こす可能性がある。ＡＱＰ４応答性Ｔ細胞が視神経及び脊髄に対する炎症を誘発すると、抗ＡＱＰ４は、補体活性化及び顆粒球動員をあおることによって病態を悪化させる。このモデルは、ＮＭＯに対する新たな治療ターゲットを同定する。特異性の高い抗原（ＡＱＰ４）及び抗体応答（抗ＡＱＰ４）を有し、現在ＡＱＰ４応答性Ｔ細胞と関連する可能性のある疾患であることから、ＮＭＯを本発明による抗原特異的療法によって治療及び／又は改善することができる。耐性応答を誘導するため、高用量の可溶性ループＣ及び／又はループＣ配列含有ペプチドを、現在ＮＭＯの治療に一般的に使用されるリツキシマブ等の薬物による免疫抑制の状況下で患者に提供してもよい。基礎疾患がある場合、粘膜耐性を達成するための経口経路は、疾患の増悪を回避するためおそらく最も安全性の高いアプローチの可能性がある。ＡＱＰ４応答性Ｔ細胞によって媒介される疾患活性は、ＡＱＰ４のループＣ及び／又はループＣ配列含有ペプチドによる先の免疫により軽減され得る。したがって、本発明は、ＮＭＯの治療に対する抗原媒介寛容原性アプローチに関する。免疫抑制の状況下又は単剤療法としてのいずれかにおいて、経口的に、静脈内的に又は皮下で送達される非常に可溶性のループＣ及び／又はループＣ配列含有ペプチドを使用することにより、ヒトにおけるＮＭＯ病が改善される。
以下は、本発明の実施において当業者を補助するために提供される本発明の詳細な説明である。当業者は、本発明の趣旨又は範囲から逸脱することなく本明細書に記載される実施形態において修正及び変化を行ってもよい。別段の規定がない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野における当業者の一人によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書では本発明の説明において使用される専門用語は、特定の実施形態を説明するためであり、本発明の限定を意図するものではない。本明細書において言及される全ての出版物、特許出願、特許、数字、及び他の参照文献は、それらの全体において参照により明確に援用される。
本明細書に記載されるものに類似又は等価な任意の方法及び材料が本発明の実施又は試験において使用されてもよいが、ここでは好ましい方法及び材料が記載される。本明細書において言及される全ての出版物は、引用される出版物との関連で方法及び／又は材料を開示及び記載するため参照により本明細書に援用される。
定義
別段の規定がない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野における当業者の一人によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。その開示全体が参照により本明細書に援用される、以下の参照文献は、本発明で使用される多くの用語の一般的な定義（本明細書で別段の定義がない限り）を当業者に提供する：Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（２ｎｄ ｅｄ．１９９４）；Ｔｈｅ Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｗａｌｋｅｒ ｅｄ．，１９８８）；Ｔｈｅ Ｇｌｏｓｓａｒｙ ｏｆ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，５ｔｈ Ｅｄ．，Ｒ．Ｒｉｅｇｅｒ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ（１９９１）；及びＨａｌｅ＆Ｍａｒｈａｍ，ｔｈｅ Ｈａｒｐｅｒ Ｃｏｌｌｉｎｓ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｙ（１９９１）。一般的には、本明細書に記載される又は本明細書に固有の分子生物学の手法等は、当該技術分野において使用される一般的な方法である。かかる標準的な技術は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，（２０００，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ−−Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）；及びＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，（１９９４，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ−Ｙｏｒｋ）等の参照マニュアルに見ることができる。
以下の用語は、別段の明示がない限り、以下に帰する意味を有する場合がある。しかしながら、当業者によって知られ又は理解される他の意味もまた可能であり、本発明の範囲に含まれることが理解されるべきである。本明細書において言及される全ての出版物、特許出願、及び他の参照文献は、それらの全体が参照により援用される。抵触する場合、定義を含む本明細書が優先される。さらに、材料、方法及び実施例は解説に過ぎず、限定を意図するものではない。
本明細書で使用される単数形「１つの（ａ）」及び「その（ｔｈｅ）」は、記載内容が明確に別段の規定をしない限り、複数の参照を含む。本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、同じ意味を有する。
具体的に述べられ又は記載内容から明確でない限り、本明細書で使用される「約」の用語は、当該技術分野における一般公差の範囲、例えば平均の２標準偏差以内に含まれると理解される。約は、標準値の１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．１％、０．０５％、又は０．０１％以内と理解される。記載内容から別段明らかでない限り、本明細書に提供される全ての数値は約の用語により修飾され得る。
本明細書で使用される「抗原」の用語は、被験体において抗体応答を惹起するか、又は抗体によって認識され結合される分子、例えばペプチド、ポリペプチド、タンパク質、フラグメント、又は他の生物学的部分、例えば配列番号６のループＣペプチド（すなわち、ＡＱＰ４のループＣ細胞外ドメイン）を指す。
本明細書で使用される「バイオマーカー」の用語は、生体の生理学的状態を定量的又は定性的な方式で反映する計量可能な性質を意味すると理解される。生体の生理学的状態は、任意の疾患又は非疾患の状態、例えばＮＭＯを有する被験体、或いは健康な被験体を含める。前記別の方法では、バイオマーカーは、治療的介入に対する正常なプロセス、病的プロセス又は薬理学的応答の指標として客観的に測定され評価され得る性質である。バイオマーカーは、臨床パラメーター（例えば、年齢、全身状態）、実験用基準（例えば、前立腺特異的抗原等の分子バイオマーカー）、画像化に基づく基準、又はタンパク質マーカーのリン酸化若しくはアセチル化状態、核酸のメチル化状態、又は生体分子に対する任意の他の検出可能な分子修飾等の遺伝学的若しくは他の分子の決定要因であってもよい。バイオマーカーの例として、例えば、ポリペプチド、ペプチド、ポリペプチドフラグメント、タンパク質、抗体、ホルモン、ポリヌクレオチド、ＲＮＡ又はＲＮＡフラグメント、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、脂質、多糖、及び他の生体代謝産物が挙げられる。
本発明のバイオマーカーは、第２の表現型（例えば疾患を有しない、例えば対照）の被験体又は被験体群に由来する生体試料と比較して、第１の表現型を有する（例えば、疾患を有する）被験体又は被験体群に由来する生体試料において調節される（例えば、レベルの減少又は増加）。バイオマーカーは、任意のレベルにおいて差次的に提示され得るが、一般的には、正常レベル若しくは対照レベルと比較して少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１１０％、少なくとも１２０％、少なくとも１３０％、少なくとも１４０％、少なくとも１５０％、又は以上増加したレベルで存在するか、又は一般的には、正常レベル若しくは対照レベルと比較して少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、若しくは１００％（すなわち、不在）減少したレベルで存在する。バイオマーカーは、統計学的に有意なレベルで（例えば、ウェルチのｔ検定又はウィルコクソン順位和検定のいずれかを使用して特定される０．０５未満のｐ値及び／又は０．１０未満のｑ値）差次的に存在することが好ましい。
本明細書で使用される「生検」又は「生検組織」の用語は、その試料が疾患組織を含有するかどうかを特定する目的で被験体から摘除される組織の試料（例えば、ＮＭＯ病変）を指す。その後、生検組織を疾患の存在又は不在について調べる（例えば、顕微鏡により）。
本明細書で使用される「相補的」の用語は、２つの核酸鎖の領域間、又は同じ核酸鎖の２つの領域間の幅広い概念の配列相補性を指す。第１の核酸領域のアデニン残基は、その残基がチミン又はウラシルである場合に第１の領域に逆平衡である、第２の核酸領域の残基と特異的な水素結合（「塩基対合」）を形成することができる。同様に、第１の核酸鎖のシトシン残基は、その残基がグアニンである場合に第１の鎖に逆平衡である第２の核酸鎖の残基と塩基対合が可能であることが知られている。核酸の第１領域は、２つの領域が逆平衡様式で配置されるときに、第１の領域の少なくとも１つのヌクレオチド残基が第２の領域の残基と塩基対合が可能である場合、同じ又は異なる核酸の第２の領域に相補的である。第１の領域は第１の部分を含み、第２の領域は第２の部分を含むことによって、第１及び第２の部分は逆平衡様式で配置され、少なくとも約５０％、好ましくは少なくとも７５％、少なくとも約９０％、又は少なくとも約９５％の第１の部分のヌクレオチド残基が第２の部分のヌクレオチド残基と塩基対合可能であることが好ましい。第１の部分の全てのヌクレオチド残基は、第２の部分のヌクレオチド残基と塩基対合可能であることがより好ましい。
本明細書で使用される「対照試料」の用語は、例えば、ＮＭＯに冒されていない健康な被験体に由来する試料、又はより初期の時間点、例えば治療前、より初期の薬物評価の時間点、治療のより初期段階の被験体に由来する試料を含む、任意の臨床上関連のある比較試料を指す。対照試料は、キットにより提供される精製された試料、タンパク質、及び／又は核酸であってもよい。かかる対照試料は、試験試料における分析物、例えばマーカーのレベルの定量的測定を可能とするため、例えば希釈系列に希釈されてもよい。対照試料は、１又は複数の被験体に由来する試料を含んでもよい。また、対照試料は、評価される被験体からより初期の時間点で作製された試料であってもよい。例えば、対照試料は、腫瘍学的な障害、例えば前立腺がんの発病前、疾患のより初期段階、又は治療若しくは一部の治療の投与前に評価される被験体から採取された試料であってもよい。また、対照試料は、動物モデルに由来する、又は神経障害、例えばＮＭＯの動物モデルに由来する組織若しくは細胞株に由来する試料であってもよい。対照試料における１又は複数のマーカー（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８又は９以上のマーカー）の活性又は発現のレベルは、例えば平均、中央値、又はモデル値を含む中心傾向の基準等の、例えば任意の適当な統計学的測定に基づいて、決定されてもよい一群の測定からなる。対照との相違は、対照からの統計学的に有意な相違であることが好ましい。
本明細書で使用される「検出すること（ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ）」、「検出（ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ）」、「決定すること、特定すること（ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ）」等は、本発明の遺伝子、タンパク質、又はペプチドの同定に対して行われるアッセイを指すと理解される。
本明細書で使用される「ＤＮＡ」又は「ＲＮＡ」の分子又は配列の用語（また同様に、「オリゴヌクレオチド」の用語の場合がある）は、一般的にはアデニン（Ａ）、グアニン（Ｇ）、チミン（Ｔ）及び／又はシトシン（Ｃ）のデオキシリボヌクレオチドで構成される分子を指す。「ＲＮＡ」では、Ｔはウラシル（Ｕ）で置き換えられる。
「障害」、「疾患」、及び「異常な状態」の用語は、包括的に使用され、身体の任意の部分、臓器、又は器官（又はそれらの任意の組み合わせ）の正常な構造又は機能からの任意の逸脱を指す。具体的な疾患は、生物学的、化学的及び物理的な変化を含む特徴的な症状及び兆候によって明らかになり、しばしば、限定されないが、人工統計学、環境、使用（ｅｍｐｌｏｙｍｅｎｔ）、遺伝学、及び病歴の要因を含む様々な他の要因と関連する。特定の特徴的な兆候、症状、及び関連する要因は、重要な診断情報を得るため様々な方法によって定量化され得る。本明細書で使用される、障害、疾患、又は異常な状態は、良性前立腺肥大及びがん、特に前立腺がんを含む異常な前立腺の状態である。
本明細書で使用される「発現」の用語は、ＤＮＡからポリペプチドが産生される、例えばループＣペプチドがそれをコードする核酸分子から発現される、プロセスを意味する。該プロセスは、遺伝子のｍＲＮＡへの転写及びこのｍＲＮＡのポリペプチドへの翻訳を含む。使用される記載内容に応じて、「発現」は、ＲＮＡ若しくはタンパク質、又は両方の産生を指す場合がある。
本明細書で使用される、「核酸ハイブリダイゼーション」におけるように「ハイブリダイゼーション」の用語は、一般的には、適切な条件下で熱力学的に好都合な二本鎖構造を形成する、相補塩基配列を有する２つの一本鎖核酸分子のハイブリダイゼーションを指す。ハイブリダイゼーション条件の例を、上に参照される２つの実験室マニュアルに見ることができ（前出のＳａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，２０００、及び前出のＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，１９９４、又はさらにはＨｉｇｇｉｎｓ ａｎｄ Ｈａｍｅｓ（Ｅｄｓ．）「Ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，ａ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ」ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ Ｏｘｆｏｒｄ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｄ．Ｃ．，（１９８５））、当該技術分野で一般的に知られている。ニトロセルロース膜（又はナイロンのような他のかかる支持体）へのハイブリダイゼーションの場合、例えばよく知られたサザンブロッティング手法では、ニトロセルロース膜を典型的な所望のストリンジェンシー条件の温度（高ストリンジェンシーに対して６０℃〜６５℃、中程度のストリンジェンシーに対して５０℃〜６０℃、及び低ストリンジェンシーに対して４０℃〜４５℃）で高塩濃度（６×ＳＳＣ又は５×ＳＳＰＥ）、５×デンハルト溶液、０．５％ＳＤＳ、及び１００μｇ／ｍｌ変性担体ＤＮＡ（例えば、サケ精子ＤＮＡ）を含有する溶液中で標識化したプローブと共に一晩インキュベートしてもよい。その後、非特異的に結合するプローブを所望のストリンジェンシーを考慮して選択された温度、すなわち室温（低ストリンジェンシー）、４２℃（中ストリンジェンシー）、又は６５℃（高ストリンジェンシー）で０．２×ＳＳＣ／０．１％ＳＤＳ中で何回か洗浄することによってフィルタから洗い流すことができる。また、洗浄溶液の塩及びＳＤＳ濃度を、所望のストリンジェンシーに適応するように調整してもよい。選択された温度及び塩濃度は、ＤＮＡハイブリッドの溶融温度（Ｔｍ）に基づく。もちろん、ＲＮＡ−ＤＮＡハイブリッドも形成され、検出され得る。かかる場合では、ハイブリダイゼーション及び洗浄の条件を当業者によってよく知られた方法に従い適合してもよい。ストリンジェントな条件を使用してもよい（前出のＳａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，２０００）。種々のアニーリング溶液及び洗浄溶液を使用する他のプロトコル又は商業的に入手可能なハイブリダイゼーションキット（例えば、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｃｌｏｎｅｔｅｃｈ製のＥｘｐｒｅｓｓＨｙｂ（登録商標））もまた当該技術分野でよく知られるように使用可能である。よく知られているように、プローブの長さ及び特定される核酸の組成は、ハイブリダイゼーション条件の更なるパラメーターを構成する。上の条件における変化は、ハイブリダイゼーション実験におけるバックグラウンドの抑制に使用される交互のブロッキング試薬の包含及び／又は置換によってなされ得ることに留意されたい。典型的なブロッキング試薬として、デンハルト試薬、ＢＬＯＴＴＯ、ヘパリン、変性サケ精子ＤＮＡ、及び商業的に入手可能な独自製剤（ｐｒｏｐｒｉｅｔａｒｙ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ）が挙げられる。特定のブロッキング試薬の包含は、適合性による問題のため、上に記載されるハイブリダイゼーション条件の修正を必要とする場合がある。また、核酸分子をハイブリダイズすることは、上に記載される分子のフラグメントを含む。さらに、上述の核酸分子のいずれかとハイブリダイズする核酸分子もまた、これらの分子の相補フラグメント、誘導体及びアレル変異体を含む。さらに、ハイブリダイゼーション複合体は、相補的なＧ塩基及びＣ塩基の間、並びに相補的なＡ塩基及びＴ塩基の間の水素結合の形成による２つの核酸配列間の複合体を指し、これらの水素結合は塩基スタッキング相互作用によってさらに安定化されてもよい。逆平衡配置の２つの相補的核酸配列水素結合。ハイブリダイゼーション複合体は溶液中で形成されてもよく（例えば、Ｃｏｔ分析又はＲｏｔ分析）、又は溶液中に存在する１つの核酸配列と固体支持体（例えば、それに対して例えば細胞が固定化された、メンブレン、フィルタ、チップ、ピン又はガラススライド）上に固定化された別の核酸配列との間で形成されてもよい。
２以上の核酸又はアミノ酸の配列の記載において本明細書で使用される「同一」又は「パーセント同一性」の用語は、比較のウィンドウに対して、又は当該技術分野で知られている配列比較アルゴリズムを使用して測定される指定の領域に対して最大の一致について比較及び整列させた場合に、又は手作業の整列及び目視検査によって、同じであるか、又は明示されたパーセンテージのアミノ酸残基若しくは同じヌクレオチド（例えば、６０％又は６５％同一性、好ましくは７０％〜９５％同一性、より好ましくは少なくとも９５％の同一性）を有する、２以上の配列若しくはサブシーケンスを指す。例えば、６０％〜９５％以上の配列同一性を有する配列は、実質的に同一であるとされる。また、かかる定義は、試験配列の相補体に対しても適用される。記載される同一性は、少なくとも約１５〜２５の長さのアミノ酸又はヌクレオチドの領域に亘って存在することが好ましく、より好ましくは約５０〜１００の長さのアミノ酸又はヌクレオチドの領域に亘って存在する。当業者は、例えば、当該技術分野で知られているＣＬＵＳＴＡＬＷコンピュータープログラム（Ｔｈｏｍｐｓｏｎ Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２（１９９４），４６７３−４６８０）又はＦＡＳＴＤＢ（Ｂｒｕｔｌａｇ Ｃｏｍｐ．Ａｐｐ．Ｂｉｏｓｃｉ．６（１９９０），２３７−２４５）等に基づくようなアルゴリズムを使用して配列間（ｂｅｔｗｅｅｎ）／配列間（ａｍｏｎｇ）のパーセント同一性を如何にして決定するかわかる。ＦＡＳＴＤＢアルゴリズムは典型的には配列中の内部非マッチング欠損若しくは付加、すなわちギャップを考慮しないが、その計算では、これは％同一性の過大評価を回避するため手作業で補正され得る。しかしながら、ＣＬＵＳＴＡＬＷは、その同一性計算に配列ギャップを考慮に入れる。また、ＢＬＡＳＴ及びＢＬＡＳＴ ２．０アルゴリズム（Ａｌｔｓｃｈｕｌ Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５（１９７７），３３８９−３４０２）が当業者に利用可能である。核酸配列に対するＢＬＡＳＴＮプログラムは、デフォルトとして１１のワード長（Ｗ）、１０の予測（Ｅ）、Ｍ＝５、Ｎ＝４、及び両方の鎖の比較を使用する。アミノ酸配列に対して、ＢＬＡＳＴＰプログラムは、デフォルトとして３のワード長（Ｗ）、１０の予測（Ｅ）を使用する。ＢＬＯＳＵＭ６２スコアリングマトリクス（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，８９，（１９８９），１０９１５）は、５０のアラインメント（Ｂ）、１０の予測（Ｅ）、Ｍ＝５、Ｎ＝４、及び両方の鎖の比較を使用する。またさらに、本発明は、その配列が上に記載されるハイブリダイズする分子の配列との比較で変性される核酸分子に関する。本発明により使用される場合、「遺伝情報の結果変性した」の用語は、遺伝情報の冗長性に起因する、同じアミノ酸をコードする異なるヌクレオチド配列を意味する。また、本発明は、１又は複数の変異又は欠失を含む核酸分子、及び（１つの）変異（複数の場合がある）若しくは（１つの）欠失（複数の場合がある）を示す、本明細書に記載される核酸分子の１つにハイブリダイズする核酸分子を指す。
「調節」の用語は、応答（例えば、マーカーの発現レベル）の増加（すなわち、活性化又は賦活化）、減少（すなわち、阻害又は抑制）、又は２つの組み合わせを指すか、又は２つを別々に指す。「調節因子」は、調節する化合物又は分子であり、例えばアゴニスト、アンタゴニスト、活性化因子、刺激因子、抑制因子、又は阻害因子であってもよい。
本明細書で使用される「核酸分子」又は「ポリヌクレオチド」は、ヌクレオチドのポリマーを指す。それらの非限定的な例として、例えば配列番号６のループＣペプチドをコードする、ＤＮＡ（例えば、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ）、ＲＮＡ分子（例えば、ｍＲＮＡ）及びそれらのキメラが挙げられる。核酸分子は、クローニング技術又は合成によって得られてもよい。ＤＮＡは、二本鎖であっても一本鎖（コーディング鎖又は非コーディング鎖［アンチセンス］）であってもよい。従来のリボ核酸（ＲＮＡ）及びデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）は、「核酸」及びそれらのアナログとしてのポリヌクレオチドの用語に含まれる。核酸骨格は、１又は複数の糖−ホスホジエステル結合、ペプチド核酸結合（「ペプチド核酸」（ＰＮＡ）と呼ばれる；Ｈｙｄｉｇ−Ｈｉｅｌｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，ＰＣＴ国際特許出願公開第９５／３２３０５号）、ホスホロチオエート結合、メチルホスフェート結合、又はそれらの組み合わせを含む、当該技術分野で既知の様々な結合を含んでもよい。核酸の糖部分は、リボース若しくはデオキシリボース、又は既知の置換を有する同様の化合物、例えば、２’メトキシ置換（２’−Ｏ−メチルリボフラノシル部分；国際特許出願公開第９８／０２５８２号を参照されたい）及び／又は２’ハロゲン化物置換であってもよい。窒素塩基は従来の塩基（Ａ、Ｇ、Ｃ、Ｔ、Ｕ）、それらの既知のアナログ（例えば、イノシン又はその他；Ｔｈｅ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ ５−３６，Ａｄａｍｓ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．，１１ｔｈ ｅｄ．，１９９２を参照されたい）、又はプリン塩基若しくはピリミジン塩基の既知の誘導体（Ｃｏｏｋ、国際特許出願公開第９３／１３１２１号を参照されたい）であってもよく、又はその骨格が１若しくは複数の残基について窒素塩基を含まない「脱塩基の」残基であってもよい（Ａｒｎｏｌｄ ｅｔ ａｌ．，米国特許第５，５８５，４８１号）。核酸は、ＲＮＡ及びＤＮＡに見られる従来の糖、塩基及び結合のみを含んでもよく、又は従来の構成成分と置換の両方（例えば、メトキシ骨格によって連結された従来の塩基、又は従来の塩基及び１若しくは複数の塩基アナログを含む核酸）を含んでもよい。一般的に理解され、本明細書で使用される「単離された」核酸分子は、ヌクレオチドのポリマーを指し、限定されるべきではないがＤＮＡ及びＲＮＡを含む。「単離された」核酸分子は、天然のｉｎ ｖｉｖｏ状態から精製されるか、クローニングによって得られるか、又は化学的に合成される。
本明細書で使用される「得ること（ｏｂｔａｉｎｉｎｇ）」の用語は、本明細書では製造すること、購入すること、或いは入手することとして理解される。
本明細書で使用される「オリゴヌクレオチド」又は「オリゴ」は、２以上のヌクレオチド（リボヌクレオチド、又はデオキシリボヌクレオチド）を有する分子を定義する。オリゴの大きさは、特定の状況及び最終的にはその特定の使用によって規定され、したがって当業者によって適合される。オリゴヌクレオチドを化学的に合成してもよく、又はよく知られる方法に従ってクローニングによって得てもよい。オリゴヌクレオチドは通常一本鎖形態であるが、二本鎖形態であってもよく、さらに「調節領域」を含んでもよい。オリゴヌクレオチドは、天然の希少な、又は合成のヌクレオチドを含んでもよい。オリゴヌクレオチドは、例えば安定性のような選択された基準を増強するように設計されてもよい。デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドのキメラもまた、本発明の範囲に含まれる場合がある。
本明細書で使用される「１又は複数」は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０の各値及び１０より大きい任意の値と理解される。
「又は」の用語は、別段の明らかな指示がない限り、「及び／又は」の用語をここに含むことを意味して使用され、その用語と互換的に使用される。例えば、本明細書で使用されるフィラミンＢ又はＬＹ９は、フィラミンＢ単独、ＬＹ９単独、及びフィラミンＢとＬＹ９の組み合わせを含むと理解される。
本明細書で使用される「患者」又は「被験体」は、ヒト又は非ヒト動物のいずれかを意味する場合があり、好ましくは障害、例えばＮＭＯを有する哺乳動物を意味することが好ましい。「被験体」は、ウマ、イヌ、ネコ、ブタ、ヤギ、ヒツジ、ハムスター、サル、モルモット、ラット、マウス、トカゲ、ヘビ、ヒツジ、ウシ、魚、及び鳥を含む任意の動物を意味する。ヒト被験体は、患者と呼ばれる場合がある。本明細書に記載される臨床所見はヒト被験体を用いて行われ、少なくとも幾つかの実施形態では被験体はヒトである。
本明細書で使用される「予防的」又は「治療的」処置は、所望の臨床効果を提供するための１若しくは複数の薬剤の被験体への投与又は介入を指す。望ましくない状態（例えば、疾患、又は他の望ましくない宿主動物の状態）の臨床所見に先立って投与される場合であれば、その処置は予防的であり、すなわち、望ましくない状態の少なくとも１つの兆候又は症状の発症に対して宿主を保護し、一方、望ましくない状態の所見後に投与される場合、その処置は治療的である（すなわち、既存の望ましくない状態又はそれによる副作用の少なくとも１つの兆候又は症状を減少、改善、又は維持することが意図される）。
抗体とタンパク質又はペプチドとの相互作用を参照して使用される場合、本明細書で使用される「特異的結合」又は「特異的に結合している」の文言は、その相互作用がタンパク質上の特定の構造（すなわち、抗原決定基又はエピトープ）の存在に依存することを意味し、言い換えれば、抗体は一般的なタンパク質ではなく特異的なタンパク質の構造を認識し、結合している。例えば、抗体がエピトープ「Ａ」に対して特異的である場合、標識化された「Ａ」及び抗体を含む反応においてエピトープＡ（又は遊離の、標識化されていないＡ）を含むタンパク質の存在は、抗体に結合した標識化Ａの量を減少する。
「等」の用語は、「限定されないが、…等」の文言を意味し、それと互換的に使用される。
「治療的効果」の用語は、薬理学的に活性な物質によってもたらされる、動物特に哺乳動物、特にヒトの局所的又は全身的な効果を指す。したがって、その用語は、疾患の診断、治癒、緩和、治療若しくは予防における、又は動物若しくは人における所望の生理学的若しくは精神的な発達及び状態の増強における使用が意図される任意の物質を意味する。治療的効果は、腫瘍成長の減少、腫瘍成長速度の減少、腫瘍量の安定化若しくは減少、腫瘍サイズの安定化若しくは減少、腫瘍悪性度の安定化若しくは減少、腫瘍アポトーシスの増加、及び／又は腫瘍血管新生の減少として理解され得る。
本明細書で使用される「治療的有効量」は、疾患の治療のため患者に投与された場合、その疾患に対するかかる治療をもたらすのに十分な化合物の量を意味し、例えば、任意の治療に適用可能な合理的な利益／リスク率で幾つかの望ましい局所的又は全身的な効果を生じるかかる物質の量、例えば、疾患の少なくとも１つの兆候又は症状を改善するのに十分な量、例えば、疾患又は状態の進行を阻止する量、例えば、ＮＭＯ病変の進行を阻止するか、又はＮＭＯを全体的に改善する量を意味する。疾患の予防のため投与された場合、その量は、疾患の発症を回避又は遅延するのに十分である。「治療的有効量」は、化合物、その治療インデックス、可溶性、疾患及びその重症度、並びに治療される患者の年齢、体重等によって変化する。例えば、本発明の方法によって発見された特定の化合物は、かかる治療に対して適用可能な合理的な利益／リスク率をもたらすのに十分な量で投与され得る。治療的有効量の化合物の投与は、２用量以上の化合物の投与を必要とする場合がある。
「転写されたポリヌクレオチド」又は「ヌクレオチド転写産物」は、本発明のマーカーの、また存在する場合は、ＲＮＡ転写産物、及びＲＮＡ転写産物の逆転写産物の転写、及び正常な翻訳後修飾（例えば、スプライシング）によって作製された成熟したｍＲＮＡ、の全て又は一部に対して相補的であるか、又はそれと高いパーセント同一性（例えば少なくとも８０％同一性）を有するポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ、ｈｎＲＮＡ、ｃＤＮＡ、又はかかるＲＮＡ若しくはｃＤＮＡのアナログ）である。
「抗原性フラグメント」等は、被験体において免疫応答を誘導することができる、又は自己免疫疾患、特に抗原がＡＱＰ−４に由来する場合、特にＮＭＯを有する又は有することが疑われる被験体に存在する自己抗体によって結合され得るペプチドの少なくともその一部（例えば、ループＣペプチド）と理解される。上記ペプチドは、正常な（例えば、自己免疫疾患のない）被験体における免疫応答を誘導することができない場合があると理解される。しかしながら、かかる抗原は、自己抗原として上記ペプチドを認識しない、又は抗原が自己と認識されないような免疫不全を有する動物における免疫応答を促進することができる。典型的には抗原性フラグメントは、少なくとも７アミノ酸の長さである。さらに、自己抗原に対する共通するエピトープがマッピングされ、本明細書に提示される組成物及び方法において抗原性フラグメントとして使用される。抗原性フラグメントは、Ｎ末端若しくはＣ末端、又は両方からのアミノ酸の欠失を含んでもよい。例えば、フラグメントの開始長さに応じて、活性なフラグメントは、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００又はそれ以上のアミノ酸のＮ末端及び／Ｃ末端の欠失を有してもよい。また、抗原性フラグメントは、同じ例示的長さの１又は複数の内部欠失を含んでもよい。また、抗原性フラグメントは、１又は複数の点突然変異、特に保存的点突然変異を含んでもよい。酵素の少なくとも１つの抗原性フラグメントは、抗原の全長の野生型配列を含んでもよい。
本明細書で使用される「キット」は、使用のための指示書を備えてもよい、適当な包装において本発明の方法における使用のための少なくとも１つの非標準的な実験試薬を備えると理解される。キットは、乾燥粉末、濃縮溶液又は既製の溶液といった本発明の方法の実施に必要な任意の他の構成成分をさらに備えてもよい。或る実施形態では、キットは、本発明の方法における使用のための試薬を含む１又は複数の容器を備え、かかる容器は、箱、アンプル、瓶、バイアル、管、袋、パウチ、ブリスターパック、又は当該技術分野で知られている他の好適な容器の形態であってもよい。かかる容器は、プラスチック、ガラス、ラミネート紙、金属箔、又は試薬を保持するのに適した他の材料で作製されてもよい。
本明細書で使用される「ポリペプチド」又は「ペプチド」は、共有結合（例えばペプチド結合）によって結合された２以上の独立して選択された天然又は非天然のアミノ酸と理解される。ペプチドは、ペプチド結合によって結合された２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０又はそれ以上の天然又は非天然のアミノ酸を含んでもよい。本明細書に記載されるポリペプチドは、全長タンパク質（例えば、完全にプロセシングされたタンパク質）、また同様により短いアミノ酸配列（例えば、天然のタンパク質のフラグメント又は合成ポリペプチドフラグメント）を含む。
「感度及び特異性」は、二項分類試験の成績の統計学的尺度である。感度（或る分野では再現率とも呼ばれる）は、それ自体が正確に同定される実際の陽性の割合（例えば、その状態を有すると同定される病気の人々のパーセンテージ）を測定し、特異性は、正確に同定された陰性の割合（例えば、その状態を有しないと同定される健康な人々のパーセンテージ）を測定する。感度と特異性はＩ型及びＩＩ型のエラーの概念と密接に関連する。理論的に最適な予測は、１００％感受性（すなわち、病気群に由来する全ての人々を病気と予測する）及び１００％特異性（すなわち、健康群に由来する人を誰も予測しない）を達成し得る。
概念は以下の通り数学的に表される：
感度＝真の陽性の数／真の陽性の数＋偽陰性の数
特異性＝真の陰性の数／真の陰性の数＋疑陽性の数
本明細書に提示される範囲は、その範囲に含まれる全ての値に対する省略標記であると理解される。例えば、１〜５０の範囲は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、又は５０からなる群に由来する任意の数字、数字の組み合わせ、又は部分範囲を含むと理解される。
ここに、本発明の例示的実施形態に対して詳細な参照が行われる。本発明は、例示的実施形態と併せて記載されるが、本発明をそれらの実施形態に限定することを意図するものではないことを理解される。対照的に、添付の特許請求の範囲に規定されるように、本発明の趣旨及び範囲に含まれ得る代替物、修飾、及び等価物を包含することが意図される。
ペプチド及びそれをコードする核酸
様々な実施例では、本発明の組成物、方法、及びキットは、ＡＱＰ４ペプチド、特に全長タンパク質の細胞外ループ領域に対応するペプチド、すなわちループＣペプチド（配列番号６）及び／又はループＣ配列含有ペプチド（配列番号８）を含んでもよい。また、他の実施形態では、本発明の組成物、方法、及びキットは、例えばループＡペプチド（配列番号５）及びループＥペプチド（配列番号７）を含むＡＱＰ４の他のペプチドを含んでもよい。
さらに他の実施形態では、本発明の組成物、方法、及びキットは、ＡＱＰ４ペプチド、特に全長タンパク質の細胞外ループ領域に対応するペプチド、すなわちループＣ配列含有ペプチド（配列番号８）をコードする核酸分子を含んでもよい。また、他の実施形態では、本発明の組成物、方法、及びキットは、例えば、ループＡペプチド（配列番号５）及びループＥペプチド（配列番号７）を含む、ＡＱＰ４の他のペプチドをコードする核酸分子を含んでもよい。
ＮＭＯを有する個体を免疫及び／又は治療するため、ペプチド及びコードする核酸分子を本発明の様々な方法で使用してもよい。
したがって、或る一つの態様では、本明細書は、配列番号６若しくは配列番号８に対応する単離されたループＣペプチド及び／又はループＣ配列含有ペプチド（又はそのフラグメント若しくは誘導体）、又は配列番号６若しくは配列番号８に開示されるポリペプチドに対して少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は１００％の配列同一性を有するポリペプチドを提供する。他の態様では、本明細書は、配列番号５に対応する単離されたループＡペプチド（又はそのフラグメント若しくは誘導体）、又は配列番号５に開示されるポリペプチドに対して少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は１００％の配列同一性を有するポリペプチドを提供する。さらに他の態様では、本明細書は、配列番号７に対応する単離されたループＥペプチド（又はそのフラグメント若しくは誘導体）、又は配列番号７に開示されるポリペプチドに対して少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は１００％の配列同一性を有するポリペプチドを提供する。
更なる態様では、本明細書は、配列番号６又は配列番号８に対応するループＣ及び／又はループＣ配列含有ペプチド（又はそのフラグメント若しくは誘導体）、又は配列番号６若しくは配列番号８に開示されるポリペプチドに対して少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は１００％の配列同一性を有するポリペプチドをコードする単離されたループＣ及び／又はループＣ配列含有ペプチドをコードする核酸分子を提供する。他の態様では、本明細書は、配列番号５に対応するループＡ（又はそのフラグメント若しくは誘導体）、又は配列番号５に開示されるポリペプチドに対して少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は１００％の配列同一性を有するポリペプチドをコードする単離されたループＡペプチドコーディング核酸分子を提供する。さらに他の態様では、本明細書は、配列番号７に対応するループＥ（又はそのフラグメント若しくは誘導体）、又は配列番号７に開示されるポリペプチドに対して少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は１００％の配列同一性を有するポリペプチドをコードする単離されたループＥペプチドコーディング核酸分子を提供する。
したがって、或る一つ態様では、本明細書は、配列番号２及び配列番号４に開示される核酸に対して少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は１００％の同一性を有する核酸配列を含むループＣ及び／又はループＣ配列含有ポリペプチドをコードする単離されたループＣ及び／又はループＣ配列含有ペプチド核酸分子を提供する。特定の実施形態では、本発明の単離された核酸分子は、ストリンジェントな条件下で、ループＣ及び／又はループＣ配列含有（又はループＡ若しくはループＥ）核酸配列のタンパク質コーディング配列を含む核酸分子に相補的な核酸配列にハイブリダイズする。また、本発明は、ループＣ及び／又はループＣ配列含有ポリペプチド、又はそのフラグメント、ホモログ、アナログ、融合タンパク質、偽ペプチド、ペプチド模倣物、若しくは誘導体をコードする単離された核酸を含む。例えば、核酸は、配列番号５、配列番号７、配列番号６、配列番号７、又は配列番号８のアミノ酸配列を含むポリペプチドに対して少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は１００％の同一性のポリペプチドをコードし得る。核酸は、例えば、ゲノムＤＮＡフラグメント又はｃＤＮＡ分子であってもよい。特定の実施形態では、これらのループＣ及び／又はループＣ配列含有（又はループＡ若しくはループＥ）核酸分子は、ループＣ及び／又はループＣ配列含有（又はループＡ若しくはループＥ）をコードする修飾されたコドン最適化ヌクレオチド配列、配列タグ（例えば、ヒスチジンタグ、チオレドキシン（Ｔｈｘ）タグ、マルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）タグ）、又は追加のＮ末端メチオニン残基を含む特定の最適化の特徴を含むように修飾されてもよく、それらの各々が、本発明のポリペプチドの発現及び／又は可溶性及び／又は回収の改善及び／又は増強をもたらす。
特定の実施形態では、本発明は、全長アクアポリン−４（ＡＱＰ４）ポリペプチドよりも短い長さ（任意に、ペプチドは１００アミノ酸残基以下の長さ、９０アミノ酸残基以下の長さ、８０アミノ酸残基以下の長さ、７０アミノ酸残基以下の長さ、６０アミノ酸残基以下の長さ、５０アミノ酸残基以下の長さ、４０アミノ酸残基以下の長さ、３０アミノ酸残基以下の長さ、２９アミノ酸残基以下の長さ、２８アミノ酸残基以下の長さ、２７アミノ酸残基以下の長さ、２６アミノ酸残基以下の長さ、２５アミノ酸残基以下の長さ、２４アミノ酸残基以下の長さ、２３アミノ酸残基以下の長さ、２２アミノ酸残基以下の長さ、２１アミノ酸残基以下の長さ、２０アミノ酸残基以下の長さ）のループＣ配列含有ペプチド（又はかかるペプチドをコードする核酸）、及び最大の同一性について配列番号８と整列させた場合に、配列番号８の少なくとも１７のアミノ酸残基を含むペプチドを提供する。上記ペプチド配列は、配列番号８の少なくとも１８のアミノ酸残基を含んでもよい。特定の実施形態では、上記ペプチドは配列番号８の全配列を含む。或る実施形態では、上記ペプチドは配列番号８の少なくとも１７の連続するアミノ酸残基を含み、上記ペプチドは配列番号８の少なくとも１８の連続するアミノ酸残基を含んでもよい。或る一つの実施形態では、上記ペプチドは、配列番号８と比較して１又は２の変異体残基を含む。上記ペプチドは、配列番号８と比較して（配列番号８−整列されたペプチド配列内に）単一の変異体を含んでもよい。
本発明のペプチドは、本明細書に記載されるループＣ配列含有ペプチドを含む融合タンパク質であってもよい。
別の態様では、本明細書は、オリゴヌクレオチド、例えばループＣ及び／又はループＣ配列含有核酸又は前記オリゴヌクレオチドの総補体の少なくとも６個の連続するヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドを提供する。
他の態様では、本明細書は、実質的に精製されたループＣ及び／又はループＣ配列含有ポリペプチド（例えば、配列番号６又は配列番号８）を提供する。特定の実施形態では、ループＣ及び／又はループＣ配列含有ポリペプチドは、ヒトループＣ及び／又はループＣ配列含有ポリペプチドのアミノ酸配列に実施的に同一のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、精製されたループＣ及び／又はループＣ配列含有ポリペプチドは、分泌シグナル配列、配列タグ（例えば、ヒスチジンタグ、チオレドキシン（Ｔｈｘ）タグ、マルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）タグ）、又は追加のＮ末端メチオニン残基を含む、少なくとも１つの最適化の特徴を含む。
さらに他の態様では、本明細書は、ループＣ及び／又はループＣ配列含有ポリペプチド又はそのフラグメント、ホモログ、アナログ、偽ペプチド、ペプチド模倣物、若しくは誘導体に免疫選択的に結合する抗体を提供する。
更なる態様では、本明細書は、ＤＮＡによってコードされるループＣ及び／又はループＣ配列含有ポリペプチドの発現を可能とする条件下で内因性又は外因性に発現されたループＣ及び／又はループＣ配列含有ポリペプチドを含む細胞を培養することによってポリペプチドを産生する方法を提供する。所望であれば、その後、ループＣ及び／ループＣ配列含有ポリペプチドを回収する。
さらに別の態様では、本明細書は、外因性プロモーターの上流又は下流に配置された内因性ループＣ及び／又はループＣ配列含有ポリペプチドを含有する細胞を培養することによってポリペプチドを産生する方法を提供する。特定の実施形態では、外因性プロモーターは、相同組換え、鎖切断、又はミスマッチ修復機構により宿主細胞のゲノムへと組み込まれる。
別の態様では、本明細書は、試料中のループＣ及び／又はループＣ含有ポリペプチドの存在を検出する方法を提供する。上記方法では、ポリペプチドと化合物の間で複合体を形成することを可能とする条件下でポリペプチドに選択的に結合する化合物と試料を接触させる。存在する場合、複合体が検出され、それによって試料内のループＣ及び／又はループＣ含有ポリペプチドを同定する。
また、試料をループＣ及び／又はループＣ配列含有核酸プローブ又はプライマーと接触させ、核酸プローブ又はプライマーが試料中のループＣ及び／又はループＣ配列含有核酸に結合したかどうかを検出することにより、試料中のループＣ及び／又はループＣ配列含有核酸の存在を検出する方法が記載される。
本発明の或る実施形態では、上記組成物は、本発明の組成物のホモログ、アナログ、誘導体、鏡像異性体、及び／又はそれらの機能的に等価な組成物をさらに含んでもよい。上記組成物のかかるホモログ、アナログ、誘導体、鏡像異性体、及びそれらの機能的に等価な組成物もまた、上に記載されるいずれかのアッセイにおいて使用され得る。当業者は、かかるホモログ、アナログ、誘導体、鏡像異性体、及び／又はそれらの機能的に等価な組成物を作製する方法において条件を操作することができる。本発明の化合物とほぼ同じ効果の又はより効果的なホモログ、アナログ、誘導体、鏡像異性体、及びそれらの機能的に等価な組成物もまた、本発明の方法における使用に対して意図される。かかる組成物の合成は、当該技術分野で日常的に行われるもののような典型的な化学修飾法によりなされる。
本発明の特定の実施形態は、本明細書に記載されるいずれかの組成物を提供すること、並びに好ましくは上記組成物のホモログ、アナログ、誘導体、鏡像異性体、及びそれらの機能的に等価な組成物を得るため、上記組成物に対してコンビナトリアル合成を行うことを含む。その有効性を決定するため、上記ホモログ、アナログ、誘導体、鏡像異性体、又は機能的に等価な組成物によってアッセイを行ってもよい。コンビナトリアル合成は、当業者に知られている技術を使用して、本明細書に記載される複数の組成物をコンビナトリアル合成に供することを含んでもよい。
幾つかの場合では、本発明のループＣ及び／又はループＣ配列含有抗原はハプテン、すなわち、特異的な免疫応答を引き起こすことはできないが、それ自体が単離された場合、それが付着される及び／又はそれが構成成分である化学種（すなわち「担体」）、例えば抗原のエピトープに対する免疫応答を増強することができる、典型的には低分子量を有する物質（例えば、低分子の有機分子又はペプチド）を含んでもよい。免疫応答は、ハプテンに対する抗体を含んでもよい。或る一組の実施形態では、抗原の一部（例えば、エピトープ）はハプテンである。別の一組の実施形態では、ハプテンは抗原及び炭水化物のいずれか又はそれらの両方に結合される分子である。例えば、ハプテンは、抗原と炭水化物の間の連結剤であってもよい。ハプテンの非限定的な例として、特定の薬物、単糖、アミノ酸、低分子ペプチド、リン脂質、トリグリセリド等が挙げられる。
本発明の特定のループＣ含有ペプチド（例えば配列番号８）は、代替的なループＣ含有配列、すなわちＧＩＬＹＬＶＴＰＰＳＶＶＧＧＬＧＶＴＭＶ（配列番号９、米国特許出願公開第２０１４／０１９９３３３号において以前に記載される）と比較して、明らかに改善された効果を持つ。実際、ヒト患者におけるＮＭＯに類似した表現型（脊髄炎症に起因する麻痺、及び視神経炎症に起因する視力障害等の神経学的症状を含む）が本発明のループＣ含有ペプチド（配列番号８）を投与されたマウスについて観察され、言うまでもなく、治療有効性がある場合には同様に限定されて、かかる神経学的症状は、配列番号９のペプチドを投与されたマウスについては観察されなかった。したがって、本発明の特定の実施形態では、本発明のループＣ含有ペプチド（例えば配列番号８）には臨床状況においてより大きな治療有効性があり、及び／又は他のループＣ配列含有ペプチド（例えば配列番号９）よりも大きなＮＭＯ神経症状をマウスにおいて誘導する。
医薬組成物
本発明は、治療的有効量のアクアポリン−４（ＡＱＰ４）水チャネルのループＣ及び／又はループＣ配列含有ペプチド、又は治療的に有効なそのフラグメント若しくは変異体を含む、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）を治療するための医薬組成物を提供する。さらに別の態様では、本発明は、治療的有効量のアクアポリン−４（ＡＱＰ４）水チャネルのループＣ及び／又はループＣ配列含有ペプチド、又は治療的に有効なそのフラグメント若しくは変異体を投与することを含む、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）を有する個体を治療する方法に関する。さらに別の態様では、本発明は、免疫原的有効量のアクアポリン−４（ＡＱＰ４）水チャネルのループＣ及び／又はループＣ配列含有ペプチド、又は免疫原的に有効なそのフラグメント若しくは変異体を投与することを含む、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）を有する個体において耐性応答を誘導する方法を提供する。
製剤
治療的有効量のループＣ及び／又はループＣ配列含有ペプチド（又はそのフラグメント若しくは変異体）、又は治療的有効量のループＣ核酸を含む本発明の医薬組成物は、簡便には、選択されたｐＨに緩衝されてもよい、滅菌液体製剤、例えば、等張性水溶液、懸濁物、エマルジョン、分散物、又は粘性組成物として提供され得る。液体製剤は、通常、ゲル、他の粘性組成物、及び固体組成物よりも作製することが容易である。さらに、液体組成物は、特に注射によって投与することがいくぶん簡便である。一方、粘性組成物は、特定の組織とのより長い接触期間を提供するため、適切な粘度範囲内で製剤化され得る。液体又は粘性の組成物は、例えば水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコール等）、及びそれらの好適な混合物を含む溶媒又は分散媒であってもよい、担体を含むことができる。
滅菌注射用溶液は、所望に応じて、様々な量の他の原料と共に必要量の適切な溶媒中で本発明の実施に利用される遺伝子修飾された免疫応答性細胞を組み込むことによって作製され得る。かかる組成物は、滅菌水、生理学的食塩水、グルコース、デキストロース等の好適な担体、希釈剤、又は賦形剤と共に混合されてもよい。また、上記組成物は凍結乾燥されてもよい。また、上記組成物は、所望の投与及び作製の経路に応じて、湿潤剤、分散剤、又は乳化剤（例えば、メチルセルロース）、ｐＨ緩衝剤、ゲル化剤、又は増粘添加剤、防腐剤、香味剤、着色剤等の補助剤を含有してもよい。参照により本明細書に援用される「ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥ」，１７ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，１９８５，等の標準テキストを調べて、過度の実験をせずに好適な製剤を作製してもよい。
抗菌防腐剤、抗酸化剤、キレート剤、及びバッファーを含む、上記組成物の安定性及び無菌状態を高める様々な添加剤を添加してもよい。微生物の活動を阻止することは、様々な抗菌剤及び抗真菌剤、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸等によって保証され得る。注射用医薬形態の持続吸収は、吸収を遅延する薬剤、例えばモノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンの使用によって実施され得る。しかしながら、本発明によれば、使用される任意のビヒクル、希釈剤、又は添加剤は遺伝子修飾された免疫応答性細胞又は他の前駆細胞と適合性でなくてはならない。
上記組成物は等張性であってもよく、すなわち、血液及び涙液と同じ浸透圧を有し得る。本発明の組成物の望ましい等張性は、塩化ナトリウム、又はデキストロース、ホウ酸、酒石酸ナトリウム、プロピレングリコール、又は他の無機若しくは有機の溶質を使用して達成され得る。塩化ナトリウムは、ナトリウムイオンを含有するバッファーに対して特に好ましい。
所望に応じて、上記組成物の粘度は、薬学的に許容可能な増粘剤を使用して選択されるレベルに維持され得る。メチルセルロースは、容易に経済的に入手可能であり、作業が容易であることから好ましい。他の好適な増粘剤として、例えば、キサンタンガム、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボマー等が挙げられる。増粘剤の好ましい濃度は、選択される薬剤に依存する。重要な点は、選択された粘度を達成する量を使用することである。明らかに、好適な担体及び他の添加剤の選択は、正確な投与経路及び特定の剤形の性質、例えば液体剤形（例えば、上記組成物が溶液、懸濁物、ゲル又は徐放形態又は液体充填形態等の他の液体形態に製剤化されるかどうか）に依存する。
当業者は、上記組成物の成分は、化学的に不活性なものを選択すべきであり、本発明において記載される遺伝子修飾された免疫応答性細胞の生存能力又は有効性に影響を及ぼさないことを認識する。これは、化学的及び薬学的な原理において当業者に何らの課題も提示することはなく、又は課題は標準テキストを参照することにより、若しくは本開示及び本明細書で引用される文書より、単純な実験（過度の実験を含まない）によって容易に回避され得る。かかる決定は、当業者の知識、本開示、及び本明細書で引用される文献から過度の実験を必要としない。また、逐次投与に関する時間は過度の実験を行わずに確認され得る。
また、本発明の組成物によって誘導される免疫応答は、本発明の組成物と組み合わせてサイトカイン又はＢ７−１／２共刺激分子の同時投与又は共発現によって増大され得る。サイトカインは、上記組成物と共に直接投与され得る、及び／又はサイトカインをｉｎ ｖｉｖｏで発現し得るようにサイトカインをコードする核酸ベクターの形態で投与され得る。或る一つの実施形態では、サイトカインは、プラスミド発現ベクターの形態で投与される。「サイトカイン」の用語は、液性調節因子としてナノモル〜ピコモルの濃度で作用し、正常状態又は病的状態のいずれかにおいて、個々の細胞及び組織の機能的活性を調節する多様な群の可溶性タンパク質及びペプチドに対する一般名として使用される。また、これらのタンパク質は、細胞間の相互作用を直接媒介し、細胞外環境で行われるプロセスを調節する。サイトカインの非限定的な例として、限定されないが、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（ＧＣＳＦ）、インターフェロン−ガンマ、インターフェロン−アルファ、腫瘍壊死因子−アルファ、腫瘍壊死因子−ベータ、ＴＧＦ−ガンマ、ＦＬＴ−３リガンド、ＣＤ４０リガンド等が挙げられる。
本発明の特定の実施形態では、本発明の薬剤は、アジュバントと併せて投与され得る。本明細書で使用される「アジュバント」は、液性及び／又は細胞性の免疫応答を賦活し得る、又は抗原に対するデポーとして機能し得る任意の分子又は化合物である。アジュバントの例として、デポー効果をもたらすアジュバント、免疫賦活アジュバント、デポー効果をもたらし、免疫系を賦活するアジュバント、及び粘膜アジュバントが挙げられる。
本明細書で使用される「デポー効果をもたらすアジュバント」は、体内で徐々に抗原が放出されるようにして、抗原に対する免疫細胞の暴露を延長するアジュバントである。このクラスのアジュバントとして、限定されないが、ミョウバン（例えば、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム）、又は鉱物油、非鉱物油、油中水型、若しくは油中水中油型、又は水中油型のエマルジョン、例えばＳｅｐｐｉｃ ＩＳＡシリーズのＭｏｎｔａｍｉｄｅアジュバント（例えば、Ｍｏｎｔａｍｉｄｅ ＩＳＡ ７２０、フランス国パリのＡｉｒＬｉｑｕｉｄｅ）、ＭＦ−５９（Ｓｐａｎ ８５及びＴｗｅｅｎ ８０で安定化された水中スクワランエマルジョン、Ｃｈｉｒｏｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、及びＰＲＯＶＡＸ（安定化洗浄剤及びミセル形成剤を含有する水中油型エマルジョン、ＩＤＥＣ、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を含むエマルジョン系製剤が挙げられる。
「免疫賦活アジュバント」は、免疫系の細胞の活性化を引き起こすアジュバントである。免疫賦活アジュバントは、例えば、免疫細胞にサイトカインを産生及び分泌させる。このクラスのアジュバントとして、限定されないが、ＱＳ２１（ＨＰＬＣ画分により２１ ｔピークで溶離する糖脂質、Ａｑｕｉｌａ Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）等のＱ．ｓａｐｏｎａｒｉａ樹木の樹皮から精製されるサポニン、ポリ（ジ（カルボキシラトフェノキシ（ｃａｒｂｏｘｙｌａｔｏｐｈｅｎｏｘｙ））ホスファゼン）、（ＰＣＰＰポリマー、Ｖｉｒｕｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）、一リン酸化リピドＡ（ＭＰＬ、Ｒｉｂｉ ＩｍｍｕｎｏＣｈｅｍ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｉｎｃ．）、ムラミルジペプチド（ＭＤＰ、Ｒｉｂｉ）及びトレオニルムラミルジペプチド（ｔ−ＭＤＰ、Ｒｉｂｉ）、ＯＭ−１７４（リピドＡに関連するグルコサミン二糖類、ＯＭ Ｐｈａｒｍａ ＳＡ）等のリポ多糖の誘導体、並びにリーシュマニア伸長因子（精製されたリーシュマニアタンパク質、Ｃｏｒｉｘａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）が挙げられる。
「デポー効果をもたらし、免疫系を賦活するアジュバント」は、上に特定される機能の両方を有するそれらの化合物である。このクラスのアジュバントとして、限定されないが、ＩＳＣＯＭＳ（混合サポニン、脂質を含み、抗原を保持する孔を有するウイルスサイズの粒子を形成する免疫賦活複合体、ＣＳＬ）、ＳＢ−ＡＳ２ （ＭＰＬ及びＱＳ２１を含有する水中油型エマルジョンである、ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ Ｂｅｅｃｈａｍアジュバントシステム２番：ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ Ｂｅｅｃｈａｍ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）、ＳＢ−ＡＳ４（ミョウバン及びＭＰＬを含有するＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ Ｂｅｅｃｈａｍアジュバントシステム４番）、ＣＲＬ １００５（これらは、ポリオキシエチレンの鎖に隣接する疎水性ポリオキシプロピレンの直鎖を含有する、Ｖａｘｃｅｌ，Ｉｎｃ．）、及びＳｙｎｔｅｘアジュバント製剤（ＳＡＦ、Ｔｗｅｅｎ ８０及び非イオン性ブロックコポリマーを含有する水中油型エマルジョン、Ｓｙｎｔｅｘ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）等のミセルを形成する非イオン性ブロックコポリマーが挙げられる。
本明細書で使用される「粘膜アジュバント」は、抗原と併せて粘膜表面に投与された場合に被験体において粘膜免疫応答を誘導することができるアジュバントである。粘膜アジュバントとして、限定されないが、例えば、コレラ毒素及びコレラ毒素誘導体（例えば、ＣＴ Ｂサブユニット、ＣＴＤ５３、ＣＴＫ９７、ＣＴＫ１０４、ＣＴＤ５３／Ｋ６３、ＣＴＨ５４、ＣＴＮ１０７、ＣＴＥ１１４、ＣＴＥ１１２Ｋ、ＣＴＳ６１Ｆ、ＣＴＳ１０６、ＣＴＫ６３等）、Ｚｏｎｕｌａ ｏｃｃｌｕｄｅｎｓ毒素、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）の易熱性毒素、不安定毒素、及び不安定毒素誘導体（例えば、ＬＴ Ｂサブユニット（ＬＴＢ）、ＬＴ７Ｋ、ＬＴ６１Ｆ、ＬＴ１１２Ｋ、ＬＴ１１８Ｅ、ＬＴ１４６Ｅ、ＬＴ１９２Ｇ、ＬＴＫ６３、ＬＴＲ７２等）、百日咳毒素及び百日咳毒素誘導体（例えば、ＰＴ−９Ｋ／１２９Ｇ）、リピドＡ誘導体（例えば、一リン酸化リピドＡ、ＭＰＬ）、ムラミルジペプチド誘導体、細菌外膜タンパク質（例えば、ライム病菌（Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ）の細胞表層タンパク質Ａ（ＯｓｐＡ）リポタンパク質、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）の細胞表層タンパク質）、水中油型エマルジョン（例えばＭＦ５９）、アルミニウム塩、サポニン等が挙げられる。
ＮＭＯは脊髄及び視神経を標的とする
視神経脊髄炎（ＮＭＯ）は、主に脊髄及び視神経を標的とし、麻痺及び失明をもたらす再発性自己免疫疾患である（１）。ＡＱＰ４に対する免疫反応に関わる非常に特異的な抗アクアポリン４（ＡＱＰ４）ＩｇＧ１バイオマーカーの発見は、急性ＮＭＯ病変内の液性及び細胞性の両方の病理によって証明された（２、３）。疾患病因における循環抗ＡＱＰ４抗体の役割に着目した幾つかの先のＮＭＯのマウス及びラットのモデルは、抗体それ自体では疾患を誘導するのに不十分であったが、ミエリン応答性Ｔ細胞によって誘導された実験的な自己免疫脳脊髄炎を増悪し得たと結論付けた（４〜８）。抗ＡＱＰ４抗体が神経系において星状細胞上でＡＱＰ４に対して受動アクセスを有した場合、抗体は実験条件下でＡＱＰ４に結合し、星状細胞に対する補体媒介損傷に関与し得たという豊富な証拠が存在した（９〜１１）。まとめると、これらの研究は、ＮＭＯ攻撃の誘発におけるよりも、ＮＭＯ再発に由来する星状細胞の損傷の増大における抗ＡＱＰ４抗体に対する重要な役割を示し、ＮＭＯの免疫病因における上流に関与し得る他のＡＱＰ４特異的免疫成分に関する研究を促す。各受動移入研究では、抗ＡＱＰ４抗体は、中枢神経系に対してＴ細胞に基づく自己免疫攻撃に関してのみ病原性であった。
理論に束縛されることを望むものではないが、ＡＱＰ４に対するＩｇＧ１バイオマーカーの産生は、おそらく免疫グロブリンクラススイッチに対するＡＱＰ４応答性のＢ細胞とＴ細胞を必要とした。また、免疫細胞のうちＴ細胞が急性ＮＭＯ病変において見られ、ＮＭＯ疾患の免疫病因における免疫Ｔ細胞の役割は、免疫優性ＡＱＰ４ペプチドがマウスにおいてＴ細胞活性化を誘発することが示された最近の研究の主題となっている（１２、１３）。しかしながら、ＡＱＰ４に対するＴ細胞の活性化にもかかわらず、これらのラット及びマウスのモデルは、病原性Ｔ細胞応答が中枢及び末梢の耐性の組み合わせによって制限されたため、又は特定のＡＱＰ４エピトープが病原性でなかったためのいずれかにより、臨床上の神経学的表現型を発現しなかった。独特のアプローチを採用し、野生型マウスに養子移植された場合にＮＭＯ様疾患を引き起こす、病原性ＡＱＰ４応答性Ｔ細胞をＡＱＰ４ヌルマウスにおいて産生した。Ｔヘルパー１７表現型に対するＡＱＰ４応答性Ｔ細胞の極性化は、表現型を増強し、視神経及び脊髄において、また脳においても炎症及び脱髄をもたらした。マウスにおける幅広いＡＱＰ４発現にもかかわらず、実質臓器の炎症の他の証拠はなく、ヒトＮＭＯ疾患をモデル化するこのアプローチの特異性を支持する。
投与
本発明のＡＱＰ４ペプチド、又はそれをコードする核酸分子を含む組成物は、全身的に提供されてもよく、又は新生物、病原体感染、又は感染性疾患の治療のため被験体に直接提供されてもよい。或る一つの実施形態では、本発明の組成物は、目的の臓器（例えば、新生物によって冒された臓器）に直接注射される。代替的には、例えば循環系（例えば腫瘍脈管構造）への投与よって、組成物を目的の臓器に間接的に提供する。
上記組成物を、通常、任意の生理学的に許容可能なビヒクルにおいて血管内投与することができるが、骨又は細胞が再生及び分化に適した部位を見出し得る他の簡便な部位（例えば、胸腺）に導入してもよい。通常、少なくとも１×１０５細胞が投与され、最終的には１×１０１０以上に達する。用量は、当業者によって容易に調整され得る（例えば、純度の低下は容量の増加を必要とする）。上記組成物を注射、カテーテル等によって導入してもよい。所望に応じて、限定されないがインターロイキン、例えばＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−６、及びＩＬ−１１、また同様に他のインターロイキン、Ｇ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ及びＧＭ−ＣＳＦ等のコロニー刺激因子、インターフェロン、例えばガンマ−インターフェロン及びエリスロポエチンを含む因子を含んでもよい。
本発明の組成物は、本発明のポリペプチドと薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物を包含する。
組成物は、カテーテル投与を含む局所注射、全身注射、局所注射、静脈内注射、又は非経口投与によって投与されてもよい。本発明の治療的組成物を投与する場合、一般的には単位用量の注射用形態（溶液、懸濁物、エマルジョン）に製剤化される。
本質的には、本発明の組成物の投与は、その標的、すなわち脊髄及び視神経のＮＭＯ病変に組成物が達することを可能とする任意の医学的に許容可能な方法によってなされ得る。選択される特定の様式は、もちろん、先に記載されるもの、例えば、特定の組成、治療される被験者の重症度の状態、治療効果に必要な投薬量等の要因に依存する。本明細書で使用される「医学的に許容可能な」様式の治療は、臨床上受け入れられない副作用を生じることなく被験体において有効レベルの上記組成物を生じることができる様式である。
任意の医学的に許容可能な方法を使用して被験体に上記組成物を投与してもよい。投与は、治療される状態に応じて、局所化（すなわち、特定の領域、生理系、組織、臓器、又は細胞型）されてもよく、又は全身性であってもよい。例えば、上記組成物を、経口的に、経腟的に、経腸的に、口腔的に（ｂｕｃｃａｌｌｙ）、経肺的に、局所的に（ｔｏｐｉｃａｌｌｙ）、経鼻的に、経皮的に、舌下的に、非経口注射又は移植により、外科的投与により、又は本発明の組成物による標的へのアクセスが達成される任意の他の投与方法によって投与されてもよい。本発明と共に使用される非経口モダリティの例として、静脈内、皮内、皮下、腔内、筋肉内、腹腔内、硬膜外、又は髄腔内が挙げられる。移植モダリティの例として、任意の移植可能な又は注射可能な薬物送達システムが挙げられる。被験体又は投薬スケジュールに対する利便性のため、幾つかの実施形態では経口投与が好ましい。経口投与に適した組成物は、硬質又は軟質カプセル、丸剤、カシェット（ｃａｃｈｅｔｔｅｓ）、錠剤、トローチ、又はドロップ等の個別の単位として提示されてもよく、各々所定量の有効成分を含有する。本発明との使用に適した他の経口投与として、シロップ、エリキシル、又はエマルジョン等の水性又は非水性の液体中の溶液又は懸濁物が挙げられる。別の一組の実施形態では、上記組成物は食品又は飲料の栄養価を高めるために使用されてもよい。
本発明の特定の実施形態では、本発明の組成物の投与は、特定の期間、例えば時間、日、週、月、又は年に亘って上記組成物に対する順次の暴露をもたらすように設計され得る。これは、例えば、上に記載される方法の１つによる本発明の組成物の反復投与によって、又は上記組成物が反復投与によらずに延長された期間に亘って送達される持続放出又は制御放出送達系によってなされてもよい。かかる送達系を使用する上記組成物の投与は、例えば、経口剤形、ボーラス注射、経皮パッチ又は皮下インプラントによってもよい。実質的に一定の濃度の上記組成物を維持することは、幾つかの場合では好ましいことがある。
また、上記組成物を決まったスケジュールで投与してもよいが、代替的には症状の出現に応じて投与してもよい。本明細書で使用される「決まったスケジュール」は、所定の設計された期間を指す。決まったスケジュールは、そのスケジュールが予め決定される限り、長さが同じ又は異なる期間を包含し得る。例えば、決まったスケジュールは、毎日、２日毎、３日毎、４日毎、５日毎、６日毎、毎週、２週毎、毎月、隔月、又はその間の任意の設定された数の日又は週、２ヶ月毎、３ヶ月毎、４ヶ月毎、５ヶ月毎、６ヶ月毎、７ヶ月毎、８ヶ月毎、９ヶ月毎、１０ヶ月毎、１１ヶ月毎、１２ヶ月毎等で上記組成物の投与を含んでもよい。代替的には、決まったスケジュールは、第１週目には毎日、続いて数か月に亘って毎月、その後３ヶ月毎の上記組成物の投与を含んでもよい。適切なスケジュールが特定の日の投与を含むことが予め決められている限り、任意の特定の組み合わせが上記決まったスケジュールによって含まれ得る。
幾つかの場合では、上記組成物は、ＮＭＯ病変事象を予防するためＮＭＯ事象が見越される被験体に投与される。本明細書で使用される「実質的に先に」は、ＮＭＯ病変事象の前少なくとも６ヶ月、少なくとも５ヶ月、少なくとも４ヶ月、少なくとも３ヶ月、少なくとも２ヶ月、少なくとも１ヶ月、少なくとも３週間、少なくとも２週間、少なくとも１週間、少なくとも５日、又は少なくとも２日を意味する。
同様に、上記組成物は、ＮＭＯ病変事象の直前（例えば、ＮＭＯ事象の４８時間以内、２４時間以内、１２時間以内、６時間以内、４時間以内、３時間以内、２時間以内、１時間以内、３０分以内、又は１０分以内）、実質的にＮＭＯ事象と同時に、又は病変症状の後に投与されてもよい。
本発明の使用に適した他の送達系として、時間放出、遅延放出、持続放出、又は制御放出の送達系が挙げられる。かかる系は、多くの場合上記組成物の反復投与を回避して被験体に対する利便性を高め得る。多くの種類の放出送達系が利用可能であり、当業者に知られている。放出送達系として、例えば、ポリ乳酸及び／又はポリグリコール酸、ポリ無水物、ポリカプロラクトン、及び／又はこれらの組み合わせ等の高分子系システム；コレステロール、コレステロールエステル、及び脂肪酸等のステロール、又はモノ−、ジ−、及びトリ−グリセリド等の天然脂肪を含む脂質系である非高分子系システム；ヒドロゲル放出システム；リポソーム系システム；リン脂質系システム；シラスティックシステム；ペプチド系システム；ワックスコーティング；従来の結合剤及び賦形剤を使用する圧縮錠剤；又は部分的に融合されたインプラントが挙げられる。具体例として、限定されないが、上記組成物がマトリクス内の形態で含有される浸食システム（例えば、米国特許第４，４５２，７７５号、第４，６７５，１８９号及び第５，７３６，１５２号に記載される）、又は活性成分が放出速度を制御する拡散システム（例えば、米国特許第３，８５４，４８０号、第５，１３３，９７４号及び第５，４０７，６８６号に記載される）が挙げられる。例えば、上記製剤は、マイクロスフェア、ハイドロゲル、高分子リザーバー、コレステロールマトリクス、又は高分子システムであってもよい。或る実施形態では、上記システムは、例えば、上記組成物を含有する製剤の拡散又は浸食／分解の速度を制御することによって、組成物の持続放出又は制御放出が起こることを可能とし得る。さらに、ポンプに基づくハードウェア送達系を使用して、１又は複数の本発明の実施家形態を送達してもよい。
長期放出インプラントの使用は、本発明の幾つかの実施形態では特に適している場合がある。本明細書で使用される「長期放出」は、上記組成物を含有するインプラントが、少なくとも３０日若しくは４５日、好ましくは少なくとも６０日若しくは９０日、又は幾つかの場合ではより長く治療的有効レベルの上記組成物を送達するように構築され、配置されることを意味する。長期放出インプラントは、当業者によく知られており、上に記載される幾つかの放出システムを含む。
上記組成物の投与は、単独であってもよく、又は例えば、アレルギー、感染性疾患、がん等を治療するために使用される他の治療剤及び／又は組成物と組み合わせてもよい。特定の実施形態では、本発明のＡＱＰ４ペプチド（又はそれをコードする核酸）を免疫抑制療法と共に投与する。
免疫抑制療法は、糖質コルチコイド剤、細胞増殖抑制剤、抗体、イムノフィリン作動薬、インターフェロン、オピオイド、ＴＮＦ結合タンパク質、及びミコフェノール酸からなる群から選択され得る。また、免疫抑制療法は、アルキル化剤、ナイトロジェンマスタード（シクロホスファミド）、ニトロソウレア、白金化合物、メトトレキサート、アザチオプリン、メルカプトプリン、フルオロウラシル、タンパク質合成阻害剤、ダクチノマイシン、アントラサイクリン、マイトマイシンＣ、ブレオマイシン、ミトラマイシン、ＩＬ−２受容体に対する抗体、ＣＤ３に対する抗体、ムロノナブ−ＣＤ３、シクロスポリン（Ｓａｎｄｉｍｍｕｎｅ（登録商標））、タクロリムス（Ｐｒｏｇｒａｆ（登録商標））、シロリムス（Ｒａｐａｍｕｎｅ（登録商標））、ＩＦＮ−ベータ、インフリキシマブ（Ｒｅｍｉｃａｄｅ（登録商標））、エタネルセプト（Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標））、アダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ（登録商標））、フィンゴリモド、レフルノミド、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））、ＭａｂＴｈｅｒａ（登録商標）、又はＺｙｔｕｘ（登録商標））、エクリズマブ（Ｓｏｌｉｒｉｓ（登録商標））、インターフェロンベータ−１ａ（Ａｖｏｎｅｘ（登録商標））、ナタリズマブ（Ｔｙｓａｂｒｉ（登録商標））及びマロノニトリルアミド（ＭＮＡ）であってもよい。
また、本発明の組成物は、他の関連する（Ｍ．Ｓ．）又は関連しない（例えば、がん、感染症）適応症の治療に１又は複数の本発明の組成物と組み合わせて使用され得る他の治療剤及び薬物と共に投与され得る。
例えば、アレルギーの治療に対して１又は複数の本発明の組成物と組み合わせて使用され得る治療剤及び治療薬の例として、限定されないが、１又は複数のＰＤＥ−４阻害剤、気管支拡張剤（例えば、サルメテロール、サルブタモール、アルブテロール、テルブタリン、Ｄ２５２２／フォルモテロール、フェノテロール、ビトルテロール、ピルブロール、メチルキサンチン（テオフィリン、オルシプレナリン等））、ベータ−２アゴニスト（例えば、アルブテロール、ビトルテロール、ピルブテロール、テルブタリン）、Ｋ＋チャネル開口薬、ＶＬＡ−４アンタゴニスト、ニューロキンアンタゴニスト、ＴＸＡ２合成阻害剤、キサンタイン、アラキドン酸アンタゴニスト、５−リポキシゲナーゼ阻害剤、トロンボキシンＡ２受容体アンタゴニスト、トロンボキサンＡ２アンタゴニスト、５−リポキシン活性化タンパク質の阻害剤、プロテアーゼ阻害剤、クロモリンナトリウム、又はメドクロミルが挙げられる。可能性のある有用なアレルギー医薬の他の例として、限定されないが、ロラタジン、セチリジン、ブクリジン、セチリジンアナログ、フェキソフェナジン、テルフェナジン、デスロラタジン、ノルアステミゾール、エピナスチン、エバスチン、エバスチン、アステミゾール、レボカバスチン、アゼラスチン、トラニラスト、テルフェナジン、ミゾラスチン、ベタタスチン、ＣＳ５６０、ＨＳＲ６０９、プロスタグランジン、ステロイド（例えば、ベクロメタゾン、フルチカゾン、トランシノロン、ブデソニド、ブデソニド等）、コルチコステロイド（例えば、ベクロメタゾンジプロピオネート、ブデソニド、フルニソリド、フルチカゾン、プロピオネート、トリアムシノロンアセトニド、デキサメタゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、プレドニゾン）、免疫調節剤（例えば、抗炎症剤、フィルルカスト又はジレウトン、ＩＬ−４ムテイン、可溶性ＩＬ−４受容体、寛容化ペプチドワクチン、抗ＩＬ−４抗体、ＩＬ−４アンタゴニスト、抗ＩＬ−５抗体、可溶性ＩＬ−１３受容体−Ｆｃ融合タンパク質、抗ＩＬ−９抗体、ＣＣＲ３アンタゴニスト、ＣＣＲ５アンタゴニスト、ＶＬＡ−４阻害剤等の免疫抑制剤）、ＩｇＥの減少剤（例えば、ＩｇＥ受容体に結合可能なペプチド又は他の分子、ＩｇＥに対するモノクローナル抗体、ＩｇＥ抗体の結合を阻止することが可能な特定のポリペプチド等）が挙げられる。さらに他の可能性のある有用な免疫調節因子として、免疫調節特性を有することが示されている神経ペプチド、例えばサブスタンスＰが挙げられる。
本明細書で使用される「がん」の用語は、限定されないが、胆道がん；膀胱がん；グリア芽細胞腫及び髄芽腫を含む脳がん；乳がん；子宮頸がん；絨毛がん；結腸がん；子宮内膜がん；食道がん；胃がん；急性リンパ性白血病及び骨髄性白血病を含む血液腫瘍；多発性骨髄腫；ＡＩＤＳ関連白血病及び成人Ｔ細胞白血病リンパ腫；ボーエン病及びパジェット病を含む上皮内新生物；肝臓がん；肺がん；ホジキン病及びリンパ球性リンパ腫を含むリンパ腫；神経芽細胞腫；扁平上皮がんを含む口腔がん；上皮細胞、間質細胞、生殖細胞及び間葉細胞から生じるものを含む卵巣がん；膵臓がん、前立腺がん；直腸がん；平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、脂肪肉腫、線維肉腫、及び骨肉腫を含む肉腫；黒色腫、カポジ肉腫、基底細胞がん、及び扁平上皮細胞がんを含む皮膚がん；セミノーマ、非セミノーマ、奇形腫等の胚腫瘍を含む精巣がん；絨毛がん；間質腫瘍及び生殖細胞腫瘍；甲状腺腺がん及び髄様がんを含む甲状腺がん；並びに腺がん及びウィルムス腫瘍を含む腎がんを含む。一般的に遭遇するがんとして、乳がん、前立腺がん、肺がん、卵巣がん、大腸がん、及び脳がんが挙げられる。一般に、がん治療のための本発明の組成物の有効量は、ｉｎ ｓｉｔｕでの哺乳動物のがん細胞増殖を阻害するのに必要な量となる。当業者は、当該技術分野において抗がん剤の有効量の評価に練れている（ｗｅｌｌ−ｓｃｈｏｏｌｅｄ）。
本明細書で使用される「がん治療」として、限定されないが、化学療法、放射線療法、アジュバント療法、又はこれらの方法の任意の組み合わせが挙げられる。変化し得るがん治療の態様として、限定されないが、投薬量、投与又は期間又は治療法のタイミングを含み、かかる態様は、同じく用量、タイミング及び／又は期間が変化し得る他の治療と組み合わせてもよく、組み合わせなくてもよい。別のがん治療は、単独で又は先に記載される治療方法のいずれかと組み合わせて利用され得る手術である。当業者は、被験体に対する適切ながん治療を決定することができる。
がんの治療に対して１又は複数の本発明の組成物と組み合わせて使用され得る抗がん剤及び抗がん薬の非限定的な例として、限定されないが、１又は複数の２０−エピ−１，２５ジヒドロキシビタミンＤ３、４−イソポタノール、５−エチニルウラシル、９−ジヒドロタキソール、アビラテロン、アシビシン、アクラルビシン、塩酸アコダゾール、アクロニン、アシルフルベン、アデシペノール、アドゼレジン、アルデスロイキン、ａｌｌ−ｔｋアンタゴニスト、アルトレタミン、アンバムスタチン、アンボマイシン、アセテートアテナントロン、アミドックス（ａｍｉｄｏｘ）、アミホスチン、アミノグルテチミド、アミノレブリン酸、アムルビシン、アムサクリン、アナグレリド、アナストロゾール、アンドログラフォライド、血管新生阻害剤、アンタゴニストＤ、アンタゴニストＧ、抗アレレックス、アントラマイシン、抗背側化形態形成タンパク質−１、抗エストロゲン、抗腫瘍薬、アンチセンスオリゴヌクレオチド、アフィジコリングリシネート、アポトーシス遺伝子調節因子、アポトーシス調節因子、アプリリン酸、ＡＲＡ−ＣＤＰ−ＤＬ−ＰＴＢＡ、アルギニンデアミナーゼ、アスパラギナーゼ、アスペリン、アスラクリン、アタメスタン、アトリムスチン、アキシナスタチン１、アキシナスタチン２、アキシナスタチン３、アザシチジン、アザセトロン、ザトキシン、アザチロシン、アゼテプタ、アゾトマイシン、バッカチンＩＩＩ誘導体、バラノール、バチマスタット、ベンゾクロリン、ベンゾデパ、ベンゾイルスタウロスポリン、ベータラクタム誘導体、ベータアレチン、ベタクラマイシンＢ、ベツリン酸、ＢＦＧＦ阻害剤、ビカルタミド、ビスアントレン、塩酸ビスアントレン、ビスアジリジニルスペルミン、ビスナフィド、ビスナフィドジメシレート、ビストラテンＡ、ビゼレシン、ブレオマイシン、硫酸ブレオマイシン、ＢＲＣ／ＡＢＬアンタゴニスト、ブレフラート、ブレキナールナトリウム、ブロピリミン、ブドチタン、ブスルファン、ブチオニンスルホキシミン、カクチノマイシン、カルシポトリオール、カルフォスチンＣ、カストステロン、カンプトテシン誘導体、カナリア痘ＩＬ−２、カペシタビン、カラセミド、カルベタイマー、カルボプラチン、カルボキサミド−アミノ−トリアゾール、カルボキシアミドトリアゾール、ケアストＭ３、カルムスチン、カーネル７００、軟骨由来阻害剤、塩酸カルビシン、カルゼレシン、カゼインキナーゼ阻害剤、カスタノスペルミン、セクロピンＢ、セドフェンロール、セトロレリックス、クロラムブシル、クロリン、クロロキノキサリンスルホンアミド、シカプレスト、サイロレマイシン、シスプラチン、シスポルフィリン、クラドリビン、クロミフェンアナログ、クロトリマゾール、コリスミシンＡ、コリスマイシンＢ、コンブレタスタチンＡ４、コンブレタスタチンアナログ、コナゲニン、クラムベシジン８１６、クリスナトール、メシル酸クリスナトール、クリプトフィシン８、クリプトフィシンＡ誘導体、クラシンＡ、シクロペンタンスラキノロン（ｃｙｃｌｏｐｅｎｔａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅｓ）、シクロホスファミド、シクロプラタム、シプマイシン、シタラビン、シタラビンオクホスフェート、細胞溶解因子、サイトスタチン、ダカルバジン、ダクリキシマブ、ダクチノマイシン、塩酸ダウノルビシン、デシタビン、デヒドロジデンニンＢ、デスロレリン、デキシフォスファミド、デキサメタプラチン、デキサゾキサン、デクスベラパミル、デザグアニン、メシル酸ジザグアニン、ジアジクオン、ジデムニンＢ、ジドックス、ジエチルノルスペルミン、ジヒドロ−５−アザシチジン、ジオキサマイシン、ジフェニルスピロムスチン、ドセタキセル、ドコサノール、ドラセトロン、ドキシフルリジン、ドキソルビシン、塩酸ドキソルビシン、ドロロキシフェン、クエン酸ドロロキシフェン、プロピオン酸ドロモスタノロン、ドロナビノール、デュアゾマイシン、デュオカルマイシンＳＡ、エブレセン、エコムスチン、エダトレキセート、エデルホシン、エドレコロマブ、エフロルニチン、塩酸エフロルニチン、エレメン、エルサミトルシン、エミテフール、エノプラチン、エムプロメート、エピプロピジン、エピルビシン、塩酸エピルビシン、エプリステリド、エルブロゾール、赤血球遺伝子療法ベクター系、塩酸エゾルビシン、エストラムスチン、エストラムスチンアナログ、リン酸エストラムスチンナトリウム、エストロゲンアゴニスト、エストロゲンアンタゴニスト、エタニダゾール、エトポシド、リン酸エトポシド、エトプリン、エキセメスタン、ファドロゾール、塩酸ファドロゾール、ファザラビン、フェンレチニド、フィルグラスチム、フィナステライド、フラボリピドール、フレゼラスチン、フロクスウリジン、フラステロン、フルダラビン、リン酸フルダラビン、塩酸フルオロダウノルニシン、フルオロフラシル、フルロシタビン、フォルフェニメックス、フォルメスタン、フォスキドン、フォストリエシン、フォストリエシンナトリウム、フォテムスチン、ガドリニウムテキサフィリン、硝酸ガリウム、ガロシタビン、ガニレリックス、ゼラチナーゼ阻害剤、ゲムシタビン、塩酸ゲムシタビン、グルタチオン阻害剤、ヘプルファム、ヘレグリン、ヘキサメチレンビスアセトアミド、ヒドロキシ尿素、ヒペリシン、イバンドロン酸、イダルビシン、塩酸イダルビシン、イドキシフェン、イドラマントン、イフォスファミド、イルモフォシン、イロマスタット、イミダゾクリドン、イミキモド、免疫刺激ペプチド、インスリン様成長因子−１受容体阻害剤、インターフェロンアゴニスト、インターフェロンアルファ−２Ａ、インターフェロンアルファ−２Ｂ、インターフェロンアルファ−Ｎ１、インターフェロンアルファ−Ｎ３、インターフェロンベータ−ＩＡ、インターフェロンガンマ−ＩＢ、インターロイキン、ヨーベングアン、ヨードドキソルビシン、イプロプラチン、イリノテカン、塩酸イリノテカン、イロプラクト、イルソグラジン、イソベンガゾール、イソホモハリコンドリンＢ、イタセトロン、ジャスプラキノリド、カハラリドＦ、ラメラリン−Ｎトリアセテート、ランレオチド、酢酸ランレオチド、ライナマイシン、レノグラスチム、硫酸レンチナン、レプトールスタチン、レトロゾール、白血病阻害因子、白血球アルファインターフェロン、酢酸ロイプロリド、ロイプロリド／エストロゲン／プロゲステロン、ロイプレリン、レバミゾール、リアロゾール、塩酸リアロゾール、直鎖ポリアミンアナログ、親油性二糖ペプチド、親油性白金化合物、リソクリナミド７、ロバプラチン、ロムブリシン、ロメトレキソール、ロメトレキソールナトリウム、ロムスチン、ロニダミン、ロソキサトロン、塩酸ロソキサトロン、ロバスタチン、ロキソルビン、ルトテカン、ルテチウムテキサフィリン、リゾフィリン、溶解性ペプチド、マイタシン（ｍａｉｔａｎｓｉｎｅ）、マンノスタチンＡ、マリマスタット、マソプロコール、マスピン、マトリリシン阻害剤、マトリクスメタロプロテイナーゼ阻害剤、メイタンシン、塩酸メクロレタミン、酢酸メゲストロール、酢酸メレンゲステロール、メルファラン、メノガリル、メルバロン、メルカプトプリン、メテレリン、メチオニナーゼ、メトトレキサート、メトトレキサートナトリウム、メトクロプラミド、メトプリン、メツレデパ、ミクロアルガールプロテインキナーゼＣ阻害剤、ＭＩＦ阻害剤、ミフェプロストン、ミルテフォシン、ミリモスチン、ミスマッチ二本鎖ＲＮＡ、ミトインドミド、ミトカルシン、ミトクロミン、ミトギリン、ミトグアゾン、ミトラクトール、ミトマルシン、ミトマイシン、ミトマイシンアナログ、ミトナフィド、ミトスパー、ミトタイン、マイトトキシン線維芽細胞増殖因子−サポリン、ミトキサントロン、塩酸ミトキサントロン、モファロテン、モラグモスチム、モノクローナル抗体、ヒト絨毛性性腺刺激ホルモン、モノホスホリル脂質ａ／マイコバクテリア細胞壁ＳＫ、モピダモール、多剤耐性遺伝子阻害剤、複数の主要抑制因子−１に基づく治療法、マスタード抗がん剤、マイコペラシドＢ、マイコバクテリア細胞壁抽出物、ミコフェノール酸、ミリオポロン、ｎ−アセチルジナリン、ナファレリン、ナグレスチップ、ナロキソン／ペンタゾシン、ナパビン、ナフテルピン、ナルトグラスチム、ネダプラチン、ネモルビシン、ネリドロン酸、中性エンドペプチダーゼ、ニルタミド、ニサマイシン、硝酸調節剤、ニトロキシド抗酸化剤、ニトルリン、ノコダゾール、ノガラマイシン、ｎ−置換ベンズアミド、Ｏ６−ベンジルグアニン、オクトレオチド、オキセノン、オリゴヌクレオチド、オナプリストン、オンダンセトロン、オラシン、経口サイトカイン誘導剤、オルマプラチン、オサテロン、オキサリプラチン、オキサウノマイシン、オキシスラン、パクリタキセル、パクリタキセルアナログ、パクリタキセル誘導体、パルミトイルリゾキシン、パルミドロン酸、パナキシトリオール、パノミフェン、パラバクチン、パゼリプチン、ペガスパルガーゼ、ペルデシン、ペリオマイシン、ペンタムスチン、ポリ硫酸ペント酸ナトリウム、ペントスタチン、ペントロゾール、硫酸ペプロマイシン、パーフルブロン、パーホスファミド、ペリリルアルコール、フェナジノマイシン、酢酸フェニル、ホスファターゼ阻害剤、ピシバニル、塩酸ピロカルピン、ピポブロマン、ピポスルファン、ピラルビシン、ピリトレキシム、塩酸ピロキサントロン、プラセチンＡ、プラセチンＢ、プラスミノーゲン活性化因子阻害剤、白金錯体、白金化合物、白金−トリアミン錯体、プリカマイシン、プロメスタン、ポルフィマーナトリウム、ポルフィロマイシン、プレドニムスチン、塩酸プロカルバジン、プロピルビス−アクリドン、プロスタグランジンＪ２、前立腺がん抗アンドロゲン、プロテアソーム阻害剤、プロテインＡに基づく免疫調節剤、プロテインキナーゼＣ阻害剤、プロテインチロシンホスファターゼ阻害剤、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ阻害剤、ピューロマイシン、塩酸ピューロマイシン、プルプリン、ピラゾフラン、ピラゾロアクリジン、ピリドキシル化ヘモグロビンポリオキシエチレン複合体、ＲＡＦアンタゴニスト、ラルチトレキセド、ラモセトロン、ＲＡＳファルネシルタンパク質トランスフェラーゼ阻害剤、ＲＡＳ阻害剤、脱メチル化レチレプチプチン、レニウムＲＥ １８６エチドロネート、リゾキシン、リボプリン、リボザイム、ＲＩＩレチンアミド、ＲＮＡｉ、ログレチミド（ｒｏｇｌｅｔｉｍｉｄｅ）、ロヒツキン、ロムルチド、ロキニメックス、ルビジノンＢ１、ルボキシル、サフィンゴール、塩酸サフィンゴール、サイントピン、サルコシンアミドニトロソウレア（ｓａｒｃｎｕ）、サルコフィトールＡ、サルグラモスチム、ＳＤＩ１模倣物、セムスチン、老化誘導阻害因子１、センスオリゴヌクレオチド、シグナル伝達阻害因子、シグナル伝達調節因子、シムトラゼイン、一本鎖抗原結合タンパク質、シゾフラン、ソブゾキサン、ボロカプテートナトリウム、フェニルアセテートナトリウム、ソルベロール、ソマトメジン結合タンパク質、ソネルミン、スパルホシン酸ナトリウム、スパルフォシン酸、スパルママイシン、スピカマイシンＤ、塩酸スピロゲルマニウム、スピロムスチン、スピロプラチン、スプレノプチン、スポンジスタチン１、スクアラミン、幹細胞阻害剤、幹細胞分裂阻害剤、スチピアミド、スチピアミド、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ストロメライシン阻害剤、スルフィノシン、スルフヌール、超活性血管作用性腸管ペプチドアンタゴニスト、スラジスター、スラミン、スワインソニン、合成グリコサミノグリカン、タリソマイシン、タリムスチン、タモキシフェンメチオジド、タウロムスチン、タザロテン、テコガランナトリウム、テガフール、テルラピリリウム、テロメラーゼ阻害剤、塩酸テロキサントロン、テモポルフィン、テモゾロミド、テオニポシド、テロキソン、テストラクトン、テトラクロロデカオキシド、テトラゾミン、タリブラチン、サリドマイド、チアミプリン、チオコラリン、チオグアニン、チオテパ、トロンボポエチン、トロンボポエチン模倣物、チマルファシン、チモポエチン受容体アゴニスト、チモトリナン、甲状腺刺激ホルモン、チアゾフリン、エチルエチオプルプリン錫、チ
ラパザミン、二塩化チタノセン、塩酸トポテカン、トプサンチン、トレミフェン、クエン酸トレミフェン、全能性幹細胞因子、翻訳阻害剤、トレストロンアセテート、トレチノイン、トリアセチルウリジン、トリシリビン、トリシリビンリン酸塩、トリメトレキセート、トリメトレキセートグルクロン酸塩、トリプトレリン、トロピセトロン、塩酸チューブロゾル、トロンステリド、チロシンキナーゼ阻害剤、チルホスチン、ＵＢＣ阻害剤、ウベニメックス、ウラシルマスタード、ウレデパ、尿生殖器洞由来成長阻害因子、ウロキナーゼ受容体アンタゴニスト、バプレオチド、バリオリンＢ、ベラセロール、ベラミン、ベルジン、ベルテポルフィン、硫酸ビンブラスチン、硫酸ビンクリスチン、ビンデシン、硫酸ビンデシン、硫酸ビネピジン硫酸、ビングリシナート、硫酸ビンロイロシン、ビノレルビン、酒石酸ビノレルビン、硫酸ビンロシジン、ビンキサルチン（ｖｉｎｘａｌｔｉｎｅ）、硫酸ビンゾリジン、ビタキシン、ボロゾール、ザノテロン、ゼニプラチン、ジラスコーブ、ジノスタチン、ジノスタチンスチマラマー、並びに塩酸ザルビシン、また同様に、それらの塩、ホモログ、アナログ、誘導体、鏡像異性体、及び／又は機能的に等価な組成物が挙げられる。
がんの治療に有用な薬剤の他の例として、限定されないが、１又は複数のリブタキシン（Ｒｉｂｕｔａｘｉｎ）、ハーセプチン、クアドラメット（Ｑｕａｄｒａｍｅｔ）、パノレックス（Ｐａｎｏｒｅｘ）、ＩＤＥＣ−Ｙ２Ｂ８、ＢＥＣ２、Ｃ２２５、オンコリム（Ｏｎｃｏｌｙｍ）、ＳＭＡＲＴ Ｍ１９５、ＡＴＲＡＧＥＮ、オバレックス（Ｏｖａｒｅｘ）、ベキサール（Ｂｅｘｘａｒ）、ＬＤＰ−０３、ｉｏｒ ｔ６、ＭＤＸ−２１０、ＭＤＸ−１１、ＭＤＸ−２２、ＯＶ１０３、３６２２Ｗ９４、抗ＶＥＧＦ、ゼナパックス（Ｚｅｎａｐａｘ）、ＭＤＸ−２２０、ＭＤＸ−４４７、ＭＥＬＩＭＭＵＮＥ−２、ＭＥＬＩＭＭＵＮＥ−１、ＣＥＡＣＩＤＥ、プレターゲット（Ｐｒｅｔａｒｇｅｔ）、ＮｏｖｏＭＡｂ−Ｇ２、ＴＮＴ、Ｇｌｉｏｍａｂ−Ｈ、ＧＮＩ−２５０、ＥＭＤ−７２０００、ＬｙｍｐｈｏＣｉｄｅ、ＣＭＡ ６７６、Ｍｏｎｏｐｈａｒｍ−Ｃ、４Ｂ５、ｉｏｒ ｅｇｆ．ｒ３、ｉｏｒ ｃ５、ＢＡＢＳ、抗ＦＬＫ−２、ＭＤＸ−２６０、ＡＮＡ Ａｂ、ＳＭＡＲＴ １Ｄ１０ Ａｂ、ＳＭＡＲＴ ＡＢＬ ３６４ Ａｂ及びＩｍｍｕＲＡＩＴ−ＣＥＡが挙げられる。
本明細書で使用される「感染性疾患」は、感染性微生物による表面的に、局所的に又は全身に宿主への侵入により生じる障害を指す。感染性微生物として、限定されないが、細菌、ウイルス、真菌、カビ等が挙げられる。感染性疾患の治療に対して１又は複数の本発明の組成物と組み合わせて使用され得る治療剤及び薬物の例として、抗菌剤、抗微生物剤、抗ウイルス剤、ヌクレオチドアナログ、抗真菌剤、抗生物質等が挙げられる。かかる薬剤及び薬物は、感染性微生物を殺傷又は阻害することができる天然又は合成の化合物を含む。本発明により有用な抗菌剤の種類は、被験体が感染した、又は感染するリスクのある微生物の種類に依存する。
本発明において潜在的に有用な抗生物質は、広域抗生物質及び狭域抗生物質を含む。単一の生物又は疾患に有効であり、他の種類の細菌には有効ではない抗生物質は、一般的には限定スペクトル抗生物質と呼ばれる。一般的に、抗生物質は、ベータ−ラクタム系抗生物質等（例えば、セファロチン、セファピリン、セファレキシン、セファマンドール、セファクロル、セファゾリン、セフロキシム、セフォキシチン、セフォタキシム、セフスロジン、セフェタメ、セフィキシム、セフトリアキソン、セフォペラゾン、セフタジジン、モキサラクタム等を含む、カルバペネム及びセファロスポリン）、天然ペニシリン、半合成ペニシリン（例えば、アンピシリン、カルベニシリン、オキサシリン、アズロシリン、メズロシリン、ピペラシリン、メチシリン、ジクロキサシリン、ナフシリン等）アンピシリン、クラブラン酸、セファロスポリン、バシトラシン等細胞壁合成阻害剤、細胞膜阻害剤（例えば、ポリミキシン、アンフォテリシンＢ、ナイスタチン、クロトリマゾール、ミコナゾール、ケトコナゾール、イトラコナゾール、フルコナゾールを含むイミダゾール等）；タンパク質合成阻害剤（例えば、テトラサイクリン、クロラムフェニコール、エリスロマイシン等のマクロライド、ストレプトマイシン、リファンピン、エタンブトール、ストレプトマイシン、カナマイシン、トブラマイシン、アミカシン、ゲンタマイシン、テトラサイクリン（例えば、テトラサイクリン、ミノサイクリン、ドキシサイクリン、及びクロルテトラサイクリン等）、エリスロマイシン、ロキシスロマイシン、クラリスロマイシン、オレアンドマイシン、アジスロマイシン、クロラムフェニコール等のアミノグリコシド）；核酸合成又は機能阻害剤（例えば、キノロン、Ｃｏ−トリモキサゾール、リファマイシン等）；競合阻害剤（例えば、ガントリシン、トリメトプリム等のスルホンアミド）である。
抗ウイルス剤は、ウイルス、又は細胞内でのウイルスの複製による細胞の感染を予防する化合物である。抗ウイルス剤によって阻止又は阻害され得るウイルス感染のプロセスには幾つかの段階がある。これらの段階は、宿主細胞へのウイルスの付着（例えば、免疫グロブリン、結合ペプチド等）、ウイルスの脱殻（例えば、アマンタジン）、ウイルスｍＲＮＡの合成又は翻訳（例えば、インターフェロン）、ウイルスＲＮＡ又はＤＮＡの複製（例えば、ヌクレオシドアナログ）、新たなウイルスタンパク質の成熟（例えば、プロテアーゼ阻害剤）、ウイルスの出芽及び放出等を含む。
ヌクレオチドアナログは、ヌクレオチドに類似するが、不完全又は異常なデオキシリボース又はリボース基を有し得る合成化合物である。ヌクレオチドアナログとして、限定されないが、アシクロビル、ガンシクロビル、イドクスウリジン、リバビリン、ジデオキシイノシン、ジデオキシシチジン、及びジドブジン（アジドチミジン）が挙げられる。
抗真菌剤は、感染性真菌の治療及び予防に有用である。幾つかの抗真菌剤は、グルコースシンターゼを阻害することによって細胞壁阻害剤として機能する。これらとして、限定されないが、バシウギン／ＥＣＢが挙げられる。他の抗真菌剤は、膜の完全性を不安定化することによって機能する。これらとして、限定されないが、クロトリマゾール、セルタコナゾール、フルコナゾール、イトラコナゾール、ケトコナゾール、ミコナゾール、及びボリコナゾール等のイミダゾール、また、ＦＫ ４６３、アンフォテリシンＢ、ＢＡＹ ３８−９５０２、ＭＫ ９９１、プラジミシン、ＵＫ ２９２、ブテナフィン、テルビナフィン等が挙げられる。他の抗真菌剤は、キチン（例えば、キチナーゼ）を破壊することによって、又は免疫抑制（５０１クリーム）によって機能する。
本発明の特定の実施形態では、組成物は、例えば、リポソームに組み込まれる、高分子放出システムに組み込まれる、又は液体に懸濁される（例えば溶解形態若しくはコロイド形態で）好適な薬学的に許容可能な担体と組み合わされてもよい。一般に、本発明における使用に適した薬学的に許容可能な担体は、当業者によく知られている。本明細書で使用される「薬学的に許容可能な担体」は、投与される有効成分（複数の場合がある）の生物学的活性の有効性と著しく干渉しない非毒性物質を指すが、例えば、使用前に該組成物内の有効成分（複数の場合がある）を安定化又は保護するための製剤化原料として使用される。薬学的に許容可能な担体は、幾つかの場合無菌であってもよい。「担体」の用語は、本発明の１又は複数の有効成分が組み合わされて該組成物の適用を容易にする、天然又は合成であってもよい、有機又は無機の原料を指す。担体は、実質的に所望の薬学的効果を損なう相互作用が存在しないような方式で、本発明の１又は複数の有効成分と、また互いに混ざって或いは混合されてもよい。担体は、適用に応じて可溶性又は不溶性のいずれであってもよい。よく知られている担体の例として、ガラス、ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリエチレン、デキストラン、ナイロン、アミラーゼ、天然及び修飾セルロース、ポリアクリルアミド、アガロース、及びマグネタイトが挙げられる。単体の性質は可溶性又は不溶性のいずれかであってもよい。当業者は、他の好適な担体を知り、又は日常の実験のみを使用してかかるものを確認することができる。
或る実施形態では、本発明の組成物は、塩、担体、緩衝剤、乳化剤、希釈剤、賦形剤、キレート剤、充填剤、乾燥剤、抗酸化剤、抗菌剤、防腐剤、結合剤、増量剤、シリカ、可溶化剤、又は有効成分として使用され得る安定化剤等の製剤原料と共に薬学的に許容可能な担体を含む。例えば、製剤が液体である場合、担体は溶媒、部分溶媒、又は非溶媒であってもよく、水性又は有機的に基づいてもよい。好適な製剤原料の例として、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、カオリン、リン酸カルシウム、若しくはリン酸ナトリウム等の希釈剤；コーンスターチ若しくはアルギン酸（ａｌｇｅｎｉｃ ａｃｉｄ）等の顆粒化剤及び崩壊剤；デンプン、ゼラチン、若しくはアカシアゴム（ａｃａｃｉａ）等の等の結合剤；ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、若しくはタルク等の滑沢剤；モノステアリン酸グリセロール、若しくはジステアリン酸グリセロール等の時間遅延物質；カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン等の懸濁剤；レシチン若しくは他の天然ホスファチド等の分散剤若しくは湿潤剤；セチルアルコール若しくはミツロウ等の増粘剤、酢酸及びその塩、クエン酸及びその塩、ホウ酸及びその塩、若しくはリン酸及びその塩等の緩衝剤；又は塩化ベンザルコニウム、クロロブタノール、パラベン、若しくはチメロサール等の防腐剤が挙げられる。好適な担体の濃度は、日常の実験のみを使用して当業者によって決定され得る。本発明の組成物は、錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、粉末、顆粒、軟膏、溶液、保管（ｄｅｐｏｓｉｔｏｒｉｅｓ）、吸入剤又は注射剤等の固体、半固体、液体又は気体の形態の製剤に製剤化され得る。当業者は、他の好適な製剤原料を知り、又は日常の実験のみを使用してかかるものを確認することができる。
製剤は、特定の実施形態では被験体の血液と等張であってもよい、滅菌水性又は非水性の溶液、懸濁物、及びエマルジョンを含む。非水性溶媒の例は、ポリプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油、ゴマ油、ココナッツ油、ラッカセイ油、ピーナッツ油等の植物油、鉱物油、オレイン酸エチル等の注射用有機エステル、又は合成モノ−若しくはジ−グリセリドを含む不揮発性油である。水性担体として、生理食塩水及び緩衝媒質を含む、水、アルコール／水性溶液、エマルジョン又は懸濁物が挙げられる。非経口ビヒクルとして、塩化ナトリウム溶液、１，３−ブタンジオール、リンゲルデキストロース、デキストロース及び塩化ナトリウム、乳酸加リンゲル又は不揮発性油が挙げられる。静脈内ビヒクルとして、流体及び栄養補充液、電解質補充液（リンゲルデキストロースに基づくもの等）等が挙げられる。また、例えば、抗菌剤、抗酸化剤、キレート剤、及び不活性ガス等の防腐剤及び他の添加剤が存在してもよい。当業者は、過度の実験に頼ることなく本発明の組成物の作製及び製剤化に対して様々なパラメーターを容易に決定することができる。
或る実施形態では、本発明は、本発明の組成物を、１又は複数の副成分を構成し得る好適な担体と関連させる又は接触させる工程を含む。最終組成物は、任意の好適な技術によって、例えば、該組成物を均一かつ本質的に液体担体、細かく分割された固体担体若しくはそれらの両方と、任意に１又は複数の先に記載される製剤原料と関連させ、その後、必要に応じて製品を形成することにより作製されてもよい。
或る実施形態では、本発明の組成物は、薬学的に許容可能な塩として存在してもよい。「薬学的に許容可能な塩」の用語は、上記組成物内又は所望の治療モダリティに見られる特定の化合物に応じて、例えば、酸又は塩基と組み合わせて作製された組成物の塩を含む。薬学的に許容可能な塩は、リチウム、ナトリウム若しくはカリウムの塩等のアルカリ金属塩として、又はベリリウム、マグネシウム、若しくはカルシウムの塩等のアルカリ土類塩として調製され得る。塩を形成するための使用され得る好適な塩基の例として、アンモニウム、又は水酸化ナトリウム、水酸化リチウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、水酸化マグネシウム等の鉱物性塩基が挙げられる。塩を形成するため使用され得る好適な酸の例として、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、フッ化水素酸、硝酸、炭酸、一水素炭酸、リン酸、一水素リン酸、二水素リン酸、硫酸、一水素硫酸、亜リン酸等が挙げられる。他の好適な酸として、有機酸、例えば、酢酸、プロピオン酸、イソブチル酸、マレイン酸、マロン酸、安息香酸、コハク酸、フマル酸、マンデル酸、フタル酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルイルスルホン酸、クエン酸、酒石酸、メタンスルホン酸、グルクロン酸、ガラクツロン酸、サリチル酸、ギ酸、ナフタレート−２−スルホン酸等が挙げられる。さらに他の好適な酸として、アルギン酸塩、アスパラギン酸塩、グルタミン酸塩等のアミノ酸が挙げられる。
用量
本発明のいずれかの組成物を治療的有効量で被験体に投与してもよい。本明細書で使用される「治療的有効量」又は「有効」量若しくは用量は、被験体内で免疫性又は耐性を誘導する、及び／又は被験体がより効果的にＮＭＯの症状を軽減する若しくは全体的にＮＭＯを改善することを可能とするのに必要な量を意味する。被験体に投与された場合、有効量は、治療される特定の状態及び所望の結果に依存する。治療的有効用量は、例えば、以下にさらに記載されるもの等の要因を用い、また日常的な実験野範囲内で、当業者によって決定され得る。
或る実施形態では、治療的有効量は細胞培養アッセイから最初に決定され得る。例えば、樹状細胞応答を誘導するのに有用な本発明の組成物の有効量は、シミュレーションインデックスに関してｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイを使用して評価され得る。シミュレーションインデックスを使用して、特定の被験体に対する本発明の特定の組成物の有効量を決定することができ、該用量を被験体における所望のレベルを達成するように増加又は減少して調整することができる。また、治療的有効量を動物モデルから決定することもできる。適用される用量を相対的な生体適合性及び投与される組成物の効能に基づいて調整することができる。上に記載される方法及び他の方法に基づいて最大の効果を達成するため用量を調整することは、当業者の能力の範囲に含まれる。これらの用量は、日常的な実験のみを使用して調整され得る。
被験体に対する本発明の組成物の投与において、投薬量、投薬スケジュール、投与経路等は、これらの組成物の既知の活性に影響を及ぼすように選択され得る。投薬量は、実験モデルの結果に基づいて、任意には本発明の組成物のアッセイの結果と組み合わせて、推定され得る。投薬量は、投与の様式に応じて所望の組成の、局所又は全身のレベルを達成するように適切に調整され得る。用量は、１日当たり１回又は数回の投与で与えられてもよい。特定の被験体の応答がかかる用量において不十分である場合、被験体の耐性が許容する程度まで、さらに高用量（又は異なる、より局所化された送達経路による実際上より高い用量）を採用してもよい。また、幾つかの場合では、被験体内又は被験体の活動部位内における組成物の適切な全身レベルを達成するため、１日当たり複数の用量も考慮される。
被験体に対する上記組成物の用量は、該組成物の治療的有効量が被験体内の組成物の活動部位、すなわち視神経及び／又は脊髄に到達するような用量であってもよい。投薬量は、幾つかの場合では、被験体内での任意の可能性のある有害な副作用を回避又は最小化しながら、最大量で与えられてもよい。実際に投与される組成物の投薬量は、活動部位において望まれる最終濃度、被験体への投与方法、組成物の効能、被験体内での組成物の寿命、投与のタイミング、併用療法の効果（例えば、カクテルにおけるような）等の要因に依存する。また、送達される用量は、被験体と関連する状態に依存し、幾つかの場合では被験体によって変化し得る。例えば、年齢、性別、体重、大きさ、環境、生理学的条件、又は被験体の現在の健康状態もまた、必要とされる用量及び／又は活動部位における上記組成物の濃度に影響を与え得る。投薬の変化は、異なる個体間で、又は同じ個体であっても異なる日で起こり得る。使用される最大用量、すなわち、健全な医学的判断に従う最も安全性の高い用量が好ましい場合がある。剤形は、実質的には被験体に有害な影響を与えないものであることが好ましい。特定の実施形態では、上記組成物は、予防手段として被験体に投与され得る。或る実施形態では、本発明の組成物は、人口統計研究若しくは疫学的研究に基づいて被験体に投与されてもよく、特定の分野若しくはキャリアの被験体に投与されてもよい。
治療方法
本明細書において、被験体においてＮＭＯを治療する方法及び／又はＮＭＯに対して被験体を免疫する方法が提供される。
したがって、或る一つの態様では、本発明は、治療的有効量のアクアポリン−４（ＡＱＰ４）水チャネルのループＣペプチド、又は治療的に有効なそのフラグメント若しくは変異体を投与することを含む、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）を有する個体を治療する方法を提供する。特定の態様では、上記組成物は、免疫抑制療法と共にさらに投与されてもよい。免疫抑制療法は、糖質コルチコイド剤、細胞増殖抑制剤、抗体、イムノフィリン作動薬、インターフェロン、オピオイド、ＴＮＦ結合タンパク質、及びミコフェノール酸からなる群から選択され得る。また、免疫抑制療法は、アルキル化剤、ナイトロジェンマスタード（シクロホスファミド）、ニトロソウレア、白金化合物、メトトレキサート、アザチオプリン、メルカプトプリン、フルオロウラシル、タンパク質合成阻害剤、ダクチノマイシン、アントラサイクリン、マイトマイシンＣ、ブレオマイシン、ミトラマイシン、ＩＬ−２受容体に対する抗体、ＣＤ３に対する抗体、ムロノナブ−ＣＤ３、シクロスポリン（Ｓａｎｄｉｍｍｕｎｅ（登録商標））、タクロリムス（Ｐｒｏｇｒａｆ（登録商標））、シロリムス（Ｒａｐａｍｕｎｅ（登録商標））、ＩＦＮ−ベータ、インフリキシマブ（Ｒｅｍｉｃａｄｅ（登録商標））、エタネルセプト（Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標））、アダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ（登録商標））、フィンゴリモド、レフルノミド、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））、ＭａｂＴｈｅｒａ（登録商標）、又はＺｙｔｕｘ（登録商標））、エクリズマブ（Ｓｏｌｉｒｉｓ（登録商標））、インターフェロンベータ−１ａ（Ａｖｏｎｅｘ（登録商標））、ナタリズマブ（Ｔｙｓａｂｒｉ（登録商標））及びマロノニトリルアミド（ＭＮＡ）から選択されてもよい。
したがって、或る一つの態様では、本発明は、治療的有効量のアクアポリン−４（ＡＱＰ４）水チャネルのループＣペプチド、又は治療的に有効なそのフラグメント若しくは変異体を投与することを含む、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）を有する個体を治療する方法を提供する。特定の態様では、上記組成物は、免疫抑制療法と共にさらに投与されてもよい。免疫抑制療法は、糖質コルチコイド剤、細胞増殖抑制剤、抗体、イムノフィリン作動薬、インターフェロン、オピオイド、ＴＮＦ結合タンパク質、及びミコフェノール酸からなる群から選択され得る。また、免疫抑制療法は、アルキル化剤、ナイトロジェンマスタード（シクロホスファミド）、ニトロソウレア、白金化合物、メトトレキサート、アザチオプリン、メルカプトプリン、フルオロウラシル、タンパク質合成阻害剤、ダクチノマイシン、アントラサイクリン、マイトマイシンＣ、ブレオマイシン、ミトラマイシン、ＩＬ−２受容体に対する抗体、ＣＤ３に対する抗体、ムロノナブ−ＣＤ３、シクロスポリン（Ｓａｎｄｉｍｍｕｎｅ（登録商標））、タクロリムス（Ｐｒｏｇｒａｆ（登録商標））、シロリムス（Ｒａｐａｍｕｎｅ（登録商標））、ＩＦＮ−ベータ、インフリキシマブ（Ｒｅｍｉｃａｄｅ（登録商標））、エタネルセプト（Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標））、アダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ（登録商標））、フィンゴリモド、レフルノミド、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））、ＭａｂＴｈｅｒａ（登録商標）、又はＺｙｔｕｘ（登録商標））、エクリズマブ（Ｓｏｌｉｒｉｓ（登録商標））、インターフェロンベータ−１ａ（Ａｖｏｎｅｘ（登録商標））、ナタリズマブ（Ｔｙｓａｂｒｉ（登録商標））及びマロノニトリルアミド（ＭＮＡ）から選択されてもよい。
治療のため、投与される量は、所望の効果を生じるのに有効な量である。有効量は、１回又は一連の投与において提供され得る。有効量は、ボーラスで、又は連続する灌流により提供され得る。
「有効量」（又は「治療的有効量」）は、治療による有益な又は所望の臨床結果をもたらすのに十分な量である。有効量を１又は複数の用量で被験体に投与してもよい。治療に関して、有効量は、疾患の進行を一時的に和らげる、改善する、安定化する、逆にする、若しくは遅くする、或いは疾患の病理学的な結果を減少するのに十分な量である。有効量は、一般的には、症例毎に内科医によって決定され、当該技術分野の範囲に含まれる。幾つかの要因は、典型的には、有効量を達成するための適切な投薬量を決定する際に考慮に入れられる。これらの要因として、被験体の年齢、性別及び体重、治療される状態、状態の重症度、並びに投与される抗原結合フラグメントの形態及び有効濃度が挙げられる。
キット
特定の実施形態では、本発明は、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）を有する個体を治療する医薬キットであって、治療的有効量のアクアポリン−４（ＡＱＰ４）水チャネルのループＣペプチド及び／又はループＣ配列含有ペプチド、又は治療的有効量のその変異体及び／又はフラグメントと、前記個体を治療するための指示書とを備える医薬キットを提供する。或る実施形態では、本発明の治療剤を含有する滅菌容器を備え、かかる容器は、箱、アンプル、瓶、バイアル、管、袋、パウチ、ブリスターパック、又は当該技術分野で既知の好適な容器の形態であってもよい。かかる容器は、プラスチック、ガラス、ラミネート紙、金属箔、又は医薬品を保持するのに適した他の材料で作製されてもよい。
上記キットは診断キット、例えば、ループＣ ＡＱＰ４ポリペプチドのペプチド配列との接触によってＴ細胞活性化が起こることによりＮＭＯを有する被験体を同定する、被験体を同定するための、ループＣ ＡＱＰ４ポリペプチドのペプチド配列（配列番号８）及びその使用に関する指示書を備えるキットである。
所望であれば、ＮＭＯを有する又はＮＭＯを発症するリスクにある被験体に上記組成物を投与するための指示書と共に上記キットを提供する。指示書は、一般的にはＮＭＯの治療又は予防のための組成物の使用に関する情報を含む。他の実施形態では、指示書は少なくとも以下の１つを含む：治療剤の説明、ＮＭＯ若しくはその症状の治療若しくは予防のための投薬スケジュール及び投与、警告、指示、カウンタ表示、過量投与の情報、有害反応、動物による薬理学、臨床研究、及び／又は参照文献。指示書は、（存在する場合は）容器に直接印刷されてもよく、容器に貼り付けられるラベルとして、又は容器の中若しくは容器と共に供給される別々のシート、パンフレット、カード若しくはフォルダとしてであってもよい。
組換え法は当該技術分野でよく知られている。本発明の実施は、別段の指示がない限り、当該技術分野の範囲に含まれる分子生物学（組み換え技術を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学、及び免疫学の従来技術を採用する。かかる技術は、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」，ｓｅｃｏｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，１９８９）；「Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」（Ｇａｉｔ，ｅｄ．，１９８４）；「Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ」（Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，ｅｄ．，１９８７）；「Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ」（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）；「Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」（Ｗｅｉ＆Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，ｅｄｓ．）；「Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ」（Ｍｉｌｌｅｒ ＆ Ｃａｌｏｓ，ｅｄｓ．，１９８７）；「Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」（Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，１９８７）；「ＰＣＲ：Ｔｈｅ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ」，（Ｍｕｌｌｉｓ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９４）；及び「Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」（Ｃｏｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９１）等の文献に十分に説明される。これらの技術は、ポリヌクレオチド及びポリペプチドの産生に適用可能であり、それ自体、本発明の作製及び実施において考慮され得る。特に有用な技術は以下の欄で考察される。
本発明は、限定として解釈されるべきではない以下の実施例によってさらに解説される。本出願を通して引用される全ての参照文献、並びに公開特許及び特許出願の内容は参照により本明細書に援用される。
本発明は、限定と解釈されるべきではない以下の実施例によってさらに説明される。本出願を通して引用される全ての参照文献、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号及び遺伝子番号、並びに公開された特許及び特許出願の内容は、参照より本明細書に援用される。当業者は、開示される構造、材料、組成及び方法対する変化を伴って本発明が実施され得ることを認識し、かかる変化は本発明の範囲に含まれるとされる。
実施例１：ＡＱＰ４応答性Ｔ細胞によって作製された視神経脊髄炎（ＮＭＯ）動物モデルは、可溶性ループＣペプチドに基づく抗原特異性療法を使用するＮＭＯを標的とする治療標的としてＡＱＰ４応答性Ｔ細胞を同定した。
野生型マウスに養子移植した場合に野生型マウスにＮＭＯ様疾患を引き起こした、病原性ＡＱＰ４応答性Ｔ細胞をＡＱＰ４ヌルマウスにおいて産生するため、独特のアプローチを採用した。Ｔヘルパー１７表現型に対するＡＱＰ４応答性Ｔ細胞の極性化は、表現型を増強し、視神経及び脊髄の炎症及び脱髄をもたらした。特に、マウスにおける病原性ＡＱＰ４応答性Ｔ細胞を使用するＮＭＯの血清陰性モデルは、Ｔｈ１７表現型に対して極性化され、野生型マウスに移植された場合に尾及び四肢の脱力をもたらした、ＡＱＰ４の第２の細胞外ループであるループＣ（例えば、ループＣ配列含有ペプチド、配列番号８）に対応するペプチドによってＡＱＰ４ヌルマウスを免疫することによって作製された。組織学は、脳と同様に脊髄及び視神経全体に亘る脱髄及びＴ細胞浸潤を示した。予想外なことに、ＡＱＰ４応答性Ｔ細胞は抗ＡＱＰ４抗体無しにマウスにおいてＮＭＯ様疾患を誘発するのに十分であり、病原性ＡＱＰ４応答性Ｔ細胞がヒトにおいて同様の役割を果たす可能性があることを示した。マウスにおける幅広いＡＱＰ４発現にもかかわらず、実質臓器の炎症の他の証拠はなく、ヒトＮＭＯ疾患のモデリングに対するこのアプローチの特異性を支持した。
材料及び方法
動物
Ｃ５７ＢＬ／６バックグラウンドに対して戻し交雑されたアクアポリン−４ヌルマウスをＥｒｌｅｎｄ Ｎａｇｅｌｈｕｓ（ノルウェー国オスローのオスロー大学）から得て、室内で繁殖させた。６週齢〜８週齢の雌性Ｃ５７ＢＬ／６をＴｈｅ Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙから購入した。全てのマウスを病原体フリーで１２時間の人工明暗サイクルのもと飼育し、食物及び水に自由にアクセスさせた。ジョンズ・ホプキンス研究所実験動物委員会は全ての実験手順を承認した。
試料
注射の２日前に樹脂に基づく精製法（Ｍｅｌｏｎ Ｇｅｌ ＩｇＧ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎキット、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して、血漿交換を受けている患者の血漿からヒトＩｇＧ画分を精製した。精製したＩｇＧをスピンカラム遠心分離（Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ、１００ｋＤ ＭＷカットオフ）により濃縮し、１００μｌの腹腔内注射のため最終タンパク質濃度を２５ｍｇ／ｍｌに調整した。Ｍａｙｏ臨床ＮＭＯ−ＩｇＧアッセイにより全てのＮＭＯタンパク質はＮＭＯ−ＩｇＧに対して血清陽性と確認し、３名の患者に由来するＮＭＯ血漿試料を精製前にプールした。ヒトＩｇＧ画分（対照ＩｇＧ）を得た。研究に試料を使用するためのインフォームドコンセントによって無名化（ｄｅｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ）された方式で、ジョンズ・ホプキンス研究所治験審査委員会によって承認されたプロトコルにより全ての試料を得た。
Ｔ細胞作製及び培養
ジョンズ・ホプキンス合成及び配列決定基盤施設においてアクアポリン−４細胞外ループペプチド（ヒト５６〜６９、１３５〜５３及び２１２〜３０）を合成した。１２０ｍｇ／ｍｌのストック溶液をＤＭＳＯ中に作製した。３つ全てのペプチドを各々２ｍｇ／ｍｌでリン酸緩衝生理食塩水にさらに希釈し、不完全アジュバント（Ｉｍｊｅｃｔ；Ｔｈｅｒｍｏ−Ｆｉｓｈｅｒ）（１４）中８ｍｇ／ｍｌの加熱殺菌した結核菌（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）Ｈ３７Ｒａ（Ｄｉｆｃｏ）を含む完全アジュバントと共に１：１で混合した。アクアポリン−４ＫＯ及びシンジェニックＣ５７Ｂｌ／６マウス（米国マサチューセッツ州ジャクソン）を合計１００μｌエマルジョンを用いて側腹部に免疫した。また、０日目及び２日目に２５０ｎｇの百日咳毒素（Ｔｏｃｒｉｓ）によりマウスを腹腔内注射した。免疫の２３日後、脾臓を採取し、脾臓をシリンジプランジャーを使用して７０μｍのセルストレーナー（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｅｎｓｏｎ）に押し通して細胞単一（ｓｉｎｇｅ）細胞懸濁物を作製した。２ｍｌのＡＣＫリシス溶液中（米国メリーランド州のＱｕａｌｉｔｙ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）に室温にて２分間、各脾臓を再懸濁することによって赤血球を枯渇させ、その後培地で洗浄した。細胞を計数し、Ｇｌｕｔａｍａｘ、１％必須アミノ酸、１％ピルビン酸ナトリウム、抗生物質−抗真菌剤（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．）、１０％仔ウシ血清（Ｓｉｇｍａ）、及び５０μＭベタメルカプトエタノール（Ｓｉｇｍａ）で補足したＲＰＭＩ１６４０中、１ウェル当たり３×１０５細胞で９６ウェル平底プレートに播種した。ペプチドを含有する１００マイクロリットルの培地（最終濃度：１０μｇ／ｍｌ）：ＭＯＧ ３５−５５ 、Ａｑｐ４ ５６−６９（ループＡ）、Ａｑｐ４１３５−５３（ループＣ関連）、又はＡｑｐ４２１２−３０（ループＥ）をウェルに三連で添加した。
ペプチドを添加しない培地、又は０．１％ＤＭＳＯを含有する培地は、「刺激無し（ＮＳ）」バックグラウンド対照としての役割を果たした。加湿雰囲気下３７℃、５％ＣＯ２のインキュベータで４日間培養した後、０．５マイクロＣｕの３Ｈ−チミジン（Ｐｅｒｋｉｎ−ｅｌｍｅｒ）を含有する１０μｌの溶液を各ウェルに添加し、さらに１８時間インキュベートした。細胞を濾紙マットに採取した。乾燥後、マットをシンチレーション液で処理し、３Ｈ取込みについてアッセイした。結果をカウント毎分（ｃｐｍ）として表す。
Ｔ細胞作製、養子移植、及び行動スコアリング
初期の実験では、ＤＭＳＯ／ＰＢＳ中ＡＱＰ４の第２の細胞外ループ、ループＣに対応するペプチド（配列番号６）によるＡＱＰ４ヌルマウスの免疫を、０日目にフロイントアジュバントと共に皮下注射した。２３日目に脾臓を採取し、バルクＮＨ４溶解し（ｂｕｌｋ ＮＨ４−ｌｙｓｅｄ）、標準培地中で培養した。Ｔ細胞増殖アッセイについて、１２．５ｍｇ／ｍｌの加熱殺菌した結核菌を含有する最終濃度１０ｍｇの不完全フロイントアジュバントのペプチド：したがって、各動物は６２５μｇの結核菌を受けた（０日目）。百日咳毒素（３００ｎｇ）を０日目及び２日目に腹腔内投与した。動物を毎日計量し、盲検（ｂｌｉｎｄｅｄ ｅｘａｍｉｎｅｒ）により標準化した５点の障害スケールに基づいて点数を付けた（Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．２００８）。プールしたＮＭＯ血漿又は対照ヒト血漿のいずれかから精製されたヒトＩｇＧの一連の４回の腹腔内注射を合計１０ｍｇ／動物に対して１３日目、１４日目、１８日目、及び１９日目に投与した。ビヒクル対照は等容量のＰＢＳを受けた。
更なる実験では、１ｍｇ／ｍｌのループＣ関連ペプチド（１３５〜５３）を含む４ｍｇ／ｍｌのフロイント完全アジュバントのエマルジョンを用いて各側腹部及び各肩（１注射部位当たり５０μｌ）に対して、６週齢〜７週齢の雌性アクアポリン−４ＫＯマウスを免疫した。免疫の１０日後、リンパ節（鼠径部、腰部、上腕、及び腋窩）を収集した。シリンジプランジャーを使用して７０μｍのセルストレーナーにリンパ節を通過させルことによって単一細胞懸濁物を作製した。完全培地（１０％ＦＣＳ、５μＭ β−メルカプトエタノール、非必須アミノ酸、ピルビン酸ナトリウム、ＨＥＰＥＳ）中で洗浄した後、細胞を計数し、１ｍｌ当たり６×１０６細胞でＴ７５フラスコに播種した。非極性化細胞をペプチド（最終濃度は５０μｇ／ｍｌであった）のみで刺激した。Ｔｈ１７極性化のため、ペプチドに加えて３０ｎｇ／ｍｌ ＩＬ−６、２０ｎｇ／ｍｌ ＩＬ−２３（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、及び１０μｇ／ｍｌの抗ＩＦＮガンマ（ＸＭＧ１．２；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で細胞を刺激した。３日間の培養の後、細胞を採取し、滅菌ＰＢＳで洗浄し、５×１０６細胞を尾静脈よりマウスに静脈注射した。百日咳毒素（２５０ｎｇ；Ｔｏｃｒｉｓ）を細胞に続いてすぐに静脈注射し、２日後に再度注射した。細胞移植の５日後から開始して、盲検により標準化された５点のＥＡＥ障害スケールを使用して定量される、行動サイン及び体重を追跡した（１４）。細胞移植から１４日後〜２１日後に動物を安楽死させ、組織学的評価のため細胞を採取した。
ＥＬＩＳＰＯＴアッセイ
ＥＬＩＳＰＯＴアッセイを使用して極性化及び非極性化された細胞培養物におけるサイトカイン産生細胞の頻度を特定した。免疫化されたＡＱＰ４ヌルマウスから細胞を採取する前日に、イモビロンＰ−底９６ウェルプレート（Ｍｕｌｔｉｓｃｒｅｅｎ（登録商標）ＨＴＳ、０．４５μｍ孔径；米国ＥＭＢ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）のウェルを３５％エタノールで３０秒間プリウェット（ｐｒｅ−ｗｅｔ）し、被覆バッファーで３回洗浄し、ＥＬＩＳＰＯＴ Ｒｅａｄｙ−Ｓｅｔ−Ｇｏキット（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）より提供される５０μｌの１：２５０希釈の捕捉抗体である抗ＩＬ１７（Ｔｈ１７）で被覆した。プレートを被覆して４℃で一晩インキュベートした。その後、ウェルを被覆バッファーで２回洗浄し、完全培地で１回洗浄し、細胞が用意されるまでプレートをインキュベータに保存した。脾臓及びリンパ節を上に記載されるよう、また極性化条件で及びその条件によらずに調製した。採取した細胞を、抗原提示細胞（ＡＰＣ）として３×１０７照射脾臓細胞（３，５００ｒａｄで照射）を含む培地に２倍連続希釈したところ、１２：１で１ウェル当たり１．２５×１０５リンパ節細胞と混合されたＡＰＣは、最も明確なスポットを生じた。一晩の培養の後、ウェルを洗浄した（ＴＢＳ＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）−２０）。検出抗体をキットに提供される希釈剤に１：２５０に希釈し、室温にて２時間に亘り５０μｌを各ウェルに適用した。洗浄後、ストレプトアビジン−アルカリホスファターゼを各ウェル（１：２５００；Ｓｉｇｍａ）に４５分間添加した。更なる洗浄の後、暗所において室温で１０分間、ＢＣＩＰ及びＮＢＴ（すなわち、４ｍＭのレバミソール（Ｓｉｇｍａ）、０．１５ｍｇ／ｍｌ ５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−ホスフェート、及び０．３６ｍｇ／ｍｌの４−ニトロブルーテトラゾリウムクロリド（Ｒｏｃｈｅ）で補足された１５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、５ｍＭ ＭｇＣｌ２、１００ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ９．５）を含む現像液でシグナルを現像した。反応をＰＢＳで洗浄することにより停止した後、風乾前に蒸留Ｈ２Ｏで洗浄した。スポットをＩｍｍｕｎｏｓｐｏｔ Ｓｅｒｉｅｓ ３ Ａｎａｌｙｚｅｒ（Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｌｔｄ．）により画像化し、Ｉｍａｇｅ Ｊ及び「ｆｉｎｄ Ｍａｘｉｍａ」機能を使用して計数した。結果を、１ウェル当たり１０６細胞当たりに調整して、三連の値の平均（±平均の標準誤差、ＳＥＭ）として表す。ステューデントＴ検定をデータに対して行い、ｐ＜０．０５を統計学的に有意とした。
組織加工及び組織学
イソフルラン（ｉｓｏｆｌｕｏｒａｎｅ）により麻酔し、心臓穿刺により最初にＰＢＳ、その後新たに作製した４％パラホルムアルデヒド溶液により灌流した。視神経及び脊髄を採取し、一晩固定し、３０％ショ糖中で凍結保存し、切片作製のため冷凍した。Ｏ．Ｃ．Ｔ． Ｃｏｍｐｏｕｎｄ（ＴｉｓｓｕｅＴｅｋ（登録商標））中に組織を包埋した後、１０ミクロン〜３０ミクロンの切片をＳｕｐｅｒｆｒｏｓｔ Ｐｌｕｓ Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ Ｓｌｉｄｅｓ（Ｆｉｓｈｅｒ ｂｒａｎｄ）に固定した。ヒト抗体がマウスの中枢神経系に入ることを追跡する目的のため、最後のヒトＩｇＧの腹腔内注射の２０分後に第１のコホートの動物を犠牲した。第２のコホートの動物を犠牲し、疾患誘導の６２日目に同様の方法で組織を調製した。
ミエリンに対するエリクロムシアニン染色及び免疫組織化学染色
エリクロムシアニンを使用して切片組織における脱髄病変を特定した。エリクロムシアニンを４５０ｍｌの０．５％Ｈ２ＳＯ４（０．２％）に溶解し、最終濃度０．４％まで１０％ＦｅＣｌ３を添加してエリクロムシアニン溶液を作製した。切片組織を１００％エタノール、９５％エタノール、７０％エタノール、及び蒸留水で各々１０分間連続洗浄することにより水和した後、エリクロムシアニン溶液に１５分間浸漬した。染色後、新たに作製した０．１％ＮＨ４ＯＨ中で２０秒間〜３０秒間に亘り識別を行い、蒸留水で洗浄することによって停止した。スライドを以下に記載されるように固定した。アセテートバッファー中０．１％エオシンＹで切片を対比染色した。マイクロ波加圧調理器において０．０５Ｍホウ酸ナトリウム（ｐＨ８．０）中の熱媒介抗原賦活化を行う前に、生理食塩水中で切片を洗浄することによりＣＤ３＋Ｔ細胞に対する免疫組織化学染色を行った。バッファーに浸漬したスライドを最大圧力が達成されるまで最大出力で（５分間）マイクロ波で加熱した後、２０％の出力でさらに７分間加熱した。３分間の冷却及び室温の生理食塩水によるスライド容器の浸水の後、内因性ペルオキシダーゼをクエンチするためスライドを２０分間３％ Ｈ２Ｏ２に移し、アビジン／ビオチンブロッキングキット（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）を使用して内因性ビオチンをブロックした。室温にて３０分間、０．１％ Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−１００中５％ヤギ血清により非特異的結合をブロックした。抗ＣＤ３ウサギモノクローナル抗体（クローンＳＰ７；米国Ｇｅｎｅ Ｔｅｘ）を１：７５で４℃で一晩適用し、ビオチニル化ヤギ抗ウサギＩｇＧ（１：１０００；Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）の後、アビジン−ビオチン複合体−セイヨウワサビペルオキシダーゼ（（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）によって検出した。シグナルを０．０３％Ｈ２Ｏ２を含むＰＢＳ中０．５ｍｇ／ｍｌのジアミノベンジジンＨＣｌにより５分間現像した。洗浄後、スライドにＦａｓｔ Ｇｒｅｅｎ対比染色を行い、脱水し、固定した。ミエリン及びＣＤ３染色の定量及び分析は記載される通りである（７）。グリア線維酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）、ミエリンに対するミエリン塩基性タンパク質、及びアクアポリン−４を、マウス抗ＧＦＡＰ（１：１０００；Ｓｉｇｍａ）、ウサギモノクローナル抗ＭＢＰ（１：２５０；Ｅｐｉｔｏｍｉｃｓ／Ａｂｃａｍ）、及びウサギ抗ＡＱＰ４（Ｈ−１９）（１：２５０；Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を４℃で一晩適用した後、ヤギＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）５５５−複合抗ウサギＩｇＧ及びＦｌｕｏｒ（登録商標）４８８−複合抗マウスＩｇＧ（１：２５０；Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ／Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ）で室温にて３０分間適用する免疫蛍光法（抗原賦活を伴わない）により調べた。蛍光切片を２μｇ／ｍｌ ４’，６−ジアミジノ−２−フェニルインドール（ＤＡＰＩ）を含むＦｌｕｏｒｏｇｅｌ（Ｅｌｅｃｔｒｏｎ Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）により固定し、透明なマニキュアにより密封した。
現在の実施例では、野生型Ｃ５７Ｂｌ／６マウスは、幾つかの免疫優性ペプチドに対するＴ細胞応答を生じたにもかかわらず、ＡＱＰ４のペプチドで免疫された後に脳脊髄炎を発症しなかった。ヒトＮＭＯ抗ＡＱＰ４抗体がＡＱＰ４の細胞外エピトープを標的とすることから、ＡＱＰ４ループＡ、Ｃ、及びＥの細胞外ループに対応するペプチドに対する抗体産生及びＴ細胞応答をＡＱＰ４ヌルマウスにおいてスクリーニングした。いずれのループに対しても抗体産生の証拠は特定されなかったが、ＡＱＰ４の第２の細胞外ループであるループＣに対してロバストなＴ細胞応答が存在した（データは示されていない）。
ＮＭＯでは、抗ＡＱＰ４抗体は、ＡＱＰ４の細胞外エピトープを標的とする。ＡＱＰ４ヌルマウスを使用して、ＡＱＰ４の細胞外ループであるループＡ、ループＣ（具体的には、配列番号８のループＣ関連ペプチド配列１３５〜１５３）、及びループＥに対応するペプチドに対する抗体産生及びＴ細胞応答を調べた。ＡＱＰ４ヌルマウスは病原性ＡＱＰ４応答性Ｔ細胞の発現に対して免疫耐性を克服しなくてもよかったため、このモデルではＡＱＰ４ヌルマウスを使用した。上記ループのいずれかに対する抗体産生の証拠は特定されなかったが、配列番号８のループＣ関連ペプチド配列１３５〜１５３に対するロバストなＴ細胞応答が存在した（図７Ａ）。短いペプチドは常にロバストな抗体応答を呈しないことから、抗ＡＱＰ４抗体産生の欠如は予測されていなかった。極性化ＡＱＰ４応答性Ｔ細胞は、非刺激対照（図７Ｂ）と比較して、相当数のインターロイキン１７（ＩＬ１７）及びＩＦＮ−ガンマ分泌細胞を産生した。しかしながら、Ｔｈ１７表現型にのみ極性化した場合、ＩＬ１７分泌細胞の数は二倍になり、ＩＦＮ−ガンマ産生細胞の数はほとんど検出不可能であった（図７Ｂ）。
配列番号８のループＣ関連ペプチド配列１３５〜１５３に対してロバストなＴ細胞反応を生じたＡＱＰ４ヌルマウスは、標的抗原を発現しなかったため、自己免疫性神経疾患を発病しなかった。野生型ＡＱＰ４発現Ｃ５７Ｂｌ／６マウスに静脈内移植された場合であってもこれらのＡＱＰ４応答性Ｔ細胞は臨床上意義のある行動学的特徴又は髄膜の炎症を超えるＣＮＳの脱髄疾患の組織学的証拠を発現しなかった（データは示されていない）。養子移植に先立って、ＡＱＰ４応答性Ｔ細胞をより炎症促進性Ｔｈ１７ヘルパー細胞表現型に対して極性化した場合、臨床効果は少なくとも２．０（図８Ａ）の行動スコアを伴う尾の引きずり、及び関連する体重減少（図８Ｂ）に加えて足の脱力及び麻痺が著しかった。
３つの重要な対照は、臨床上又は組織学的な表現型を示さず、このモデルの特異性を確認した。第１に、非刺激培養物又は非ＣＮＳタンパク質によって刺激された培養物に由来するＴｈ１７極性化ＡＱＰ４応答性Ｔ細胞の養子移植は無害であり、極性化プロセスの間にＡＱＰ４ペプチドが必要されたことを強調した（図８Ａ〜図８Ｂ）。第２に、ナイーブＡＱＰ４ヌルマウスに戻し移植（ｔｒａｎｓｆｅｒｒｅｄ ｂａｃｋ）したＴｈ１７に対して極性化されたＡＱＰ４応答性Ｔ細胞も無害であり、宿主マウスにおけるＡＱＰ４の星状細胞発現はこのモデルに必要であったことを実証した（データは示されていない）。組織学的には、非極性化ＡＱＰ４応答性Ｔ細胞の臨床学的に無症状の野生型レシピエントでは、脊髄の軟組織、視神経及び脳（図９Ａ、図９Ｄ、図９Ｇ）、また同様に肺等の他のＡＱＰ４発現実質臓器（図９Ｊ）において散在する希少なＣＤ３＋Ｔ細胞が存在した。養子移植されたＴｈ１７極性化ＡＱＰ４応答性Ｔ細胞の臨床上影響を受けた野生型レシピエントでは、組織学は、脱髄及び炎症性浸潤の増加が脊髄、視神経、及び脳に主にＣＤ４＋リンパ球を含んだことを明らかにした。脊髄（図９Ｂ、図９Ｃ）及び視神経（図９Ｅ、図９Ｆ）における炎症及び脱髄は、症状の大半を占めるが、脳幹、小脳、及び大脳皮質の一部は、炎症領域を示し、これはマウスほど臨床上明白ではなかった（図９Ｈ）。ＡＱＰ４水チャネルがこれらの病原性Ｔ細胞によって標的化されたが、星状細胞ＡＱＰ４発現は、急性炎症病変内であっても比較的無傷のようであった（図９Ｉ）。多くの他の実質臓器におけるＡＱＰ４発現にもかかわらず、臨床上影響を受けたマウスにおいて肺（図９Ｋ）又は筋肉（図９Ｌ）を含むＣＮＳ外における炎症又はＡＱＰ４喪失の証拠はなかった。Ｔｈ１７極性化ＡＱＰ４応答性Ｔ細胞の野生型レシピエントの脊髄、視神経及び脳におけるＣＤ３細胞の盲検による定量は、非極性化ＡＱＰ４応答性Ｔ細胞を受けたマウスと比較して５倍超の免疫反応性（＊＊ｐ＜０．０１）を示した（図１０）。
したがって、上の研究は、ＮＭＯに類似する疾患は、ＡＱＰ４の第２の細胞外ループであるループＣに対する自己応答性Ｔ細胞の養子移植によって野生型マウスにおいて引き起こされ得ることを実証した。また、上の研究は、病原性ＡＱＰ４応答性Ｔ細胞の養子静脈内移植は、他のＡＱＰ４発現臓器を除いて、視神経及び脊髄を攻撃するＮＭＯ様炎症性疾患を引き起こすのに十分であったことを実証した。移植前のＴｈ１７表現型へのＡＱＰ４応答性Ｔ細胞の極性化は炎症を増幅し、より重篤な脱髄及び神経障害をもたらした。この応答に対する最良の説明は、ＡＱＰ４ヌルマウスにおけるＡＱＰ４ループＣ配列含有ペプチド配列番号８による免疫は、野生型マウスにおける同じループの免疫化とは異なるＴ細胞応答を生じたことであった（１５）。ヌルマウスにおいてＡＱＰ４応答性Ｔ細胞は、野生型マウスにおいて産生された場合のような任意の程度の負の選択に曝されなかった。また、任意の可能性のある自己応答傾向を抑制する野生型マウスにおける保護調節応答が存在し得る。
ループＣ全長に及ぶわずかに短いペプチドを使用する先の研究では、免疫化は、Ｃ５７Ｂｌ／６マウスにおいてＴ細胞応答を惹起したが、いかなる種類の臨床上の疾患も誘発しなかった。また同様に、ＡＱＰ４ヌルマウスにおけるループＣペプチドによる免疫化は、臨床上の表現型を伴わずにＴ細胞応答を賦活した。後者は、ヌルマウスにＡＱＰ４応答性Ｔ細胞が攻撃するＡＱＰ４が存在しなかったことから予測された。しかしながら、ＡＱＰ４ヌルマウスに由来するＡＱＰ４応答性Ｔ細胞が野生型マウスに養子移植された場合、自己応答性Ｔ細胞はＣＮＳ炎症を伴うＮＭＯ様疾患を生じた。移植前のそれらのＴ細胞のＴｈ１表現型ではなくＴｈ１７表現型に対する極性化は、炎症を増幅し、その炎症は視神経及び脊髄に限定されたままであり、マウスにおいてＡＱＰ４を発現する他の臓器と同様に脳には炎症を生じない。
この応答に対する最良の説明は、ＡＱＰ４ヌルマウスにおけるＡＱＰ４−ループＣペプチドによる免疫化は、野生型マウスにおける同じループの免疫化とは異なるＴ細胞応答を生じることである。ヌルマウスにおけるこれらのＡＱＰ４応答性Ｔ細胞は、野生型マウスで産生された場合にＡＱＰ４応答性Ｔ細胞が暴露されるような任意の程度の負の選択に曝されない。また、野生型マウスでは、任意の可能性のある自己応答傾向を抑制する保護的な調節応答が存在する可能性がある。
本研究の意義は、視神経及び脊髄に対してのみ誘発及び局在化された炎症の両方におけるＮＭＯのＴＨ１７極性化ＡＱＰ４応答性Ｔ細胞の中枢免疫病原性の役割を示す。ＡＱＰ４を標的とする病原性Ｔ細胞は、ＡＱＰ４発現星状細胞を殺傷せず、ＡＱＰ４発現の喪失を引き起こさなかった。むしろ、このモデルにおいて実証された病原性Ｔ細胞の役割は、ＣＮＳのＡＱＰ４に富む領域に対する攻撃を誘発した後、抗体及び補体を含む免疫系の他の成分を動員して星状細胞の損傷を媒介することである。ヒトＮＭＯの病理学では、星状細胞の死滅及びアクアポリン−４の喪失は抗ＡＱＰ４抗体の結合によって開始され、補体の媒介によるＡＱＰ４のＭ２３アイソフォームの破壊、又はＭ１アイソフォームの内部移行のいずれかをもたらす（１６、１７）。神経炎症を悪化する抗ＡＱＰ４抗体の病原性機能が以前に実証されたが、進行中の実験的な脊髄炎の状況下のみであって、疾患の発病下（ｉｎ ｉｎｓｔｉｇａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｄｉｓｅａｓｅ）ではない（５〜７）。ラット又はマウスへの抗ＡＱＰ４抗体の受動移入は、血液脳関門が発達途中であり、ＣＮＳ標的に対して抗体が結合可能であるＰ２の子においても、自己応答性Ｔ細胞の不在下では神経炎症を誘発できなかった。したがって、神経系に対する免疫標的の特異性は、抗ＡＱＰ４抗体によっては媒介されず、抗ＡＱＰ４抗体は、任意の臓器において結合し得たことから、ＡＱＰ４標的間で区別しなかった。
細胞外ループＣは、ヒトにおいて抗ＡＱＰ４抗体の最も一般的な標的である（１９）。ＡＱＰ４応答性Ｔ細胞及び病原性ＡＱＰ４抗体は、共にはたらいてＮＭＯを引き起こす可能性がある。このモデルでは、自己応答性Ｔ細胞及び抗体応答の両方を賦活する条件下でＡＱＰ４のループＣに対応するペプチドに易罹患性の人を暴露する。ＡＱＰ４に応答するＴｈ１７は、本研究及び以前の動物モデル（２０）において実証されたように、より劇症型の疾患を引き起こす可能性がある。ＡＱＰ４応答性Ｔ細胞が視神経及び脊髄に対する炎症を誘発すると、抗ＡＱＰ４は補体活性化及び顆粒球動員をあおることによって病状を悪化させる。
このモデルは、ＮＭＯに対するＡＱＰ４特異的免疫療法の可能性を強調する。非常に特異的な抗原（ＡＱＰ４）及び抗体応答（抗ＡＱＰ４）を伴い、ここでＡＱＰ４応答性Ｔ細胞と関連する可能性を有する疾患として、ＮＭＯは抗原特異性療法による治療に適している（２１、２２）。耐性応答を誘導するため、高用量の可溶性ループＣペプチド（例えば、ループＣ配列含有ペプチド配列番号８、及び／又はそのフラグメント若しくは誘導体）を、現在ＮＭＯの治療に一般的に使用されるリツキシマブ等の薬物による免疫抑制の状況下で患者に提供することができる。基礎疾患により、粘膜耐性を達成するための経口経路が疾患の増悪を回避する最も安全な初期アプローチのようである（２３）。（抗原特異的療法が試験された）より抗原特異性の低い、関節リウマチ及び多発性硬化症等の他の疾患では、免疫優性抗原応答における顕著な不均一性があり、対照的に、ＮＭＯは、大部分がＡＱＰ４水チャネルにのみ対する反応によって定義される、ＡＱＰ４関連疾患であるが、一部の患者がループＡ及びループＥに対しても抗体応答を生じ、ＡＱＰ４内の正確な標的はＮＭＯ患者の間でわずかに変化する場合がある（１９）。理論に束縛されることを望むものではないが、大半の病原性抗体はＡＱＰ４のループＣ（例えば、ループＣ配列含有ペプチド配列番号８及び／又はそのフラグメント若しくは誘導体）を標的とするが、一部の患者はループＡ及びループＥに対しても応答する抗体を産生する（１９）。ループＥに対して応答性のＴ細胞が脊髄における炎症を誘導することができたＬｅｗｉｓラットにおける研究は、ループＣ以外のＡＱＰ４の細胞外標的も同様に関与する可能性を示唆した（２４）。
等価物：
当業者は、日常的な実験のみによって、本明細書に記載される具体的な実施形態及び方法に対する多くの等価物を認識する、又は確認することが可能である。かかる等価物は、以下の特許請求の範囲によって包含されることが意図される。
本明細書に記載される詳細な実施例及び実施形態は、解説目的のみの例示として与えられ、何ら本発明を限定するとみなされるものではないと理解される。様々な修正又は変化が当業者に対して示唆され、本出願の趣旨及び範囲に含まれ、添付の特許請求の範囲に含まれるとみなされる。例えば、原料の相対量は、所望の効果を最適化するために変化してもよく、追加の原料が添加されてもよく、及び／又は同様の原料を１若しくは複数の記載される原料について置換してもよい。本発明のシステム、方法、及びプロセスと関連する追加の有利な特徴及び機能は、添付の特許請求の範囲から明らかとなる。さらに、当業者は、日常的な実験のみによって、本明細書に記載される具体的な実施形態及び方法に対する多くの等価物を認識する、又は確認することが可能である。かかる等価物は、以下の特許請求の範囲によって包含されることが意図される。
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Claims (8)

  1. 治療的有効量のアクアポリン−４（ＡＱＰ４）水チャネルのループＣペプチド、又は
    治療的に有効な、配列番号６、８で表されるアミノ酸配列を含むフラグメント、又はその組み合わせ、
    を含む、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）の治療用医薬組成物。
  2. 前記視神経脊髄炎（ＮＭＯ）が単相性視神経脊髄炎（ＮＭＯ）である、請求項１に記載の医薬組成物。
  3. 前記視神経脊髄炎（ＮＭＯ）が再発性視神経脊髄炎（ＮＭＯ）である、請求項１に記載の医薬組成物。
  4. アクアポリン−４（ＡＱＰ４）水チャネルのループＣペプチドが配列番号１で表されるアミノ酸配列を含むポリペプチドであるか、又はそれと少なくとも９０％の配列同一性を有するポリペプチドである、請求項１に記載の医薬組成物。
  5. 前記治療的有効量が耐性応答を誘導するのに十分である、請求項１に記載の医薬組成物。
  6. 前記組成物が免疫抑制療法をさらに含む、請求項１に記載の医薬組成物。
  7. 前記免疫抑制療法が、糖質コルチコイド剤、細胞増殖抑制剤、抗体、イムノフィリン作動薬、インターフェロン、オピオイド、ＴＮＦ結合タンパク質、及びミコフェノール酸からなる群から選択される、請求項６に記載の医薬組成物。
  8. 前記免疫抑制療法が、アルキル化剤、ナイトロジェンマスタード（シクロホスファミド）、ニトロソウレア、白金化合物、メトトレキサート、アザチオプリン、メルカプトプリン、フルオロウラシル、タンパク質合成阻害剤、ダクチノマイシン、アントラサイクリン、マイトマイシンＣ、ブレオマイシン、ミトラマイシン、ＩＬ−２受容体に対する抗体、ＣＤ３に対する抗体、ムロノナブ−ＣＤ３、シクロスポリン（Ｓａｎｄｉｍｍｕｎｅ（登録商標））、タクロリムス（Ｐｒｏｇｒａｆ（登録商標））、シロリムス（Ｒａｐａｍｕｎｅ（登録商標））、ＩＦＮ−ベータ、インフリキシマブ（Ｒｅｍｉｃａｄｅ（登録商標））、エタネルセプト（Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標））、アダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ（登録商標））、フィンゴリモド、レフルノミド、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））、ＭａｂＴｈｅｒａ（登録商標）、又はＺｙｔｕｘ（登録商標））、エクリズマブ（Ｓｏｌｉｒｉｓ（登録商標））、インターフェロンベータ−１ａ（Ａｖｏｎｅｘ（登録商標））、ナタリズマブ（Ｔｙｓａｂｒｉ（登録商標））及びマロノニトリルアミド（ＭＮＡ）である、請求項６に記載の医薬組成物。
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