JP6597992B2 - Method for producing polyphenol-containing culture and polyphenol-containing culture - Google Patents

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本発明は、キノア種子および有色素米からなる群から選択される穀類を担子菌及び/又は子嚢菌の菌糸体で資化させ、培養液中にポリフェノールを産生させることを特徴とする、ポリフェノール含有培養物の製造方法、およびポリフェノール含有培養物に関する。   The present invention is characterized in that a cereal selected from the group consisting of quinoa seeds and pigmented rice is assimilated with a mycelium of basidiomycetes and / or ascomycetes to produce polyphenols in a culture solution The present invention relates to a culture production method and a polyphenol-containing culture.

飽食や欧米型の食事への思考変化により、ガン、心疾患、糖尿病に代表される生活習慣病が増加し、活性酸素による障害がこれら疾病の一因と考えられている。過剰に摂取された活性酸素が生体組織や細胞を傷つけ、各種の疾病や障害を引き起こす。食事を介して酸化防止力を有する成分を摂取することは、生活習慣病の予防や抑制に効果がある。食物から摂取しうる抗酸化物質としてポリフェノールがあり、例えば、ブドウやイチゴに含まれるアントシアニン類、緑茶に含まれるカテキン、レモンの果実に含まれるエリオシトリン、ニンジンに含まれるカロテノイド色素、トマトやスイカに含まれるリコペン、ゴマに含まれるリグナン類などがある。   Lifestyle-related diseases such as cancer, heart disease, and diabetes have increased due to satiety and changes in Western-style diets. Disorders due to active oxygen are considered to contribute to these diseases. Excessive intake of active oxygen damages living tissues and cells, causing various diseases and disorders. Taking an ingredient having antioxidant power through a meal is effective in preventing or suppressing lifestyle-related diseases. Antioxidants that can be ingested from food include polyphenols such as anthocyanins in grapes and strawberries, catechins in green tea, eriocitrin in lemon fruits, carotenoid pigments in carrots, tomatoes and watermelons Examples include lycopene, lignans contained in sesame.

植物は太陽光下でも紫外線の傷害を受けることなく生育することができ、このような環境に対する耐性は、植物がポリフェノールなどの活性酸素抑制成分を含有するためと考えられている。近年、南米原産のキノア(Chenopodium quinoa Willd.)に注目が集まっている。キノアは、アカザ科の植物で、タンパク質、ビタミン、ミネラル、食物繊維に富み、アミノ酸バランスにも優れる擬穀類である。非特許文献1では、キノア種子のメタノール水抽出物から、ケンフェロールやクエルセチンなどのフラボノール配糖体を単離している。なお、クエルセチンは構造中に5つの水酸基を含み、ケンフェロールは4つの水酸基を含むポリフェノールである。クエルセチンはビタミンPの一部であり、抗酸化作用のほか、抗炎症作用もあるといわれている。また、ケンフェロールやケンフェロール配糖体は、抗酸化作用のほかに抗炎症、抗微生物、抗がん、抗糖尿病、抗骨粗鬆症、抗不安、鎮痛作用などを有するといわれている。   Plants can grow without being damaged by ultraviolet rays even under sunlight, and such resistance to the environment is considered to be due to the fact that the plants contain active oxygen suppressing components such as polyphenols. In recent years, attention has been focused on Chenopodium quinoa Willd. Quinoa is a red cereal that is rich in protein, vitamins, minerals, dietary fiber, and has a good amino acid balance. In Non-Patent Document 1, flavonol glycosides such as kaempferol and quercetin are isolated from an aqueous methanol extract of quinoa seeds. Quercetin is a polyphenol containing five hydroxyl groups in its structure, and kaempferol is a polyphenol containing four hydroxyl groups. Quercetin is a part of vitamin P and is said to have anti-inflammatory activity as well as antioxidant activity. Kaempferol and kaempferol glycosides are said to have anti-inflammatory, anti-microbial, anti-cancer, anti-diabetic, anti-osteoporosis, anti-anxiety, analgesic action, etc. in addition to the antioxidant action.

ポリフェノール成分を富化する試みとして、液体培養担子菌の菌糸体、培養濾液またはそれらの処理物を加熱し、該菌糸体、培養濾液または処理物中のポリフェノール含量を増大させる方法がある(特許文献1)。担子菌類のポリフェノール含有量は少なく、充分な効果を期待できないため、加熱により、担子菌類中のポリフェノール含有量を増大するというものである。アガリクス・ブラゼイに属するハラタケや、マイタケ、シイタケ、霊芝、シメジ、ツクリタケ、メシマコブ、ヤマブシタケ、エノキなどを、酵母エキス、モルトエキスおよび蔗糖を含む液体培地に植菌して培養し、菌糸体や培養濾液を回収した後に、40〜150℃の温度で2時間から2週間加熱処理すると、前記加熱処理を行わない場合と比較して、ポリフェノール含量が2〜3倍に増加するという。   As an attempt to enrich the polyphenol component, there is a method in which the mycelium, culture filtrate or treated product thereof is heated to increase the polyphenol content in the mycelium, culture filtrate or treated product (Patent Literature). 1). Since the basidiomycete has a low polyphenol content and a sufficient effect cannot be expected, the polyphenol content in the basidiomycete is increased by heating. Agaricus blazei, agaric, maitake, shiitake mushrooms, shimeji mushrooms, tsukutake mushroom, meshimakobu, yamabushitake, enoki, etc. are inoculated and cultured in a liquid medium containing yeast extract, malt extract and sucrose, and mycelium and culture When the filtrate is collected and then heat-treated at a temperature of 40 to 150 ° C. for 2 hours to 2 weeks, the polyphenol content is increased 2 to 3 times compared to the case where the heat treatment is not performed.

また、加工時に廃棄される穀類や擬穀類の外皮に含まれるポリフェノールを有効利用する方法として、外皮付き穀物を加圧下または加熱下に水に浸漬することでポリフェノール成分を増加させると共に、外皮から内側に浸透移行させ、内側の可食部にポリフェノール成分を富化させるという方法もある(特許文献2)。例えば、外皮付きコムギを0.2MPaの加圧または20〜60℃の加熱下に水に浸漬すると可食部にポリフェノールが移行するため、処理後のコムギを製粉すれば、ポリフェノール含有量が多いコムギ粉を製造しうるという。擬穀類としてキノアが例示されている。   In addition, as a method for effectively using polyphenols contained in the husks of grains and pseudo-cereals that are discarded during processing, the polyphenol component is increased by immersing the husk grains in water under pressure or heating, and the inner side from the hull. There is also a method in which the polyphenol component is enriched in the edible portion on the inside (Patent Document 2). For example, if the wheat with a shell is immersed in water under a pressure of 0.2 MPa or heated at 20 to 60 ° C., polyphenols migrate to the edible part, so if the processed wheat is milled, the wheat with a high polyphenol content It is said that powder can be manufactured. Quinoa is exemplified as the pseudocereal.

更に、植物構成成分及び/又は植物抽出物を圧搾し、及び/又は抽出して発酵ブロスに加工し、この発酵ブロスに微生物を接種して発酵させ、発酵終了後に活性成分を取り出すことを特徴とする、医薬活性成分の製造方法もある(特許文献3)。実施例8では、キノア種子の分散液にケフィール培養物を添加して発酵させ、発酵ブロスを70〜80℃に15分間加熱後、遠心および濾過して得た溶液を凍結乾燥している。酸化ストレスの指標として、ヒト線維芽細胞にUVA照射した際の細胞光保護効果を評価した結果、前記培養物は、UV照射や環境毒素などの酸化ストレスに有用である、という。   Further, the plant component and / or plant extract is squeezed and / or extracted and processed into a fermentation broth. The fermentation broth is inoculated with microorganisms and fermented, and the active ingredient is taken out after completion of the fermentation. There is also a method for producing a pharmaceutically active ingredient (Patent Document 3). In Example 8, the kefir culture was added to the quinoa seed dispersion and fermented, and the fermentation broth was heated to 70-80 ° C. for 15 minutes, and then the solution obtained by centrifugation and filtration was freeze-dried. As an index of oxidative stress, as a result of evaluating the cell photoprotective effect when UVA irradiation is performed on human fibroblasts, it is said that the culture is useful for oxidative stress such as UV irradiation and environmental toxins.

また、植物繊維成分を含有する培地を用いて担子菌等の菌糸体を培養し、この培養物からの抽出物を主成分とする抗酸化機能増強剤もある(特許文献4)。主成分は、植物組織中のヘミセルロース、セルロース、リグニンなどを担子菌や子嚢菌の出すパーオキシエターゼ、セルラーゼなどの酵素で酸化分解および縮合を起こして変性した水溶性リグニン水溶性成分に、ヘミセルロースの主成分であるペントースを主体とした多糖が複雑に結合した物質である。強いフリーラジカル消去活性を示し、マクロファージから誘導産生された一酸化窒素も消去しうるという。実施例では、バガスに椎茸菌を接種して4ヶ月培養したところ、培養物のフリーラジカル消去活性が確認されたという。   Moreover, there exists an antioxidant function enhancer which culture | cultivates mycelium, such as a basidiomycete, using the culture medium containing a plant fiber component, and has the extract from this culture as a main component (patent document 4). The main component is water-soluble lignin water-soluble component modified by oxidative degradation and condensation with enzymes such as peroxidase and cellulase produced by basidiomycetes and ascomycetes in hemicellulose, cellulose and lignin in plant tissues. It is a substance in which polysaccharides mainly composed of pentose, which is the main component, are bound in a complex manner. It exhibits strong free radical scavenging activity and can also eliminate nitric oxide induced and produced from macrophages. In the examples, when bagasse was inoculated with shiitake mushrooms and cultured for 4 months, the free radical scavenging activity of the culture was confirmed.

特開2001−269189号公報JP 2001-269189 A 特開2010−63454号公報JP 2010-63454 A 特開2005−521649号公報JP 2005-521649 A 特開平11−228441号公報JP 11-228441 A

http://www.tokusanshubyo.or.jp/jouhoushi08/j08-13.pdfhttp://www.tokusanshubyo.or.jp/jouhoushi08/j08-13.pdf

ガン、動脈硬化、心筋梗塞、狭心症、脳梗塞、糖尿病などの活性酸素が一因とされる疾病に対し、経口摂取によりまたは外科的投与その他により活性酸素の傷害を抑制できれば便宜である。抗酸化物質としてポリフェノールがある。前記特許文献2によれば、廃棄部分に含まれるポリフェノールを可食部に移行させて有効利用することができるという。しかしながら、廃棄物を有効利用しうる点で優れるが、ポリフェノールの含有量を増加させるものではない。   It is convenient if the active oxygen injury can be suppressed by oral ingestion or surgical administration or the like for diseases caused by active oxygen such as cancer, arteriosclerosis, myocardial infarction, angina pectoris, cerebral infarction and diabetes. Antioxidants include polyphenols. According to the said patent document 2, it is said that the polyphenol contained in a discard part can be moved to an edible part, and can be used effectively. However, it is excellent in that the waste can be effectively used, but does not increase the content of polyphenol.

また、前記特許文献1は、担子菌を培養し、担子菌体や培養濾液に含まれるポリフェノール含量を2〜3倍に増加させるものである。特許文献1の実施例1では、アガリクスの培養ろ液を80℃で24時間、加熱処理しているが、加熱処理しない場合のポリフェノール含有量が100ml当り18.9mgであるのに対し、加熱処理によって26.2mgに増加させうるに過ぎない。従って、ポリフェノール含有量をより増加しうる培養方法の開発が望まれる。   Moreover, the said patent document 1 cultures basidiomycetes and increases the polyphenol content contained in a basidiomycete cell body or a culture filtrate 2 to 3 times. In Example 1 of Patent Document 1, Agaricus culture filtrate was heat-treated at 80 ° C. for 24 hours, but the polyphenol content without heat treatment was 18.9 mg per 100 ml, whereas heat treatment was performed. Can only be increased to 26.2 mg. Accordingly, development of a culture method that can further increase the polyphenol content is desired.

また、前記特許文献3は、キノア種子の分散液にケフィール培養物を添加して発酵させ、酸化ストレスに有用な発酵ブロスを得るというものであるが、抗酸化性物質はポリフェノールではなくその効果も充分ではない。従って、より抗酸化力に優れる培養方法の開発が望まれる。また、前記特許文献4は、リグニンを含有する植物を資化させるものであり、バガス、トウモロコシの茎葉、小麦ふすま、稲藁、熊笹、竹などを原料とし、更に、米糠、乾燥酵母、イースト菌などを培地に添加し、抽出物のDPPHラジカル活性などを評価している。しかしながら、培養条件毎の活性値が記載されていないため、培養方法による活性値の相異が不明である。また、特許文献4で産生される抗酸化物質は、水溶性リグニン水溶性成分に多糖が複雑に結合した物質であり、ポリフェノールではない。ポリフェノールは種類も多く、抗酸化活性のほかに、抗炎症作用や抗癌作用その他の効果も有する。したがって、ポリフェノール含有量が多く抗酸化力に優れる培養物の製造方法、およびポリフェノール含有量が高く、抗酸化活性に優れるポリフェノール含有培養物の開発が望まれる。   Further, Patent Document 3 is to add a kefir culture to a quinoa seed dispersion and ferment it to obtain a fermentation broth useful for oxidative stress. However, the antioxidant is not a polyphenol and has its effect. Not enough. Therefore, the development of a culture method that is more excellent in antioxidant power is desired. Patent Document 4 assimilates a plant containing lignin, which is made from bagasse, corn stover, wheat bran, rice straw, bear pod, bamboo, etc., and rice bran, dry yeast, yeast, etc. Is added to the medium to evaluate the DPPH radical activity and the like of the extract. However, since the activity value for each culture condition is not described, the difference in activity value depending on the culture method is unknown. Further, the antioxidant substance produced in Patent Document 4 is a substance in which a polysaccharide is complexly bound to a water-soluble lignin water-soluble component, and is not a polyphenol. There are many types of polyphenols, and in addition to antioxidant activity, they also have anti-inflammatory action, anti-cancer action and other effects. Accordingly, it is desired to develop a method for producing a culture having a high polyphenol content and excellent antioxidant power, and a polyphenol-containing culture having a high polyphenol content and excellent antioxidant activity.

上記現状に鑑み、本発明は、キノア種子および有色素米からなる群から選択される穀類を資化原料とし、担子菌などの菌糸体と共に培養してポリフェノール量および抗酸化力を増加させることを特徴とする、ポリフェノール含有培養物を製造する方法、およびポリフェノール含有培養物を提供することを目的とする。   In view of the above situation, the present invention uses cereals selected from the group consisting of quinoa seeds and pigmented rice as an assimilation raw material, and cultivates them with mycelium such as basidiomycetes to increase the amount of polyphenol and antioxidant power. It is an object of the present invention to provide a method for producing a polyphenol-containing culture, and a polyphenol-containing culture.

本発明者らはキノア種子および有色素米からなる群から選択される穀類と水とからなる培地に担子菌及び/又は子嚢菌の菌糸体を接種し、前記穀類を前記菌糸体で資化させたところ、培養液中にポリフェノールが産生されること、培地に含まれる水の量によって、生成されるポリフェノール量やポリフェノールの種類が相異することを見出した。更に、培地に使用する穀類をそのまま粒子として使用し、または脱皮(だっぷ)して使用し、またはこれらの粉砕物を使用することでポリフェノール含有量や抗酸化活性が相違すること、菌糸体の種類、添加量、培地の種類などを選択することでポリフェノール含有量やポリフェノール量に対する抗酸化活性の異なるポリフェノール含有培養物を製造することができることを見出し、本発明を完成させた。   The present inventors inoculate a mycelium of basidiomycetes and / or ascomycetes into a medium consisting of cereal and water selected from the group consisting of quinoa seeds and pigmented rice, and assimilate the cereal with the mycelium. As a result, it was found that the amount of polyphenol produced and the type of polyphenol differ depending on the production of polyphenol in the culture medium and the amount of water contained in the medium. Furthermore, the cereals used in the medium can be used as particles as they are, or used after being moulted, or by using these pulverized products, the polyphenol content and antioxidant activity are different. The inventors have found that polyphenol-containing cultures having different antioxidant activities with respect to polyphenol content and polyphenol content can be produced by selecting the type, added amount, type of medium, and the like, thereby completing the present invention.

すなわち本発明は、キノア種子および有色素米からなる群から選択される穀類と、前記穀類の1.2〜100質量倍の水とを含む培地でエノキタケ、スエヒロタケ、キクラゲ、ツクツクホウシタケ、およびオオウズラタケのいずれか1種以上に由来する担子菌及び/又は子嚢菌の菌糸体を培養し、
前記担子菌及び/又は子嚢菌の菌糸体に前記穀類を資化させ、
培養液にポリフェノールを産生させることを特徴とする、ポリフェノール含有培養物の製造方法を提供するものである。
That is, the present invention is a medium containing cereals selected from the group consisting of quinoa seeds and pigmented rice, and water that is 1.2 to 100 times the mass of the cereals, and is made up of enokitake mushrooms, shirohirotake mushrooms , jellyfishes, tsukutokuboshitake, Culturing mycelium of basidiomycetes and / or ascomycetes derived from any one or more species ,
Assimilating the cereals to the mycelium of the basidiomycetes and / or ascomycetes,
The present invention provides a method for producing a polyphenol-containing culture, characterized in that polyphenol is produced in a culture solution.

また本発明は、前記穀類が、未粉砕の穀類、穀類の脱皮物、および穀類またはその脱皮物の粉砕物とからなる群から選択される1種であることを特徴とする、前記ポリフェノール含有培養物の製造方法を提供するものである。   In the present invention, it is preferable that the cereal is one selected from the group consisting of unground cereals, cereals of cereals, and cereals or pulverized products of the sheds. The manufacturing method of a thing is provided.

また本発明は、前記未粉砕の穀類またはその穀類の脱皮物と、その20〜100質量倍の水とを含む培地で担子菌及び/又は子嚢菌の菌糸体を培養し、
得られた培養物を乾燥し及び粉砕して粉砕物を得て、
得られた粉砕物にその20〜100質量倍の水とを含む培地で担子菌及び/又は子嚢菌の菌糸体を培養することを特徴とする、前記ポリフェノール含有培養物の製造方法を提供するものである。
Further, the present invention cultivates mycelia of basidiomycetes and / or ascomycetes in a medium containing the unmilled cereal or the unpeeled cereal of the cereal and water of 20 to 100 times its mass,
The obtained culture is dried and pulverized to obtain a pulverized product,
Provided is a method for producing a polyphenol-containing culture, characterized by culturing mycelium of basidiomycetes and / or ascomycetes in a medium containing 20 to 100 times by mass of the obtained pulverized product. It is.

また本発明は、前記菌糸体が、エノキタケNBRC 5366、エノキタケNBRC 30904、エノキタケNBRC 31862、エノキタケNBRC 33210、スエヒロタケNBRC 4929、キクラゲNBRC 100150オオウズラタケNBRC 30339、ツクツクホウシタケNBRC 33061およびツクツクホウシタケNBRC 33259からなる群から選択される1種以上である、前記ポリフェノール含有培養物の製造方法を提供するものである。
The present invention, the mycelium is composed of d Nokitake NBRC 5366, Flammulina NBRC 30904, Flammulina NBRC 31 862, Flammulina NBRC thirty-three thousand two hundred ten, Schizophyllum commune NBRC 4929, fungus NBRC one hundred thousand one hundred and fifty, Fomitopsis palustris NBRC 30339, Tsukutsukuhoushi bamboo NBRC thirty-three thousand and sixty-one and Tsukutsukuhoushi bamboo NBRC 33 259 The present invention provides a method for producing the above polyphenol-containing culture, which is one or more selected from the group.

また本発明は、前記菌糸体の接種量が、前記穀類の0.001〜0.2質量%である、前記ポリフェノール含有培養物の製造方法を提供するものである。   Moreover, this invention provides the manufacturing method of the said polyphenol containing culture | cultivation whose inoculum of the said mycelium is 0.001-0.2 mass% of the said grain.

また本発明は、キノア種子と、エノキタケNBRC 5366、エノキタケNBRC 30904、エノキタケNBRC 31862、エノキタケNBRC 33210、スエヒロタケNBRC 4929、キクラゲNBRC 100150、オオウズラタケNBRC 30339、ツクツクホウシタケNBRC 33061およびツクツクホウシタケNBRC 33259からなる群から選択される1種以上の菌糸体との培養物であって
ポリフェノール量が、前記培養物(乾燥重量)100g当り、没食子酸換算で400mg以上であることを特徴とする、ポリフェノール含有培養物を提供するものである。
In addition, the present invention includes quinoa seeds, enokitake NBRC 5366, enokitake NBRC 30904, enokitake NBRC 31862, enokitake NBRC 33210, Shirohirotake NBRC 4929, mushroom NBRC 100150, Ozuratake NBRC 30339 A culture with one or more selected mycelium ,
The present invention provides a polyphenol-containing culture, wherein the amount of polyphenol is 400 mg or more in terms of gallic acid per 100 g of the culture (dry weight).

また本発明は、前記ポリフェノール含有培養物の抗酸化活性が、培養物(乾燥重量)100g当り、トロロックス換算値で1000μmol以上であることを特徴とする、前記ポリフェノール含有培養物を提供するものである。   The present invention also provides the polyphenol-containing culture, wherein the antioxidant activity of the polyphenol-containing culture is 1000 μmol or more in terms of Trolox per 100 g of the culture (dry weight). is there.

また本発明は、前記ポリフェノール含有培養物の抗酸化活性が、培養物(乾燥重量)100g当り、トロロックス換算値で400を超え1000μmol未満であることを特徴とする、前記ポリフェノール含有培養物を提供するものである。   The present invention also provides the polyphenol-containing culture, wherein the antioxidant activity of the polyphenol-containing culture is more than 400 and less than 1000 μmol in terms of Trolox per 100 g of the culture (dry weight). To do.

また本発明は、有色素米と、エノキタケNBRC 5366、エノキタケNBRC 30904、エノキタケNBRC 31862、エノキタケNBRC 33210、スエヒロタケNBRC 4929、キクラゲNBRC 100150、オオウズラタケNBRC 30339、ツクツクホウシタケNBRC 33061およびツクツクホウシタケNBRC 33259からなる群から選択される1種以上の菌糸体との培養物であって
ポリフェノール量が、前記培養物(乾燥重量)100g当り、没食子酸換算で300mg以上であることを特徴とする、ポリフェノール含有培養物を提供するものである。
The present invention also includes pigmented rice, Enokitake NBRC 5366, Enokitake NBRC 30904, Enokitake NBRC 31862, Enokitake NBRC 33210, Suirotake NBRC 4929, Cypridina NBRC 100150, Ozuratake NBRC 3039 A culture with one or more mycelium selected from
Amount polyphenols, the culture (dry weight) 100 g per, characterized in that at least 300mg gallic acid terms, there is provided a polyphenol-containing cultures.

また本発明は、前記ポリフェノール含有培養物の抗酸化活性が、培養物(乾燥重量)100g当り、トロロックス換算値で1500μmol以上であることを特徴とする、ポリフェノール含有培養物を提供するものである。   The present invention also provides a polyphenol-containing culture, wherein the antioxidant activity of the polyphenol-containing culture is 1500 μmol or more in terms of Trolox per 100 g of the culture (dry weight). .

本発明によれば、キノア種子および有色素米からなる群から選択される穀類を担子菌及び/又は子嚢菌の菌糸体で資化させることで、抗酸化活性に優れるポリフェノールを含む培養物を製造することができる。しかも、使用する培地の水分含有量を変化させ、および穀類の粒子径などを調整することで、ポリフェノール量を増加させ、またはポリフェノールの種類を変化させ、ポリフェノール量が高く、およびポリフェノール量に対する抗酸化活性量が異なるポリフェノール含有培養物を得ることができる。   According to the present invention, a cereal selected from the group consisting of quinoa seeds and pigmented rice is assimilated with the mycelium of basidiomycetes and / or ascomycetes to produce a culture containing polyphenols with excellent antioxidant activity can do. Moreover, by changing the water content of the medium used and adjusting the grain size of cereals, the amount of polyphenol is increased or the type of polyphenol is changed, the amount of polyphenol is high, and the antioxidant against the amount of polyphenol Polyphenol-containing cultures with different activity levels can be obtained.

実施例1の結果を示す図である。粉砕液体培地を使用して種々の菌糸体を培養して得た培養物に含まれるポリフェノール量と抗酸化活性との関係を示す。It is a figure which shows the result of Example 1. The relationship between the amount of polyphenols contained in cultures obtained by culturing various mycelia using a pulverized liquid medium and the antioxidant activity is shown. 実施例2の結果を示す図である。粒子固体培地を使用して種々の菌糸体を培養して得た培養物に含まれるポリフェノール量と抗酸化活性との関係を示す。It is a figure which shows the result of Example 2. The relationship between the amount of polyphenol contained in the culture obtained by cultivating various mycelium using a solid particle medium and the antioxidant activity is shown. 実施例1、実施例3〜実施例5の結果を示す図である。10種の菌糸体について、粉砕液体培地、粉砕固体培地、粒子液体培地および粒子固体培地を使用して培養し、それぞれの培養物に含まれるポリフェノール量と抗酸化活性との関係を示す。It is a figure which shows the result of Example 1, Example 3-Example 5. FIG. Ten types of mycelium are cultured using a pulverized liquid medium, a pulverized solid medium, a particle liquid medium, and a particle solid medium, and the relationship between the amount of polyphenol contained in each culture and the antioxidant activity is shown. マンネンタケYFH 05001に関し、使用する培地とポリフェノール量およびトロロックス換算値との関係を示す図である。It is a figure which shows the relationship between the culture medium to be used, the amount of polyphenols, and the Trolox conversion value regarding Mannentake YFH 05001. エノキタケNBRC 5366に関し、使用する培地とポリフェノール量およびトロロックス換算値との関係を示す図である。It is a figure which shows the relationship between the culture medium to be used, polyphenol amount, and Trolox conversion value about Enokitake NBRC 5366. スエヒロタケNBRC 4929に関し、使用する培地とポリフェノール量およびトロロックス換算値との関係を示す図である。It is a figure which shows the relationship between the culture medium to be used, polyphenol amount, and Trolox conversion value regarding Suehirotake NBRC 4929. キクラゲNBRC 100150に関し、使用する培地とポリフェノール量およびトロロックス換算値との関係を示す図である。It is a figure which shows the relationship between the culture medium to be used, the amount of polyphenols, and the Trolox conversion value regarding the jellyfish NBRC 100150. ツクツクホウシタケNBRC 33061に関し、使用する培地とポリフェノール量およびトロロックス換算値との関係を示す図である。It is a figure which shows the relationship between the culture medium to be used, the amount of polyphenols, and the Trolox conversion value regarding Tsukutsuku Hoshitake NBRC 33061. エノキタケNBRC 30904に関し、使用する培地とポリフェノール量およびトロロックス換算値との関係を示す図である。It is a figure which shows the relationship between the culture medium to be used, the amount of polyphenols, and the Trolox conversion value regarding Enokitake NBRC 30904. エノキタケNBRC 31862に関し、使用する培地とポリフェノール量およびトロロックス換算値との関係を示す図である。It is a figure which shows the relationship between the culture medium to be used, polyphenol amount, and Trolox conversion value about Enokitake NBRC 31862. エノキタケNBRC 33210に関し、使用する培地とポリフェノール量およびトロロックス換算値との関係を示す図である。It is a figure which shows the relationship between the culture medium to be used, polyphenol amount, and Trolox conversion value regarding Enokitake NBRC 33210. オオウズラタケNBRC 30339に関し、使用する培地とポリフェノール量およびトロロックス換算値との関係を示す図である。It is a figure which shows the relationship between the culture medium to be used, the amount of polyphenols, and the Trolox conversion value regarding Pseudomonas NBRC 30339. ツクツクホウシタケNBRC 33259に関し、使用する培地とポリフェノール量およびトロロックス換算値との関係を示す図である。It is a figure which shows the relationship between the culture medium to be used, the amount of polyphenols, and the Trolox conversion value regarding Tsukutsuku Hoshitake NBRC 33259. 実施例6の結果を示す図である。UV照射により検出した結果を示す。It is a figure which shows the result of Example 6. The result detected by UV irradiation is shown. 実施例6の結果を示す図である。DPPH/MeOH溶液により検出した結果を示す。It is a figure which shows the result of Example 6. The result detected by the DPPH / MeOH solution is shown.

本発明は、キノア種子および有色素米からなる群から選択される穀類と、前記穀類の1.2〜100質量倍の水とを含む培地で担子菌及び/又は子嚢菌の菌糸体を培養し、前記担子菌及び/又は子嚢菌の菌糸体に前記穀類を資化させ、培養液にポリフェノールを産生させることを特徴とする、ポリフェノール含有培養物の製造方法である。キノア種子には、フラボノイド配糖体が含まれ、そのアグリコンは抗酸化作用を発揮しうるクエルセチンやケンフェロールなどのポリフェノールである。担子菌の菌糸体で培養するものとして特許文献4があるが、植物繊維を含む培地を菌糸体で培養して抗酸化性物質を生成しているが、ポリフェノールを産生するものではない。本発明によれば、キノア種子および有色素米からなる群から選択される穀類を担子菌及び/又は子嚢菌の菌糸体と共に培養することで培養液中のポリフェノール量を増加させ、かつポリフェノール量に対応して抗酸化活性を増加させることができ、かつ、培養条件を選択することで、ポリフェノール量に対する抗酸化活性を調整することができる。これにより、ポリフェノール量が高く、所望の抗酸化活性を有するポリフェノール含有培養物を得ることができる。   The present invention cultivates mycelia of basidiomycetes and / or ascomycetes in a medium containing cereals selected from the group consisting of quinoa seeds and pigmented rice, and water 1.2 to 100 times as much as the cereals. A method for producing a polyphenol-containing culture, characterized in that the mycelium of the basidiomycete and / or ascomycete is assimilated to the cereal and the culture solution produces polyphenol. Quinoa seeds contain flavonoid glycosides, and the aglycone is a polyphenol such as quercetin or kaempferol that can exert an antioxidant action. Although there exists patent document 4 as what culture | cultivates by the mycelium of a basidiomycete, the culture medium containing a plant fiber is culture | cultivated by a mycelium and the antioxidant substance is produced | generated, However, Polyphenol is not produced. According to the present invention, cereals selected from the group consisting of quinoa seeds and pigmented rice are cultured together with mycelium of basidiomycetes and / or ascomycetes to increase the amount of polyphenols in the culture solution, and to the amount of polyphenols Correspondingly, the antioxidant activity can be increased, and the antioxidant activity against the amount of polyphenol can be adjusted by selecting the culture conditions. Thereby, the polyphenol containing culture | cultivation which has high polyphenol amount and has desired antioxidant activity can be obtained.

(1)担子菌および子嚢菌
キノコとは、菌類のうちで比較的大型の子実体を形成するものや子実体そのものであり、担子菌や子嚢菌がある。キノコは生態系のサイクルの「分解」部分を担当し、キノコにより植物を構成するリグニン等が分解され、複雑構造のタンパク質が簡単な構造の成分に変化され、再度植物の生長のために使用される。担子菌としては、マンネンタケ、スエヒロタケ、キクラゲ、エノキタケ、オオウズラタケ、アガリクス、ヒラタケ、マイタケ、マスタケ、マンネンタケ、シイタケ、ナメコ、ブナシメジ、フクロタケ、ヤマブシタケ、ヌメリツバタケなどがある。また、子嚢菌門に属するものとして、ツクツクホウシタケ、チャワンタケ、アミガサタケがある。本発明では、担子菌や子嚢菌の中で、キノア種子および有色素米からなる群から選択される穀類を資化し、ポリフェノールを生成できるものを広く使用することができる。本発明では、マンネンタケ、エノキタケ、スエヒロタケ、キクラゲ、ツクツクホウシタケ、およびオオウズラタケを好ましく使用することができる。特に、オオウズラタケ由来の菌糸体を好適に使用することができる。菌糸体は、生育の際にポリフェノールを消費するが、オオウズラタケはポリフェノールの消費量が少なく、最終的に培養液中のポリフェノール量を増加しうるからである。なお、穀類を資化してポリフェノールを生産しうるか否かは、予備培養試験などを行うことで評価することができる。
(1) Basidiomycetes and Ascomycetes Mushrooms are fungi that form relatively large fruit bodies or fruit bodies themselves, and include basidiomycetes and ascomycetes. Mushrooms are in charge of the “degradation” part of the ecosystem cycle, and the lignin and other components that make up the plant are broken down by the mushrooms, complex proteins are converted into simple structural components and used again for plant growth. The As basidiomycetes, there are Mannentake, Shirohirotake, Mushroom, Enokitake, Ouzuratake, Agaricus, Oyster mushroom, Maitake, Mustache, Mannentake, Shiitake, Nameko, Bunashimeji, Fukurotake, Yamabushitake, Numerizubatake and the like. In addition, as belonging to the Ascomycota, there are Tsukutsuku Hoshitake, Chawantake and Amigasatake. In the present invention, among basidiomycetes and ascomycetes, those that can assimilate cereals selected from the group consisting of quinoa seeds and pigmented rice to produce polyphenols can be widely used. In the present invention, Mannentake, Enokitake, Suehirotake, Mushroom, Tsukutsuku Hoshitake, and Oozutake can be preferably used. In particular, mycelium derived from Prunus communis can be suitably used. This is because mycelium consumes polyphenols during growth, but Japanese quail bamboo consumes less polyphenols and can ultimately increase the amount of polyphenols in the culture. Note that whether or not cereals can be assimilated to produce polyphenols can be evaluated by conducting a preliminary culture test or the like.

(2)培地
本発明では、資化材料としてキノア種子および有色素米からなる群から選択される穀類を使用し、これに水を添加したものを培地として使用する。キノアは、アカザ科・アカザ属の植物であり、1つの房に直径2〜3mmの種子を250〜500個程度付け、この種子を脱穀して食用することができる。イネ科でないためグルテンを含まず、小麦アレルギーのような対グリアジンアレルギーを持つものも摂取でき、リシンを始め多くの必須アミノ酸や、リノレン酸、オレイン酸などの不飽和脂肪酸を含み、極めて栄養バランスに優れる食材である。キノアは、イネ科でないことから擬穀類に分類される場合もあるが、本発明では穀類に含めるものとする。また、有色素米とは、玄米の種皮または果皮の少なくとも一方にアントシアニン系色素やタンニン系色素、クロロフィル系色素を含む穀類を意味し、玄米の種皮または果皮の少なくとも一方にアントシアニン系の紫黒色素を含む黒米や、玄米の種皮または果皮の少なくとも一方にタンニン系の赤色色素を含む赤米、クロロフィル系色素を含む緑米、その他紫米、紅米などがある。
(2) Medium In the present invention, a cereal selected from the group consisting of quinoa seeds and pigmented rice is used as an assimilation material, and water added thereto is used as a medium. Quinoa is a plant belonging to the genus Aceraceae and Akaza, and can attach about 250 to 500 seeds having a diameter of 2 to 3 mm to one bunch and thresh these seeds for use. Because it is not gramineous, it does not contain gluten and can be ingested with allergies to gliadins such as wheat allergies. Excellent food. Although quinoa is sometimes not classified as a cereal, it may be classified as a cereal, but in the present invention, it is included in the cereal. Pigmented rice means grains containing anthocyanin pigments, tannin pigments, and chlorophyll pigments in at least one of brown rice seed coat or pericarp, and anthocyanin purple black pigment in at least one of brown rice seed coat or pericarp. Black rice containing brown rice, red rice containing tannin red pigment in at least one of seed coat or pericarp of brown rice, green rice containing chlorophyll pigment, purple rice, red rice, and the like.

使用するキノア種子や有色素米は、粒子状のまま、すなわち未粉砕の状態で使用することもできるし、種皮を除去したものでもよい。更に、これらの穀類を粉末状に粉砕した粉砕物を使用してもよい。なお、穀類から籾殻を除去する工程を脱皮と称し、本願発明では、キノア種子から種皮を除去することを脱皮に含めるものとする。粉砕方法や粉砕の程度は特に限定は無い。粉砕により単位重量あたりの表面積が増加するため、ポリフェノール産生量および抗酸化活性が増加する傾向があるが、使用する菌糸体の種類や培地の水分含有量によっては粒子状で使用した場合に多量のポリフェノールが産生され、抗酸化活性が高い場合がある。マンネンタケやエノキタケは、後記する液体培地で培養した場合に、粉砕によりポリフェノール量が倍増する傾向があり、オオウズラタケは未粉砕の場合にポリフェノール量が倍増する傾向がある。   The quinoa seed and pigmented rice to be used can be used in the form of particles, that is, in an unground state, or can be used after removing the seed coat. Furthermore, you may use the ground material which grind | pulverized these cereals into the powder form. In addition, the process of removing rice husks from cereals is referred to as molting. In the present invention, removing seed coat from quinoa seeds is included in molting. The pulverization method and the degree of pulverization are not particularly limited. Since the surface area per unit weight is increased by grinding, polyphenol production and antioxidant activity tend to increase, but depending on the type of mycelium used and the water content of the medium, a large amount of particles may be used when used in particulate form. Polyphenols are produced and may have high antioxidant activity. Mannentake and Enokitake have a tendency to double the amount of polyphenols by pulverization when cultured in a liquid medium described later, and Japanese quail bamboo has a tendency to double the amount of polyphenols when not pulverized.

培地に添加する水の量は、穀類に対して1.2〜100質量倍である。本発明では、含水量に対応して液体培地と固体培地とに区分するものとし、穀物と穀物の1.2〜2.0質量倍、好ましくは1.5〜2.0質量倍の水を添加した培地を「固体培地」と称し、2.0質量倍を超えて100質量倍、より好ましくは30〜80質量倍の培地を「液体培地」と称する。このように分類するのは、固体培地を使用するか液体培地を使用するかにより、培養物中のポリフェノール量に対する抗酸化活性が相違することが判明したからである。固体培地を使用すると、接種する菌糸体の種類に関わらず、ポリフェノール量に対する抗酸化活性の比が近似するが、液体培地を使用すると、接種する菌糸体の種類によってポリフェノール量も、ポリフェノール量に対する抗酸化活性の比も大きく相違する。より詳細には、キノア種子液体培地にエノキタケNBRC 5366、エノキタケNBRC 30904、エノキタケNBRC 31862を接種する場合、およびキノア種子固体培地にエノキタケNBRC 5366、キクラゲNBRC 100150、ツクツクホウシタケNBRC 33061、エノキタケNBRC 30904、エノキタケNBRC 31862、エノキタケNBRC 33210、オオウズラタケNBRC 330339、ツクツクホウシタケNBRC 33259を接種する場合には、ポリフェノール量と抗酸化力との比が一定しないポリフェノール含有培養物となるが、キノア種子液体培地にマンネンタケYFH 05001、スエヒロタケNBRC 4929、キクラゲNBRC 100150、ツクツクホウシタケNBRC 33061、エノキタケNBRC 33210、オオウズラタケNBRC 330339、ツクツクホウシタケNBRC 33259を接種する場合には、ポリフェノール量に対して抗酸化活性の比が近似するポリフェノール含有培養物が製造される。   The amount of water added to the medium is 1.2 to 100 times the mass of the cereal. In the present invention, the liquid medium and the solid medium are classified according to the water content, and 1.2 to 2.0 mass times, preferably 1.5 to 2.0 mass times water of the cereal and cereal. The added medium is referred to as “solid medium”, and the medium that exceeds 2.0 mass times and is 100 mass times, more preferably 30 to 80 mass times is referred to as “liquid medium”. This classification is because it was found that the antioxidant activity against the amount of polyphenol in the culture differs depending on whether a solid medium or a liquid medium is used. When a solid medium is used, the ratio of antioxidant activity to the amount of polyphenols is approximated regardless of the type of mycelium to be inoculated. However, when a liquid medium is used, the amount of polyphenols varies depending on the type of mycelium to be inoculated. The ratio of oxidation activity is also greatly different. More specifically, when inoculating Enokitake NBRC 5366, Enokitake NBRC 30904, Enokitake NBRC 31862 in a quinoa seed liquid medium, and Enokitake NBRC 5366, Cypridium NBRC 100150, Tsukukoku Shishitake NBRC 33004, When inoculated with NBRC 31862, Enokitake NBRC 33210, Ozutake NBRC 330339, Tsukutokushitake NBRC 33259, it becomes a polyphenol-containing culture in which the ratio of the amount of polyphenol to the antioxidant power is not constant, but the quinoa seed liquid medium YFH 05001 , Suehirotake NBRC 4929, Jellyfish NBRC 100150, Tsukutsuku Hoshitake N When inoculated with BRC 33061, Enokitake NBRC 33210, Ozutake NBRC 330339, and Tsukutokushitake NBRC 33259, a polyphenol-containing culture having a ratio of antioxidant activity to the amount of polyphenol is produced.

本発明で使用する菌糸体は、穀類のみを資化してポリフェノールを産生できるため、前記培地には、蔗糖、その他の成分を添加する必要はない。ただし、蔗糖、酵母エキス、モルトエキス、pH調整剤、グルコース、ポテト抽出物、フスマ、コヌカ、その他の成分を添加してもよい。   Since the mycelium used in the present invention can produce polyphenols by assimilating only cereals, it is not necessary to add sucrose or other components to the medium. However, sucrose, yeast extract, malt extract, pH adjuster, glucose, potato extract, bran, Konuka, and other components may be added.

(3)培養方法
本発明のポリフェノール含有培養物の製造方法では、前記培地に菌糸体を接種し、温度20〜30℃で7〜20日間の培養を行う。固体培地の場合は、静置培養が好適であり、液体培地の場合には、撹拌培養が好適である。何れの培養方法の場合でも、予め培地を高温滅菌した後に菌糸体を接種する。培養時は通気培養であり、培地中に菌糸体が蔓延した状態で終了させる。
(3) Culture method In the method for producing a polyphenol-containing culture of the present invention, the mycelium is inoculated into the medium and cultured at a temperature of 20 to 30 ° C for 7 to 20 days. In the case of a solid medium, stationary culture is suitable, and in the case of a liquid medium, stirring culture is suitable. In any culture method, the mycelium is inoculated after high-temperature sterilization of the medium in advance. At the time of culture, it is aeration culture, and it is terminated with the mycelium invading in the medium.

固体培地を使用する場合、穀類の粉砕物を使用してなる固体培地(以下、単に粉砕固体培地と称する。)を使用しても、穀類を未粉砕で粒子状のまま使用してなる固体培地(以下、単に粒子固体培地と称する。)を使用してもよい。固体培地を使用する培養方法を固体培養と称する。同様に、液体培地として、穀類の粉砕物からなる液体培地(以下、単に粉砕液体培地と称する。)を使用してもよく、穀類を未粉砕で粒子状のまま使用してなる液体培地(以下、単に粒子液体培地と称する。)を使用してもよい。液体培地を使用する培養方法を液体培養と称する。本発明では、異なる2以上の培地による培養を組み合わせた培養方法をハイブリッド培養と称し、このようなハイブリッド培養であってもよい。例えば、未粉砕の穀類またはその穀類の脱皮物と、その20〜100質量倍の水とを含む培地で担子菌及び/又は子嚢菌の菌糸体を培養し、得られた培養物を乾燥し及び粉砕して粉砕物を得て、得られた粉砕物にその20〜100質量倍の水とを含む培地で担子菌及び/又は子嚢菌の菌糸体を培養するハイブリッド培養がある。ハイブリッド培養によりポリフェノール量を増加させ、または抗酸化活性を増加させることができる。   In the case of using a solid medium, a solid medium obtained by using cereal grains in an unpulverized state even when a solid medium (hereinafter simply referred to as a crushed solid medium) using a pulverized product of cereal is used. (Hereinafter, simply referred to as a particulate solid medium) may be used. A culture method using a solid medium is referred to as solid culture. Similarly, a liquid culture medium (hereinafter simply referred to as a pulverized liquid medium) may be used as the liquid culture medium. , Simply referred to as a particulate liquid medium). A culture method using a liquid medium is called liquid culture. In the present invention, a culture method in which cultures using two or more different media are combined is referred to as hybrid culture, and such hybrid culture may be used. For example, the mycelium of basidiomycetes and / or ascomycetes is cultured in a medium containing unmilled cereal or a molting product of the cereal and 20 to 100 times its mass of water, and the resulting culture is dried and There is a hybrid culture in which a pulverized product is obtained by pulverization, and mycelia of basidiomycetes and / or ascomycetes are cultured in a medium containing 20 to 100 times the mass of water in the obtained pulverized product. Hybrid culture can increase the amount of polyphenols or increase antioxidant activity.

本発明では、培地を穀類と水のみで構成しうるため、菌糸体の接種量は、培養期間内に穀類を資化して生存しうる期間となる。好ましくは、前記菌糸体の接種量は、前記穀類の0.001〜0.2質量%であることが好ましく、より好ましくは0.005〜0.15質量%、特に好ましくは0.01〜0.12質量%である。菌糸体は、生育するためにポリフェノールを消費することが判明し、過量の菌糸体の使用は、ポリフェノール産生量を低減させる場合がある。なお、菌糸体によってポリフェノール消費量が相違するが、各菌糸体の至適使用量は、予備試験により菌糸体の特性を評価して決定することができる。   In the present invention, since the medium can be composed only of cereal and water, the inoculum of the mycelium is a period in which the cereal can be assimilated and survived within the culture period. Preferably, the inoculum of the mycelium is preferably 0.001 to 0.2% by mass of the cereal, more preferably 0.005 to 0.15% by mass, and particularly preferably 0.01 to 0%. .12% by mass. Mycelium has been found to consume polyphenols to grow, and the use of excessive amounts of mycelia can reduce polyphenol production. The polyphenol consumption varies depending on the mycelium, but the optimum amount of each mycelium can be determined by evaluating the characteristics of the mycelium by a preliminary test.

(4)ポリフェノール含有培養物
培養終了後、培養物は、そのままポリフェノール含有培養物として使用することができる。培養物から常法によりポリフェノールを抽出してもよい。一方、培養物に含まれる穀類の残渣や菌糸体を除去し、ポリフェノール含有培養物として使用してもよい。培養物には、ポリフェノールが含まれ、ポリフェノールの種類に応じた抗酸化活性を発揮するため抗酸化剤として使用することができる。
(4) Polyphenol-containing culture After completion of the culture, the culture can be used as it is as a polyphenol-containing culture. Polyphenol may be extracted from the culture by a conventional method. On the other hand, cereal residues and mycelium contained in the culture may be removed and used as a polyphenol-containing culture. The culture contains polyphenol and can be used as an antioxidant because it exhibits antioxidant activity according to the type of polyphenol.

本発明は、培地に使用する穀類の粉砕の有無、培地に添加する水分量の相違によってポリフェノール産生量や抗酸化活性が相違する。例えば、菌糸体としてオオウズラタケやスエヒロタケを使用する場合は、培地として未粉砕の穀類を使用した粒子液体培地を使用するとポリフェノール量の多い培養物を得ることができる。特に、オオウズラタケは、生育の際にポリフェノール消費量が少ない点で有利である。マンネンタケ、エノキタケ、キクラゲ、ツクツクホウシタケを使用する場合は、培地として穀類の粉砕物を使用した粉砕液体培地を使用することで、未粉砕の穀類を使用した場合よりもポリフェノール産生量が多く、抗酸化力も高い培養物を得ることができる。なお、エノキタケは、培地として粒子液体培地を使用し、次いで、培養物を粉砕して粉砕液体培地を用いるハイブリッド培養も好適である。後記する実施例に示すように、粉砕液体培地を使用する場合よりもポリフェノール量が増加し、特に抗酸化活性に優れるからである。   In the present invention, the amount of polyphenol produced and the antioxidant activity differ depending on the presence or absence of pulverization of cereals used in the medium and the difference in the amount of water added to the medium. For example, when using Oozutake or Suehirotake as the mycelium, a culture with a large amount of polyphenol can be obtained by using a liquid particle medium using unground cereals as the medium. In particular, Prunus octopus is advantageous in that it consumes less polyphenol during growth. When using garlic mushrooms, enokitake mushrooms, mushrooms, and husk mushrooms, the use of a pulverized liquid medium using ground cereals as a medium results in higher polyphenol production and antioxidants than when unground cereals are used. A strong culture can be obtained. Enokitake is also preferably a hybrid culture in which a particulate liquid medium is used as a medium, and then the culture is crushed and a crushed liquid medium is used. This is because, as shown in the examples described later, the amount of polyphenol is increased as compared with the case of using a pulverized liquid medium, and the antioxidant activity is particularly excellent.

一方、同じ菌糸体、同じ穀類を使用して培養した場合でも、培地の含水量や穀類の粉砕の有無によってポリフェノール量および抗酸化活性が相違し、培養物に含まれるポリフェノール含有量と抗酸化活性との比が相違する。その詳細は明確ではないが、培地の種類によって生産物が異なるためと考えられる。例えば、粉砕の有無により穀類に含まれる澱粉質の資化速度が相違し、生産物の特性に差が生じたものと推定される。このことは、異なる培地を使用することで、ポリフェノール量に対する抗酸化活性の比が異なるポリフェノール含有培養物が得られることを意味する。   On the other hand, even when cultured using the same mycelium and the same cereal, the amount of polyphenol and the antioxidant activity differ depending on the water content of the medium and the presence or absence of cereals. The ratio is different. Although the details are not clear, it is thought that the product varies depending on the type of medium. For example, it is presumed that the assimilation rate of starch contained in cereals differs depending on the presence or absence of pulverization, resulting in a difference in product characteristics. This means that by using different media, polyphenol-containing cultures with different ratios of antioxidant activity to polyphenol content are obtained.

本発明のポリフェノール含有培養物は、ポリフェノール量が、培養物(乾燥重量)100g当り、没食子酸換算で400mg以上、より好ましくは600mg以上である。キノア種子を使用する場合、液体培地によれば、マンネンタケYFH 05001、スエヒロタケNBRC 4929、キクラゲNBRC 100150、ツクツクホウシタケNBRC 33061、エノキタケNBRC 33210、オオウズラタケNBRC 330339、ツクツクホウシタケNBRC 33259を接種し、前記ポリフェノール含有培養物の抗酸化活性が、培養物(乾燥重量)100g当り、トロロックス換算値で1000μmol以上となるポリフェノール含有培養物を得ることができる。また、固体培地を使用する場合は、スエヒロタケNBRC 4929を接種して、トロロックス換算値で1000μmol以上となるポリフェノール含有培養物を得ることができる。   The polyphenol-containing culture of the present invention has a polyphenol content of 400 mg or more, more preferably 600 mg or more in terms of gallic acid per 100 g of the culture (dry weight). When quinoa seeds are used, according to the liquid medium, Mannentake YFH 05001, Suehirotake NBRC 4929, Mushroom NBRC 100150, Tsukutoku Hoshitake NBRC 33061, Enokitake NBRC 33210, Ozuratake NBRC 33025, Tsukokuboshi RC It is possible to obtain a polyphenol-containing culture in which the antioxidant activity of the product is 1000 μmol or more in terms of Trolox per 100 g of the culture (dry weight). Moreover, when using a solid culture medium, Suehirotake NBRC 4929 is inoculated and the polyphenol containing culture | cultivation used as 1000 micromol or more by a Trolox conversion value can be obtained.

また、キノア種子粉砕液体培地を使用し、エノキタケNBRC 5366、エノキタケNBRC 30904、エノキタケNBRC 31862を接種する場合、および固体培地を使用し、エノキタケNBRC 5366、キクラゲNBRC 100150、ツクツクホウシタケNBRC 33061、エノキタケNBRC 30904、エノキタケNBRC 31862、エノキタケNBRC 33210、オオウズラタケNBRC 330339、ツクツクホウシタケNBRC 33259を接種する場合には、抗酸化力が、培養物(乾燥重量)100g当り、トロロックス換算値で、400μmol以上1000μmol未満、好ましくは400〜900μmolとなるポリフェノール含有培養物を得ることができる。なお、前記ポリフェノール量は、フォーリン・チオカルト法による測定値とし、没食子酸相当量(mg/100g)に換算した値である。また、抗酸化活性は、後記する実施例に記載する方法での測定値とし、トロロックス相当モル数である。たとえば、乾燥キノア種子100gに含まれるポリフェノール量は約200〜300mgである。ポリフェノールには、抗酸化活性以外の抗炎症作用などが存在するため、ポリフェノール量に対する抗酸化活性の異なるポリフェノール含有培養物は、含まれるポリフェノールに由来する、抗酸化活性以外の他の効果を期待することができる。   In addition, when quinoa seed pulverized liquid medium is used and inoculated with Enokitake NBRC 5366, Enokitake NBRC 30904, Enokitake NBRC 31862, and using a solid medium, Enokitake NBRC 5366, Cypress NBRC 100150, Tsukutoku Hoshitake NBRC 3304 , Enokitake NBRC 31862, Enokitake NBRC 33210, Ozutake NBRC 330339, Tsukutoku Shitake NBRC 33259, the antioxidant power is 400 μmol or more and less than 1000 μmol in terms of Trolox per 100 g of culture (dry weight). Can obtain a polyphenol-containing culture of 400-900 μmol. The amount of polyphenol is a value measured by a foreign thiocult method, and is a value converted to an equivalent amount of gallic acid (mg / 100 g). Further, the antioxidant activity is a value measured by the method described in Examples described later, and is a molol equivalent mol number. For example, the amount of polyphenol contained in 100 g of dried quinoa seed is about 200 to 300 mg. Since polyphenols have anti-inflammatory effects other than antioxidant activity, polyphenol-containing cultures with different antioxidant activities relative to the amount of polyphenols are expected to have effects other than antioxidant activity derived from the contained polyphenols. be able to.

また、赤米や黒米などの有色素米を使用すると、ポリフェノール量が、培養物(乾燥重量)100g当り、没食子酸換算で300mg以上であることを特徴とする、ポリフェノール含有培養物を得ることができ、更に、前記ポリフェノール含有培養物の抗酸化活性が、培養物(乾燥重量)100g当り、トロロックス換算値で1500μmol以上であることを特徴とする、ポリフェノール含有培養物を得ることができる。たとえば、乾燥赤米や黒米100gに含まれるポリフェノール量は約100〜250mgである。   In addition, when pigmented rice such as red rice or black rice is used, a polyphenol-containing culture characterized in that the amount of polyphenol is 300 mg or more in terms of gallic acid per 100 g of the culture (dry weight) can be obtained. In addition, it is possible to obtain a polyphenol-containing culture, wherein the antioxidant activity of the polyphenol-containing culture is 1500 μmol or more in terms of Trolox per 100 g of the culture (dry weight). For example, the amount of polyphenol contained in 100 g of dried red rice or black rice is about 100 to 250 mg.

次に実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、これらの実施例は何ら本発明を制限するものではない。   EXAMPLES Next, although an Example is given and this invention is demonstrated concretely, these Examples do not restrict | limit this invention at all.

(製造例1)
下記に基づいて、各菌糸体を調製した。
乾熱済み試験管(18mm)に、モルトエキス10g、酵母エキス4g、ショ糖10g、水1リットル、寒天15gからなるMYS寒天培地を20mlずつ分注し、オートクレーブで121℃、20min滅菌し、滅菌シャーレに前記培地を流し入れた。固化した後、種菌プレートを滅菌済みコルクボーラー(7mm)で1ディスクくり抜き、作製したMYSプレートの中央に接種した。パラフィルムでプレートの周囲を覆い、25℃のインキュベーターで培養した。プレートの8割程に菌糸体が拡がった後、10℃の冷蔵庫において保存した。調製した菌糸体の種類を表1に示す。なお、菌糸体の重量は、菌糸体によって相違するが、1ディスクあたり約0.3mgであった。
(Production Example 1)
Each mycelium was prepared based on the following.
Dispense 20 ml of MYS agar medium consisting of 10 g of malt extract, 4 g of yeast extract, 10 g of sucrose, 1 liter of water and 15 g of agar into a dry-heated test tube (18 mm), and sterilize by autoclaving at 121 ° C. for 20 min. The medium was poured into a petri dish. After solidifying, the inoculum plate was cut out by 1 disc with a sterilized cork borer (7 mm) and inoculated in the center of the prepared MYS plate. The periphery of the plate was covered with parafilm and cultured in an incubator at 25 ° C. After the mycelium spread to about 80% of the plate, it was stored in a refrigerator at 10 ° C. Table 1 shows the types of mycelium prepared. The weight of the mycelium was about 0.3 mg per disc although it varied depending on the mycelium.

(分析定量方法)
(1)ポリフェノール量
ポリフェノール量は、フォーリン・チオカルト法によって測定した。
(a)培養物を凍結乾燥し、乾燥物をマルチビーズショッカー(安井機械株式会社製)を用いて、2,000rpmで90秒間粉砕した。試験管に粉砕物200mg、抽出溶媒(メタノール:水=2:1(v/v))10mlを入れ、シリコ栓をして50℃に設定したアルミブロックヒーターで保温し、10分間毎にボルテックスミキサーで約5秒間混合しつつ60分間抽出した。抽出液を冷却遠心機で25℃、5,000rpm又は10,000rpmで10分間遠心分離して上澄を回収し、これを抽出液とした。
(b)没食子酸一水和物0.1106gを蒸留水に溶かして100mlとし、没食子酸として1g/lの溶液を調製し、これを希釈して没食子酸溶液の0〜100mg/lの濃度シリーズを作製した。6本の試験管に蒸留水3ml、抽出溶媒(メタノール:水=2:1(v/v))0.5ml、各濃度の没食子酸溶液0.5ml、5倍に希釈したフェノール試薬を1ml加え、軽く混合した後、10%炭酸ナトリウム水溶液を1ml加え20回振り混ぜた。40℃、60分間暗所で静置した後、760nmにおける吸光度を測定し、検量線を作成した。
(c)前記抽出溶媒を1mlとしたコントロール溶液を作製し、没食子酸の検量線作成と同様の手順で前記(a)で調製した抽出液0.5ml用いて吸光度を測定した。没食子酸の検量線より、コントロール溶液を対照とし、抽出液のポリフェノール量を没食子酸に換算し求めた。なお、結果は、培養物(乾燥重量)100gに対する没食子酸量(mg/100g)で表示した。
(Analytical quantification method)
(1) Amount of polyphenol The amount of polyphenol was measured by the foreign thiocult method.
(A) The culture was freeze-dried, and the dried product was pulverized at 2,000 rpm for 90 seconds using a multi-bead shocker (manufactured by Yasui Machinery Co., Ltd.). Put 200 mg of pulverized product and 10 ml of extraction solvent (methanol: water = 2: 1 (v / v)) into a test tube, heat it with an aluminum block heater set at 50 ° C with a silico stopper, and vortex mixer every 10 minutes For 60 minutes while mixing for about 5 seconds. The extract was centrifuged at 25 ° C., 5,000 rpm, or 10,000 rpm for 10 minutes with a cooling centrifuge to recover the supernatant, which was used as the extract.
(B) 0.1106 g of gallic acid monohydrate is dissolved in distilled water to make 100 ml, a 1 g / l solution is prepared as gallic acid, and this is diluted to a concentration series of 0 to 100 mg / l of gallic acid solution Was made. Add 6 ml of distilled water, 0.5 ml of extraction solvent (methanol: water = 2: 1 (v / v)), 0.5 ml of gallic acid solution of each concentration, and 1 ml of phenol reagent diluted 5 times to 6 test tubes. After lightly mixing, 1 ml of 10% aqueous sodium carbonate solution was added and shaken 20 times. After leaving still in a dark place at 40 ° C. for 60 minutes, the absorbance at 760 nm was measured to prepare a calibration curve.
(C) A control solution with 1 ml of the extraction solvent was prepared, and the absorbance was measured using 0.5 ml of the extract prepared in (a) in the same procedure as the calibration curve for gallic acid. From the calibration curve of gallic acid, the control solution was used as a control, and the amount of polyphenol in the extract was converted to gallic acid. The results were expressed as the amount of gallic acid (mg / 100 g) per 100 g of culture (dry weight).

(2)抗酸化活性
抗酸化活性は、DPPHラジカル消去法で測定した。
(a)96穴マイクロプレートに、400μMのDPPH液と、0.2MのMESバッファー(pH6.0)と抽出溶媒(メタノール:水=2:1(v/v))とを1:1:1で混合した混合液150μlを分注し、抽出溶媒25μl、各濃度のトロロックス溶液(0、40、80、120、160、200μM)25μlを加えて混合し、室温で試料添加後から20分間放置した。520nmにおける吸光度を測定し、トロロックスの検量線を作成した。
(b)トロロックス溶液に代えて、前記したポリフェノール量の測定方法の(a)工程で得た抽出液25μlを用いて、吸光度を測定した。測定値をトロロックス量に換算し、抗酸化活性値とした。なお、測定値は、培養物(乾燥重量)100gに対するトロロックス量(μmol/100g)で表示した。
(2) Antioxidant activity Antioxidant activity was measured by the DPPH radical scavenging method.
(A) In a 96-well microplate, 400 μM DPPH solution, 0.2 M MES buffer (pH 6.0) and extraction solvent (methanol: water = 2: 1 (v / v)) were 1: 1: 1. 150 μl of the mixed solution mixed in 1) was added, mixed with 25 μl of extraction solvent and 25 μl of Trolox solution (0, 40, 80, 120, 160, 200 μM) of each concentration, and left at room temperature for 20 minutes after the sample was added. did. Absorbance at 520 nm was measured to prepare a Trolox calibration curve.
(B) Instead of the Trolox solution, the absorbance was measured using 25 μl of the extract obtained in the step (a) of the method for measuring the amount of polyphenol described above. The measured value was converted to the amount of Trolox and used as the antioxidant activity value. In addition, the measured value was displayed by the amount of Trolox (micromol / 100g) with respect to 100g of cultures (dry weight).

(3)TLC
(a)薄層プレート(メルク株式会社、5×10cm、シリカゲル60F254)を使用した。展開溶媒は、クロロホルム:メタノール=2:1溶液とした。
(b)試料は、標準物質溶液1μl、サンプル溶液3μlをスポットした。
(c)検出は、紫外線254nmの照射により行った。また、DPPH/MeOH0.02%(w/v)溶液を噴霧して、抗酸化物質を検出した。
(3) TLC
(A) A thin layer plate (Merck Co., Ltd., 5 × 10 cm, silica gel 60F254) was used. The developing solvent was a chloroform: methanol = 2: 1 solution.
(B) The sample was spotted with 1 μl of a standard substance solution and 3 μl of a sample solution.
(C) Detection was performed by irradiation with ultraviolet light at 254 nm. Further, an antioxidant was detected by spraying a DPPH / MeOH 0.02% (w / v) solution.

(実施例1)
(1)キノア種子(山梨県産)を水洗し、70℃で48hr乾燥した。前記水洗キノア種子の一部をコーヒーミル(ナショナル株式会社製、NC−S85)で16メッシュ以上に粉砕した。300ml容三角フラスコに、前記キノア粉砕物を2.5g、水道水を100mlを加え、110℃、15分間、オートクレーブ殺菌し、粉砕液体培地を調製した。
(2)前記粉砕液体培地に、製造例1で調製した菌糸体の中で表1に示すものを10ディスクずつ接種し、14日間、25℃、100rpmの条件下で回転振とう培養した。なお、菌糸体を接種しなかった培地も、同様に回転振とう培養を行った。
(3)培養後、得られた培養物について、前記測定法により、ポリフェノール量および抗酸化能を評価した。結果を表1に示す。なお、表中「−」は未測定を示す。
(4)菌糸体を接種した各試料について、ポリフェノール値当りのトロロックス換算値を算出した。結果を図1に示す。
Example 1
(1) Quinoa seeds (from Yamanashi Prefecture) were washed with water and dried at 70 ° C. for 48 hours. A part of the washed quinoa seed was pulverized to 16 mesh or more with a coffee mill (NC-S85, manufactured by National Corporation). To a 300 ml Erlenmeyer flask, 2.5 g of the quinoa pulverized product and 100 ml of tap water were added, and autoclaved at 110 ° C. for 15 minutes to prepare a crushed liquid medium.
(2) The crushed liquid medium was inoculated with 10 disks each of the mycelium prepared in Production Example 1 shown in Table 1, and cultured for 14 days under conditions of 25 ° C. and 100 rpm. The culture medium not inoculated with the mycelium was similarly subjected to rotary shaking culture.
(3) After the culture, the obtained culture was evaluated for the amount of polyphenol and the antioxidant ability by the above-described measurement method. The results are shown in Table 1. In the table, “-” indicates unmeasured.
(4) The Trolox equivalent value per polyphenol value was calculated for each sample inoculated with the mycelium. The results are shown in FIG.

表1において抗酸化能が未測定の菌糸体は、キノア種子を資化できず生育しなかった菌糸体である。図1に、菌糸体が生育して得た培養物のポリフェノール当りの抗酸化能を示す。図1に示すように、菌糸体の種類に応じて培養物(乾燥重量)100g当り、ポリフェノール量が400〜900mgであり、抗酸化能が1000μmol以上の群(I)と、ポリフェノール量が200〜1000mgであり、抗酸化能が1000μmol以下の群(II)と、との2グループに大別された。群(I)に属するのは、ツクツクホウシタケNBRC 33259、スエヒロタケNBRC 4929、ツクツクホウシタケNBRC 33061、エノキタケNBRC 33210、キクラゲNBRC 100150、オオウズラタケNBRC 30339、およびマンネンタケYFH 05001からなる7菌株であった。群(II)では、ポリフェノール量と抗酸化活性とが比例しない傾向が観察された。   In Table 1, the mycelium whose antioxidant ability was not measured is a mycelium that could not assimilate quinoa seeds and did not grow. FIG. 1 shows the antioxidant capacity per polyphenol of a culture obtained by growing mycelium. As shown in FIG. 1, the amount of polyphenol is 400 to 900 mg per 100 g of culture (dry weight) depending on the type of mycelium, and the group (I) having an antioxidant capacity of 1000 μmol or more, and the amount of polyphenol is 200 to 200 mg. It was 1000 mg and was roughly divided into two groups, that is, the group (II) having an antioxidant capacity of 1000 μmol or less. Belonging to group (I) are Tsukukoku-shitake NBRC 33259, Suehiro-take NBRC 4929, Tsuku-tsuku-shitake NBRC 33061, Enokitake NBRC 33210, Cypridella NBRC 100150, Ozutake NBRC 30339, and Manntake 500 YH. In group (II), a tendency that the amount of polyphenol and the antioxidant activity were not proportional was observed.

(実施例2)
(1)100ml容三角フラスコに、実施例1で使用した水洗したキノア種子10g、水道水18.1ml(水分含量65%)を加え、121℃、15分間、オートクレーブ殺菌し、粒子固体培地を調製した。
(2)前記粒子固体培地に、製造例1で調製した菌糸体の中で表1に示すものを2ディスクずつ接種し、14日間、25℃のインキュベーターで静置培養した。なお、菌糸体を接種しなかった培地も、同様に静置培養を行った。
(3)培養後、得られた培養物について、実施例1と同様にしてポリフェノール量およびトロロックス換算値を算出した。結果を表1に示す。
(4)菌糸体を接種した各試料について、ポリフェノール値当りのトロロックス換算値を算出した。結果を図2に示す。
(Example 2)
(1) To a 100 ml Erlenmeyer flask, add 10 g of washed quinoa seeds used in Example 1 and 18.1 ml of tap water (water content 65%), autoclaved at 121 ° C. for 15 minutes to prepare a particle solid medium. did.
(2) Two particles of the mycelium prepared in Production Example 1 shown in Table 1 were inoculated into the particle solid medium, and statically cultured in an incubator at 25 ° C. for 14 days. In addition, the culture medium which was not inoculated with the mycelium was also subjected to static culture.
(3) After culturing, the amount of polyphenol and the converted Trolox were calculated in the same manner as in Example 1 for the obtained culture. The results are shown in Table 1.
(4) The Trolox equivalent value per polyphenol value was calculated for each sample inoculated with the mycelium. The results are shown in FIG.

表1から、マイタケ、アガリクス、ナメコ、ヤマブシタケなど、粉砕液体培地で生育しない菌糸体は、粒子固体培地でも生存することができない傾向があった。一方、ヒラタケYFH 060301、ヒラタケ信州(JA長野)、ヒラタケNBRC 6515、フクロタケNBRC 30010、カワラタケMAFF 420002、ヒラタケSKB 019は、粒子固体培養では、未接種培養物よりもポリフェノール産生量が少ないが、粉砕液体培地による培養物にはポリフェノールが産生される。なお、粉砕液体培地で生育した菌糸体について、得られた培養物のポリフェノール当りのトロロックス換算値を評価したところ、図2に示すように、ポリフェノール量の増加に伴いトロロックス換算値で示される抗酸化活性が増加する傾向が示された。   From Table 1, mycelium that did not grow on the pulverized liquid medium, such as maitake, agaricus, nameko, and yamabushitake, tended to be unable to survive even on the particle solid medium. On the other hand, oyster mushroom YFH 060301, oyster mushroom Shinshu (JA Nagano), oyster mushroom NBRC 6515, Fukurotake NBRC 30010, Kawaratake MAFF 420002, oyster mushroom SKB 019 have less polyphenol production in particle solid culture than uninoculated culture, Polyphenols are produced in the culture medium. In addition, when the mycelium grown in the pulverized liquid medium was evaluated for the Trolox equivalent value per polyphenol of the obtained culture, it is indicated by the Trolox equivalent value as the amount of polyphenol increases as shown in FIG. A tendency to increase antioxidant activity was shown.

(実施例3)
(1)キノア種子(山梨県産)を水洗し、70℃で48hr乾燥した。前記水洗キノア種子の一部をコーヒーミル(ナショナル株式会社製、NC−S85)で16メッシュ以上に粉砕した。100ml容三角フラスコに、前記キノア粉砕物10g、水道水17.6ml(水分含量65%)を加え、110℃、15分間、オートクレーブ殺菌し、粉砕固体培地を調製した。
(2)前記粉砕固体培地に、製造例1で調製した菌糸体の中で表2に示すものを2ディスクずつ接種し、14日間、25℃のインキュベーターで静置培養した。なお、菌糸体を接種しなかった培地も、同様に静置培養を行った。
(3)培養後、得られた培養物について、実施例1と同様にしてポリフェノール量および抗酸化能を評価した。結果を表2に示す。なお、表2には参考のため、実施例1の数値を併記した。
(4)菌糸体を接種した各試料について、ポリフェノール値当りのトロロックス換算値を算出した。結果を図3に示す。なお、図3には参考のため、実施例1の結果も併記した。
Example 3
(1) Quinoa seeds (from Yamanashi Prefecture) were washed with water and dried at 70 ° C. for 48 hours. A part of the washed quinoa seed was pulverized to 16 mesh or more with a coffee mill (NC-S85, manufactured by National Corporation). To a 100 ml Erlenmeyer flask, 10 g of the quinoa pulverized product and 17.6 ml of tap water (water content 65%) were added, and autoclaved at 110 ° C. for 15 minutes to prepare a crushed solid medium.
(2) The crushed solid medium was inoculated with 2 disks of the mycelium prepared in Production Example 1 shown in Table 2 and statically cultured in a 25 ° C. incubator for 14 days. In addition, the culture medium which was not inoculated with mycelium was also subjected to static culture.
(3) After culturing, the amount of polyphenol and antioxidant capacity of the obtained culture were evaluated in the same manner as in Example 1. The results are shown in Table 2. In Table 2, the numerical values of Example 1 are also shown for reference.
(4) The Trolox equivalent value per polyphenol value was calculated for each sample inoculated with the mycelium. The results are shown in FIG. In FIG. 3, the results of Example 1 are also shown for reference.

(実施例4)
(1)300ml容三角フラスコに、実施例1で使用した水洗したキノア種子2.5g、水道水100mlを加え、121℃、15分間、オートクレーブ殺菌し、粒子液体培地を調製した。
(2)前記粒子液体培地に、製造例1で調製した菌糸体の中で表2に示すものを10ディスクずつ接種し、14日間、25℃、100rpmの条件下で回転振とう培養した。なお、菌糸体を接種しなかった培地も、同様に回転振とう培養を行った。
(3)培養後、得られた培養物について、実施例1と同様にしてポリフェノール量およびトロロックス換算値を算出した。結果を表2に示す。表2において、「P」はポリフェノール量を、「抗酸化」は、トロロックス換算値を示す。
(4)菌糸体を接種した各試料について、ポリフェノール値当りのトロロックス換算値を算出した。結果を図3に併記した。
Example 4
(1) To a 300 ml Erlenmeyer flask, 2.5 g of washed quinoa seeds and 100 ml of tap water used in Example 1 were added, and autoclaved at 121 ° C. for 15 minutes to prepare a particle liquid medium.
(2) 10 particles of the mycelium prepared in Production Example 1 shown in Table 2 were inoculated into the particle liquid medium and cultured for 14 days under conditions of 25 ° C. and 100 rpm. The culture medium not inoculated with the mycelium was similarly subjected to rotary shaking culture.
(3) After culturing, the amount of polyphenol and the converted Trolox were calculated in the same manner as in Example 1 for the obtained culture. The results are shown in Table 2. In Table 2, “P” indicates the amount of polyphenol, and “antioxidant” indicates a Trolox equivalent value.
(4) The Trolox equivalent value per polyphenol value was calculated for each sample inoculated with the mycelium. The results are shown in FIG.

(実施例5)
(1)実施例2と同様にして粒子固体培地を調製した。
(2)前記粒子固体培地に、製造例1で調製した菌糸体の中で表2に示すものを2ディスクずつ接種し、14日間、25℃のインキュベーターで静置培養した。なお、菌糸体を接種しなかった培地も、同様に静置培養を行った。
(3)培養後、得られた培養物について、実施例1と同様にしてポリフェノール量およびトロロックス換算値を算出した。結果を表2に示す。
(4)菌糸体を接種した各試料について、ポリフェノール値当りのトロロックス換算値を算出した。結果を図3に併記した。
(Example 5)
(1) A particulate solid medium was prepared in the same manner as in Example 2.
(2) Two particles of the mycelium prepared in Production Example 1 shown in Table 2 were inoculated into the particle solid medium, and statically cultured in an incubator at 25 ° C. for 14 days. In addition, the culture medium which was not inoculated with mycelium was also subjected to static culture.
(3) After culturing, the amount of polyphenol and the converted Trolox were calculated in the same manner as in Example 1 for the obtained culture. The results are shown in Table 2.
(4) The Trolox equivalent value per polyphenol value was calculated for each sample inoculated with the mycelium. The results are shown in FIG.

表2から、培養物(乾燥重量)100gに換算した場合、最も多くのポリフェノールを産生したのは、オオウズラタケNBRC 30339による粒子液体培地を使用した培養物であった。同菌糸体を使用して粒子固体培地を使用した場合は288mg、粉砕固体培地を使用した場合は285mgであるから、粒子液体培地を使用した1390mgはこれらの約5倍多く、粉砕液体培地を使用した場合の661mgと比較しても約2倍も多い。また、抗酸化活性も、粒子液体培地にオオウズラタケNBRC 30339を接種することで、培養物に含まれる抗酸化活性は3789μmolと高値を示した。粉砕固体培地や粒子固体培地を使用する場合と比較して約4倍、粉砕液体培地を使用する場合と比較しても約3倍も抗酸化活性が高い。   From Table 2, when converted to a culture (dry weight) of 100 g, the most polyphenol was produced by a culture using a particulate liquid medium by Prunus NBRC 30339. When using a solid particle medium using the same mycelium, it is 288 mg, and when using a pulverized solid medium, it is 285 mg. Therefore, 1390 mg using a particle liquid medium is approximately five times as much as this, and a pulverized liquid medium is used. It is about twice as much as the 661 mg in this case. Moreover, as for the antioxidant activity, the antioxidant activity contained in the culture showed a high value of 3789 μmol by inoculating the powdered liquid medium with Prunus NBRC 30339. The antioxidant activity is about 4 times higher than that when a pulverized solid medium or a particulate solid medium is used, and about 3 times higher than when a pulverized liquid medium is used.

図3は、各培養物に含まれるポリフェノール当りのトロロックス換算値で示される抗酸化活性を、培地毎に区分した図である。培養物に含まれるポリフェノール量は、使用する培地によって相違し、固体培地よりも液体培地を使用する場合に、培養物(乾燥重量)100g当りのポリフェノール産生量が多い結果となった。ポリフェノール産生量を粉砕液体培地と粒子液体培地とで比較すると、粉砕液体培地>粒子固体培地となる菌糸体は、マンネンタケYFH 05001、エノキタケNBRC 5366、キクラゲNBRC 100150、ツクツクホウシタケNBRC 33061、エノキタケNBRC 30904、エノキタケNBRC 31862、ツクツクホウシタケNBRC 33259となった。一方、粒子固体培地>粉砕液体培地となる菌糸体は、スエヒロタケNBRC 4929、エノキタケNBRC 33210、オオウズラタケNBRC 30339であった。   FIG. 3 is a diagram in which the antioxidant activity indicated by the Trolox equivalent value per polyphenol contained in each culture is divided for each medium. The amount of polyphenol contained in the culture was different depending on the medium to be used. When a liquid medium was used rather than a solid medium, the amount of polyphenol produced per 100 g of the culture (dry weight) was large. When the amount of polyphenol produced is compared between the pulverized liquid medium and the particle liquid medium, the mycelium in which the pulverized liquid medium> particulate solid medium is: Mannentake YFH 05001, Enokitake NBRC 5366, Aedes NBRC 100150, Tsukutoku Hoshitake NBRC 33061, Enokitake NBRC 30904, Enokitake NBRC 31862 and Tsukutsuku Hoshitake NBRC 33259. On the other hand, the mycelium in which the solid particle medium> the pulverized liquid medium was Suehirotake NBRC 4929, Enokitake NBRC 33210, and Ozuratake NBRC 30339.

各菌糸体毎に使用する培地とポリフェノール量およびトロロックス換算値を評価し、ポリフェノール量に対する抗酸化活性(トロロックス換算値)の結果を図4〜図13に示す。スエヒロタケNBRC 4929を除いて、粉砕固体培地や粒子固体培地を使用する場合と比較して、粉砕液体培地や粒子液体培地を使用する場合にポリフェノール産生量が増加する傾向にあった。また、マンネンタケYFH 05001、キクラゲNBRC 100150、ツクツクホウシタケNBRC 33061、オオウズラタケNBRC 30339およびツクツクホウシタケNBRC 33259に関しては、何れの培地で培養した場合も、ポリフェノール量の増加に比例して抗酸化活性が増加する傾向にあった。一方、エノキタケNBRC 5366、スエヒロタケNBRC 4929、エノキタケNBRC 30904、エノキタケNBRC 31862、エノキタケNBRC 33210は、ポリフェノール量と抗酸化活性とが比例しない傾向にあり、使用する培地によって産生されるポリフェノール種が異なることが示唆された。   The culture medium used for each mycelium, the amount of polyphenol, and the Trolox equivalent value are evaluated, and the results of the antioxidant activity (the Trolox equivalent value) with respect to the polyphenol amount are shown in FIGS. With the exception of Suehirotake NBRC 4929, the amount of polyphenol produced tended to increase when a pulverized liquid medium or a particle liquid medium was used compared to when a pulverized solid medium or a particle solid medium was used. In addition, with respect to the cultivated bamboo shoot YFH 05001, the jellyfish NBRC 100150, the bamboo shoot bamboo NBRC 33061, the quail bamboo NBRC 30339 and the bamboo shoot bamboo NBRC 33259, the antioxidant activity tends to increase in proportion to the increase in the amount of polyphenol. It was in. On the other hand, Enokitake NBRC 5366, Suenotake NBRC 4929, Enokitake NBRC 30904, Enokitake NBRC 31862, and Enokitake NBRC 33210 tend to have different proportions of polyphenol and antioxidant activity, and the type of polyphenol produced differs depending on the medium used. It was suggested.

(実施例6)
表2に示す菌糸体の中から、抗酸化活性値が高い培養物として、オオウズラタケNBRC 30339、スエヒロタケNBRC 4929、エノキタケNBRC 33210、および未接種の粒子液体培養による培養物を用いてTLCを行った。標準物質として、ケンフェロールとクエルセチンとを使用した。UV照射による検出後のクロマトグラムを図14に示す。また、DPPH/MeOH溶液を噴霧したクロマトグラムを図15に示す。図14、図15において、Sは標準物質を、Bは未接種の培養物を、1はオオウズラタケNBRC 30339の培養物を、2はスエヒロタケNBRC 4929の培養物を、3はエノキタケNBRC 33210の培養物を示す。
(Example 6)
From the mycelium shown in Table 2, TLC was carried out using a culture of Prunus NBRC 30339, Suhirotake NBRC 4929, Enokitake NBRC 33210, and an uninoculated particle liquid culture as a culture having a high antioxidant activity value. Kaempferol and quercetin were used as standard substances. The chromatogram after detection by UV irradiation is shown in FIG. Further, FIG. 15 shows a chromatogram obtained by spraying the DPPH / MeOH solution. 14 and 15, S is a standard substance, B is an uninoculated culture, 1 is a culture of Prunus NBRC 30339, 2 is a culture of Suirotake NBRC 4929, and 3 is a culture of Enokitake NBRC 33210 Indicates.

図14より、未接種の培養物には、クエルセチンが含まれるが、ケンフェロールの含有量は極めて少ない。一方、オオウズラタケNBRC 30339とスエヒロタケNBRC 4929の培養物には、ケンフェロールとクエルセチンとが存在し、エノキタケNBRC 33210の培養物にはクエルセチチンが含まれていた。
図15より、未接種の培養物にはケンフェロールとクエルセチンの何れも含まれていないが、オオウズラタケNBRC 30339とスエヒロタケNBRC 4929の培養物には、ケンフェロールが存在した。しかしながら、いずれの培養物にもクエルセチンは含まれていなかった。一方、ケンフェロールおよびクエルセチン以外の部分にスポットに抗酸化反応が検出されたことから、ケンフェロールとクエルセチン以外の抗酸化物質が産生されたと考えられる。なお、キノア種子にはケンフェロール配糖体が存在しているため、オオウズラタケNBRC 30339とスエヒロタケNBRC 4929の培養により、本来含まれていたケンフェロール配糖体が、発酵により加水分解されて糖が切り離され、ケンフェロールのアグリコンが形成されたと考えられる。
From FIG. 14, the uninoculated culture contains quercetin, but the content of kaempferol is very low. On the other hand, kaempferol and quercetin were present in the culture of Prunus NBRC 30339 and Suhirotake NBRC 4929, and the culture of Enokitake NBRC 33210 contained quercetin.
According to FIG. 15, the uninoculated culture contains neither kaempferol nor quercetin, but kaempferol was present in the culture of Prunus NBRC 30339 and Suhirotake NBRC 4929. However, none of the cultures contained quercetin. On the other hand, since an antioxidant reaction was detected in spots other than kaempferol and quercetin, it is considered that an antioxidant other than kaempferol and quercetin was produced. Since quinoa seeds contain kaempferol glycosides, the kaempferol glycosides originally contained in the quinoa seed NBRC 30339 and Suehirotake NBRC 4929 are hydrolyzed by fermentation and separated from the sugar. It is considered that kaempferol aglycone was formed.

(実施例7)
実施例4に従いキノア粒子液体培地を調製し、オオウズラタケNBRC 30339、スエヒロタケNBRC 4929、エノキタケNBRC 33210の菌糸体をそれぞれ10ディスク仕込み、温度25℃、100rpmで14日間、回転振とう培養し、実施例4と同様にしてポリフェノール量および抗酸化活性を測定した。結果を表4に示す。
次いで、キノア粒子液体培養物を凍結乾燥し、コーヒーミルで粉砕した。
実施例1のキノア種子に代えてこの粉砕物を使用し、実施例1と同様にして粉砕液体培地を調製した。具体的には、コーヒーミル粉砕物2.5g、水道水100mlを乾熱滅菌済み300ml容三角フラスコに入れ、オートクレーブで110℃、15分間滅菌し、放冷した。このように調製した粉砕液体培地に、実施例1と同様にしてオオウズラタケNBRC 30339、スエヒロタケNBRC 4929、エノキタケNBRC 33210の菌糸体を10ディスク接種して培養し、培養物のポリフェノール量および抗酸化活性を測定した。このハイブリッド培養の結果を表3に示す。
表3に示すように、オオウズラタケ、スエヒロタケ、エノキタケの菌糸体は何れもハイブリッド培養により生育することができた。また、スエヒロタケおよびエノキタケは、ハイブリッド培養によりポリフェノール量および抗酸化活性を増加させることができた。
(Example 7)
A quinoa particle liquid medium was prepared in accordance with Example 4, 10 mycelia of Ozutake NBRC 30339, Suhirotake NBRC 4929, and Enokitake NBRC 33210 were each prepared and cultured with shaking at a temperature of 25 ° C. and 100 rpm for 14 days. The amount of polyphenol and antioxidant activity were measured in the same manner as described above. The results are shown in Table 4.
The quinoa particle liquid culture was then lyophilized and ground in a coffee mill.
This pulverized product was used in place of the quinoa seeds of Example 1, and a pulverized liquid medium was prepared in the same manner as in Example 1. Specifically, 2.5 g of coffee mill pulverized product and 100 ml of tap water were put into a 300 ml Erlenmeyer flask that had been sterilized by dry heat, sterilized in an autoclave at 110 ° C. for 15 minutes, and allowed to cool. In the same manner as in Example 1, the crushed liquid medium thus prepared was inoculated with 10 discs of mycelia of Prunus NBRC 30339, Suhirotake NBRC 4929, Enokitake NBRC 33210, and the amount of polyphenols and antioxidant activity of the culture were measured. It was measured. The results of this hybrid culture are shown in Table 3.
As shown in Table 3, all of the mycelium of Oozutake, Suhirotake and Enokitake were able to grow by hybrid culture. Moreover, Suehirotake and Enokitake were able to increase the amount of polyphenol and antioxidant activity by hybrid culture.

(実施例8)
モルトエキス10g、酵母エキス4g、ショ糖10g、水1リットルからなるMYS液体培地100mlにオオウズラタケNBRC 30339、スエヒロタケNBRC 4929、エノキタケNBRC 33210の菌糸体をそれぞれ10ディスク接種し、温度25℃、100rpmで14日間、回転振とう培養した。次いで、培養物を2日間、凍結乾燥処理を行い、粉末化した。なお、オオウズラタケおよびエノキタケの培養物は、凍結乾燥処理によって十分に乾燥しなかったため、シャーレに移して80℃で1日乾燥処理を行い、粉砕した。次いで粉砕物を抽出溶媒(メタノール:水=2:1(v/v))10mlで抽出した。抽出物について、実施例1と同様にしてポリフェノールおよび抗酸化活性を測定した。結果を表4に示す。また、菌糸体を添加しない培地についても同様に操作し、ポリフェノール量と抗酸化活性を測定した。また、MYS液体培地に代えて実施例4で調製したキノア粒子液体培養を使用し、オオウズラタケNBRC 30339、スエヒロタケNBRC 4929、エノキタケNBRC 33210の菌糸体をそれぞれ10ディスク接種し、温度25℃、100rpmで14日間、回転振とう培養し、実施例4と同様にしてポリフェノール量および抗酸化活性を測定した。結果を表4に示す。
表4に示すように、キノア粒子液体培地で培養した場合は、菌糸体の接種によりポリフェノール量および抗酸化活性が上昇した。一方、MYS培地を使用してスエヒロタケNBRC 4929、エノキタケNBRC 33210を培養すると、ポリフェノール量と抗酸化活性が未接種よりも低下した。このことは、菌糸体の生育に際してポリフェノールが消費されることを意味する。消費の程度は、菌糸体によって相違し、オオウズラタケNBRC 30339は生育に際しポリフェノールの消費量が少ないことが判明した。生育の際のポリフェノール消費量の相違により、培養液に含まれるポリフェノール量が相違し、オオウズラタケNBRC 30339の培養によりポリフェノール含有量が高く、抗酸化活性に優れる培養物が得られる一因と推定される。
(Example 8)
Inoculate 10 discs of mycelia of Ozuratake NBRC 30339, Suhirotake NBRC 4929 and Enokitake NBRC 33210 into 100 ml of MYS liquid medium consisting of 10 g of malt extract, 4 g of yeast extract, 10 g of sucrose and 1 liter of water, and 14 at a temperature of 25 ° C. and 100 rpm. Rotating shake culture for days. The culture was then lyophilized for 2 days and powdered. The culture of Prunus edulis and Enokitake was not sufficiently dried by lyophilization treatment, so it was transferred to a petri dish, dried at 80 ° C. for 1 day, and pulverized. Subsequently, the pulverized product was extracted with 10 ml of an extraction solvent (methanol: water = 2: 1 (v / v)). For the extract, polyphenol and antioxidant activity were measured in the same manner as in Example 1. The results are shown in Table 4. In addition, the same procedure was applied to a medium to which no mycelium was added, and the amount of polyphenol and antioxidant activity were measured. In addition, using the quinoa particle liquid culture prepared in Example 4 in place of the MYS liquid medium, 10 discs of mycelia of Ozutake NBRC 30339, Suhirotake NBRC 4929, Enokitake NBRC 33210 were inoculated, respectively, at a temperature of 25 ° C. and 100 rpm at 14 rpm. The culture was subjected to rotary shaking for one day, and the amount of polyphenol and antioxidant activity were measured in the same manner as in Example 4. The results are shown in Table 4.
As shown in Table 4, when cultivated in a quinoa particle liquid medium, the amount of polyphenol and antioxidant activity increased by inoculation of mycelium. On the other hand, when Shirohirotake NBRC 4929 and Enokitake NBRC 33210 were cultured using MYS medium, the amount of polyphenol and the antioxidant activity were lower than those of uninoculated. This means that polyphenols are consumed during the growth of mycelium. The degree of consumption was different depending on the mycelium, and it was found that the amount of polyphenol consumed was small in Ozuratake NBRC 30339 during growth. Due to the difference in polyphenol consumption during growth, the amount of polyphenol contained in the culture solution is different, and it is estimated that culturing of Prunus NBRC 30339 has a high polyphenol content and is responsible for obtaining a culture excellent in antioxidant activity. .

(実施例9)
実施例4と同様にしてキノア粒子液体培地を調製した。この培地に菌糸体としてオオウズラタケNBRC 30339、スエヒロタケNBRC 4929、エノキタケNBRC 33210を使用し、菌糸体の接種量を、1ディスク(キノアの0.012質量%)、5ディスク(キノアの0.06質量%)、10ディスク(キノアの0.12質量%)、20ディスク(キノアの0.24質量%)に変更した以外は実施例4と同様に操作した。培養液のポリフェノール量および抗酸化活性を測定した。結果を表5に示す。
表5に示すように、スエヒロタケNBRC 4929およびオオウズラタケNBRC 30339では、キノアの0.012質量%の菌糸体を添加した培地で、ポリフェノール量が高値を示し、抗酸化活性も高い傾向が観察された。一方、エノキタケNBRC 33210は、接種する菌糸量とポリフェノール産生量との間に大きな相関は観察されず、キノアの0.012〜0.24質量%の間で得られた培養物中のポリフェノール量および抗酸化活性は、略近似する値であった。なお、培養終了後の菌糸体の生育状況の概観に大きな相違は観察されなかった。菌糸体の種類によって相違するが、接種量が多いと、ポリフェノール量および抗酸化活性が培養終了前に最大値を迎える可能性があると推定された。
Example 9
A quinoa particle liquid medium was prepared in the same manner as in Example 4. As the mycelium in this medium, Prunus NBRC 30339, Suhirotake NBRC 4929, and Enokitake NBRC 33210 are used. ) Operation was carried out in the same manner as in Example 4 except that 10 disks (0.12% by mass of quinoa) and 20 disks (0.24% by mass of quinoa) were used. The amount of polyphenol and the antioxidant activity of the culture broth were measured. The results are shown in Table 5.
As shown in Table 5, in Shirohirotake NBRC 4929 and Ozuuratake NBRC 30339, a tendency was observed in which the amount of polyphenol was high and the antioxidant activity was also high in a medium to which 0.012% by mass of quinoa mycelium was added. On the other hand, for Enokitake NBRC 33210, no significant correlation was observed between the amount of mycelium to be inoculated and the amount of polyphenol produced, and the amount of polyphenol in the culture obtained between 0.012 and 0.24% by mass of quinoa and Antioxidant activity was a value approximately approximated. In addition, the big difference was not observed in the appearance of the growth state of the mycelium after completion | finish of culture | cultivation. Although it differs depending on the type of mycelium, it was estimated that the amount of polyphenol and the antioxidant activity might reach the maximum values before the end of the culture when the amount of inoculation was large.

(実施例10)
キノア種子の種皮を精米機で除去して脱皮キノア種子を調製し、この脱皮キノア種子を使用した以外は実施例4と同様にして脱皮キノア粒子液体培地を調製した。この脱皮キノア粒子液体培地に、実施例4と同様にしてオオウズラタケNBRC 30339、スエヒロタケNBRC 4929、エノキタケNBRC 33210を培養し、培養物に含まれるポリフェノール量および抗酸化活性を測定した。結果を表6に示す。なお、脱皮処理せずに培養し、同様にポリフェノール量および抗酸化活性を測定した。この結果も表6に記載する。
脱皮キノアを使用すると菌糸体を接種しない培地のみ、ポリフェノール量および抗酸化活性が低下した。一方、オオウズラタケNBRC 30339およびスエヒロタケNBRC 4929は、キノアの脱皮処理によりポリフェノール量および抗酸化活性が上昇した。なお、エノキタケNBRC 33210は、脱皮によりポリフェノール量が増加したが、抗酸化活性は低下した。なお、オオウズラタケNBRC 30339の培養物をTLC分析してケンフェロールを検出したところ、脱皮によりケンフェロール量が増加することが確認された。従って、脱皮によりケンフェロールの生成が促進され、抗酸化能が増加すると推定された。なお、キノアの種皮にはサポニンが含まれており、脱皮処理によりサポニンが除去される可能性がある。キノア種子に含まれるサポニンは苦味があるため、サポニンを除去し、かつポリフェノール量および抗酸化活性の高い培養液が得られる脱皮キノアを使用する培養は、食品や化粧品製造において有用である。
(Example 10)
The seed coat of the quinoa seed was removed with a rice mill to prepare a molted quinoa seed, and a molted quinoa particle liquid medium was prepared in the same manner as in Example 4 except that this molted quinoa seed was used. In this peeled quinoa particle liquid medium, Prunus NBRC 30339, Suhirotake NBRC 4929, Enokitake NBRC 33210 were cultured in the same manner as in Example 4, and the amount of polyphenol contained in the culture and antioxidant activity were measured. The results are shown in Table 6. In addition, it culture | cultivated without molting process and measured the amount of polyphenols and antioxidant activity similarly. The results are also shown in Table 6.
When molting quinoa was used, the amount of polyphenol and antioxidant activity decreased only in the medium not inoculated with mycelium. On the other hand, the amount of polyphenol and antioxidative activity of Prunus NBRC 30339 and Shirohirotake NBRC 4929 increased by quinoa molting treatment. Enokitake NBRC 33210 increased the amount of polyphenol by molting, but its antioxidant activity decreased. When kaempferol was detected by TLC analysis of the culture of Prunus NBRC 30339, it was confirmed that the amount of kaempferol was increased by molting. Therefore, it was estimated that molting promoted the production of kaempferol and increased the antioxidant capacity. Note that quinoa seed coat contains saponin, and saponin may be removed by molting. Since saponin contained in quinoa seeds has a bitter taste, culturing using molted quinoa from which saponin is removed and a culture solution having a high amount of polyphenol and antioxidant activity is obtained is useful in food and cosmetic production.

(実施例11)
実施例10で脱皮したキノア種子を更に精白処理した。山本タテ形精米機ライスパルを用いて、キノア粒子を未精米を0とし、精白度を1から3の3段階で処理した。各キノア粒子を用いて、実施例4と同様にしてキノア粒子液体培地を調製し、オオウズラタケNBRC 30339を10ディスク接種し、25℃、100rpmで14日間回転振とう培養を行った。培養後の培養液に含まれるポリフェノール量および抗酸化活性を測定した。結果を表7に示す。表7における「増加量」とは、未接種の各精製度の結果との差分である。なお、キノア粒子表面を、デジタルマイクロスコープを用いて観察したところ、精白度1の表面は未処理物と大きな相違は観察されなかったが、精白度2では粒子表面の凹凸が殆どなくなり、精白度3では、粒子自体が小径化した。また、粒子液体培地には粒子が確認できるが、培養を開始すると、精白度にかかわらず培養終了時には粒子が存在せず白い懸濁液となっていた。
表7に示すように、キノア粒子液体培地のポリフェノール量および抗酸化活性は、キノア精白度が上昇するにつれ低下した。一方、オオウズラタケNBRC 30339の培養物は、キノアを精白度0〜2に処理するよりも精白度3とする場合に抗酸化活性が上昇した。
(Example 11)
The quinoa seeds moulted in Example 10 were further refined. Using a Yamamoto vertical rice mill rice pal, the quinoa particles were treated in three stages from 0 to 1, and the milling degree from 1 to 3. Using each quinoa particle, a quinoa particle liquid medium was prepared in the same manner as in Example 4, and 10 discs of Ozutake NBRC 30339 were inoculated, and cultured with shaking at 25 ° C. and 100 rpm for 14 days. The amount of polyphenol and the antioxidant activity contained in the culture solution after the culture were measured. The results are shown in Table 7. The “increase amount” in Table 7 is the difference from the result of each unpurified degree of purification. When the surface of the quinoa particle was observed using a digital microscope, the surface with a whiteness degree of 1 was not significantly different from that of the untreated material. In No. 3, the particle itself was reduced in diameter. In addition, particles can be confirmed in the particle liquid medium, but when culturing was started, particles were not present at the end of the culturing regardless of the degree of whiteness and became a white suspension.
As shown in Table 7, the amount of polyphenol and antioxidant activity of the quinoa particle liquid medium decreased as the quinoa whitening degree increased. On the other hand, in the culture of Prunus NBRC 30339, the antioxidant activity increased when the quinoa was treated at a milling degree of 3 compared with the milling degree of 0-2.

(実施例12)
キノア種子に代えて、黒米、赤米を使用して粒子固体培地を調製した。赤米の最終水分含量が55%(w/w)、黒米の最終水分含量が50%(w/w)となるように水道水を添加し、赤米は115℃にて、黒米は120℃にてそれぞれ15分間オートクレーブで殺菌した後放冷した。この培地にオオウズラタケNBRC 30339を2ディスク接種し、25℃で14日間静置培養を行った。なお、培養7日目に培地の撹拌を行った。培養液のポリフェノール量と抗酸化活性を測定した。結果を表8に示す。黒米、赤米共にこれを培地に使用してオオウズラタケを培養することで、ポリフェノール量および抗酸化活性が増加した。特に、赤米の増加量が優れることが判明した。
(Example 12)
A particle solid medium was prepared using black rice and red rice instead of quinoa seeds. Tap water is added so that the final moisture content of red rice is 55% (w / w) and the final moisture content of black rice is 50% (w / w). Red rice is 115 ° C and black rice is 120 ° C. Were sterilized in an autoclave for 15 minutes, and then allowed to cool. This medium was inoculated with 2 discs of Prunus NBRC 30339 and statically cultured at 25 ° C. for 14 days. The medium was agitated on the seventh day of culture. The amount of polyphenol and antioxidant activity of the culture broth were measured. The results are shown in Table 8. The amount of polyphenols and antioxidant activity increased by cultivating Ootake-ratake using both black and red rice as a medium. In particular, it has been found that the increase in red rice is excellent.

本発明によれば、キノア種子や有色素米などの穀類を資化させてポリフェノールを産生させることができる。しかも、使用する培地によってポリフェノール量やその抗酸化活性を変化させることができる。粉砕液体培養やハイブリッド培養によって抗酸化活性が高く、ポリフェノール含有量の高い培養物を製造することができ、有用である。   According to the present invention, polyphenols can be produced by assimilating cereals such as quinoa seeds and pigmented rice. Moreover, the amount of polyphenol and its antioxidant activity can be changed depending on the medium used. A culture with high antioxidant activity and a high polyphenol content can be produced by pulverized liquid culture or hybrid culture, which is useful.

Claims (10)

キノア種子および有色素米からなる群から選択される穀類と、前記穀類の1.2〜100質量倍の水とを含む培地でエノキタケ、スエヒロタケ、キクラゲ、ツクツクホウシタケ、およびオオウズラタケのいずれか1種以上に由来する担子菌及び/又は子嚢菌の菌糸体を培養し、
前記担子菌及び/又は子嚢菌の菌糸体に前記穀類を資化させ、
培養液にポリフェノールを産生させることを特徴とする、ポリフェノール含有培養物の製造方法。
A medium containing cereals selected from the group consisting of quinoa seeds and pigmented rice and water that is 1.2 to 100 times the mass of the cereals, any one or more of enokitake, suhirohirotake, jellyfish, tsukutsukoshitake, and ozuzutake Culturing mycelium of basidiomycetes and / or ascomycetes derived from
Assimilating the cereals to the mycelium of the basidiomycetes and / or ascomycetes,
A method for producing a polyphenol-containing culture, characterized in that polyphenol is produced in a culture solution.
前記穀類は、未粉砕の穀類、穀類の脱皮物、および穀類またはその脱皮物の粉砕物とからなる群から選択される1種であることを特徴とする、請求項1記載のポリフェノール含有培養物の製造方法。   2. The polyphenol-containing culture according to claim 1, wherein the cereal is one selected from the group consisting of unground cereals, cereal sheds, and cereals or crushed sheds thereof. Manufacturing method. 前記未粉砕の穀類またはその穀類の脱皮物と、その20〜100質量倍の水と含む培地で担子菌及び/又は子嚢菌の菌糸体を培養し、
得られた培養物を乾燥し及び粉砕して粉砕物を得て、
得られた粉砕物その20〜100質量倍の水と含む培地で担子菌及び/又は子嚢菌の菌糸体を培養することを特徴とする、請求項2記載のポリフェノール含有培養物の製造方法。
The cultured with cereal or molting of the cereals unmilled mycelia of Basidiomycetes and / or child ascomycete in medium containing the 20 to 100 times by mass of water,
The obtained culture is dried and pulverized to obtain a pulverized product,
Culturing mycelia of Basidiomycetes and / or child ascomycete in a medium containing the resulting pulverized product and its 20 to 100 times by mass of water, characterized in, The process according to claim 2 polyphenol content culture according .
前記菌糸体が、エノキタケNBRC 5366、エノキタケNBRC 30904、エノキタケNBRC 31862、エノキタケNBRC 33210、スエヒロタケNBRC 4929、キクラゲNBRC 100150、オオウズラタケNBRC 30339、ツクツクホウシタケNBRC 33061およびツクツクホウシタケNBRC 33259からなる群から選択される1種以上である、請求項1〜3のいずれか1項に記載のポリフェノール含有培養物の製造方法。   The mycelium is selected from the group consisting of Enokitake NBRC 5366, Enokitake NBRC 30904, Enokitake NBRC 31862, Enokitake NBRC 33210, Suhirotake NBRC 4929, Cypridina NBRC 100150, Ozuuratake NBRC 30339 The manufacturing method of the polyphenol containing culture of any one of Claims 1-3 which is a seed | species or more. 前記菌糸体の接種量は、前記穀類の0.001〜0.2質量%である、請求項1〜4のいずれか1項に記載のポリフェノール含有培養物の製造方法。   The method for producing a polyphenol-containing culture according to any one of claims 1 to 4, wherein an inoculation amount of the mycelium is 0.001 to 0.2% by mass of the cereal. キノア種子と、エノキタケNBRC 5366、エノキタケNBRC 30904、エノキタケNBRC 31862、エノキタケNBRC 33210、スエヒロタケNBRC 4929、キクラゲNBRC 100150、オオウズラタケNBRC 30339、ツクツクホウシタケNBRC 33061およびツクツクホウシタケNBRC 33259からなる群から選択される1種以上の菌糸体との培養物であって、
ポリフェノール量が、前記培養物(乾燥重量)100g当り、没食子酸換算で400mg以上であることを特徴とする、ポリフェノール含有培養物。
Quinoa seeds, Enokitake NBRC 5366, Enokitake NBRC 30904, Enokitake NBRC 31862, Enokitake NBRC 33210, Suirotake NBRC 4929, Cypridina NBRC 100150, Ozuuratake NBRC 30339 A culture with the above mycelium,
A polyphenol-containing culture, wherein the amount of polyphenol is 400 mg or more in terms of gallic acid per 100 g of the culture (dry weight).
前記ポリフェノール含有培養物の抗酸化活性が、培養物(乾燥重量)100g当り、トロロックス換算値で1000μmol以上であることを特徴とする、請求項6記載のポリフェノール含有培養物。   The polyphenol-containing culture according to claim 6, wherein the antioxidant activity of the polyphenol-containing culture is 1000 µmol or more in terms of Trolox per 100 g of the culture (dry weight). 前記ポリフェノール含有培養物の抗酸化活性が、培養物(乾燥重量)100g当り、トロロックス換算値で400を超え1000μmol未満であることを特徴とする、請求項6記載のポリフェノール含有培養物。   The polyphenol-containing culture according to claim 6, wherein the antioxidant activity of the polyphenol-containing culture is more than 400 and less than 1000 µmol in terms of Trolox per 100 g of the culture (dry weight). 有色素米と、エノキタケNBRC 5366、エノキタケNBRC 30904、エノキタケNBRC 31862、エノキタケNBRC 33210、スエヒロタケNBRC 4929、キクラゲNBRC 100150、オオウズラタケNBRC 30339、ツクツクホウシタケNBRC 33061およびツクツクホウシタケNBRC 33259からなる群から選択される1種以上の菌糸体との培養物であって、
ポリフェノール量が、前記培養物(乾燥重量)100g当り、没食子酸換算で300mg以上であることを特徴とする、ポリフェノール含有培養物。
Pigmented rice, Enokitake NBRC 5366, Enokitake NBRC 30904, Enokitake NBRC 31862, Enokitake NBRC 33210, Suirotake NBRC 4929, Cypridina NBRC 100150, Ozuuratake NBRC 30339 A culture with mycelium of more than species,
A polyphenol-containing culture, wherein the amount of polyphenol is 300 mg or more in terms of gallic acid per 100 g of the culture (dry weight).
前記ポリフェノール含有培養物の抗酸化活性が、培養物(乾燥重量)100g当り、トロロックス換算値で1500μmol以上であることを特徴とする、請求項9記載のポリフェノール含有培養物。
10. The polyphenol-containing culture according to claim 9, wherein the antioxidant activity of the polyphenol-containing culture is 1500 μmol or more in terms of Trolox per 100 g of the culture (dry weight).
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