JP6723195B2 - プロリンリッチペプチドの構造模倣物およびその使用 - Google Patents

Description

本発明は特に、プロリンリッチペプチドの構造模倣物として使用され得るので、タンパク質のプロリンリッチモチーフ結合ドメイン（ＰＲＭ結合ドメイン）に結合できる化合物に関する。本発明はさらに、薬学的活性剤としてのそれらの化合物の使用、ならびに細菌疾患および神経変性疾患および腫瘍性疾患の治療におけるそれらの薬学的活性剤の使用に関する。

ペプチドおよびタンパク質は、生物の不可欠な成分であり、様々な異なる機能を有する。タンパク質は主に生体触媒の役割（酵素）、ならびに他の関連する役割を有するが、それらは、重要な組織成分としてのそれらの能力を果たさなければならず、ペプチドは、主にホルモン、神経伝達物質および神経修飾物質として生物内部で重要な機能を有する。膜結合型受容体に結合し、それにより媒介される細胞生理学におけるその後の反応により、ペプチドは、ある細胞から別の細胞への伝達に影響を与え、代謝、免疫反応、消化、呼吸、痛覚、生殖、作用、電解質平衡などの様々な生命プロセスを制御する。

したがって、病原性状態の処置における治療を考案するための必要な基盤を同時に与えながら、生物内部の正確な関係を理解するという必要性が従来技術において存在する。分子レベルでの生物学的プロセスの作用の発見の進化により、生物および化学の学際的統合が進化し、分析プロセスおよびコンピュータ支援理論的方法における大幅な進歩により支持されている。上記の全ては、新規活性剤の開発をもたらす任意の首尾良い識別のための重要な要件である。それにも関わらず、簡単で効果的な活性剤の新規設計である実際の目標への道程は依然として長く続いており、はるかに遠い。典型的に、出発点として天然構造から作用する場合、総合的な実証研究が、可能な標的物質のライブラリーを合成し、特定の活性についてそれらの剤を最適化するために必要とされる。さらに、多くの時間的要件および出費以外に、しばしば、後になって、コンピュータにより開発された活性物質が頻繁に、実際の非常に複雑な生物学的システム（例えばヒトにおける）において不適切である所望の効果のみを示す、または許容可能でない副作用を有することが見出される。

この背景を考慮に入れて、特にまた、ペプチドおよび／またはペプチド模倣物活性剤の開発は、それらを合成することに関する目的に関してもまた、大きな課題であり、実際には、多用な学際的相互作用に関して、最終的には、所望の標的分子へのアクセスを増加させるための可能性および制限に関して実現可能であることを決定する有機合成化学の分野である。典型的に、これらの分子は、立体選択性を依然として示しながら、可能な限り少ない工程で構築されなければならないので、新たなおよびより良い合成方法が、研究室だけでなく、今後の大規模用途に関してもまた、この目標を満たすために常に必要とされる。ディプロリン（ｄｉｐｒｏｌｉｎｅ）単位の構造模倣物およびＰＰＩＩヘリックス構造を有するプロリンリッチペプチドにおける置換基としてのその使用は従来技術の一部である。

一部のβ−ターンペプチド模倣物は、タンパク質間相互作用の調節因子として当該技術分野において知られている。特許文献１は、ＭｙＤ８８のホモ二量体化ならびにＭｙＤ８８とＴＩＲとの間の相互作用を防ぐ異なるペプチドおよびペプチド模倣物を開示している。β−ターンペプチド模倣物はまた、ＳＨ３ドメインの間のタンパク質間相互作用の調節因子として知られている。例えば、特許文献２は、ポリプロリンモチーフおよびα−ヘリックス構造を含むβ−ターンペプチド模倣物がＳＨ３ドメインと相互作用できることを開示している。非特許文献１および非特許文献２は、ポリプロリン配列のための模倣物として使用され得る異なるβ−ターンペプチド模倣物を開示している。

しかしながら、公知のペプチド模倣物は、飽和中心６員環を有する。従来技術と反対に、本発明に係る化合物は、６員の不飽和中心環により特徴付けられる。本発明の式１に係る中心６員環における二重結合は、化合物の高い安定性に起因して従来技術と対照的にかなりの改良を表し、驚くべきことに、標的構造に対して改良された親和性を表す。全ての他の公知の構造は、２つの隣接する環Ｃ原子により側環に結合される中心７環系の存在を提供するような種類である（特許文献３）。新たな足場の主な利点は、ビニリデン架橋の修飾された部分に起因して、異なる立体の要求が、例えば、ＥＶＨ１ドメインまたはしかし、他の構造に対する親和性に関してかなりの増加の一因となる、結合ステップの間に現れるという事実にある。

国際公開第２００６／０６７０９１Ａ１号 国際公開第９８／５４２０８号 国際公開第２００８／０４０３３２Ａ１号

Ｗｉｔｔｅｒら、Ｂｉｏｏｒｇ．＆ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔ．８（１９９８）３１３７ Ｖａｒｔａｋら、Ｏｒｇａｎｉｃ Ｌｅｔ．２００６、８：５、９８３

したがって、本発明の目的は、特にＰＰＩＩヘリックス構造を有する場合、プロリンリッチペプチドのための模倣物として使用され得る化合物を提供することである。プロリン−プロリンジペプチド単位、特にＰＰＩＩヘリックス構造を有するものは、好ましくは、いわゆるＰＲＭ結合ドメイン（ＰＲＭ＝プロリンリッチモチーフ）のためのリガンドとして機能できる。

驚くべきことに、本発明に係る課題は、６員の不飽和中心環を有する一般式１の化合物
（式中、
Ｘ＝Ｏおよび／またはＳであり、
Ａ、Ｂ＝環架橋であり、
Ｙ^１＝Ｈ、アルキル、フルオロアルキル、アリールおよび／またはヘテロアリールであり、
Ｚ^１、Ｚ^２＝Ｈ、カルボニル、ＯＨ、Ｏ−アルキル、Ｏ−アシル、Ｎ−Ｒ^１Ｒ^２（ここで、Ｒ^１および／またはＲ^２＝Ｈ、アルキル、アシル、スルホニルである）、アルキル、アシル、フルオロアルキル、アリールおよび／またはヘテロアリールであり、
Ｒ^１＝アルキル、アシル、アルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニルおよび／またはアミノカルボニル（ＣＯＮＨ_２、ＣＯＮＨＲ、ＣＯＮＨ−ペプチジル、（Ｒを有する））であり、
Ｒ^２＝Ｈ、アルキル、アリール、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、アリールオキシカルボニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アミノアシルおよび／またはペプチジルである）
を提供することにより解決される。

本発明に係る化合物は従来技術の不都合な点を有さないことはかなり驚くべきことであった。従来技術に関連する上述の不都合な点以外に、今まで、製剤としてのペプチド活性剤の使用は以下の多くのさらなる要因により制限されていた：
１）胃腸管および血清中のタンパク質分解に起因する低い代謝的安定性；
２）細胞に侵入する低い能力；
３）主に高分子量に起因する経口摂取後の不十分な吸収；
４）肝臓および腎臓を介する迅速な排出；ならびに
５）異なる受容体との相互作用に起因する、選択性の欠如。

驚くべきことに、本発明に係る化合物は、人工的に製造される物質として、特に、タンパク質リガンドの機能を発揮でき、ペプチドの生物学的効果（アゴニスト）を模倣またはペプチドの生物学的効果（アンタゴニスト）遮断できる、模倣物として使用され得ることが見出された。ペプチド模倣物を提供する原理は当該技術分野において知られているが、今まで、ＰＰＩＩ構造を有する非常にわずかの例のみの模倣物が開示されているだけであり、それは非常に多くの不都合な点を有する。側環Ｂの結合が中心Ｃ原子により達成される場合、中心６環系を有する構造模倣物を提供できることはかなり驚くべきことであり、ここで、これらの化合物は、中心７環系を有し、側環が中心環の２つの隣接するＣ原子に結合される公知の構造模倣物より生物学的効果が実証されている。これらの修飾の結果、例えば細胞運動性に影響を与える非常に良好な生物学的利用能および非常に高い生物学的効率を有する分子を提供する本発明に係る構造模倣物を使用する可能性を生じることは予測できず、自明ではなかった。本発明に係る分子がペプチドを対象とする場合、前記ペプチドは驚くべきことに、公知の構造模倣物と比較して細胞に侵入する良好な能力を示す。公知の構造模倣物と対照的に、新規構造模倣物は、例えば、ＥＶＨ１ドメインなどの天然の結合パートナーとの結合にかなり良く適している。したがって、本発明は、特にポリプロリンＩＩヘリックスの完全に新規である、本発明の構造模倣物を含む。公知かつ新規の構造模倣物は、とりわけ、ＰＰＩＩヘリックスの改良された模倣物特性を有する、ビニリデン基の変化位置に関して互いに異なる。このことは、実際に、リガンドに関して、ビニリデン架橋の位置が、結合に関して立体障害を引き起こし、例えばＶＡＳＰ−ＥＶＨ１との結合に関して、親和性に関するかなりの向上が達成される。

ＰＰＩＩヘリックスの構造モチーフを完全または部分的に合成類似体と置き換えるために存在する異なるアプローチにも関わらず、公知の構造と、異なるタンパク質ドメインとの相互作用を試験することは、全く可能ではなかったまたは制限を有してのみ可能であった。平均的な当業者はまた、プロリンリッチヘリックスと、異なるタンパク質ドメインとの相互作用が特定の生物学的意義を有さないことを従来技術の教示から習得している。それに応じて、本発明者らの成果は、彼らが、この相互作用および／または修飾が、細菌またはウイルス感染、神経変性疾患または腫瘍の形成などの多くの疾患と関連することを実証できた状況に存在している。当該技術分野において公知である多くの模倣物は、多くの場合、系から再び取り除くことが困難である、または全く取り除くことができない触媒を用いてのみ調製され得る。我々は現在さらに、公知の製剤が短期間の保存期間を有するのみであり、多くの場合、合成に必要である製剤が汚染してのみ得られ得、医薬分野において完全に使用することを妨げる、またはそれらの使用に関してかなりの困難性を与えることを指摘している。さらに、今まで公知である模倣物の結合親和性は、本発明に係る目的を達成できるようなものではなかった。

ペプチドリガンドとタンパク質受容体との相互作用は、生物学的プロセスの調節において重要な役割を果たし、ペプチド形状に極めて依存する。生理学的状態に供することにより、直鎖ペプチドの構造は動的平衡にあり、この動的平衡は個々の結合周囲の回転によりｐＨ値および温度に依存する。結果として、生物学的反応構造の最小の割合のみが存在する。

ペプチド骨格の構造は、通常、φ（ファイ）、ψ（プサイ）およびω（オメガ）の３つの角により記載される。部分的二重結合特性に起因して、ペプチド結合は、回転するのを防がれ、平面形状を有し、その結果、２つの好ましい構造：ω＝１８０°および／またはω＝０°を有する、ｔｒａｎｓ−およびｃｉｓ−ペプチド結合を生じ、ここで、ｔｒａｎｓ−構造はエネルギー的により好適であり、したがって普及している。

このように、ペプチド骨格の構造の詳細に関して、最初の近似値により、アミノ酸部分のねじれ角φおよびψは十分である。Ｎ−Ｃ_α結合に沿った回転を表している角φは、４個の原子Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ−Ｃ_α−Ｃ（＝Ｏ）により定義される。同じように、Ｎ−Ｃ_α−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎは角ψを定義し、これは、Ｃ_α−Ｃ（＝Ｏ）結合周囲の回転を表す。理論的に、多数の異なる組み合わせがφおよびψから可能であるが、ペプチドにおける特定の優先的な構造が、側鎖のサイズ、極性および電荷に応じて存在し、それにより、α−ヘリックス、β−ひだ折れシート、β−ターンなどの既知の二次構造の形成を生じる。

ペプチド内の成分としてのアミノ酸プロリン
プロリンは、第２アミノ酸のみであるので、２０個の天然に生じるアミノ酸の中で特別な位置を占める。アミド窒素に対するα側鎖の環化に起因して、ねじれ角φ＝（−６５±１５°）は５員環の成分として相対的に制限され、このことは、したがって、ペプチドが少しの回転自由度を有することを意味する。窒素の二重アルキル化は、他の共通のアミドプロトンが（ペプチド骨格において）欠失する結果を生じ、このため、プロリンは、水素架橋ドナーのための候補ではなく、他方で、カルボニル基は特に電子においてリッチであり、このため、他のアミノ酸を用いた場合より良い水素架橋受容体である。これらの幾何学的および電子的特性に起因して、プロリンは、α−ヘリックス（「α−ヘリックスブレーカー」）を安定化できず、また、β−ひだ折れ構造（「β−ひだ折れシートブレーカー」）を形成せず、代わりに、それは好ましくは、他の典型的に二次構造、いわゆるβ−ターンおよびポリプロリンヘリックス（ＰＰＩＩヘリックス）において出くわす。

二次構造としてのプロリンリッチモチーフおよびＰＰＩＩヘリックス
プロリンリッチアミノ酸配列は、多くの場合、多タンパク質複合体に関与し、細胞内シグナル伝達プロセスに関して形成および／または溶解されるタンパク質内に出くわす。それらの中のこれらのタンパク質は、プロリンが排他的または優勢的に（多くの場合、連続した４個以上のプロリン単位で）存在するそれらの表面上に配列を示す。

このように、ＰＰＩＩヘリックスと省略されるポリプロリンヘリックスである特徴的な二次構造が含まれる；これは、ペプチド骨格のねじれ角φ＝−７８°およびψ＝＋１４６°を有する伸長した左巻き螺旋として理解される。結果として、断面において１回の回転当たり正確に３つのプロリン部分を有するヘリックス軸周囲の疑似Ｃ_３回転対称が生じ（図１）、このため、プロリンリッチ配列におけるプロリン部分は、好ましくは、少なくとも３周期（例えば、ＰｘｘＰｘｘＰ（配列番号１）またはＰＰｘＰＰｘＰＰｘ（配列番号２））で反復する。

このように、ペプチド骨格のプロリン側鎖およびカルボニル基は一定の間隔で溶媒に曝露される。分子内水素架橋の非存在に起因して、カルボニル基は、受容体タンパク質との分子内水素架橋結合を形成するのに特に良く適している。

しかしながら、プロリンのみが存在しない場合、ＰＰＩＩヘリックスの構造モチーフもまた、含まれてもよい。アミノ酸Ｇｌｕは、特に高頻度で、ＰＰＩＩヘリックス、およびその近接に存在するが、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、ＡｓｐおよびＨｉｓもまた、見られる。プロリン位置を決定するドメインとリガンドとの間の好ましい結合様式は厳密に保存されなければならず、必要な場合、他のアミノ酸と置換されてもよい。

本発明の好ましい実施形態において、それは、ＡおよびＢにより表される架橋が、Ｃ−、Ｏ−、Ｓ−および／またはＮ−原子を含む群から選択される２〜４個の環原子からなるような様式で選択される。このように、４、５、６または７員を含む環が得られ、それは、ＣＨ２単位以外に、−Ｏ−、−Ｓ−および−Ｎ−Ｒ（ここで、Ｒ＝Ｈ、アルキルまたはアシル）も含み得る。

本発明のさらに好ましい実施形態において、化合物は一般式２
（式中、
Ｚ^１、Ｚ^２は構造１に示され、構造式２の図の構造に示され、
Ｘ＝−ＣＨ_２−、−Ｏ−、−Ｓ−および／または−ＮＨ−Ｒであり、
Ｒ^１、Ｒ^２＝アルキル、アシル、ヘタリールおよび／またはスルホニルである）
を有する。

本発明のさらなる実施形態において、本発明は式３
（式中、
Ｘ＝−ＣＨ_２−、−Ｏ−および／または−Ｓ−であり、
Ｒ＝ＮＨ−Ｒ’’、−Ｏ−Ｒ’’（ここで、Ｒ’’＝ペプチジル、置換アルキルおよび／またはヘタリールである）であり、
Ｒ’＝アシル、ペプチジルおよび／またはスルホニルである）
を有する。

ペプチジルは式３Ｒ’において特に好ましい。

好ましい態様によれば、本発明は薬学的活性剤として命名した化合物の使用に関する。薬学的活性剤としての使用は、外科、治療または診断プロセスにおける用途を含む。

さらなる態様によれば、本発明は、必要な場合、薬学的に許容可能な担体物質と共に本発明に係る化合物を含む医薬物質に関する。

好ましい医薬担体物質は、例えば、充填剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、溶解遅延剤、崩壊剤、吸収促進剤、保湿剤、吸収剤および／または潤滑剤である。

さらなる態様によれば、本明細書は、ＳＲＣ−ホモロジー−３ドメイン、ＷＷドメイン、ＥＮＡ−ＶＡＳＰホモロジー−１ドメイン、ＧＹＦドメイン、ＵＥＶドメインおよび／またはプロフィリンを含む群から選択されるドメインについてのリガンドとしての本発明に係る化合物の使用に関する。

それに応じて、本発明はまた、驚くべきことに、特に、ＳＨ３ドメイン、ＥＶＨ１ドメイン、ＷＷドメイン、ＧＹＦドメイン、ＵＥＶドメインおよびプロフィリンに関与するタンパク質間相互作用の良好な阻害剤としてのポリプロリンＩＩヘリックスの新規構造模倣物の使用に関する。これらのドメイン、例えばＶＡＳＰ（ＥＶＨ１ドメイン）またはＹＡＰ（ＷＷ）を含むタンパク質は、とりわけ、細胞運動性（特にＶＡＳＰ）および細胞増殖（特にＹＡＰ）の調節において特に重要な役割を果たす。したがって、例えば、ＶＡＳＰは、多くの浸潤性乳癌細胞において顕著に過剰発現される。ＷＷドメインにより媒介される、ＥＲＢＢ４のＣ末端断片とＹＡＰの相互作用の結果、例えば、ＹＡＰの核局在化が生じ、細胞増殖のコアクチベーターとしてのＹＡＰの機能についての必要条件である。したがって、これらの新規構造模倣物を使用するための多くの新規および驚くべき可能性が現れる。

これらのドメインの全ては好ましくは、１〜５００μＭの親和性を有するプロリンリッチ配列と相互作用し、場合により、本発明の特定の実施形態において、必要な特異性を得るためにさらなる隣接するエピトープを必要とする。リガンド、ペプチドおよびドメインの間の結合は好ましくは、２つの予め形成された疎水性表面の相互作用により作製される。芳香族アミノ酸は有益にはドメインタンパク質の表面上に凝集し、その部分は疎水結合ポケットを構成する。プロリンリッチペプチドリガンドは、ＰＰＩＩヘリックスの剛性の性質に起因して、ドメイン表面と接触する幾何学的に固定された相補的構造を有する。本明細書において有益には、ドメイン表面と接触する核モチーフの長さ全体にわたって疎水性接触は起こらず、むしろ、リガンドペプチドはドメインにわたる傘様構造を形成する。プロリンモチーフの一部は疎水性結合ポケットにおいて占められるので、ドメインの芳香族部分と相互作用する。これらの接触は、生物学的に関連した結合強度を提供するのに不十分であるので、さらに安定化する水素架橋結合が有益には形成され、これはプロリンの電子が豊富なカルボニル基により容易に作製できる。

ＰＰＩＩヘリックスの制限された柔軟性のために分子間結合はエネルギー的に起こりやすく、比較的高度のオーダーに起因して、一般的な直鎖ペプチドに関する場合より結合形成に関するエントロピーの減少は少ない。このエネルギーの寄与を定量化するために、ジペプチドｘＰにおいて、ペプチド骨格周囲の他の共通の４つの回転自由度のうちの２つのみを調べることができる。３００Ｋにおける各々の回転自由度はおよそ３．５ｋＪ／ｍｏｌに対応するので、ｘＰジペプチド当たりの生じるエネルギーの利点は、錯体形成でおよそ７ｋＪ／ｍｏｌである。

さらなる親和性の増加が、例えば、ＥＶＨ１ドメイン（ＥＮＡ−ＶＡＳＰホモロジー−１ドメイン）に結合する細菌表面タンパク質ＡｃｔＡなどの単一ペプチド内のプロリンリッチ配列の多重反復に起因して同様に見られ得る。

ＥＶＨ１ドメインは、およそ１１５個のアミノ酸からなり、種々の信号を与える多ドメインタンパク質において生じる。少しのものに加えて、これはまた、分子アダプターとして作用し、細胞骨格のアクチン動的を調節する、ＥＮＡ／ＶＡＳＰタンパク質のファミリーを含む。ＥＶＨ１ドメインは、リガンド選択により３つのクラスに細分される。第１のクラスは、特に、例えば、ラメリポディン（ｌａｍｅｌｌｉｐｏｄｉｎ）においてビンキュリンおよびザイキシンなどの全ての接着斑タンパク質において検出され得るＦＰＰＰＰ核酸モチーフを特異的に認識し、それは好ましくは、ラメリポディア、浸潤突起および糸状突起において、同様に細胞内細菌リステリア・モノサイトゲネシス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）のＡｃｔＡタンパク質において検出され得る。

分子レベルにおけるプロセスおよび得られる生物学的機能性を研究するために、３次元ドメイン構造が解明されたが、異なるリガンドとペプチドとの相互作用を同様に試験した。そこで、ＥＶＨ１ドメインは、コンセンサスコアモチーフＦＰｘφＰを認識することが見られ、ここで、フェニルアラニン（Ｆ）および２つの外側プロリン位置（Ｐ）は結合の形成に必須であるが、２つの内側位置は変動を許容する（ｘ＝任意のアミノ酸、φ＝疎水性アミノ酸）。これは図２において見られ得、ヒトＶＡＳＰタンパク質のクラス−Ｉ−ＥＶＨ１ドメインが、ＡｃｔＡペプチド（_３３２ＳＦＥＦＰＰＰＰＴＥＤＥＬ_３４４）（配列番号３）由来の短い部分と一緒に試験された。中心のＦＰＰＰＰモチーフ（配列番号４）および親和性が増加しているＥＬエピトープが構成され、個々の位置が他の天然アミノ酸により置換される場合、結合強度が明確に影響を受けることを示す（暗＝良好な結合、明＝結合なし）。

Ｐ_０およびＰ_１位が他のアミノ酸により置換され得る（ここで、特にＰ_０は完全に非特異的である）という事実は、結合様式におけるリガンドペプチドの評価により説明され得る：Ｐ_−１およびＰ_２はドメインの疎水性結合ポケットにおいて取られるが、中間の２つのプロリンはドメインの上の傘様位置にあり、ドメイン表面とほとんど接触しない。しかしながら、Ｐ_０のカルボニル基は、ＥＶＨ１ドメインのトリプトファン部分Ｗ２３のＮＨに対して必須の水素架橋を形成する。

さらに、多くの異なる試験リガンドペプチドに基づいて、結合親和性の概観を得ることが可能であった。最も高い観察された結合親和性（Ｋ_Ｄ＝２０μＭ）は、リガンド_３３２ＳＦＥＦＰＰＰＰＴＥＤＥＬ_３４４により与えられる（ＡｃｔＡタンパク質の４つのプロリンリッチリピートの３分の１）。他方で、リガンドがそのコアモチーフＦＰＰＰＰＴ（配列番号５）に短縮される場合、ＶＡＳＰ−ＥＶＨ１ドメインに関連する測定可能な親和性はこれ以上見出され得ず；他方で、Ｍｅｎａ−ＥＶＨ１ドメインに対する結合は非常に弱かったが、なおもさらに検出可能（４１７μＭ）であった。

本発明の好ましい実施形態はポリプロリン模倣物としての化合物の使用を提供する。有益には、プロリンリッチアミノ酸配列は、特に、シグナル変換プロセス、特に、細胞内シグナル変換プロセスに関与するペプチドにおいて見出される。本発明の意味において、模倣物という用語はまた、類似体としても理解され得る。本発明に係る化合物の好ましい使用は、細菌感染症ならびに神経変性疾患および／または腫瘍疾患を含む群から選択される、ポリプロリンヘリックス構造により媒介される、細胞内シグナル変換プロセスの修飾に関連する疾患の治療においてである。

さらなる態様によれば、本発明は１つまたは複数の本発明に係る化合物を含むペプチドまたはタンパク質に関し、本発明に係る化合物は好ましくはポリプロリン模倣物として使用される。さらなる態様によれば、本発明は、１つまたは複数の本発明に係る化合物、ならびに１つまたは複数の構造８６に係る化合物を含むペプチドまたはタンパク質に関する。

本発明の好ましい実施形態において、ペプチドは、
Ａｃ−ＳＦＥ−［２−Ｃｌ−Ｆ］−ｐ−ＰＰ−ＴＥＤＥＬ−ＮＨ２（配列番号６−［２−Ｃｌ−Ｆ］−ｐ−ＰＰ−配列番号７）、
Ａｃ−ＳＦＥ−［２−Ｃｌ−Ｆ］−ＰＰ−ｐ−ＴＥＤＥＬ−ＮＨ２、
Ａｃ−ＳＦＥ−［２−Ｃｌ−Ｆ］−ｐ−ｘ−ＴＥＤＥＬ−ＮＨ２および
Ａｃ−ＳＦＥ−［２−Ｃｌ−Ｆ］−ｐ−ｐ−ＴＥＤＥＬ−ＮＨ２
からなる群から選択され、ここで、ｐは本発明に係る化合物を示し、ｘは構造８６を示し、２−Ｃｌ−Ｆは２−Ｃｌ−フェニルアラニンを示す。本発明のさらなる好ましい実施形態において、ペプチドはｐ＝構造８５として特徴付けられる。

構造８５および８６は、本発明の説明のいくつかの文脈において、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸として表される。これらの構造がペプチドに使用される場合、その構造は対応して、任意のＦｍｏｃ保護基を含まないことが好ましい；例えば、化合物は、最も近くに位置するペプチドまたはタンパク質におけるアミノ酸に対してペプチジル化合物により結合され得る。

本発明はまた、好ましくは、細菌感染症ならびに神経変性疾患および／または腫瘍疾患を含む群から選択される、ポリプロリンヘリックス構造により媒介される、細胞内シグナル変換プロセスの修飾に関連する疾患を治療するための本発明に係る化合物、本発明に係る化合物を含むペプチドまたは薬剤の使用に関する。

細菌疾患は、好ましくは、以下の細菌に関連するような疾患、特にそれらにより媒介される疾患である：レジオネラ菌、連鎖球菌、ブドウ球菌、クレブシエラ菌、ヘモフィルスインフルエンザ、リケッチア（紅斑熱）、マイコバクテリウム、マイコプラズマ、ウレアプラズマ、ナイセリア（髄膜炎、ウォーターハウスフリードリヒセン症候群（Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅ−Ｆｒｉｅｄｒｉｃｈｓｅｎ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、淋病）、シュードモナス、ボルデテラ（百日咳）、コリネバクテリア（ジフテリア）、クラミジア、カンピロバクター（下痢）、大腸菌、プロテウス、サルモネラ菌、赤痢菌、エルシニア属、ビブリオ科、腸球菌、クロストリジウム（ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｅｎ）、ボレリア菌、梅毒トレポネーマ、ブルセラ菌、フランシセラ属および／またはレプトスピラ属、特にリステリア菌。

特に好ましい疾患は、Ｌ．モノサイトゲネスＳｖ１／２ａ、Ｌ．モノサイトゲネスＳｖ４ｂ Ｆ２３６５、Ｌ．モノサイトゲネスＳｖ４ｂ Ｈ７８５８、１７８コンティグ、Ｌ．モノサイトゲネスＳｖ１／２ａ Ｆ６８５４、１３３コンティグ、Ｌ．モノサイトゲネスＳｖ４ｂ、Ｌ．モノサイトゲネスＳｖ４ａ、Ｌ．イノキュアＳｖ６ａ、Ｌ．ウェルシメリ（ｗｅｌｓｈｉｍｅｒｉ）Ｓｖ６ｂ、Ｌ．シーリゲリ（ｓｅｅｌｉｇｅｒｉ）Ｓｖ１／２ｂおよび／またはＬ．イバノビ（ｉｖａｎｏｖｉｉ）Ｓｖ５を含む群から選択される、リステリア菌により引き起こされるもの、あるいは上記の名称の好ましいリステリア菌に実質的に手段として関連するものである。

好ましい神経変性疾患は、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病および／または筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を含む群から選択される。

好ましい腫瘍疾患は、喉および首、鼻および耳、肺、縦隔、消化管、泌尿生殖器系、婦人科系、胸部、内分泌系、皮膚、骨および軟組織肉腫、中皮腫、黒色腫、中枢神経系の新生物、小児癌または腫瘍疾患、リンパ腫、白血病、腫瘍随伴症候群、既知の原発性腫瘍を有さない転移（ＣＵＰ症候群）、腹膜癌腫、免疫抑制により引き起こされる悪性腫瘍および／または転移性腫瘍の腫瘍疾患を含む群から選択される。

腫瘍は特に以下の癌を含み得る：胸部、前立腺および大腸の腺癌；気管支部分から生じる肺癌の全ての形態；骨髄癌；黒色腫；肝臓癌；神経芽細胞腫；乳頭腫；アプドーマ；分離腫；鰓腫；悪性カルチノイド症候群；カルチノイド心疾患；癌腫（例えばウォーカー（Ｗａｌｋｅｒ）癌、基底細胞癌、基底有棘細胞癌、ブラウン・ピアース癌、腺管癌、エールリッヒ腫瘍、インサイチュ癌腫、癌−２−癌腫、メルケル細胞癌、粘液癌、非小細胞気管支癌、燕麦細胞癌、乳頭状癌、スキルス癌、細気管支肺胞上皮癌、気管支癌、扁平上皮癌及び移行上皮癌）；組織球性機能障害；白血病（例えば、Ｂ細胞白血病、混合細胞白血病、ヌル細胞白血病、Ｔ細胞白血病、慢性Ｔ細胞白血病、ＨＴＬＶ−ＩＩ関連白血病、急性リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病、マスト細胞白血病および骨髄性白血病）；悪性組織球増殖症、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、孤立性形質細胞腫；細網内皮症、軟骨芽細胞腫；軟骨腫、軟骨肉腫；線維腫；線維肉腫；巨大細胞腫瘍；組織球腫；脂肪腫；脂肪肉腫；白血肉腫；中皮腫；粘液腫；粘液肉腫；骨腫；骨肉腫；ユーイング肉腫；滑膜腫；腺線維腫；腺リンパ腫；癌肉腫；脊索腫；頭蓋咽頭腫；未分化胚細胞腫；過誤腫；間葉；中腎腫；筋肉腫；エナメル上皮腫；セメント腫；歯牙腫；奇形腫；胸腺腫；絨毛芽腫；腺癌；腺腫；胆管腫；真珠腫；円柱腫；嚢胞腺癌；嚢胞腺腫；顆粒膜細胞腫瘍；半陰陽性卵巣腫瘍；汗腺腫；島細胞腫瘍；ライディッヒ細胞腫瘍；乳頭腫；セルトリ細胞腫瘍；Ｔｈｅｋａ細胞腫瘍；筋腫；平滑筋肉腫；筋芽；筋腫；筋肉腫；横紋筋腫；横紋筋肉腫；上衣腫；神経節；神経膠腫；髄芽腫；髄膜腫；神経鞘腫；神経芽細胞腫；神経上皮腫；神経線維腫；神経腫；傍神経節腫；非クロム親和性傍神経節腫；被角血管腫；好酸球増加を伴う血管リンパ様過形成；硬化血管腫；血管腫症；グロムス血管腫；血管内皮腫；血管腫；血管周囲細胞腫、血管肉腫；リンパ管腫、リンパ管筋腫、リンパ管肉腫；松果体腫；葉状嚢胞性肉腫；血管肉腫；リンパ管肉腫；粘液肉腫；卵巣癌；肉腫（例えば、ユーイング肉腫、実験的に、カポジ肉腫およびマスト細胞肉腫）；新生物（例えば、骨腫瘍、乳房の腫瘍、消化器系の新生物、大腸新生物、肝臓の腫瘍、膵腫瘍、下垂体腫瘍、精巣腫瘍、眼窩腫瘍、頭頸部や喉の新生物、神経系の新生物、聴覚臓器、骨盤、気道および尿生殖路の新生物）；神経線維腫症および子宮頸部扁平上皮異形成。

さらなる実施形態において、癌または腫瘍は、首および喉の領域の腫瘍、内部の鼻の腫瘍を含む鼻および耳の腫瘍、副鼻腔、咽頭、唇、口腔、咽頭、喉頭、下咽頭、耳、唾液腺および傍神経節腫の腫瘍、非小細胞気管支癌を含む肺の腫瘍、小細胞気管支癌、縦隔の腫瘍、食道、胃、膵臓、肝臓、胆嚢および胆嚢管、小腸、結腸および直腸癌および肛門癌を含む胃腸管の腫瘍、腎臓、尿管、膀胱、前立腺、尿道、ペニスおよび睾丸の腫瘍を含む泌尿生殖器の腫瘍、子宮頸部、膣、外陰部、子宮体部の腫瘍、悪性絨毛性疾患、卵巣癌、卵管の腫瘍（ｔｕｂａ ｆａｌｏｐｐｉｉ）を含む、婦人科腫瘍、腹腔の腫瘍、乳癌、甲状腺、副甲状腺、副腎皮質の腫瘍を含む内分泌器官の腫瘍、内分泌膵臓腫瘍、カルチノイド腫瘍およびカルチノイド症候群、多発性内分泌新生物、骨および軟部組織肉腫、中皮腫、皮膚腫瘍、皮膚黒色腫および眼内黒色腫を含む黒色腫、中枢神経系の腫瘍、網膜芽細胞腫を含む小児腫瘍、ウィルムス腫瘍、神経線維腫症、神経芽細胞腫、ユーイング肉腫腫瘍ファミリー、横紋筋肉腫、非ホジキンリンパ腫を含むリンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫を含む中枢神経系の原発性リンパ腫、急性白血病を含む白血病、慢性骨髄性およびリンパ性白血病、形質細胞腫瘍、骨髄異形成症候群、腫瘍随伴症候群、既知の原発腫瘍のない転移（ＣＵＰ症候群）、腹膜癌腫症、カポジ肉腫などのエイズ関連の悪性腫瘍を含む免疫抑制により誘導される悪性腫瘍、エイズ関連リンパ腫、中枢神経系のエイズ関連リンパ腫、エイズ関連ホジキン病およびエイズ関連肛門性器腫瘍、移植関連悪性腫瘍、脳転移、肺転移、肝転移、骨転移、胸膜転移および心膜転移を含む転移した腫瘍、ならびに悪性腹水を含む群から選択される。

さらなる好ましい実施形態において、癌または腫瘍は、乳癌、結腸癌、胃癌、膵臓癌、大腸癌および小腸癌を含む胃腸腫瘍、卵巣癌、子宮頸癌、肺癌、前立腺癌、腎細胞癌腫および／または肝転移の癌または腫瘍疾患を含む群から選択される。

前述の疾患を治療する場合、ゲル剤、粉末剤、錠剤、制御放出錠剤、プレミックス、エマルション、調合製剤、ドロップ剤、濃縮物、顆粒、シロップ剤、丸薬、ボーラス、カプセル剤、エアロゾル、噴霧剤および／または吸入剤として、本発明に係る化合物を含む薬剤を調製および／または投与することが特に好ましい。

好ましくは、本発明に係る化合物を含む薬剤は、０．１〜９９．５重量％、好ましくは０．５〜９５．０重量％、特に好ましくは２０．０〜８０．０重量％の濃度で製剤中に存在する。

この製剤は好ましくは、経口、皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内および／または局所的に投与される。

好ましくは、本発明に係る化合物を含む薬剤は、２４時間にわたって０．０５〜５００ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは５〜１００ｍｇ／ｋｇ体重の総量で投与される。

好ましくは、接触は、経口的、注射により、局所的、経膣的、直腸的および／または経鼻的になされる。

本発明はさらに、必要な場合、キットの内容物を組み合わせるための指示書、例えばパッケージ挿入物またはホームページなどのさらなる情報を示すインターネットアドレスと共に、本発明に係る化合物の少なくとも１つおよび／または本発明に係る薬剤を含むキットに関する。キットを扱うための情報は、例えば、上述の疾患、特に好ましい疾患のための治療スケジュールを含んでもよい。しかしながら、指示書はまた、上述の疾患の診断がなされる場合に、本発明に係る生成物が使用される方法の詳細を含んでもよい。本発明に係るキットはまた、基礎研究を実施するために使用されてもよい。

したがって、本発明はまた、神経変性疾患、細菌感染疾患または腫瘍疾患の予防および／または治療のためのキットの使用に関する。

本発明の配列
配列番号１：ＰｘｘＰｘｘＰ
配列番号２：ＰＰｘＰＰｘＰＰｘ
配列番号３：ＳＦＥＦＰＰＰＰＴＥＤＥＬ
配列番号４：ＦＰＰＰＰ
配列番号５：ＦＰＰＰＰＴ
配列番号６：ＳＦＥ
配列番号７：ＴＥＤＥＬ
配列番号８：ＰＰＰＰＴＥＤＥＬ

アルデヒド１０４の結晶構造。 ビシクル（ｂｉｃｙｃｌｅ）１１７の結晶構造。 ディプロリン成分８５の^１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（６００ＭＨｚ、ＭｅＯＨ−ｄ^４、ＲＴ） ＰＰＩＩ配座におけるディプロリンモチーフを有する８５の結晶構造およびＸの結晶構造の比較 ＥＶＨ１阻害剤の細胞取り込み。（Ａ）リガンドを有さない対照 ＥＶＨ１阻害剤の細胞取り込み。（Ｂ）＋ＮＢＤ−ＳＦＥＦＰＰＰＴＥＤＥＬ−ＮＨ_２ ＥＶＨ１阻害剤の細胞取り込み。（Ｃ）＋ＮＢＤ−ＳＦＥ−［２−Ｃｌ−Ｆ］−ｐ−ｘ−ＴＥＤＥＬ−ＮＨ_２。

本発明は、ディプロリン模倣物８５の合成を記載することにより以下にさらに詳細に示されるが、本発明はそれらに限定されるわけではない。

本発明は、結合パートナーとしてリガンドペプチドの天然のプロリンリッチ配列を置き換えるように高親和性でＥＶＨ１ドメインに結合できるはずである分子の研究により動機付けられた。ＶＡＳＰ−ＥＶＨ１ドメインとのリガンドペプチドの相互作用のための分子モデリング研究に基づいて、化合物８５を考案し、ＦＰＰＰＰコアモチーフの２つの隣接するプロリン位置に置き換えるために、それを試験ペプチド内に有望なモジュール（ジペプチド模倣物）として挿入できる。構造設計のガイドラインは、（１）幾何学的に固定した螺旋構造（三環式）；（２）天然に存在するプロリン−プロリンジペプチド（ＰＰＩＩ螺旋構造における）と比較して結合角度および距離の最適一致；（３）カルボニル基の形態の中心水素架橋受容体機能；ならびに（４）ペプチド内への計画された挿入のために秩序だって簡単な設計を想定するためのＦｍｏｃ−保護Ｎ末端および遊離Ｃ末端を有するアミノ酸様全構造であった。続いて、構造に関して、ＰＰＩＩヘリックスにおいて２つの連続したプロリンの限定した類似体を表している記載した分子８５はこれらの要件を満たす。Ｚ構成のオレフィン架橋を挿入することにより、プロリン環は、仮定された生物学的に活性な構造において安定化され、６個の中心環は、トランス−アミド結合の完全な固定を保証する。

十分な量で化合物を提供するために、実現可能な立体選択的合成経路を開発することが必要であった。ストラテジーとしての選択は、収束様式（６個の中心環の逆合成分解、スキーム２０を参照）で標的分子を１００および１０１型の２つのビニル−プロリン誘導体に戻すアプローチであった。まず、これらをオレフィンメタセシスにより三環を閉じる前にペプチド結合により互いに結合させることができる。６個の環を形成するための環閉鎖メタセシスは文献に記載されている。２つの異なって置換されたビニルプロリン誘導体１００および１０１は、次いで、各々、立体選択的に合成されなければならない。Ｌ−プロリンは、考えられる限りでは、両方の場合における開始物質として役立ち得る。
スキーム２０

スピロ−２−ビニル−プロリン１０７は、Ｎ−ｂｏｃ−保護基を有する１０１型の成分として示された。その合成は、ＧｍｅｉｎｅｒおよびＢｉｔｔｅｒｍａｎｎ（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２００６，７１，９７−１０２）により２００６年に公開された（スキーム３１）。

スキーム３１：ＧｍｅｉｎｅｒおよびＢｉｔｔｅｒｍａｎｎ（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２００６，７１，９７−１０２）による化合物１０７の合成。
第三者（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２００６，７１，９７−１０２）により２００６年に公開されているこの合成を、ほとんどの部分を変化させずに借用した。公開されたプロトコルは、主要な問題に遭遇せずに最初にマルチグラムスケールに従うことができる（スキーム４１）。

スキーム４１：アルデヒド４１の合成
クロラールによるＬ−プロリンの保護の結果、所望の生成物１０３を生じ、それを８２％の収率でジアステレオマーとして得た。次いでホルミル化し、それはまた、６６％の良好な収率で実施できる。純粋なジアステレオマーとしてアルデヒド１０４を得るために、とりわけ、投薬ポンプを使用してギ酸メチルを非常にゆっくり加えることが必要であった。アルデヒド１０４の正確な構成および絶対配置をｘ線結晶構造解析により確認した。

公開されたプロトコルに係る以下のウィッティヒ反応を再生可能な方法で、３８％の収率で所望の生成物１０５を得た（スキーム４２）。
スキーム４２：ウィッティヒ反応による１０５の合成
Ｎｙｓｔｅｄメチレン化を使用して、６７％の収率で所望のオレフィン１０５を得ることができた（スキーム４３）。

スキーム４３：オレフィン１０５を得るためのＮｙｓｔｅｄメチレン化
続いて、メチルエステル１０６への再保護反応を６１％の満足のいく収率で達成した。メチルエステルを開裂するために、より良いプロトコルを使用して、８６％の収率で遊離酸１０７を得た。

スキーム４４：スピロ−２−ビニル−プロリン１０７の合成
第２の成分、１００型のトランス−５−ビニル−プロリンエステルを合成するために、本発明者らは、本発明者の独自の研究室で開発されている合成を当てにした（スキーム４５）。

スキーム４５：トランス−５−ビニル−プロリン誘導体の合成
まず、定量的収率でＢｏｃ_２Ｏ、トリエチルアミンおよびＤＭＡＰ、ＣおよびＮ末端を使用して５０ｇのＬ−プロリン１０２を保護した。保護プロリン１０８の電気化学的酸化は、４８×５６ｍｍの電極面積および２４０ｍＡの一定の電流強度を用いて４６ｇ（１７０ｍｍｏｌ）のスケールで実施できる。酸化生成物の精製により、収率の多くの損失が生じ、このため、これをさらに直接反応させ、ニトリル１１０へのシアン化後まで精製を延期した。これは、１．１ｅｑのＴＭＳＣＮを滴下することによりＤＣＭ中のＴＭＳＯＴｆの１ｖｏｌ％溶液で実施し、２段階にわたって、８１％の収率でシアン化物１１０のシス−トランス−異性体混合物（ｄ．ｒ．：２．９：１、シス：トランス）を得た。次いで水素化後、ピリジン、酢酸および水（２：１：１）の混合物中のラニーニッケルを用いて水素雰囲気下で８０℃にて１８ｇのスケールで行い、５１％の収率でアルデヒド１１１を得た。ＮａＨ_２ＰＯ_２の代わりに水素雰囲気の使用は公知の方法の明らかな改良を表す。塩基としてＫＨＭＤＳを使用している間、ウィッティヒ反応により、８８％の収率で所望の生成物１１２が生じた（ｄ．ｒ．：１．７：１、シス：トランス）。ＤＣＭ中のＴＭＳＯＴｆを用いた脱保護およびその後のカラムクロマトグラフィーによるジアステレオマーの分離の結果、３３％の収率で必要とされるトランス構成プロリン１１３、および４９％の収率でシス−エピマー１１４（示さず）を生じた。

このように得られた物質を用いて、三環式ディプロリン模倣物のさらなる合成を調べた（ペプチド結合およびその後の環閉鎖メタセシス）。２つのビニル基（特にスピロ環成分１０７）によりもたらされる立体障害にもかかわらず、８５℃にてＮＭＰ中でＨＡＴＵを使用してペプチド結合を首尾良く結合することが可能であった。その中のカルボン酸１０７をＨＡＴＵを用いて予め活性化させ、その後、アミン１１３およびジイソプロピルエチルアミンを塩基として添加した。結合生成物の識別は、回転異性体混合物の存在にもかかわらず、^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルにおいてにおいて確認できた。

スキーム４６：ＨＡＴＵを使用したビニル−プロリン１１３および１０７のペプチド結合

スキーム５３：三環１７に到達するための環閉鎖メタセシス
環閉鎖メタセシスにより三環１１７を調製するために、グラブス触媒、生成ＩＩ（３０ｍｏｌ％）をジペプチド１１５に最初に加え（スキーム５３）、その物質をマイクロ波中で、７時間５０℃（３００Ｗ）で加熱した。所望の生成物１１７を５４％の収率で得た。さらに、２２％の遊離体１１５を再び単離できる。環閉鎖メタセシスの成功は、オレフィン信号の変化により^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルにおいて明確に実証され得る。さらに、三環１１７の構造および構成はｘ線回折により実証され得る。

固相ペプチド合成に関連して有用な合成した三環１１７を与えるために、両方の保護基は、最後に開裂されなければならず、アミン機能がＦｍｏｃ保護基に提供されなければならなかった。これは、穏やかな塩基性条件下で開裂され得る任意の実際的意義のＮ型保護基のみであり、その目的のために、とりわけ、ピペリジン、モルホリンなどの第二級アミンが典型的に使用される。このように、さらに塩を生成せずに固相合成において非保護アミノ機能を生成することができる。高い塩基不安定性は有機合成におけるＦｍｏｃ基の使用を含み、それにより、後の段階で保護基を変化させることを必要とする。

スキーム５４：標的構造８５に対するＦｍｏｃ保護
ジクロロメタン中の過剰なトリフルオロ酢酸（９９％）を、酸によるＢｏｃ保護基およびｔｅｒｔ−ブチルエステルの結合開裂のために１１５に加えた。次いでその物質を室温にて撹拌した（スキーム５４）。続いて、ショッテン・バウマン条件下で、残渣をＦｍｏｃ保護最終産物８５に移した。前記産物は顕著な極性を示したが、それにも関わらず、ｐＨ約１で水相からジクロロメタンで抽出され得、続いて、シリカゲル上でのカラムクロマトグラフィーにより精製され得る。非結晶質の弱い白色の固体物質（８５％）として８５を得、そのＮＭＲスペクトルは予想値と一致した（６００ＭＨｚ ^１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（ＭｅＯＨ−ｄ^４）、６０：４０回転異性体混合物について図１５を参照のこと）。

ＰＰＩＩ構造におけるディプロリン模倣物としての本発明に係る物質
８５の結晶構造と、ＰＰＩＩ構造におけるディプロリンモチーフおよびＸ（ここで、Ｘは既知のＰＰＩＩ−模倣アミノ酸を示す）の結晶構造との比較を図４に示す（図４）。

全ての３つの構造は、Ｒ１およびＲ２の位置ならびに中間カルボニル基に関して同一であることが明確に見られ得る。さらに、ピロリジン環の位置は、プロリンパッカーを考慮してディプロリンモチーフのものと一致する。しかしながら、本発明に係る化合物は、実質的に、以前に記載されているものと比較してビニリデン架橋の位置が異なる。この特性はタンパク質表面上の８５型の驚くべき新規結合特性のための主な理由である。

生物学的結果
今までＥＶＨ１ドメインについて記載された実験は存在せず、以下にまとめて示され得る複数の重要な発見を導いたので、これらの結果は特に注目すべきであり、したがって、以下のさらなる研究についての基礎を与える。
１）固相ペプチド合成の標準的なカップリング条件（ＤＩＣ／ＨＯＢｔ）下で異なる試験ペプチド内に合成的に調製した三環８５の挿入を問題なく達成した。
２）ＥＶＨ１受容体にＰＰＩＩヘリックスを結合する場合の反応構造の予測は、リガンドペプチドＩの十分な結合親和性ならびに／または十分に一致した三環８５の生物学的に必要とされる構造および実際の構造により確認される。
３）リガンドの局所的な構造の予めの固定により予想される有益なエントロピー効果は、天然のペプチド配列と比較して見出される高い結合親和性に基づいてそれ自体で確認するようである。他方で、幾何学的固定はまた、リガンドおよびドメインタンパク質の収束、それによる結合形成を防がない。

初期の生物学的結果および見解
ＥＶＨ１ドメインに対する結合
例として合成化合物８５を用いて、リガンドペプチドを、部分的または完全に置換したプロリン配列により合成し、次いでＥＶＨ１ドメイン（ｐ＝成分８５）とのそれらの相互作用について試験した。模倣物８５の挿入に起因して、ドメインに対するリガンドペプチドの結合親和性を増加できたことが見出された。全てのプロリンを相互接続した８５の成分およびＰＰＩＩ−模倣化合物８６と置き換えた場合、その結果は、天然ペプチドのものと比較してかなり向上した親和性を有するリガンドペプチドである。
８６：
８５：

これを以下の表１にまとめ、それは、内在する天然ペプチドリガンドと同様にリガンドペプチドの結合親和性のリストである。

結合親和性は、蛍光滴定および等温熱量測定により決定された（ｐ＝成分８５、ここで、ｘは、構造８６（現在、Ｆｍｏｃ保護アミノ酸として）に係る既知のＰＰＩＩ−模倣アミノ酸を示し、「２−Ｃｌ−Ｆ」は２−Ｃｌ−フェニルアラニンを表す）。

さらなる実験は、模倣物８５を挿入することがドメイン（ＶＡＳＰ−ＥＶＨ１）に対するリガンドペプチドの結合親和性を向上させることを実証する：
Ａｃ−ＳＦＥ−［２Ｃｌ−Ｆ］−ＰＰ−ｘ−ＴＥＤＥＬ−ＮＨ_２ Ｋｄ＝０．７７ｕＭ
Ａｃ−ＳＦＥ−［２−Ｃｌ−Ｆ］−ｘ−ｘ−ＴＥＤＥＬ−ＮＨ２ Ｋｄ＝０．８６ｕＭ
Ａｃ−ＳＦＥ−［２−Ｃｌ−Ｆ］−ｐ−ｘ−ＴＥＤＥＬ−ＮＨ２ Ｋｄ＝０．３７ｕＭ

さらに、本発明に係る化合物との親和性の観察された増加は最初の時間に完全に天然アミノ酸を使用することを可能にし、一方、ＥＶＨ１ドメインに結合する能力をさらに保存する：
Ａｃ−［２−Ｃｌ−Ｆ］−ｐ−ｘ−ＯＨ Ｋｄ＝３ｕＭ

比較すると、対応して短縮されたＡｃｔＡ由来ペプチドＡｃ−ＦＰＰＰＰ−ＯＨに関して、５００ｕＭまでの測定した範囲内にＫｄ値を実証することはできなかった。

ＥＶＨ１阻害剤の細胞取り込み
本発明に係る化合物を組み込むことにより、タンパク質間の相互作用に対する阻害剤としてのそれらの活性についての必須条件としてＥＶＨ１阻害剤の細胞内への変化した取り込みが生じた。蛍光標識したＡｃｔＡ由来ペプチドＮＢＤ−ＳＦＥＦＰＰＰＴＥＤＥＬ−ＮＨ２と対照的に、対応するペプチドＮＢＤ−ＳＦＥ−［２−Ｃｌ−Ｆ］−ｐｘ−ＴＥＤＥＬ−ＮＨ_２が、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞において明確に高い濃度で検出され得ることが実証され得る（図５）。

標的構造８５の合成および生物学的用途に関する一般的な概念は、この有望な基礎に基づいて首尾良く実施され得るので、多くのさらなる可能性が、ここで、それらが小さな合成分子を利用するという標的様式でポリプロリンを含有するリガンドに結合する関連タンパク質ドメインを扱うことについて想定される。種々の既存の分子構造とは別に、他のプロリン−模倣物骨格との組み合わせを提供し、連続して８５を並べることによりポリプロリンモチーフの完全な置換を実行するように、他のドメイン（とりわけ、ＭＥＮＡ−、ＥＮＡ−およびＥＶＬ−ＥＶＨ１、ＷＷ、ＳＨ３）についてのリガンドの合成を含むように概念を拡張することもまた想定される。

実験部分
ガラス機器は、プロパンガスバーナーで加熱した０．２〜２ｍｂａｒの最終圧力で油ポンプ真空において真空／アルゴン二重コック装置で３回排気し、続いてアルゴンで通気した。使い捨てシリンジ、カニューレ、移送カニューレを保存し、アセトンから湿らせ、８０℃にて乾燥キャビネット内に入れた。１０１３〜１０ｍｂａｒの圧力および４０℃の水浴温度にて、Ｂｕｃｈｉ社による真空回転エバポレーター中で溶媒を除去した。

ＴＨＦ、トルエンおよびジエチルエーテルを、指示薬としてベンゾフェノン、五酸化リン上のクロロホルムおよび水素化カルシウム上のジクロロメタンを用いて、アルゴン下およびナトリウム上で数時間、還流し、次いで蒸留した。メタノールを、マグネシウムおよびヨウ素上で還流し、次いで蒸留した。ＴＨＦ、メチルＴＨＦ、トルエン、ジエチルエーテルおよびジクロロメタンを使用前に新たに蒸留した。脱水していない溶媒もまた、使用前に蒸留した。残りの試薬は、ＡＢＣＲ社、Ａｃｒｏｓ社、Ａｌｄｒｉｃｈ社、Ｃｈｅｍｅｔａｌｌ社、Ｆｌｕｋａ社、Ｍｅｒｃｋ社、Ｌａｎｃａｓｔｅｒ社、Ｒｉｅｄｅｌ−ｄｅ Ｈａｅｎ社およびＳｔｒｅｍ社から購入し、さらに精製せずに使用した。

カラムクロマトグラフィーによる分離プロセスを、シリカゲル６０（２３０〜４００メッシュ、Ｍｅｒｃｋ）または酸化アルミニウム（５０〜２００μｍ、Ｂｒｏｃｋｍａｎｎ Ｉ、Ａｃｒｏｓ）上で行った。メタノール、ジクロロメタン、酢酸エチルおよびシクロヘキサンを使用前に蒸留した。移動相を体積分率で示す。

Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ社によるＦＴ−ＩＲ Ｐａｒａｇｏｎ１０００機器で室温にてＩＲスペクトルを記録し、ＺｎＳｅ結晶上でＡＴＲ操作し、その物質を溶液により適用した。吸収は、ｃｍ−１にて波数^〜νで示し、ｓ（強）、ｍ（中間）、ｗ（弱）として特徴付ける。必要な場合、ｂｒ（広い信号）をこれに加える。

予備電気分解プロセスのために使用されるメタノールを使用前に蒸留した。Ｆｉｒｍ Ｖｏｌｔｃｒａｆｔによる線形実験電力機器ＶＬＰ−１６０２ＰｒｏおよびＤｉｄａｃ−Ｔｅｃ社による４８×２８ｍｍ黒鉛板電極が電圧源として提供される。

Ｂｕｃｈｉ社によるＭｅｌｔｉｎｇ ＰｏｉｎｔＢ−５４５およびＷａｇｎｅｒ ａｎｄ Ｍｕｙｎｚ社によるＰｏｌｙＴｈｅｒｍ Ａマイクロ加熱ベンチシステムを用いて融点を決定した。

^１Ｈ−および１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを、Ｂｒｕｋｅｒ社によるＡｖａｎｃｅ ＤＰＸ３００、ＡＣ３００、ＡＶ４００、Ａｖａｎｃｅ ＤＰＸ５００およびＡＶ６００機器で室温にて記録した。化学シフトは、使用される溶媒の信号（^１３Ｃ−ＮＭＲ）に対するおよび／またはこれらの溶媒の重水素化されていないトレース（^１Ｈ−ＮＭＲ）に対するｐｐｍとして示す。（ＣＨＣｌ_３）＝７．２４ｐｐｍ，（ＣＤＣｌ_３）＝７７．００ｐｐｍ，（ＣＤ_２ＨＯＤ）＝３．３１ｐｐｍ，（ＭｅＯＤ）＝４９．０５ｐｐｍ。

^１Ｈ−スペクトルにおいて、多重度を以下のように示す：
ｓ＝一重項
ｄ＝二重項
ｔ＝三重項
ｑ＝四重項
ｓｅｐｔ＝七重項
ｍ＝多重項

^１３Ｃ核磁気共鳴スペクトルはＡＰＴとして記録し、以下のように示す：
ｓ＝四級Ｃ原子
ｄ＝三級Ｃ原子
ｔ＝二級Ｃ原子
ｑ＝一級Ｃ原子

結合定数ＪはＨｅｒｔｚで示す。ＮＭＲ信号の割り当ては、Ｈ、Ｈ−ＣＯＳＹ、ＴＯＣＳＹ、ＨＭＢＣおよびＨＭＱＣ−スペクトルにより実証された。割り当てのために選択された炭素原子の番号付けはそれぞれの数字から誘導でき、ＩＵＰＡＣ命名と必ずしも一致しない。

ＭｅｒｃｋフィルムＨＸ６１６６０６（２０×２０ｍｍ、０．２ｍｍ層厚）でＤＣを実施した。全ての溶離混合物は体積部分で示す。ＵＶランプ、過マンガン酸カリウム溶液またはセリウム（ＩＶ）表面溶液により任意の染色を行い、その後、熱風ドライやで加熱した。

低解像度（ＬＲ）ＭＳスペクトルを、Ｏｐｔｉｍａ５−キャピラリーカラムを備えたＦｉｎｎｉｇａｎ ＭＡＴ Ｉｎｃｏｓ５０ Ｇａｌａｘｙ Ｓｙｓｔｅｍ（ＧＣ／ＤＩＰ−ＭＳ）およびキャリアガスとして水素、ならびにＡｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社による組み合わせたＨＰ６８９０／ＭＳＤ５９７３（ＧＣ−ＭＳ）システムおよびＨＰ５キャピラリーカラムで記録した。サンプルのイオン化を７０ｅＶにてＥＩにより行った。画分はｍ／ｚで示し、信号の強度は１００％で最も強いピークを示す。

高解像度（ＨＲ）ＭＳスペクトルをＤＩＰ法によりＦｉｎｎｉｇａｎ ＭＡＴ ＨＳＱ−３０で測定した。イオン化をＥＩまたはＥＳＩ法に従って７０ｅＶにて行った。

回転値は、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ社による偏光計３４３で１０ｃｍの長さのキュベット内で測定した。濃度はｇ（１００ｍｌ）^−１で示す。

Ｎｏｎｉｕｓ Ｋａｐｐａ ＣＣＤ回折計でＸ線結晶構造解析を実施した。

（３Ｒ，７ａＳ）−３−（トリクロロメチル）−テトラヒドロピロロ［１，２−ｃ］オキサゾール−１（３Ｈ）−オン（１０３）
２２ｍｌ（２２５ｍｍｏｌ、２．５ｅｑ）クロラールを、室温にて４５ｍｌのＭｅＣＮ中の１０．４７０ｇ（９０．９４ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）Ｌ−プロリン（１０２）の懸濁液に加え、得られた溶液を室温にて１９．５時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、残留物を溶解し、１００ｍｌのＤＣＭ中で濾過した。濾液を濃縮し、このプロセスを３回以上繰り返した。１８．１４１ｇ（７４．２０ｍｍｏｌ、８２％）の生成物１０３を白色固体として得た。
Ｍ（Ｃ_７Ｈ_８Ｃｌ_３ＮＯ_２）：２４４．５０ｇｍｏｌ^−１。
［α］^２０ _Ｄ：３４．３°（ｃ＝０．９７０、ベンゼン）．
融点：１０９．６°．
^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝１．７８−１．６４（ｍ，１Ｈ，Ｈ４’），１．９６−１．８５（ｍ，１Ｈ，Ｈ４），２．１３−２．０２（ｍ，１Ｈ，Ｈ３’），２．２６−２．１３（ｍ，１Ｈ，Ｈ３），３．１５−３．０６（ｍ，１Ｈ，Ｈ５’），３．３９（ｄｄｄ，Ｊ１０．９，７．８，６．０，１Ｈ，Ｈ５），４．０９（ｄｄ，Ｊ８．９，４．６，１Ｈ，Ｈ２），５．１４（ｓ，１Ｈ，Ｈ７）．
^１３Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３：δ＝２５．３２（ｔ，Ｃ４），２９．９１（ｔ，Ｃ３），５７．８７（ｔ，Ｃ５），６２．３８（ｔ，Ｃ２），１００．６２（ｓ，Ｃ８），１０３．６０（ｄ，Ｃ７），１７５．４３（ｓ，Ｃ６）．
ＩＲ（ＦＴ−ＡＴＲ）：^〜ν＝２９５８（ｍ），２９２０（ｗ），２８９３（ｗ），２８６６（ｗ），１７８４（ｓ），１７２５（ｍ），１４４９（ｗ），１３７３（ｗ），１３５９（ｗ），１３２２（ｍ），１２８３（ｍ），１２７０（ｍ），１２４３（ｍ），１１７４（ｓ），１１０７（ｓ），１０８３（ｍ），１０４３（ｗ），１００１（ｓ），９５８（ｓ），９１３（ｗ），８９８（ｍ），８３８（ｓ），８１３（ｓ），７９０（ｓ），７４４（ｓ）．

（３Ｒ，７ａＲ）−１−オキソ−３−（トリクロロメチル）−ヘキサヒドロピロロ［１，２−ｃ］−オキサゾール−７ａカルバルデヒド（１０４）
約３．５ｇのＬｉＣｌ ｂｅｉを、−７８°で保護プロリン１０３の１４．０９２ｇ（５７．６４ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）の溶液に適切に加えた後、ＴＨＦ中の１３８ｍｌ（８４．４６ｍｍｏｌ、１．５ｅｑ、０．６２５Ｍ）ＬＤＡを、６０分にわたって滴下した。その溶液をこの温度で３０分間撹拌し、次いで１５ｍｌ（２４１．８５ｍｍｏｌ、４．０ｅｑ）ＨＣＯＯＭｅを１２０分にわたって非常にゆっくり滴下した。その溶液を−７８℃にてさらに３０分間撹拌し、次いで１時間にわたって−４０℃の温度にした。次いで水中の１２０ｍｌの１０％クエン酸溶液を加え、物質をそれぞれ１２０ｍｌのＭＴＢＥで３回抽出し、合わせた有機相を５００ｍｌの飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、溶媒を減圧下で除去した。溶出液としてＥｔＯＡｃ／ＣｙＨｅｘ１：４を用いたシリカゲル上のクロマトグラフィーにより、１０．３８８ｇ（３８．１２ｍｍｏｌ、６６％）の生成物１０４を白色固体として得た。
Ｍ（Ｃ_８Ｈ_８Ｃｌ_３ＮＯ_３）：２７２．５１ｇｍｏｌ^−１．
ＤＣ：Ｒ_ｆ＝０．１３（ＥｔＯＡｃ／ＣｙＨｅｘ１：４）．
［α］^２５ _Ｄ：２９．９°（ｃ＝０．５２０，ＣＨＣｌ_３）．
融点：８４．８°Ｃ．
^１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝２．００−１．７７（ｍ，２Ｈ，Ｈ４），２．４４−２．２０（ｍ，２Ｈ，Ｈ３），３．３１（ｄｔ，Ｊ１１．６，６．０，１Ｈ，Ｈ５’），３．５２（ｄｄｄ，Ｊ１１．４，７．７，６．３，１Ｈ，Ｈ５），５．１６（ｓ，１Ｈ，Ｈ７），９．５９（ｓ，１Ｈ，Ｈ９）．

^１３Ｃ−ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３：δ＝２５．４７（ｔ，Ｃ４），３３．８４（ｔ，Ｃ３），５８．９４（ｔ，Ｃ５），７８．０１（ｓ，Ｃ２），９９．９２（ｓ，Ｃ８），１０２．３６（ｄ，Ｃ７），１６９．２７（ｓ，Ｃ６），１９３．４３（ｄ，Ｃ９）．
ＧＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝２７２（［Ｍ］^＋，１），２４２（［Ｍ］^＋−ＣＨＯ，２０），１１７（２４），９６（５９），６８（３５），４１（１００）．
ＩＲ（ＦＴ−ＡＴＲ）：^〜ν＝３０１７（ｗ），２９１４（ｗ），２８４６（ｗ），１８０７（ｍ），１７２９（ｗ），１４５６（ｗ），１３５３（ｗ），１３１９（ｗ），１２７２（ｗ），１２１３（ｍ），１１９０（ｗ），１１３４３（ｗ），１１０７（ｗ），１０５８（ｗ），１０２０（ｗ），９９３（ｗ），９７２（ｗ），９２９（ｗ），８３９（ｗ），８１６（ｗ），７４７（ｓ），６６７（ｍ）．

（３Ｒ，７ａＲ）−３−（トリクロロメチル）−７ａ−ビニルテトラヒドロピロロ［１，２−ｃ］オキサゾール−１−（３Ｈ）−オン（１０５）
まず、５０ｍｌＴＨＦ中の６ｍｌ（４２．２３ｍｍｏｌ、２．５ｅｑ）ＢＦ_３Ｅｔ_２Ｏを、０℃にて２０分にわたって１３０ｍｌのＴＨＦ中の９７ｇ（４２．２３ｍｍｏｌ、２．５ｅｑ）Ｎｙｓｔｅｄ試薬（ＴＨＦ中５０％、Ａｌｄｒｉｃｈ）の懸濁液に滴下し、次いで３０ｍｌＴＨＦ中の４．６０３ｇ（１６．８９ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）の遊離体１０４をこの物質に滴下した。反応混合物を室温にて２時間撹拌し、２００ｍｌの１ＮのＨＣｌ溶液の添加後、それぞれ２００ｍｌのｎ−ヘキサンで３回抽出した。合わせた有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、溶媒を減圧下で除去し、溶出液としてＥｔＯＡｃ／ＣｙＨｅｙ１：１０を用いたシリカゲル上でのクロマトグラフィー後に、３．０５１ｇ（１１．２８ｍｍｏｌ、６７％）の生成物１０５を無色の油として得た。
Ｍ（Ｃ９Ｈ１０Ｃｌ３ＮＯ２）：２７０．５４ｇｍｏｌ−１．
ＤＣ：Ｒｆ＝０．１７（ＥｔＯＡｃ／ＣｙＨｅｘ１：１０）．
［α］２２Ｄ：４９．９°（ｃ＝０．６６０，ＣＨＣｌ３）．
融点：８４．８°Ｃ．
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ＝２．００−１．７７（ｍ，２Ｈ，Ｈ４），２．４４−２．２０（ｍ，２Ｈ，Ｈ３），３．３１（ｄｔ，Ｊ１１．６，６．０，１Ｈ，Ｈ５’），３．５２（ｄｄｄ，Ｊ１１．４，７．７，６．３，１Ｈ，Ｈ５），５．１６（ｓ，１Ｈ，Ｈ７），９．５９（ｓ，１Ｈ，Ｈ９）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３：δ＝２５．４７（ｔ，Ｃ４），３３．８４（ｔ，Ｃ３），５８．９４（ｔ，Ｃ５），７８．０１（ｓ，Ｃ２），９９．９２（ｓ，Ｃ８），１０２．３６（ｄ，Ｃ７），１６９．２７（ｓ，Ｃ６），１９３．４３（ｄ，Ｃ９）．
ＧＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝２７２（［Ｍ］＋，１），２４２（［Ｍ］＋−ＣＨＯ，２０），１１７（２４），９６（５９），６８（３５），４１（１００）．
ＩＲ（ＦＴ−ＡＴＲ）：^〜ν＝３０１７（ｗ），２９１４（ｗ），２８４６（ｗ），１８０７（ｍ），１７２９（ｗ），１４５６（ｗ），１３５３（ｗ），１３１９（ｗ），１２７２（ｗ），１２１３（ｍ），１１９０（ｗ），１１３４３（ｗ），１１０７（ｗ），１０５８（ｗ），１０２０（ｗ），９９３（ｗ），９７２（ｗ），９２９（ｗ），８３９（ｗ），８１６（ｗ），７４７（ｓ），６６７（ｍ）．

（Ｒ）−１−ｔｅｒｔ−ブチル−２−メチル−２−ビニルピロリジン−１，２−ジカルボキシレート（１０６）
まず、１５ｍｌ（２１２．２４ｍｍｏｌ、１０ｅｑ）ＡｃＣｌを０℃にて６０ｍｌのＭｅＯＨに加え、続いて、２０ｍｌのＭｅＯＨ中の５．７６３ｇ（２１．３０ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）の遊離体１０５の溶液を加えた。その溶液を室温にて７日間撹拌し、その後、溶媒を減圧下で除去し、残渣を２０ｍｌのＭｅＯＨ中に取り、再び減圧下で溶媒を除去した。次いで残渣を６０ｍｌのＤＣＭ中に取り、１７．２０ｍｌ（１０６．５０ｍｍｏｌ、５．０ｅｑ）ＤＩＰＥＡを加え、次いで３５ｍｌ中の１７．７ｍｌ（８２．７２ｍｍｏｌ、３．９ｅｑ）Ｂｏｃ_２Ｏの溶液を滴下した。その物質を室温にて２．５日間撹拌し、溶媒を減圧下で除去し、残渣を１００ｍｌのＭＴＢＥ中に取った。エーテル相を１００ｍｌの各々の１ＮのＨＣｌ溶液、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液および飽和ＮａＣｌ溶液で連続して洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、次いで溶媒を減圧下で除去し、溶出液としてＥｔＯＡｃ／ＣｙＨｅｘ１：６を用いたシリカゲル上でのクロマトグラフィー後に、３．６５４ｇ（１４．３１ｍｍｏｌ、６７％）の保護ビニルプロリン１０６を無色の油として得た。
Ｍ（Ｃ_１３Ｈ_２１ＮＯ_４）：２５５．３１ｇｍｏｌ^−１．
ＤＣ：Ｒ_ｆ＝０．２０（ＥｔＯＡｃ／ＣｙＨｅｘ１：４）．
［α］^２２ _Ｄ：６２．５°（ｃ＝０．４５５，ＣＨＣｌ_３）．
^１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝１．３８（Ψ−ｄ，Ｊ２８．５（Ψ），９Ｈ，Ｈ１０），１．９０−１．７４（ｍ，２Ｈ，Ｈ４），２．０３−１．９１（ｍ，１Ｈ，Ｈ３’），２．２５−２．０８（ｍ，１Ｈ，Ｈ３），３．６７−３．４６（ｍ，２Ｈ，Ｈ５），３．７１（Ψ−ｄ，Ｊ１．７（Ψ），３Ｈ，Ｈ７），５．０２（Ψ−ｄｄ，Ｊ１７．０，４．６（Ψ），１Ｈ，Ｈ１２’），５．１３（Ψ−ｄｄ，Ｊ１０．５，４．２（Ψ），１Ｈ，Ｈ１２），６．３０（Ψ−ｄｄｄ，Ｊ１７．２，１０．５，３．８（Ψ），１Ｈ）．
^１３Ｃ−ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３：δ＝２２．７６／２１．８７（ｔ，Ｃ４），２８．３８／２８．１８（ｑ，Ｃ１０），３９．１９／３７．９３（ｔ，Ｃ３），４７．９９／４７．８２（ｔ，Ｃ５），５２．３９／５２．２０（ｑ，Ｃ７），６９．４５／６９．３０（ｓ，Ｃ２），７９．９７／７９．７２（ｓ，Ｃ９），１１３．０８／１１２．９６（ｔ，Ｃ１２），１３７．１５／１３６．３９（ｄ，Ｃ１１），１５３．５５／１５３．４４（ｓ，Ｃ８），１７３．７２（ｓ，Ｃ６）．
ＧＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝１９６（［Ｍ］^＋−Ｃ_２Ｈ_３Ｏ_２，１３），１４０（７５），９６（６３），５６（１００）．
ＩＲ（ＦＴ−ＡＴＲ）：^〜ν＝３０８５（ｗ），２９７４（ｍ），２８７６（ｗ），１７４２（ｓ），１６９６（ｓ），１６４１（ｗ），１４７６（ｗ），１４５３（ｗ），１４３２（ｗ），１３８７（ｓ），１３６４（ｓ），１２８９（ｗ），１２５８（ｓ），１２１４（ｍ），１１６５（ｓ），１１２２（ｓ），１０７１（ｍ），１０２１（ｗ），９８９（ｗ），９５９（ｗ），９３３（ｗ），９２１（ｗ），８８１（ｗ），８５７（ｗ），７８４（ｗ），７７０（ｗ），７４１（ｗ），６６３（ｗ）．
ＨＲ−ＭＳ：（ＥＳＩ，Ｃ_１３Ｈ_２１ＮＮａＯ_４）：２７８．１３７±０．００３ｕ（２７８．１３６８ｕ）．

（Ｒ）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−２−ビニルピロリジン−２−カルボン酸（１０７）
３．４ｍｌ（６．７２ｍｍｏｌ、２．０ｅｑ、２Ｎ）ＬｉＯＨ水溶液、３．４ｍｌのＭｅＯＨおよび１０．２ｍｌのＴＨＦ（１：１：３）中の８５８ｍｇ（３．３６ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）の遊離体１０６の溶液を５０℃にて５時間撹拌した。ｐＨ値を調べ（ｐＨ＝１０）、次いで反応混合物をＭＴＢＥで２回洗浄し、水相を０℃にて１ＮのＨＣｌ溶液を加えることによりｐＨ＝１に調整した。次いでその物質をＤＣＭで３回抽出し、合わせたＤＣＭ相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、溶媒を減圧下で除去した。７００ｍｇ（２．９０ｍｍｏｌ、８６％）の生成物１０７を白色固体として得た。
Ｍ（Ｃ_１２Ｈ_１９ＮＯ_４）：２４１．２８ｇｍｏｌ^−１．
［α］^２３ _Ｄ：−２５．８°（ｃ＝０．４９０，ＣＨＣｌ_３）．
融点：１３４．４°Ｃ．
^１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝１．３４（Ψ−ｄ，Ｊ２９．３（Ψ），９Ｈ，Ｈ９），２．０４−１．６８（ｍ，３Ｈ，Ｈ４，Ｈ３’），２．４２−２．１３（ｍ，１Ｈ，Ｈ３），３．６６−３．３２（ｍ，２Ｈ，Ｈ５），５．２０−４．８７（ｍ，２Ｈ，Ｈ１１），６．２９−６．００（ｍ，１Ｈ，Ｈ１０），１０．２２（ｓ，１Ｈ，ＣＯＯＨ）．
^１３Ｃ−ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３：δ＝２１．７１／２２．５６（ｔ，Ｃ４），２７．９３／２８．１９（ｑ，Ｃ９），３７．８２／３９．１６（ｔ，Ｃ３），４７．６８／４８．２６（ｔ，Ｃ５），６９．１８／７０．１５（ｓ，Ｃ２），８０．５１／８０．８１（ｓ，Ｃ８），１１３．０２／１１４．０２（ｔ，Ｃ１１），１３６．１５／１３６．４８（ｄ，Ｃ１０），１５３．５３／１５４．８４（ｓ，Ｃ７），１７５．９０／１７８．０８（ｓ，Ｃ６）．
ＩＲ（ＦＴ−ＡＴＲ）：^〜ν＝２９６８（ｍ，ｂｒ），２８７５（ｍ），２６２０（ｗ），１７２７（ｓ），１６９０（ｗ），１６３４（ｓ），１５５０（ｗ），１４７５（ｍ），１４４９（ｍ），１４１８（ｓ），１３９３（ｓ），１３６６（ｓ），１３４９（ｍ），１２４８（ｓ），１２１４（ｗ），１１５８（ｓ），１１２２（ｍ），１０７８（ｍ），１０１３（ｗ），９９６（ｗ），９８２（ｍ），９４２（ｍ），８８４（ｍ），８５２（ｓ），７７４（ｓ），７５５（ｗ），７１９（ｓ）．
ＨＲ−ＭＳ：（ＥＳＩ，Ｃ_１２Ｈ_１９ＮＮａＯ_４）：２６４．１２１±０．００３ｕ（２６４．１２１２ｕ）．

（Ｓ）−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−ピロリジン−１，２−ジカルボキシレート（１０８）
５２ｍｌ（２５１ｍｍｏｌ、２．７ｅｑ）ｂｏｃ_２Ｏを、１８０ｍｌのｔＢｕＯＨおよび３．７０ｍｌ（２６．３２ｍｍｏｌ、０．３ｅｑ）ＮＥｔ_３中の１０．１ｇ（８７．７３ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）Ｌ−プロリン（１０２）に加え、その物質を、溶液が透明になるまで室温にて４時間撹拌した。次いで３．２９５ｇ（２６．３２ｍｍｏｌ、０．３ｅｑ）ＤＭＡＰを加え、溶液を、凝固の初期の兆候を示すまで、氷浴中で冷却した。その溶液を室温にて１７時間撹拌し、激しく撹拌しながら、ガスの生成がもはや観察されなくなるまで４５℃で１．５時間にわたって加熱した。４５０ｍｌのＭＴＢＥを調製物に加え、物質を３００ｍｌの各々の１ＮのＨＣｌ溶液、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液および飽和ＮａＣｌ溶液で連続して洗浄し、有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、溶媒を減圧下で除去した。２３．８ｇ（８７．７０ｍｍｏｌ、９９％）の保護プロリン１０８を無色油として得た。一部の生成物を、溶出液としてＥｔＯＡｃ／ＣｙＨｅｘ（１：９）を用いてシリカゲル上でのクロマトグラフィーによる分析目的のために精製した。
Ｍ（Ｃ_１４Ｈ_２５ＮＯ_４）：２７１．３５ｇｍｏｌ^−１．
ＤＣ：Ｒ_ｆ＝０．１２（ＥｔＯＡｃ／ＣｙＨｅｘ１：９）．
［α］^２０ _Ｄ：−５３．１°（ｃ＝０．６７０，ＣＨＣｌ_３）．
^１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝１．５１−１．２５（ｍ，１８Ｈ，Ｈ８，Ｈ１１），１．９４−１．６７（ｍ，３Ｈ，Ｈ４，Ｈ３），２．２４−１．９４（ｍ，１Ｈ，Ｈ３’），３．５４−３．１７（ｍ，２Ｈ，Ｈ５），４．１０（Ψ−ｄｄｄ，Ｊ２５．５（Ψ），８．６，２．９，１Ｈ，Ｈ２）．
^１３Ｃ−ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３：δ＝２４．０５／２３．２６（ｔ，Ｃ４），２８．２１／２７．８４（ｑ，Ｃ８，Ｃ１１），３０．７４／２９．７３（ｔ，Ｃ３），４６．３５／４６．１５（ｔ，Ｃ５），５９．５２（ｄ，Ｃ２），７９．４０／７９．２０（ｓ，Ｃ１０），８０．６１（ｓ，Ｃ７），１５４．１４／１５３．７９（ｓ，Ｃ９），１７２．１２（ｓ，Ｃ６）．
ＧＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝２７１（［Ｍ］^＋，１），１７０（［Ｍ］^＋−Ｃ_５Ｈ_９Ｏ_２，１５），１４２（９），１１４（９５），５７（１００），１９（２６）．
ＩＲ（ＦＴ−ＡＴＲ）：^〜ν＝２９７３（ｓ），２９２８（ｍ），２８８０（ｗ），１７３８（ｓ），１６９７（ｓ），１４７６（ｍ），１４５４（ｍ），１３９６（ｓ），１３６４（ｓ），１２８９（ｍ），１２５２（ｓ），１２１５（ｓ），１１４８（ｓ），１０８５（ｓ），１０２８（ｗ），９７８（ｍ），９３９（ｍ），９１７（ｍ），８９５（ｍ），８５１（ｍ），８４０（ｍ），７９７（ｗ），７７０（ｍ）．

（Ｓ）−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−メトキシピロリジン−１，２−ジカルボキシレート（１０９）
５ｃｍの間隔を有する２つの黒鉛プレート電極（４８×５６ｍｍ）を、３４０ｍｌメタノール中の４６．１２９ｇ（１７０．００ｍｍｏｌ）の保護プロリン１０８（０．５Ｍ）および５．６ｇ（１７ｍｍｏｌ）のＢｕ_４ＮＢＦ_４（０．０５Ｍ）の溶液中に０℃にて浸し、２４０ｍＡの定電流強さにて電気分解した。２．４６Ｆｍｏｌ^−１を流した後、溶媒を減圧下で除去し、シリカゲル上で溶出液として１０００ｍｌのＥｔＯＡｃ／ＣｙＨｅｘ（１：１）で濾過する。溶媒を減圧下で除去し、５０．６２４ｇ（１６７．９７ｍｍｏｌ、９９％）の粗生成物１０９を透明な油として得、それをさらに追加の精製せずに反応させた。一部の生成物を、溶出液としてＥｔＯＡｃ／ＣｙＨｅｘ（１：７）を用いたシリカゲル上でのクロマトグラフィーにより分析目的のために精製した。
Ｍ（Ｃ_１５Ｈ_２７ＮＯ_５）：３０１．３８ｇｍｏｌ^−１．
ＤＣ：Ｒ_ｆ＝０．４３（ＥｔＯＡｃ／ＣｙＨｅｘ１：７）．
^１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝１．５９−１．２３（ｍ，１８Ｈ，Ｈ８，Ｈ１１），２．４５−１．６２（ｍ，４Ｈ，Ｈ３，Ｈ４），３．６３−３．２０（ｍ，３Ｈ，Ｈ１２），４．２９−３．９６（ｍ，１Ｈ，Ｈ２），５．３４−４．９９（ｍ，１Ｈ，Ｈ５）．
^１３Ｃ−ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３：δ＝２８．２３／２８．１５／２７．９２／２７．８２（Ｃ８，Ｃ１１），３０．８２／２９．７９（ｔ，Ｃ３），３２．８９／３２．１７（ｔ，Ｃ４），３２．８９／３２．１７（ｔ，Ｃ４），６０．２４／５９．９３／５９．８３／５９．６２（ｄ，Ｃ２），８０．９０／８０．６９／８０．３６／８０．２７（ｓ，Ｃ７，Ｃ１０），８９．２２／８８．３４（ｄ，Ｃ５），１５４．４３／１５４．２１／１５３．８１（ｓ，Ｃ９），１７１．７３／１７１．６７／１７１．５９（ｓ，Ｃ６）．
ＧＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝３０１（［Ｍ］^＋，１），２００（［Ｍ^］＋−Ｃ_５Ｈ_９Ｏ_２，２２），１７２（８），１４４（３２），１００（８０），５７（１００），２９（１４）．
ＩＲ（ＦＴ−ＡＴＲ）：^〜ν＝２９７５（ｓ），２９２８（ｓ），２８２５（ｗ），１７３８（ｓ），１６９９（ｓ），１４７６（ｍ），１４５５（ｍ），１３６４（ｓ），１３２７（ｓ），１２５２（ｓ），１１５７（ｓ），１０８４（ｓ），１０２４（ｍ），９８７（ｓ），９３９（ｓ），９１１（ｓ），８８５（ｓ），８４１（ｓ），７９７（ｓ），７７２（ｓ），７２９（ｍ）．

（Ｓ）−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−シアノピロリジン−１，２−ジカルボキシレート（１１０）
最初に４．４ｍｌのＴＭＳＯＴｆ（１ｖｏｌ％）、次いで２５．８ｍｌ（１９１．８１ｍｍｏｌ、１．１ｅｑ）のＴＭＳＣＮを、４４０ｍｌの乾燥ＤＣＭ中の５０．６２４ｇ（１６７．９７ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）の粗プロリン１０９に−４０℃にて滴下し、次いでこの温度で１．５時間撹拌した。溶液を６５ｍｌのＭｅＯＨと混合し、減圧下で溶媒を除去し、生成物を、溶出液としてＥｔＯＡｃ／ＣｙＨｅｘ１：９を用いた中性酸化アルミニウム上でのクロマトグラフィーにより得た。４０．５６９ｇ（１３６．８９ｍｍｏｌ、２工程において８１％）のニトリル１１０のジアステレオマー混合物（ｄ．ｒ．：３：１ ｃｉｓ：ｔｒａｎｓ）。一部の個々のアイソマーを分析目的のためにクロマトグラフィーにより分離した。
Ｍ（Ｃ_１５Ｈ_２４Ｎ_２Ｏ_４）：２９６．３６ｇｍｏｌ−１．
ｔｒａｎｓ−ＤＣ：Ｒ_ｆ＝０．３３（ＥｔＯＡｃ／ＣｙＨｅｘ１：９）．
ｔｒａｎｓ−［α］^２０ _Ｄ：−８８．６°（ｃ＝０．５５０，ＣＨＣｌ_３）．
ｔｒａｎｓ−融点：１０６．３°Ｃ．
ｔｒａｎｓ−^１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝１．４８−１．３２（ｍ，１８Ｈ，Ｈ８，Ｈ１１），２．５３−１．９７（ｍ，４Ｈ，Ｈ３，Ｈ４），４．２０（Ψ−ｄｄ，Ｊ２６．２（Ψ），７．９１Ｈ，Ｈ２），４．６１（Ψ−ｄｄ，Ｊ３０．２（Ψ），７．２，１Ｈ，Ｈ５）．
ｔｒａｎｓ−^１３Ｃ−ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３：δ＝２８．０４／２７．８１（ｑ，Ｃ８，Ｃ１１），２９．６０／２８．５９／２８．４６（ｔ，Ｃ３，Ｃ４），４７．５９／４７．４８（ｄ，Ｃ５），５９．５２／５９．４１（ｄ，Ｃ２），８１．８４／８１．７８／８１．７０／８１．４９（ｓ，Ｃ７，Ｃ１０），１１８．８２／１１８．７５（ｓ，Ｃ１２），１５２．７７／１５２．４８（ｓ，Ｃ９），１７０．７９／１７０．７０（ｓ，Ｃ６）．
ｔｒａｎｓ−ＧＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝２５５（［Ｍ］^＋，１），１９９（５），１５４（［Ｍ］^＋−Ｃ_５Ｈ_９Ｏ_２，１００）．
ｔｒａｎｓ−ＩＲ（ＦＴ−ＡＴＲ）：^〜ν＝２９７３（ｍ），２９２８（ｗ），２２３８（ｗ），１７３４（ｓ），１７０４（ｓ），１４７３（ｗ），１４５５，１３６４（ｓ），１３２３（ｍ），１３０６（ｍ），１２５２（ｍ），１２２５（ｓ），１１４４（ｓ），１１１９（ｓ），１０６１（ｍ），１０３４（ｗ），９８７（ｗ），９１４（ｍ），８４２（ｍ），８２０（ｗ），７７３（ｍ），７５６（ｗ）．
ｔｒａｎｓ−ＨＲ−ＭＳ：（ＥＳＩ，Ｃ_１５Ｈ_２４Ｎ_２ＮａＯ_４）：３１９．１６３±０．００１ｕ（３１９．１６３４ｕ）．
ｃｉｓ−ＤＣ：Ｒ_ｆ＝０．２７（ＥｔＯＡｃ／ＣｙＨｅｘ１：９）．
ｃｉｓ−［α］^２０ _Ｄ：１９．２°（ｃ＝０．４２０，ＣＨＣｌ_３）．
ｃｉｓ−融点：８１．３°Ｃ．
ｃｉｓ−^１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝１．６３−１．３３（ｍ，１８Ｈ，Ｈ８，Ｈ１０），２．４７−２．００（ｍ，４Ｈ，Ｈ３，Ｈ４），４．１６（Ψ−ｔｄ，Ｊ１４．２（Ψ），６．７，６．７，１Ｈ，Ｈ２），４．５５（Ψ−ｔｄ，Ｊ３９．１（Ψ），５．７，５．７，１Ｈ，Ｈ５）．
ｃｉｓ−^１３Ｃ−ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３：δ＝２８．１４／２７．８４（ｑ，Ｃ８，Ｃ１１），３０．３９／２９．７１／２９．６４／２８．５７（ｔ，Ｃ３，Ｃ４），４７．５２（ｄ，Ｃ５），６０．２４／６０．１９（ｄ，Ｃ２），８２．０１／８１．９１／８１．６２（ｓ，Ｃ７，Ｃ１０），１１８．３８／１１８．０９（ｓ，Ｃ１２），１５２．５０／１５２．２５（ｓ，Ｃ９），１７０．５３／１７０．３０（ｓ，Ｃ６）．
ｃｉｓ−ＧＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝２５５（［Ｍ］^＋，１），１９９（５），１５４（［Ｍ］^＋−Ｃ_５Ｈ_９Ｏ_２，１００）．
ｃｉｓ−ＩＲ（ＦＴ−ＡＴＲ）：^〜ν＝２９７６（ｓ），２９８２（ｍ），２８８０（ｗ），２２３８（ｗ），１７３８（ｓ），１６９７（ｓ），１４７３（ｍ），１４５５（ｍ），１３８４（ｓ），１３６４（ｓ），１２８６（ｓ），１２５５（ｓ），１２１５（ｓ），１１５０（ｓ），１１１６（ｓ），１０７２（ｓ），１０２８（ｍ），９８６（ｍ），９５０（ｍ），９３５（ｍ），９０５（ｍ），８７８（ｍ），８４２（ｓ），７６９（ｓ）．
ｃｉｓ−ＨＲ−ＭＳ：（ＥＳＩ，Ｃ_１５Ｈ_２４Ｎ_２ＮａＯ_４）：３１９．１６３±０．００１ｕ（３１９．１６３４ｕ）．

（Ｓ）−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−ホルミルピロリジン−１，２−ジカルボキシレート（１１１）
９０ｇのＲａｎｅｙ−Ｎｉ／Ｈ_２Ｏ（水中に５０ｗｔ％、Ａｃｒｏｓ）を、６４０ｍｌのＰｙ／ＡｃＯＨ／Ｈ_２Ｏ（２：１：１）中の１７．９０５ｇ（６０．４２ｍｍｏｌ）のシアン化物１１０の溶液に加え、８０℃にて７２時間水素下で撹拌した。３００ｍｌの水を懸濁液に加え、その懸濁液を各々８００ｍｌのＭＴＢＥで３回抽出した。合わせた有機相を水で２回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、溶媒を減圧下で除去した。残渣を、シリカゲル上の１０００ｍｌのＥｔＯＡｃ／ＣｙＨｅｘ（１：１）で濾過し、溶媒の除去後、粗生成物を、溶出液としてＥｔＯＡｃ／ＣｙＨｅｘ１：４を用いてシリカゲル上でのクロマトグラフィーにより精製した。９．２３４ｇ（３０．８５ｍｍｏｌ、５１％）のアルデヒド１１１を黄色の油（ｄ．ｒ．：１．７：１ ｃｉｓ：ｔｒａｎｓ）として得た。
Ｍ（Ｃ_１５Ｈ_２５ＮＯ_５）：２９９．３６ｇｍｏｌ^−１．
ＤＣ：Ｒ_ｆ＝０．２７（ＥｔＯＡｃ／ＣｙＨｅｘ１：４）．
^１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝１．５０−１．３４（ｍ，１８Ｈ，Ｈ８，Ｈ１１），２．２５−１．８３（ｍ，４Ｈ，Ｈ３，Ｈ４），４．５３−３．８４（ｍ，２Ｈ，Ｈ２，Ｈ５），９．６５−９．４５（ｍ，１Ｈ，Ｈ１２）．
^１３Ｃ−ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３：δ＝２９．９４／２９．２０／２９．００／２８．２７／２６．２９／２６．１７／２５．２４／２４．５６（ｔ，Ｃ３，Ｃ４），２８．１４／２７．９０（ｑ，Ｃ８，Ｃ１１），６０．５２／６０．３８／６０．２９（ｄ，Ｃ５），６５．２８（ｄ，Ｃ２），８１．６３／８１．５４／８１．４５／８１．３５／８１．２３／８１．００／８０．７７（ｓ，Ｃ７，Ｃ１０），１５４．１２／１５３．９３／１５３．５５／１５３．１５（ｓ，Ｃ９），１７１．５４／１７１．４２／１７１．２６（ｓ，Ｃ６），２００．９９／２００．１１（ｓ，Ｃ１２）．
ＧＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝２９９（［Ｍ］^＋，１），２７０（［Ｍ］^＋−ＣＯ，５），１９８（［Ｍ］^＋−Ｃ_５Ｈ_９Ｏ_２，２），１７０（２７），１４２（８），１１４（１００），９８（４１），５７（７５），３９（２５）．
ＩＲ（ＦＴ−ＡＴＲ）：^〜ν＝２９７６（ｓ），２９２６（ｍ），２８７３（ｗ），２８０６（ｗ），２７１３（ｗ），１７３０（ｓ），１６９５（ｓ），１４７６（ｍ），１４５５（ｍ），１３８３（ｓ），１３６４（ｓ），１２９０（ｍ），１２５３（ｓ），１２２０（ｓ），１１４８（ｓ），１１２３（ｓ），１０９０（ｓ），１０１０（ｍ），９７９（ｍ），９１３（ｍ），８４３（ｍ），７９６（ｗ），７７１（ｍ）．

（Ｓ）−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−ビニルピロリジン−１，２−ジカルボキシレート（１１２）
トルエン（１５ｗｔ％、ＡＢＣＲ）中の９３．５ｍｌ（６１．６９ｍｍｏｌ、２．０ｅｑ）のＫＨＭＤＳの溶液を、室温にてアルゴン下で、２２０ｍｌＴＨＦ中の２２．０３７ｇ（６１．６９ｍｍｏｌ、２．０ｅｑ）Ｐｈ_３ＰＭｅＢｒの懸濁液に加え、その物質を１時間撹拌した。次いで、７０ｍｌのＴＨＦ中の９．２３４ｇ（３０．８８ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）のアルデヒド１１１の溶液を−７８℃にて滴下し、得られた溶液を室温にて２．５時間撹拌した。１６０ｍｌの飽和Ｒｏｃｈｅｌｌｅ塩溶液および１００ｍｌの水を反応混合物に加え、次いで２６０ｍｌのＭＴＢＥで各々３回抽出し、合わせた有機相を飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。溶媒を減圧下で除去し、溶出液としてＥｔＯＡｃ／ＣｙＨｅｘ（１：９）を用いたシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィーによる精製後、８．０９１ｇ（２７．２１ｍｍｏｌ、８８％）のビニルプロリン１１２を異性体混合物（ｄ．ｒ．：１．７：１ ｃｉｓ：ｔｒａｎｓ）として得た。
Ｍ（Ｃ_１６Ｈ_２７ＮＯ_４）：２９７．３９ｇｍｏｌ^−１．
ＤＣ：Ｒ_ｆ＝０．２７（ＥｔＯＡｃ／ＣｙＨｅｘ１：９）．
^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝１．５０−１．３２（ｍ，１８Ｈ，Ｈ８，Ｈ１１），２．１９−１．５９（ｍ，４Ｈ，Ｈ３，Ｈ４），４．５８−４．０１（ｍ，２Ｈ，Ｈ２，Ｈ５），５．４４−４．９２（ｍ，２Ｈ，Ｈ１３），５．９５−５．６０（ｍ，１Ｈ，Ｈ１２）．
^１３Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３：δ＝２８．３２／２７．９８（ｑ，Ｃ８，Ｃ１１），３１．５４／３０．８６／２９．９２／２９．００／２７．３３（ｔ，Ｃ３，Ｃ４），６１．００／６０．５３／６０．３４／６０．１７／５９．６１／５９．３６（ｄ，Ｃ２，Ｃ５），８０．８５／７９．８６／７９．７８／７９．７２（ｓ，Ｃ７，Ｃ１０），１１４．９３／１１４．７８／１１４．５９／１１３．８２／１１３．６４（ｔ，Ｃ１３），１３９．２１／１３８．９７／１３８．６３／１３８．５０／１３８．０６（ｄ，Ｃ１２），１５３．７３／１５３．５８（ｓ，Ｃ９），１７２．０９／１７２．０３／１７１．９７（ｓ，Ｃ６）．
ＧＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝２９７（［Ｍ］^＋，１），１９６（［Ｍ］^＋−Ｃ_５Ｈ_９Ｏ_２，１６８（１０），１４０（１００），１１４（２），９６
（７０），７９（５），５７（７２），３９（２７）．
ＩＲ（ＦＴ−ＡＴＲ）：^〜ν＝２９７５（ｓ），２９３３（ｍ），２８８０（ｗ），１７３７（ｓ），１６９７（ｓ），１６４０（ｗ），１４７７
（ｍ），１４５５（ｍ），１３８５（ｓ），１３６３（ｓ），１３２３（ｍ），１２９０（ｍ），１２５５（ｍ），１２１３（ｍ），１１５０（ｓ），
１１０６（ｓ），１０６６（ｗ），１０２３（ｗ），９８８（ｗ），９５７（ｗ），９１２（ｍ），８７３（ｗ），８５６（ｗ），８４３（ｗ），７７０（ｗ）．
ＨＲ−ＭＳ：（ＥＳＩ，Ｃ_１６Ｈ_２７ＮＮａＯ_４）：３２０．１８３±０．００１ｕ（３２０．１８３８ｕ）．

（２Ｓ，５Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル−５−ビニルピロリジン−２−カルボキシレート（１１３）
２．５ｍｌ（１３．８２ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）のＴＭＳＯＴｆを、０℃にてアルゴン下で、５０ｍｌのＤＣＭ中の４．０４１ｇ（１３．５９ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）のビニルプロリン１１２の溶液にゆっくり加え、その物質を５分間撹拌し、次いで１０ｍｌの飽和ＮａＨＣＯ_３溶液を加えることにより反応を停止した。水相を各々１６ｍｌのＤＣＭで３回抽出し、合わせた有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、溶媒を減圧下で除去した。溶出液としてＤＣＭ／ＭｅＯＨ（２５：１）を用いたシリカゲル上でのクロマトグラフィー後、８８７ｍｇ（４．５０ｍｍｏｌ、３３％）のｔｒａｎｓ−異性体１１３および１．３０６ｇ（６．６３ｍｍｏｌ、４９％）のｃｉｓ−異性体１１４を得た。
Ｍ（Ｃ_１１Ｈ_１９ＮＯ_２）：１９７．２７ｇｍｏｌ^−１．
ｔｒａｎｓ−ＤＣ：Ｒ_ｆ＝０．３５（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ２５：１）．
ｔｒａｎｓ−［α］^２０ _Ｄ：−２８．９°（ｃ＝０．７１５，ＣＨＣｌ_３）．
ｔｒａｎｓ−^１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝１．４２（ｓ，９Ｈ，Ｈ８），１．５８−１．４５（ｍ，１Ｈ，Ｈ４’），１．９６−１．７０（ｍ，２Ｈ，Ｈ３，Ｈ４），２．２５−２．１０（ｍ，１Ｈ，Ｈ３’），２．７０（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），３．７７−３．６５（ｍ，２Ｈ，Ｈ２，Ｈ５），４．９７（ｄ，Ｊ１０．２，１Ｈ，Ｈ１０），５．１３（ｄｄ，Ｊ１７．１，０．９，１Ｈ，Ｈ１０’），５．７６（ｄｄｄ，Ｊ１７．１，１０．１，７．０，１Ｈ，Ｈ９）．
ｔｒａｎｓ−^１３Ｃ−ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３：δ＝２８．００（ｑ，Ｃ８），２９．６０，３１．７９（ｔ，Ｃ３，Ｃ４），５９．７９，６０．８９（ｄ，Ｃ２，Ｃ５），８１．０１（ｓ，Ｃ７），１１４．５０（ｔ，Ｃ１０），１４０．８９（ｄ，Ｃ９），１７４．９０（ｓ，Ｃ６）．
ｔｒａｎｓ−ＧＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝１９７（［Ｍ］＋，１），９６（［Ｍ］＋−Ｃ５Ｈ９Ｏ２，１００），７９（１２），５７（２２），
４１（３２），１９（１０）．
ｔｒａｎｓ−ＩＲ（ＦＴ−ＡＴＲ）：^〜ν＝３３４６（ｗ），３０７６（ｗ），２９７４（ｓ），２９３２（ｍ），２８７２（ｗ），１７２３（ｓ），１６４１（ｗ），１６０４（ｗ），１５９１（ｗ），１４７７（ｍ），１４５６（ｍ）１３９１（ｓ），１３６６（ｓ），１３３９（ｍ），１２２６（ｓ），１１５３（ｓ），１０２９（ｍ），９９１（ｓ），９１６（ｓ），８４６（ｓ），８０８（ｍ），７５４（ｍ）７２１（ｗ），６９２（ｗ），６７７（ｗ）．
ｔｒａｎｓ−ＨＲ−ＭＳ：（ＥＳＩ，Ｃ_１１Ｈ_２０ＮＯ_２）：１９８．１４９±０．００２ｕ（１９８．１４９４ｕ）．
ｃｉｓ−ＤＣ：Ｒ_ｆ＝０．２７（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ２５：１）．
ｃｉｓ−［α］^２０ _Ｄ：−２５．１°（ｃ＝１．４７５，ＣＨＣｌ_３）．
ｃｉｓ−^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝１．４４（ｓ，９Ｈ，Ｈ８），２．２８−１．８２（ｍ，４Ｈ，Ｈ３，Ｈ４），２．２２（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），３．５９（ｄｄ，Ｊ１４．３，７．２１Ｈ，Ｈ５），３．６７（ｄｄ，Ｊ８．７，５．２１Ｈ，Ｈ２），５．０３（ｄ，Ｊ１０．３，１Ｈ，Ｈ１０），５．１７（ｄ，Ｊ１７．１，１Ｈ，Ｈ１０’）５．８５（ｄｄｄ，Ｊ１７．２，１０．２，７．１，１Ｈ，Ｈ９）．
ｃｉｓ−^１３Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３：δ＝２８．０２（ｑ，Ｃ８），３１．８７，３０．３７（ｔ，Ｃ３，Ｃ４），６０．７０（ｄ，Ｃ２），６２．２３（ｄ，Ｃ５），８１．１３（ｓ，Ｃ７），１１５．２０（ｔ，Ｃ１０），１３９．９７（ｄ，Ｃ９），１７４．３３（ｓ，Ｃ６）．
ｃｉｓ−ＧＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝１９７（［Ｍ］＋，１），９６（［Ｍ］＋−Ｃ５Ｈ９Ｏ２，１００），７９（１２），５７（２２），
４１（３２），１９（１０）．
ｃｉｓ−ＩＲ（ＦＴ−ＡＴＲ）：^〜ν＝３３６０（ｗ，ｂｒ），２９７７（ｓ），２９２６（ｍ），２８７３（ｗ），１７２７（ｓ），１６３６（ｗ），１４７３（ｗ），１４５３（ｍ），１４２６（ｗ），１３９０（ｍ），１３６６（ｓ），１２８３（ｍ），１２４６（ｓ），１２２５（ｓ），１１５４（ｓ），１１００（ｍ），１０３０（ｗ），９９２（ｍ），９１７（ｍ），８４８（ｓ），７６９（ｗ），７５３（ｗ），７４０（ｗ）．
ｃｉｓ−ＨＲ−ＭＳ：（ＥＳＩ，Ｃ_１１Ｈ_２０ＮＯ_２）：１９８．１４９±０．００１ｕ（１９８．１４９４ｕ）．

（２Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（（５Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−ビニルピロリジン−１−カルボニル）−２−ビニルピロリジン−１−カルボキシレート（１１５／１１６）
１５ｍｌのＮＭＰ中の７４３ｍｇ（３．０８ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）の酸１０７、１．２８８ｇ（３．３９ｍｍｏｌ、１．１ｅｑ）のＨＡＴＵおよび１．０２ｍｌ（６．１６ｍｍｏｌ、２．０ｅｑ）のＤＩＰＥＡの溶液を室温にて２０分間撹拌した。次いで７９２ｍｇ（４．０２ｍｍｏｌ、１．３ｅｑ）のアミン１１３を加え、溶液を８５℃で２３時間加熱した。２２ｍｌの１０％のクエン酸水溶液を加えた後、その物質を各々４０ｍｌのＭＴＢＥで３回抽出し、有機相を１２０ｍｌの各々の飽和ＮａＨＣＯ_３−Ｌｓｇ、飽和ＮａＣｌ溶液および水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、溶媒を減圧下で除去した。溶出液としてＥｔＯＡｃ／ＣｙＨｅｘを用いたシリカゲル上でのクロマトグラフィーにより、５３９ｍｇ（１．２８ｍｍｏｌ、４２％）のジアステレオマー混合物（ｄ．ｒ．：８：１ １１５：１１６）のジペプチド１１５および１１６を黄色の油として得た。
Ｍ（Ｃ_２３Ｈ_３６Ｎ_２Ｏ_５）：４２０．５４ｇｍｏｌ^−１．
ＤＣ：Ｒ_ｆ＝０．３３（ＥｔＯＡｃ／ＣｙＨｅｘ１：３）．
［α］^２０ _Ｄ：−１５．６°（ｃ＝１．０１０，ＣＨＣｌ_３）．
^１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝１．４５−１．３４（ｍ，１８Ｈ，Ｈ８，Ｈ２０），１．６４−１．５７（ｍ，１Ｈ，Ｈ４’），１．７３−１．６４（ｍ，１Ｈ，Ｈ３’），１．８５−１．７３（ｍ，２Ｈ，Ｈ１６），２．０９−２．０１（ｍ，１Ｈ，Ｈ３），２．２６−２．１３（ｍ，２Ｈ，Ｈ４，Ｈ１５’），２．３４−２．２６（ｍ，１Ｈ，Ｈ１５），３．４７−３．３６（ｍ，１Ｈ，Ｈ１７’），３．５９−３．４７（ｍ，１Ｈ，Ｈ１７），４．３７−４．２６（ｍ，０．５Ｈ，Ｈ２），４．７１（ｓ，０．５Ｈ，Ｈ５），４．８０−４．７４（ｍ，０．５Ｈ，Ｈ２），４．８２（ｓ，０．５Ｈ，Ｈ５），５．１０−４．９５（ｍ，３Ｈ，Ｈ１０’，Ｈ１２），５．２０−５．１０（ｍ，１Ｈ，Ｈ１０），５．８３−５．６３（ｍ，１Ｈ，Ｈ９），６．６９−６．５５（ｍ，１Ｈ，Ｈ１３）．
^１３Ｃ−ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３：δ＝２２．４１，２１．６３（ｔ，Ｃ１６），２５．０８，２４．８５（ｔ，Ｃ３），２８．２７，２７．８６（ｑ，Ｃ８，Ｃ２０），３１．３０，３０．６９（ｔ，Ｃ４），３６．７８，３５．９３（ｔ，Ｃ１５），４８．３１，４８．０２（ｔ，Ｃ１７），５９．９７，５９．６９（ｄ，Ｃ５），６１．８０，６１．６０（ｄ，Ｃ２），７０．７１，７０．１５（ｓ，Ｃ１４），８０．８３，８０．６６（ｓ，Ｃ７，Ｃ１９），１１２．１５（ｔ，Ｃ１２），１１４．６２（ｔ，Ｃ１０），１３９．７５，１３８．５６（ｄ，Ｃ９），１４０．０８，１４０．０２（ｄ，Ｃ１３），１５４．２７，１５４．０４（ｓ，Ｃ１８），１７１．４０（ｓ，Ｃ１１），１７１．０８（ｓ，Ｃ６）．
ＩＲ（ＦＴ−ＡＴＲ）：^〜ν＝３０７３（ｗ），２９７３（ｍ），２９２６（ｗ），２８８０（１），１７３５（ｓ），１６９３（ｓ），１６３４（ｓ），１４７７（ｗ），１４５５（ｗ），１３８０（ｓ），１３６３（ｓ），１３００（ｗ），１２５５（ｍ），１２１７（ｍ），１１４９（ｓ），１０７５（ｗ），９９２（ｗ），９１７（ｗ），８５０（ｗ），７６９（ｗ），６６３（ｗ）．
ＨＲ−ＭＳ：（ＥＳＩ，Ｃ_２３Ｈ_３６Ｎ_２ＮａＯ_５）：４４３．２５３±０．００２ｕ（４４３．２５２２ｕ）．

（２’Ｒ，３Ｓ，８ａＳ）−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−オキソ−２，３，５，８ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−スピロ［インドリジン−６，２’ピロリジン］−１’，３−ジカルボキシレート（１１７）
６．５ｍｌのＤＣＭ中の１３５ｍｇ（０．３２ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）のジペプチド１１５および１１６ならびに８２ｍｇ（０．１０ｍｍｏｌ、０．３ｅｑ）のＧｒｕｂｂｓＩＩの溶液をマイクロ波（３００Ｗ）中で５５℃にて７時間加熱した。０．５ｍｌのＤＭＳＯを加えた後、その物質を室温にて一晩撹拌し、次いで溶媒を減圧下にて１００ｍｂａｒで除去した。溶出液としてＥｔＯＡｃ／ＣｙＨｅｘ１：１を用いたシリカゲル上でのクロマトグラフィーにより、６５ｍｇ（０．１７ｍｍｏｌ、５３％）の生成物１１７および１７ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ、１３％）のジアステレオマー１１８を灰色の固体物質として得た。さらに、３０ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ、２２％）の遊離体１１５／１１６を再単離できる。
Ｍ（Ｃ_２１Ｈ_３２Ｎ_２Ｏ_５）：３９２．４９ｇｍｏｌ^−１．
ＤＣ：Ｒ_ｆ＝０．３０（ＥｔＯＡｃ／ＣｙＨｅｘ１：１）．
［α］^２０ _Ｄ：−１３８．７°（ｃ＝０．２６５，ＣＨＣｌ_３）．
融点：１２８．０°Ｃ．
^１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３，回転異性体混合物；Ｒｏｔ１：Ｒｏｔ２：１．５：１）：回転異性体１：δ＝１．３０（ｓ，９Ｈ，Ｈ１８），１．４４（ｓ，９Ｈ，Ｈ８），１．５６−１．４８（ｍ，１Ｈ，Ｈ４’），１．９１−１．７５（ｍ，３Ｈ，Ｈ３’，Ｈ１３’，Ｈ１４’），２．０４−１．９６（ｍ，１Ｈ，Ｈ１４），２．１４−２．１０（ｍ，１Ｈ，Ｈ４），２．２７−２．２０（ｍ，１Ｈ，Ｈ１３），２．４５−２．３６（ｍ，１Ｈ，Ｈ３），３．５０−３．４１（ｍ，１Ｈ，Ｈ１５’），３．７８−３．７２（ｍ，１Ｈ，Ｈ１５），４．２２−４．１６（ｍ，１Ｈ，Ｈ５），４．４６（ｔ，Ｊ８．８，１Ｈ，Ｈ２），５．７２（ｄｄ，Ｊ９．９，１．４，１Ｈ，Ｈ１０），５．７９（ｄｄ，Ｊ９．８，２．８，１Ｈ，Ｈ９）；回転異性体２：δ＝１．４０（ｓ，９Ｈ，Ｈ１８），１．４３（ｓ，９Ｈ，Ｈ８），１．７５−１．６９（ｍ，１Ｈ，Ｈ４’），１．９１−１．７５（ｍ，３Ｈ，Ｈ３’，Ｈ１３’，Ｈ１４’），２．０４−１．９６（ｍ，１Ｈ，Ｈ１４），２．１０−２．０５（ｍ，１Ｈ，Ｈ４），２．２７−２．２０（ｍ，１Ｈ，Ｈ１３），２．４５−２．３６（ｍ，１Ｈ，Ｈ３），３．５０−３．４１（ｍ，１Ｈ，Ｈ１５’），３．７１−３．６５（ｍ，１Ｈ，Ｈ１５），４．２２−４．１６（ｍ，１Ｈ，Ｈ５），４．５６（ｔ，Ｊ８．６，１Ｈ，Ｈ２），５．８０（ｄｄ，Ｊ９．６，１．４，１Ｈ，Ｈ１０），５．８８（ｄｄ，Ｊ９．８，２．７，１Ｈ，Ｈ９）．
^１３Ｃ−ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３，回転異性体混合物）：δ＝２２．８０，２２．４９（ｔ，Ｃ１４），２８．２１，２８．１４（ｔ，Ｃ３），２８．５２，２８．３２，２７．９９（ｑ，Ｃ８，Ｃ１８），３１．３０，３１．１４（ｔ，Ｃ４），３９．４３，３８．１５（ｔ，Ｃ１３），４８．２６，４７．９８（ｔ，Ｃ１５），５７．８４，５７．６２（ｄ，Ｃ２），５８．６４，５８．５２（ｄ，Ｃ５），６４．２８，６４．００（ｓ，Ｃ１１），７９．６３，７９．３９（ｓ，Ｃ１７），８１．３３，８１．０８（ｓ，Ｃ７），１２２．４６，１２１．４１（ｄ，Ｃ１０），１３４．０３，１３３．３７（ｄ，Ｃ９），１５４．２１，１５４．０７（ｓ，Ｃ１６），１６８．０５，１６７．９３（ｓ，Ｃ１２），１７１．５４，１７１．２５（ｓ，Ｃ６）．
ＩＲ（ＦＴ−ＡＴＲ）：^〜ν＝２９７２（ｓ），２９２９（ｍ），２８７３（ｍ），１７３５（ｓ），１６９６（ｓ），１６５９（ｓ），１４７７
（ｍ），１４３２（ｓ），１３８３（ｓ），１３６４（ｓ），１２９３（ｍ），１２５５（ｓ），１２１１（ｓ），１１４９（ｓ），１０７８（ｗ），
１０３４（ｗ），１００４（ｍ），９５９（ｗ），９２８（ｗ），８８４（ｗ），８７０（ｗ），８４３（ｗ），８０３（ｗ），７８６（ｗ），７７０（ｗ），７３４（ｗ），７０２（ｗ）．

結晶データ１１７

結晶データ１１８

（２’Ｒ，３Ｓ，８ａＳ）−１’−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）−５−オキソ−２，３，５，８ａテトラヒドロ−１Ｈ−スピロ［インドリジン−６，２’−ピロリジン］−３−カルボン酸（８５）
２ｍｌのＴＦＡを、２ｍｌのＤＣＭ中の４９ｍｇ（０．１３ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）のジペプチド１１７の溶液に０℃にて加え、次いで室温にて１時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、残渣を３ｍｌの半飽和ＮａＨＣＯ_３溶液中に取り、この後、ｐＨ値を調べた（ｐＨ≧８）。この後、１ｍｌのＴＨＦ中の５１ｍｇ（０．２０ｍｍｏｌ、１．５ｅｑ）のＦｍｏｃ−Ｃｌの溶液を０℃にて加え、室温にて一晩撹拌した。５ｍｌのＤＣＭを添加した後、溶液を、０℃にて、１ＮのＨＣｌ溶液でｐＨ＝１に調整した。次いで相を分離し、水相をＤＣＭで２回抽出した。合わせた有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、溶媒を減圧下で除去し、溶出液としてＤＣＭ／ＭｅＯＨ１５：１を用いたシリカゲル上でのクロマトグラフィーにより、５３ｍｇ（０．１１ｍｍｏｌ、８５％）のＦｍｏｃ−保護生成物８５を得た。
Ｍ（Ｃ_２７Ｈ_２６Ｎ_２Ｏ_５）：４５８．５１ｇｍｏｌ^−１．
ＤＣ：Ｒ_ｆ＝０．２０（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ１５：１）．
融点：
^１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ，回転異性体混合物；ｒｏｔ１：ｒｏｔ２１：１）：δ＝回転異性体１：δ＝１．６６−１．５５（ｍ，１Ｈ，Ｈ４’），２．０３−１．７７（ｍ，４Ｈ，Ｈ３’，Ｈ１１’，Ｈ１２），２．１６−２．０８（ｍ，１Ｈ，Ｈ４），２．３４−２．２８（ｍ，１Ｈ，Ｈ１１），２．４２−２．３５（ｍ，１Ｈ，Ｈ３），３．５４−３．４５（ｍ，１Ｈ，Ｈ１３’），３．７１−３．６１（ｍ，１Ｈ，Ｈ１３），４．３３−４．１６（ｍ，３Ｈ，Ｈ５，Ｈ１５’，Ｈ１６），４．４１（ｔ，Ｊ８．７，１Ｈ，Ｈ２），４．５４（ｄｄ，Ｊ１０．９，６．０，１Ｈ，Ｈ１５），５．６９（ｄｄ，Ｊ１０．０，２．４，１Ｈ，Ｈ７），５．８７（ｄｄ，Ｊ１０．０，１．１，１Ｈ，Ｈ８），７．３２−７．２６（ｍ，２Ｈ，Ｈ１９），７．４０−７．３４（ｍ，２Ｈ，Ｈ２０），７．６３−７．５０（ｍ，２Ｈ，Ｈ１８），７．７９−７．７２（ｍ，２Ｈ，Ｈ２１）；回転異性体２：１．２４−１．１５（ｍ，１Ｈ，Ｈ４’），２．０３−１．７７（ｍ，５Ｈ，Ｈ３’，Ｈ４，Ｈ１１’，Ｈ１２），２．２８−２．２３（ｍ，１Ｈ，Ｈ３），２．３４−２．２９（ｍ，１Ｈ，Ｈ１１），３．５４−３．４５（ｍ，１Ｈ，Ｈ１３’），３．７１−３．６１（ｍ，１Ｈ，Ｈ１３），４．０３（ｔ，Ｊ５．６，１Ｈ，Ｈ１６），４．１７−４．１１（ｍ，１Ｈ，Ｈ５），４．３３−４．１７（ｍ，３Ｈ，Ｈ２，Ｈ１５），５．４８（ｄｄ，Ｊ９．８，２．６，１Ｈ，Ｈ７），５．５８（ｄ，Ｊ９．９，１Ｈ，Ｈ８），７．３２−７．２６（ｍ，２Ｈ，Ｈ１９），７．４０−７．３４（ｍ，２Ｈ，Ｈ２０），７．６３−７．５０（ｍ，２Ｈ，Ｈ１８），７．７９−７．７２（ｍ，２Ｈ，Ｈ２１）．
^１３Ｃ−ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＭｅＯＤ，回転異性体混合物）：δ＝２４．１９／２３．２５（ｔ，Ｃ１２），２９．５３／２９．４５（ｔ，Ｃ３），３２．０９／３２．０５（ｔ，Ｃ４），４０．３５／３９．４６（ｔ，Ｃ１１），４８．３４（ｄ，Ｃ１６），４９．９０／４９．４３（ｔ，Ｃ１３），６０．６４／６０．１３（ｄ，Ｃ５），６１．５２／６１．３１（ｄ，Ｃ２），６５．７５／６５．７２（ｓ，Ｃ９），６８．４２／６７．８５（ｔ，Ｃ１５），１２１．００／１２０．９３（ｄ，Ｃ２１），１２４．５８／１２４．３５（ｄ，Ｃ８），１２６．１３／１２６．０９／１２５．９７／１２５．７７（ｄ，Ｃ１８），１２８．１２／１２８．０４／１２７．９９（ｄ，Ｃ１９），１２８．８０／１２８．７３（ｄ，Ｃ２０），１３２．７７／１３１．６４（ｄ，Ｃ７），１４２．５７／１４２．５１（ｓ，Ｃ２２），１４５．５１／１４５．３６，１４５．０５／１４５．０１（ｓ，Ｃ１７），１５６．６９／１５５．９７（ｓ，Ｃ１４），１７０．２０／１７０．１０（ｓ，Ｃ１０），１８０．１４／１７９．９６（ｓ，Ｃ６）．

略語
ａｂｓ． 絶対
Ｅｑ． 当量
Ａｒ アリール
ＡＴＲ 減衰全内部反射
９−ＢＢＮ ９−ボラビシクロノナン
ｂｅｒ． 算出した
Ｂｎ ベンジル
Ｂｏｃ ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル
Ｂｏｃ_２Ｏ ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカルボネート（Ｂｏｃ無水物）
ＣＨ シクロヘキサン
Ｃｙ シクロヘキシル
ＤＣ 薄層クロマトグラフィー、ＴＬＣ
ＤＣＥ ジクロロエタン（１，２−）
ＤＣＭ ジクロロメタン
ＤＩＢＡＬ−Ｈ 水素化ジイソブチルアルミニウム
ＤＩＣ ジイソプロピルカルボジイミド
ＤＩＰ 直接注入プローブ（質量分析）
ＤＩＰＥＡ ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＡＰ ４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン
ＤＭＦ Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＰ ２，２−ジメトキシプロパン
ＤＭＳ ジメチルスルフィド
ＤＭＳＯ ジメチルスルホキシド
ｄｒ ジアステレオマー比
ＥＥ 酢酸エチル
ｅｅ 鏡像体過剰率
ＥＩ 電子［衝突］イオン化
ＥＳＩ 静電スプレーイオン化
Ｅｔ エチル
Ｅｔ_２Ｏ ジエチルエーテル
ＥｔＯＨ エタノール
ＥＶＨ１ ＥＮＡ−ＶＡＳＰ−ホモロジー１ドメイン
ＦＧＩ 官能基反転
Ｆｍｏｃ フルオレニル−９−メトキシカルボニル
ＦＭＰ 分子薬理学のための研究施設（Ｂｅｒｌｉｎ−Ｂｕｃｈ）
ＧＣ−ＭＳ 質量分析に関連するガスクロマトグラフィー
ｇｅｆ． 実測値
ｇｅｓ． 飽和
ＨＰＬＣ 高速液体クロマトグラフィー
ＨＲＭＳ 高分解能質量分析
ＩＲ 赤外分光法
ｋｏｎｚ． 濃縮した
ＬｉＨＭＤＳ リチウム−ヘキサメチルジシラジド
Ｍ モル質量
ＭＣＰＢＡ メタクロロ過安息香酸
Ｍｅ メチル
ＭｅＯＨ メタノール
Ｍｓ メシル（メタンスルホニル）
ＭＳ 質量分析
ＭＴＢＥ メチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテル
ＮａＨＭＤＳ ナトリウム−ヘキサメチルジシラジド
ＮＭＥ Ｎ−メチルフェドリン
ＮＭＲ 核磁気共鳴スペクトル
ＮＯＥ 核オーバーハウザー効果
ｏ オルト
Ｐｈ フェニル
ＰＰＩＩ ポリプロリンヘリックスＩＩ型
ＰＯＭ−Ｃｌ ピバル酸クロロメチル（ｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈｙｌ ｐｉｖａｌｏａｔｅ）
ＰＰＴＳ ピリジニウム−ｐａｒａ−トルエンスルホネート
ＲＣＭ 環閉鎖メタセシス
Ｒ_ｆ 保持因子
［Ｒｕ］_ＩＩ Ｇｒｕｂｂｓ ＩＩ 触媒８１
［Ｒｕ］_ｇｒ Ｂｌｅｃｈｅｒｔ ８２による修飾（グリーン）Ｇｒｕｂｂｓ Ｈｏｖｅｙｄａ触媒
ｓ 二次
Ｓｍｐ． 融点
Ｓｕ スクシンイミド
ＴＢＡＦ フッ化テトラブチルアンモニウム
ＴＢＳ ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル
ｔ−Ｂｕ ｔｅｒｔ−ブチル
Ｔｆ トリフルオロメタンスルホニル（Ｔｒｉｆｌｕｏｒｍｅｔｈａｎｓｕｌｆｏｎｙｌ）
ＴＦＡ トリフルオロ酢酸（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏａｓｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ）
ＴＨＦ テトラヒドロフラン
ＴＭＥＤＡ テトラメチルエチレンジアミン
ＴＭＳ トリメチルシリル
ＴＭＳＯＴｆ トリメチルシリルトリフルオロメタンスルホネート
ＴＰＳ ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル
Ｔｓ トシル（ｐａｒａ−トルエンスルホニル）
ＴｓＯＨ ｐａｒａ−トルエンスルホン酸
Ｚ ベンジルオキシカルボニル−（また、Ｃｂｚ）

天然タンパク質アミノ酸の１文字表記および３文字表記

Claims (13)

1. 一般式（３）
   （３）
   （式中、
   Ｘ^２＝−ＣＨ_２−であり、
   Ｒ＝ペプチジル、ＮＨ−Ｒ’’、−Ｏ−Ｒ’’（ここで、Ｒ’’は、置換アルキル、
   またはヘタリールであり、Ｒがペプチジルのとき、該ペプチジルのＮ末端は、式（３）のＣ原子に結合する。）
   Ｒ’＝アシル、ペプチジル、アルキルスルホニル、またはアリールスルホニルであり、Ｒ’がペプチジルのとき、該ペプチジルのＣ末端は、式（３）のＮ原子に結合する。）
   に対応することを特徴とする、化合物。
2. 薬学的に許容可能な担体物質と組み合わされる、請求項１に記載の化合物を含む薬剤。
3. 前記薬学的に許容可能な担体物質が、充填剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、溶解遅延剤、崩壊剤、吸収促進剤、保湿剤、吸収剤および潤滑充填剤からなる群から選択されることを特徴とする、請求項２に記載の薬剤。
4. ＲおよびＲ’の少なくとも１つがペプチジルである、請求項１に記載の１つまたは複数の式（３）の化合物を含むペプチド。
5. 請求項４に記載の１つまたは複数の化合物、および以下の構造８６
   に記載の１つまたは複数の化合物を含むペプチドであって、構造８６のペプチドへの挿入は、Ｆｍｏｃ保護基および／またはＣＯＯＨ基に代えて、構造８６とペプチドの間で１の結合を介して起こる、前記ペプチド。
6. 前記ペプチドが、
   Ａｃ−ＳＦＥ−［２−Ｃｌ−Ｆ］−ｐ−ＰＰ−ＴＥＤＥＬ−ＮＨ_２、
   Ａｃ−ＳＦＥ−［２−Ｃｌ−Ｆ］−ＰＰ−ｐ−ＴＥＤＥＬ−ＮＨ_２、
   Ａｃ−ＳＦＥ−［２−Ｃｌ−Ｆ］−ｐ−ｘ−ＴＥＤＥＬ−ＮＨ_２および
   Ａｃ−ＳＦＥ−［２−Ｃｌ−Ｆ］−ｐ−ｐ−ＴＥＤＥＬ−ＮＨ_２
   からなる群から選択され、
   ここで、
   ｐ＝請求項１に記載の化合物であり、請求項１の式（３）におけるＲおよびＲ’はペプチジルであり、
   ｘ＝請求項５に記載の構造８６であり、
   ２−Ｃｌ−Ｆ＝２−Ｃｌ−フェニルアラニンである、
   請求項５に記載のペプチド。
7. ｐ＝構造８５
   である、請求項６に記載のペプチドであって、構造８５のペプチドへの挿入は、Ｆｍｏｃ保護基および／またはＣＯＯＨ基に代えて、構造８５とペプチドの間で１以上の結合を介して起こる、前記ペプチド。
8. 細菌感染疾患ならびに神経変性疾患および／または腫瘍疾患を含む群から選択される、ポリプロリンヘリックス構造により媒介される、細胞内シグナル変換プロセスの修飾に関連する疾患の治療に使用される請求項２に記載の薬剤。
9. 細菌疾患が、レジオネラ菌、連鎖球菌、ブドウ球菌、クレブシエラ菌、ヘモフィルスインフルエンザ、リケッチア（紅斑熱）、マイコバクテリウム、マイコプラズマ、ウレアプラズマ、ナイセリア（髄膜炎、ウォーターハウスフリードリヒセン症候群（Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅ−Ｆｒｉｅｄｒｉｃｈｓｅｎ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、淋病）、シュードモナス、ボルデテラ（百日咳）、コリネバクテリア（ジフテリア）、クラミジア、カンピロバクター（下痢）、大腸菌、プロテウス、サルモネラ菌、赤痢菌、エルシニア属、ビブリオ科、腸球菌、クロストリジウム、ボレリア菌、梅毒トレポネーマ、ブルセラ菌、フランシセラ属および／またはレプトスピラ属、特にリステリア菌を含む群から選択される、細菌により引き起こされることを特徴とする、請求項８に記載の薬剤。
10. リステリア菌が、Ｌ．モノサイトゲネスＳｖ１／２ａ、Ｌ．モノサイトゲネスＳｖ４ｂ Ｆ２３６５、Ｌ．モノサイトゲネスＳｖ４ｂ Ｈ７８５８、１７８コンティグ、Ｌ．モノサイトゲネスＳｖ１／２ａ Ｆ６８５４、１３３コンティグ、Ｌ．モノサイトゲネスＳｖ４ｂ、Ｌ．モノサイトゲネスＳｖ４ａ、Ｌ．イノキュアＳｖ６ａ、Ｌ．ウェルシメリ（ｗｅｌｓｈｉｍｅｒｉ）Ｓｖ６ｂ、Ｌ．シーリゲリ（ｓｅｅｌｉｇｅｒｉ）Ｓｖ１／２ｂおよび／またはＬ．イバノビ（ｉｖａｎｏｖｉｉ）Ｓｖ５を含む群から選択されることを特徴とする、請求項９に記載の薬剤。
11. 神経変性疾患が、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病および／または筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を含む群から選択されることを特徴とする、請求項８に記載の薬剤。
12. 腫瘍疾患が、癌腫、肉腫、神経内分泌腫瘍、血液腫瘍（ｈｅｍｏ−ｏｎｃｏｌｏｇｉｃａｌ ｔｕｍｏｒ）、新生物発生腫瘍（ｄｙｓｏｎｔｏｇｅｎｅｔｉｃ ｔｕｍｏｒ）および／または混合腫瘍であることを特徴とする、請求項８に記載の薬剤。
13. 腫瘍疾患が、首および喉の腫瘍、内部の鼻の腫瘍を含む鼻および耳の領域の腫瘍、副鼻腔、咽頭、唇、口腔、咽頭、喉頭、下咽頭、耳、唾液腺および傍神経節腫の腫瘍、非小細胞気管支癌を含む肺の腫瘍、小細胞気管支癌、縦隔の腫瘍、食道、胃、膵臓、肝臓、胆嚢および胆嚢管、小腸、結腸および直腸癌および肛門癌を含む胃腸管の腫瘍、腎臓、尿管、膀胱、前立腺、尿道、ペニスおよび睾丸の腫瘍を含む泌尿生殖器の腫瘍、子宮頸部、膣、外陰部、子宮体部の腫瘍、悪性絨毛性疾患、卵巣癌、卵管の腫瘍（ｔｕｂａ ｆａｌｏｐｐｉｉ）を含む、婦人科腫瘍、腹腔の腫瘍、乳癌、甲状腺、副甲状腺、副腎皮質の腫瘍を含む内分泌器官の腫瘍、内分泌膵臓腫瘍、カルチノイド腫瘍およびカルチノイド症候群、多発性内分泌新生物、骨および軟部組織肉腫、中皮腫、皮膚腫瘍、皮膚黒色腫および眼内黒色腫を含む黒色腫、中枢神経系の腫瘍、網膜芽細胞腫を含む小児腫瘍、ウィルムス腫瘍、神経線維腫症、神経芽細胞腫、ユーイング肉腫腫瘍ファミリー、横紋筋肉腫、非ホジキンリンパ腫を含むリンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、中枢神経系の原発性リンパ腫、ホジキン疾患、急性白血病を含む白血病、慢性骨髄性およびリンパ性白血病、形質細胞腫瘍、骨髄異形成症候群、腫瘍随伴症候群、既知の原発腫瘍のない転移（ＣＵＰ症候群）、腹膜癌腫症、カポジ肉腫などのエイズ関連の悪性腫瘍を含む免疫抑制により誘導される悪性腫瘍、エイズ関連リンパ腫、中枢神経系のエイズ関連リンパ腫、エイズ関連ホジキン病およびエイズ関連肛門性器腫瘍、移植関連悪性腫瘍、脳転移、肺転移、肝転移、骨転移、胸膜転移および心膜転移を含む転移した腫瘍、ならびに悪性腹水を含む群から選択されることを特徴とする、請求項８〜１１のいずれか一項に記載の薬剤。