JP6567083B2 - 抗dkk−1−抗rankl二重特異性抗体化合物 - Google Patents
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Description
本発明の二重特異性抗体化合物を構築しようと試みた際に、重大な問題に遭遇した。遭遇した問題には、骨形成の増加と骨吸収の減少との両方に対する適合性及び/または最適な生物活性を有する単一薬剤を設計することが含まれる。例えば、mAb部分またはscFv部分のうちの一方としてのDkk−1抗体、及びmAb部分またはscFv部分のうちの他方としての既知のRANKL抗体(Denosumab等)を含む、二重特異性抗体化合物(米国特許第8,148,498号に記載される)は、適合性及び/または許容される生物活性を有する薬剤を提供しない。実際、研究によると、(骨吸収を減少させるための)Denosumabの薬力学的作用プロファイルは、6か月であり、半減期はおよそ35〜42日であり、一方で、(骨形成を増加させるための)米国特許第8,148,498号に記載されるDkk−1抗体の薬力学的作用プロファイルは、1ヵ月であり、半減期はおよそ16日にすぎないことが示されている。かかる本質的に異なる生物学的活性プロファイルは、とりわけ脊椎固定療法(本質的な骨治癒及び融合が術後最初の3か月で起こることが知られる)に対する補助剤としての治療的使用のための、投薬に対する問題を生じさせる。したがって、本発明の驚くべきかつ予想外の特性を有する二重特異性抗体化合物に到達するためには、薬理学的介入が必要とされる。
作動可能に連結されている遺伝子の発現を導くことができる発現ベクターは、当該技術分野で周知である。発現ベクターは、宿主細胞からのポリペプチドの分泌を促進するシグナルペプチドをコードすることができる。シグナルペプチドは、免疫グロブリンシグナルペプチドまたは異種シグナルペプチドであり得る。第1のポリペプチド鎖及び第2のポリペプチド鎖の各々は、それらが1つのベクター中で作動可能に連結されている異なるプロモーターから独立して発現されてもよく、あるいは、第1及び第2のポリペプチド鎖は、2つのベクター(1つは第1のポリペプチド鎖を発現し、1つは第2のポリペプチド鎖を発現する)に作動可能に連結されている異なるプロモーターから独立して発現することができる。本発明の二重特異性抗体化合物の調製に使用するための例示の好適なベクターには、pEE 6.4(例えば第1のポリヌクレオチド配列を発現させるため)及びpEE 12.4(例えば第2のポリヌクレオチド配列を発現させるため)等の、Lonza Biologicsから入手可能なベクターが含まれる。
本明細書で使用されるとき、「治療」及び/または「治療すること」」は、全てのプロセスを指すことを意図し、これには、本明細書に記載の障害の進行の遅延、中断、阻止、制御、または停止があり得るが、必ずしも全ての障害症状の完全な排除を示すわけではない。治療は、Dkk−1及び/もしくはRANKLのレベルの低下、またはDkk−1及び/もしくはRANKLの生物活性の低下により利益を得るであろう患者における、疾患または病態の治療のための本発明の二重特異性抗体化合物、またはその薬学的組成物の投与を含み、(a)疾患のさらなる進行を阻害すること、すなわちその進行を阻止すること、及び(b)疾患を緩和すること、すなわち、疾患もしくは障害の退行を引き起こすこと、またはその症状もしくは合併症を緩和することを含む。本発明の二重特異性抗体は、骨治癒において、例えば、脊椎固定術に対する補助剤として、及び/または骨粗鬆症、骨減少症、変性腰椎脊椎すべり症、変性椎間板疾患、もしくは骨形成不全症の治療において、有用であることが予想される。
本発明の二重特異性抗体化合物は、患者への投与に好適な薬学的組成物に組み込むことができる。本発明の二重特異性抗体化合物は、静脈内、筋肉内、皮下、または腹腔内を含む非経口投与を介した投与が意図される。それに加えて、本発明の二重特異性抗体化合物は、患者に単独で、または薬学的に許容される担体及び/もしくは希釈剤と共に単回用量または複数回用量で、投与することができる。かかる薬学的組成物は、選択された投与様式に適切であるように設計されており、薬学的に許容される希釈剤、担体及び/または分散剤のような賦形剤、緩衝剤、界面活性剤、保存剤、可溶化剤、等張剤、安定化剤などが適宜使用される。該組成物は、開業医には一般的に知られているような製剤化技術の概要を提供する、例えば、Remington,The Science and Practice of Pharmacy,19th Edition,Gennaro,Ed.,Mack Publishing Co.,Easton,PA 1995に開示されている従来の技術に従って設計することができる。薬学的組成物に好適な担体には、本発明の二重特異性抗体化合物と組み合わせた場合に、分子の活性を保持し、かつ患者の免疫系と非反応性である、任意の材料が含まれる。本発明の薬学的組成物は、二重特異性抗体化合物及び1種以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤を含む。
本発明の例示的な二重特異性抗体は、本質的に以下のように発現及び精製される。配列番号3(例示的な配列番号1の第1のポリペプチド鎖及び翻訳後に切断されるシグナルペプチドをコードする)及び配列番号4(例示的な配列番号2の第2のポリペプチド鎖及び翻訳後に切断されるシグナルペプチドをコードする)のDNAを含むグルタミンシンセターゼ(GS)発現ベクターを用いて、チャイニーズハムスター細胞株(CHO、GSノックアウト)をエレクトロポレーションによりトランスフェクトする。発現ベクターは、SV Early(シミアンウイルス40E)プロモーター及びGS遺伝子をコードする。GSの発現は、CHO細胞によって必要とされるアミノ酸であるグルタミンの生化学的合成を可能にする。トランスフェクション後、細胞を50μM L−メチオニンスルホキシミン(MSX)でバルク選択にかける。MSXによるGSの阻害は、選択のストリンジェンシーを高めるために利用される。宿主細胞ゲノムの転写活性領域への発現ベクターcDNAの組み込みを有する細胞を、CHO野生型細胞に対して選択することができる。トランスフェクトされたプールを、安定した発現細胞のクローン伸長に近づけるようにするために、低密度でプレートする。マスターウェル(masterwell)を二重特異性抗体発現についてスクリーニングし、次いで無血清懸濁培養においてスケールアップして、産生に使用する。
例示的な二重特異性抗体化合物は、10mMクエン酸緩衝液pH5.5または10mMヒスチジン緩衝液pH5.5のうちの一方で製剤化する。それぞれの緩衝液に添加する150mM NaCl及び0.02% Tween80の影響もまた評価する。二重特異性抗体化合物は、Amicon U.C.フィルター(Millipore、カタログ番号UFC903024)を使用して1mg/mL及び50mg/mLに濃縮する。
ヒトDkk−1及びヒトRANKLに対する例示的な二重特異性抗体の結合親和性及び結合化学量論を、HBS−EP+(10mM Hepes、pH7.4+150mM NaCl+3mM EDTA+0.05%(w/v)界面活性剤P20)泳動用緩衝液でプライミングしたBiacore 2000計測器での表面プラズモン共鳴アッセイ、及び25℃に設定した分析温度を用いて決定する。捕捉手法を用いるために、4つ全てのフローセル(Fc)上に固定化したプロテインA(標準的なNHS−EDCアミンカップリングを用いて生成)を含むCM5チップ(Biacore、品番BR−100530)を使用する。抗体試料は、泳動用緩衝液中に希釈することによって0.2〜10μg/mLに調製する。ヒトDkk−1 試料は、泳動用緩衝液中に希釈することによって100nM、50nM、25nM、12.5nM、6.25nM、3.125nM、1.5625nM、0.78125nM、0.390625nM、0.1953125nM、及び0(ブランク)nMの最終濃度に調製する。ヒトRANKLは、泳動用緩衝液中に希釈することによって100nM、50nM、25nM、12.5nM、6.25nM、3.125nM、1.5625nM、0.78125nM、0.390625nM、0.1953125nM、及び0(ブランク)nMの最終濃度に調製する。
TCF/LEFルシフェラーゼレポーターで安定に感染させたマウス前造骨性MC3T3E1/Topflash細胞を使用して、表1に提示される例示的な二重特異性抗体の、Dkk−1活性を中和する能力を評価する。Wnt3aは、TCF/LEF調節型ルシフェラーゼ発光を誘導する。ヒトDkk−1は、Wnt3a誘導型TCF/LEFルシフェラーゼ発現を遮断する。例示的な二重特異性抗体によるDkk−1活性の中和を、ルシフェラーゼ発光の回復を定量することにより測定する。
ヒトRANK及びNF−kB主導型ルシフェラーゼレポーターを安定に共発現するHEK293細胞を使用して、表1に提示される例示的な二重特異性抗体の、RANKL活性を中和する能力を評価する。上述のHEK293細胞モデルにおいて、RANKは、ヒトRANKLが結合すると、NF−kBシグナル伝達を誘導してルシフェラーゼ発光をもたらす。例示的な二重特異性抗体によるRANKへのRANKL結合の中和を、ルシフェラーゼ発光の低減によって測定する。
インビボでの骨及び椎骨治癒に対する全身効果を、げっ歯類皮質欠損モデルを用いて評価する。14週齢のオスの胸腺欠損ヌードラット(Harlan(Indianapolis、IN))を、食物(0.5%Ca及び0.4%Pを含むTD 89222、Teklad(Madison、WI))及び水を自由に与えながら、12時間の光/暗サイクルにおいて22℃で維持する。
オッセオインテグレーション及びインプラント固定、ならびに椎骨治癒に対する全身効果を、げっ歯類脛骨スクリューインプラントモデルを用いてインビボで評価する。23週齢のオスSprague−Dawleyラット(Charles River Labs.,Int’l Inc.)に、両方の後肢脛骨における内側・外側へのチタンスクリュー(2×4mm)の外科移植を施す。術後1日目(1日目)、ラットを5つの群に分割し、下記のうちの1つを皮下注射する:a.)3mg/kgのIgG4陰性対照抗体(N=9)、b.)3mg/kgのDkk−1アッセイ対照抗体(例示的な二重特異性抗体のmAb部分と同じ重鎖及び軽鎖可変領域配列を有するIgG4 Dkk−1 mAb)(N=9)、c.)3mg/kgのRANKLアッセイ対照抗体(例示的な二重特異性抗体のscFv部分と同じCDR配列を有するIgG4 RANKL mAb)(N=9)、d.)4.2mg/kgの例示的な二重特異性抗体(N=9)、e.)14mg/kgの例示的な二重特異性抗体(N=9)、ならびにf.)1日時点及び8日時点の両方で4.2mg/kgの例示的な二重特異性抗体(N=9)。21日目、ラットを殺処理する。
脊椎固定モデルにおけるインビボでの骨及び椎骨治癒に対する全身効果を、げっ歯類腰椎後方融合モデルを用いて評価する。450〜530gの質量を有する14週齢のオスのSprague−Dawleyラット(Charles River Labs.,Int’l Inc.)に左腸骨稜手術を施して、0.5×0.5cmの自家移植片を採取する。移植片を採取した同じラットにおいて、骨移植片を、皮質剥離した腰椎椎骨5及び6(L5及びL6)横突起に即座に移植する。第1の研究(研究1)において、総計48匹のラットに移植手術を施し、第2の研究(研究2)においては、総計60ラットに移植手術を施す。手術の当日(0日目)、デジタル放射線画像を撮影して、移植片の位置付けを確実にする。
配列
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atggagacggacactctcctcctgtgggtattgctcctttgggtccctggttctacaggggaggtacagctggtagaaagcggtgggggattggtacaaccaggtggatctctccggttgtcatgtgcagctagtgggtttaccttctccagttatacgatgtcttgggtgagacaagcgcccggtaaaggattggagtgggtcgcaaccatcagtggaggagggtttggaacatactaccctgatagcgttaaggggcggtttaccataagcagagataacgcgaagaactctctctaccttcaaatgaactctctgcgggctgaagatacagctgtgtattattgcgcccgccctgggtataacaattactacttcgatatttggggccaagggacaaccgtaaccgtgtctagcgcttcaactaagggtccaagcgtgttccctttggcaccctgcagcagaagcacgtccgagtctaccgctgctttgggctgtctcgtcaaggactacttccccgaaccagttactgtttcttggaactctggtgcactcacaagtggggtccatacgttccccgccgttttgcaatccagcgggttgtactctctttcatccgtggtcactgttcctagctccagcctcggcactaaaacttacacttgtaatgtagaccataagcccagcaacaccaaggtggataagagagtcgagtccaagtacggccctccttgtcctccatgtcctgcgccggaggccgccggaggaccttctgtgttcctttttccaccaaaacctaaagacacccttatgatatcccgaactcccgaggtaacgtgcgtggtagtcgatgtaagccaggaagatcccgaagtccagttcaattggtacgttgacggcgtcgaagtccacaatgctaagacaaaacccagggaagagcagttcaacagcacctatcgcgtagtgagcgtactgaccgtgcttcaccaagactggctcaacggtaaggaatataaatgtaaggtttccaataaaggcctgcccagctcaattgagaaaaccatatccaaagctaaggggcaacctcgagaaccacaggtttacacacttcctccatcacaggaggaaatgacgaaaaatcaggttagcctgacttgtctcgttaaaggattttatccatctgatattgccgtagaatgggagagtaatggacagcctgagaataactataagaccacaccacccgtcctcgactctgacggctcattcttcctgtattctcgcttgacggtggacaagagcagatggcaggaagggaacgtgttttcttgcagtgtgatgcacgaggcactgcataatcattacacacagaagtctttgtccctgtcactgggtggcggaggaggttcaggaggtgggggcagtggcggcggaggctcacaggtccagcttgtccagtctggggcagaggtgaagaagcccgggagtagtgtgaaggtcagctgtaaggcgtcagggtacgcttttactaattactacattgaatgggtgagacaggctccaggccagtgtcttgagtggatgggcgtgattaatccaggctggggtgacactaattacaatgagaagttcaaagggcgggtgactatcacggcagataagtctacttccactgcttatatggagctctcctccctgaggagcgaagacaccgctgtttattattgtgcccggcgagatacagcccatgggtattatgccctcgatccatggggccagggcacgacagttaccgtgagctccggaggaggagggagcgggggcgggggatctggaggaggaggaagtggaggtggagggtctgggggaggcggaagcgatatccagatgactcaaagccctagttccttgagcgcctctgtgggcgacagagtgacaataacctgtaaagcatcacaaaacgtgggcaccaacgtggcgtggtatcaacaaaaacctggcaaggcgcctaagttgctgatttatagtgcatcttacaggtattcaggggtgccctccagatttagtggcagtggcagcggaaccgatttcactctcacaataagctctcttcagccagaggacttcgcgacgtattattgccaacagtattgggactatccactgactttcggttgtggaacaaaggttgagatcaag
atggagacagacacactcctgctatgggtactgctgctctgggttccaggatccactggtgaaattgtgttgacacagtctccagccaccctgtctttgtctccaggggaaagagccaccctctcctgccacgccagcgacagtattagcaacagcctacactggtaccaacagaaacctggccaggctcccaggctcctcatctattatgctagacagtccatccagggcatcccagccaggttcagtggcagtgggtctgggacagacttcactctcaccatcagcagcctagagcctgaagattttgcagtttattactgtcaacagagtgagagctggccgctccacttcggcggagggaccaaggtggagatcaaacgaactgtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgc
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYTMSWVRQAPGKGLEWVATISGGGFGTYYPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARPGYNNYYFDIWGQGTTVTVSS
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYAFTNYYIEWVRQAPGQCLEWMGVINPGWGDTNYNEKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARRDTAHGYYALDPWGQGTTVTVSS
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCHASDSISNSLHWYQQKPGQAPRLLIYYARQSIQGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQSESWPLHFGGGTKVEIK
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQNVGTNVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYWDYPLTFGCGTKVEIK
AASGFTFSSYTMS
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VINPGWGDTNYNEKFKG
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HASDSISNSLH
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KASQNVGTNVA
YSASYRYS
QQYWDYPLT
GGGGSGGGGSGGGGS
GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS
本発明は、以下の態様を含む。
[1]
2つの第1のポリペプチド鎖と、2つの第2のポリペプチド鎖とを含む二重特異性抗体化合物であって、それぞれ
a.)前記第1のポリペプチド鎖は、一本鎖可変フラグメント(scFv)及びmAb IgG重鎖(HC)を含み、前記HCは重鎖CDR(HCDR)1〜3を含む重鎖可変領域(HCVR1)を有し、HCDR1のアミノ酸配列は配列番号9であり、HCDR2のアミノ酸配列は配列番号10であり、HCDR3のアミノ酸配列は配列番号11であり、前記scFvは重鎖可変領域(HCVR2)及び軽鎖可変領域(LCVR2)を有し、HCVR2はHCDR4〜6を含み、LCVR2はLCDR4〜6を含み、HCDR4のアミノ酸配列は配列番号12であり、HCDR5のアミノ酸配列は配列番号13であり、HCDR6のアミノ酸配列は配列番号14であり、LCDR4のアミノ酸配列は配列番号18であり、LCDR5のアミノ酸配列は配列番号19であり、LCDR6のアミノ酸配列は配列番号20であり、
b.)前記第2のポリペプチドは、軽鎖CDR(LCDR)1〜3を含むmAb軽鎖(LC)を含み、LCDR1のアミノ酸配列は配列番号15であり、LCDR2のアミノ酸配列は配列番号16であり、LCDR3のアミノ酸配列は配列番号17であり、
各scFvは、独立して、HCのN末端及びLCVR2のC末端に共有結合しているポリペプチドリンカー(L1)を介して前記HCに連結され、LCVR2は、LCVR2のC末端及びHCVR2のN末端に共有結合している第2のポリペプチドリンカー(L2)を介して同じscFvのHCVR2に連結される、二重特異性抗体化合物。
[2]
HCVR1のアミノ酸配列が配列番号5であり、LCVR1のアミノ酸配列が配列番号7であり、HCVR2のアミノ酸配列が配列番号6であり、LCVR2のアミノ酸配列が配列番号8である、[1]に記載の二重特異性抗体化合物。
[3]
L1のアミノ酸配列が配列番号21であり、L2のアミノ酸配列が配列番号22である、[1]及び[2]のいずれかに記載の二重特異性抗体化合物。
[4]
2つの第1のポリペプチド鎖及び2つの第2のポリペプチド鎖を含む二重特異性抗体化合物であって、前記第1のポリペプチドの各々のアミノ酸配列が配列番号1であり、前記第2のポリペプチドの各々のアミノ酸配列が配列番号2である、二重特異性抗体化合物。
[5]
配列番号1のアミノ酸配列を有するポリペプチド鎖をコードするポリヌクレオチド配列を含むDNA分子。
[6]
配列番号2のアミノ酸配列を有するポリペプチド鎖をコードするポリヌクレオチド配列を含むDNA分子。
[7]
配列番号1のアミノ酸配列を有するポリペプチド鎖をコードするポリヌクレオチド配列を含み、かつ配列番号2のアミノ酸配列を有するポリペプチド鎖をコードするポリヌクレオチド配列を含む、DNA分子。
[8]
[5]に記載のDNA分子及び[6]に記載のDNA分子を含む哺乳動物細胞であって、前記細胞は、配列番号1のアミノ酸配列を有するポリペプチド鎖及び配列番号2のアミノ酸配列を有するポリペプチド鎖を発現することができる、哺乳動物細胞。
[9]
前記哺乳動物細胞がCHOである、[8]に記載の哺乳動物細胞。
[10]
[7]に記載のDNA分子を含む哺乳動物細胞であって、前記細胞は、配列番号1のアミノ酸配列を有するポリペプチド鎖及び配列番号2のアミノ酸配列を有するポリペプチド鎖を発現することができる、哺乳動物細胞。
[11]
前記哺乳動物細胞がCHOである、[10]に記載の哺乳動物細胞。
[12]
アミノ酸配列が配列番号1であるポリペプチド及びアミノ酸配列が配列番号2であるポリペプチドを含む二重特異性抗体化合物を産生するためのプロセスであって、前記二重特異性抗体化合物が発現されるような条件下で[8]または[10]に記載の哺乳動物細胞を培養することと、前記発現された二重特異性抗体化合物を回収することとを含む、プロセス。
[13]
[12]に記載のプロセスによって産生される二重特異性抗体化合物。
[14]
骨障害を治療する方法であって、それを必要とする患者に、治療有効量の、[1]〜[4]及び[13]のいずれかに記載の二重特異性抗体化合物を投与することを含む、方法。
[15]
脊椎固定の患者を治療する方法であって、前記患者に、治療有効量の、[1]〜[4]及び[13]のいずれかに記載の二重特異性抗体化合物を投与することを含む、方法。
[16]
骨粗鬆症、骨減少症、腰椎変性すべり症、変性椎間板疾患、または骨形成不全症のうちの少なくとも1つを治療する方法であって、それを必要とする患者に、治療有効量の、[1]〜[4]及び[13]のいずれかに記載の二重特異性抗体化合物を投与することを含む、方法。
[17]
治療に使用するための、[1]〜[4]及び[13]のいずれかに記載の二重特異性抗体化合物。
[18]
脊椎固定療法に対する補助剤として使用するための、[1]〜[4]及び[13]のいずれかに記載の二重特異性抗体化合物。
[19]
骨治癒において、または骨粗鬆症、骨減少症、腰椎変性すべり症、変性椎間板疾患、もしくは骨形成不全症のうちの少なくとも1つの治療において使用するための、[1]〜[4]及び[13]のいずれかに記載の二重特異性抗体化合物。
[20]
[1]〜[4]及び[13]のいずれかに記載の二重特異性抗体化合物及び1種以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤を含む、薬学的組成物。
[21]
脊椎固定の患者の治療のための薬剤の製造における、[1]〜[4]及び[13]のいずれかに記載の二重特異性抗体化合物の使用。
[22]
骨障害の治療のための薬剤の製造における、[1]〜[4]及び[13]のいずれかに記載の二重特異性抗体化合物の使用。
[23]
骨粗鬆症、骨減少症、腰椎変性すべり症、変性椎間板疾患、または骨形成不全症のうちの少なくとも1つの治療のための薬剤の製造における、[1]〜[4]及び[13]のいずれかに記載の二重特異性抗体化合物の使用。
Claims (16)
- 2つの第1のポリペプチド鎖と、2つの第2のポリペプチド鎖とを含む二重特異性抗体化合物であって、それぞれ
a.)前記第1のポリペプチド鎖は、一本鎖可変フラグメント(scFv)及びmAb IgG重鎖(HC)を含み、前記HCは重鎖CDR(HCDR)1〜3を含む重鎖可変領域(HCVR1)を有し、HCDR1のアミノ酸配列は配列番号9であり、HCDR2のアミノ酸配列は配列番号10であり、HCDR3のアミノ酸配列は配列番号11であり、前記scFvは重鎖可変領域(HCVR2)及び軽鎖可変領域(LCVR2)を有し、HCVR2はHCDR4〜6を含み、LCVR2はLCDR4〜6を含み、HCDR4のアミノ酸配列は配列番号12であり、HCDR5のアミノ酸配列は配列番号13であり、HCDR6のアミノ酸配列は配列番号14であり、LCDR4のアミノ酸配列は配列番号18であり、LCDR5のアミノ酸配列は配列番号19であり、LCDR6のアミノ酸配列は配列番号20であり、
b.)前記第2のポリペプチドは、軽鎖CDR(LCDR)1〜3を含むmAb軽鎖(LC)を含み、LCDR1のアミノ酸配列は配列番号15であり、LCDR2のアミノ酸配列は配列番号16であり、LCDR3のアミノ酸配列は配列番号17であり、
各scFvは、独立して、HCのC末端及びHCVR2のN末端に共有結合しているポリペプチドリンカー(L1)を介して前記HCに連結され、LCVR2は、LCVR2のN末端及びHCVR2のC末端に共有結合している第2のポリペプチドリンカー(L2)を介して同じscFvのHCVR2に連結される、二重特異性抗体化合物。 - HCVR1のアミノ酸配列が配列番号5であり、LCVR1のアミノ酸配列が配列番号7であり、HCVR2のアミノ酸配列が配列番号6であり、LCVR2のアミノ酸配列が配列番号8である、請求項1に記載の二重特異性抗体化合物。
- L1のアミノ酸配列が配列番号21であり、L2のアミノ酸配列が配列番号22である、請求項1及び2のいずれかに記載の二重特異性抗体化合物。
- 2つの第1のポリペプチド鎖及び2つの第2のポリペプチド鎖を含む二重特異性抗体化合物であって、前記第1のポリペプチドの各々のアミノ酸配列が配列番号1であり、前記第2のポリペプチドの各々のアミノ酸配列が配列番号2である、二重特異性抗体化合物。
- 配列番号1のアミノ酸配列を有するポリペプチド鎖をコードするポリヌクレオチド配列を含むDNA分子及び配列番号2のアミノ酸配列を有するポリペプチド鎖をコードするポリヌクレオチド配列を含むDNA分子を含む哺乳動物細胞であって、前記細胞は、配列番号1のアミノ酸配列を有するポリペプチド鎖及び配列番号2のアミノ酸配列を有するポリペプチド鎖を発現することができる、哺乳動物細胞。
- 配列番号1のアミノ酸配列を有するポリペプチド鎖をコードするポリヌクレオチド配列を含み、かつ配列番号2のアミノ酸配列を有するポリペプチド鎖をコードするポリヌクレオチド配列を含むDNA分子を含む哺乳動物細胞であって、前記細胞は、配列番号1のアミノ酸配列を有するポリペプチド鎖及び配列番号2のアミノ酸配列を有するポリペプチド鎖を発現することができる、哺乳動物細胞。
- 骨障害を治療するための薬学的組成物であって、請求項1〜4のいずれかに記載の二重特異性抗体化合物を含む、薬学的組成物。
- 脊椎固定の患者を治療するための薬学的組成物であって、請求項1〜4のいずれかに記載の二重特異性抗体化合物を含む、薬学的組成物。
- 骨粗鬆症、骨減少症、腰椎変性すべり症、変性椎間板疾患、または骨形成不全症のうちの少なくとも1つを治療するための薬学的組成物であって、請求項1〜4のいずれかに記載の二重特異性抗体化合物を含む、薬学的組成物。
- 治療に使用するための、請求項1〜4のいずれかに記載の二重特異性抗体化合物。
- 脊椎固定療法に対する補助剤として使用するための、請求項1〜4のいずれかに記載の二重特異性抗体化合物。
- 骨治癒において、または骨粗鬆症、骨減少症、腰椎変性すべり症、変性椎間板疾患、もしくは骨形成不全症のうちの少なくとも1つの治療において使用するための、請求項1〜4のいずれかに記載の二重特異性抗体化合物。
- 請求項1〜4のいずれかに記載の二重特異性抗体化合物及び1種以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤を含む、薬学的組成物。
- 脊椎固定の患者の治療のための薬剤の製造における、請求項1〜4のいずれかに記載の二重特異性抗体化合物の使用。
- 骨障害の治療のための薬剤の製造における、請求項1〜4のいずれかに記載の二重特異性抗体化合物の使用。
- 骨粗鬆症、骨減少症、腰椎変性すべり症、変性椎間板疾患、または骨形成不全症のうちの少なくとも1つの治療のための薬剤の製造における、請求項1〜4のいずれかに記載の二重特異性抗体化合物の使用。
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