CN106573038A - 螺杆菌治疗剂 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及治疗和/或预防受试者中由表达HtrA的细菌引起的炎症的方法。本发明还涉及包含HtrA多肽或其片段的免疫原性组合物、以及用于治疗或预防疾病的治疗性和/或预防性的疫苗。

Description

螺杆菌治疗剂
技术领域
本发明涉及治疗和/或预防受试者中的炎症的方法。本发明还涉及包含多肽或其片段的免疫原性组合物、以及用于治疗或预防疾病的治疗性和/或预防性的疫苗。
背景技术
幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)是革兰氏阴性细菌，其为人胃的主要病原体。感染通常发生在儿童期中，传播最可能是通过口-口途径。一旦建立，基本上所有的感染是终生的，且据估测，世界人口的一半被这些细菌感染。
幽门螺杆菌(H.pylori)感染会造成慢性胃炎，其在某些个体中是多种病状的发生的主要病原学因素，所述病状包括胃溃疡(gastric ulcers)、十二指肠溃疡(duodenalulcers)、胃MALT淋巴瘤(gastric MALT lymphoma)和胃腺癌(gastric adenocarcinoma)。胃腺癌仍然是世界上由恶性肿瘤引起的死亡的第三大主要原因，仅次于肺癌和肝癌。被完全接受的是，这些幽门螺杆菌-相关的疾病的发生是慢性胃炎的直接结果，并且炎症越严重，这些病状越可能发生。
目前通过联合抗生素疗法来治疗幽门螺杆菌感染。但是，越来越多的抗生素抗性的发生是一个严重的担忧。第一轮治疗的失败率是20％，且对于第二轮治疗是25％，所以两轮治疗后的总失败率是5％。随着增加的抗性比率，预期该比率在未来几年中增加。
自从它的发现以来，已经做出大量努力来开发目的在于保护免于幽门螺杆菌感染的有效疫苗。这些努力迄今为止是完全不成功的。妨碍有效疫苗的开发的主要问题是，不能可靠地产生消毒免疫。存在许多减少动物模型中的幽门螺杆菌定殖(colonisation)的疫苗方案，但是都没有完全根除它。小鼠的疫苗接种(预防性的或治疗性的)通常导致细菌数目的1-2个对数(log)下降，而临床试验迄今为止尚未证实任何效力的证据。
此外，预防性疫苗接种在小鼠中诱导的保护性免疫通常与胃炎(称作免疫后胃炎)的严重程度的增加有关，尽管这对于治疗性疫苗接种而言尚未报道。
因此，仍然需要对幽门螺杆菌引起的炎症和疾病的有效的预防性治疗性治疗。
发明内容
本发明的发明人发现，给受试者接种HtrA多肽会减少或预防细菌诱导的炎症和疾病的发生，尽管细菌感染在疫苗接种后持续。
因此，第一方面提供了一种治疗或预防受试者中细菌诱导的炎症的方法，所述方法包括给所述受试者施用细菌HtrA多肽或其至少10个氨基酸的片段和/或结合细菌HtrA的抗体。
在第一方面的一个实施方案中，所述方法包括施用免疫原性组合物，其包含细菌HtrA多肽或其至少10个氨基酸的片段。
第二方面提供了细菌HtrA多肽或其至少10个氨基酸的片段和/或结合细菌HtrA的抗体在治疗或预防受试者中细菌诱导的炎症中的用途。
第三方面提供了细菌HtrA多肽或其至少10个氨基酸的片段和/或结合细菌HtrA的抗体在制备用于治疗或预防受试者中细菌诱导的炎症的药物中的用途。
在第一至第三方面的一个实施方案中，所述炎症由肠病原性细菌诱导，且所述HtrA多肽是肠病原性细菌HtrA多肽或其至少10个氨基酸的片段。在一个特定实施方案中，所述肠病原性细菌选自幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)、大肠杆菌(Escherichiacoli)、弗氏志贺氏菌(Shigella flexneri)和空肠弯曲杆菌(Campylobacter jejuni)，和/或所述肠病原性细菌HtrA选自幽门螺杆菌、大肠杆菌、弗氏志贺氏菌和空肠弯曲杆菌HtrA。
在第一至第三方面的另一个实施方案中，所述炎症由幽门螺杆菌诱导，且所述HtrA多肽是幽门螺杆菌HtrA多肽或其至少10个氨基酸的片段。
在第一至第四方面的另一个实施方案中，所述HtrA多肽或其至少10个氨基酸的片段包含与SEQ ID NO：1-6中的任一个或与其至少10个氨基酸的片段至少95％相同的氨基酸序列。
在第一至第三方面的另一个实施方案中，所述HtrA多肽或其至少10个氨基酸的片段包含与SEQ ID NO：7-36中的任一个至少95％相同的氨基酸序列。
在第一至第三方面的另一个实施方案中，所述细菌诱导的炎症是胃炎和/或十二指肠炎(duodenitis)。
在第一至第三方面的另一个实施方案中，所述炎症是萎缩性胃炎(atrophicgastritis)。
第四方面提供了用于治疗或预防受试者中细菌诱导的炎症的免疫原性组合物，其包含细菌HtrA多肽或其至少10个氨基酸的片段和/或结合细菌HtrA的抗体。
在第四方面的一个实施方案中，所述免疫原性组合物包含细菌HtrA多肽或其至少10个氨基酸的片段。
在第四方面的另一个实施方案中，所述细菌HtrA多肽或其至少10个氨基酸的片段是幽门螺杆菌多肽或其至少10个氨基酸的片段。
在第四方面的另一个实施方案中，所述组合物包含HtrA多肽，所述HtrA多肽包含与SEQ ID NO：1-6中的任一个或其至少10个氨基酸的片段至少95％相同的氨基酸序列。
在第四方面的另一个实施方案中，所述HtrA多肽或其至少10个氨基酸的片段包含与SEQ ID NO：7-36中的任一个至少95％相同的氨基酸序列。
在第四方面的另一个实施方案中，所述组合物包含药学上可接受的赋形剂和/或佐剂。
在第四方面的另一个实施方案中，所述免疫原性组合物是疫苗。在一个特定实施方案中，所述免疫原性组合物是治疗性疫苗。
第五方面提供了一种药物组合物，其包含结合细菌HtrA多肽的抗体。优选地，所述抗体特异性地结合HtrA。
在一个实施方案中，所述抗体结合幽门螺杆菌HtrA多肽。
在第五方面的另一个实施方案中，所述抗体是单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人抗体、Fab、F(ab′)2或scFv。
第六方面提供了本文描述的免疫原性组合物、本文描述的药物组合物或结合细菌HtrA的抗体在药物制备中的用途，所述药物用于治疗或预防细菌诱导的炎症。
在第六方面的一个实施方案中，所述细菌诱导的炎症是幽门螺杆菌诱导的炎症。
在第六方面的另一个实施方案中，所述细菌诱导的炎症是胃炎和/或十二指肠炎。在一个特定实施方案中，所述炎症是萎缩性胃炎。
第七方面提供了一种制备免疫原性组合物的方法，所述方法包括将HtrA多肽或其至少10个氨基酸的片段与药学上可接受的赋形剂和/或佐剂混合。
在第七方面的一个实施方案中，所述方法包括分离HtrA多肽。在一个特定实施方案中，所述HtrA多肽是重组HtrA多肽。
在第七方面的一个实施方案中，所述免疫原性组合物是疫苗。
第八方面提供了一种治疗或预防受试者中由幽门螺杆菌感染引起的疾病的方法，所述方法包括给所述受试者施用HtrA多肽或其至少10个氨基酸的片段。
在第八方面的一个实施方案中，所述方法包括给所述受试者施用免疫原性和/或药物性组合物，其包含HtrA多肽或其至少10个氨基酸的片段。
在第七或第八方面的一个实施方案中，所述HtrA多肽或其至少10个氨基酸的片段是幽门螺杆菌HtrA多肽或其至少10个氨基酸的片段。
在第七或第八方面的另一个实施方案中，所述HtrA多肽包含与SEQ ID NO：1-6中的任一个或其至少10个氨基酸的片段至少95％相同的氨基酸序列。
在第七或第八方面的另一个实施方案中，所述HtrA多肽或其片段包含与SEQ IDNO：7-36中的任一个至少95％相同的氨基酸序列。
在第八方面的一个实施方案中，所述免疫原性组合物包含药学上可接受的赋形剂和/或佐剂。
在第八方面的另一个实施方案中，由幽门螺杆菌感染引起的疾病是炎症、胃炎、胃溃疡、十二指肠溃疡、胃癌和/或粘膜相关淋巴样组织(MALT)淋巴瘤(mucosa-associated-lymphoid-tissue(MALT)lymphoma)。
在第一和第八方面的一个实施方案中，所述方法包括给所述受试者施用减毒的细菌或病毒，其包含HtrA多肽或其至少10个氨基酸的片段。
在第三至第七方面的一个实施方案中，给所述受试者的所述组合物或药物包含含有HtrA多肽或其至少10个氨基酸的片段的减毒的细菌或病毒。
第九方面提供了包含HtrA多肽或其至少10个氨基酸的片段的减毒的细菌或病毒。
在一个实施方案中，所述HtrA多肽或其至少10个氨基酸的片段是幽门螺杆菌HtrA多肽或其至少10个氨基酸的片段。
在另一个实施方案中，所述HtrA多肽包含与SEQ ID NO：1-6中的任一个或其至少10个氨基酸的片段至少95％相同的氨基酸序列。
在另一个实施方案中，其片段包含与SEQ ID NO：7-36中的任一个至少95％相同的氨基酸序列。
第十方面提供了一种DNA疫苗，其包含编码细菌HtrA多肽或其至少10个氨基酸的片段的多核苷酸。
在一个实施方案中，所述多核苷酸编码包含与SEQ ID NO：1-36中的任一个至少95％相同的氨基酸序列的HtrA多肽或至少10个氨基酸的片段。
在另一个实施方案中，在给受试者施用DNA疫苗以后，表达所述多肽，且产生针对所述多肽的免疫应答。
显而易见地，本发明的一个方面的优选特征和特性可应用于本发明的许多其它方面。
贯穿本说明书，词语“包含”或变体诸如“包括”或“含有”应当理解为暗示包括所述元件、整数或步骤，或者元素、整数或步骤的集合，但不排除任何其它元素、整数或步骤，或者元素、整数或步骤的集合。
在下文中通过以下非限制性实施例和参考附图描述本发明。
附图说明
图1.使用重组HtrA的预防性疫苗接种诱导一些针对幽门螺杆菌攻击的保护作用。通过鼻途径将小鼠组(n＝6)用杀死的幽门螺杆菌+霍乱毒素(CT)佐剂(阳性对照)或HtrA+CT接种两次。给阴性对照假施用PBS(n＝5)。第2次剂量以后4周，用活幽门螺杆菌株SS1攻击所有小鼠。4周以后通过菌落形成测定来评估小鼠胃中的细菌负荷。与阴性对照组相比(**p＜0.01，***p＜0.001；ANOVA)，疫苗接种减少了细菌定殖。
图2.使用重组HtrA的预防性疫苗接种没有引起免疫后胃炎。对小鼠的胃在组织学上评估胃炎。如预期的，与阴性对照组相比(*Mann-Whitney)，接种杀死的幽门螺杆菌+CT的小鼠在攻击之前具有显著增加的胃炎严重程度。但是，接种HtrA+CT的小鼠中的胃炎与阴性对照组没有差别。换言之，尽管有图1中所示的保护性免疫，但是这些小鼠被保护免于发生免疫后胃炎。
图3.使用重组HtrA(rHtrA)的预防性疫苗接种响应于幽门螺杆菌感染抑制胃细胞因子水平。通过ELISA定量在图1中描述的小鼠的胃组织中的细胞因子水平。如预期的，来自感染对照小鼠(PBS)和接受阳性对照疫苗(幽门螺杆菌+CT)的小鼠的胃组织呈现高细胞因子水平，包括已知高促炎性的那些(IFNγ和IL-17A)。意外地，使用HtrA+CT的疫苗接种将感染的小鼠中的这些细胞因子的水平显著地抑制至极低的或不可检测的水平(**p＜0.01，***p＜0.001；ANOVA)。
图4.使用重组HtrA的预防性疫苗接种诱导酶中和抗体应答。在实验结束时(幽门螺杆菌攻击后4周)从图1所示的接种疫苗的/攻击的小鼠收集血清。将这些血清与HtrA混合，然后测量它对酪蛋白的蛋白水解性裂解。与来自其它组的血清相比，来自接种HtrA、然后用幽门螺杆菌攻击的小鼠的血清会抑制HtrA蛋白酶的切割该蛋白底物的能力(***ANOVA)。
图5.使用HtrA的疫苗接种诱导针对HtrA的血清抗体。给一组C57BL/6小鼠(n＝8)经鼻接种rHtrA+CT。给予3次疫苗接种，间隔3周。将对照组用PBS假处理。最后一次疫苗接种后一周，将小鼠杀死并收集血清。通过ELISA测量针对rHtrA的抗体。
图6.使用注射的HtrA+明矾的治疗性疫苗接种没有减少幽门螺杆菌的定殖。将C57BL/6小鼠组(n＝7/8)用幽门螺杆菌感染4周，然后皮下注射4个每周剂量的单独明矾佐剂(阴性对照)、rHtrA和明矾、或rHtrasa和明矾。最后一次疫苗接种后4周，取出胃并通过菌落形成测定来定量细菌定殖。
图7.使用注射的HtrA+明矾的治疗性疫苗接种保护免于幽门螺杆菌诱导的胃炎。在组织学上量化治疗性疫苗接种的小鼠的胃中的胃炎的严重程度(如在图6中所述)。A)分开显示的rHtra和rHtrAsa组。B)组合的两个rHtrA组。百分比指示不具有明显的细胞浸润、组织化生(metaplasia)或萎缩的小鼠的比例。尽管对定殖没有影响(图6)，使用有活性的rHtra或无活性的rHtrAsa的疫苗接种导致免于幽门螺杆菌诱导的萎缩性胃炎的发生的保护作用。
图8.使用注射的HtrA+明矾的治疗性疫苗接种保护免于幽门螺杆菌诱导的胃炎，胃细胞因子没有显著增加。通过ELISA定量在治疗性接种HtrA的小鼠的胃匀浆物中的细胞因子水平(如在图6中所述)。任一个rHtrA组的疫苗接种没有产生关键胃细胞因子的显著增加，特别是与仅接种明矾的主要阴性对照组相比。
图9.使用注射的HtrA+明矾的治疗性疫苗接种诱导针对天然HtrA的肠抗体。从图6所述的小鼠收集肠刮片。通过蛋白质印迹检测结合幽门螺杆菌HtrA的抗体。显示了来自阴性对照小鼠(剩下未感染的和未接种疫苗的，或感染然后注射单独的明矾)或接种rHtrA和明矾或rHtrASA和明矾的幽门螺杆菌感染的小鼠的印迹。泳道显示了用来自各个小鼠的血清探测的印迹。
对序列表的解释
SEQ ID NO：1-幽门螺杆菌HtrA多肽的氨基酸序列(Genbank登记号：DAA34967)。
SEQ ID NO：2-幽门螺杆菌HtrA多肽的氨基酸序列(Genbank登记号：EJC53274)。
SEQ ID NO：3-幽门螺杆菌HtrA多肽的氨基酸序列(Genbank登记号：EJC13564)。
SEQ ID NO：4-幽门螺杆菌HtrA多肽的氨基酸序列(Genbank登记号：EJC10337)。
SEQ ID NO：5-幽门螺杆菌HtrA多肽的氨基酸序列(Genbank登记号：EJC09766)。
SEQ ID NO：6-幽门螺杆菌HtrA多肽的氨基酸序列(Genbank登记号：EJC07480)。
SEQ ID NO：7-30-幽门螺杆菌HtrA多肽片段的氨基酸序列。
SEQ ID NO：31-幽门螺杆菌HtrA多肽胰蛋白酶结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO：32-35-幽门螺杆菌HtrA多肽PDZ 1结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO：36-幽门螺杆菌HtrA多肽PDZ 2结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO：37-40-寡核苷酸引物
详细描述
一般技术和定义
除非另外明确定义，在本文中使用的所有技术和科学术语应当视为具有与本领域(例如，在免疫学、微生物学和生物化学中)的普通技术人员通常理解相同的含义。
除非另有说明，在本发明中利用的分子遗传学、生物化学和免疫学技术是本领域技术人员众所周知的标准操作。这样的技术在以下来源的文献中进行了描述和解释：例如，J，Perbal，A Practical Guide to Molecular Cloning(分子克隆的实践指导)，JohnWiley and Sons(1984)，J.Sambrook和Russell.，Molecular Cloning：A LaboratoryManual(分子克隆：实验室手册)，第3版，Cold Spring Harbour Laboratory Press(2001)，R.Scopes，Protein Purification-Principals and Practice(蛋白纯化-原理和实践)，第3版，Springer(1994)，T.A.Brown(编)，Essential Molecular Biology：A PracticalApproach(基本分子生物学：实践方法)，第1和2卷，IRL Press(1991)，D.M.Glover和B.D.Hames(编)，DNA Cloning：APractical Approach(DNA克隆：实践方法)，第1-4卷，IRLPress(1995和1996)，和F.M.Ausubel等人(编)，Current Protocols in MolecularBiology(现代分子生物学方法)，Greene Pub.Associates and Wiley-Interscience(1988，包括到目前的所有更新)，Ed Harlow和David Lane(编)Antibodies：A LaboratoryManual(抗体：实验室手册)，Cold Spring Harbour Laboratory，(1988)，和J.E.Coligan等人(编)Current Protocols in Immunology(现代免疫学反复)，John Wiley&Sons(包括到目前的所有更新)。
本文中使用的术语“治疗”包括对以下内容的提及：施用HtrA多肽或其片段、结合HtrA多肽的抗体或如本文中所述的组合物或疫苗，以减少或消除受试者中由表达HtrA的细菌诱导的炎症的至少一种症状。
术语“预防”表示保护可能暴露于表达HtrA多肽的细菌或被其感染的受试者免于发生细菌诱导的炎症的至少一种症状。
本文中使用的“施用”应当广义地解释，且包括将如本文中所述的组合物或治疗剂施用给受试者或患者以及将所述组合物或治疗剂提供给细胞，例如，通过将前药提供给患者进行施用。
术语“特异性地结合”、“特异地结合”、“特异性结合”表示，与特定结合剂和靶分子物质混合在一起时，抗体结合靶分子种类的能力优于对其它分子种类的结合。
HtrA丝氨酸蛋白酶
HtrA是许多肠病原性细菌物种(包括幽门螺杆菌、大肠杆菌、弗氏志贺氏菌和空肠弯曲杆菌)中的丝氨酸蛋白酶和周质伴侣蛋白。因而，术语“HtrA多肽”或“HtrA多核苷酸”表示这样的细菌多肽或多核苷酸：其已经被指定为或鉴别为，或预测为，基因或蛋白序列的数据库(诸如Genbank(http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/genbank/)或EMBL(http：//www.ebi.ac.uk/))上的HtrA。在一个实施方案中，所述HtrA多肽或多核苷酸是属于序列数据库上的幽门螺杆菌、大肠杆菌、弗氏志贺氏菌和空肠弯曲杆菌中的任一个的基因组的序列。在一个优选的实施方案中，所述HtrA多肽或多核苷酸是幽门螺杆菌HtrA多肽或多核苷酸(即在序列数据库上被鉴别为幽门螺杆菌的基因组中的HtrA序列的多肽或其片段、或多核苷酸或其片段)。
迄今为止，HtrA是唯一经鉴别的由幽门螺杆菌产生的丝氨酸蛋白酶。它是在细菌表面上表达并分泌的～55kDa蛋白。。它是细菌存活所必需的，甚至是体外生长所必需的。HtrA多肽的氨基酸序列的非限制性例子包括Genbank登记号DAA34967(SEQ ID NO：1)、EJC53274(SEQ ID NO：2)、EJC13564(SEQ ID NO：3)、EJC10337(SEQ ID NO：4)、EJC09766(SEQ ID NO：5)和EJC07480(SEQ ID NO：6)。
在本发明的方法和组合物中使用的HtrA多肽可以是分离的多肽，使用本领域的标准技术从其所来源的细菌直接纯化所述多肽。
在一个实施方案中，所述多肽是重组多肽。术语“重组”在多肽的情形中包括对以下内容的提及：当由细胞生产时与它的天然状态相比具有改变的量或改变的速率的多肽，以及所述多肽在不会天然地生产所述多肽的细胞中的生产。术语“重组”也表示多肽在无细胞表达系统中的生产。
通过具有缺口产生罚分＝5和缺口延伸罚分＝0.3的GAP(Needleman和Wunsch，(1970))分析(GCG程序)确定多肽的％同一性。查询序列的长度是至少100个氨基酸，且GAP分析在至少100个氨基酸的区域上比对两个序列。在一个实施例中，查询序列的长度是至少200个氨基酸，且GAP分析在至少200个氨基酸的区域上比对两个序列。在一个实施例中，GAP分析在它们的整个长度上比对两个序列。
关于限定的多肽，应当理解，高于上面提供的那些的％同一性数字将包括优选的实施方案。因而，在适用时，考虑到最小％同一性数字，优选的是，所述多肽包含与有关的提及的SEQ ID NO至少80％、更优选地至少85％、更优选地至少90％、更优选地至少91％、更优选地至少92％、更优选地至少93％、更优选地至少94％、更优选地至少95％、更优选地至少96％、更优选地至少97％、更优选地至少98％、更优选地至少99％、更优选地至少99.1％、更优选地至少99.2％、更优选地至少99.3％、更优选地至少99.4％、更优选地至少99.5％、更优选地至少99.6％、更优选地至少99.7％、更优选地至少99.8％，且甚至更优选地至少99.9％相同的氨基酸序列。
在本发明范围内还包括包含HtrA多肽的片段的免疫原性组合物和/或疫苗。在一个实施方案中，所述片段是HtrA多肽的“免疫原性片段”。
在一个实施方案中，所述HtrA多肽的片段长度是至少8个氨基酸，更优选地长度是9个氨基酸，或更优选地长度是至少10个氨基酸。备选地，所述片段长度是至少11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、30个、40个、50个、60个、70个、80个、90个或100个或更多个氨基酸。HtrA多肽的片段的非限制性例子提供为SEQ ID NO：7-36。因而，在一个实施方案中，施用给受试者的HtrA多肽能够引起针对包含选自SEQ ID NO：1-36中的任一个的氨基酸序列的多肽的免疫应答。
本领域技术人员会理解，免疫原性组合物、药物组合物和/或疫苗可以包含HtrA多肽的结构域，例如，胰蛋白酶结构域、PDZ 1结构域或PDZ 2结构域。HtrA多肽结构域的实例氨基酸序列提供为SEQ ID NO：31(胰蛋白酶2结构域)、SEQ ID NO：32-35(PDZ 1结构域)和SEQ ID NO：36(PDZ 2结构域)。
免疫原性组合物和疫苗
幽门螺杆菌已经与炎症和胃溃疡和十二指肠溃疡的发生强烈关联，且已经证实，幽门螺杆菌的根除可以阻止溃疡形成。实际上，呈现溃疡的患者应当进行幽门螺杆菌试验并治疗，因为具有既存溃疡的患者中的幽门螺杆菌的根除会治愈溃疡疾病且可以预防大多数复发。胃腺癌是世界上癌症死亡的第三大主要原因，且有力的证据表明幽门螺杆菌会促进胃癌的发生。尽管其它因素诸如低水果/蔬菜饮食、吸烟、年龄和高盐摄入也会增加胃癌的风险，但是幽门螺杆菌感染与胃癌最密切相关。幽门螺杆菌感染还可以导致被称作MALT淋巴瘤(胃癌的一类)的病症的发生。幽门螺杆菌感染的治疗和根除可以导致多达75％的病例中该后一种恶性肿瘤的消退。
幽门螺杆菌感染的常规治疗是被称作三联疗法(Triple Therapy)的7-天药物疗程，其包含两种抗生素阿莫西林(amoxicillin)和克拉霉素(clarithromycin)(用于一起杀死细菌)以及一种酸抑制剂(用于增强抗生素活性)。由于使用抗生素治疗如此多的具有不同病症的患者，由于越来越多的抗生素抗性株的出现，已经变得更难以治疗幽门螺杆菌。所以，多达25％的患者从第一线疗法失败。
考虑到用于幽门螺杆菌感染的常规疗法的失败，本发明的发明人已经发现，给受试者接种HtrA多肽或其片段会减少或阻止由所述细菌引起的炎症和/或疾病的发生。不希望受任何特定理论约束，假定针对HtrA的疫苗接种会诱导中和抗体，所述中和抗体会在感染过程中阻断HtrA活性。HtrA活性的缺乏会阻止细胞连接的打开和上皮屏障的破坏，从而阻止细菌组分转移进胃组织，从而保护免于炎症的诱导。
因此，本发明提供了用于治疗或预防炎症或疾病的免疫原性组合物和疫苗，所述炎症或疾病由表达HtrA多肽的细菌对受试者的感染造成。
本文中使用的“免疫原性组合物”表示这样的组合物：其包含HtrA多肽或其片段，且其引起针对HtrA多肽或其片段的免疫应答。术语“免疫原性组合物”也包括对“疫苗”的提及。术语“疫苗”涵盖具有以下效果的任何组合物：其诱导至少部分地保护免于由靶病原体引起的炎症和/或疾病的免疫应答，或其有效地保护免于病原体和/或减少所述病原体的定殖或感染。诱导“至少部分地保护性的”免疫应答是指，疫苗减少或阻止细菌诱导的炎症、表达HtrA多肽的细菌的感染和/或定殖，或减少由表达HtrA多肽的细菌的感染引起的至少一种症状。免疫原性组合物可以选择、活化或繁殖免疫系统的细胞，包括记忆B和T细胞，例如，实现对HtrA多肽或其片段特异性的抗体或其它免疫介质的生产。
如本领域理解的，术语“疫苗接种”表示给人施用疫苗的过程，而术语“免疫”表示在疫苗接种以后刺激免疫系统以产生至少部分地保护性的免疫应答。
术语“抗原”和“抗原的”是本领域充分理解的，且表示被免疫系统的组分(例如，抗体或T-细胞抗原受体)特异性地识别的大分子部分。术语“抗原”表示在宿主中可以诱导针对它的免疫应答的肽、多肽或其它大分子。因而，本发明的方法可以利用HtrA多肽的抗原片段。优选地，所述抗原片段能够引起针对细菌病原体(例如来自螺杆菌属(Helicobacter)的细菌，包括、但不限于，幽门螺杆菌)的免疫应答。在一个实施方案中，所述抗原是HtrA多肽的表位。在一个实施方案中，所述抗原片段是6个氨基酸的长度，更优选地7个氨基酸的长度，更优选地8个氨基酸的长度，更优选地9个氨基酸的长度，更优选地至少10个氨基酸的长度。备选地，所述抗原片段是至少20个、30个、40个、50个、60个、70个、80个、90个、100个或更多个氨基酸的长度。在一个实施方案中，所述抗原当施用给受试者时能够引起针对HtrA多肽的免疫应答。
通过任意合适的递送途径，诸如真皮内的、粘膜的例如鼻内的、口服的、肌肉内的或皮下的途径，可以施用本发明的疫苗和/或免疫原性组合物。其它递送途径是本领域众所周知的。疫苗制品通常描述在Vaccine Design(疫苗设计)(“The subunit and adjuvantapproach(亚单位和佐剂方案)”(Powell M.F.和Newman M.J.编)(1995)Plenum Press，NewYork)中。在一个实施方案中，通过肌肉内的递送途径施用本发明的免疫原性组合物。肌肉内施用可以是施用至大腿或上臂。注射通常是经由针(例如皮下注射针)进行，但是可以可替换地使用无针注射。一种典型的肌肉内剂量是0.5ml。
近年来，已经描述了特别设计成将液体药剂施用进皮肤或透过皮肤施用的装置，例如在WO99/34850和EP1092444中描述的装置，以及在例如WO 01/13977中描述的喷射注射装置。疫苗制品的真皮内施用的替代方法可以包括常规注射器和针，或为固体疫苗的弹道递送设计的装置，或透皮贴剂，或应用于皮肤的表面(透皮或经皮递送)。
当要将本发明的疫苗或免疫原性组合物施用至皮肤、或更具体地施用进真皮时，所述疫苗是处于低液体体积，特别是约0.05ml至0.2ml的体积。另一种合适的施用途径是皮下途径。任意合适的装置可以用于皮下递送，例如经典的针。在本发明的一个方面，使用无针喷射注射器服务，例如诸如在WO 02/34317中公开的那种。在本发明的另一个方面，所述装置预装了液体疫苗制剂。
在一个实施方案中，鼻内施用所述疫苗。通常，将所述疫苗局部地施用至鼻咽区域。用于本发明的疫苗的鼻内施用的优选装置是喷雾装置。合适的商购可得的鼻腔喷雾装置包括AccusprayTM(Becton Dickinson)。
如本文中所述的免疫原性组合物和/或疫苗可以呈治疗或预防组合物或疫苗的形式。免疫原性组合物或疫苗的预防性施用优选地保护接受者免于炎症和/或疾病的发生，或延迟炎症和/或疾病的发生，所述炎症和/或疾病将由包含HtrA多肽的细菌的感染引起。将预防性的组合物或疫苗施用给这样的患者：其未知被所述细菌感染，或已知没有被表达HtrA多肽的细菌(例如幽门螺杆菌)感染，或其尚未暴露于所述细菌。备选地，将治疗性的免疫原性组合物和/或疫苗施用给这样的受试者：其已知或预期已经被表达HtrA多肽的细菌感染，和其可能已经表现出由所述细菌的感染引起的炎症和/或疾病的征兆或症状。所述治疗组合物和/或疫苗会阻止或延迟由所述细菌的感染引起的炎症和/或疾病的进展，或减少由表达HtrA多肽的细菌的感染造成的炎症和/或疾病的征兆或症状。
佐剂可用于改善免疫应答和/或增加疫苗制品的稳定性。佐剂通常被描述为免疫系统的非特异性刺激物，但是也可以用于靶向免疫系统的特定分支。可以将一种或多种具有该活性的化合物加入疫苗中。因此，本发明的特定疫苗还包含佐剂。合适的疫苗佐剂包括、但不限于：铝盐(磷酸铝或氢氧化铝)、单磷酰脂质A(例如3D-MPL)、皂苷(例如QS21)、水包油乳剂、来自革兰氏阴性细菌菌株的水泡或外膜囊泡制品(诸如由WO02/09746教导的那些)、脂质A或其衍生物、烷基葡萄糖酰胺磷酸酯或这些佐剂中的两种或更多种的组合。在一个实施方案中，所述佐剂是磷酸铝。在另一个实施方案中，所述佐剂每人剂量包含100-750、150-600、200-500、250-450、300-400或约350μg作为磷酸铝的铝。在另一个实施方案中，所述佐剂是氢氧化铝。
“ISCOM-样佐剂”是包含免疫刺激复合物(ISCOM)的佐剂，其包含皂苷、胆固醇和磷脂，它们一起形成特征性的笼样颗粒，所述笼样颗粒具有促进其功能的独特球形笼样结构。该术语包括用抗原生产的ISCOM佐剂，且包含在ISCOM颗粒和ISCOM基质佐剂(它们是不用抗原生产的中空ISCOM-型佐剂)内的抗原。在一个实施方案中，如本文中所述的免疫原性组合物和/或疫苗包含ISCOM基质颗粒佐剂，诸如ISCOMATRIXTM，其不用抗原制备(ISCOMTM和ISCOMATRIXTM是澳大利亚Parkville的CSL Limited的注册商标)。
在某些实施方案中，所述佐剂是细胞因子。本发明的某些组合物包含一种或多种细胞因子、趋化因子或诱导细胞因子和趋化因子产生的化合物、或多核苷酸，所述多核苷酸编码一种或多种细胞因子、趋化因子或诱导细胞因子和趋化因子产生的化合物。细胞因子的例子包括，但不限于：粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)，粒细胞集落刺激因子(G-CSF)，巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)，集落刺激因子(CSF)，促红细胞生成素(EPO)，白介素2(IL-2)，白介素3(IL-3)，白介素4(IL-4)，白介素5(IL-5)，白介素6(IL-6)，白介素7(IL-7)，白介素8(IL-8)，白介素9(IL-9)，白介素10(IL-10)，白介素11(IL-11)，白介素12(IL-12)，白介素13(IL-13)，白介素14(IL-14)，白介素15(IL-15)，白介素16(IL-16)，白介素17(IL-17)，白介素18(IL-18)，干扰素α(IFNα)，干扰素β(IFNβ)，干扰素γ(IFNγ)，干扰素ω(IFNω)，干扰素τ(IFNτ)，干扰素γ诱导因子I(IGIF)，转化生长因子β(TGF-β)，RANTES(活化后调节、正常T-细胞表达和假定分泌)，巨噬细胞炎症性蛋白(例如，MIP-1α和MIP-1β)，利什曼原虫属(Leishmania)延伸起始因子(LEIF)和Flt-3配体。
在另一个实施方案中，所述HtrA多肽或其至少10个氨基酸的片段可以缀合至细菌类毒素，诸如来自白喉、破伤风、大肠杆菌(例如，热不稳定的毒素)、霍乱、幽门螺杆菌或其它病原体的类毒素。此外，HtrA多肽或其至少10个氨基酸的片段可以缀合至细菌多糖，诸如来自奈瑟球菌属(Neisseria sp.)、肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)或流感嗜血菌(Haemophilus influenzae)b型细菌的荚膜多糖。
赋形剂是与药物的活性成分(“API”)一起配制的无活性物质，用于给含有有效活性成分的制剂增量(bulking-up)的目的(因而经常被称作“增量剂”、“填充剂”或“稀释剂”)。当生产剂型时，增量允许药用物质的方便和准确分配。它们也可以用于各种增强治疗的目的，诸如促进药物吸收或溶解，或其它药代动力学考虑。赋形剂还可以用在制备过程中，以辅助涉及的活性物质的处理，诸如通过促进粉末流动性或不粘性能，以及辅助体外稳定性诸如阻止在预期的贮存期限内的变性。如本领域已知的，适当的赋形剂的选择也取决于施用途径和剂型、以及活性成分和其它因素。
其它合适的佐剂(其有时已经被称作免疫刺激剂)包括，但不限于：细胞因子、生长因子、趋化因子、来自淋巴细胞的细胞培养物的上清液、单核细胞、来自淋巴样器官的细胞、细胞制品和/或来自植物、细菌或寄生虫(金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)或脂多糖制品)的提取物或促分裂原。
本发明的另一个方面是制备本发明的疫苗和/或免疫原性组合物的方法，所述方法包括下述步骤：将HtrA多肽或其片段与药学上可接受的赋形剂和/或佐剂混合。
还可以经由脂质体载体施用HtrA多肽或其至少10个氨基酸的片段，所述脂质体载体用于将多肽靶向至特定组织，诸如淋巴组织，或选择性地靶向至被感染的细胞，以及增加多肽组合物的半衰期。脂质体包括乳剂、泡沫、胶束、不溶性单层、液晶、磷脂分散体、层状层等。在这些制品中，要递送的多肽如下作为脂质体的组成部分而掺入：单独地，或与结合在淋巴样细胞中占优势的受体的分子(诸如结合CD45抗原或其它共刺激因子的单克隆抗体)相结合，或与其它治疗性或免疫原性组合物相结合。因而，用期望的多肽填充或装饰的脂质体可以被引导至淋巴样细胞的位点，在此处所述脂质体然后递送多肽组合物。用于本发明的用途的脂质体从标准的形成囊泡的脂质形成，所述脂质通常包括中性磷脂和带负电荷的磷脂和甾醇，诸如胆固醇。脂质的选择通常通过考虑以下因素来指导：例如，脂质体大小、酸不稳定性和脂质体在血流中的稳定性。在本领域中有多种方法可用于制备脂质体。可以静脉内地、局部地(locally)、表面局部地(topically)等以特定剂量施用含有HtrA多肽或其至少10个氨基酸的片段的脂质体混悬液，所述特定剂量尤其随施用方式、正在递送的多肽和正在治疗的疾病的阶段而变化。
在一个实施方案中，将如本文中所述的免疫原性组合物和/或疫苗与用于治疗细菌感染的常规疗法一起施用，或与用于治疗细菌感染的常规疗法联合施用，或作为与用于治疗细菌感染的常规疗法的组合施用。例如，所述常规疗法可以是生物体特异性的抗生素。在幽门螺杆菌感染的情况下，所述常规疗法可以是抗生素和酸抑制剂和/或胃保护剂的组合。已经用于治疗幽门螺杆菌感染的药物包括阿莫西林、克拉霉素、利福布汀(Rifabutin)、次水杨酸铋呋喃唑酮(Bismuth subsalicylate Furazolidone)、乳铁蛋白(Lactoferrin)、硝唑沙奈(Nitazoxanide)和左氧氟沙星(Levofloxacin)。已经用于治疗幽门螺杆菌感染的组合包括奥美拉唑(Omeprazole)(200mg每天2次(bd))、阿莫西林(1000mg每天2次)和克拉霉素(500mg每天2次)。
减毒的细菌
在一个实施方案中，由减毒的细菌(例如，沙门氏菌属(Salmonella sp))或病毒疫苗载体(例如，MVA)表达HtrA多肽或其至少10个氨基酸的片段。减弱细菌病原体的毒力的方法是本领域已知的。通常，将突变引入细菌基因组中以阻止或减少毒素或其它毒力基因的表达，以删除或灭活所述基因。在某些情况下，所述基因的功能被完全敲除。这可以通过根本消除所述基因对任何多肽的合成来实现，或通过产生导致无功能多肽的合成的突变来实现。为了消除多肽的合成，可以删除整个基因或部分，例如5′-末端。在基因的编码序列内的删除或插入可以用于制备仅合成无功能多肽(例如，仅含有野生型蛋白的N-端序列的多肽)的基因。在毒素基因的情况下，所述突变可以使基因产物无毒。
本公开内容因而包括包含减毒的细菌或病毒疫苗载体的组合物，所述载体表达HtrA多肽或其至少10个氨基酸的片段。编码HtrA多肽的核酸可以是在载体中，或可以掺入宿主载体的基因组中，例如，通过同源重组或基因组编辑(使用经工程改造的核酸酶的基因组编辑(GEEN))掺入。适合用于基因组编辑的经工程改造的核酸酶的例子包括转录活化剂-样效应物核酸酶(TALENs)和CRISPR/Cas系统。在本发明的一个实施方案中，所述疫苗组合物包含减毒的沙门氏菌疫苗载体，所述载体包含在沙门氏菌致病岛2区域中的减毒突变和任选的一个或多个另外的减毒突变(例如，在aroA、aroC或sod基因中的一个或多个中的突变)和编码HtrA多肽或其至少10个氨基酸的片段的核酸。本发明的减毒的活疫苗组合物可以进一步包含，例如，药学上可接受的载体、稀释剂和/或佐剂。
抗体疗法
除了预防性和治疗性疫苗接种以外，本发明还包括用于治疗具有或疑似具有细菌诱导的炎症和/或疾病的患者的抗体疗法。本文中使用的术语“抗体疗法”包括对这样的治疗方法或治疗方案的提及：其包括给受试者施用抗体。如本领域中理解的，术语“抗体疗法”包括被动免疫疗法和被动免疫预防。
本文中使用的术语“抗体”表示能够结合靶标(例如细菌HtrA多肽或其片段)的免疫球蛋白、免疫球蛋白片段或免疫球蛋白-样分子。因而，术语“抗体”不仅包括完整的多克隆或单克隆抗体，而且包括双特异性抗体、双抗体、三抗体、异源缀合物抗体、嵌合抗体、人源化抗体和人抗体，包括其完整分子以及片段，诸如能够结合HtrA多肽或其片段的Fab、Fab′、F(ab′)2、Fv和scFv。
本文中使用的术语“单克隆抗体”(mAb)表示从单个拷贝或克隆(包括，例如，任何真核、原核或噬菌体克隆)衍生出的抗体，而不论用于生产它的方法。在本发明中使用的mAb优选地存在于均匀的或基本上均匀的群体中。完整mAb含有2个重链和2个轻链。因而，这样的单克隆抗体的片段包括，例如，Fab片段、Fab′片段、F(ab′)2、单链Fv片段和包含轻链和重链的独臂抗体。例如，通过重组技术、噬菌体展示技术、合成技术，例如，CDR-移接，或这样的技术的组合，或本领域已知的其它技术，可以生产单克隆抗体及其抗原结合片段。
通过常规方法，可以制备表现出期望的功能性质(即，结合HtrA多肽或其片段)的抗体。例如，可以用HtrA多肽或其片段免疫小鼠，可以将得到抗体回收和纯化，并且使用已知方法可以评估它们是否具有期望的结合和功能性质的确定。还可以通过常规方法制备抗原结合片段。用于生产和纯化抗体和抗原结合片段的方法是本领域众所周知的，且可以参见，例如，Harlow和Lane(1988)Antibodies，A Laboratory Manual(抗体，实验室手册)，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，N.Y.，第5-8和15章，ISBN0-87969-314-2。
短语“人源化抗体”表示具有特定框架区的单克隆抗体及其抗原结合片段，所述特定框架区是从非人抗体衍生出的基本上人的或完全人的周围CDR。“框架区”或“框架序列”表示框架区1-4中的任一个。人源化抗体和抗原结合片段包括这样的分子：其中框架区1-4中的任何一个或多个是基本上人的或完全人的，即，其中存在各个基本上人的或完全人的框架区1-4的任何可能组合。例如，这包括这样的分子：其中框架区1和框架区2、框架区1和框架区3、框架区1、2和3等是基本上人的或完全人的。基本上人的框架是与已知的人种系框架序列具有至少约80％序列同一性的那些。优选地，基本上人的框架与已知的人种系框架序列具有至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约99％的序列同一性。
完全人的框架是与已知的人种系框架序列相同的那些。人框架种系序列可以通过它们的网站(www.imgt.org)从ImMunoGeneTics(IMGT)得到，或通过Marie-Paule Lefranc和Gerard Lefranc，Academic Press，2001，ISBN012441351从The ImmunoglobulinFactsBook得到。例如，种系轻链框架可以选自由下述组成的组：A11、A17、A18、A19、A20、A27、A30、LI、L1I、L12、L2、L5、L15、L6、L8、O12、O2和O8，且种系重链框架区可以选自由下述组成的组：VH2-5、VH2-26、VH2-70、VH3-20、VH3-72、VHI-46、VH3-9、VH3-66、VH3-74、VH4-31、VHI-18、VHI-69、VI-13-7、VH3-11、VH3-15、VH3-21、VH3-23、VH3-30、VH3-48、VH4-39、VH4-59和VH5-5I。
可以使用几种不同的方法制备人源化抗体。在一个方案中，将母体抗体化合物CDR移接进与母体抗体化合物框架具有高序列同一性的人框架中。新框架的序列同一性通常是与母体抗体化合物中的对应框架的序列至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约99％相同。在具有少于100个氨基酸残基的框架的情况下，可以改变1、2或3个氨基酸残基。与母体抗体相比，该移接可以导致结合亲和力下降。如果是这种情况，所述框架可以基于Queen等人(1991)公开的特定标准在某些位置回复突变至亲本框架。描述在人源化小鼠抗体中有用的方法的另外参考文献包括：美国专利号4,816,397；5,225,539；和5,693,761；在Levitt(1983)中描述的计算机程序ABMOD和ENCAD；和Winter和同事的方法(Jones等人，1986)。
可以通过胃肠外途径(例如，皮下、静脉内、腹膜内、肌肉内或透皮)施用抗体或抗体片段、或包含它们的免疫原性组合物或药物组合物。可以将本发明的抗体或其抗原结合片段单独地或与药学上可接受的载体和/或赋形剂组合地以单次或多次剂量施用给患者。本发明的药物组合物可以通过本领域众所周知的方法(例如，Remington：The Science andPractice of Pharmacy(雷明顿：制药科学与实践)，第19版(1995)，A.Gennaro等人，MackPublishing Co.)来制备，且包含如在本文中公开的抗体和一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
在一个实施方案中提供了一种组合物，例如，一种药物组合物，其含有结合HtrA多肽、其片段或表位的一种抗体或抗体的组合。所述药物组合物可以根据常规技术用药学上可接受的载体或稀释剂以及任意其它已知佐剂和赋形剂配制，所述常规技术是诸如在以下文献中公开的那些：Remington：The Science and Practice of Pharmacy(雷明顿：制药科学与实践)，第19版，Gennaro，编，Mack Publishing Co.，Easton，Pa.，1995。
药物组合物也可以在联合治疗中施用，即，与其它药剂组合。例如，所述联合治疗可以包括含有至少一种抗-HtrA抗体和一种抗炎剂的组合物。在一个实施方案中，这样的抗炎剂包括甾体类药物或NSAID(非甾体类抗炎药)。药剂的例子包括阿司匹林(aspirin)和其它水杨酸盐、Cox-2抑制剂诸如罗非昔布(rofecoxib，Vioxx)和塞来考昔(celecoxib)(西乐葆(Celebrex))、NSAID诸如布洛芬(ibuprofen)(Motrin，Advil)、非诺洛芬(fenoprofen，Nalfon)、萘普生(naproxen，Naprosyn)、舒林酸(sulindac，Clinoril)、双氯芬酸(diclofenac，Voltaren)、吡罗昔康(piroxicam，Feldene)、酮洛芬(ketoprofen，Orudis)、二氟尼柳(diflunisal，Dolobid)、萘丁美酮(nabumetone，Relafen)、依托度酸(etodolac，Lodine)、奥沙普秦(oxaprozin，Daypro)和吲哚美辛(indomethacin，Indocin)。
在一个实施方案中，将结合HtrA多肽的抗体与用于治疗细菌感染的常规疗法一起、或结合地、或作为与用于治疗细菌感染的常规疗法的组合施用。
DNA疫苗
DNA疫苗接种包括将编码抗原的DNA直接体内引入到受试者的细胞和/或组织中用于通过该受试者的组织的细胞表达所述抗原。这样的疫苗在本文中被称作“DNA疫苗”或“基于核酸的疫苗”。DNA疫苗的例子描述在US 5,939,400、US 6,110,898、WO 95/20660和WO93/19183中。直接注射的编码抗原的DNA引起保护性免疫应答的能力已经在众多实验系统中证实。
已知影响DNA免疫引起的免疫应答的因素是DNA递送方法，例如，胃肠外途径可以产生低基因转移速率并产生相当大的基因表达的变异性。使用基因枪对质粒的高速接种会增强小鼠的免疫应答，可能是因为更大的DNA转染效率和树突细胞更有效的抗原呈递。含有本发明的基于核酸的疫苗的载体也可以通过本领域已知的其它方法(例如，转染、电穿孔、显微注射、转导、细胞融合、DEAE葡聚糖、磷酸钙沉淀、脂转染(溶酶体融合)或DNA载体转运蛋白)引入期望的宿主中。
疾病的治疗
本发明的发明人已经确定，可以将如本文中所述的HtrA多肽或其至少10个氨基酸的片段、编码HtrA多肽或其至少10个氨基酸的片段的多核苷酸、免疫原性组合物、药物组合物和/或疫苗施用给受试者，优选人受试者，以治疗或预防由表达HtrA多肽的细菌的感染引起的、细菌诱导的炎症和/或疾病。本发明的发明人已经发现，该治疗会减轻或延迟由表达HtrA多肽的细菌的感染引起的炎症和/或疾病的征兆或症状的发展，尽管所述治疗没有根除或预防细菌的感染。
如本领域中理解的，术语“细菌诱导的炎症”表示组织对来自细菌的有害刺激的生物应答，且包括急性和慢性炎症。急性炎症的过程可以由已经存在于所有组织中的先天免疫细胞(主要是定殖巨噬细胞、树突细胞、组织细胞、库普弗细胞(Kupffer cells)和肥大细胞)的活化开始。这些细胞在它们的表面上呈递某些受体，所述受体被命名为模式识别受体(PRR)，其识别病原体广泛共有的、但是可与宿主分子区分的分子，其被统称为病原体-相关的分子模式(PAMP)。在感染开始，细胞可能经历活化(它们的PRR之一识别PAMP)并释放引起炎症的临床征兆的炎症介质。该先天性免疫应答的活化然后支持获得性免疫应答的活化，其具体地涉及T-辅助(Th)淋巴细胞。幽门螺杆菌胃炎涉及分别以促炎细胞因子IFNγ和IL-17为标志的混合型Th1和Th17型免疫应答。由这些应答引起的胃炎的严重程度由免疫抑制性IL-10的产生调节。Th2-型应答，例如，IL-13，也抑制这样的应答。血管舒张和它引起的增加的血流会造成发红(rubor)和增加的热(灼热)。增加的血管渗透性导致血浆蛋白和流体渗出(渗漏)进入组织中(水肿)，这会将它自身显示为肿胀(肿瘤)。一些释放的介质(诸如缓激肽)会增加对疼痛的敏感性(痛觉过敏(hyperalgesia)，痛)。所述介质分子还会改变血管以允许白细胞(主要是嗜中性粒细胞)迁移到血管外(外渗)进入组织中。所述嗜中性粒细胞沿着由局部细胞建立的趋化性梯度迁移以到达损伤部位。
除了细胞衍生的介质以外，几个由预形成的血浆蛋白组成的无细胞生化级联系统平行地起作用以开始和扩散炎症应答。这些包括由细菌活化的补体系统。渗出性组分涉及含有重要蛋白诸如纤维蛋白和免疫球蛋白(抗体)的血浆流体向发炎组织中的移动。该移动通过化学诱导的扩张和增加的血管渗透性(其导致血浆的净损失)来实现。增加的流体向组织中的收集造成它肿胀(水肿)。该外渗的流体被淋巴管集中至局部淋巴结，一起冲洗暴露于幽门螺杆菌抗原的细胞，以开始适应性免疫系统的识别和攻击阶段。
急性炎症特征在于显著的血管变化，包括血管舒张、增加的渗透性和增加的血流，它们由各种炎症介质的作用诱导。血管舒张首先发生在微动脉水平，发展至毛细管水平，并实现存在的血液量的净增加，从而造成炎症的发红和热。增加的血管渗透性会导致血浆向组织中的移动，产生淤滞，这是由于血液内细胞浓度的增加——以膨大的被细胞填充的血管为特征的病症。淤滞允许白细胞沿着内皮边缘迁移(marginate)(移动)，即对于它们向组织中的募集而言至关重要的过程。
在体内产生的特定情形中，诸如当炎症发生在上皮表面上或涉及化脓性细菌时，观察到急性和慢性炎症的特定模式。
1)肉芽肿性炎症(Granulomatous inflammation)：特征在于肉芽肿的形成，它们是有限的、但是不同数目的疾病的结果，所述疾病尤其包括结核病(tuberculosis)、麻风病(leprosy)、结节病(sarcoidosis)和梅毒(syphilis)。
2)纤维素性炎症(Fibrinous inflammation)：导致血管渗透性的大幅增加的炎症允许纤维蛋白穿过血管。如果存在适当的促凝固刺激，诸如癌细胞，会沉积纤维蛋白性渗出物。这通常见于浆膜腔中，在此处可以在浆膜之间发生纤维蛋白性渗出物向疤痕的转化，从而限制它们的功能。所述沉积物有时形成假膜片。在肠炎症(假膜性结肠炎(Pseudomembranous colitis))的过程中，可以形成假膜管。
3)化脓性炎症(Purulent inflammation)：产生大量脓的炎症，所述脓由嗜中性粒细胞、死细胞和流体组成。化脓性细菌(诸如葡萄球菌)的感染是这类炎症的特征。由周围组织包封的脓的大型局限性集合被称作脓肿。
4)浆液性炎症(Serous inflammation)：特征在于无粘性的浆液的大量流出，通常由浆膜的间皮细胞产生，但是可以从血浆衍生出。皮肤水疱例证了这类炎症。
5)溃疡性炎症(Ulcerative inflammation)：发生在上皮附近的炎症可以导致来自表面的组织的坏死性损失，从而暴露底层。上皮中的随后凹陷被称作溃疡。
在一个实施方案中，所述“细菌诱导的”炎症是胃炎(即，胃的衬里的炎症)或十二指肠炎(即，十二指肠的炎症)。糜烂性胃炎是由对粘膜防御物的损伤引起的胃粘膜腐蚀。慢性胃炎表示宽范围的胃组织的问题。
在由幽门螺杆菌感染或定殖诱导的胃炎的情况下，急性感染可能作为伴有腹部疼痛(胃痛)或恶心的急性胃炎出现。在这发展成慢性胃炎的情况下，征状(如果存在的话)经常是非溃疡性消化不良的那些：胃痛、恶心、胃气胀、嗳气和有时的呕吐或黑色粪便。被幽门螺杆菌感染的个体具有10-20％的发生消化性溃疡(peptic ulcers)的终生危险和1-2％的获得胃癌的风险。幽门窦的炎症最可能导致十二指肠溃疡，而本体(胃体)的炎症更可能导致胃溃疡和胃腺癌。
粘液腺化生(分化细胞的可逆替换)发生在胃腺的严重损伤的场合，其然后衰弱(萎缩性胃炎)并被粘液腺逐渐替换。胃溃疡可能发生。因而，在一个实施方案中，所述细菌诱导的炎症是萎缩性胃炎。
在一个实施方案中，提供了一种治疗或预防受试者中由幽门螺杆菌感染引起的疾病的方法。如本领域已知的，由幽门螺杆菌感染引起的疾病包括炎症、胃炎、十二指肠炎、萎缩性胃炎、胃溃疡、十二指肠溃疡、胃癌和/或粘膜相关淋巴样组织(MALT)淋巴瘤。
实施例
实施例1.HtrA抗原的制备和疫苗接种
如Lower等人(2008)所述生产重组HtrA(包括突变体)。使用Pfx DNA聚合酶(Invitrogen，Karlsruhe，德国)通过标准PCR从幽门螺杆菌株26695的基因组DNA扩增基因hp1018。使用下述引物：hp1018正向：5′-GGC TAT GGA TAA GGA TCA ACG C-3′(SEQ ID NO：37)，hp1018反向：5′-CCA CCG CCT TAA TAG AGT CCT T-3′(SEQ ID NO：38)。将PCR产物(具有333个碱基的计算长度)呈递给商业提供者(GENterprise，Mainz，德国)用于测序。
使用引物5′-aaggatccggcaatatccaaatccagagcatg-3′(SEQ ID NO：39)和5′-aagaattcgacccacccctatcatttcacc-3′(SEQ ID NO：40)以及Pfx DNA聚合酶在含有26种PCR增强子(Invitrogen)的供应缓冲液中从幽门螺杆菌株26695的基因组DNA扩增构建体Hp1018/19Dsp。然后将扩增的BamH1/EcoR1侧接的PCR产物连接进pGEM-T Easy质粒(Promega)中，亚克隆进pGEX-6P-1质粒DNA(GE Healthcare Life Sciences)中，并转化进大肠杆菌BL21中。蛋白酶-无活性的Hp1018/19DspS205A蛋白的构建，根据生产商的说明书使用QuikChangeH快速定向诱变试剂盒)QuikChangeH Lightning Site-DirectedMutagenesis Kit)(Stratagene)将丝氨酸205突变至丙氨酸。对于GST-Hp1018/19Dsp的异源过表达和纯化，将转化的大肠杆菌在500ml TB培养基中培养至0.6的OD550，并通过加入0.1mM异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。将细菌培养物以4000g沉淀30分钟并在25mlPBS中通过声处理进行裂解。将裂解物通过离心进行澄清，并将上清液与谷胱甘肽琼脂糖(GE Healthcare Life Sciences)一起在4℃温育过夜。将融合蛋白用10mM还原型谷胱甘肽在室温洗脱10分钟，或用180U Prescission蛋白酶在4℃切割16h(GE Healthcare LifeSciences)。通过SDS PAGE和酶谱法来分析洗脱和切割产物。
通过鼻途径给不含特定病原体的年龄匹配的雌性C57BL/6小鼠(在Parkville墨尔本大学(University of Melbourne)的Veterinary Science动物房中繁育)接种重组HtrA抗原(SEQ ID NO：1)2次，间隔3周。对于鼻疫苗接种，将在30μL体积中的疫苗缓慢地应用于有意识的小鼠的外鼻孔。用100μg福尔马林固定的幽门螺杆菌、100μg明矾或10μg HtrA+100μg明矾皮下地免疫小鼠。
实施例2.幽门螺杆菌培养和小鼠的攻击
在微量需氧的条件下在37℃在含有5％马血清(JRH Biosciences，USA)、0.02％两性霉素B和Skirrow氏选择性补充剂(Skirrow’s Selective Supplements)的脑心浸液液体培养基(BHI；Oxoid，Basingstoke，UK)中培养幽门螺杆菌株SS1。
通过将0.1mm玻璃珠(Daintree Scientific，St.Helens，TAS，澳大利亚)加给细菌并使用FastPrep FP120(Thermo Savant，Waltham，MA，USA)以30-秒循环在60m/s脉冲，在循环之间在冰上温育，直到裂解细菌，而制备幽门螺杆菌裂解物(HpL)。通过在马血琼脂平板上培养来证实无菌度。使用BCA蛋白测定试剂盒(Pierce，Rockford，IL，USA)定量蛋白水平。
对于用于疫苗接种的福尔马林固定，将细菌悬浮于在PBS中的0.01M的甲醛溶液中，并调节至1.5的OD600。在37℃轻轻摇动2小时以后，将细菌在室温摇动过夜，在PBS中洗涤3次，并以108个细菌/mL重悬。
在这些研究中使用的C57BL/6小鼠是得自墨尔本Walter and Eliza HallInstitute的年龄匹配的雌鼠。所有动物实验由墨尔本大学动物伦理委员会(Universityof Melbourne Animal Ethics Committee)批准。
将小鼠用悬浮于0.1mL BHI中的107个幽门螺杆菌株SS1胃内地感染1次。在实验结束时，将小鼠通过CO2窒息进行安乐死，并将胃沿着内曲率切开并分成两半。将一半用于通过菌落形成测定定量细菌水平。将另一半在中性缓冲的福尔马林中固定用于胃炎的组织学评估。
实施例3.菌落形成测定
攻击后4周，将胃沿着内曲率切开并分成两半。将一半放在BHI液体培养基中并匀浆(GmbH匀浆器，Kinematica，瑞士)。在BHI液体培养基中制备10倍系列稀释物，并将等分试样分布在Glaxo选择性补充物琼脂平板(Blood Agar Base No.2，含有5％马血、3.75μg/mL Amphostat B、12μg/mL万古霉素、0.4μg/mL多粘菌素B、20μg/mL杆菌肽和1.3μg/mL萘啶酸)上。培养5天后，将菌落计数并计算每个胃的菌落形成单位的数目。
实施例4.胃病理学
如以前所述(Sutton等人，2001)，在组织学上评估胃炎。将每个胃的第二半在10％中性缓冲的福尔马林中固定，包埋在石蜡中，并切割4μm-厚切片。为了评估胃炎，将切片用H&E染色，并在光学显微术下盲评分。使用3个参数在每只动物的2个单独的组织切片中评估炎症。(1)从0至6对细胞浸润(淋巴细胞和嗜中性粒细胞向固有层中的迁移)评级，其中0，无；1，轻微多病灶的；2，轻度扩散的；3，轻度扩散的和中度多病灶的；4，中度扩散的；5，中度扩散的和严重多病灶的；和6，严重扩散的；(2)“粘液化生”(本体中大的、苍白色的球形细胞)；和(3)“萎缩”(胃壁细胞和主细胞的损失)。从0至3对化生和萎缩评级(0，不存在；1，轻度；2，中度；3，严重)。
实施例5.胃细胞因子
通过离心从胃匀浆物除去细胞碎片，并在ELISA之前使用BCA蛋白测定试剂盒(Pierce，Rockford，IL，USA)定量上清液中的蛋白浓度。通过在碳酸氢盐包被缓冲液pH 9.6中将96-孔Maxisorp平板(Nunc，Roskilde，丹麦)用纯化的抗-小鼠IL-13(50ng/孔；eBioscience，San Diego，CA，USA)、IL-10(100ng/孔；BD Biosciences，San Jose，CA，USA)、IFNγ(100ng/孔；BD Biosciences)或IL-17A(50ng/孔；eBioscience)包被过夜，确定细胞因子浓度。将平板用在PBS中的1％的BSA(Sigma)(封闭剂)封闭1小时，然后一式两份地加入样品在室温保持3小时或在4℃保持过夜。然后将捕获的细胞因子用在封闭剂中的生物素化的抗-小鼠IL-13(25ng/孔；eBioscience)、IL-10(50ng/孔；BD Bio-sciences)、IFNγ(50ng/孔；BD Biosciences)或IL-17A(25ng/孔；eBioscience)标记1小时，然后加入50μL在封闭剂中的1/5000稀释的辣根过氧化物酶缀合的链霉抗生生物素蛋白(Pierce)保持30min。用100μL TMB溶液(制备为在DMSO中的0.1％的10mg/mL TMB(Sigma))和0.006％的过氧化氢(在磷酸盐-柠檬酸盐缓冲液pH 5.0中)显色，并用等体积的2M硫酸停止反应，然后在450nm读出吸光度。相对于重组IL-10、IFNγ(BD Biosciences)、IL-13和IL-17A(eBioscience)的标准曲线确定样品浓度。
实施例6.HtrA血清抑制测定
使用肽酶/蛋白酶测定试剂盒(E33758)测量来自以上接种疫苗的小鼠的血清阻断HtrA的蛋白水解活性的能力。将来自接种疫苗的/感染的小鼠的血清(在攻击后4周收集)1∶5稀释，并使用肽酶试剂盒的组分B(消化缓冲液)与HtrA或PBS(对照)混合30分钟。然后在温育60min(按照试剂盒推荐)后通过测量底物的切割来评估HtrA的蛋白水解活性。使用TECAN Infinite M200Pro读数器在502/528nm读出吸光度，并使用Magellan 7.1SPI软件分析数据。
实施例7.对感染的抗体应答的定量
通过心脏穿刺收集血清。使用手术刀片从纵向打开的小肠的下面10cm收集肠粘液刮片，称重，然后与等体积的PBS混合，所述PBS含有完全的不含小型-EDTA的蛋白水解酶抑制剂混合液(Roche Diagnostics，Mannheim，德国)。通过直接ELISA确定抗-螺杆菌抗体水平。将Maxisorp免疫平板(Nunc，丹麦)用50μg/孔的在碳酸氢盐缓冲液pH9.6中的幽门螺杆菌裂解物包被过夜。将平板在室温封闭1小时。将样品在封闭剂中1/10连续稀释，并将50μL加入双份孔中，然后在室温温育1小时。将捕获的抗体用在封闭剂中的辣根过氧化物酶缀合的山羊-抗-小鼠IgG(4ng/孔；Pierce)、山羊-抗-小鼠IgG1(8ng/孔，Southern Biotech，Birmingham，AL，USA)或IgA(10ng/孔，Southern Biotech)在室温标记1小时。显色并如上读出，并计算终点滴度。
实施例8.蛋白质印迹法
将幽门螺杆菌裂解物(20μg/泳道)在8％SDS-PAGE凝胶上分离，然后转移至硝酸纤维素膜(Amersham Biosciences)。将膜用5％脱脂乳封闭，并用1/1,000稀释的肠刮片探测。用辣根过氧化物酶-缀合的抗-小鼠抗体(Dako)检测结合的一级抗体。如下使标记的蛋白显影：将膜在ECL Prime试剂(Amersham Biosciences)中温育，并使用ImageQuant LAS 4000(GE Healthcare)显影。将所有凝胶曝光10秒。
实施例9.统计学
使用Social Sciences软件21.0版的统计包(Statistical Package)执行统计学分析。
实施例10.结果
使用HtrA的预防性疫苗接种诱导最小的保护作用
通过鼻途径给小鼠组接种杀死的幽门螺杆菌+霍乱毒素(CT)佐剂(阳性对照)或HtrA+CT两次。给阴性对照假施用PBS。最后一剂后4周，用活幽门螺杆菌株SS1攻击所有小鼠。4周后通过菌落形成测定评估小鼠胃中的细菌负荷。与阴性对照组相比，疫苗接种减少了细菌定殖(图1；**p＜0.01，***p＜0.0001；ANOVA)。
免疫后胃炎
关于胃炎在组织学上评估在图1中提及的小鼠的胃。如预期的，与阴性对照组相比，在攻击之前接种了杀死的幽门螺杆菌+CT的小鼠具有显著增加的胃炎的严重程度(增加的萎缩和化生，关键胃炎读出)(*Mann-Whitney；图2)。但是，接种了HtrA+CT的小鼠中的胃炎不能与阴性对照组区分开。换言之，尽管有图1所示的保护性免疫，这些小鼠没有发生免疫后胃炎。
这不可能与在HtrA+CT组中观察到的相对于阳性对照组的稍低的保护水平有关；本发明人已经用重组抗原试验幽门螺杆菌疫苗执行了无数类似实验，且在以前没有看到该结果。在文献中充分认识到，幽门螺杆菌定殖与胃炎严重程度无关。
免疫后胃细胞因子水平的抑制
幽门螺杆菌感染在小鼠和人类的胃组织中诱导混合的Th1和Th17应答。已知IL-10是幽门螺杆菌诱导的胃炎的重要抑制剂。IL-13是用于测量Th2-型应答的主要标志物。为了进一步探索该减轻的胃炎，通过ELISA定量以上小鼠的胃匀浆物中的细胞因子。
如预期的，来自感染对照(PBS)和阳性对照疫苗(幽门螺杆菌+CT)组的胃组织呈现高水平的Thl(IFNγ)和Th17(IL-17A)细胞因子。该具体实验不含未感染的对照组，但是数年的实验指示这些细胞因子通常不容易在胃匀浆物中检测到。IL-10和IL-13也升高；这也是预料中的，因为这些细胞因子增加以抑制由Th1和Th17-型细胞因子诱导的炎症性信号。
完全意外的观察是，使用HtrA+CT的疫苗接种将感染的小鼠中的这些细胞因子的水平显著地抑制到极低的或不可检测的水平(**p＜0.01，***p＜0.0001；ANOVA)(图3)。这是首次已经证实会抑制幽门螺杆菌诱导的胃炎的疫苗。
重组HtrA(rHtrA)疫苗接种诱导中和抗体应答
本发明人假定，所述疫苗通过诱导中和HtrA活性的抗体而抑制胃炎和胃细胞因子水平。为了试验这方面，开发针对HtrA活性的体外测定以评估来自以上小鼠的血清的抑制能力。图4中的结果表明，来自接种HtrA、然后用幽门螺杆菌攻击的小鼠的血清的确抑制HtrA蛋白酶切割靶底物的能力(***ANOVA)。这不同于来自其它组的血清。
重组HtrA(rHtrA)疫苗接种诱导针对HtrA的抗体
通过鼻途径给一组小鼠接种rHtrA+CT 3次。给阴性对照假施用PBS。来自接种疫苗的小鼠的血清含有特异性地检测HtrA的抗体(图5)。
通过注射途径进行治疗性HtrA疫苗接种
在皮下注射单独的明矾佐剂(阴性对照)、rHtrA和明矾、或rHtrasa和明矾(除了使酶无活性的丝氨酸至丙氨酸的单个氨基酸置换以外，rHtrasa与rHtrA相同)之前，用幽门螺杆菌感染小鼠组。最后一次疫苗接种后4周，将胃取出并通过菌落形成测定来定量细菌定殖。在任何组之间不存在幽门螺杆菌定殖水平的差异(图6)。
通过注射途径进行的治疗性HtrA疫苗接种确实保护免于幽门螺杆菌诱导的胃炎
在组织学上定量在图6中描述的治疗性疫苗接种的小鼠的胃中的胃炎的严重程度。尽管对定殖没有影响(图6)，使用有活性的rHtra或无活性的rHtrAsa的疫苗接种导致保护免于幽门螺杆菌诱导的萎缩性胃炎的发生(图7)。
通过注射途径进行的治疗性HtrA疫苗接种保护免于幽门螺杆菌诱导的胃炎，没有 胃细胞因子的显著增加
通过ELISA定量在图6中描述的来自小鼠的胃匀浆物中的细胞因子水平。使用rHtrA组的疫苗接种没有造成关键胃细胞因子的显著增加，特别是与接种单独明矾的主要阴性对照组相比(图8)。
通过注射途径进行的治疗性rHtrA疫苗接种在胃肠道中诱导对天然HtrA特异性的 抗体
关于针对HtrA的抗体的存在，检测在图6中描述的小鼠的肠刮片。针对幽门螺杆菌裂解物的肠刮片的蛋白质印迹分析表明，仅治疗性接种rHtrA的被感染的小鼠具有可检测的针对HtrA的抗体(图9)。重要的是，这也证实，使用重组HtrA的疫苗接种诱导针对天然幽门螺杆菌HtrA的粘膜抗体。
本领域技术人员将理解，可以对在具体实施方案中所示的发明做出众多变化和/或修改，而不脱离宽泛地描述的发明的范围。因此，本发明的实施方案在所有方面都被视作示例性的和非限制性的。
在本文中讨论和/或提及的所有出版物整体并入本文中。
本申请要求2014年6月30日提交的AU 2014902493的优先权，其整个内容通过引用并入本文。
在本说明书中包括的文件、行为、材料、装置、物品等的任何讨论仅用于提供本发明的背景的目的。它不应被视为承认因为它在本申请的每个权利要求的优先权日期之前存在，任何或所有这些内容构成现有技术基础的一部分或者是在与本发明相关的领域中的公知常识。
参考文献
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<213> 幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)
<400> 1
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Arg Asp Lys Lys Glu Arg Ala Phe Thr Leu Thr Leu Ala Glu Arg Lys
355 360 365
Asn Pro Asn Lys Lys Glu Thr Ile Ser Ala Gln Asn Gly Thr Gln Gly
370 375 380
Gln Leu Asn Gly Leu Gln Val Glu Asp Leu Thr Gln Lys Thr Lys Arg
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Ser Met Arg Leu Ser Asp Asp Val Gln Gly Val Leu Val Ser Gln Val
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Asn Glu Asn Ser Pro Ala Glu Gln Ala Gly Phe Arg Gln Gly Asn Ile
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Ile Thr Lys Ile Glu Glu Ile Glu Val Lys Ser Val Ala Asp Phe Asn
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Lys Pro Lys Arg Phe Leu Val Leu Asp Leu Asn Gln Gly Tyr Arg Ile
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<211> 88
<212> PRT
<213> 幽门螺杆菌
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<212> PRT
<213> 幽门螺杆菌
<400> 33
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Ser Tyr Asp Asn Lys Glu Gly Ala Val Val Ile Ser Val Glu Lys Asp
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35 40 45
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85
<210> 34
<211> 88
<212> PRT
<213> 幽门螺杆菌
<400> 34
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35 40 45
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65 70 75 80
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85
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<211> 88
<212> PRT
<213> 幽门螺杆菌
<400> 35
Gly Tyr Leu Gly Val Gly Leu Gln Asp Leu Ser Gly Asp Leu Gln Asn
1 5 10 15
Ser Tyr Asp Asn Lys Glu Gly Ala Val Val Ile Ser Val Glu Lys Asp
20 25 30
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<212> PRT
<213> 幽门螺杆菌
<400> 36
Gly Leu Gln Val Glu Asp Leu Thr Gln Lys Thr Lys Arg Ser Met Arg
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Leu Ser Asp Asp Val Gln Gly Val Leu Val Ser Gln Val Asn Glu Asn
20 25 30
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50 55 60
Glu Lys Tyr Lys Gly Lys Pro Lys Arg Phe Leu Val Leu
65 70 75
<210> 37
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 寡核苷酸引物
<400> 37
ggctatggat aaggatcaac gc 22
<210> 38
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 寡核苷酸引物
<400> 38
ccaccgcctt aatagagtcc tt 22
<210> 39
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 寡核苷酸引物
<400> 39
aaggatccgg caatatccaa atccagagca tg 32
<210> 40
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 寡核苷酸引物
<400> 40
aagaattcga cccaccccta tcatttcacc 30

Claims (29)

1.一种治疗或预防受试者中细菌诱导的炎症的方法，所述方法包括给所述受试者施用细菌HtrA多肽或其至少10个氨基酸的片段和/或结合细菌HtrA的抗体。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法包括施用免疫原性组合物，所述免疫原性组合物包含细菌HtrA多肽或其至少10个氨基酸的片段。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中所述炎症由幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)诱导，且所述HtrA多肽是幽门螺杆菌HtrA多肽或其至少10个氨基酸的片段。
4.根据权利要求3所述的方法，其中所述HtrA多肽或其至少10个氨基酸的片段包含与SEQ ID NO：1-6中的任一个或与其至少10个氨基酸的片段至少95％相同的氨基酸序列。
5.根据权利要求1-4中的任一项所述的方法，其中所述细菌诱导的炎症是胃炎和/或十二指肠炎。
6.根据权利要求5所述的方法，其中所述炎症是萎缩性胃炎。
7.用于治疗或预防受试者中细菌诱导的炎症的免疫原性组合物，其包含细菌HtrA多肽或其至少10个氨基酸的片段和/或结合细菌HtrA的抗体。
8.一种免疫原性组合物，其包含细菌HtrA多肽或其至少10个氨基酸的片段。
9.根据权利要求8所述的免疫原性组合物，其中所述细菌HtrA多肽或其至少10个氨基酸的片段是幽门螺杆菌多肽或其至少10个氨基酸的片段。
10.根据权利要求9所述的免疫原性组合物，其中所述组合物包含HtrA多肽，所述HtrA多肽包含与SEQ ID NO：1-6中的任一个或其至少10个氨基酸的片段至少95％相同的氨基酸序列。
11.根据权利要求7-10中的任一项所述的免疫原性组合物，所述免疫原性组合物包含药学上可接受的赋形剂和/或佐剂。
12.根据权利要求7-11中的任一项所述的免疫原性组合物，所述免疫原性组合物是疫苗。
13.根据权利要求12所述的免疫原性组合物，所述免疫原性组合物是治疗性疫苗。
14.一种药物组合物，其包含结合细菌HtrA多肽的抗体。
15.根据权利要求14所述的药物组合物，其中所述抗体结合幽门螺杆菌HtrA多肽。
16.根据权利要求14或权利要求15所述的药物组合物，其中所述抗体是单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人抗体、Fab、F(ab′)2或scFv。
17.权利要求7-13中的任一项所述的免疫原性组合物、权利要求14-16中的任一项所述的药物组合物、或结合细菌HtrA的抗体在药物制备中的用途，所述药物用于治疗或预防细菌诱导的炎症。
18.根据权利要求7所述的免疫原性组合物或根据权利要求18所述的用途，其中所述细菌诱导的炎症是幽门螺杆菌诱导的炎症。
19.根据权利要求19所述的免疫原性组合物或用途，其中所述细菌诱导的炎症是胃炎和/或十二指肠炎。
20.根据权利要求20所述的免疫原性组合物，其中所述炎症是萎缩性胃炎。
21.一种制备免疫原性组合物的方法，所述方法包括将HtrA多肽或其至少10个氨基酸的片段与药学上可接受的赋形剂和/或佐剂混合。
22.根据权利要求22所述的方法，其中所述HtrA多肽或其至少10个氨基酸的片段是幽门螺杆菌HtrA多肽或其至少10个氨基酸的片段。
23.根据权利要求22或权利要求23所述的方法，其中所述免疫原性组合物是疫苗。
24.根据权利要求22-24中的任一项所述的方法，其中所述HtrA多肽包含与SEQ ID NO：1-5中的任一个或其至少10个氨基酸的片段至少95％相同的氨基酸序列。
25.一种治疗或预防受试者中由幽门螺杆菌感染引起的疾病的方法，所述方法包括给所述受试者施用HtrA多肽或其至少10个氨基酸的片段。
26.根据权利要求26所述的方法，其中所述方法包括给所述受试者施用包含HtrA多肽或其至少10个氨基酸的片段是免疫原性和/或药物性组合物。
27.根据权利要求26所述的方法，其中所述HtrA多肽包含与SEQ ID NO：1-6中的任一个或其至少10个氨基酸的片段至少95％相同的氨基序列。
28.根据权利要求26或权利要求27所述的方法，其中所述免疫原性组合物包含药学上可接受的赋形剂和/或佐剂。
29.根据权利要求26-28中的任一项所述的方法，其中所述由幽门螺杆菌感染造成的疾病是炎症、胃炎、胃溃疡、十二指肠溃疡、胃癌和/或粘膜相关淋巴样组织(MALT)淋巴瘤。
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