JP6609730B2 - 体内輸送担体、これを用いた複合体、及び体内輸送方法 - Google Patents
体内輸送担体、これを用いた複合体、及び体内輸送方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6609730B2 JP6609730B2 JP2018538791A JP2018538791A JP6609730B2 JP 6609730 B2 JP6609730 B2 JP 6609730B2 JP 2018538791 A JP2018538791 A JP 2018538791A JP 2018538791 A JP2018538791 A JP 2018538791A JP 6609730 B2 JP6609730 B2 JP 6609730B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- peptide
- silica gel
- solution
- adsorption
- transport carrier
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- A61K38/08—Peptides having 5 to 11 amino acids
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
本開示は係る事情に鑑みてなされたものであり、物質を腸へ輸送することができる新規な体内輸送担体、これを用いた複合体、及び体内輸送方法を提供することを課題とする。
本開示の複合体は、負電荷をもつ両性物質と、前記両性物質を吸脱着し得る体内輸送担体とを有する複合体であって、前記体内輸送担体はシリカゲルを有する。
本実施形態の体内輸送担体は、負電荷をもつ両性物質を体内に輸送する担体である。体内輸送担体は、シリカゲルを有する。上記両性物質をシリカゲルに吸着させた状態で経口投与すると、両性物質はシリカゲルに吸着された状態を維持して強酸性環境の胃を通過し、腸に到達する。中性環境の腸においては、両性物質がシリカゲルから脱離する。腸では、負電荷をもつ両性物質が脱離しやすい。
「負電荷をもつ両性物質」とは、中性(pH7)の水中において負電荷をもつ両性物質をいう。負電荷をもつ両性物質は、中性域でシリカゲルに吸着されにくい。このため、中性環境の腸内で負電荷をもつ両性物質はシリカゲルから脱離しやすい。
両性物質がペプチド類である場合、ペプチドであってもよく、ペプチド誘導体、ペプチドの塩であってもよい。「ペプチド誘導体」は、ペプチドをアセチル化、アミド化、リン酸化、環化などしたものをいう。「塩」とは、ペプチド又はその誘導体の薬理学的に許容される任意の塩(無機塩及び有機塩を含む)をいう。ペプチドの塩は、溶媒和物又は無溶媒和物であってもよい。
一般のシリカゲルは、酸性ないし中性(たとえば3〜7.5)である。これらのシリカゲルはアルカリ性に調整するとよい。酸性ないし中性のシリカゲルをアルカリ性に調整するためには、シリカゲルをアルカリに接触させるとよい。例えば、シリカゲルをアルカリ溶液に接触させるとよい。アルカリ溶液は、例えば、NaOH、KOH、アンモニアなどのアルカリ成分を水に溶解したアルカリ溶液である。アルカリ溶液のpHは、8〜10がよい。アルカリ溶液のpHが10を超えると、シリカゲルが溶解するおそれがある。アルカリ溶液のpHが8未満の場合には、シリカゲルをアルカリ性に調整しにくい。
焼成温度は、250〜900℃が良く、更には400〜800℃であることが好ましく、550〜750℃であることがより好ましい。焼成温度が低すぎる場合には、シラノール基を減少できない。焼成温度が高すぎる場合には、シリカゲルが溶融するおそれがある。
シリカゲルの平均粒子径は問わないが、2〜2000μmであることが好ましい。平均粒子径はレーザ回折式粒度分布測定装置又は篩い分け重量法により測定した値である。
複合体を製造するためには、体内輸送担体と両性物質とを液体中で混合する。液体のpHは、1〜10であるとよい。液体のpHが1未満の場合には、両性物質が吸着しなくなるおそれがある。液体のpHが10を超える場合には、シリカゲルが溶解するおそれがある。
体内輸送担体と両性物質とを混合する液体は、例えば、水を含むとよい。両性物質がペプチド、アミノ酸、タンパク質の場合には、液体はリン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水(以下、「PBS」という。)、生理食塩水などが好ましい。
(その他)
本開示の別の実施形態は、負電荷をもつ両性物質を体内に輸送する両性物質の体内輸送方法であって、前記両性物質とシリカゲルとを有する複合体を形成し、前記複合体を体内に投与する、両性物質の体内輸送方法であってもよい。
本開示の別の実施形態は、負電荷をもつ両性物質を有する医薬品の体内への輸送に使用するためのシリカゲルであってもよい。
以下のように、種々のシリカゲル及び種々のペプチドを調製し、強酸性溶液、及び中性溶液において、それぞれ、ペプチドがシリカゲルに吸着する割合及び量を測定した。
以下の6種類のシリカゲル(試料1〜6)を調製した。
<試料1>
試料1として、富士シリシア化学株式会社製のクロマトレックス SMB100−5を準備した。このシリカゲルは、平均細孔径10nm、平均粒子径5μm、比表面積310m2/g、細孔容積0.8mL/gであった。
シリカゲルのシラノール基数(個/nm2)は、180℃で2時間乾燥後のシリカゲルW(g)を950℃で2時間焼成し、焼成後のシリカゲルの質量W1(g)と、シリカゲルの比表面積M(m2/g)から、以下の算出式により求めた。
×((6.02×1023 )/(M×1018))
試料1のシラノール基数は、6個/nm2であった。
試料1を、水に加えてスラリーとした後、少量のNaOH水溶液を加えてpH6.6とし、24時間静置した。スラリーを脱液後、160℃で乾燥させ、得られたシリカゲルを試料2とした。試料2は、pHが6.6であり、シラノール基数が6個/nm2であった。
試料1を、水に加えてスラリーとした後、少量のNaOH水溶液を加えてpH8.8とし、24時間静置した。スラリーを脱液後、160℃で乾燥させ、得られたシリカゲルを試料3とした。試料3は、pHが8.8であり、シラノール基数が6個/nm2であった。
試料1を、600℃で2時間焼成し、得られたシリカゲルを試料4とした。試料4は、pHが5.1であり、シラノール基数が4個/nm2であった。
試料2を、600℃で2時間焼成し、得られたシリカゲルを試料5とした。試料5は、pHが6.6であり、シラノール基数が4個/nm2であった。
試料3を、600℃で2時間焼成し、得られたシリカゲルを試料6とした。試料6は、pHが8.8であり、シラノール基数が4個/nm2であった。
残基数7のペプチドであるDFELEDD(配列番号34)、VLDTDYK(配列番号38)、HNRNNRR(配列番号42)を合成した。VLDTDYKは、機能性ペプチド(J Dairy Research(2000)67,53−64)である。
(手順1)N−α−(9−Fluorenylmethoxycarbonyl)amino acid p−methoxybenzyl alcohol resin(Fmoc AA−Alko Resin)樹脂(渡辺化学工業株式会社)をポリプロピレン(PP)製カラム(国産化学株式会社)に入れた。
(手順3)3等量のFmoc amino acid、O−(ベンゾトリアゾール−1−イル)−N,N,N′,N′−テトラメチルウロニウム ヘキサフルオロホスファート(HBTU)、N,N−ジイソプロピルエチルアミン(DIPEA)を加えて2時間撹拌後、DMFとメタノール(MeOH)で樹脂を洗浄した。
樹脂を遠沈管へ移し、トリフルオロ酢酸(TFA)16ml、チオアニソール2.4ml、1,2−Ethanedithiol(EDT)1.2ml、m−クレゾール0.4mlを加えて3時間撹拌し、樹脂からペプチドを溶出させた。フィルターを用いて樹脂を除き、ジエチルエーテルを加え激しく振り、ペプチドを析出させた。得られた懸濁液を遠心分離機(3000×g、10分間)にかけて、沈降させたペプチドを回収し、自然乾燥させた。
各ペプチドを秤り取り、計算量のpH2.1リン酸緩衝液を加えて溶かし、濃度0.25mMに調整した。これをpH2ペプチド溶液とした。
上記のシリカゲル懸濁液と、上記のpH2ペプチド溶液及びpH7ペプチド溶液とを用いて、以下の吸着試験1,2及び対照試験1,2を行った。
1.5mLマイクロチューブに、pH7ペプチド溶液150μLとシリカゲル懸濁液50μLとを加えて攪拌し、室温で1分静置後、10000rpm、1分、固形分を遠心沈降させ、上澄みを蛍光量測定用溶液とした。
吸着試験2は、マイクロチューブ中の混合液がpH2ペプチド溶液150μLとシリカゲル懸濁液50μLとからなる点を除いて、吸着試験1と同様に行った。また、得られた酸性蛍光量測定溶液150μLに0.1NのNaOHを200μL加えて中性にしたものを蛍光量測定用溶液とした。
対照試験1は、マイクロチューブ中の混合液がpH7ペプチド溶液150μLと水50μLとからなる点を除いて、吸着試験1と同様に行った。
対照試験2は、マイクロチューブ中の混合液がpH2ペプチド溶液150μLと水50μLとからなる点を除いて、吸着試験2と同様に行った。
96ウェルプレート(Corning社製)の各穴にそれぞれの蛍光量測定用溶液150μLを加えた。各穴に、5mg/mLに調整したフルオレスカミン(蛍光物質)10μLを追加して1分間混合した。蛍光測定装置により各穴から発する蛍光量を測定した。照射する励起光の波長は355nmであり、発せられた蛍光量は、波長460nmで測定した。
吸着試験1及び対照試験1で測定した各蛍光量に基づいて、pH7ペプチド溶液中の各ペプチドがシリカゲルに吸着している吸着割合(%)は、以下の式により求めた。
求めた吸着割合は、pH7ペプチド吸着割合と称する。
ペプチドの吸着割合(%)=100×((対照試験2で測定した蛍光量)−(吸着試験2で測定した蛍光量))/(対照試験2で測定した蛍光量)
求めた吸着割合は、pH2ペプチド吸着割合と称する。
<吸着量の求め方>
濃度0.25mM、pH7の各ペプチド溶液を適宜希釈したものについて、蛍光量測定方法により蛍光量を測定し、蛍光量とペプチド濃度との検量線を作成した。この検量線によりpH7溶液の蛍光量をpH7ペプチド溶液濃度に換算した。また、シリカゲル添加量からpH7ペプチド吸着量を次の式により算出した。
=((対照試験1から算出したペプチド濃度)−(吸着試験1から算出したペプチド濃度))/(混合液中のシリカゲル濃度)
濃度0.25mM、pH2の各ペプチド溶液を適宜希釈したものについては、蛍光量測定溶液を中性に調整するため、上澄み150μLに0.1NのNaOHを200μL加えたものを蛍光量測定溶液とし、蛍光量測定方法により蛍光量を測定し、蛍光量とペプチド濃度との検量線を作成した。この検量線によりpH2溶液の蛍光量をペプチド溶液濃度に換算した。また、シリカゲル添加量からpH2ペプチド吸着量を次の式により算出した。
=((対照試験2から算出したペプチド濃度)−(吸着試験2から算出したペプチド濃度))/(混合液中のシリカゲル濃度)
さらに、pH2ペプチド吸着量からpH7ペプチド吸着量を差し引いて、スコア量を求めた。
以下のように、シリカゲル及び3残基のペプチドを調製し、強酸性溶液及び中性溶液において、それぞれ、シリカゲルに吸着するペプチドの吸着割合を測定した。
本実験例2で用いるシリカゲル試料7は、pHを8.9とした点を除いて、試料6のシリカゲルと同様である。すなわち、本実験例2で用いるシリカゲルは、焼成したシリカゲルであって、pHが8.9であり、シラノール基の数が4個/nm2である。
<ペプチドの合成>
以下に示した3残基のペプチド32種類を合成した。
上記ペプチドは、(Ochiai et al., Biosci Biotechnol Biochem, 2012;76(4):819−24.,Matsumoto et al., Scientific Reports, 5:12884(2015))記載の方法にしたがって、フォトリンカーペプチドアレイで同一残基を2グループ(各2個ずつ)合成した。
<ペプチド溶液の調製>
アレイ上のスポット毎のペプチドに紫外線を3時間照射して、ペプチドをアレイから切り離した。ペプチドが付着した状態のアレイを、1スポット毎に直径6mmのbiopsy punchで打ち抜いた。アレイの打ち抜き片を、96ウェルフィルタープレート(メルク社製)の複数の穴に1スポットずつ入れた。複数の穴のうちの1グループ目のものにpH2.1リン酸緩衝液180μLを加え、2グループ目のものにpH7.4PBS溶液180μLを加えた。これらを1時間静置して、アレイの打ち抜き片から溶液にペプチドを溶出させた。96ウェルフィルタープレートの下部から真空吸引を行って打ち抜き片をフィルター上部に残し、溶液をフィルター下部の受液部に落とすことで、pH2ペプチド溶液及びpH7ペプチド溶液を調製した。
中性であるpH7ペプチド溶液での吸着割合が60%以上と高いペプチドは、等電点が5以上のものであった。
等電点が7以下のペプチドは、負電荷をもつ傾向がある。試料7のシリカゲルは、負電荷をもつペプチドを吸着させた状態で胃を通過して腸に到達し、腸においてペプチドを脱離しやすい。
実験例2の試料7シリカゲルの懸濁液と、実験例2にける3残基32種類のペプチドに代えて、5残基ペプチドとを準備し、強酸性溶液及び中性溶液において、それぞれ、シリカゲルに吸着するペプチドの吸着割合を測定した。測定にあたっては、以下に示した21種類の5残基ペプチドを用いた。
各ペプチドの等電点及び疎水度を表4に示した。
実験例2において32種類3残基のペプチドに代えて、以下に示した23種類の7残基ペプチドを用い、強酸性溶液及び中性溶液において、それぞれ、シリカゲルに吸着するペプチドの吸着割合を測定した。
各ペプチドの等電点及び疎水度を表5に示した。
図3、図9、図15を比べると、pH2ペプチド吸着割合については、ペプチドの残基数が3よりも5、5よりも7の方が高くなった。ペプチドの残基数が多くなると、強酸性の胃内における、ペプチドのシリカゲルへの吸着性が高まる。
(実験例5)
本実験例5では、シリカゲルに吸着させたペプチドに対する酵素からの保護効果を確認した。
実験例1で用いた未焼成のシリカゲル、試料3を準備した。試料3は、pHが8.8であり、シラノール基の数が6個/nm2である。(実験例1)の<シリカゲル懸濁液の調製>と同様の方法で、40mg/mLのシリカゲルを有するシリカゲル懸濁液を調製した。
<ペプチド保護確認試験B>
マイクロチューブに加えたpH2.1リン酸緩衝液100μLに代えて、ペプシン溶液100μLを加えた点を除いて、試検液Aと同様にして試検液Bを得た。ペプシン溶液は、約2unit/μLのペプシン(プロテアーゼ)を含むpH2の疑似胃液である。
マイクロチューブに加えたシリカゲル懸濁液150μLに代えて、pH2.1リン酸緩衝液150μL、pH2.1リン酸緩衝液100μLに代えて、ペプシン溶液100μLを加えた点を除いて、試検液Aと同様にして、試検液Cを得た。
Claims (8)
- 負電荷をもつ両性物質を体内に輸送する体内輸送担体であって、
前記体内輸送担体はシリカゲルを有し、
前記シリカゲルはアルカリ性である、体内輸送担体。 - 前記シリカゲルは、1〜6個/nm2のシラノール基を有する、請求項1に記載の体内輸送担体。
- 前記シリカゲルのpHは、7.5〜10である、請求項1又は2に記載の体内輸送担体。
- 前記両性物質の等電点は、2以上8以下である、請求項1〜3のいずれかに記載の体内輸送担体。
- 前記両性物質は、アミノ酸、ペプチド類、たんぱく質、核酸類、糖類、脂質類、それらの複合体、高分子化合物、有機化合物の中から選ばれる1種以上である、請求項1〜4のいずれかに記載の体内輸送担体。
- 前記ペプチド類の疎水度が−4.5〜4.5である、請求項5に記載の体内輸送担体。
- 前記体内輸送担体は、前記両性物質を吸脱着可能である、請求項1〜6のいずれかに記載の体内輸送担体。
- 負電荷をもつ両性物質と、前記両性物質を吸脱着し得る体内輸送担体とを有する複合体であって、
前記体内輸送担体は、アルカリ性のシリカゲルを有する、複合体。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2017092447 | 2017-05-08 | ||
JP2017092447 | 2017-05-08 | ||
PCT/JP2018/017676 WO2018207744A1 (ja) | 2017-05-08 | 2018-05-07 | 体内輸送担体、これを用いた複合体、及び体内輸送方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2018207744A1 JPWO2018207744A1 (ja) | 2019-06-27 |
JP6609730B2 true JP6609730B2 (ja) | 2019-11-27 |
Family
ID=64104763
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2018538791A Active JP6609730B2 (ja) | 2017-05-08 | 2018-05-07 | 体内輸送担体、これを用いた複合体、及び体内輸送方法 |
Country Status (2)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP6609730B2 (ja) |
WO (1) | WO2018207744A1 (ja) |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH0358927A (ja) * | 1989-07-28 | 1991-03-14 | Kaken Pharmaceut Co Ltd | ポートマイシン吸着化合物ならびにこの吸着化合物を用いた抗コクシジウム剤および飼料用組成物 |
JP3361167B2 (ja) * | 1993-12-20 | 2003-01-07 | ロート製薬株式会社 | 緩下性の機能性食品及び緩下剤 |
JP3217286B2 (ja) * | 1996-12-19 | 2001-10-09 | 科学技術振興事業団 | Dna固定化複合体 |
JP2003252689A (ja) * | 2002-03-01 | 2003-09-10 | Fuji Silysia Chemical Ltd | シリカ発泡体の製造方法 |
JP2006193462A (ja) * | 2005-01-13 | 2006-07-27 | Univ Waseda | ナノ構造体シリカ多孔質材料を担体とした経皮剤及び経口剤 |
IT1400821B1 (it) * | 2009-03-09 | 2013-07-02 | Probiotical Spa | Sospensione oleosa contenente batteri probiotici per uso pediatrico |
-
2018
- 2018-05-07 WO PCT/JP2018/017676 patent/WO2018207744A1/ja active Application Filing
- 2018-05-07 JP JP2018538791A patent/JP6609730B2/ja active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2018207744A1 (ja) | 2018-11-15 |
JPWO2018207744A1 (ja) | 2019-06-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN105073770B (zh) | 链霉亲和素突变蛋白及其使用方法 | |
Wadhwani et al. | Antibiotic gold: tethering of antimicrobial peptides to gold nanoparticles maintains conformational flexibility of peptides and improves trypsin susceptibility | |
Darewicz et al. | Angiotensin I-converting enzyme (ACE) inhibitory activity and ACE inhibitory peptides of salmon (Salmo salar) protein hydrolysates obtained by human and porcine gastrointestinal enzymes | |
Rothenstein et al. | Isolation of ZnO-binding 12-mer peptides and determination of their binding epitopes by NMR spectroscopy | |
López-Pérez et al. | Screening and optimizing antimicrobial peptides by using SPOT-synthesis | |
TWI338779B (en) | Methods,compositions and systems for assaying at least one target analyte in a sample | |
Oller‐Salvia et al. | From venoms to BBB shuttles: synthesis and blood–brain barrier transport assessment of apamin and a nontoxic analog | |
US11856945B2 (en) | Methods and systems for preparing and preserving a biological sample | |
Ju et al. | Quantification of proteins on gold nanoparticles by combining MALDI-TOF MS and proteolysis | |
Riahifard et al. | Design, synthesis, and evaluation of amphiphilic cyclic and linear peptides composed of hydrophobic and positively-charged amino acids as antibacterial agents | |
Roufik et al. | Thermodynamics of binding interactions between bovine β-lactoglobulin A and the antihypertensive peptide β-Lg f142-148 | |
Fortunato et al. | Metal cation triggered peptide hydrogels and their application in food freshness monitoring and dye adsorption | |
Imai et al. | Interaction between porous silica gel microcarriers and peptides for oral administration of functional peptides | |
JP2011168505A (ja) | ポリカーボネートおよび/またはポリメタクリル酸メチル親和性ペプチド、およびその利用 | |
Nie et al. | The calcium-binding activity of fish scale protein hydrolysates | |
JP6609730B2 (ja) | 体内輸送担体、これを用いた複合体、及び体内輸送方法 | |
Madsen et al. | A simplified chromatographic approach to purify commercially available bovine submaxillary mucins (BSM) | |
Finkina et al. | Impact of different lipid ligands on the stability and IgE-binding capacity of the lentil allergen Len c 3 | |
Chan et al. | Peptide–Peptide Co-Assembly: A Design Strategy for Functional Detection of C-peptide, A Biomarker of Diabetic Neuropathy | |
Moyer et al. | Leveraging orthogonal mass spectrometry based strategies for comprehensive sequencing and characterization of ribosomal antimicrobial peptide natural products | |
EP2569338A1 (en) | Binding systems | |
US8759259B2 (en) | Compositions and methods for producing cyclic peptoid libraries | |
Bera et al. | Solid-state packing dictates the unexpected solubility of aromatic peptides | |
Wang et al. | Structural analysis and study of gel properties of thermally-induced soybean isolate–potato protein gel system | |
Jee et al. | An efficient strategy to enhance binding affinity and specificity of a known isozyme inhibitor |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20180724 |
|
A871 | Explanation of circumstances concerning accelerated examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A871 Effective date: 20181112 |
|
A975 | Report on accelerated examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971005 Effective date: 20181130 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20190108 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20190124 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20190128 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20190124 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20181112 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20190319 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20190411 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20190507 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20190530 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6609730 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
S533 | Written request for registration of change of name |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313533 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |