JP6571303B1 - 反応処理装置 - Google Patents
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Abstract
Description
(2)パルスジェネレータ等により第1変調周波数(110Hz)の第1変調信号を発生させ、該第1変調信号を用いて第1励起光源からの第1励起光を変調させた。同様に、第2変調周波数(110Hz)の第2変調信号を発生させ、該第2変調信号を用いて第2励起光源からの第2励起光を変調させた。第1変調信号と第2変調信号のDuty比はともに50%とした。
(3)第1変調信号による変調と第2変調信号による変調との位相差Δφを変化させ、第1蛍光検出装置50に係る第1信号出力を計測した。
なお、本実施例では、蛍光信号に対して位相差のみの依存性を検出するので、サーマルサイクルは行っていない。
V1 4=2・d・(1−d) ・・・(1)
出力と位相で囲まれた領域の面積のうち、0を境にして正側と負側との領域の面積が等しいことから、以下の(2)式が成り立つ。
(1−x)・p+(1+a−x)・(d−p)+(a−x)・p+(−x)・{1−(d+p)}=0から、
x=(1+a)・d ・・・(2)
V1 4=−2・(1+a)・d2+2・(1+a)・d−2・a・p ・・・(3)
V1 N=|−2・a・(d2−d+p)| ・・・(4)
pm=d−d2 ・・・(5)
Δpm=(Nm')・(d−d2)/(N0')=(Nm'/V1 0)・(d−d2)/{(N0')/V1 0} ・・・(6)
Δpm=(d−d2)/{20・(N0')/V1 0} ・・・(7)
Δpm=3・(d−d2)/{100・(N0')/V1 0} ・・・(8)
Δpm=(d−d2)/{100・(N0')/V1 0} ・・・(9)
実施例1では、第1光学ヘッド51の対物レンズOB1および第2光学ヘッド55の対物レンズOB2として、開口数(NA)が0.23のものを用いた。第1蛍光検出装置は青励起/緑蛍光の組み合わせでFAMに対応したもので、第2蛍光検出装置は緑励起/赤蛍光の組み合わせでROXに対応したものとした。
実施例2では、第1光学ヘッド51の対物レンズOB1および第2光学ヘッド55の対物レンズOB2として、開口数(NA)が0.18のものを用いた。
(実施例3)
実施例3では、第1光学ヘッド51の対物レンズOB1および第2光学ヘッド55の対物レンズOB2として、開口数(NA)が0.12のものを用いた。
(実施例4)
実施例4では、第1光学ヘッド51の対物レンズOB1および第2光学ヘッド55の対物レンズOB2として、開口数(NA)が0.07のものを用いた。
配列番号2:リバースPCRプライマー
配列番号3:プローブ
Claims (11)
- 試料が移動する流路が形成された反応処理容器と、
第1励起光を前記流路に設定された第1蛍光検出領域中の試料に照射するとともに、前記第1励起光の照射により試料から生じた第1蛍光を検出する第1蛍光検出装置と、
第2励起光を前記流路に設定された第2蛍光検出領域中の試料に照射するとともに、前記第2励起光の照射により試料から生じた第2蛍光を検出する第2蛍光検出装置と、
を備える反応処理装置であって、
前記第1蛍光の波長範囲と前記第2励起光の波長範囲は、少なくとも一部が重複しており、
前記第1励起光および前記第2励起光は所定のDuty比で点滅発光し、
前記第1励起光と前記第2励起光の点滅のDuty比をdとしたときに、前記第1励起光と前記第2励起光の点滅の位相差が、2π(pm−Δpm)[rad]〜2π(pm+Δpm)[rad]の範囲内、又は2π{(1−pm)−Δpm}[rad]〜2π{(1−pm)+Δpm}[rad]の範囲内で設定される(ただしpm=d−d2及びΔpm=0.01×pmである)ことを特徴とする反応処理装置。 - 試料が移動する流路が形成された反応処理容器と、
第1励起光を前記流路に設定された第1蛍光検出領域中の試料に照射するとともに、前記第1励起光の照射により試料から生じた第1蛍光を検出する第1蛍光検出装置と、
第2励起光を前記流路に設定された第2蛍光検出領域中の試料に照射するとともに、前記第2励起光の照射により試料から生じた第2蛍光を検出する第2蛍光検出装置と、
を備える反応処理装置であって、
前記第1蛍光の波長範囲と前記第2励起光の波長範囲は、少なくとも一部が重複しており、
前記第1励起光および前記第2励起光は所定のDuty比で点滅発光し、
前記第1励起光と前記第2励起光の点滅のDuty比をdとしたときに、前記第1励起光と前記第2励起光の点滅の位相差が、2π(p m −Δp m )[rad]〜2π(p m +Δp m )[rad]の範囲内、又は2π{(1−p m )−Δp m }[rad]〜2π{(1−p m )+Δp m }[rad]の範囲内で設定される(ただしp m =d−d 2 及びΔp m =(d−d 2 )/{k・(N 0 ')/V 1 0 }であり、N 0 'は、前記第1励起光と前記第2励起光の点滅の位相差が0radのときの前記第1蛍光検出装置の信号出力のノイズであり、V 1 0 は、前記第2蛍光検出装置が作動していない場合の前記第1蛍光検出装置の信号出力であり、20≦kである)ことを特徴とする反応処理装置。 - 試料が移動する流路が形成された反応処理容器と、
第1励起光を前記流路に設定された第1蛍光検出領域中の試料に照射するとともに、前記第1励起光の照射により試料から生じた第1蛍光を検出する第1蛍光検出装置と、
第2励起光を前記流路に設定された第2蛍光検出領域中の試料に照射するとともに、前記第2励起光の照射により試料から生じた第2蛍光を検出する第2蛍光検出装置と、
を備える反応処理装置であって、
前記第1蛍光の波長範囲と前記第2励起光の波長範囲は、少なくとも一部が重複しており、
前記第1励起光および前記第2励起光は所定のDuty比で点滅発光し、
前記第1励起光と前記第2励起光の点滅のDuty比をdとしたときに、前記第1励起光と前記第2励起光の点滅の位相差が、2π(pm−Δpm)[rad]〜2π(pm+Δpm)[rad]の範囲内、又は2π{(1−pm)−Δpm}[rad]〜2π{(1−pm)+Δpm}[rad]の範囲内で設定される(ただしpm=d−d2及びΔpm=(d−d2)/{k・(N0')/V1 0}であり、N0'は、前記第1励起光と前記第2励起光の点滅の位相差が0radのときの前記第1蛍光検出装置の信号出力のノイズであり、V1 0は、前記第2蛍光検出装置が作動していない場合の前記第1蛍光検出装置の信号出力であり、k=20である)ことを特徴とする反応処理装置。 - 試料が移動する流路が形成された反応処理容器と、
第1励起光を前記流路に設定された第1蛍光検出領域中の試料に照射するとともに、前記第1励起光の照射により試料から生じた第1蛍光を検出する第1蛍光検出装置と、
第2励起光を前記流路に設定された第2蛍光検出領域中の試料に照射するとともに、前記第2励起光の照射により試料から生じた第2蛍光を検出する第2蛍光検出装置と、
を備える反応処理装置であって、
前記第1蛍光の波長範囲と前記第2励起光の波長範囲は、少なくとも一部が重複しており、
前記第1励起光および前記第2励起光は所定のDuty比で点滅発光し、
前記第1励起光と前記第2励起光の点滅のDuty比をdとしたときに、前記第1励起光と前記第2励起光の点滅の位相差が、2π(p m −Δp m )[rad]〜2π(p m +Δp m )[rad]の範囲内、又は2π{(1−p m )−Δp m }[rad]〜2π{(1−p m )+Δp m }[rad]の範囲内で設定される(ただしp m =d−d 2 及びΔp m =(d−d 2 )/{k・(N 0 ')/V 1 0 }であり、N 0 'は、前記第1励起光と前記第2励起光の点滅の位相差が0radのときの前記第1蛍光検出装置の信号出力のノイズであり、V 1 0 は、前記第2蛍光検出装置が作動していない場合の前記第1蛍光検出装置の信号出力であり、k=100/3である)ことを特徴とする反応処理装置。 - 試料が移動する流路が形成された反応処理容器と、
第1励起光を前記流路に設定された第1蛍光検出領域中の試料に照射するとともに、前記第1励起光の照射により試料から生じた第1蛍光を検出する第1蛍光検出装置と、
第2励起光を前記流路に設定された第2蛍光検出領域中の試料に照射するとともに、前記第2励起光の照射により試料から生じた第2蛍光を検出する第2蛍光検出装置と、
を備える反応処理装置であって、
前記第1蛍光の波長範囲と前記第2励起光の波長範囲は、少なくとも一部が重複しており、
前記第1励起光および前記第2励起光は所定のDuty比で点滅発光し、
前記第1励起光と前記第2励起光の点滅のDuty比をdとしたときに、前記第1励起光と前記第2励起光の点滅の位相差が、2π(p m −Δp m )[rad]〜2π(p m +Δp m )[rad]の範囲内、又は2π{(1−p m )−Δp m }[rad]〜2π{(1−p m )+Δp m }[rad]の範囲内で設定される(ただしp m =d−d 2 及びΔp m =(d−d 2 )/{k・(N 0 ')/V 1 0 }であり、N 0 'は、前記第1励起光と前記第2励起光の点滅の位相差が0radのときの前記第1蛍光検出装置の信号出力のノイズであり、V 1 0 は、前記第2蛍光検出装置が作動していない場合の前記第1蛍光検出装置の信号出力であり、k=100である)ことを特徴とする反応処理装置。 - 前記第1蛍光検出装置は、前記第1励起光を照射するとともに前記第1蛍光を受光する第1光学ヘッドを備え、
前記第2蛍光検出装置は、前記第2励起光を照射するとともに前記第2蛍光を受光する第2光学ヘッドを備え、
前記第1光学ヘッドおよび前記第2光学ヘッドの開口数が0.07〜0.23の範囲内にある場合、前記第1蛍光検出領域の中心と前記第2蛍光検出領域の中心との間の距離は、4mm以上に設定されることを特徴とする請求項1から5のいずれかに記載の反応処理装置。 - 前記流路は、第1温度に維持される第1温度領域と、前記第1温度よりも高い第2温度に維持される第2温度領域と、前記第1温度領域と前記第2温度領域とを接続する接続領域とを備え、
前記第1蛍光検出装置によって検出された蛍光信号に基づいて、前記流路内における試料の移動が制御され、
前記第1蛍光検出領域は、前記接続領域の略中間点に設定されることを特徴とする請求項1から6のいずれかに記載の反応処理装置。 - 前記第1蛍光検出装置は、前記第1励起光として青色光を照射し、且つ前記第1蛍光として緑色光を検出し、
前記第2蛍光検出装置は、前記第2励起光として緑色光を照射し、且つ前記第2蛍光として赤色光を検出することを特徴とする請求項1から7のいずれかに記載の反応処理装置。 - 前記第1励起光は、波長範囲が450〜490nmの光を含み、
前記第1蛍光は、波長範囲が510〜550nmの光を含み、
前記第2励起光は、波長範囲が510〜550nmの光を含み、
前記第2蛍光は、波長範囲が580〜640nmの光を含む、
ことを特徴とする請求項1から7のいずれかに記載の反応処理装置。 - 第3励起光を前記流路に設定された第3蛍光検出領域中の試料に照射するとともに、前記第3励起光の照射により試料から生じた第3蛍光を検出する第3蛍光検出装置をさらに備え、
前記第3蛍光検出装置は、前記第3励起光として赤色光を照射し、且つ前記第3蛍光として赤外光を検出することを特徴とする請求項8に記載の反応処理装置。 - 前記第1蛍光検出装置の第1光学ヘッドが中央に配置され、前記第2蛍光検出装置の第2光学ヘッドおよび前記第3蛍光検出装置の第3光学ヘッドが前記第1光学ヘッドの両側に配置されることを特徴とする請求項10に記載の反応処理装置。
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