JP6712676B2

JP6712676B2 - 疼痛緩和組成物およびその製造方法

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Publication number: JP6712676B2
Application number: JP2019513720A
Authority: JP
Inventors: ジョンヒョンナム
Original assignee: ジョンヒョンナム
Priority date: 2016-12-09
Filing date: 2017-03-06
Publication date: 2020-06-24
Anticipated expiration: 2037-03-06
Also published as: CN109069457B; CN109069457A; JP2019516800A; KR101811544B1; WO2018105816A1; US20190125704A1

Description

発明の詳細な説明

［背景］
［１．分野］
本発明は、疼痛緩和組成物に関する。

［２．関連技術の説明］
疼痛とは、実際のまたは起こり得る組織損傷に関連する不快な感覚的および情緒的経験と定義される。疼痛は、多くの医学的状態において主要症状として現れる。しかし、疼痛は主観的に知覚されるため、疼痛を効果的に診断し、処置することはきわめて困難である。疼痛は、患者に重大な機能障害をもたらし、患者の職業的機能および社会的機能、ならびに家族生活の質を危うくすることになる。疼痛は、大きく、急性疼痛と、神経因性疼痛などの慢性疼痛とに分類することができる。

急性疼痛は一般に、炎症または軟組織損傷によって引き起こされ、炎症または軟組織損傷の原因となる神経メカニズムはよく知られている。したがって、急性疼痛は、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）または一般の鎮痛薬、例えばオピエートなどで処置することができる。

神経因性疼痛は一般に、末梢感覚神経損傷によって引き起こされ、神経因性疼痛の強度はきわめて高い。さらに、神経因性疼痛は、オピエートを含む鎮痛薬の使用後でさえも頻回に再発し得るため、神経因性疼痛の有効な処置を実現することはかなり困難である。

現在使用されている鎮痛薬は、大きく２つのタイプに分類される。第１のタイプには、ＮＳＡＩＤおよびそれに関連するシクロオキシゲナーゼアイソフォーム２（ＣＯＸ−２）阻害剤の群が含まれ、第２のタイプにはモルヒネなどのアヘン製剤が含まれる。これらの鎮痛薬は一般の疼痛には効果があるが、神経因性疼痛のようにいくつかの特定の種類の疼痛には鎮痛効果をほとんど発揮しない。オピエートを高用量で投与すると、疼痛緩和にいくらか効く場合がある。しかし、オピエートを増量すると、重篤な副作用または潜在的中毒を引き起こす可能性がある。ＮＳＡＩＤは鎮痛効果がオピエートより低いため、十分な鎮痛効果を実現するには増量して投与するべきであり、ＮＳＡＩＤに付随する胃腸管の副作用が発生する恐れがある。

したがって、現在知られている鎮痛薬の機序とは異なる機序を使用して、副作用を伴わずに疼痛緩和に有用となる新規な疼痛緩和化合物または類縁体を開発する緊急の必要性が依然として存在する。

［概要］
［技術的目的］
本発明の実施形態は、副作用を伴わずに疼痛を迅速に抑制することができる医薬組成物を提供する。

［技術的解決手段］
本発明のある態様によれば、有効成分として、式１：

のアビエタ−６，８，１１，１３−テトラエン−１８−酸、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を含む疼痛緩和組成物が提供される。

本発明による医薬組成物は、天然植物である松かさの炭化物抽出物から単離された天然由来の化合物を使用しており、それにより、副作用を伴わずに優れた疼痛緩和効果を発揮する。

実施例１に従って松かさ炭化物抽出物から単離した式１の化合物の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）クロマトグラムを示す図である。実施例１に従って松かさ炭化物抽出物から単離した式１の化合物のＬＣ／ＭＳスペクトルを示す図である。実施例１に従って松かさ炭化物抽出物から単離した式１の化合物の^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルおよび^１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す図である。実施例２に従って調製した松かさ炭化物抽出物の成分の比較結果を示すグラフである。実施例２に従って調製した松かさ炭化物抽出物の成分の、使用した種々の抽出溶媒による比較結果を示すグラフである。松かさ炭化物抽出物の成分の、実施例２に従った試料対溶媒比（Ｗ／Ｖ）による比較結果を示すグラフである。松かさ炭化物抽出物の成分の、実施例２に従った抽出時間による比較結果を示すグラフである。式１の化合物の疼痛緩和効力を評価するための、細胞内カルシウム濃度の増加に対するＴＲＰＶアゴニスト処置の効果を示すグラフである。抽出溶媒による抽出量を比較するグラフである。抽出時間による、ＭｅＯＨでの抽出量と水での抽出量とを比較するグラフである。

以下に本発明をさらに詳しく説明する。しかしながら、本発明は、多くの異なる形態で具現化することができ、本明細書に記載の実施形態に限定されると解釈されるべきではない。
本発明は、有効成分として、式１：

のアビエタ−６，８，１１，１３−テトラエン−１８−酸、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を含む、疼痛緩和組成物を提供するが、ここで、Ｈは１〜１０個の炭素原子を有するアルキル基ですべて置換されていることが可能であり、このようなすべての置換基が本発明の範囲内に包含されるものとする。

本発明による組成物は、種々の種類の疼痛、特に熱傷痛または外部損傷疼痛を抑制することができる。
したがって、本発明による組成物は、疼痛、特に皮膚損傷によって引き起こされる疼痛を抑制することができる。

本発明による式１の化合物およびその薬学的に許容される塩または溶媒和物は、疼痛緩和のために使用することができるが、本発明による式１の化合物の使用は、特定の種類の疼痛および疼痛の強度（重症度）に限定されない。

本発明による式１の化合物は、松かさ炭化物抽出物から単離することができる。加えて、本医薬組成物は、式１の化合物を含む松かさ炭化物抽出物を含むのが好ましい。式１の化合物は、松かさ炭化物抽出物から単離された化合物の形態で、または直接に式１の化合物を含む松かさ炭化物抽出物の形態で使用されると、副作用を伴わずに優れた疼痛緩和効果を発揮することができる。しかしながら、式１の化合物の調製方法は、本明細書に開示されているものに限定されない。

本発明の実施形態によれば、松かさ炭化物抽出物は、水、１〜４個の炭素原子を有する低級アルコール、アセトン、酢酸エチル、クロロホルム、またはこれらの混合溶媒を松かさ炭化物に添加することによって調製されてもよい。好ましくは、松かさ炭化物抽出物は、水、メタノール、エタノール、またはこれらの混合溶媒を松かさ炭化物に添加することによって調製される。最も好ましくは、松かさ炭化物抽出物は、１００％メタノールを抽出溶媒として添加することによって調製され、これにより、本発明による化合物中の活性成分の含量が増加する。

本発明の実施形態によれば、松かさ炭化物抽出物は、好ましくは、松かさ炭化物材料（ｗ）に抽出溶媒（ｖ）を、１（ｗ）：１０〜１５０（ｖ）の比で添加することによって調製される。上記の比を超える量で抽出溶媒を使用すると、活性成分は十分に抽出されない。

本発明の実施形態によれば、松かさ炭化物抽出物は、好ましくは超音波抽出または還流抽出によって得られる。抽出溶媒として水を使用する場合は、還流抽出を使用するのが好ましく、抽出溶媒として有機溶媒を使用する場合は、超音波抽出を使用するのが好ましい。

抽出時間は、１０〜１００分、好ましくは２０〜４０分の範囲としてもよい。抽出時間を長くしたとしても、抽出される活性成分の量は増加せず、抽出時間があまりにも短いと、十分な量の活性成分が抽出されない。

本発明による化合物は、薬学的に許容される塩の形態で投与されてもよい。「薬学的に許容される塩」という表現は、本明細書で使用する場合、無毒性または低毒性の酸または塩基から調製される塩を意味する。本発明による化合物が相対的に酸性の官能性を含有する場合、塩基付加塩は、化合物の中性型を、十分な量の望ましい塩基および適切な不活性溶媒と接触させることによって得ることができる。薬学的に許容される塩基付加塩の例として、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、アンモニウム塩、マグネシウム塩、または有機アミノ塩などが挙げられるが、これらに限定されない。

本発明の化合物には、その溶媒和物、特に水和物を含めてもよい。さらに、本発明の化合物には、溶媒和形態（例えば水和物）と同様に非溶媒和形態を含めてもよい。本発明の化合物は、結晶形または非晶形で存在してもよく、このような物理的形態は本発明の範囲内に包含される。

本発明は、本化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物と、薬学的に許容される賦形剤または添加剤とを含む医薬組成物を提供する。本発明による化合物またはその薬学的に許容される塩／溶媒和物は、単独で、または好都合な担体または賦形剤と組み合わせて投与してもよい。投与方式は単回投与でも反復投与でもよい。

本発明による医薬組成物は、固体製剤でも液体製剤でもよい。固体製剤は、散剤、顆粒剤、トローチ剤、カプセル剤、および坐剤などの形態をとってもよいが、これらに限定されない。固体製剤として、賦形剤、香味剤、結合剤、防腐剤、崩壊剤、潤滑剤、および充填剤などを挙げることができるが、これらに限定されない。液体製剤は、溶液剤（水またはプロピレングリコール溶液など）、懸濁剤、および乳剤などの形態をとってもよいが、これらに限定されない。液体製剤は、適切な着色剤、香味剤、安定化剤、および増粘剤などを添加することによって調製してもよい。

本発明の医薬組成物は、処置されようとする疾患および患者の状態によって、経口投与、注射（例えば、筋肉内注射、腹腔内注射、静脈内注射、注入、皮下注射またはインプラント）、吸入、鼻腔内投与、腟投与、直腸投与、舌下投与、経皮投与、または局所投与に好適な製剤の形態で投与してもよいが、これらに限定されない。投与の経路によって、本発明の医薬組成物は、一般に使用され、無毒性であり、薬学的に許容される担体、添加剤およびビヒクルを含む、適切な投与単位製剤として製剤化されてもよい。デポー製剤は、所定の期間中継続的に薬物を放出することができ、これもまた本発明の範囲に含めることができる。

本発明はまた、疼痛緩和を必要とする患者に、治療有効量の式１の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を投与するステップを含む、疼痛緩和のための方法も提供する。

疼痛緩和のための方法では、式１の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を、１日当たり約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約２．５ｍｇ／ｋｇ〜約５００ｍｇ／ｋｇの量で投与してもよい。しかしながら、用量は、患者の状態（年齢、性別、体重など）、処置される状態の重症度、および使用する化合物などによって変動させてもよい。必要に応じて、化合物の有効１日量を分割し、１日を通して適切な間隔をおいて複数回投与してもよい。

ここで本発明を、以下の実施例を用いてさらに説明する。これらの実施例は完全な開示を提供するために公表されるが、本発明の範囲を限定するものではない。
［実施例１］
松かさ炭化物抽出物の調製および式１の化合物の単離
韓国のＧｒａｅｍｅＣｏ．，Ｌｔｄ．から入手した松かさ炭化物２．５３ｋｇを、ＭｅＯＨ３．５Ｌを使用して室温にて繰り返し４回抽出し、次いで濃縮してＭｅＯＨ抽出物を約９２ｇ得た。得られたＭｅＯＨ抽出物に、ｎ−ヘキサンおよびＥｔＯＡｃの各々を使用して溶媒分画を３回行い、ｎ−ヘキサン抽出物を約６ｇ、およびＥｔＯＡｃ抽出物を約４５ｇ得た。カラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ_３−ＭｅＯＨ、１：１）を、ｓｅｐｈａｄｅｘＬＨ−２０ゲルを使用してＥｔＯＡｃ抽出物に対して行って、５つの画分Ｆ１〜Ｆ５を得た。シリカゲルカラム（ｎ−ヘキサン−ＥｔＯＡｃ、１：０〜０：１）を使用して画分Ｆ４を分離し、Ｆ４．１〜Ｆ４．６を得た。その後、ＭＰＬＣ（ＢｉｏｒａｇｅＩｓｏｌｅｒａＩＳＯ−１ＳＶ）でシリカゲルカラム（ＣＨＣｌ_３−ＭｅＯＨ、１００：０〜９８：２）を使用して画分Ｆ４．３を分離し、Ｆ４．３．１〜Ｆ４．３．４を得た。ＹＭＣ−ＰａｃｋＯＤＡ−Ａカラム（ＭｅＯＨ−Ｈ_２Ｏ、７：３〜１：０、８ｍＬ／分）を備えた分取ＨＰＬＣ（ＶａｒｉａｎＰｒｏｓｔａｒ２１０）を使用して画分Ｆ４．３．３を精製し、式１の化合物を単離した。

単離した化合物をＨＰＬＣ（Ｖａｒｉａｎ９２０−ＬＣ）およびＵＰＬＣ（ＷａｔｅｒｓＡＣＱＵＩＴＹＵＰＬＣ（登録商標））に供してその純度を確認し、ＬＣ／ＭＳ（ＷａｔｅｒｓＵＰＬＣ／ｑ−ＴＯＦＭＳシステム）およびＧＣ／ＭＳ（Ａｇｉｌｅｎｔ７８９０／５９７３ＭＳシステム）を使用して化合物の分子量を確認した。次いで、ＮＭＲ（核磁気共鳴、Ｖａｒｉａｎシステム５００ＭＨｚ）を使用して^１Ｈ−、^１３Ｃ−、^１Ｈ−^１ＨＣＯＳＹ、ＨＳＱＣ、およびＨＭＢＣＮＭＲの測定を実施し、単離した化合物の構造を同定し、それにより式１の化合物を得た。

Ｃ_２０Ｈ_２６Ｏ_２の分子量：２９８．４２
ＥＳＩ−ＭＳｍ／ｚ：２９７［Ｍ−Ｈ］⁻。^１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ１．０９（３Ｈ，ｓ，Ｈ−２０）、１．２３（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ，Ｈ−１６）、１．２４（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ，Ｈ−１７）１．４２（３Ｈ，ｓ，Ｈ−１９）、１．６８〜１．８７（５Ｈ，ｍ，Ｈ−１ａ，２，３）、２．２１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１３．５Ｈｚ，Ｈ−１ｂ）、２．８６（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１５）、２．９２（１Ｈ，ｓ，Ｈ−５）５．８０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．５Ｈｚ，Ｈ−６）、６．５３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．５Ｈｚ，Ｈ−１４）、６．９２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ，Ｈ−９）、７．０８（２Ｈ，ｍ，Ｈ−１１，１２）。^１３Ｃ−ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ１７．２（Ｃ−１９）、１８．４（Ｃ−２）、２０．９（Ｃ−２０）、２４．０（Ｃ−１６）、２４．０（Ｃ−１７）、３３．７（Ｃ−１５）、３５．４（Ｃ−１）、３５．８（Ｃ−３）、３７．２（Ｃ−１０）、４６．２（Ｃ−４）、４６．６（Ｃ−５）、１２１．７（Ｃ−１１）、１２４．８（Ｃ−９）、１２５．８（Ｃ−１２）、１２８．５（Ｃ−１４）、１２９．７（Ｃ−６）、１３２．６（Ｃ−８）、１４５．１（Ｃ−９）、１４５．４（Ｃ−１３）、１８４．０（Ｃ−１８）。

［実施例２］
抽出条件による松かさ炭化物抽出物の比較
実施例１で使用した松かさ炭化物３ｇずつを取り出して、抽出方法、抽出溶媒の種類、使用した抽出溶媒の組成および量、ならびに抽出時間を含む５条件を変えて抽出し、遠心分離を４０００ｒｐｍで実施して上清を濾過し、次いで抽出量の比較のためにその上清を濃縮し、ＵＰＬＣを使用して成分分析を実施した。還流抽出および超音波抽出を抽出方法として使用し、水、エタノールおよびＭｅＯＨの各溶媒を抽出溶媒として使用した。抽出溶媒としてのＭｅＯＨ、ＥｔＯＨおよび水の組成は３０％〜１００％の範囲で変動させ、抽出時間は使用した抽出溶媒の種類に応じて１０〜１２０分の範囲で変動させた。実施例１と同じ条件で分析を実施し、各抽出物の純度をＵＶ２５４ｎｍで確認した。

抽出方法：還流抽出／超音波抽出
使用した抽出溶媒：メタノール、エタノールおよび水
抽出溶媒の組成：３０％、５０％、７０％および１００％
抽出溶媒の量：３０ｍｌおよび１００ｍｌ
抽出時間：１０、３０、６０、９０および１２０分
− 抽出方法による比較
抽出は、超音波抽出および還流抽出によって３０分間、ＭｅＯＨおよび水各１００ｍｌを抽出溶媒として使用して、同じ抽出条件で実施した。ＭｅＯＨを抽出溶媒として使用した場合、抽出方法による抽出量に実質的な差は見られなかった。水を抽出溶媒として使用した場合、抽出量は、還流抽出の方が超音波抽出より多かった。ＵＰＬＣ分析では、ＭｅＯＨおよび水抽出溶媒の両方において、抽出方法による別段の成分の違いは見られなかった（図４を参照）。

− 抽出溶媒組成による比較
抽出溶媒組成による抽出量の差を分析するために、ＭｅＯＨ、ＥｔＯＨおよび水を抽出溶媒として、各組成を３０％、５０％、７０％および１００％に変動させて使用して抽出を実施した。抽出は、超音波抽出によって３０分間、抽出溶媒を各３０ｍｌ使用して、同じ条件で実施した。ＭｅＯＨを抽出溶媒として使用した場合、抽出量は、ＥｔＯＨを同じ条件で使用した場合より多かった。とりわけ、１００％ＭｅＯＨを使用した場合、抽出効率は最高であった。ＵＰＬＣ分析では、ＭｅＯＨとＥｔＯＨの間に抽出溶媒組成の実質的な違いは見られなかった。抽出溶媒組成により、極性成分と非極性成分の間に含量の差があった（図５および図９を参照）。

さらに、ＭｅＯＨを抽出溶媒として使用して抽出することによって、試料対溶媒比（ｗ／ｖ）による抽出量の差を比較した。抽出は、試料対溶媒比（ｗ／ｖ）１：１０（３０ｍｌ）および１：３０（１００ｍｌ）を使用して、同じ条件で実施した。抽出結果により、抽出量は、１００ｍｌのＭｅＯＨを使用した場合の方が３０ｍｌのＭｅＯＨを使用した場合の約２倍以上であったことが確認された。成分の違いは見られなかった（図６および図１０を参照）。

− 抽出時間による比較
抽出時間による抽出量の比較については、両抽出方法と、各抽出方法に対応する好適な抽出溶媒とを使用して実験を行った。１０、３０、６０および９０分の４つの抽出時間条件でＭｅＯＨ溶媒３０ｍｌを使用して超音波抽出を実施することによって、抽出量を比較した。Ｈ_２Ｏ溶媒１００ｍｌを使用して還流抽出を実施することによって抽出量および溶媒成分を比較したが、Ｈ_２Ｏ溶媒は、３０、６０、９０および１２０分の４つの抽出時間条件で、相対的に高い抽出効率を示した。抽出時間を除くすべての抽出条件は、両抽出方法とも同じに維持した。抽出結果により、抽出時間の増加に応じて抽出量がわずかに増加したことが示された。観察された抽出量の差はほんのわずかであり、その差は統計的に有意ではないと考えられるものであった。加えて、抽出時間によって、抽出溶媒組成に別段の違いは見られなかった（図７および図１０を参照）。

上記のとおり、松かさ炭化物の活性成分は、水および低級アルコールを使用した場合に、抽出の効率を最も高くできることを理解することができる。

［実験実施例１］
式１の化合物の活性アッセイ
実施例１で単離した式１の化合物の活性を調べるために、疼痛緩和効果を評価した。疼痛緩和は、細胞内カルシウム濃度およびシグナリング経路を同定することによって確認した。

式１の化合物とともに５０％コンフルエントまで２４時間インキュベートした白色ラットのｆ１１侵害受容感覚細胞株を調製した後に、ＴＲＰＶイオンチャネル活性を測定した。ＴＲＰＶイオンチャネルの前活性化因子としての２−ＡＰＢ（２−アミノエトキシジフェニルホウ酸）でｆ１１細胞株を処置し、２−ＡＰＢ処置に対する応答において引き起こされる細胞内カルシウムの変化を、Ｆｌｕｏ−４−ＡＭ蛍光色素をリアルタイムベースで使用して評価した。

ｆ１１細胞株をＴＲＰＶイオンチャネルの前活性化因子としての２−ＡＰＢで処置すると、細胞内カルシウム濃度の一過性の急激な増加が２０秒以内に見られ、増加した細胞内カルシウム濃度は約５分後にベースレベルに戻ることが確認された。

しかしながら、ｆ１１細胞株を式１の化合物で２４時間前処置すると、式１の化合物で処置した実験群と未処置の対照群とを比較した下の表形式データをつけた図８において確認されるとおり、２−ＡＰＢにより誘発される細胞内カルシウム濃度の増加は強力に抑制され、これにより式Ｉの化合物が疼痛緩和効力をもたらすことが示唆された（図８を参照）。

Claims

有効成分として、式１：
のアビエタ−６，８，１１，１３−テトラエン−１８−酸、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を含み、
式１の化合物を含む松かさ炭化物抽出物を含む、疼痛緩和組成物。
請求項１に記載の疼痛緩和組成物の製造方法であって、
松かさ炭化物抽出物が、水、１〜４個の炭素原子を有する低級アルコール、アセトン、酢酸エチル、クロロホルム、またはこれらの混合溶媒を松かさ炭化物に添加することによって調製される、疼痛緩和組成物の製造方法。
請求項１に記載の疼痛緩和組成物の製造方法であって、
松かさ炭化物抽出物が、水、１〜４個の炭素原子を有する低級アルコール、またはこれらの混合溶媒を松かさ炭化物に添加することによって調製される、疼痛緩和組成物の製造方法。
請求項１に記載の疼痛緩和組成物の製造方法であって、
松かさ炭化物抽出物が、１００％メタノールを松かさ炭化物に添加することによって調製される、疼痛緩和組成物の製造方法。
請求項１に記載の疼痛緩和組成物の製造方法であって、
松かさ炭化物抽出物が、松かさ炭化物に抽出溶媒を１：１〜１：５（ｗ／ｖ）の比で添加することによって調製される、疼痛緩和組成物の製造方法。
請求項１に記載の疼痛緩和組成物の製造方法であって、
松かさ炭化物抽出物が、松かさ炭化物について超音波抽出または還流抽出を行うことによって得られる、疼痛緩和組成物の製造方法。