JP6648029B2 - 化学合成用の自動ガスバルブ容器ホルダ - Google Patents

Description

本発明は、ペプチド合成、タンパク質生合成、またはオリゴヌクレオチド合成等の化学合成に関する。より詳しくは、本発明は、そのような合成に必要な溶液の自動ガスバルブ容器ホルダ、およびそのような自動ガスバルブ容器ホルダを使用する合成方法に関する。

ペプチド治療薬（インスリンを除く）は、この２〜３年で２桁の伸びを示している。こうしたペプチド医薬品の成功は、安定性（保管寿命）および体内での急速分解の問題が解決されたことがその端緒である。後期前臨床および臨床開発段階にある数百の治験が進行中である。２０１０年には、ほぼ２０種の新しいＡＰＩ（医薬品有効成分）が臨床研究に入っている。これは、１９８０年代では新しいＡＰＩが年間５種だったことと対照的である。上市されているペプチドおよびパイプラインにあるペプチドは両方ともその大多数が、合成ペプチドで占められている（約７０％）。ペプチド研究およびペプチド製造は世界的に広く行われているが、５億ドル／年といわれるペプチドＡＰＩの最大推定市場規模の大半を構成するのは、欧州市場および米国市場である。

医薬品のＡＰＩとしてペプチドを使用する有益性は、数十年前から認識されていたが、その可能性は十分には開発されていなかった。多数の機能が特定されているが、新しい治療領域および適応症が常に研究されている。従来の低分子に対するペプチドの利点は、標的特異性が高いこと、効力がより高いこと、および毒性が低いことである。分解産物はいずれもアミノ酸であるため、全身毒性のいかなるリスクも最小限に抑えられ、ペプチドのｔ_１／２（半減期）は短いため、組織蓄積のより大きなリスクが排除される。ペプチドの安定性および体内でのｔ_１／２が短いという課題は、かなりの程度解決されている。

ポリペプチド製造には、幾つかの合成技術が利用可能である。簡略化された簡単な概略が表１に示されている。必要とされるペプチドの量および長さならびにその複雑さが、選択に影響を及ぼす。それぞれ個々の技術の利点を活用するために、ハイブリッド型を開発することができる。ハイブリッド型では、固相技術を使用してペプチド断片が合成され、バッチ合成を使用してそれらが共に連結されて、正しい全長産物になる。

オリゴヌクレオチドの合成とは異なり、ポリペプチド合成装置は、他の化学溶液に加えて、２０種を超える異なるアミノ酸の取り扱いが可能である必要がある。更に、アミノ酸は水に感受性であるため、有機溶媒中のアミノ酸を空気中の湿気から分離する必要がある。したがって、こうした所望の特徴を提供する小型の容器ホルダの必要性が存在する。

欧州特許第１９９２４０７号明細書

本明細書に開示されているものとしては、容器が容器ホルダに接続されると自動的に開くガスバルブを含む新規の容器ホルダが挙げられる。容器が分離されると、ガス制御バルブは自動的に閉じる。また、本開示の容器ホルダを少なくとも２つ含む容器ホルダパネル、ならびにそのような容器ホルダおよび容器ホルダパネルを使用して１つまたは複数のアミノ酸が供給される化学合成法が開示されている。

したがって、本発明の第１の態様は、主本体を含む容器ホルダであって、上記主本体が、ひいては、
（ａ）ガス入口、
（ｂ）溶液出口、
（ｃ）ガスが上記ガス入口から上記容器に進入することを可能にするガス制御バルブ、および
（ｄ）上記ガスを入力するためのおよび上記容器中の溶液を放出するための通路を含む、使用中に上記容器を密封するための密封手段を含み、
上記容器が上記密封手段により上記容器ホルダに密封的に接続されると、上記ガス制御バルブが自動的に開き、上記容器が上記容器ホルダから流体的に分離されると、上記ガス制御バルブが自動的に閉じる容器ホルダを提供することである。

本発明の第２の態様は、本発明の第１の態様による２つ以上の容器ホルダを含む容器ホルダパネルを提供することである。

本発明の第３の態様は、例えばポリペプチドを化学合成する方法であって、
（ａ）既存ペプチドのアルファアミノ保護基を脱保護する合成ステップ、
（ｂ）アミノ酸の供給源からの次のアミノ酸をミキサー中で事前に活性化する合成ステップ、および
（ｃ）活性化アミノ酸を上記既存ペプチドにカップリングする合成ステップのサイクルを含み、
少なくとも１つのアミノ酸が、本発明のある態様による容器ホルダに接続されている容器から供給される方法を提供する。

本発明の別の態様は、ポリペプチドを合成する方法であって、
（ａ）既存ペプチドのアルファアミノ保護基を脱保護する合成ステップ、
（ｂ）アミノ酸の供給源からの次のアミノ酸をミキサー中で事前に活性化する合成ステップ、および
（ｃ）活性化アミノ酸を上記既存ペプチドにカップリングする合成ステップのサイクルを含み、
少なくとも１つのアミノ酸が、本発明のある態様による容器ホルダパネルに接続されている容器から供給される方法を提供する。

本発明の更なる詳細および利点は、以下の記載および特許請求の範囲から明らかであろう。

適所にある容器ホルダおよび容器の断面図である。外径１／１６”（１．６ｍｍ）の毛細管からガスが供給され、同様の毛細管が、アミノ酸の出口として使用されている。 容器ホルダの部分断面側面図である。スプリングバルブは、その内部Ｏリングにより密封されることになる。 断面側面図である。スプリングバルブは開放されており、ガスは容器を加圧することになる。 断面正面図である。ガイドピンは、チューブがそのスレッドで接続される際に鋼鉄ディスクが回転するのを防止する。 ベンチ支持体を有する例示的な容器ホルダを示す図である。 ポリペプチド合成機試作品のキャビネットレールに取り付けられた例示的な容器ホルダを示す図である。

ポリペプチド合成装置の必要条件の１つは、他の化学溶液に加えて、２０種を超える異なるアミノ酸の取り扱いが可能である必要性に関する。更に、アミノ酸は水分に感受性であるため、有機溶媒中のアミノ酸を空気中の湿気から分離する必要がある。容器が容器ホルダに接続されると自動的に開くガスバルブを含む新規の容器ホルダが設計される。容器が分離されると、ガス制御バルブは自動的に閉まる。外的環境に感受性である組成物を含む容器を容器ホルダに取り付けると、容器内の圧力がわずかに上昇し、したがって、組成物は、そのような容器ホルダにより外的環境から確実に分離される。更に、本発明は、本開示の容器ホルダを少なくとも２つ含む容器ホルダパネル、ならびにそのような容器ホルダまたは容器ホルダパネルを使用して１つまたは複数のアミノ酸が供給されるペプチド合成法を提供する。

第１の態様では、本発明は、容器１００を保持するための、図１に例示されているような容器ホルダ１０に関する。ホルダ１０は、容器１００の相補的スレッド上方部分１１０を受容するための下向きの内側スレッド開口部１４を有する主本体１２を含む。また、容器ホルダ主本体１２は、ガス入口１６；液体溶液出口１８；ガスがそれを介してガス入口１６から容器１００に進入するガス制御バルブ２０；および容器がホルダ主本体１２に螺合された際に容器を密封するための、ガスを入力するためのおよび容器１００からの液体Ｌの出力を実施する放出チューブ１９のための通路２４を含む密封手段２２を含む。放出チューブ１９は、液体Ｌが、ガス入口１６からのガス圧力により放出チューブ１９を上昇し、出口１８から押し出されることになるように、容器中の液体Ｌに浸漬されている。容器が容器ホルダに接続されると、ガス制御バルブ２０が自動的に開き、容器が容器ホルダから分離されると、ガス制御バルブが自動的に閉鎖される。

図２および３には、ガスバルブの操作がより詳細に示されている。図２では、ホルダの主本体１２は、それに対応する容器に取り付けられておらず、ガスバルブ２０は閉鎖されており、図３では、容器に取り付けられており、ガスバルブ２０が開放されている。

より詳細には、容器１００が適所に螺合されていない場合（図２）、バルブ２０のばね付勢ピン２８が下方に押し下げられ、入口１６のガスＧは、阻止され、前室２６を通過することができない。容器１００が適所に螺合されている場合、容器の上端部１２０は、弾性平坦密封部材２３として機能し、それがひいては、バルブ作動プレート２７を上方に押し上げて、バルブピン２９に作用し、そのばね付勢に抗してピンを上方に押し上げる。そうするとバルブ２０が開き、ガスによる容器１００の加圧が可能になる。プレート２７の後側は、Ｏリングシール２５により主本体１２に対して密封される。

図３から理解することができるように、通路２４は、加圧ガスＧの流れおよび放出チューブ１９を両方とも通すものであり、洗浄が容易である単純な頭部構造が実現されている。

１つの実施形態では、ガス制御バルブ２０は、スプリングバルブである。

１つの実施形態では、密封手段は、スレッド部分１４およびプレート２７またはディスクを含み、容器がそのスレッド上側端部１２０または蓋を介してスレッド部分に接続されると、プレート２７またはディスクが、ガス制御バルブ２０を開放する。プレート２７またはディスクは、鋼鉄製であってもよく、またはプラスチック製であってもよい。

ある実施形態では、容器ホルダは、プレート２７またはディスクの下に平坦シール２３を、プレート／ディスクと主本体の内側表面または端部との間にＯリング２５を更に含む。

図４には、異なる断面平面で切り取った主本体１２の更なる断面図が示されている。この図では、ガイドピン３０は、ガイドスプリング３１により適所に付勢されるように示されている。ガイドピン３０の目的は、容器１００が主本体１２に適所に螺合される際のプレート２７の回転を止めることである。

ある実施形態では、容器ホルダと共に使用される容器は、スレッド１１０が、容器ホルダのスレッド１４と噛合する限り、任意の形状またはサイズであってもよい。あるいは、様々な容器用の様々なスレッドを有するアダプター部品を使用して、様々な容器を様々な容器ホルダに接続することができる。好ましい実施形態では、容器は、ファルコンチューブ等の５０ｍｌチューブである。

容器ホルダは、ガス制御バルブが開位置にある場合、容器が不活性ガスで加圧され、容器中の溶液が外的環境から隔離されるように設計されている。ある実施形態では、不活性ガスは、水分非含有であってもよい。ある他の実施形態では、不活性ガスは窒素である。

図５および６には、本発明の第２の態様が示されている。複数の容器１００を保持する改変型容器ホルダを含む容器ホルダパネル５０が示されている。改変型容器ホルダ１０’は、複数の容器受容スレッド開口部１４’、共通ガス入口１６’、および複数の出口１８を有する。図５では、垂直支持体５５に上下に設置され、容器ホルダパネル５０を形成する４つの容器ホルダ１０’が示されている。

別の例示的な実施形態では、本発明は、各列が少なくとも２つの容器ホルダを有する少なくとも２列の容器ホルダを含む容器ホルダパネル５０に関する。好ましい実施形態では、容器ホルダパネルは、各列が少なくとも８つの容器ホルダを有する少なくとも４列の容器ホルダを含む。

１つの実施形態では、各容器ホルダのガス入口は、共通のガス供給源に接続されている。

図６には、ポリペプチド合成等の化学合成の装置に使用されるパネル５０が示されている。

ある実施形態では、容器ホルダパネルは、ペプチド合成機６０にアミノ酸溶液を供給するために使用される。ある好ましい実施形態では、容器ホルダパネル５０は、ポリペプチド合成の実施に必要なアミノ酸溶液全てをペプチド合成機６０に供給するために使用される。

本発明の別の態様では、ポリペプチドを合成する方法であって、
（ａ）既存ペプチドのアルファアミノ保護基を脱保護する合成ステップ、
（ｂ）アミノ酸の供給源からの次のアミノ酸をミキサー中で事前に活性化する合成ステップ、および
（ｃ）活性化アミノ酸を上記既存ペプチドにカップリングする合成ステップのサイクルを含み、
少なくとも１つのアミノ酸が、本発明の一態様による容器ホルダに接続されている容器から供給される方法が提供される。１つの例示的な実施形態では、各アミノ酸は、容器ホルダに接続されている個々の容器から供給される。

本発明の第３の態様では、ポリペプチドを合成する方法であって、
（ａ）既存ペプチドのアルファアミノ保護基を脱保護する合成ステップ、
（ｂ）アミノ酸の供給源からの次のアミノ酸をミキサー中で事前に活性化する合成ステップ、および
（ｃ）活性化アミノ酸を上記既存ペプチドにカップリングする合成ステップのサイクルを含み、
少なくとも１つのアミノ酸が、本発明の一態様による容器ホルダパネルの容器ホルダに接続されている容器から供給される方法が提供される。１つの例示的な実施形態では、各アミノ酸は、容器ホルダパネルの容器ホルダに接続されている容器から供給される。

ポリペプチド合成のサイクルプロセスを、下記に簡単に記載する。

例示的なポリペプチド合成プロセス
ポリペプチドは、カラムに充填された固体支持体で合成することができる。必要とされるカラム体積ＣＶは、支持体の膨潤特性および更に生成しようとするペプチドの量／長さに関連する。支持体は、装置に設置する前に、乾燥形態またはスラリーのいずれでカラムに付加してもよい。合成プロセスは、各サイクルにて、１つのアミノ酸を伸長中のペプチド鎖に追加するサイクル手順である。最初のアミノ酸（ＡＡ）が、支持体のα−アミン反応サイトに既に結合されており、２番目のＡＡをカップリングする準備ができていてもよい。各サイクルでは、様々な化学薬品／試薬が、充填カラムに段階的にポンプ送出される。

（１）合成ステップ
各サイクルは、以下を含む：
・カラム中の既存ペプチドのアルファアミノ保護基を脱保護すること、
・次のアミノ酸をミキサー中で事前に活性化すること、
・カラムに再循環させて事前活性化アミノ酸をカップリングすること、
・随意に、アミノ酸鎖の最後の未結合アミノ酸を、その後の合成ステップ全体にわたっていかなるアミノ酸とも結合しないように、ブロッキングするキャッピングステップ。

各サイクルでの個々のステップ後に、経路およびカラムを洗浄して、あらゆる交差汚染および望ましくない反応を排除する。所望のポリペプチド産物（アミノ酸鎖）が生成されるまで、サイクルを繰り返す。

最初に、目的のＡＡ配列を、使用する固体支持体、各ＡＡ用の活性化およびカップリング混合、および更にそれぞれ必要な活性化時間およびカップリング時間と共にソフトウエアに入力する。

１．既存ペプチドの最後のＡＡの脱保護により、Ｆｍｏｃ保護基が除去されることになる。これは、溶媒（通常は、ＮＭＰまたはＤＭＦ）と混合されている脱保護剤（例えば、ピペリジン）を添加にすることにより実施される。カラムをフラッシングし、混合物を廃棄ラインに除去する。この段階でＮ末端が遊離され、活性化されている必要のある次のＡＡと反応する。
経路、カラム、およびミキサーを、溶媒（通常は、ＮＭＰまたはＤＭＦ）で洗浄する。

２．伸長中のペプチドにカップリングされる次のＡＡの事前活性化は、ミキサー中で実施される。ＡＡの活性化に必要な場合、添加剤および塩基を、目的のＡＡおよびカップリング試薬ＣＲと共に混合物に添加する。添加剤、塩基、およびＣＲ試薬には選択肢があり、選択は、特定のＡＡおよび実施するカップリングに依存する。

３．事前活性化アミノ酸のカップリングは、カップリング混合物をカラムにポンプ送出することにより実施される。この反応は緩やかであり、カップリング率を高めるためには再循環が必要である。

このステップを実施した後、経路、カラムを洗浄し、ミキサーを清浄して、事前活性化ＡＡの検出レベルを≦０．０１％にする。

時として、実施しようとするカップリングに応じて、次のＡＡを付加する前にあらゆる未反応α−アミン部位を排除することが必要とされることがある。したがって、この目的を達成するために、場合によってはカラムをキャッピング剤でフラッシングしてもよい。

次のＡＡカップリングのために合成サイクルを継続する。

（２）合成後ステップ
合成が終了したら、カラムを装置から取り外す。物質を乾燥し、その後ペプチドを支持体から切断してから、ろ過／精製する。粗ペプチドを切断した後に残る支持体は、使い捨てなので廃棄される。

容器ホルダ
アミノ酸の各々は、有機溶媒に溶解され、空気中の湿気から保護される必要がある。これは、ＡＡ溶液を保持する容器をわずかな正圧で加圧して、ペプチド合成プロセス中に容器が空になっていくと共に空気が容器内に入り込まないようにすることにより達成される、容器の加圧は、容器をボトルホルダのガス入口に接続し、その後不活性ガスを容器に分配することにより達成される。ガス流をスプリングバルブで制限して、ボトルが取り外されてもガス漏洩がないようにする。ボトルが完全に取り付けられると、スプリングバルブの開口部は、ガス入口と一致し、ガスはボトルへと自由に流れ込む。図１。

ＡＡの容器ホルダは、良好な使いやすさを有し、適切な機能性を保証するのが重要である。使いやすさの問題は、効果的でロバストな様式で、容器を流路に接続および流路から取り外すことに関連する。機能性は、ＡＡが水分を含まないようにしておく必要性に関することがほとんどであるが、入口チューブにある程度の正圧をかけて、ＡＡ溶液が高粘性であることによるキャビテーションを防止することも有用である。

容器ホルダの主本体には、容器が完全に接続されると開き（図２）、容器が分離されると閉じる（図３）ガス制御バルブが装備されている。

容器が容器ホルダと接続されると、鋼鉄ディスクがスプリングバルブと係合してガス入口を開放し、ガスは、鋼鉄ディスクにある溶液出口用の大型穴から容器へと進入する。チューブ内へのガス流は、図２の緑色破線矢印により示されている。Ｏリングおよび平坦ゴムシールを使用して、ガス漏洩を防止することができる。図２の赤色および青色破線円を参照されたい。Ｆｉｎｇｅｒｔｉｇｈｔ １／１６”コネクタ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社製）を、ガス入口およびアミノ酸出口に使用して、ガス漏洩を防止することができる。

容器が容器ホルダにしっかりと接続されていないと、鋼鉄ディスクは、重力およびスプリングバルブ内部の内部ばね力により降下することになる。スプリングバルブは、その内部Ｏリングにより密封されることになる。図３。図１〜４に示されているスプリングバルブは、自動車タイヤに広く使用されている代表的なシュレーダーバルブである。

随意に、２つの円柱形ガイドピンが、その回転を防止する鋼鉄ディスクに取り付けられている。そうでなければ、アミノ酸出口毛細管用の大型穴が適所からずれてしまうだろう（図４）。ガイドピンには、したがって、スプリングバルブの内部スプリングを支持するために（つまり、バルブディスクの適切な戻りを保証するために）それ自体のコイルスプリングが設けられていてもよい。

図１〜４に示されている自動ガス制御装置は、ガス消費を削減すること、ならびに容器が適所にある場合にガス流を確保することにより、付加価値を提供する。適切なサイズの接続部を用いれば、あらゆる容器を容器ホルダと共に使用することができる。好ましい容器は、ファルコン５０ｍｌチューブである。

ポリペプチド合成機と共に使用するための容器ホルダパネル
ほとんどのポリペプチドは、多数の異なるアミノ酸で構成されている。したがって、ペプチド合成機は、単回のポリペプチド合成実施で、２０種以上の異なるアミノ酸を取り込むことができる必要がある場合がある。したがって、２０個以上の容器ホルダが、各合成実施に必要となる場合がある。したがって、単一の容器ホルダの代わりに、容器ホルダパネルを使用して、アミノ酸および他の溶液をより良好にやりくりし、合成プロセスへのヒト介入を最小限に抑えることが望ましい。

したがって、容器ホルダパネルは、２つ以上の容器ホルダを含んでいてもよい。１つの例では、容器ホルダは、３２か所の標準５０ｍｌファルコンチューブ位置および外部のより大型の容器に不活性ガス（例えばＮ_２）を供給するための１０個のＦｉｎｇｅｒｔｉｇｈｔ １／１６”接続部（パネルの各側に５個）を備える。３２か所のファルコンチューブ位置には、チューブが接続されると開き、チューブが分離されると閉じるガス制御バルブが個々に装備されている。ガスチューブは、壁の一部として容器パネル壁と一体化されていてもよく、または容器パネルの反対側にあってもよい。ガスチューブは、容器に干渉しない限り、いかなる場所あってもよい。

容器と対応する容器ホルダとの接続は、容器の蓋にあるスレッドを、容器ホルダの対応するスレッド部分と螺合させることにより実現することができる。したがって、１つの実施形態では、容器ホルダパネルの幾つかの容器ホルダは、異なる容器を受容するための異なるタイプのスレッドを有していてもよい。別の実施形態では、容器ホルダパネルの容器ホルダは、同じタイプのスレッドを有しており、様々な容器のための様々なスレッドを有するアダプター部品を使用して、様々な容器を容器ホルダパネルのホルダに接続することができる。

容器ホルダパネルは、支持体部材を有する自立ユニットであってもよく（図５）、またはキャビネットレールに設置されていてもよい（図６）。

個々の容器ホルダまたは容器ホルダパネルのいずれかのガス入口に接続されている容器は、Ｎ_２等の不活性ガスを使用して、約０．１〜約０．５ｂａｒに加圧されていてもよい。容器ホルダパネルには５０ｍｌファルコンチューブが好ましいが、２００ｍｌまでの容器であれば、実験室規模のポリペプチド合成機に使用することができる。重量および交差汚染のリスクを最小限に抑えるため、高耐薬品性プラスチックの単回使用チューブの使用が好ましい場合がある。

本発明の特定の実施形態が図示および記載されているが、当業者であれば、本発明の教示から逸脱せずに変更および改変をなすことができることは明らかであろう。例えば、本明細書にはペプチド合成が例として挙げられているが、記載および図示されている容器ホルダは、タンパク質またはオリゴヌクレオチドの合成等の、他の合成技術に使用される幅広い応用可能性を有することになることは、熟練した読者であれば明白であろう。上述の記載および添付の図面に示されているものは、限定としてではなく、単に例示のために提示されている。本発明の実際の範囲は、従来技術に基づいて適切な観点で検討される添付の特許請求の範囲に規定されることが意図されている。

Ｌ 液体
Ｇ ガス
１０ 容器ホルダ
１０’ 改変型容器ホルダ
１２ 容器ホルダ主本体
１４ 内側スレッド開口部、スレッド部分
１４’ 容器受容スレッド開口部
１６ ガス入口
１６’ 共通ガス入口
１８ 液体溶液出口
１９ 放出チューブ
２０ ガス制御バルブ
２２ 密封手段
２３ 弾性平坦密封部材、平坦シール
２４ 通路
２５ Ｏリングシール、Ｏリング
２６ 前室
２７ バルブ作動プレート
２８ ばね付勢ピン
２９ バルブピン
３０ ガイドピン
３１ ガイドスプリング
５０ 容器ホルダパネル
５５ 垂直支持体
１００ 容器
１１０ 相補的スレッド上方部分
１２０ スレッド上端部

Claims (20)

1. 主本体（１２）を含む容器ホルダ（１０、１０’）であって、前記主本体（１２）が、
   （ａ）ガス入口（１６）、
   （ｂ）溶液出口（１８）、
   （ｃ）不活性ガスが前記ガス入口（１６）から容器（１００）に進入することを可能にするガス制御バルブ（２０）、および
   （ｄ）前記不活性ガスを入力するためのおよび前記容器（１００）中のアミノ酸溶液（Ｌ）を放出するための通路（２４）を含む、使用中に前記容器（１００）を密封するための密封手段（２２）を含み、
   前記容器（１００）が前記密封手段（２２）により前記容器ホルダ（１０、１０’）に密封的に接続されると、前記ガス制御バルブ（２０）が自動的に開き、前記容器（１００）が前記容器ホルダ（１０、１０’）から分離されると、前記ガス制御バルブ（２０）が自動的に閉じ、
   前記主本体が、内側スレッド開口部（１４）を含み、前記密封手段（２２）が、前記スレッド開口部（１４）に相補的なスレッド部分およびプレート（２７）を含み、前記容器（１００）が、前記スレッド部分と接続されると、前記プレート（２７）が前記ガス制御バルブ（２０）を開き、
   前記容器ホルダ（１０、１０’）が、前記プレート（２７）の回転を防止するために、前記プレート（２７）に取り付けられて前記プレート（２７）で作動可能な１つまたは複数のガイドピン（３０）を更に含む、容器ホルダ（１０、１０’）。
2. 前記ガス制御バルブ（２０）が、プレート（２７）により作動可能であるスプリングバルブであり、前記プレート（２７）が、前記容器（１００）を前記容器ホルダ（１０、１０’）に密封的に接続する行為により転置される、請求項１に記載の容器ホルダ（１０、１０’）。
3. 前記プレート（２７）が、前記容器（１００）と前記入口（１６）とを流体的に相互接続するための通路（２４）を含み、前記出口（１８）が、前記容器（１００）内へと伸長する放出チューブ（１９）を含み、前記通路（２４）が前記チューブ（１９）を受容する、請求項２に記載の容器ホルダ（１０、１０’）。
4. 前記プレート（２７）の下に平坦シール（２３）を、および前記プレート（２７）と前記開口部（１４）の内部表面との間にＯリング（２５）を更に含む、請求項１に記載の容器ホルダ（１０、１０’）。
5. 前記ガイドピン（３０）を作動可能な位置へと付勢するためのコイルスプリングを更に含む、請求項１に記載の容器ホルダ（１０、１０’）。
6. 前記容器（１００）の少なくとも幾つかが、５０ｍｌチューブである、請求項１に記載の容器ホルダ（１０、１０’）。
7. 前記ガス制御バルブ（２０）が開位置にある場合、前記容器（１００）が前記不活性ガスで加圧され、前記容器（１００）中の前記溶液がその外的環境から隔離される、請求項１に記載の容器ホルダ（１０、１０’）。
8. 前記不活性ガスが水分を含んでいない、請求項７に記載の容器ホルダ（１０、１０’）。
9. 前記不活性ガスが窒素である、請求項７に記載の容器ホルダ（１０、１０’）。
10. ペプチド合成機またはオリゴヌクレオチド合成機等の合成機に前記アミノ酸溶液（Ｌ）を供給するために使用される、請求項１に記載の容器ホルダ（１０、１０’）。
11. 請求項１乃至１０のいずれか１項に記載の２つ以上の容器ホルダ（１０’）を含む、容器ホルダパネル（５０）。
12. 少なくとも２列の容器ホルダ（１０’）を含み、各列が少なくとも２つの容器ホルダ（１０’）を含む、請求項１１に記載の容器ホルダパネル（５０）。
13. ４列の容器ホルダ（１０’）を含み、各列が、８つの容器ホルダ（１０’）を含む、請求項１１に記載の容器ホルダパネル（５０）。
14. 各容器ホルダ（１０’）の前記ガス入口（１６）が、共通のガス供給源（１６’）に接続されている、請求項１１に記載の容器ホルダパネル（５０）。
15. ペプチド合成機にアミノ酸溶液（Ｌ）を供給するために使用される、請求項１１に記載の容器ホルダパネル（５０）。
16. ペプチド合成機に全てのアミノ酸溶液（Ｌ）を供給するために使用される、請求項１１に記載の容器ホルダパネル（５０）。
17. ポリペプチドを合成する方法であって、
    （ａ）既存ペプチドのアルファアミノ保護基を脱保護する合成ステップ、
    （ｂ）アミノ酸の供給源からの次のアミノ酸をミキサー中で事前に活性化する合成ステップ、および
    （ｃ）活性化アミノ酸を前記既存ペプチドにカップリングする合成ステップのサイクルを含み、
    少なくとも１つのアミノ酸が、請求項１乃至１０のいずれか１項に記載の容器ホルダ（１０、１０’）または請求項１１乃至１６のいずれか１項に記載の容器ホルダパネル（５０）に接続されている容器（１００）から供給される方法。
18. 前記アミノ酸または各アミノ酸が、容器ホルダ（１０、１０’）または容器ホルダパネル（５０）に接続されているそれぞれの容器（１００）から供給される、請求項１７に記載の方法。
19. ポリペプチドを合成する方法であって、
    （ａ）既存ペプチドのアルファアミノ保護基を脱保護する合成ステップ、
    （ｂ）アミノ酸の供給源からの次のアミノ酸をミキサー中で事前に活性化する合成ステップ、および
    （ｃ）活性化アミノ酸を前記既存ペプチドにカップリングする合成ステップのサイクルを含み、
    少なくとも１つのアミノ酸が、請求項１１に記載の容器ホルダパネル（５０）の容器ホルダ（１０’）に接続されている容器（１００）から供給される方法。
20. 各アミノ酸が、前記容器ホルダパネル（５０）の容器ホルダ（１０’）に接続されている容器（１００）から供給される、請求項１９に記載の方法。