JP6634444B2 - ヘリコバクター治療 - Google Patents

Description

本発明は、患者における、炎症を治療および／または阻止する方法に関する。さらに、本発明は、病気の治療または阻止のための、治療および／または予防ワクチンだけでなく、ポリペプチドまたはそのフラグメントを含む免疫原性組成物に関する。

ヘリコバクター・ピロリ菌は、人間の胃の主要病原体（ｍａｊｏｒ ｐａｔｈｏｇｅｎｓ）である、グラム陰性の細菌である。感染は、通常、経口−経口ルートで伝送されることが、最も確率の高く、小児期に起こる。一旦、確立されると、事実上、全ての感染症は一生続き、世界の人口の半分がこれらの細菌に感染していると推定される。

ヘリコバクター・ピロリ菌の感染は、幾らかの個人において、胃潰瘍（ｇａｓｔｒｉｃ ｕｌｃｅｒｓ）、十二指腸潰瘍（ｄｕｏｄｅｎａｌ ｕｌｃｅｒｓ）、胃のＭＡＬＴリンパ腫（ｇａｓｔｒｉｃ ＭＡＬＴ ｌｙｍｐｈｏｍａ）、および、胃腺癌（ｇａｓｔｒｉｃ ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ）を含む、疾患（ｐａｔｈｏｌｏｇｉｅｓ）の範囲の発症における、主な病因の要因である、慢性胃炎を活発化する。胃腺癌は、悪性のために、世界で、肺や肝臓癌に次いで、死亡の３番目の主要な原因のままである。これらのヘリコバクター・ピロリ菌に付随する疾患の発症は、慢性胃炎の直接結果であり、そして、炎症が重度であればあるほど、これらの病態が発症する可能性が高い、ということは、完全に受け入れられている。

ヘリコバクター・ピロリ菌の感染は、抗生物質の組合せ療法によって、現在、治療されている。しかし、抗生物質に耐性の発症の増加が、深刻な問題である。最初の治療による失敗率は、２０％で、そして、２番目の治療では、２５％であり、治療の２ラウンド後の全体の失敗率を５％にする。耐性率の増加に伴い、この率は、今後数年で、増加すると予測されている。

発見以来、ヘリコバクター・ピロリ菌感染からの保護を目的とした、効果的なワクチンの開発のために、大きな努力がされてきた。したがって、これらの努力は、これまで、完全に成功しなかった。効果的なワクチンの開発を阻止する主な問題は、確実に、殺菌免疫（ｓｔｅｒｉｌｉｓｉｎｇ ｉｍｍｕｎｉｔｙ）を作ることができないことである。動物モデルで、ヘリコバクター・ピロリ菌のコロニー形成を減少させるであろう、多数のワクチン アプローチがあるが、いずれも、完全に、根絶（ｅｒａｄｉｃａｔｅ）をすることはできないであろう。臨床試験では、今日まで、いかなる有効性の証拠も示さないが、予防または治療上の、マウスのワクチン接種は、基本的には、細菌数で、１−２ログの減少を齎す。

また、予防のワクチン接種によって誘導された、マウスにおける防御免疫は、一般的に、胃炎の重症度（ワクチン接種後胃炎（ｐｏｓｔ−ｉｍｍｕｎｉｓａｔｉｏｎ ｇａｓｔｒｉｔｉｓ）と呼ばれる）の増加が付随するが、これは、治療的ワクチンには、報告されていない。

したがって、ヘリコバクター・ピロリ菌によって引き起こされる、炎症および疾患の、効果的な予防と治療法の必要性が残っている。

［概要］
本発明者は、患者を、ＨｔｒＡポリペプチドで免疫化することは、ワクチン接種後の細菌感染の持続性にもかかわらず、細菌により誘導される、炎症および疾患の発症を減少又は阻止することを見出した。

したがって、最初の側面は、患者において、細菌により誘導される炎症を、治療又は阻止する方法を提供する。この方法は、患者に、細菌のＨｔｒＡポリペプチド、または、少なくとも、１０のアミノ酸のそのフラグメント、および／または、細菌のＨｔｒＡに結合する抗体を投与することを含む。

前記最初の側面の１つの実施形態では、当該方法は、細菌のＨｔｒＡポリペプチドまたは、少なくとも、１０のアミノ酸のフラグメントを含む、免疫原性組成物を投与することを含む。

２番目の側面は、患者における、細菌により誘導された炎症の治療または阻止において、細菌のＨｔｒＡポリペプチドまたは、少なくとも、１０のアミノ酸のそのフラグメント、および／または、細菌のＨｔｒＡに結合する抗体の使用を提供する。

３番目の側面は、患者における、細菌により誘導された炎症の治療または阻止のための医薬の製造において、細菌のＨｔｒＡポリペプチドまたは、少なくとも、１０のアミノ酸のそのフラグメント、および／または、細菌のＨｔｒＡと結合する抗体の使用を提供する。

前記１〜３の側面の、１つの実施形態では、前記炎症は、腸管病原細菌（ｅｎｔｅｒｏｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ）によって誘導され、そして、前記ＨｔｒＡポリペプチドは、腸管病原細菌の（ｅｎｔｅｒｏｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ）ＨｔｒＡポリペプチド、または、少なくとも、１０のアミノ酸のそのフラグメントである。１つの特定の実施形態では、前記腸管病原細菌（ｅｎｔｅｒｏｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ）は、ヘリコバクター・ピロリ菌、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、赤痢菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｆｌｅｘｎｅｒｉ，）、およびカンピロバクター・ジェジュニ（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｊｅｊｕｎｉ）、および／または、前記腸管病原細菌（ｅｎｔｅｒｏｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ）のＨｔｒＡは、ヘリコバクター・ピロリ、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、赤痢菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｆｌｅｘｎｅｒｉ，）およびカンピロバクター・ジェジュニ（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｊｅｊｕｎｉ）のＨｔｒＡから選択される。

前記１〜３の側面の、他の実施形態では、前記炎症は、ヘリコバクター・ピロリ菌により誘導され、そして、前記ＨｔｒＡポリペプチドは、ヘリコバクター・ピロリ菌のＨｔｒＡポリペプチドまたは、少なくとも、１０のアミノ酸のそのフラグメントである。

前記１〜４の側面の、他の実施形態では、前記ＨｔｒＡポリペプチドまたは、少なくとも、１０のアミノ酸のそのフラグメントは、配列番号１乃至６のいずれか１つ、または、少なくとも、１０のアミノ酸のそのフラグメントと、少なくとも、９５％同一であるアミノ酸配列を含む。

前記１〜３の側面の、他の実施形態では、前記ＨｔｒＡポリペプチドまたは、少なくとも、１０のアミノ酸のそのフラグメントは、配列番号７乃至３６のいずれか１つと、少なくとも、９５％同一であるアミノ酸配列を含む。

前記１〜３の側面の、他の実施形態では、前記細菌で誘導された炎症は、胃炎および／または十二指腸炎（ｇａｓｔｒｉｔｉｓ ａｎｄ／ｏｒ ｄｕｏｄｅｎｉｔｉｓ）である。

前記１〜３の側面の、また、他の実施形態では、前記炎症は、萎縮性胃炎（ａｔｒｏｐｈｉｃ ｇａｓｔｒｉｔｉｓ）である。

４番目の側面は、患者において、細菌により誘導された炎症の、治療または予防に使用するために、細菌のＨｔｒＡポリペプチド、または、少なくとも、１０のアミノ酸のそのフラグメント、および／または、細菌のＨｔｒＡと結合する抗体を含む免疫原性組成物、を提供する。

前記４番目の側面の１つの実施形態では、前記免疫原性組成物は、細菌のＨｔｒＡポリペプチド、または、少なくとも、１０のアミノ酸のそのフラグメントを含む。

前記４番目の側面の、別の実施形態では、前記細菌のＨｔｒＡポリペプチド、または、少なくとも、１０のアミノ酸のそのフラグメントは、ヘリコバクター・ピロリ菌のポリペプチドまたは、その、少なくとも、１０のアミノ酸のそのフラグメントである。

前記４番目の側面の別の実施形態では、その組成物は、配列番号１乃至６のいずれか１つ、または、少なくとも、１０のアミノ酸のそのフラグメントと、少なくとも、９５％同一である、アミノ酸配列を含む、ＨｔｒＡポリペプチドを含む。

前記４番目の側面の別の実施形態では、前記ＨｔｒＡポリペプチドまたは、少なくとも、１０のアミノ酸のそのフラグメントは、配列番号７乃至３６のいずれか１つと、少なくとも、９５％同一である、アミノ酸配列を含む。

前記４番目の側面の別の実施形態では、前記組成物は、薬学的に許容できる賦形剤および／またはアジュバントを含む。

前記４番目の側面の、まだ別の実施形態では、前記免疫原性組成物は、ワクチンである。１つの特定の実施形態では、前記免疫原性組成物は、治療用ワクチンである。

５番目の側面は、細菌のＨｔｒＡポリペプチドに結合する抗体を含む医薬組成物を提供する。好ましくは、当該抗体は、特に、ＨｔｒＡに結合する。

一実施形態では、当該抗体は、ヘリコバクター・ピロリ菌のＨｔｒＡポリペプチドに結合する。

前記５番目の側面の別の実施形態では、当該抗体は、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体（ｈｕｍａｎｉｓｅｄ ａｎｔｉｂｏｄｙ）、ヒト抗体（ｈｕｍａｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ）、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２、または、ｓｃＦｖである。

６番目の側面では、細菌により誘導された炎症の治療または阻止のための薬剤の製造において、ここに記載した前記免疫原性組成物、ここに記載した前記医薬組成物、または、細菌のＨｔｒＡに結合する抗体の使用を提供する。

前記６番目の側面の一実施形態では、前記細菌により誘導された炎症は、ヘリコバクター・ピロリ菌により誘導される炎症である。

前記６番目の側面の別の実施形態では、前記細菌により誘導される炎症は、胃炎および／または十二指腸炎（ｇａｓｔｒｉｔｉｓ ａｎｄ／ｏｒ ｄｕｏｄｅｎｉｔｉｓ）である。１つの特定の実施形態では、当該炎症は、萎縮性（ａｔｒｏｐｈｉｃ）胃炎である。

７番目の側面では、免疫原性組成物を製造する方法を提供することで、当該方法は、ＨｔｒＡポリペプチドまたは、少なくとも、１０のアミノ酸のそのフラグメントと、薬学的に許容される賦形剤および／またはアジュバントを混合することを含む。

前記７番目の側面の１つの実施形態では、当該方法は、ＨｔｒＡポリペプチドを単離することを含む。１つの特定の実施形態では、当該ＨｔｒＡポリペプチドは、組換えＨｔｒＡポリペプチドである。

前記７番目の側面の一実施形態では、前記免疫原性組成物はワクチンである。

８番目の側面は、患者における、ヘリコバクター・ピロリ菌の感染によって引き起こされる病気の、治療または阻止する方法を提供する。当該方法は、患者に、ＨｔｒＡポリペプチドまたは、少なくとも、１０のアミノ酸のそのフラグメントを投与することを含む。

前記８番目の側面の１つの実施形態では、当該方法は、患者に、ＨｔｒＡポリペプチド、または、少なくとも、１０のアミノ酸のそのフラグメントを含む、免疫原性および／または医薬組成物を投与することを含む。

前記７または８の側面の１つの実施形態では、前記ＨｔｒＡポリペプチドまたは、少なくとも、１０のアミノ酸のそのフラグメントは、ヘリコバクター・ピロリ菌のＨｔｒＡポリペプチド、または、少なくとも、１０のアミノ酸のそのフラグメントである。

前記７または８の側面の別の実施形態では、前記ＨｔｒＡポリペプチドは、配列番号１乃至６、または、少なくとも、１０のアミノ酸のそのフラグメントの、いずれか１つと、少なくとも、９５％同一である、アミノ酸配列を含む。

前記７または８番目の側面の別の実施形態では、前記ＨｔｒＡポリペプチドまたは、そのフラグメントは、配列番号７乃至３６のいずれか１つと、少なくとも、９５％同一である、アミノ酸配列を含む。

前記８番目の側面の１つの実施形態では、前記免疫原性組成物は、薬学的に許容される賦形剤および／またはアジュバントを含む。

前記８番目の側面の別の実施形態では、ヘリコバクター・ピロリ菌の感染によって引き起こされる前記疾患は、炎症、胃炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍、胃癌、および／または、粘膜内リンパ組織（ＭＡＬＴ）リンパ腫（ｌｙｍｐｈｏｍａ）である。

前記、最初と８番目の側面の１つの実施形態では、当該方法は、ＨｔｒＡポリペプチドまたは、少なくとも、１０のアミノ酸のそのフラグメントを含む、弱毒化された細菌またはウィルスを、患者に投与することを含む。

前記３から７番目の側面の１つの実施形態では、当該組成物または薬剤は、患者に、前記ＨｔｒＡポリペプチドまたは、少なくとも、１０のアミノ酸のそのフラグメントを含む、弱毒化された細菌またはウィルスを含む。

９番目の側面は、ＨｔｒＡポリペプチドまたは、少なくとも、１０のアミノ酸のそのフラグメントを含む、弱毒化された細菌またはウィルスを提供する。

一実施形態では、前記ＨｔｒＡポリペプチドまたは、少なくとも、１０のアミノ酸のそのフラグメントは、ヘリコバクター・ピロリ菌のＨｔｒＡポリペプチドまたは、少なくとも、１０のアミノ酸のそのフラグメントである。

別の実施形態では、前記ＨｔｒＡポリペプチドは、配列番号１乃至６、または、少なくとも、１０のアミノ酸のそのフラグメントのいずれか１つと、少なくとも、９５％同一である、アミノ酸配列を含む。

まだ、他の実施形態では、そのフラグメントは、配列番号７乃至３６のいずれか１つと、少なくとも、９５％同一である、アミノ酸配列を含む。

１０番目の側面は、細菌のＨｔｒＡポリペプチドまたは、少なくとも、１０のアミノ酸のそのフラグメントをコードするポリヌクレオチドを含む、ＤＮＡワクチンを提供する。

一実施形態では、前記ポリヌクレオチドは、アミノ酸配列１乃至３６のいずれか１つと、少なくとも、９５％同一のアミノ酸配列を含む、ＨｔｒＡポリペプチドまたは、少なくとも、１０のアミノ酸のフラグメントをコードする。

他の実施形態では、ＤＮＡワクチンを患者に投与すると、前記ポリペプチドが発現され、そして、当該ポリペプチドに免疫応答が発生する。

明らかに、本発明の１つの側面の、好適な機能および特徴は、本発明の他の多くの側面に適用可能である。

この明細書を通じて、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という用語、または、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などのバリエーションは、言及された構成要素、整数またはステップ、あるいは、構成要素、整数またはステップのグループを、包含し、なにか他の構成要素、整数またはステップあるいは、構成要素、整数またはステップのグループを除外しない、意味であると理解されるであろう。

本発明を、次の非限定の実施例の方法で、添付の図を参照しながら、以下に、説明する。

図１は、組換えＨｔｒＡを用いた、予防のワクチン接種（Ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ）が、ヘリコバクター・ピロリ菌の抗原投与に対する、何らかの保護を誘導することを示す。マウスのグループ（ｎ＝６）は、死んだ、ヘリコバクター・ピロリ菌とコレラ毒素（ＣＴ）アジュバント（ａｄｊｕｂａｎｔ）（ポジティブ コントロール）、あるいは、ＨｔｒＡとＣＴで、２度、経鼻のルートで免疫化された。ネガティブ コントロールは、ＰＢＳ（ｎ＝５）で、偽投与された。２回目の投与後、４週間で、全てのマウスは、生きているヘリコバクター・ピロリ菌ＳＳ１株（ｓｔｒａｉｎ）抗原投与された。マウスの胃の中に細菌負荷（Ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｂｕｒｄｅｎｓ）は、コロニー形成アッセイによって、４週間後に評価された。ワクチン接種は、ネガティブ コントロールのグループと比較して、細菌のコロニー形成（ｃｏｌｏｎｉｓａｔｉｏｎ）を減少した（＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１；分散分析（ＡＮＯＶＡ））。 図２は、組換えＨｔｒＡによる、予防のワクチン接種（Ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ）は、ワクチン接種後の胃炎を引き起さない。マウスの胃は、組織学的に、胃炎の評価がされた。予想通り、抗原投与の前に（ｂｅｆｏｒｅ ｃｈａｌｌｅｎｇｅ）、死んだヘリコバクター・ピロリ菌とＣＴでワクチン接種されたマウスは、ネガティブ コントロール グループと比較して、胃炎の重症度が、顕著に増加した（＊マン−ホイットニー）。しかしながら、ＨｔｒＡとＣＴで、ワクチン接種されたマウスの胃炎は、ネガティブ コントロール グループと区別がつかなかった。換言すれば、図１に示された、保護免疫（ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｉｍｍｕｎｉｔｙ）にも拘らず、これらのマウスは、ワクチン接種後の胃炎の発症から保護された。 図３は、組換えＨｔｒＡ（ｒＨｔｒＡ）を用いた、予防のワクチン接種は、ヘリコバクター・ピロリ菌の感染に対する応答における、胃のサイトカイン レベル（ｇａｓｔｒｉｃ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｌｅｖｅｌｓ）を抑制することを示す。図１に示された、マウスの胃組織中のサイトカイン レベルは、ＥＬＩＳＡ法により、定量された。予想通り、感染のコントロール マウス（ＰＢＳ）の胃の組織、および、ポジティブ コントロール ワクチン（ヘリコバクター・ピロリ菌とＣＴ）を受けたマウスは、高い、炎症反応を促進するとして知られている、サイトカインを含む高サイトカイン（ＩＦＮγおよびＩＬ−１７Ａ）レベルを示した。予想外に、ＨｔｒＡとＣＴによる、ワクチン接種は、感染マウスの、これらのサイトカインのレベルを有意に抑制し、非常に低い、または、検出不可能なレベルにした（＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１；分散分析（ＡＮＯＶＡ））。 図４は、組換えＨｔｒＡで、予防のワクチンを接種すると、抗体応答を中和する、酵素を誘導する。図１に示すように、血清（ｓｅｒａ）は、ワクチン接種された／抗原投与されたマウスから、実験の終わり（ヘリコバクター・ピロリ菌の抗原投与後、４週間）に、採取された。これらの血清を、カゼインのタンパク質開裂（ｐｒｏｔｅｏｌｙｔｉｃ ｃｌｅａｖａｇｅ ｏｆ ｃａｓｅｉｎ）を測定する前に、ＨｔｒＡと混合した。ＨｔｒＡで、ワクチン接種され、その後、ヘリコバクター・ピロリ菌で抗原投与された、マウスから得た血清は、他のグループから血清とは対照的に、このタンパク質の基質（＊＊＊分散分析（ＡＮＯＶＡ））を切断する、ＨｔｒＡプロテアーゼの能力を、阻害した。 図５は、ＨｔｒＡを用いたワクチン接種は、ＨｔｒＡに対する血清抗体を誘導する。Ｃ５７ＢＬ／６マウスのグループ（ｎ＝８）は、ｒＨｔｒＡとＣＴを用い、経鼻でワクチン接種された。３回のワクチン接種は、３週間の間隔を空け、与えられた。コントロール グループは、ＰＢＳで偽処置した（ｓｈａｍ−ｔｒｅａｔｅｄ）。最後のワクチン接種後、１週間で、マウスを死亡させ、そして、血清を収集した。ｒＨｔｒＡに対する抗体は、ＥＬＩＳＡ法により、測定した。 図６は、ＨｔｒＡとミョウバン（ａｌｕｍ）を注射することによる、治療的ワクチン接種は、ヘリコバクター・ピロリ菌による、コロニー形成を減少させないことを示す。Ｃ５７ＢＬ／６マウスのグループ（ｎ＝７／８）は、ミョウバン アジュバントだけ（ネガティブ コントロール）、ｒＨｔｒＡとミョウバン（ａｌｕｍ）または、ｒＨｔｒＡ^ｓａとミョウバン（ａｌｕｍ）のそれぞれについて、毎週４回の用量で、皮下注射をされる前、４週間、ヘリコバクター・ピロリ菌で感染された。最後のワクチン接種後、４週間、胃は、取り出され、そして、細菌のコロニー形成は、コロニー形成アッセイによって定量分析された。 図７は、ＨｔｒＡとミョウバン（ａｌｕｍ）を注射することによる、治療的ワクチン接種は、ヘリコバクター・ピロリ菌が誘導する胃炎に対して、保護する。治療的にワクチン接種されたマウスの胃における、胃炎の重症度（図６で記載するように）は、組織学的に、定量化された。Ａ）ｒＨｔｒａおよびｒＨｔｒＡ^ｓａグループは、別々に表示される。Ｂ）２つのｒＨｔｒＡグループは、一緒にされる。割合は、目に見える、細胞の膨張、化生または萎縮がなかったマウスの集団を示す。コロニー形成に何らの影響を有しないのにも拘らず（図６）、活性のｒＨｔｒａ、または、非活性のｒＨｔｒＡ^ｓａのそれぞれを用いた、ワクチン接種は、ヘリコバクター・ピロリ菌が誘導する萎縮性胃炎の発症に対する保護を齎した。 図７は、ＨｔｒＡとミョウバン（ａｌｕｍ）を注射することによる、治療的ワクチン接種は、ヘリコバクター・ピロリ菌が誘導する胃炎に対して、保護する。治療的にワクチン接種されたマウスの胃における、胃炎の重症度（図６で記載するように）は、組織学的に、定量化された。Ａ）ｒＨｔｒａおよびｒＨｔｒＡ^ｓａグループは、別々に表示される。Ｂ）２つのｒＨｔｒＡグループは、一緒にされる。割合は、目に見える、細胞の膨張、化生または萎縮がなかったマウスの集団を示す。コロニー形成に何らの影響を有しないのにも拘らず（図６）、活性のｒＨｔｒａ、または、非活性のｒＨｔｒＡ^ｓａのそれぞれを用いた、ワクチン接種は、ヘリコバクター・ピロリ菌が誘導する萎縮性胃炎の発症に対する保護を齎した。 図８は、ＨｔｒＡとミョウバン（ａｌｕｍ）を注射することによる、治療的ワクチン接種は、ヘリコバクター・ピロリ菌で誘導された、胃炎に対して、胃のサイトカインの顕著な増加なしに、保護する。ＨｔｒＡを用いて、治療的にワクチン接種された（図６に記載のように）、マウス由来の胃のホモジネート（ｈｏｍｏｇｅｎａｔｅｓ）における、サイトカイン レベルは、ＥＬＩＳＡ法により、定量された。いずれかの、ｒＨｔｒＡグループによるワクチン接種は、重要な胃のサイトカインについて、特に、ミョウバン（ａｌｕｍ）だけで、免疫化された、主のネガティブ コントロール グループと比較して、顕著な増加生成はされなかった。 図９は、ＨｔｒＡとミョウバン（ａｌｕｍ）を注射することによる、治療的、ワクチン接種は、ネイティブのＨｔｒＡに対する腸の抗体を誘導する。図６に記載されているように、腸内擦過は（Ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｓｃｒａｐｉｎｇｓ）、マウスから収集した。ヘリコバクター・ピロリ菌のＨｔｒＡと結合する抗体は、ウエスタン ブロットにより検出された。ブロットは、ネガティブ コントロール マウス（左側、感染せず、ワクチン接種されていない、または、感染され、その後、ミョウバン（ａｌｕｍ）でのみ注射された）、または、ヘリコバクター・ピロリ菌で感染されたマウスで、ｒＨｔｒＡとミョウバン（ａｌｕｍ）で、または、ｒＨｔｒＡ^ＳＡとミョウバン（ａｌｕｍ）でワクチン接種されたマウスを示す。レーンは、個々のマウスの血清を用いてプローブ化された（ｐｒｏｂｅｄ）ブロットを示す。

［配列表の凡例（ｋｅｙ）］
配列番号１−ヘリコバクター・ピロリ菌のＨｔｒＡポリペプチドのアミノ酸配列（ジェンバンク（Ｇｅｎｂａｎｋ）登録（ａｃｃｅｓｓｉｏｎ）：ＤＡＡ３４９６７）。
配列番号２−ヘリコバクター・ピロリ菌のＨｔｒＡポリペプチドのアミノ酸配列（ジェンバンク（Ｇｅｎｂａｎｋ）登録（ａｃｃｅｓｓｉｏｎ）：ＥＪＣ５３２７４）。
配列番号３−ヘリコバクター・ピロリ菌のＨｔｒＡポリペプチドのアミノ酸配列（ジェンバンク（Ｇｅｎｂａｎｋ）登録（ａｃｃｅｓｓｉｏｎ）：ＥＪＣ１３５６４）。
配列番号４−ヘリコバクター・ピロリ菌のＨｔｒＡポリペプチドのアミノ酸配列（ジェンバンク（Ｇｅｎｂａｎｋ）登録（ａｃｃｅｓｓｉｏｎ）：ＥＪＣ１０３３７）。
配列番号５−ヘリコバクター・ピロリ菌のＨｔｒＡポリペプチドのアミノ酸配列（ジェンバンク（Ｇｅｎｂａｎｋ）登録（ａｃｃｅｓｓｉｏｎ）：ＥＪＣ０９７６６）。
配列番号６−ヘリコバクター・ピロリ菌のＨｔｒＡポリペプチドのアミノ酸配列（ジェンバンク（Ｇｅｎｂａｎｋ）登録（ａｃｃｅｓｓｉｏｎ）：ＥＪＣ０７４８０）。
配列番号７〜３０−ヘリコバクター・ピロリ菌のＨｔｒＡポリペプチドのフラグメントのアミノ酸配列。
配列番号３１−ヘリコバクター・ピロリ菌のＨｔｒＡポリペプチドのトリプシン ドメインのアミノ酸配列。
配列番号３２〜３５−ヘリコバクター・ピロリ菌のＨｔｒＡポリペプチド ＰＤＺ１ドメインのアミノ酸配列。
配列番号３６−ヘリコバクター・ピロリ菌のＨｔｒＡポリペプチド ＰＤＺ２ドメインのアミノ酸配列。
配列番号３７〜４０−オリゴヌクレオチドのプライマー。

［発明の詳細な説明］

［一般的な技術と定義］
特に、他に定義がない限り、ここで使用される、全ての技術的および科学的用語は、当業者（例えば、免疫学、微生物学および生化学における）に一般的に理解されているのと同じ意味を持つものとしなければならない。

特記されない限りは、本発明において、利用されている、分子遺伝学、生化学、および免疫学的なテクニックは、当業者によく知られている標準的な手順である。そのようなテクニックは、
Ｊ、Ｐｅｒｂａｌ、分子クローニングの実用的なガイド、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ（１９８４年）、
Ｊ．ＳａｍｂｒｏｏｋおよびＲｕｓｓｅｌｌ、分子クローニング：実験室マニュアル３版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｕｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ（２００１年）、
Ｒ．Ｓｃｏｐｅｓ、蛋白質の精製−プリンシパルと実践、３版、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ（１９９４年）、
Ｔ．Ａ．Ｂｒｏｗｎ（編者）、本質的な分子生物学：実用的なアプローチ、１および２巻、ＩＲＬ プレス（１９９１年）、
Ｄ．Ｍ．ＧｌｏｖｅｒおよびＢ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ（編者）、ＤＮＡのクローニング：実用的なアプローチ、１−４巻、ＩＲＬ プレス（１９９５および１９９６年）、および、Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌら（編者）、分子生物学の現在のプロトコル、Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂ． Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ（１９８８年、現在までのすべての更新を含む）、
Ｅｄ ＨａｒｌｏｗおよびＤａｖｉｄ Ｌａｎｅ（編者）、抗体：実験室マニュアル、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｕｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（１９８８年）、および、
Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎら（編者）免疫学の現在のプロトコル、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ（現在までのすべての更新を含む）、のようなソースにおける文献の全体において記載および説明されている。

ここで使用されている、「治療“ｔｒｅａｔｉｎｇ”」、「治療“ｔｒｅａｔ”」または「治療“ｔｒｅａｔｍｅｎｔ”」という用語は、ＨｔｒＡポリペプチド若しくはそのフラグメント、ＨｔｒＡポリペプチドに結合する抗体、または、ＨｔｒＡを発現する細菌によって、誘導される、患者における、少なくとも、１つの炎症の症状を減少または除去する、ここに記載された、組成物またはワクチンを投与する意味も含む。

「阻止」という用語は、ＨｔｒＡポリペプチドを発現する細菌によって、暴露された、又は感染された患者を、細菌で誘導された炎症の、少なくとも、１つの症状が、発症することから保護することを指す。

ここで使用される、「投与」は、広く解釈され、そして、たとえば、患者に、プロドラッグの提供をすることなどによって、細胞に、組成物または治療剤を、提供するだけでなく、被験者または患者に、ここに記載された、組成物または治療剤を、対象または患者に投与することも含む。

「特異的に結合“ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ ｂｉｎｄｓ”」、「特異的に結合“ｂｉｎｄ ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ”」、「特異的結合“ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｂｉｎｄｉｎｇ”」という用語は、特定の結合剤と標的分子種（ｔａｒｇｅｔ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｓｐｅｃｉｅｓ）が、他の分子種と混合されているとき、他の分子種との結合に優先して、標的分子種（ｔａｒｇｅｔ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｓｐｅｃｉｅｓ）に結合する、抗体の能力を意味する。

［ＨｔｒＡ セリンプロテアーゼ］
ＨｔｒＡは、ヘリコバクター・ピロリ菌（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ，）、大腸菌、赤痢菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｆｌｅｘｎｅｒｉ）、および、カンピロバクター ジェジュニ（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｊｅｊｕｎｉ．）を含む、多くの腸管病原細菌種における、セリンプロテアーゼおよび細胞周辺腔シャペロン（ｐｅｒｉｐｌａｓｍｉｃ ｃｈａｐｅｒｏｎｅ）である。したがって、「ＨｔｒＡポリペプチド」または「ＨｔｒＡポリヌクレオチド」という用語は、Ｇｅｎｂａｎｋ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｇｅｎｂａｎｋ／）またはＥＭＢＬ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／）などの、遺伝子またはタンパク質の配列のデータベースにおいて、ＨｔｒＡとしてアサインされ、または、識別され、または、予言されてきた、細菌のポリペプドまたはポリヌクレオチドを意味する。一実施形態において、前記ＨｔｒＡポリペプチドまたはポリヌクレオチドは、シーケンス データベース上で、ヘリコバクター・ピロリ菌（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ，）、大腸菌、赤痢菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｆｌｅｘｎｅｒｉ）、および、カンピロバクター ジェジュニ（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｊｅｊｕｎｉ．）のいずれか１つのゲノムに属する配列である。好ましい実施形態では、前記ＨｔｒＡポリペプチドまたはポリヌクレオチドは、ヘリコバクター・ピロリ菌のＨｔｒＡポリペプチドまたはポリヌクレオチドである（すなわち、シーケンス データベースにおいて、ヘリコバクター・ピロリ菌のゲノムにおいて、ＨｔｒＡ配列として識別されている、ポリペプチドもしくはそのフラグメント、または、ポリヌクレオチドもしくはそのフラグメント）。

今日まで、ＨｔｒＡは、ヘリコバクター・ピロリ菌によって生成される、唯一の識別されたセリンプロテアーゼである。細菌表面で発現され、そして、分泌もされる、〜５５ｋＤａのタンパク質である。体外で成長のためにも、細菌の生存に不可欠である。ＨｔｒＡポリペプチドのアミノ酸配列の非限定な例は、Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＤＡＡ３４９６７（配列番号１）、ＥＪＣ５３２７４（配列番号２）、ＥＪＣ１３５６４（配列番号３）、ＥＪＣ１０３３７（配列番号４）、ＥＪＣ０９７６６（配列番号５）およびＥＪＣ０７４８０（配列番号６）を含む。

本発明の本方法および組成物において使用される、ＨｔｒＡポリペプチドは、本技術分野において、標準的な手法を用いて派生した、細菌から直接精製された、単離されたポリペプチドで良い。

１つの実施形態において、当該ポリペプチドは、組換えポリペプチドである。ポリペプチドの文脈において、「組換え」という用語は、前記ポリペプチドを、自然には、生産しない、細胞における、前記ポリペプチドの生産だけでなく、本来の状態と比較して、変更された量または変更された速度で、細胞によって製造されるときのポリペプチドの参照を含む。「組換え」という用語は、また、無細胞発現系における、ポリペプチド生産を指す。

ポリペプチドの％同一性（ｉｄｅｎｔｉｔｙ）は、ギャップ（ｇａｐ）生成ペナルティ（ｇａｐ ｃｒｅａｔｉｏｎ ｐｅｎａｌｔｙ）＝５、および、ギャップ（ｇａｐ）伸長ペナルティ（ｇａｐ ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ ｐｅｎａｌｔｙ）＝０．３を用いた、ギャップ（ＧＡＰ）（ニードルマンとウンシュ（Ｗｕｎｓｃｈ）（１９７０年））分析（ＧＣＧプログラム）によって決定される。

クエリ配列は、少なくとも、１００のアミノ酸の長さで、そして、前記ギャップ分析は、少なくとも、１００アミノ酸の領域を超えた、２つの配列をアライン（ａｌｉｇｎ）する。１つの例で、前記クエリ配列は、少なくとも２００アミノ酸の長さで、そして、前記ギャップ分析は、少なくとも２００のアミノ酸の領域を超えた、２つの配列をアライン（ａｌｉｇｎ）する。１つの例では、前記ギャップ分析は、それらの全長を超えた、２つの配列をアライン（ａｌｉｇｎ）する。

定義されたポリペプチドに関して、上記で提供された以上の％同一性の数値は、好ましい実施形態を含むであろうことが分かるであろう。したがって、可能であれば、最小の％同一性の数値に関して、当該ポリペプチドは、好ましくは、少なくとも８０％のアミノ酸配列を含み、より好ましくは 少なくとも８５％、より好ましくは、少なくとも９０％、より好ましくは、少なくとも９１％、より好ましくは、少なくとも９２％、より好ましくは、少なくとも９３％、より好ましくは、少なくとも９４％、より好ましくは、少なくとも９５％、より好ましくは、少なくとも９６％、より好ましくは、少なくとも９７％、より好ましくは、少なくとも９８％、より好ましくは、少なくとも９９％、より好ましくは、少なくとも９９．１％、より好ましくは、少なくとも９９．２％、より好ましくは、少なくとも９９．３％、より好ましくは、少なくとも９９．４％、より好ましくは、少なくとも９９．５％、より好ましくは、少なくとも９９．６％、より好ましくは、少なくとも９９．７％、より好ましくは、少なくとも９９．８％、そして、さらにもっと好ましくは、少なくとも９９．９％の、関連してノミネートされた配列番号に対する同一性である。

また、本発明の範囲内に含まれるのは、ＨｔｒＡポリペプチドのフラグメントを含む、免疫原性組成物および／またはワクチンである。一実施形態では、当該フラグメントは、ＨｔｒＡポリペプチドの「免疫原性フラグメント」である。

１つの実施形態では、前記ＨｔｒＡポリペプチドの前記フラグメントは、少なくとも８アミノ酸の長さであり、より好適には、９アミノ酸の長さであり、または、より好適には、少なくとも１０アミノ酸の長さである。また、当該フラグメントは、少なくとも、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０または１００、あるいは、より多くのアミノ酸の長さである。ＨｔｒＡポリペプチドのフラグメントの非限定な例は、配列番号７乃至３６として提供されている。したがって、１つの実施形態では、患者に投与された、前記ＨｔｒＡポリペプチドは、配列番号１乃至３６のいずれか１つから選択された、アミノ酸配列を含むポリペプチドに対して、免疫応答を引き出す（ｅｌｉｃｉｔ）ことができる。

当業者によって理解されるように、免疫原性組成物、医薬組成物、および／または、ワクチンは、たとえば、トリプシン ドメイン、ＰＤＺ １ ドメイン、または、ＰＤＺ ２ ドメインなどの前記ＨｔｒＡポリペプチドのドメインを含んでもよい。ＨｔｒＡポリペプチドのドメインのアミノ酸配列の例は、配列番号３１（トリプシン ２ ドメイン）、配列番号３２−３５（ＰＤＺ １ ドメイン）および配列番号３６（ＰＤＺ ２ ドメイン）として提供されている。

［免疫原性組成物およびワクチン］
ヘリコバクター・ピロリ菌は、炎症および胃および十二指腸潰瘍の発症と、強力にリンクし、そして、ヘリコバクター・ピロリ菌の除菌は、潰瘍の形成を阻止することができることが示されている。既存の潰瘍を持つ患者における、ヘリコバクター・ピロリ菌の除菌は、潰瘍を治療し、そして、ほとんどの再発を防ぐことができるので、実際、潰瘍を呈する患者は、ヘリコバクター・ピロリ菌のテストがされ、そして、治療する必要がある。胃腺癌は、世界の癌死の３番目の主要な原因であり、そして、ヘリコバクター・ピロリ菌は、胃癌の発症に関与するという、強力な証拠がある。少ない果物／野菜のダイエット、喫煙、年齢および高い塩分摂取量のような他の要因も、また、胃癌のリスクを増加させるが、ヘリコバクター・ピロリ菌の感染は、胃がんと最も密接に関連する。ヘリコバクター・ピロリ菌の感染は、また、胃がんの１種である、ＭＡＬＴリンパ腫として知られている状態の発症に繋がる。ヘリコバクター・ピロリ菌の感染の治療と除菌は、事案の７５％まで、この後者の悪性腫瘍からの軽減（ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ）を齎すことができる。

ヘリコバクター・ピロリ菌の感染症の、従来の治療法は、細菌を殺すために、抗生物質の活性を高めるための制酸剤とともに、２つの抗生物質である、アモキシシリンとクラリスロマイシンを含む、トリプル療法と呼ばれる投薬の７日間のコースである。様々な状態の、非常に多くの患者を治療するために、抗生物質を使用したことによって、抗生物質耐性株の発生の増加により、ヘリコバクター・ピロリ菌を治療することが、より困難になった。その結果、患者の２５％まで、ファースト ラインの治療が失敗した。

ヘリコバクター・ピロリ菌の感染症のための、従来の治療の失敗の観点から、本発明者は、ＨｔｒＡポリペプチドまたはそのフラグメントで、患者を、ワクチン接種すると、細菌によって引き起こされる、炎症および／または病気の発症を減少または阻止することを発見した。任意の特定の理論に拘束されることを希望しないが、ＨｔｒＡに対するワクチン接種が、感染中に、ＨｔｒＡ活性をブロックする中和抗体を誘導するもの、と仮定される。ＨｔｒＡ活性の欠如は、細胞間結合（ｃｅｌｌ ｊｕｎｃｔｉｏｎ）の開始（ｏｐｅｎｉｎｇ）および上皮障壁（ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｂａｒｒｉｅｒ）の分裂を阻止し、それにより、細菌のコンポーネントが、胃の組織に移行するのを阻止し、炎症の誘導に対して保護する。

したがって、本発明は、ＨｔｒＡポリペプチドを発現する細菌に、患者が感染したことにより引き起こされる、炎症または疾患を、治療または阻止するための、免疫原性組成物およびワクチンを提供する。

ここで使用される、「免疫原性組成物」は、ＨｔｒＡポリペプチドまたはそのフラグメントを含み、そして、ＨｔｒＡポリペプチドまたはそのフラグメントに対する免疫応答を引き出す組成物を指す。「免疫原性組成物」という用語は、また、「ワクチン」への参照も含む。「ワクチン」という用語は、少なくとも、部分的に、標的病原体によって引き起こされる、炎症および／または疾患に対して保護する、または、効果的に、当該病原体から保護し、および／または、当該病原体によるコロニー形成または感染を減少する、免疫応答を誘導する、いかなる組成物をカバーする。「少なくとも部分的に保護」する免疫応答を誘導することによって ワクチンが、ＨｔｒＡポリペプチドを発現する細菌により誘導された炎症、感染症および／またはコロニー形成を、減少または阻止し、または、ＨｔｒＡポリペプチドを発現する細菌による感染によって引き起こされる、少なくとも、１つの症状を減少すること、を意味する。免疫原性組成物は、たとえば、ＨｔｒＡポリペプチドまたはそのフラグメントに特異的な、抗体または他の免疫メディエーター生産を可能にするように、メモリＢおよびＴ細胞を含む、免疫系の細胞を、選択、活性化または拡大をすることができる。

当該分野で理解されているように、「ワクチン接種」という用語は、ワクチンを、ヒトに投与するプロセスを指す。一方、「免疫化“ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ”」という用語は、ワクチン接種により、少なくとも部分的に保護免疫反応を生ずる、免疫系の刺激を指す。

「抗原」および「抗原性」という用語は、本分野で良く理解され、そして、たとえば、抗体またはＴ−細胞抗原受容体のような、免疫システムのコンポーネントによって、特に認識される、高分子の部分を指す。「抗原」という用語は、ホストにおいて、それに対する免疫反応を誘導することができる、ペプチド、ポリペプチド、または他の高分子を指す。したがって、本発明の方法は、ＨｔｒＡポリペプチドの抗原フラグメントを用いることもできる。好ましくは、抗原フラグメントは、細菌の病原体、たとえば、ヘリコバクター・ピロリ菌を含むが、これに限定されない、ヘリコバクター属からの細菌、に対する免疫応答を高めることが可能である。一実施形態では、抗原は、ＨｔｒＡポリペプチドのエピトープである。一実施形態では、抗原のフラグメントは、６アミノ酸の長さで、より好ましくは、７アミノ酸の長さで、より好ましくは、８アミノ酸の長さで、より好ましくは、９アミノ酸の長さで、より好ましくは、少なくとも、１０のアミノ酸の長さである。また、抗原フラグメントは、少なくとも、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００個またはそれ以上のアミノ酸の長さである。一の実施態様では、患者に投与したときの抗原は、ＨｔｒＡポリペプチドに対して、免疫反応を引き出すことができる。

本発明の、ワクチンおよび／または免疫原性組成物は、たとえば、鼻腔内、口腔、筋肉内又は皮下のような、経皮、粘膜などの、任意の適切なデリバリー・ルートによって、投与されることができる。他のデリバリー・ルートは、本分野でよく知られている。ワクチン調製は、一般的に、「ワクチンの設計」（「サブユニットとアジュバント アプローチ」（編者 パウエル Ｍ．Ｆ．およびニューマン Ｍ．Ｊ．）（１９９５年）プレナム プレス、ニューヨーク）に記載されている。１つの実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、筋肉内デリバリー・ルートによって投与される。筋肉内投与は、大腿部（ｔｈｉｇｈ）または上腕にされてもよい。注射は、基本的には、針（たとえば、皮下注射針（ｈｙｐｏｄｅｒｍｉｃ ｎｅｅｄｌｅ））を介するが、針のない注射も、代替で、使用することがある。典型的な筋肉内の投与量は、０．５ｍｌである。

より最近では、液体の薬剤を、皮膚の中に、または、通して、投与するように、特に、設計されたデバイスが、たとえば、ＷＯ９９／３４８５０およびＥＰ１０９２４４４に記載されたようなデバイス、また、たとえば、ＷＯ０１／１３９７７に記載された、ジェット注射デバイス（ｊｅｔ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｄｅｖｉｃｅｓ）が記載された。ワクチン製剤の皮内投与の代替の方法は、従来の注射器および針、または、固形ワクチンの皮内デリバリー（ｂａｌｌｉｓｔｉｃ ｄｅｌｉｖｅｒｙ）または経皮パッチのためにデザインされたデバイス、または、皮膚（経皮的または経皮デリバリー）の表面に適用される、デバイスを含む。

本発明の、ワクチンまたは免疫原性組成物が、皮膚に、より特異的には、真皮に、投与される場合、ワクチンは、低液量、特に、約０．０５ｍｌおよび０．２ｍｌの間の容量である。別の適切な投与経路は、皮下のルートである。任意の適切なデバイス、たとえば、伝統的な針を、皮下のデリバリーのために、使用することができる。本発明の１つの側面では、たとえば、ＷＯ０２／３４３１７に公表されたような、針無ジェット インジェクター サービスが使用される。本発明の別の側面において、前記デバイスは、液体ワクチンで、予め充填されている製剤である。

一実施形態では、前記ワクチンは、鼻腔内投与である。通常、前記ワクチンは、鼻咽頭（ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ）領域に、ローカルで投与される。本発明による、ワクチンの経鼻投与のための、好ましいデバイスは、スプレー デバイスである。適当な市販の鼻スプレーのデバイスには、Ａｃｃｕｓｐｒａｙ^TM（ベクトン ディッキンソン）が含まれる。

ここに記載された、免疫原性組成物および／またはワクチンは、治療または予防の組成物またはワクチンの形態であって良い。免疫原性組成物またはワクチンの予防的投与は、好ましくは、炎症および／または病気の発症から、受信者を保護し、または、ＨｔｒＡポリペプチドを含む細菌の感染によって引き起こされる、炎症および／または病気の発症を遅延する。予防的組成物またはワクチンは、たとえば、ＨｔｒＡポリペプチドを発現するヘリコバクター・ピロリ菌のような細菌、に感染したことを知られていないか、または、前記細菌に感染していないことが知られているか、または、まだ、前記細菌に暴露されていない、患者に、投与される。また、治療の免疫原性組成物および／またはワクチンは、ＨｔｒＡポリペプチドを発現する細菌に、既に、感染したことが知られているか、または予測され、かつ、細菌による感染によって引き起こされる、炎症および／または疾患の徴候または症状を既に示している、患者に投与される。治療の組成物および／またはワクチンは、細菌の感染によって引き起こされる炎症および／または病気の進行を、阻止または遅らせ、または、ＨｔｒＡポリペプチドを発現する細菌による感染によって引き起こされる炎症および／または病気の徴候または症状を軽減する。

アジェバントは、免疫応答の改善および／またはワクチン製剤の安定性を向上するのに役立つ。アジュバントは、通常、免疫システムの非特異的な刺激として記述されるが、しかし、また、免疫システムの特定の兵器（ａｒｍ）をターゲットにするために有用である。この活性を有する、１つまたはそれ以上の化合物は、ワクチンに追加されてもよい。したがって、本発明の特定のワクチンには、さらに、アジュバントを含む。適切なワクチン アジュバントは、アルミニウム塩（リン酸アルミニウムまたはアルミニウム水酸化物）、モノホスホリル（ｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌ）脂質Ａ（たとえば、３Ｄ−ＭＰＬ）、サポニン（たとえば、ＱＳ２１）、油中水型エマルション、グラム陰性細菌株からの水泡（ｂｌｅｂｓ）または外膜（ｂｌｅｂｓ ｏｒ ｏｕｔｅｒ ｍｅｍｂｒａｎｅ）の小胞（ｖｅｓｉｃｌｅ）調製物（ＷＯ０２／０９７４６によって教示されるもののような）、脂質Ａまたはそれらの誘導体、アルキル グルコサミド ホスファイトまたは、これらのアジェバントの２以上の組み合わせ、を含み、しかし、これらに限定されない。一実施形態では、前記アジェバントは、リン酸アルミニウムである。更なる実施形態では、前記アジェバントは、ヒトの投与量当たり、リン酸アルミニウムとして、１００−７５０、１５０−６００、２００−５００、２５０−４５０、３００−４００、または、約３５０μｇのアルミニウムを含む。さらなる実施形態では、前記アジュバントは、水酸化アルミニウムである。

「ＩＳＣＯＭのようなアジュバント」とは、一緒になって、その機能に貢献する、ユニークな球状のケージのような構造を有する、特徴的なケージ状の粒子を形成する、サポニン、コレステロール、およびリン脂質、を含む、免疫的な刺激的複合体（ＩＳＣＯＭ）を含む、アジュバントである。この用語は、抗原により作り出され、そして、ＩＳＣＯＭ粒子中に抗原を含む、ＩＳＣＯＭアジュバント、並びに、抗原なしで生成される、中空のＩＳＣＯＭ型アジュバントである、ＩＳＣＯＭ マトリックス アジュバントの両方を含む。一実施形態で、ここで記載された、免疫原性組成物および／またはワクチンは、ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）のような、抗原なしで製造される、ＩＳＣＯＭ マトリックス粒子アジュバント（ＩＳＣＯＭ（商標）およびＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）は、ＣＳＬ株式会社、パークビル、オーストラリアの登録商標である）を含む。

特定の実施形態では、前記アジェバントはサイトカインである。本発明の特定の組成物は、１つ以上のサイトカイン、ケモカイン、または、サイトカインおよびケモカインの生成を誘導する化合物、または、１以上のサイトカインまたはケモカインをコードするポリヌクレオチド、または、サイトカインおよびケモカインの生産を誘導する化合物を含む。サイトカインの例としては、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）、コロニー刺激因子（ＣＳＦ）、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、インターロイキン２（ＩＬ−２）、インターロイキン３（ＩＬ−３）、インターロイキン４（ＩＬ−４）、インターロイキン５（ＩＬ−５）、インターロイキン６（ＩＬ−６）、インターロイキン７（ＩＬ−７）、インターロイキン８（ＩＬ−８）、インターロイキン９（ＩＬ−９）、インターロイキン１０（ＩＬ−１０）、インターロイキン１１（ＩＬ−１１）、インターロイキン１２（ＩＬ−１２）、インターロイキン１３（ＩＬ−１３）、インターロイキン１４（ＩＬ−１４）、インターロイキン１５（ＩＬ−１５）、インターロイキン１６（ＩＬ−１６）、インターロイキン１７（ＩＬ−１７）、インターロイキン１８（ＩＬ−１８）、インターフェロンα（インターフェロンα）、インターフェロンβ（ＩＦＮβ）、インターフェロンγ（ＩＮＦγ）、インターフェロンω（ＩＦＮω）、インターフェロンτ（ＩＦＮτ）、インターフェロンγ誘導因子Ｉ（ＩＧＩＦ）、変換成長因子（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ）β（ＴＧＦ−β）、ＲＡＮＴＥＳ（活性化により制御され、発現およびおそらく分泌される、通常のＴ−細胞（ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｕｐｏｎ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ， ｎｏｒｍａｌ Ｔ−ｃｅｌｌ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ａｎｄ ｐｒｅｓｕｍａｂｌｙ ｓｅｃｒｅｔｅｄ））、マクロファージ炎症性タンパク質（たとえば、ＭＩＰ−１αおよびＭＩＰ−１β）、リーシュマニア伸長開始因子（ＬＥＩＦ）、およびＦｌｔ−３リガンド、を含むが、これらに限定されない。

さらなる実施形態では、ＨｔｒＡポリペプチドまたは、少なくとも、１０のアミノ酸のそのフラグメントは、ジフテリア、破傷風、大腸菌（熱不安定な毒素（ａ ｈｅａｔ ｌａｂｉｌｅ ｔｏｘｉｎ）など）、コレラ、ヘリコバクター・ピロリ菌、または、他の病原体からのトキソイド（ｔｏｘｏｉｄ）ような、細菌トキソイド（ｔｏｘｏｉｄ）、とコンジュゲート（ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ）されてもよい。さらに、前記ＨｔｒＡポリペプチドまたは、少なくとも、１０のアミノ酸のそのフラグメントは、ナイセリア（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｓｐ．）、肺炎レンサ球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）または、インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）のｂ型細菌（ｔｙｐｅ−ｂ ｂａｃｔｅｒｉａ）から莢膜多糖（ｃａｐｓｕｌａｒ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ）のような、細菌の多糖類とコンジュゲート（ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ）されてもよい。

賦形剤は、強力な有効成分を含む、増量アップの製剤の目的のために（従って、しばしば、「増量剤」、「充填剤」、または「希釈剤」として呼ばれる）、医薬の有効成分（“ＡＰＩ”）と一緒に製剤化される不活性の物質である。増量アップにより、剤形を製造するとき、原薬の、便利で、および正確な調剤を可能にする。それらは、また、医薬の吸収性または溶解性を促進する、または、他の薬物動態学的考慮のような、さまざまな治療の向上の目的に役立つことができる。賦形剤は、また、予測される品質保証期間を超えた、変性の防止などの、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの安定性の補助に加えて、粉体の流動性または非粘着性を促進すること等により、問題の有効成分の取扱を補助するために、製造工程においても、役に立つことができる。本分野で公知のように、適切な賦形剤の選択は、また、有効成分とその他の要因と同様に、投与ルートおよび剤形に依存する。

時々、免疫刺激剤として、言及された、その他の適切なアジュバントは、
サイトカイン、増殖因子、ケモカイン、リンパ球の細胞培養からの上清、単球、リンパ器官からの細胞、植物、細菌または寄生虫（黄色ブドウ球菌またはリポ多糖体の調製物（（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ ｏｒ ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ））からの細胞調製物および／または抽出物、またはマイトジェン（ｍｉｔｏｇｅｎ）、を含むが、これらに限定されない。

本発明のそれ以上の側面は、ＨｔｒＡポリペプチドまたはそのフラグメントを、薬学上許容される賦形剤および／またはアジュバントと混合する工程を含む、本発明の、ワクチンおよび／または免疫原性組成物を作る方法である。

前記ＨｔｒＡポリペプチドまたは少なくとも、１０のアミノ酸のそのフラグメントは、ポリペプチドの組成物の半減期を増加するだけでなく、前記ポリペプチドを、リンパ組織などの特定の組織に、ターゲットにする、または、感染した細胞に選択的にターゲットにするのに役立つ、リポソーム キャリアを介して、また、投与することができる。リポソームは、エマルジョン、発泡体、ミセル、不溶性単分子膜、液晶、リン脂質液（ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ ｄｉｓｐｅｒｓｉｏｎｓ）、ラメラ層（ｌａｍｅｌｌａｒ ｌａｙｅｒｓ）などを含む。これらの調製において、デリバーされる前記ポリペプチドは、単独、または、リンパ様細胞間受容体（ａ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｐｒｅｖａｌｅｎｔ ａｍｏｎｇ ｌｙｍｐｈｏｉｄ ｃｅｌｌｓ）に結合する分子（ＣＤ４５抗原または他の共刺激因子に結合するモノクローナル抗体のような）と組み合わせて、または、他の治療または免疫原性組成物とともに、リポソームの一部として組み込まれる。

したがって、目的のポリペプチドで、充填されたか、または、修飾された、前記リポソームは、その後、前記リポソームが、ポリペプチド組成物をデリバーする、リンパ球様細胞のサイトに導かれることができる。本発明にしたがって、使用される、リポソームは、中性または負荷電のリン脂質および、コレステロールなどのステロールを、一般的に含む、標準の、小胞形成脂質（ｓｔａｎｄａｒｄ ｖｅｓｉｃｌｅ−ｆｏｒｍｉｎｇ ｌｉｐｉｄｓ）から形成される。脂質の選択は、一般的に、たとえば、血流におけるリポソームのサイズ、酸に対する不安定性および安定性などの検討によって、ガイドされる。本分野では、リポソームを調製するために、さまざまな方法が可能である。ＨｔｒＡポリペプチドまたは、少なくとも、１０のアミノ酸のそのフラグメントを含む、リポソーム懸濁液は、静脈内、ローカルで、局所的等で、特に、投与方法、デリバーされるポリペプチド、および、治療される疾患のステージにしたがって、変わる用量で、投与されることができる。

一実施形態では、ここに記載されている、前記免疫原性組成物および／またはワクチンは、細菌感染症の治療のための従来の治療法と、一緒に、または、連続して（ｉｎ ｃｏｎｊｕｎｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ）、または組み合わせて、投与される。たとえば、従来の治療法は、生物固有の抗生物質である。ヘリコバクター・ピロリ菌による感染症の場合、従来の治療法は、抗生物質および酸の抑制剤および／または胃プロテクターの組み合わせである。ヘリコバクター・ピロリ菌の感染を治療するために使用されてきた医薬品は、アモキシシリン、クラリスロマイシン、リファブチン、次サリチル酸ビスマス フラゾリドン（Ｂｉｓｍｕｔｈ ｓｕｂｓａｌｉｃｙｌａｔｅ Ｆｕｒａｚｏｌｉｄｏｎｅ）、ラクトフェリン、ニタゾキサニドおよびレボフロキサシンを含む。ヘリコバクター・ピロリ菌の感染を治療するために使用されてきた組み合わせは、オメプラゾール（２００ｍｇ、１日２回）、アモキシシリン（１０００ｍｇ、１日２回）およびクラリスロマイシン（５００ｍｇ、１日２回）を含む。

［弱毒細菌］
一実施形態では、ＨｔｒＡポリペプチドまたは少なくとも、１０のアミノ酸のそのフラグメントは、弱毒細菌（たとえば、サルモネラ属）またはウイルス ワクチン キャリア（たとえば、ＭＶＡ）によって発現される。病原性細菌の病原性を減衰させる方法は、本分野で知られている。通常、毒素の発現を阻止または減少するために、細菌のゲノム、または、遺伝子を削除または不活性化するために、他の病原性遺伝子に、突然変異が導入される。いくつかの場合、前記遺伝子の前記機能は、完全にノックアウトされる。これは、前記遺伝子から、いかなるポリペプチドの合成を完全に廃止、または、機能のないポリペプチドの合成を齎す突然変異を作成することによって達成される。ポリペプチドの合成を廃止するために、全体の遺伝子または、その一部、たとえば、５’末端のいずれかが、削除される。遺伝子のコーディング シーケンス内の欠失または挿入は、機能のないポリペプチド（たとえば、野生型タンパク質のＮ末端配列のみを含むポリペプチド）のみを合成する遺伝子を、作成するために使用される。毒素遺伝子の場合、突然変異は、遺伝子産物を、非毒性にする。

本開示は、したがって ＨｔｒＡポリペプチドまたは少なくとも、１０のアミノ酸のそのフラグメントを発現する、弱毒細菌またはウイルス ワクチン キャリアを含む組成物を含む。前記ＨｔｒＡポリペプチドをコードする核酸は、ベクターであってもよく、または、たとえば、相同組換え（ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ）、または、ゲノム編集（ｇｅｎｏｍｅ ｅｄｉｔｉｎｇ）（人工核酸を用いた（ＧＥＥＮ）ゲノム編集）によって、ホストのキャリアのゲノムに組み込むことができる。ゲノム編集に適した人工核酸の例は、Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ａｃｔｉｖａｔｏｒ−Ｌｉｋｅ Ｅｆｆｅｃｔｏｒ Ｎｕｃｌｅａｓｅｓ（ＴＡＬＥＮｓ）およびＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムを含む。本発明の一実施形態では、前記ワクチン組成物は、サルモネラ病原性アイランド２領域（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ Ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ Ｉｓｌａｎｄ ２ ｒｅｇｉｏｎ）に、弱毒化突然変異（ａｔｔｅｎｕａｔｉｎｇ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ）および、必要に応じて、１つ以上追加の弱毒化突然変異（ａｔｔｅｎｕａｔｉｎｇ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ）（たとえば、ａｒｏＡ、ａｒｏＣまたはｓｏｄ遺伝子の１つ以上における突然変異）、およびＨｔｒＡポリペプチドまたは、少なくとも、１０のアミノ酸のそのフラグメントをコードする核酸を含む、弱毒化したサルモネラ ワクチン キャリアを含む。本発明の弱毒生ワクチン組成物は、さらに、たとえば、薬学的に許容されるキャリア、希釈液および／またはアジュバントを含むことができる。

［抗体療法］
予防および治療のワクチン接種に加えて、本発明はまた、細菌により誘導された炎症および／または疾患を持っているまたはそれが疑われる、患者の治療のための抗体療法を含む。本明細書で使用されるとき、「抗体療法」という用語は、患者に、抗体を投与することを含む、治療プロトコルまたは治療レジメの意味を含む。本分野において理解されているように、「抗体療法」という用語は、受動免疫療法および受動免疫予防の両方を含む。

ここで使用される「抗体」という用語は、たとえば、細菌のＨｔｒＡポリペプチドまたは、そのフラグメントのような、ターゲットに結合できる、免疫グロブリン、免疫グロブリンのフラグメント、または免疫グロブリン様の分子を指す。したがって、「抗体」という用語は、インタクトのポリクローナルまたはモノクローナル抗体だけでなく、ＨｔｒＡポリペプチドまたはそのフラグメントと結合のできる、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ＦｖおよびｓｃＦｖのような、そのフラグメントだけでなく、インタクトな分子を含む、二重特異性抗体（ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）、二重特異性抗体（ｄｉａｂｏｄｉｅｓ）、三量体（ｔｒｉａｂｏｄｉｅｓ）、ヘテロ結合抗体（ｈｅｔｅｒｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ）、キメラ抗体、ヒト化抗体およびヒト抗体、をも含む。

本明細書で使用するとき、「モノクローナル抗体」（ｍＡｂ）という用語は、たとえば、真核生物、原核生物、または、ファージ（ｐｈａｇｅ）クローンを含む、単一のコピーまたはクローンから派生した抗体を指し、そして、それが製造された方法は指さない。

本発明で使用される抗体（ｍＡｂｓ）は、好適には、均一または実質的に均一の集団として、存在する。完全な、モノクローナル抗体は、２つの重鎖および２つの軽鎖が含まれる。したがって、このようなモノクローナル抗体のフラグメントは、たとえば、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）_２、単鎖 Ｆｖフラグメント、および、１つの軽鎖および１つの重鎖を含む、片腕（ｏｎｅ−ａｒｍｅｄ）抗体を含む。モノクローナル抗体および、その抗原結合フラグメントは、たとえば、遺伝子組換え技術、ファージ ディスプレイ技術、たとえば、ＣＤＲ移植（ＣＤＲ−ｇｒａｆｔｉｎｇ）のような合成技術、または、このような技術の組み合わせ、または、本分野で知られているその他の技術によって、製造することができる。

目的の機能的な特性、すなわち、ＨｔｒＡポリペプチドまたはそのフラグメントに結合、を示す抗体は、従来の方法で製造することができる。たとえば、マウスは、ＨｔｒＡポリペプチドまたはそのフラグメントで、免疫することができ、生じた抗体は、回収し、そして、精製されることができる、そして、精製した抗体が、目的の結合および機能的特性を有しているかどうかの決定は、知られている方法を使用して評価できる。抗原結合フラグメントは、また、従来の方法でも、調整することができる。抗体および抗原結合フラグメントを、生産および精製する方法は、本分野でよく知られており、そして、たとえば、ハーローおよびレーン（１９８８年）の「抗体、実験室マニュアル」Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、ニューヨーク、５−８および１５章、ＩＳＢＮ ０−８７９６９−３１４−２に見つけることができる。

「ヒト化抗体」という用語は、実質的にヒト、または、非ヒト抗体から派生した、完全に ヒトの取り巻くＣＤＲｓ（ｈｕｍａｎ ｓｕｒｒｏｕｎｄｉｎｇ ＣＤＲｓ）である、フレームワーク領域を有する、モノクローナル抗体および抗原が結合するそのフラグメントを指す。「フレームワーク領域」または「フレームワーク配列」は、フレームワーク領域１乃至４のいずれか１つを指す。ヒト化抗体および抗原が結合するそのフラグメントは、フレームワーク領域１乃至４のいずれか１つ以上が、実質的または完全にヒトである、分子を含む。すなわち、個々の、実質的に、または、完全にヒトのフレームワーク領域１乃至４の可能な組合せのいずれかが存在する。たとえば、フレームワーク領域１およびフレームワーク領域２、フレームワーク領域１およびフレームワーク領域３、フレームワーク領域１、２および３等が、実質的に、または、完全にヒトである分子が含まれる。実質的にヒトのフレームワークは、知られているヒトの生殖細胞系（ｇｅｒｍｌｉｎｅ）フレームワークの配列と、少なくとも、約８０％の配列同一性を有するものである。好ましくは、実質的にヒトのフレームワークは、知られているヒトの生殖細胞系（ｇｅｒｍｌｉｎｅ）フレームワークの配列の、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または、少なくとも、約９９％の配列同一性を有する。

完全にヒトのフレームワークは、既知のヒト生殖細胞系（ｇｅｒｍｌｉｎｅ）フレームワークの配列と同じフレームワークである。ヒトのフレームワーク生殖系（ｇｅｒｍｌｉｎｅ）配列は、彼らのウェブサイト（ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ）を経由して、ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）から、または、免疫グロブリン データ集（ＦａｃｔｓＢｏｏｋ）（マリー−ポール Ｌｅｆｒａｎｃおよびジェラルド Ｌｅｆｒａｎｃ、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、２００１年、ＩＳＢＮ ０１２４４１３５１）から、得ることができる。たとえば、生殖系（ｇｅｒｍｌｉｎｅ）の軽鎖フレームワークは、Ａ１１、Ａ１７、Ａ１８、Ａ１９、Ａ２０、Ａ２７、Ａ３０、Ｌ１、Ｌ１Ｉ、Ｌ１２、Ｌ２、Ｌ５、Ｌ１５、Ｌ６、Ｌ８、Ｏ１２、Ｏ２およびＯ８から成る群から選択でき、および、生殖系（ｇｅｒｍｌｉｎｅ）重鎖フレームワーク領域は、ＶＨ２−５、ＶＨ２−２６で、ＶＨ２−７０、ＶＨ３−２０、ＶＨ３−７２、ＶＨＩ−４６、ＶＨ３−９、ＶＨ３−６６、ＶＨ３−７４、ＶＨ４−３１、ＶＨＩ−１８、ＶＨＩ−６９、ＶＩ−１３−７、ＶＨ３−１１、ＶＨ３−１５、ＶＨ３−２１、ＶＨ３−２３、ＶＨ３−３０、ＶＨ３−４８、ＶＨ４−３９、ＶＨ４−５９、およびＶＨ５−５Ｉから成る群から選択できる。

ヒト化抗体は、いくつかの異なる方法を使用して製造することができる。アプローチの１つは、親抗体（ｐａｒｅｎｔ ａｎｔｉｂｏｄｙ）化合物のＣＤＲｓは、親抗体（ｐａｒｅｎｔ ａｎｔｉｂｏｄｙ）化合物フレームワークと高い配列同一性を有する、ヒトのフレームワークにグラフト（ｇｒａｆｔ）される。新しいフレームワークの配列の同一性は、一般的に、親抗体化合物（ｐａｒｅｎｔ ａｎｔｉｂｏｄｙ）における対応するフレームワークの配列と、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも９０％、少なくとも約９５％、または、少なくとも約９９％の同一性である。１００より少ないアミノ酸残基を有する、フレームワークの場合、１つ、２つ、または、３つのアミノ酸残基を変更することができる。このグラフト（ｇｒａｆｔ）は、親抗体の結合親和性と比較して、低下を齎す場合がある。この場合、当該フレームワークは、クィーンら（１９９１年）によって開示された、特定の基準（ｃｒｉｔｅｒｉａ）に基づいて、特定の位置で、親のフレームワークに、バック変異（ｂａｃｋ−ｍｕｔａｔｅｄ）をすることができる。マウス抗体をヒト化するのに役立つ方法を説明した追加の文献は、米国特許４，８１６，３９７；５，２２５，５３９および５，６９３，７６１号；レヴィット（１９８３年）に記載された、コンピューター プログラムのＡＢＭＯＤおよびＥＮＣＡＤ；およびウィンターと同僚（Ｊｏｎｅｓら，１９８６年）の方法を含む。

抗体または抗体フラグメント、あるいは、同じものを含む免疫原的または医薬の組成物は、非経口的ルートによって投与されてもよい（たとえば、皮下、静脈内、腹腔内、筋肉内又は経皮的）。本発明の、抗体、または抗原と結合するそのフラグメントは、患者に、単独で、または薬学的に許容される担体および／または賦形剤と組合せて、１回または複数回で、投与されてもよい。本発明の医薬組成物は、本分野でよく知られている方法によって、調整することができ（たとえば、レミントン：薬学の科学と実践、１９版（１９９５年）、Ａ．ジェンナーロら、マック出版社）、ここに開示されたように、抗体、および、１つまたは複数の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤を含む。

一実施形態では、組成物、たとえば、１つ、または、ＨｔｒＡポリペプチド、そのフラグメントまたはそのエピトープに結合する抗体の組み合わせを含む医薬組成物などが提供される。医薬組成物は、レミントン（薬学の科学と実践、１９版、ジェンナーロ編、マック出版社、イーストン、ペンシルベニア州、１９９５年）に開示されているような従来の技術に従って、任意の他のよく知られているアジュバントおよび賦形剤と同様に、薬学上許容される担体または希釈剤と一緒に製剤化されてよい。

医薬組成物は、また、併用療法、すなわち、他の薬剤と組み合わせても投与することができる。たとえば、当該併用療法は、少なくとも、１つの抗ＨｔｒＡ抗体と抗炎症剤を有する組成物を含むことができる。一実施形態では、このような抗炎症剤は、ステロイド薬またはＮＳＡＩＤ（非ステロイド性抗炎症薬）を含む。薬剤の例としては、アスピリンとその他のサリチル酸塩、ロフェコキシブ（バイオックス）およびセレコキシブ（セレブレックス）のようなＣｏｘ−２阻害剤；イブプロフェン（モトリン、アドビル）、フェノプロフェン（ナフロン）、ナプロキセン（ナプロシン）、スリンダク（クリノリル）、ジクロフェナク（ボルタレン）、ピロキシカム（フェルデン）、ケトプロフェン （オルディス）、ジフルニサル（ドロビッド）、ナブメトン（レラフェン）、エトドラク（ロジン）、オキサプロジン（ダイプロ）およびインドメタシン（インドシン）などの ＮＳＡＩＤｓを含む。

一実施形態では、細菌感染症の治療のための従来の治療法と、一緒に、連続して、または、組み合わせて、ＨｔｒＡポリペプチドに結合する抗体が投与される。

［ＤＮＡワクチン接種］
ＤＮＡワクチン接種は、患者の組織細胞による、抗原の発現のために、抗原をコードするＤＮＡを、患者の細胞および／または組織に、直接in vivoで導入することを含む。このようなワクチンは、ここでは、「ＤＮＡワクチン」または「核酸ベースのワクチン」と呼ばれる。ＤＮＡワクチンの例は、米国特許５，９３９，４００、米国特許６，１１０，８９８、ＷＯ９５／２０６６０およびＷＯ９３／１９１８３に記載されている。直接注射された、抗原をコードするＤＮＡの、保護免疫反応を引き出す能力は、多数の実験システムで実証されている。

ＤＮＡ免疫化（ＤＮＡ ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ）により誘発される、免疫反応に影響を与えることが知られている要因は、ＤＮＡのデリバリーの方法であり、たとえば、非経口的ルートは、遺伝子トランスファーの低いレートを生じ、そして、遺伝子発現のかなりの可変性を生み出すことができる。遺伝子銃（ｇｅｎｅ−ｇｕｎ）を用いた、プラスミドの高速接種（Ｈｉｇｈ−ｖｅｌｏｃｉｔｙ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ）は、多分、ＤＮＡトランスフェクションのより大きい効率および、樹状細胞（ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ）による、より効果的な抗原提示（ａｎｔｉｇｅｎ ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ）のため、マウスの免疫応答を亢進する。本発明の、核酸ベースのワクチンを含むベクターは、また、たとえば、トランスフェクション、エレクトロポレーション（ｅｌｅｃｔｒｏｐｏｒａｔｉｏｎ）、マイクロインジェクション（ｍｉｃｒｏｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）、トランスダクション（ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ）、細胞融合、ＤＥＡＥ デキストラン、リン酸カルシウム沈殿物、リポフェクション（ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｏｎ）（リソソーム融合）、または ＤＮＡ ベクター トランスポーターのような、本分野で知られている他の方法によって、目的のホストに導入されてもよい。

［疾患の治療］
本発明者は、ここに記載された、ＨｔｒＡポリペプチドまたは、少なくとも、１０のアミノ酸のそのフラグメント、ＨｔｒＡポリペプチドまたは少なくとも、１０のアミノ酸のそのフラグメントをコードするポリヌクレオチド、免疫原性組成物、医薬組成物、および／またはワクチンは、ＨｔｒＡポリペプチドを発現する細菌による感染に起因する、細菌で誘導された、炎症および／または疾病を、治療または阻止するために、患者、好適には、ヒトの患者に投与することができることを決定した。本発明は、この治療が、細菌による感染を根絶または阻止しない治療にもかかわらず、ＨｔｒＡポリペプチドを発現する細菌による感染によって起こる、炎症および／または疾患の、兆候または症状の発症を、減少または遅延することを見出した。

本分野において、理解されているように、「細菌により誘導された炎症」という用語は、細菌の有害な刺激に対する、組織の生物学的応答を指し、そして、急性および慢性の炎症の両方を含む。急性炎症のプロセスは、すべての組織に既に存在する、自然免疫系細胞、主に、レジデントの（ｒｅｓｉｄｅｎｔ）マクロファージ、樹状細胞（ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ）、組織球（ｈｉｓｔｉｏｃｙｔｅｓ）、クッパー細胞（Ｋｕｐｆｆｅｒ ｃｅｌｌｓ）およびマストサイト（ｍａｓｔｏｃｙｔｅｓ）、の活性化によって、開始されることがある。これらの細胞は、その表面上に、広く、病原体によって共有されているが、ホスト分子と区別される分子を認識し、まとめて、病原体関連分子パターン（ｐａｔｈｏｇｅｎ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｐａｔｔｅｒｎｓ）（ＰＡＭＰｓ）と呼ぶ、パターン認識レセプター（ｐａｔｔｅｒｎ ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ）（ＰＲＲｓ）と名付けられた、特定のレセプターを有する。感染症の発症時、細胞は、活性化を受ける可能性があり（ＰＲＲｓの１つは、１つのＰＡＭＰを認識する）、そして、炎症の臨床徴候に関与する、炎症性メディエーターをリリースする。その後、この自然免疫応答の活性化は、特に、ヘルパーＴ（Ｔｈ）リンパ球を含む、獲得免疫応答の活性化をサポートする。ヘリコバクター・ピロリ菌の胃炎は、それぞれ、炎症性（ｐｒｏ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ）サイトカインであるＩＦＮγおよびＩＬ−１７によってマークされた、Ｔｈ１およびＴｈ１７型の混合免疫応答を含む。

これらの応答によって引き起こされる胃炎の重症度は、免疫抑制のＩＬ−１０の生産によって制御される。Ｔｈ２型反応、たとえば、ＩＬ−１３もまた、そのような応答を阻害する。血管拡張およびその結果である血流増加により、赤み（発赤）および増加した熱（ｃａｌｏｒ）を惹き起す。血管の透過性の増加は、血漿蛋白および体液（ｆｌｕｉｄ）が組織（浮腫）への滲出（漏れ）を齎し、それ自体、腫れ（腫瘍）として現れる。ブラジキニンなどのリリースされたメディエーターのいくつかは、痛み（痛覚過敏、悲しみ（ｄｏｌｏｒ））に対する感受性を増大する。メディエーター分子は、また、白血球、主に、好中球の、血管外（血管外漏出（ｅｘｔｒａｖａｓａｔｉｏｎ））における、組織への移行を許容するように、血管を変える。好中球は、ローカル セルにより、生成された、遊走グラデーションに沿って移行し、損傷の部位に到達する。

細胞由来のメディエーターに加えて、前もって形成された血漿蛋白から成る、いくつかの無細胞（ａｃｅｌｌｕｌａｒ）生化学的カスケード システムが、並行して、炎症反応を開始し、活発化（ｐｒｏｐａｇａｔｅ）するように、働く。これらは、細菌によって活性化された、補体システムを含む。滲出性コンポーネントは、炎症を起こした組織に、フィブリンおよび免疫グロブリン（抗体）のような重要なタンパク質を含む、血漿流体（ｐｌａｓｍａ ｆｌｕｉｄ）の移動を含む。この移動は、化学的に誘導された膨張および、血漿の純損失に帰結する、血管の増加された透過性を介して達成される。組織における、流体の増加された収集が、その膨張（浮腫）を惹き起す。この血管外の体液は、適応免疫系の認識および攻撃の段階（ｔｈｅ ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ａｎｄ ａｔｔａｃｋ ｐｈａｓｅ ｏｆ ｔｈｅ ａｄａｐｔｉｖｅ ｉｍｍｕｎｅ ｓｙｓｔｅｍ）を開始するのに沿って、ヘリコバクター・ピロリ菌の抗原に暴露された細胞を流しながら（ｆｌｕｓｈｉｎｇ）、リンパ管により、その領域のリンパ節（ｌｙｍｐｈ ｎｏｄｅｓ）に対して、流入（ｆｕｎｎｅｌｅｄ）する。

急性炎症は、様々な炎症性メディエーター活動によって引き起こされる、血管拡張、透過性亢進および血流増加を含む、著しい血管の変化によって特徴づけられる。血管拡張は、最初、毛細血管レベルで起こり、細動脈レベルに進んで、そして、存在する血量において、純増を齎し、炎症の赤みや熱を引き起こす。血管の透過性の亢進は、血液の中の細胞の濃度の増加のせいで、結果として、うっ滞（細胞で詰まった、拡張された血管によって特徴づけられる状態）しながら、血漿の、組織への移動を齎す。うっ滞は、組織にそれらの集まる重大なプロセスである、白血球が、内皮細胞に沿って、縁へ移動（移動）することを許容する。

上皮の表面で炎症が発生したとき、または、化膿菌が関与しているときなど、体内で発生する特定の状況において、急性および慢性の炎症の特定のパターンが見られる。
１） 肉芽腫性炎症： 肉芽腫の形成によって特徴付けられ、とりわけ、結核、ハンセン病、サルコイドーシスおよび梅毒を含む、限られるが、多様な疾患の結果である。
２） フィブリン炎症： 血管透過性の大幅な増加の原因の炎症は、フィブリンが血管を通過するのを許容する。がん細胞などの、適切な凝結促進性の（ｐｒｏｃｏａｇｕｌａｔｉｖｅ）刺激が存在する場合、フィブリン浸出液が堆積される。これは、漿膜腔（ｓｅｒｏｕｓ ｃａｖｉｔｉｅｓ）においてよく見られ、そこでは、その機能を制限する、フィブリン浸出液の傷跡（ｓｃａｒ）への変換が、漿膜の間（ｂｅｔｗｅｅｎ ｓｅｒｏｕｓ ｍｅｍｂｒａｎｅｓ）において、生じる。当該堆積物（ｄｅｐｏｓｉｔ）は、時々、偽膜シート（ｐｓｅｕｄｏｍｅｍｂｒａｎｅ ｓｈｅｅｔ）を形成する。腸の炎症（偽膜性大腸炎）において、偽膜の管を形成することができる。
３） 化膿性炎症： 好中球、死んだ細胞および体液から成る膿の大きな量を齎す、炎症。ブドウ球菌などの化膿菌による感染症は、このような炎症の特徴である。周囲の組織によって囲まれた膿の大きな、ローカライズされた堆積は、膿瘍と呼ばれる。
４） 漿液性炎症： 漿膜中皮細胞によって通常作られる、非粘性の漿液の多量の胸水によって特徴付けられるが、血漿に由来する可能性がある。皮膚の水疱は、炎症のこのパターンを例である。
５） 潰瘍性炎症： 上皮の近くに起こる炎症は、下位層を暴露する表面から、組織の壊死の損失につながることができる。上皮における、それに続く掘削は、潰瘍として知られている。

一実施形態で、「細菌で誘導された」炎症は、胃炎（すなわち、胃の粘膜の炎症）または十二指腸炎（すなわち、十二指腸の炎症）である。びらん性胃炎は、粘膜防御への損傷によって引き起こされる胃粘膜糜爛である。慢性胃炎は、胃の組織の広い範囲の問題を指す。

ヘリコバクター・ピロリ菌による、感染またはコロニー形成により誘導された胃炎の場合、急性感染症は、腹部の痛み（胃の痛み）または吐き気を伴った、急性胃炎として現れる可能性がある。これが、慢性的な胃炎に進展したとき、もし、存在する場合、その症状は、しばしば、非潰瘍性消化不良の症状である：胃の痛み、吐き気、膨満感、げっぷ、そして、時に、嘔吐または黒い便。ヘリコバクター・ピロリ菌に感染している個人は、１０から２０％の消化性潰瘍の発症のライフタイム・リスクおよび、１から２％の胃癌に罹るリスクを有する。コーパス（胃体）の炎症は、胃潰瘍および胃腺癌につながる可能性が高いものの、幽門前庭部の炎症は、十二指腸潰瘍につながる可能性が高い。

粘液腺化生（Ｍｕｃｏｕｓ ｇｌａｎｄ ｍｅｔａｐｌａｓｉａ）である、分化した細胞のリバーシブルの交換（ｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ）は、胃腺（ｇａｓｔｒｉｃ ｇｌａｎｄ）の重度の損傷の設定（ｔｈｅ ｓｅｔｔｉｎｇ ｏｆ ｓｅｖｅｒｅ ｄａｍａｇｅ）で発生し、その後、衰弱し（ｗａｓｔｅ ａｗａｙ）（萎縮性胃炎）、そして、徐々に、粘液腺に置き換えられる（ｍｕｃｏｕｓ ｇｌａｎｄｓ）。胃潰瘍が発症する可能性がある。したがって、１つの実施形態において、細菌が誘導する炎症は、萎縮性胃炎である。

一実施形態では、患者における、ヘリコバクター・ピロリ菌の感染によって引き起こされる疾患を、治療または阻止する方法が提供される。本分野で知られているように、ヘリコバクター・ピロリ菌の感染によって引き起こされる疾患は、炎症、胃炎、十二指腸炎、萎縮性胃炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍、胃癌、および／または粘膜内リンパ組織（ｍｕｃｏｓａ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ−ｌｙｍｐｈｏｉｄ−ｔｉｓｓｕｅ）（ＭＡＬＴ）リンパ腫（ｌｙｍｐｈｏｍａ）を含む。

実施例１
［ＨｔｒＡ抗原の調製およびワクチン接種］
組換えＨｔｒＡ（変異を含む）は、Ｌｏｗｅｒら（２００８年）の説明に従って、製造された。遺伝子ｈｐ１０１８は、ヘリコバクター・ピロリ菌の２６６９５株のゲノムＤＮＡから、Ｐｆｘ ＤＮＡポリメラーゼ（インビトロジェン社、カールスルーエ、ドイツ）を使用して、標準のＰＣＲによって増幅された。次のプライマーが使用された。
ｈｐ１０１８：５’−ＧＧＣ ＴＡＴ ＧＧＡ ＴＡＡ ＧＧＡ ＴＣＡ ＡＣＧ Ｃ−３’（配列番号３７）について
ｈｐ１０１８ｒｅｖ：５’−ＣＣＡ ＣＣＧ ＣＣＴ ＴＡＡ ＴＡＧ ＡＧＴ ＣＣＴ Ｔ−３’（配列番号３８）。

３３３塩基の計算された長さを有する、ＰＣＲのプロダクトは、シークエンシングのために、商用プロバイダー（ＧＥＮｔｅｒｐｒｉｓｅ社、マインツ、ドイツ）に提供された。

Ｈｐ１０１８／１９Ｄｓｐの構成物（ｃｏｎｓｔｒｕｃｔ）は、ヘリコバクター・ピロリ菌の２６６９５株のゲノムＤＮＡから、プライマー ５’−ａａｇｇａｔｃｃｇｇｃａａｔａｔｃｃａａａｔｃｃａｇａｇｃａｔｇ−３’（配列番号３９）および５’−ａａｇａａｔｔｃｇａｃｃｃａｃｃｃｃｔａｔｃａｔｔｔｃａｃｃ−３’（配列番号４０）を使用して、２６ ＰＣＲ エンハンサー（インビトロジェン社）を用いた、供給された緩衝液のＰｆｘ ＤＮＡポリメラーゼを用い、増幅された。増幅された、ＢａｍＨ１／ＥｃｏＲ１が隣接する（ｆｌａｎｋｅｄ）ＰＣＲプロダクトは、その後、ｐＧＥＭ−Ｔ Ｅａｓｙ ｐｌａｓｍｉｄ（Ｐｒｏｍｅｇａ社）に結紮され（ｌｉｇａｔｅｄ）、ｐＧＥＸ−６Ｐ−１ ｐｌａｓｍｉｄ ＤＮＡ（ＧＥ ヘルスケア ライフ サイエンス社）に、サブクローン（ｓｕｂｃｌｏｎｅ）され、そして、大腸菌ＢＬ２１において、形質転換（ｔｒａｎｓｆｏｒｍ）された。プロテアーゼ非活性のＨｐ１０１８／１９ＤｓｐＳ２０５Ａタンパク質の構造（ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ）は、ＱｕｉｋＣｈａｎｇｅＨ Ｌｉｇｈｔｎｉｎｇ Ｓｉｔｅ−Ｄｉｒｅｃｔｅｄ Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ Ｋｉｔ（ストラタジーン社）を用い、製造元の指示に従って、２０５位のセリンを、アラニンに変異させた。ＧＳＴ−Ｈｐ１０１８／１９Ｄｓｐの異種過剰発現および精製のために、形質転換された（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ）大腸菌は、０．６のＯＤ_５５０まで、５００ｍｌのＴＢ培地で育てられ、そして、発現は、０．１ｍＭのイソプロピルチオガラクトシド（ＩＰＴＧ）の添加により誘導された。細菌培養は、４０００ｇで、３０分間、ペレット化され、そして、超音波で、２５ｍｌのＰＢＳに溶解された。溶解物は、遠心分離によってクリアにされ、そして、上清は、一晩、４℃で、グルタチオンセファロース（ＧＥ ヘルスケア ライフ サイエンス社）で培養された。融合タンパク質は、室温で、１０分間、１０ｍＭの還元型グルタチオンで溶出され、または、４℃で、１６時間、１８０Ｕ Ｐｒｅｓｃｉｓｓｉｏｎ プロテアーゼ（Ｐｒｅｓｃｉｓｓｉｏｎ Ｐｒｏｔｅａｓｅ）（ＧＥ ヘルスケア ライフ サイエンス社）で切断された。溶出と切断されたプロダクトは、ＳＤＳ ページおよびザイモグラフィーによって分析された。

Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｉｍａｌ ｈｏｕｓｅ、メルボルン大学、パークビルで飼育された、特定病原体がフリーの、年齢をマッチされた雌のｃ５７ｂｌ／６マウスは、組換えＨｔｒＡ抗原（配列番号１）で、鼻のルートを経由して、３週間あけて、２回、ワクチン接種された。経鼻ワクチン接種のために、３０μＬのボリュームのワクチンは、ゆっくりと、覚醒マウス（ｃｏｎｓｃｉｏｕｓ ｍｏｕｓｅ）の外鼻孔に適用された。マウスは、ホルマリンで固定された、ヘリコバクター・ピロリ菌１００μｇ、ミョウバン１００μｇ、または、ＨｔｒＡの１０μｇとミョウバンの１００μｇを、皮下で免疫された。

実施例２
ヘリコバクター・ピロリ菌の培養およびマウスへの抗原投与
ヘリコバクター・ピロリ菌株ＳＳ１は、５％馬血清（ＪＲＨ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社、米国）、０．０２％アムホテリシンＢおよびスキローの選択的サプリメント（Ｓｋｉｒｒｏｗ’ｓ Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｓ）を含む、ブレイン ハート インフュージョン培地（ＢＨＩ；Ｏｘｏｉｄ、ベイジングストーク、イギリス）で、微好気性条件下で、３７℃で培養された。

ヘリコバクター・ピロリ菌の溶解物（ＨｐＬ）は、０．１ｍｍのガラスビーズ（Ｄａｉｎｔｒｅｅ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、セント・ヘレンズ、タスマニア州、オーストラリア）を、細菌に加え、ＦａｓｔＰｒｅｐ ＦＰ１２０（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓａｖａｎｔ社、ウォルサム、マサチューセッツ州、米国）を使用して、細菌が溶解するまで、サイクルの間、氷上で培養しながら、３０秒サイクルで、６０ｍ／ｓでパルスすることによって調製した。無菌状態（Ｓｔｅｒｉｌｉｔｙ）は、馬血液寒天培地プレート上で、培養することによって確認された。タンパク質レベルは、ＢＣＡタンパク質アッセイ・キット（Ｐｉｅｒｃｅ社、ロックフォード、イリノイ州、米国）を用いて定量した。

ワクチン接種用のホルマリン固定のために、細菌は、０．０１ＭのホルムアルデヒドのＰＢＳで懸濁され、そして、１．５のＯＤ_６００に調整された。２時間、３７℃で穏やかに振盪した後、細菌は、室温で、一晩、振盪され、ＰＢＳで、３回洗浄され、そして、１０^８細菌／ｍＬで再懸濁された。

これらの研究で使用された、Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、Ｗａｌｔｅｒ ａｎｄ Ｅｌｉｚａ Ｈａｌｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、メルボルンから得た、年齢をマッチさせた雌であった。すべての動物実験は、メルボルン大学の動物倫理委員会によって承認された。

マウスは、１０^７のヘリコバクター・ピロリ菌のＳＳ１株の、０．１ｍＬのＢＨＩ懸濁液で、一度、胃内に感染させた。実験の完了時に、マウスを、ＣＯ_２窒息（ａｓｐｈｙｘｉａｔｉｏｎ）によって安楽死（ｅｕｔｈａｎｉｚｅｄ）させ、そして、胃内側の曲率に沿って、胃を開き、そして、２つの半分に分割された。半分の１つは、コロニー形成アッセイにより、細菌のレベルを定量するのに使用された。残りの半分は、胃炎の組織学的評価のため、中性に緩衝化されたホルマリンで固定された。

実施例３
コロニー形成アッセイ
抗原投与後、４週間で、胃は、内側の曲率に沿って開かれ、そして、２つの半分に分割された。半分の１つは、ＢＨＩ培地（ｂｒｏｔｈ）に置かれ、そして、均質にされた（ＧｍｂＨ Ｐｏｌｙｔｒｏｎ（登録商標） ｈｏｍｏｇｅｎｉｓｅｒ， Ｋｉｎｅｍａｔｉｃａ社、スイス連邦共和国）。ＢＨＩ培地（ｂｒｏｔｈ）に、１０倍の連続希釈（ｓｅｒｉａｌ ｄｉｌｕｔｉｏｎ）を調製し、そして、分割量を、Ｇｌａｘｏ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ ａｇａｒ ｐｌａｔｅｓ（馬血液５％、３．７５μｇ／ｍｌのアムホスタットＢ、１２μｇ／ｍＬのバンコマイシン、０．４μｇ／ｍＬのポリミキシンＢ、２０μｇ／ｍｌのバシトラシンおよび１．３μｇ／ｍＬのナリジクス酸を含む、血液寒天培地ベース（（Ｂｌｏｏｄ Ａｇａｒ Ｂａｓｅ）番号２）に、広げた。５日間の培養後、コロニーを計測し、そして、胃当たりの、コロニー形成単位の数が計算された。

実施例４
胃病理学
胃炎は、前述したように、組織学的に、評価された（サットンら、２００１年）。各胃の２番目の半分は、１０％の中性緩衝ホルマリン（ｎｅｕｔｒａｌ ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｆｏｒｍａｌｉｎ）で固定され、パラフィンに埋め込まれ、そして、４μｍの厚さの切片にカット（ｓｅｃｔｉｏｎｓ ｃｕｔ）された。胃炎の評価のために、切片は、Ｈ＆Ｅで染色され、そして、光学顕微鏡下、盲検で（ｂｌｉｎｄｅｄ）、計測された。炎症は、３つのパラメーターを使用して、各動物について、２つの独立した組織切片において評価された。
（１）細胞浸潤（ｃｅｌｌｕｌａｒ ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ）（リンパ球および好中球の基底膜（ｌａｍｉｎａ ｐｒｏｐｒｉａ）への移行）。０乃至６で評価され（ｇｒａｄｅ）、０は、なし；１は、軽度の多発性（ｍｕｌｔｉｆｏｃａｌ）；２は、軽度の蔓延（ｗｉｄｅｓｐｒｅａｄ）；３は、軽度の蔓延および中等度の多発性；４は、中等度の蔓延；５は、中程度の蔓延および重度の多発性；ならびに、６は、重度の蔓延を示す。
（２）「粘液腺化生」（胃体（ｃｏｒｐｕｓ）における、大きい、薄い、球状細胞（ｌａｒｇｅ， ｐａｌｅ， ｇｌｏｂｕｌａｒ ｃｅｌｌｓ））ならびに、
（３）「萎縮（ａｔｒｏｐｈｙ）」（傍細胞及び主細胞（ｐａｒｉｅｔａｌ ａｎｄ ｃｈｉｅｆ ｃｅｌｌｓ）の損失）。
「粘液腺化生」および「萎縮（ａｔｒｏｐｈｙ）」は、０乃至３で評価された（０は、なし；１は、軽度；２は、中等度；３は、重度）。

実施例５
胃のサイトカイン
細胞の残骸（Ｃｅｌｌ ｄｅｂｒｉｓ）は、遠心分離により、胃のホモジネートから除去され、そして、上清のタンパク質の濃度は、ＥＬＩＳＡに先立ち、ＢＣＡ タンパク質 アッセイ キット（Ｐｉｅｒｃｅ社、ロックフォード、イリノイ州、米国）を使用して定量した。サイトカイン濃度は、９６ウェルのＭａｘｉｓｏｒｐ プレート（Ｎｕｎｃ社、ロスキデ、デンマーク） を、精製された抗マウスＩＬ−１３（５０ｎｇ／ウェル；ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社、サンディエゴ、カリフォルニア、米国）、ＩＬ−１０（１００ｎｇ／ウェル；ＢＤ バイオサイエンス社、サンノゼ、カリフォルニア、米国）、ＩＦＮγ（１００ｎｇ／ウェル；ＢＤ バイオサイエンス社）またはＩＬ−１７Ａ（５０ｎｇ／ウェル；ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社）で、重炭酸塩コーティング バッファーにおいて、ｐＨ９．６で、一晩、コーティングすることにより決定された。重複して（ｉｎ ｄｕｐｌｉｃａｔｅ）、サンプルを追加するのに先立ち、１時間、その後、室温で、３時間、または、４℃で一晩かけて、プレートは、１％のＢＳＡ（シグマ社）を含むＰＢＳ（ブロッカー）で、ブロック（ｂｌｏｃｋ）された。補足された（Ｃａｐｔｕｒｅｄ）サイトカインは、その後、ビオチン標識抗マウスＩＬ−１３（２５ｎｇ／ウェル；ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社）、ＩＬ−１０（５０ｎｇ／ウェル；ＢＤ Ｂｉｏ−ｓｃｉｅｎｃｅｓ社）、ＩＦＮγ（５０ｎｇ／ウェル；ＢＤ バイオサイエンス社）、または、ＩＬ−１７Ａ（２５ｎｇ／ウェル；ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社）を含むブロッカーを使用して、５０μＬの西洋ワサビペルオキシダーゼでコンジュゲートされた（ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ）ストレプトアビジン（Ｐｉｅｒｃｅ社）１／５０００を含むブロッカーを加える前に、１時間、その後３０分で、標識化された。発色は、１０ｍｇ／ｍＬのＴＭＢ（シグマ）の０．１％ＤＭＳＯ溶液、および、０．００６％の過酸化水素を含むｐＨ５．０のリン酸クエン酸バッファーとして、調製されたＴＭＢ溶液の１００μＬを使用し、その反応は、４５０ｎｍで吸光度を読む前に、２Ｍ硫酸（ｓｕｌｐｈｕｒｉｃ ａｃｉｄ）の等量を用いて停止した。サンプル濃度は、組換え、ＩＬ−１０、ＩＦＮγ（ＢＤ バイオサイエンス社）、ＩＬ−１３およびＩＬ−１７Ａ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社）の標準曲線に対して、測定した。

実施例６
ＨｔｒＡ血清阻害アッセイ
ＥｎｚＣｈｅｋ（登録商標）ペプチダーゼ／プロテアーゼ アッセイ キット（Ｅ３３７５８）は、上記ワクチン接種マウスの血清の、ＨｔｒＡのタンパク質分解の活性をブロックする能力を測定するために使用した。ワクチン接種を受けた／感染したマウスからの血清（抗原投与後、４週間で収集された）は、ペプチダーゼ キットのコンポーネントＢ（消化バッファー（ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ ｂｕｆｆｅｒ））を使用した、ＨｔｒＡまたはＰＢＳ（コントロール）のいずれかで、１：５に希釈され、そして、３０分間、混合された。ＨｔｒＡのタンパク質分解活性は、その後、６０分間のインキュベーションに続く、基質の開裂を測定することにより、評価された（キットの推奨のとおり）。吸光度は、５０２／５２８ｎｍで、ＴＥＣＡＮ Ｉｎｆｉｎｉｔｅ Ｍ２００Ｐｒｏ ｒｅａｄｅｒを使用して、読み、そして、データは、Ｍａｇｅｌｌａｎ ７．１ ＳＰＩ ｓｏｆｔｗａｒｅを使用して分析した。

実施例７
感染症に対する抗体反応の定量化
心臓穿刺（ｃａｒｄｉａｃ ｐｕｎｃｔｕｒｅ）によって血清を採取した。腸粘液擦過（Ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｍｕｃｕｓ ｓｃｒａｐｉｎｇ）は、外科用メス刃を使用して縦に開いた小腸の下部１０ｃｍから、採集し、重さを測定し、その後、完全な、ミニ−ＥＤＴＡフリーのプロテアーゼ阻害剤カクテル（ｍｉｎｉ−ＥＤＴＡ−ｆｒｅｅ ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｃｏｃｋｔａｉｌ）（ロシュ・ダイアグノスティックス社，マンハイム，ドイツ）を含むＰＢＳの等量と混合した。抗ヘリコバクター抗体のレベルは、直接ＥＬＩＳＡ法により決定した。Ｍａｘｉｓｏｒｐ ｉｍｍｕｎｏｐｌａｔｅｓ（Ｎｕｎｃ社、デンマーク）は、一晩、ヘリコバクター・ピロリ菌の溶解物の、ｐＨ９．６の炭酸水素バッファーの５０μｇ／ウェルでコーティングした。プレートは、１時間、室温で、ブロックされた。１時間、室温で、インキュベーションする前に、サンプルは、連続して、ブロッカーで、１／１０に希釈され、そして、５０μＬが、ウェルを複製（ｄｕｐｌｉｃａｔｅ）するために、加えられた。捕捉された抗体は、西洋わさびペルオキシダーゼでコンジュゲートされた、ヤギ−抗−マウス ＩｇＧ（４ｎｇ／ウェル；Ｐｉｅｒｃｅ社）、ヤギ抗マウス ＩｇＧ１（８ｎｇ／ウェル、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ社、バーミンガム、ＡＬ、米国）またはＩｇＡ（１０ｎｇ／ウェル、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ社）を含む、ブロッカーで、室温で、１時間、標識化された。上記のように、発色され、そして、解読され、そして、エンド・ポイントの力価（ｔｉｔｒｅｓ）が、計算された。

実施例８
ウェスタン ブロティング
ヘリコバクター・ピロリ菌の溶解物（２０μｇ／レーン）は、８％ＳＤＳページ ゲルにおいて分離され、その後、硝酸セルロースの膜（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）に移された。当該膜は、５％のスキムミルクで、ブロックされ、１／１０００に希釈された、腸内擦過でプローブ化された。結合した一次抗体は、西洋わさびペルオキシダーゼでコンジュゲートされた抗マウス抗体（Ｄａｋｏ）で検出された。標識化されたタンパク質は、ＥＣＬ Ｐｒｉｍｅ ｒｅａｇｅｎｔ（アマシャム バイオサイエンス社）で、膜を培養し ＩｍａｇｅＱｕａｎｔ ＬＡＳ ４０００（ＧＥ ヘルスケア社）を使用して、視覚化された。すべてのゲルが、１０秒間暴露された。

実施例９
統計
Ｓｏｃｉａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｓｏｆｔｗａｒｅ， ｖｅｒｓｉｏｎ ２１．０の統計パッケージを使用して、統計分析を行った。

実施例１０
結果
ＨｔｒＡを用いた、予防的なワクチンの接種は、最小限の保護を誘導する。
マウスのグループは、殺されたヘリコバクター・ピロリ菌とコレラ毒素（ＣＴ）アジュバント（ポジティブ コントロール）、または、ＨｔｒＡとＣＴを用いて、鼻ルートを介して、２回、ワクチン接種された。ネガティブ コントロールは、ＰＢＳで、偽投与がされた。最終投与後、４週間、すべてのマウスは、生きているヘリコバクター・ピロリ菌ＳＳＩ株で抗原投与された。マウスの胃の中に細菌負荷（Ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｂｕｒｄｅｎｓ）は、コロニー形成アッセイによって、４週間後に評価された。ワクチン接種は、ネガティブ コントロール グループと比較して、細菌のコロニー形成を減少した（図１；＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．０００１；分散分析（ＡＮＯＶＡ））。

免疫後の胃炎
図１において示される、マウスの胃は、組織学的に、胃炎の評価がされた。予想通り、抗原投与の前に、殺されたヘリコバクター・ピロリ菌とＣＴでワクチン接種された、マウスは、ネガティブ コントロール グループ（＊マン−ホイットニー；図２）と比較して、胃炎の重症度が顕著に増加した（増加した萎縮および化生、重要な（ｋｅｙ）胃炎読出し（ｇａｓｔｒｉｔｉｓ ｒｅａｄｏｕｔｓ）。しかし、ＨｔｒＡとＣＴでワクチン接種された、マウスの胃炎は、ネガティブ コントロール グループと区別できなかった。言い換えれば、図１に示される、防御免疫にもかかわらず、これらのマウスは、免疫後の胃炎を発症しなかった。

これは、ポジティブ コントロール グループと比較して、ＨｔｒＡとＣＴのグループにおいて観察された、わずかに低いレベルの保護に関連していることはありえない。本発明者は、ヘリコバクター・ピロリ菌のワクチンをテストする、組換え抗原を用いて、無数の同様の実験を行ったが、以前は、これを観察していない。ヘリコバクター・ピロリ菌のコロニー形成は、胃炎の重症度とは関連しない、ということは、文献において、よく認識されている。

免疫後の胃のサイトカイン レベルの抑制
ヘリコバクター・ピロリ菌の感染は、マウスおよびヒトの両方の胃の組織において、Ｔｈ１とＴｈ１７の混合する、応答を誘導する。ＩＬ−１０は、ヘリコバクター・ピロリ菌で誘導される胃炎の重要な抑制として知られている。ＩＬ−１３は、Ｔｈ２型反応を測定するために使用されるメインのマーカーである。この減少した胃炎をさらに探索するために、上記のマウスの胃のホモジネートにおけるサイトカインは、ＥＬＩＳＡ法により、定量した。

予想されたように、感染制御（ＰＢＳ）およびポジティブ コントロール ワクチン（ヘリコバクター・ピロリ菌＋ＣＴ）グループからの胃の組織は、Ｔｈ１（ＩＦＮγ）およびＴｈ１７（ＩＬ−１７Ａ）サイトカインの高レベルで、存在した。この特定の実験は、感染していないコントロール グループを含まないが、しかし、数年に亘る実験は、これらのサイトカインは、通常、簡単に、胃のホモジネートにおいて検出されないことを示す。ＩＬ−１０およびＩＬ−１３も、また、上昇した。これらのサイトカインは、Ｔｈ１およびＴｈ１７型のサイトカインによって誘導された、炎症のシグナルの抑制を増加するので、これは、また、予想される。

完全に予想外で観察されたことは、ＨｔｒＡ＋ＣＴによる、ワクチン接種は、感染マウスにおけるこれらのサイトカインのレベルを、非常に低いまたは検出不可能なレベルまで、顕著に抑制した（＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．０００１；ＡＮＯＶＡ）（図３）。これは、ワクチンが、ヘリコバクター・ピロリ菌で誘導された胃炎を抑制することが実証された、初めてのことであった。

組換えＨｔｒＡ（ｒＨｔｒＡ）によるワクチン接種は、中和抗体の応答を誘導する
本発明者は、ワクチンが、ＨｔｒＡ活性を中和する抗体を誘導することによって、胃炎や胃のサイトカイン レベルを抑制していることを仮説とした。これをテストするために、ＨｔｒＡ活性のためのｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイを、上記のマウスの血清の阻害能力を評価するために、開発した。図４の結果は、ＨｔｒＡでワクチン接種され、その後、ヘリコバクター・ピロリ菌で抗原投与された、マウスの血清は、実際、ターゲットの基質を分解する、ＨｔｒＡプロテアーゼの機能を阻害した（＊＊＊分散分析（ANOVA））。これは他のグループからの血清とは対照的であった。

遺伝子組換えＨｔｒＡ（ｒＨｔｒＡ）のワクチン接種は、ＨｔｒＡに対する、抗体を誘導する
マウスのグループは、鼻のルート経由で ｒＨｔｒＡ＋ＣＴで、３回、ワクチン接種された。ネガティブ コントロールは、ＰＢＳで偽投与された。ワクチン接種されたマウスの血清は、特異的に、ＨｔｒＡを検出した抗体を含んだ（図５）。

注射ルートによる、治療的な、ＨｔｒＡワクチン接種
マウスのグループは、ミョウバン アジュバントのみ（ネガティブ コントロール）、ｒＨｔｒＡ とミョウバン、または、ｒＨｔｒａ^ｓａとミョウバン（酵素を非活性にする、セリンをアラニンに代える、単一のアミノ酸置換を除いて、ｒＨｔｒａ^ｓａは、ｒＨｔｒＡと同一である。）のいずれかで、皮下に注射される前に、ヘリコバクター・ピロリ菌に感染していた。最後のワクチン接種後、４週間で、胃は除去され、そして、細菌のコロニー形成を、コロニー形成アッセイによって定量した。いかなるグループの間で、ヘリコバクター・ピロリ菌のコロニー形成レベルに、差はなかった（図６）。

注射ルートによる、治療的、ＨｔｒＡのワクチン接種は、ヘリコバクター・ピロリ菌で誘導された胃炎に対して保護しない
図６で説明した、治療的に、ワクチン接種された、マウスの胃の胃炎の重症度を、組織学的に、定量された。コロニー形成に効果はなかったにもかかわらず（図６）、活性なｒＨｔｒａまたは非活性なｒＨｔｒＡ^ｓａのいずれを用いた、ワクチン接種は、ヘリコバクター・ピロリ菌で誘導された、萎縮性胃炎の発症に対して、保護を齎した（図７）。

注射ルートによる、治療的な、ＨｔｒＡのワクチン接種は、胃のサイトカインの顕著な増加なしで、ヘリコバクター・ピロリ菌で誘導された胃炎に対して保護した
図６で説明されている、マウスの胃のホモジネートにおける、サイトカイン レベルは、ＥＬＩＳＡ法により、定量された。いずれかのｒＨｔｒＡにより、ワクチン接種されたグループは、特に、ミョウバン単独でワクチン接種された、主のネガティブ コントロール グループと比較して、重要な胃のサイトカインにおいて、顕著な増加を生成しなかった（図８）。

注射ルートによる、治療的な、ＨｔｒＡのワクチン接種は、消化管において、ネイティブのＨｔｒＡに特異的な抗体を誘導する
図６で説明された、マウスから腸内擦過（Ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｓｃｒａｐｉｎｇｓ）は、ＨｔｒＡに対する抗体の存在についてのテストがされた。ヘリコバクター・ピロリ菌の溶解物に対する、腸内擦過のウエスタンブロット分析は、ｒＨｔｒＡで治療的にワクチン接種された、感染したマウスのみが、ＨｔｒＡに対する検出可能な抗体を有することを示した（図９）。重要なことは、これも、また、遺伝子組換えＨｔｒＡを用いた、ワクチン接種は、ネイティブのヘリコバクター・ピロリ菌に対する粘膜抗体を誘導した。ことを実証する。

広く記載されている発明の範囲から逸脱することなく、特定の実施形態に示されるように、本発明に、多数のバリエーションおよび／または変更がなされるということを、当業者は、理解するであろう。本実施形態は、したがって、すべての点において、例示として考慮され、制限として考慮されてはならない。

ここに、議論され、および／または、参照された、すべての刊行物は、完全に、ここに、組み込まれる。

本出願は、２０１４年６月３０日に提出された、ＡＵ ２０１４９０２４９３の優先権を主張し、その全体の内容が参照により組み込まれる。

本明細書に含まれる、文書、行為、材料、デバイス、記事等に関するいかなる議論も、本発明の文脈を提供する目的のためだけである。この出願の各クレームの優先日の前に存在していたので、これらの事項の、任意のまたはすべてが、先行技術の一部を形成し、または、本発明に関連する分野において、一般常識である、との合意であるとして判断されてはならない。

［参照文献］
ジョーンズら（Ｊｏｎｅｓ）（１９８６年）Nature ３２１：５２２−５２５
レヴィット（Ｌｅｖｉｔｔ）（１９８３年）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ． １６８：５９５−６２０
ローワーら（Ｌｏｗｅｒ）（２００８年）ＰＬｏｓ Ｏｎｅ；３：ｅ３５１０
ニードルマン（Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ）およびウンシュ（Ｗｕｎｓｃｈ）（１９７０年）：Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８（３）：４４３−４５３
クイーンら（Ｑｕｅｅｎ）（１９９１年）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ． ８８：２８６９
サットンら（Ｓｕｔｔｏｎ）（２００１年）Ｇｕｔ、４９：４６７−４７３

Claims (16)

1. 患者（ｓｕｂｊｅｃｔ）における、ヘリコバクター・ピロリ菌により誘導された（ｉｎｄｕｃｅｄ）炎症を、治療または阻止するための医薬品を製造するための、細菌のＨｔｒＡポリペプチド、および／または、細菌のＨｔｒＡに結合する抗体の使用であって、ここで、
   ＨｔｒＡポリペプチドは、配列番号１〜６のいずれか１つと、少なくても９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
2. 請求項１に記載の使用であって、ここで、
   前記ＨｔｒＡポリペプチドが、配列番号１〜６のいずれか１つと、少なくても９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
3. 請求項１または２に記載の使用であって、ここで、
   ヘリコバクター・ピロリ菌により誘導された（ｉｎｄｕｃｅｄ）炎症が、胃炎（ｇａｓｔｒｉｔｉｓ）および／または十二指腸炎（ｄｕｏｄｅｎｉｔｉｓ）である。
4. 細菌のＨｔｒＡポリペプチドを含む、免疫原性組成物（ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ）であって、免疫原性組成物が、患者（ｓｕｂｊｅｃｔ）における、ヘリコバクター・ピロリ菌により誘導された（ｉｎｄｕｃｅｄ）炎症の、治療または阻止において使用するための免疫原性組成物であって、ここで、
   前記ＨｔｒＡポリペプチドが、配列番号１〜６のいずれか１つと、少なくても９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
5. 細菌のＨｔｒＡポリペプチドを含む、免疫原性組成物（ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ）を構成する、ワクチン、および／または治療用ワクチンであって、ここで、
   前記ＨｔｒＡポリペプチドが、配列番号１〜６のいずれか１つと、少なくても９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
6. 薬学的に許容される賦形剤および／またはアジュバントを含む、請求項５に記載されたワクチン。
7. ワクチン、および／または治療用ワクチンである、請求項４に記載の免疫原性組成物（ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ）。
8. ＨｔｒＡポリペプチドが、配列番号１〜６のいずれか１つからなる、請求項４〜７のいずれか１項に記載の免疫原性組成物（ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ）またはワクチン。
9. 細菌のＨｔｒＡポリペプチドに結合する抗体を含む、医薬組成物であって、ここで、
   前記ＨｔｒＡポリペプチドが、配列番号１〜６のいずれか１つと、少なくても９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
10. 前記抗体が、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）2、またはｓｃＦｖである、請求項９に記載の医薬組成物。
11. 前記ＨｔｒＡポリペプチドが、配列番号１〜６のいずれか１つからなる、請求項９または
    １０に記載の医薬組成物。
12. ヘリコバクター・ピロリ菌で誘導された炎症が、胃炎および／または十二指腸炎である、請求項４，７または８のいずれかに記載された免疫原性組成物。
13. ワクチンおよび／または治療用ワクチンを製造する方法であって、前記方法が、ＨｔｒＡポリペプチドと、薬学的に許容される賦形剤および／またはアジュバントとを混合することを含む、方法であって、ここで、
    前記ＨｔｒＡポリペプチドが、配列番号１〜６のいずれか１つと、少なくても９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
14. 患者において、ヘリコバクター・ピロリ菌の感染によって引き起こされる疾患の、治療または阻止のための医薬品の製造のためのＨｔｒＡポリペプチドの使用であって、ここで、
    前記ＨｔｒＡポリペプチドは、配列番号１〜６のいずれか１つと、少なくても９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
15. 請求項１４に規定された使用であって、
    ここで、前記ＨｔｒＡポリペプチドは、配列番号１乃至６のいずれか１つと、少なくとも、９５％の同一性のある、アミノ酸配列を含む。
16. 請求項１４または１５に記載された使用であって、
    ここで、前記ＨｔｒＡポリペプチドは、配列番号１乃至６のいずれか１つからなる。