JP6592854B2

JP6592854B2 - ｃ−ＭＹＣ遺伝子転座の判定方法

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Publication number: JP6592854B2
Application number: JP2017196492A
Authority: JP
Inventors: 玲一迫
Original assignee: 玲一迫
Priority date: 2017-10-10
Filing date: 2017-10-10
Publication date: 2019-10-23
Anticipated expiration: 2037-10-10
Also published as: JP2019070571A

Description

本発明は、ｃ−ＭＹＣ遺伝子転座の判定方法に関する。

従来、免疫組織化学の結果については抗原発現の反応性（immunoreactivity：陽性、弱陽性、陰性等）と、それらが面積的に占める大まかな割合（proportion）との２要素を病理医が個々に自分の文章で記載しており、双方を共に示すための共通した表記方法がなかった。このため、数値という絶対値で結果を示すことが多い他の医学データと異なり、データの相互比較は行われていなかった。
例えば、骨髄、血液およびリンパ節からなる群から選択される試料中の血液系悪性腫瘍由来の悪性細胞を同定するためのインビトロ法として、悪性細胞における１型５−ＨＴＲおよび／または２型５−ＨＴＲの発現細胞を免疫細胞化学によって検出する方法が開示されている（例えば、特許文献１参照）。

特表２０１７−５２６６２９号公報

特許文献１の方法においても、免疫組織化学の結果の表記方法は示されておらず、病理医が個々に抗原発現の反応性を陽性と陰性の２種類に分け、その面積比率を感覚的にとらえて悪性細胞を言語で同定することから、同定の精度や再現性、イメージ想定が悪いという課題があった。

本発明は、このような従来の課題に着目してなされたもので、ｃ−ＭＹＣ遺伝子の転座の陰性・高確率な陽性の判定を容易にするｃ−ＭＹＣ遺伝子転座の判定方法を提供することを目的とする。

上記目的を達成するために、本発明に関する抗原発現の反応性の表記物は、免疫組織化学による抗原発現の所定の反応性を示す反応性記号と、前記所定の反応性の他の反応性に対する面積比率を示す比率記号とが関連付けて表示された表示記号を有することを、特徴とする。

本発明に関する抗原発現の反応性の表記物は、ｃ−ｍｙｃ蛋白の免疫組織化学による抗原発現の反応性を少なくとも陽性と弱陽性と陰性との３種類に分類したとき各種類の反応性を示す反応性記号と、各種類の反応性の他の反応性に対する面積比率を示す比率記号とが関連付けて表示された表示記号を有することが好ましい。

抗原発現の反応性の分類は、３種類のほか、４種類または５種類以上であってもよい。４種類の場合、抗原発現の所定の反応性を示す反応性記号としては、例えば、陽性を「＋」、弱陽性を「（ｗｅａｋ）＋」、非常に弱い陽性を「（ｖｅｒｙｗｅａｋ）＋」、陰性を「−」で示す記号が挙げられる。なお、「陽性」は、通常強度の陽性を意味する。

面積比率を示す比率記号としては、例えば、左側に反応性記号で示される反応性が６０％〜７０％のとき「＞」、左側に反応性記号で示される反応性が７５％〜９０％のとき「＞＞」、左側に反応性記号で示される反応性が９９％以上のとき「＞＞＞」で示す記号が挙げられる。

本発明において、表記物は、記号を表示可能ないかなるものであってもよく、例えば、印刷物その他の紙面、黒板、モニター画像、スライド投射画像などが挙げられる。
本発明に関する抗原発現の反応性の表記物を用いることにより、ｃ−ＭＹＣ遺伝子の転座の陰性・陽性の判定を容易にすることができる。

本発明に係るｃ−ＭＹＣ遺伝子転座の判定方法は、ｃ−ｍｙｃ蛋白の免疫組織化学による抗原発現の反応性を少なくとも陽性と弱陽性と陰性との３種類に分類し、観察領域に占める各種類の反応性の面積比率を求め、各種類の反応性を示す反応性記号と、各種類の反応性の他の種類の反応性に対する面積比率を示す比率記号とが関連付けて表示された表示記号を被表記物に表示して前述の抗原発現の反応性の表記物を作成し、前記陽性が前記観察領域の３０〜３５％、前記弱陽性が前記観察領域の３０〜３５％、前記陰性が前記観察領域の３０〜３５％を占めるとき、ｃ−ＭＹＣ遺伝子の転座が陰性であると判定することを特徴とする。

本発明に係る他のｃ−ＭＹＣ遺伝子転座の判定方法は、ｃ−ｍｙｃ蛋白の免疫組織化学による抗原発現の反応性を少なくとも陽性と弱陽性と陰性との３種類に分類し、観察領域に占める各種類の反応性の面積比率を求め、各種類の反応性を示す反応性記号と、各種類の反応性の他の種類の反応性に対する面積比率を示す比率記号とが関連付けて表示された表示記号を被表記物に表示して前述の抗原発現の反応性の表記物を作成し、前記陽性が前記観察領域の７５〜９０％であるとき、ｃ−ＭＹＣ遺伝子の転座が陽性になり得る確率が高いと判定することを特徴とする。

本発明に係るｃ−ＭＹＣ遺伝子転座の判定方法は、本発明者がｃ−ｍｙｃ蛋白の免疫組織化学による抗原発現の反応性を陽性と弱陽性と陰性との３種類に分類して臨床データを分析することにより、経験的に得られた判定方法である。
本発明に係るｃ−ＭＹＣ遺伝子転座の判定方法により、所定の条件を満たす場合には、精密な検査を行わずに、高い精度でｃ−ＭＹＣ遺伝子の転座の陰性・陽性の判定が可能となる。
なお、本発明において、「観察領域」は、撮影された顕微鏡写真全体でも、範囲を特定した一部の領域であってもよい。

本発明によれば、ｃ−ＭＹＣ遺伝子の転座の陰性・高確率な陽性の判定を容易にするｃ−ＭＹＣ遺伝子転座の判定方法を提供することができる。

本発明の実施の形態の抗原発現の反応性の表記物の表記方法を示すフローチャートである。病変部生検を免疫組織化学的に染色した４つの顕微鏡写真である。

以下、図面に基づき、本発明の実施の形態について説明する。
図１は、本発明の実施の形態の抗原発現の反応性の表記物の表記方法を示すフローチャートである。図２は、病変部生検を免疫組織化学的に染色した４つの顕微鏡写真である。

悪性腫瘍由来の悪性細胞や正常ないし病的細胞における各種蛋白質を同定するため、病変部生検を免疫組織化学的に染色した顕微鏡写真から抗原発現の反応性が陽性か陰性かを判定することが行われている。病変部生検の顕微鏡写真の準備と、抗原発現の反応性の評価は以下の方法で行う。

まず、病変部位を採取し、ホルマリン固定後に型の如く、パラフィン切片を作製する。次に、抗ｃ−ｍｙｃ抗体を一次抗体として用い、パラフィン切片を免疫組織化学的に染色する。染色標本を顕微鏡で観察して、ｃ−ｍｙｃ蛋白の免疫組織化学による抗原発現の反応性を表示記号により表記し、接眼１０倍・対物４０倍レンズの光学顕微鏡で観察する。

抗原発現の反応性の表示記号から反応性の評価を行い、ｃ−ＭＹＣ遺伝子の転座の、悪性細胞におけるｃ−ｍｙｃ蛋白の発現の程度を陽性、弱陽性、非常に弱い陽性（弱陽性と陰性の間の強度）、陰性の４種類に分けて観察し、それぞれの抗原発現の面積的な割合を、図１に示すフローチャートに従って記号表記する。記号表記を行う被表記物は、所定の用紙のほか、パーソナルコンピュータのモニター画像であってもよい。

図１に示すように、抗原発現の反応性の表記物を表記するとき、観察領域に占める面積で「優に５割を超える反応性パターンがあるか？」で２つに分け、ｙｅｓの場合、「反応性パターンは１種類か２種類か３種類か？」で３つに分け、１種類のとき、「＋」、「（ｗｅａｋ）＋」、「（ｖｅｒｙｗｅａｋ）＋」、「−」のいずれかの反応性記号を表示記号とする。

「＋」、「（ｗｅａｋ）＋」、「（ｖｅｒｙｗｅａｋ）＋」、「−」の反応性記号は、ｃ−ｍｙｃ蛋白の免疫組織化学による抗原発現の反応性を４種類に分類したときの各種類の反応性を示している。免疫組織化学による抗原発現の所定の反応性のうち、「＋」は陽性を、「（ｗｅａｋ）＋」は弱陽性を、「（ｖｅｒｙｗｅａｋ）＋」は非常に弱い陽性を、「−」は陰性を示している。病変部生検を免疫組織化学的に染色したカラーの顕微鏡写真では、陽性は茶色に、弱陽性は薄い茶色に、非常に弱い陽性はかなり薄い茶色（ベージュ系）に、陰性は完全な白色に写っている。

反応性パターンが２種類のときには、「＋」、「（ｗｅａｋ）＋」、「（ｖｅｒｙｗｅａｋ）＋」、「−」のうちの２種類の反応性記号の間に「＞」、「＞＞」、「＞＞＞」、「＞＞＞＊」の比率記号を表示する。図１に示すように２種類の反応性記号の反応性の面積比率に応じて、左側により強い反応性の反応性記号を表示し、右側により弱い反応性の反応性記号を表示して、比率記号を２種類の反応性記号と関連付けた表示記号とする。

反応性パターンが３種類のときには、「＋」、「（ｗｅａｋ）＋」、「（ｖｅｒｙｗｅａｋ）＋」、「−」のうちの３種類の反応性記号の各反応性記号の間に「＞」、「＞＞」の比率記号を表示する。図１に示すように３種類の反応性記号の反応性の面積比率に応じて、左側により強い反応性の反応性記号を表示し、右側により弱い反応性の反応性記号を表示して、比率記号を３種類の反応性記号と関連付けた表示記号とする。

「優に５割を超える反応性パターンがあるか？」でｎｏの場合、「ほぼ５割の反応性パターンがあるか？」で２つに分け、ｙｅｓのとき、「＋」、「（ｗｅａｋ）＋」、「（ｖｅｒｙｗｅａｋ）＋」、「−」のうちの２種類または３種類の反応性記号の間に「／」、「＞」、「＞＞」、「＞＞＞」の比率記号を表示して、比率記号を２種類または３種類の反応性記号と関連付けた表示記号とする。「／」の比率記号は、左側のより強い反応性記号の反応性と、右側のより弱い反応性の反応性記号の反応性との面積比率が４７〜５３％であることを示している。

「ほぼ５割の反応性パターンがあるか？」でｎｏのとき、「＋」、「（ｗｅａｋ）＋」、「（ｖｅｒｙｗｅａｋ）＋」、「−」のうちの３種類の反応性記号の間に「／」、「＞＞」、「＞＞＞」の比率記号を表示して、比率記号を３種類の反応性記号と関連付けた表示記号とする。３種類の反応性記号の間に表示される「／」の比率記号は、各反応性記号の反応性の面積比率が３０〜３５％であることを示している。

図２に示す顕微鏡写真について、各写真の抗原発現の反応性を表示記号で示すと、Ａは「＋＞＞（ｗｅａｋ）＋」で、Ｂは「＋／（ｗｅａｋ）＋＞＞−」で、Ｃは「＋／（ｗｅａｋ）＋／−」で、Ｄは「−」で示される。

病変部位を採取し、ホルマリン固定後にパラフィン切片を作製し、抗ｃ−ｍｙｃ抗体を一次抗体として用いて、パラフィン切片を免疫組織化学的に染色した。染色標本を顕微鏡で観察し、図１に示すフローチャートに従って、ｃ−ｍｙｃ蛋白の免疫組織化学による抗原発現の反応性を表示記号で示した。また、FISH（Fluorescence in situ hybridization）用プローブセットを用いて、ｃ−ＭＹＣ遺伝子の転座の陽性（分断ないし他遺伝子との融合を含む）と陰性（分断ないし他遺伝子との融合を含まない）を検出した。

その結果は、以下のとおりである。左側にフローチャートに従って表記した表示記号を示す。それぞれの表記の右側にFISH用プローブセットを用いて検出した、検索対象とした症例数におけるｃ−ＭＹＣ遺伝子転座陽性の症例数を示す。また、Ａ群、Ｂ群、Ｃ群の右側には同様の症例数とともに括弧内に割合を示す。

Ａ群：０／４３（０％）
ｃ−ｍｙｃ＋／（ｗｅａｋ）＋／− ・・・０／４３
Ｂ群：１３／２５（５２％）
ｃ−ｍｙｃ＋／（ｗｅａｋ）＋＞＞− ・・・３／４
ｃ−ｍｙｃ＋／（ｗｅａｋ）＋＞＞＞− ・・・１／２
ｃ−ｍｙｃ＋＞（ｗｅａｋ）＋＞− ・・・０／１
ｃ−ｍｙｃ＋＞（ｗｅａｋ）＋＞＞− ・・・３／９
ｃ−ｍｙｃ＋＞＞（ｗｅａｋ）＋＞− ・・・６／９
Ｃ群：８／９（８９％）
ｃ−ｍｙｃ＋＞＞（ｗｅａｋ）＋・・・７／７
ｃ−ｍｙｃ＋＞＞＞（ｗｅａｋ）＋・・・１／２

このように、免疫組織化学の結果が「ｃ−ｍｙｃ＋／（ｗｅａｋ）＋／−」の表示記号で示される場合、陽性が観察領域の３０〜３５％、弱陽性が観察領域の３０〜３５％、陰性が観察領域の３０〜３５％と、それぞれほぼ同じ３分の１程度を占めている。この場合、４３件の症例中、ｃ−ＭＹＣ遺伝子の転座が陽性のものは０件、陰性のものが４３件すべてであった。このことから、免疫組織化学の結果が「ｃ−ｍｙｃ＋／（ｗｅａｋ）＋／−」の場合、ｃ−ＭＹＣ遺伝子の転座が陰性であると判定することができる。

また、免疫組織化学の結果が「ｃ−ｍｙｃ＋＞＞（ｗｅａｋ）＋」の表示記号で示される場合、陽性が前記観察領域の７５〜９０％を占めている。この場合、７件の症例中、ｃ−ＭＹＣ遺伝子の転座が陽性のものは７件すべて、陰性のものが０件であった。このことから、免疫組織化学の結果が「ｃ−ｍｙｃ＋＞＞（ｗｅａｋ）＋」の場合、症例数が少ないもののｃ−ＭＹＣ遺伝子の転座が高い確率で陽性になり得るものと判定することができる。

「ｃ−ｍｙｃ＋＞＞（ｗｅａｋ）＋」の表示記号で示される場合、すなわち、陽性が観察領域の７５〜９０％を占める場合、遺伝子Aに異常が生じている確率は９割以上になる。蛋白質レベルの発現様式を上述の表示記号で示すことによって、遺伝子異常の検出が容易になる。遺伝子Aの異常があると、患者の予後は不良になることが既に知られているので、免疫組織化学による蛋白質発現様式で患者の予後まで推定することができる。

このように、免疫組織化学の結果が「ｃ−ｍｙｃ＋／（ｗｅａｋ）＋／−」の表示記号で示される場合、精密な検査を行わずにｃ−ＭＹＣ遺伝子の転座の陰性判定が可能となる。また、「ｃ−ｍｙｃ＋＞＞（ｗｅａｋ）＋」の表示記号で示される場合には、抗原発現の反応性の表記物を用いることにより、ｃ−ＭＹＣ遺伝子の転座の陽性判定をかなり高い確率で行うことを容易にすることができる。

前述の表示記号によって、これまで個々の病理医がまちまちの長さで文章表記してきた免疫組織化学の所見が一定の法則に従ってかなり短く記号化され、それによって見易くかつ相互の比較が容易になる。記載時間の短縮にもなる。また、従来、抗原発現の反応性を陽性と陰性の２段階でとらえていたものが少なくとも陽性と弱陽性と陰性の３段階等でとらえることとなり、ｃ−ＭＹＣ遺伝子の転座の陰性・陽性の判定の精度を向上させることができる。
さらに、免疫組織化学の所見をビッグデータとして取り扱って、大規模症例数の解析や分析が可能となる。

Claims

ｃ−ｍｙｃ蛋白の免疫組織化学による抗原発現の反応性を少なくとも陽性と弱陽性と陰性との３種類に分類し、観察領域に占める各種類の反応性の面積比率を求め、各種類の反応性を示す反応性記号と、各種類の反応性の他の種類の反応性に対する面積比率を示す比率記号とが関連付けて表示された表示記号を被表記物に表示し、前記陽性が前記観察領域の３０〜３５％、前記弱陽性が前記観察領域の３０〜３５％、前記陰性が前記観察領域の３０〜３５％を占めるとき、ｃ−ＭＹＣ遺伝子の転座が陰性であると判定することを特徴とするｃ−ＭＹＣ遺伝子転座の判定方法。
ｃ−ｍｙｃ蛋白の免疫組織化学による抗原発現の反応性を少なくとも陽性と弱陽性と陰性との３種類に分類し、観察領域に占める各種類の反応性の面積比率を求め、各種類の反応性を示す反応性記号と、各種類の反応性の他の種類の反応性に対する面積比率を示す比率記号とが関連付けて表示された表示記号を被表記物に表示し、前記陽性が前記観察領域の７５〜９０％であるとき、ｃ−ＭＹＣ遺伝子の転座が陽性になり得る確率が高いと判定することを特徴とするｃ−ＭＹＣ遺伝子転座の判定方法。