RU2779430C2 - Фармацевтическая композиция, содержащая антитело к sost, и ее применения - Google Patents

Abstract

Группа изобретений относится к области фармацевтики и медицины. 1 объект представляет собой фармацевтическую композицию для лечения заболевания или состояния, связанного с SOST, содержащую от 80 до 100 мг/мл антитела к SOST (ген, кодирующий белок склеростин), от 10 до 30 мМ ацетатного буфера, от 45 до 95 мг/мл трегалозы или сахарозы, от 0,3 до 0,6 мг/мл полисорбата 80, от 4,5 до 20 мМ соли кальция, pH составляет от 5,0 до 5,5. 2 и 3 объекты – способ получения и лиофилизированный препарат, содержащий антитело к SOST. 4 и 5 объекты – способ получения и восстановленный раствор, содержащий антитело к SOST. 6 и 7 объекты – применение фармацевтической композиции, или лиофилизированного препарата, или восстановленного раствора в изготовлении лекарственного средства для лечения заболевания или состояния, выбранного из остеопороза, остеопении или остеоартрита, ревматоидного артрита, заболевания пародонта и множественной миеломы, и способ лечения заболевания или состояния. 8 объект – контейнер для лечения заболевания или состояния, связанного с SOST. Технический результат заключается в стабильности при хранении фармацевтических композиций и препаратов, содержащих антитело к SOST. 8 н. и 31 з.п. ф-лы, 11 табл., 9 пр.

Description

Область техники

Настоящее описание относится к области фармацевтических препаратов, в частности к фармацевтической композиции, содержащей антитело к SOST (ген, кодирующий белок склеростин) или его антигенсвязывающий фрагмент, и ее применению в качестве лекарственного средства.

Предшествующий уровень техники

Остеопороз (OP - Osteoporosis), включая постменопаузальный остеопороз (РМО - postmenopausal osteoporosis) и старческий остеопороз, представляет собой системное нарушение метаболизма костной ткани, которое характеризуется малой костной массой и деградацией костной микроструктуры, что приводит к уменьшенной прочности костей, повышенной хрупкости костей и повышенному риску перелома. Согласно статистике, примерно 200 миллионов людей в мире страдают от остеопороза, и его распространенность достигла лидирующих семи из наиболее распространенных заболеваний и часто встречающихся заболеваний. Степень распространенности остеопороза у женщин в Китае в возрасте более 60 лет составляет до 60%, и степень распространенности у мужчин составляет 40-50%.

Помимо традиционных мер, таких как выполнение физических упражнений, прием кальция и витамина D, и распространение информации о том, как предупредить переломы костей, современное медицинское лечение главным образом концентрируется на уменьшении костной резорбции для предупреждения перелома кости. Лекарственные средства против костной резорбции включают кальцитонин, бифосфонаты, средства для заместительной терапии эстрогенами и селективные модуляторы эстрогеновых рецепторов (СМЭР) и т.д. Ингибиторы костной резорбции, представленные бифосфонатами, могут предупреждать дальнейший остеопороз, однако, они не способны реконструировать поврежденные остеопорозом кости. Кроме того, данные ингибиторы костной резорбции также ингибируют остеогенез, вместе с тем, ингибируя костную резорбцию. Гормональные лекарственные средства несут более высокий риск инициации венозного тромбоза и сердечнососудистых заболеваний. Что более важно, анаболические лекарственные средства для костей, в истинном смысле слова, должны не только увеличивать костную массу, но также эффективно улучшать микроструктуру кости и стимулировать остеогенез. Однако, это именно то, чего не могут достичь существующие лекарственные средства против костной резорбции. За последние 15 лет разные медицинские меры, нацеленные на снижение риска перелома, систематически исследовались в клинических испытаниях, при этом все еще существует большая необходимость в эффективных лекарственных средствах. К настоящему времени только лекарственные средства на основе паратиреоидного гормона (ПТГ), как оказалось, стимулируют остеогенез. Однако, очевидны многие недостатки. Например, их воздействие на ремоделирование костей не является длительным, они оказывают небольшой эффект на восстановление перелома костей, ежесуточная чрескожная инъекция, на протяжении вплоть до более чем один год, является необходимой, требуется введение только низкой дозы, высокие затраты и неспособность продолжительного применения на протяжении более чем двух лет; о проблеме, связанной с их безопасностью, было сделано предостережение в черной рамке FDA (Food and Drug Administration - управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов), США, и т.п.

Склеростин служит в качестве новой биологической мишени для разработки лекарственных средств; механизм, который лежит в основе: остеропороз можно лечить посредством регулирования анаболизма остеобластов. Такая мишень заполняет пробелы в области лечения остеопороза посредством регулирования метаболизма костной ткани.

Склеростин представляет собой гликопротеин, секретируемый в результате экспрессии гена SOST, и его аминокислотная последовательность характеризуется 190 остатками и петлевым доменом, содержащим цистеин. Доказано, что он главным образом экспрессируется в клетках костной ткани, с очень низким уровнем экспрессии в остеобластах, хряще, печени, почке, костном мозге, сердце, поджелудочной железе и других местоположениях.

Исследования показали, что склеростин может регулировать остеогенез через ингибирование сигнального пути Wnt посредством связывания с рецептором липопротеинов низкой плотности LRP5/6. В настоящее время лекарственные средства на основе моноклональных антител против мишени, разрабатываемые несколькими компаниями, вошли в III или II фазу клинических испытаний, соответственно. Все клинические данные, предоставленные тремя компаниями, демонстрировали, что механизм, лежащий в основе лечения остеопороза, заключается в регулировании метаболизма костной ткани через мишень, и демонстрировали безопасность и значительную силу. Отчет о клиническом исследовании для антитела против склеростина, Ромосозумаба, предложенного Amgen и UCB, указал на то, что и его безопасность и переносимость являются хорошими, и что плотность костей была значимо повышена в костях, подвергавшихся лечению, по сравнению с контролем. Данное лекарственное средство перешло на III фазу клинических испытаний. Другие два лекарственных средства на основе моноклонального антитела перешли на II фазу клинических испытаний Lilly и Novartis, соответственно. Показаниями к лечению данными антителами являются остеопороз, повреждение костной ткани/родственная остеопатия и т.д. Стоит упомянуть, что некоторые исследования показали, что антитела против склеростина не противоречат лечению с использованием традиционных бисфосфонатов, и данные два лекарственных средства могут быть использованы в сочетании.

Однако лекарственные средства на основе антител имеют большую молекулярную массу, сложные структуры и легко деградируют, полимеризуются или нежелательным образом химически модифицируются. Для того, чтобы сделать антитела подходящими для введения, и для сохранения стабильности и оказания лучшего действия после хранения и на протяжении последующего применения, исследования стабильных препаратов лекарственных средств на основе антител являются особенно важными.

В настоящее время существует много компаний, разрабатывающих фармацевтические препараты, содержащие антитела к SOST, например, WO 2016145961, WO 2012028683, WO 2012135035 и тому подобное. Однако, в отношении новых антител к SOST все еще существует необходимость в разработке фармацевтических композиций (препаратов), содержащих антитела к SOST, которые являлись бы более подходящими для введения.

Краткое описание изобретения

Согласно настоящему описанию предложена фармацевтическая композиция, содержащая антитело к SOST или его антигенсвязывающий фрагмент, и буфер, в которой буфер выбран из группы, состоящей из ацетатного буфера, гистидинового буфера, фосфатного буфера или сукцинатного буфера, предпочтительно ацетатного буфера, более предпочтительно буфера на основе уксусной кислоты и ацетата натрия.

В альтернативном воплощении в фармацевтической композиции концентрация антитела к SOST или его антигенсвязывающего фрагмента (то есть концентрация антитела к SOST или его антигенсвязывающего фрагмента, полученного в буфере) составляет примерно от 1 до 120 мг/мл, предпочтительно примерно от 60 до 120 мг/мл, еще более предпочтительно примерно от 80 до 120 мг/мл, наиболее предпочтительно примерно от 90 до 110 мг/мл, еще более предпочтительно от 80 до 100 мг/мл. Неограничивающие воплощения концентрации включают 90 мг/мл, 91 мг/мл, 92 мг/мл, 93 мг/мл, 94 мг/мл, 95 мг/мл, 96 мг/мл, 97 мг/мл, 98 мг/мл, 99 мг/мл, 100 мг/мл, 101 мг/мл, 102 мг/мл, 103 мг/мл, 104 мг/мл, 105 мг/мл, 106 мг/мл, 107 мг/мл, 108 мг/мл, 109 мг/мл, 110 мг/мл, наиболее предпочтительно примерно 100 мг/мл.

В альтернативном воплощении концентрация буфера составляет примерно от 5 до 30 мМ, предпочтительно примерно от 10 до 20 мМ, неограничивающие воплощения концентрации буфера включают 10 мМ, 12 мМ, 14 мМ, 16 мМ, 18 мМ, 20 мМ, наиболее предпочтительно 10 мМ.

В альтернативном воплощении значение рН буфера в фармацевтической композиции составляет примерно от 4,8 до 5,5, предпочтительно примерно от 5,0 до 5,5, неограничивающее воплощение рН может составлять примерно 5,0, 5,1, 5,2, 5,3, 5,4, 5,5, наиболее предпочтительно примерно 5,0. После приготовления фармацевтической композиции с буфером по настоящему описаниию конечный рН фармацевтической композиции примерно на 0,2-0,3 выше, чем рН буфера. Таким образом, в альтернативном воплощении рН фармацевтической композиции в описании составляет примерно от 4,8 до 5,5, предпочтительно от примерно 5,0 до 5,5. В неограничивающем воплощении рН фармацевтической композиции может составлять примерно 5,0, 5,1, 5,2, 5,3, 5,4, 5,5, наиболее предпочтительно примерно 5,2 или 5,3.

Кроме того, в альтернативном воплощении фармацевтическая композиция также содержит сахарид. Термин "сахарид" по настоящему описанию охватывает общепринятый состав (СН20)п и его производные, включая моносахарид, дисахарид, трисахарид, полисахарид, сахарный спирт, восстанавливающий сахар, невосстанавливающий сахар и т.д., которые могут быть выбраны из группы, состоящей из глюкозы, сахарозы, трегалозы, лактозы, фруктозы, мальтозы, декстрана, глицерина, эритрита, арабита, ксилита, сорбита, маннита, мелибиозы, мелицитозы, маннотриозы, стахиозы, лактулозы, мальтулозы, сорбита, мальтита, лактита, изомальтулозы и т.п. Сахарид предпочтительно представляет собой невосстанавливающий дисахарид, более предпочтительно трегалозу или сахарозу.

В альтернативном воплощении концентрация сахарида в фармацевтической композиции составляет примерно от 40 до 95 мг/мл, предпочтительно примерно от 60 до 90 мг/мл, неограничивающее воплощение концентрации сахарида включает 60 мг/мл, 65 мг/мл, 70 мг/мл, 75 мг/мл, 80 мг/мл, 85 мг/мл, 90 мг/мл, более предпочтительно 80 мг/мл.

В альтернативном воплощении фармацевтическая композиция также включает поверхностно-активное вещество, которое может быть выбрано из группы, состоящей из полисорбата 20, полисорбата 80, полоксамера, Тритон (Triton), додецилсульфоната натрия, лаурилсульфоната натрия, октилгликозида натрия, лаурил-сульфобетаина, миристил-сульфобетаина, линолеил-сульфобетаина, стеарил-сульфобетаина, лаурил-саркозина, миристил-саркозина, линолеил-саркозина, стеарил-саркозина, линолеил-бетаина, миристил-бетаина, цетил-бетаина, лаурил амидопропил-бетаина, кокарамидопропил-бетаина, линолеамидопропил-бетаина, миристамидопропил-бетаина, пальмитоиламидопропил-бетаина, изостеарамидопропил-бетаина, миристамидопропил-диметиламина, пальмитоиламидопропил-диметиламина, изостеарамидопропил-диметиламина, метилкокоацила натрия, двунатриевого метилолеил-таурата, полиэтиленгликоля, полипропиленгликоля и сополимера этилена и пропиленгликоля и т.д. Поверхностно-активное вещество предпочтительно представляет собой полисорбат 80 или полисорбат 20, более предпочтительно полисорбат 80.

В альтернативном воплощении концентрация поверхностно-активного вещества в фармацевтической композиции составляет примерно от 0,02 до 0,8 мг/мл, предпочтительно примерно от 0,3 до 0,6 мг/мл, неограничивающее воплощение концентрации поверхностно-активного вещества включает 0,3 мг/мл, 0,35 мг/мл, 0,4 мг/мл, 0,45 мг/мл, 0,5 мг/мл, 0,55 мг/мл, 0,6 мг/мл, более предпочтительно примерно 0,4 мг/мл.

В альтернативном воплощении фармацевтическая композиция дополнительно содержит модификатор вязкости. Модификатор вязкости может быть выбран из группы, состоящей из соли кальция, хлорида натрия, хлорида магния и аргинин гидрохлорида, и предпочтительно представляет собой хлорид кальция или ацетат кальция.

В альтернативном воплощении концентрация соли кальция в фармацевтической композиции предпочтительно составляет примерно от 4,5 до 20 мМ, предпочтительно примерно от 4,5 до 10 мМ, неограничивающий пример включает 4,5 мМ, 5 мМ, 5,5 мМ, 6,0 мМ, 6,5 мМ, 7,0 мМ, 7,5 мМ, 8,0 мМ, 8,5 мМ, 9,0 мМ, 9,5 мМ, 10 мМ, наиболее предпочтительно составляет примерно 0,4 мг/мл.

В альтернативном воплощении фармацевтическая композиция содержит:

(а) 1-120 мг/мл антитела к SOST или его антигенсвязывающего фрагмента;

(б) 5-30 мМ раствор ацетатного буфера;

(в) 45-95 мг/мл трегалозы;

(г) 0,02-0,8 мг/мл полисорбата 80; и

(д) 4,5-20 мМ раствор соли кальция; предпочтительно рН фармацевтической композиции составляет примерно от 4,8 до 5,5, более предпочтительно составляет примерно от 5,0 до 5,2.

В альтернативном воплощении фармацевтическая композиция содержит:

(а) 90-110 мг/мл антитела к SOST или его антигенсвязывающего фрагмента;

(б) 10-20 мМ раствор ацетатного буфера;

(в) 60-90 мг/мл трегалозы;

(г) 0,3-0,6 мг/мл полисорбата 80; и

(д) 4,5-10 мМ раствор соли кальция; предпочтительно рН фармацевтической композиции составляет от 5,0 до 5,2.

В альтернативном воплощении фармацевтическая композиция содержит:

(а) 100 мг/мл антитела к SOST или его антигенсвязывающего фрагмента;

(б) 10 мМ раствор ацетатного буфера;

(в) 80 мг/мл трегалозы;

(г) 0,4 мг/мл полисорбата 80; и

(д) 4,5 мМ раствор соли кальция; предпочтительно рН фармацевтической композиции составляет 5,0, где ацетатный буфер представляет собой буфер на основе уксусной кислоты и ацетата натрия.

В альтернативном воплощении фармацевтическая композиция содержит:

(а) 80-100 мг/мл антитела к SOST или его антигенсвязывающего фрагмента; и

(б) 10-20 мМ раствор ацетатного буфера, и рН фармацевтической композиции составляет от 5,0 до 5,2.

В альтернативном воплощении фармацевтическая композиция содержит:

(а) 100 мг/мл антитела к SOST или его антигенсвязывающего фрагмента;

(б) 10 мМ буферный раствор на основе уксусной кислоты и ацетата натрия, рН 5,0;

(в) 80 мг/мл трегалозы;

(г) 0,4 мг/мл полисорбата 80; и

(д) 4,5 мМ раствор хлорида кальция.

В альтернативном воплощении антитело к SOST или его антигенсвязывающий фрагмент, находящиеся в фармацевтической композиции, содержит HCDR1, HCDR2 и HCDR3 (HCDR - область, определяющая комплементарность тяжелой цепи), как показано в SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 9 и SEQ ID NO: 5, соответственно; и

LCDR1, LCDR2 и LCDR3 (LCDR - область, определяющая комплементарность легкой цепи), как показано в SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, соответственно.

В альтернативном воплощении антитело к SOST или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи SEQ ID NO: 10 и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 13.

В альтернативном воплощении антитело к SOST или его антигенсвязывающий фрагмент, присутствующие в фармацевтической композиции, выбраны из группы, состоящей из мышиного антитела, химерного антитела, гуманизированного антитела, предпочтительно представляет собой гуманизированное антитело.

В альтернативном воплощении аминокислотная последовательность легкой цепи антитела к SOST, присутствующего в фармацевтической композиции, обладает по меньшей мере 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%-ной идентичностью последовательностей с аминокислотной последовательностью легкой цепи Ab-5, аминокислотная последовательность тяжелой цепи антитела к SOST обладает по меньшей мере 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%-ной идентичностью последовательностей с аминокислотной последовательностью тяжелой цепи Ab-5, последовательность легкой цепи антитела Ab-5 показана в SEQ ID NO: 25 и последовательность тяжелой цепи антитела Ab-5 показана в SEQ ID NO: 22.

Согласно настоящему описанию также предложен способ получения лиофилизированного препарата, содержащего антитело к SOST, включающий этап сублимационной сушки фармацевтической композиции, как описано выше.

В альтернативном воплощении способа получения лиофилизированного препарата, содержащего антитело к SOST, сублимационная сушка включает последовательно предварительное замораживание, первичную сушку и вторичную сушку. Предварительное замораживание представляет собой замораживание при температуре от 5 до минус 40 - минус 50°С, наиболее предпочтительно до минус 45°С, независимо от степени вакуума. Температура для первичной сублимационной сушки составляет от минус 30 до 0°С, наиболее предпочтительно составляет минус 27°С; степень вакуума составляет от 0,05 мбар до 0,2 мбар (20 Па), наиболее предпочтительно составляет 0,1 мбар (10 Па). Температура вторичной сушки составляет от 20 до 30°С, наиболее предпочтительно составляет 25°С, степень вакуума снижается с 0,05-0,2 мбар (20 Па), наиболее предпочтительно 0,1 мбар (10 Па), до 0,005-0,02 мбар (2 Па), наиболее предпочтительно 0,01 мбар (1 Па).

Согласно настоящему описанию дополнительно предложен лиофилизированный препарат, содержащий антитело к SOST, полученный способом получения лиофилизированного препарата, содержащего антитело к SOST, как описано выше.

В некоторых воплощениях лиофилизированный препарат стабилен при 2-8°С на протяжении по меньшей мере 3 месяцев, по меньшей мере 6 месяцев, на протяжении 12 месяцев, по меньшей мере 18 месяцев или по меньшей мере 24 месяцев. В некоторых воплощениях лиофилизированный препарат стабилен при 40°С на протяжении по меньшей мере 7 суток, по меньшей мере 14 суток или по меньшей мере 28 суток.

Согласно настоящему описанию дополнительно предложен способ получения восстановленного раствора, содержащего антитело к SOST, включающий этап восстановления лиофилизированного препарата, как описано выше, где растворитель для восстановления выбран из группы, состоящей из воды для инъекции, физиологического раствора и раствора глюкозы, но не ограничивается ими. Восстановление согласно настоящему описанию означает растворение лиофилизированного белкового препарата в разбавителе (который выбран из группы, состоящей из воды для инъекции, физиологического раствора и раствора глюкозы, но не ограничивается ею), таком, чтобы белок был диспергирован в восстановленном препарате, то есть, чтобы мог быть получен соответствующий восстановленный раствор.

Согласно настоящему описанию дополнительно предложен восстановленный раствор, содержащий антитело к SOST, полученный способом получения восстановленного раствора, содержащего антитело к SOST, как описано выше.

В альтернативном воплощении восстановленного раствора, содержащего антитело к SOST, концентрация антитела к SOST и его антигенсвязывающего фрагмента, составляет от 80 мг/мл до 100 мг/мл; наиболее предпочтительно 100 мг/мл.

В альтернативном воплощении восстановленного раствора, содержащего антитело к SOST, рН восстановленного раствора составляет от 4,8 до 5,5, предпочтительно 5,3.

В альтернативном воплощении восстановленный раствор, содержащий антитело к SOST, дополнительно содержит буфер на основе уксусной кислоты и ацетата натрия, где концентрация буферного раствора на основе уксусной кислоты и ацетата натрия составляет от 10 до 30 мМ, предпочтительно составляет 10 мМ.

В альтернативном воплощении восстановленный раствор, содержащий антитело к SOST, дополнительно содержит дисахарид, когда дисахарид представляет собой трегалозу или сахарозу.

В альтернативном воплощении восстановленного раствора, содержащего антитело к SOST, концентрация дисахарида составляет от 45 до 90 мг/мл, предпочтительно от 75 до 80 мг/мл, наиболее предпочтительно составляет 80 мг/мл.

В альтернативном воплощении восстановленный раствор, содержащий антитело к SOST, дополнительно содержит поверхностно-активное вещество; где поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат, предпочтительно представляет собой полисорбат 80.

В альтернативном воплощении восстановленного раствора, содержащего антитело к SOST, концентрация поверхностно-активного вещества составляет от 0,3 до 0,6 мг/мл, предпочтительно составляет 0,4 мг/мл.

В альтернативном воплощении восстановленный раствор, содержащий антитело к SOST, дополнительно содержит модификатор вязкости, где модификатор вязкости выбран из группы, состоящей из соли кальция, хлорида натрия, хлорида магния и аргинин гидрохлорида, предпочтительно соль кальция выбрана из хлорида кальция или ацетата кальция.

В альтернативном воплощении восстановленного раствора, содержащего антитело к SOST, концентрация раствора соли кальция составляет от 4,5 до 20 мМ, предпочтительно от 4,5 до 10 мМ, наиболее предпочтительно составляет 4,5 мМ.

Настоящее описание дополнительно относится к лиофилизированному препарату, содержащему антитело к SOST, причем лиофилизированный препарат восстанавливают с образованием фармацевтической композиции, как описано выше.

Согласно настоящему описанию дополнительно предложено изделие или набор, содержащий контейнер, содержащий любую из стабильных фармацевтических композиций, описанных в данном документе. В некоторых воплощениях флакон представляет собой инъекционный флакон, сделанный из нейтрального боросиликатного стекла.

Согласно настоящему изобретению дополнительно предложено применение фармацевтической композиции или лиофилизированного препарата, или восстановленного раствора, как описано выше, в изготовлении лекарственного средства для лечения заболеваний или состояний, связанных с SOST, где заболевания или состояния, связанные с SOST, выбраны из группы, состоящей из остеопороза, остеопении или остеоартрита, ревматоидного артрита, заболевания пародонта и множественной миеломы, предпочтительно остеопороза.

Согласно настоящему описанию дополнительно предложен способ лечения и предупреждения заболевания или состояния, связанного с SOST, включающий введение терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции или лиофилизированной композиции, или восстановленного раствора, как описано выше, нуждающемуся в этом пациенту, где заболевание или состояние, связанное с SOST, выбрано из группы, состоящей из остеопороза, остеопении или остеоартрита, ревматоидного артрита, заболевания пародонта и множественной миеломы, предпочтительно остеопороза.

Согласно настоящему описанию дополнительно предложено изделие, содержащее контейнер, содержащий фармацевтическую композицию или лиофилизированный препарат, или восстановленный раствор, как описано выше.

Следует принимать во внимание, что один, некоторые или все признаки разных воплощений, описанных в данном документе, можно дополнительно объединять с получением других воплощений настоящего описания. Эти и другие аспекты описания очевидны специалистам в данной области. Эти и другие воплощения настоящего описания дополнительно описаны посредством следующего подробного описания.

Подробное описание изобретения

Термины

Для того, чтобы сделать данное описание более понятным, ниже конкретно определены некоторые технические и научные термины. Если в данном документе конкретно не определено иное, будет считаться, что все другие технические и научные термины, используемые в данном документе, имеют такое же значение, которое, как правило, понятно обычному специалисту в данной области, к которой принадлежит данное описание.

Термин "буфер" относится к буферу, который устойчив к изменениям в рН, благодаря своему сопряженному компоненту кислота - основание. Примеры буфера, который контролирует рН в таком интервале, включают ацетатный буфер, сукцинатный буфер, глюконатный буфер, гистидиновый буфер, оксалатный буфер, лактатный буфер, фосфатный буфер, цитратный буфер, тартратный буфер, фумаратный буфер, глицил-глициновый буфер и буферы других органических кислот.

"Гистидиновый буфер" относится к буферу, содержащему гистидин-ионы. Примеры гистидиновых буферов включают гистидин-гидрохлоридный буфер, гистидин-ацетатный буфер, гистидин-фосфатный буфер, гистидин-сульфатный буфер и т.д., предпочтительно гистидин-гидрохлоридный буфер. Гистидин-гидрохлоридный буфер получают с помощью гистидина и соляной кислоты или гистидина и гистидин гидрохлорида.

"Цитратный буфер" относится к буферу, который включает цитрат-ионы. Примеры цитратного буфера включают буфер на основе лимонной кислоты и цитрата натрия, буфер на основе лимонной кислоты и цитрата калия, буфер на основе лимонной кислоты и цитрата кальция, буфер на основе лимонной кислоты и цитрата магния и т.п. Предпочтительным цитратным буфером является лимонная кислота-цитрат натрия.

"Сукцинатный буфер" относится к буферу, который включает сукцинат-ионы. Примеры сукцинатного буфера включают буфер на основе янтарной кислоты и сукцината натрия, буфер на основе янтарной кислоты и сукцината калия, буфер на основе янтарной кислоты и сукцината кальция и т.п.Предпочтительный сукцинатный буфер представляет собой буфер на основе янтарной кислоты и сукцината натрия.

"Фосфатный буфер" относится к буферу, который включает фосфат-ионы. Примеры фосфатного буфера включают буфер на основе гидрофосфата натрия и дигидрофосфата натрия и буфер на основе гидрофосфата натрия и дигидрофосфата калия и т.д. Предпочтительный фосфатный буфер представляет собой буфер на основе гидрофосфата натрия и дигидрофосфата натрия.

"Ацетатный буфер" относится к буферу, который включает ацетат-ионы. Примеры ацетатного буфера включают буфер на основе уксусной кислоты и ацетата натрия, буфер на основе уксусной кислоты и гистидина, буфер на основе уксусной кислоты и ацетата калия, буфер на основе уксусной кислоты и ацетата кальция, буфер на основе уксусной кислоты и ацетата магния и т.п.Предпочтительным ацетатным буфером является буфер на основе уксусной кислоты и ацетата натрия.

Термин "модификатор вязкости" представляет собой стандартное фармацевтическое вещество, добавляемое для регуляции вязкости препарата. Модификатор вязкости, на который ссылаются в данном документе, главным образом относится к неорганической соли и соли аминокислоты. Предпочтительно, неорганическая соль выбрана из группы, состоящей из хлорида натрия, хлорида кальция, хлорида магния и ацетата кальция. Предпочтительно, соль аминокислоты выбрана из группы, состоящей из гидрохлорида аргинина, гидрохлорида гистидина, гидрохлорида глицина и ацетата гистидина и т.п.

Термин "фармацевтическая композиция" относится к смеси, содержащей одно или более соединений, описанных в данном документе, или их физиологически/фармацевтически приемлемую соль или их пролекарство с другими химическими компонентами. Указанные другие химические компоненты представляют собой, например, физиологически/фармацевтически приемлемые носители и эксципиенты. Целью фармацевтической композиции является содействие введению в организм, при котором облегчается поглощение активного вещества, по средством чего осуществляется биологическая активность. В том виде, в котором они используются в данном документе, термины "фармацевтическая композиция" и "препарат" не являются взаимоисключающими.

В отношении формы раствора фармацевтической композиции в настоящем описании, если не указано иное, растворитель, включенный в него, представляет собой воду.

"Лиофилизированный препарат" относится к препарату или фармацевтической композиции, полученной посредством вакуумной сублимационной сушки жидкой формы или формы раствора фармацевтической композиции или препарата.

Сублимационная сушка по настоящему описанию включает предварительное замораживание, первую сушку и вторичную сушку. Целью предварительного замораживания является замораживание продукта с получением кристаллического твердого вещества. Температура и скорость для предварительного замораживания являются двумя важными технологическими параметрами. В настоящем описании температура для предварительного замораживания имеет значение -45°С, и скорость предварительного замораживания имеет значение 1°С/мин. Первая сушка также известна как первичная сушка, которая представляет собой главную стадию сублимационной сушки. Целью является удаление льда из продукта при сохранении формы продукта, минимизации повреждения продукта. Если температура и степень вакуумирования для первичного замораживания не будут подходящими, это приведет к разрушению продукта. Более высокая температура и степень вакуумирования будут ускорять эффективность лиофилизации, но в то же время увеличивать риск разрушения продукта. Температура первичной сушки по настоящему описанию может представлять собой общепринятую температуру в данной области, например, от минус 30 до 0°С. Вторичная сушка также известна как аналитическая сушка, которая представляет собой первичный этап удаления связанной воды из продукта посредством предельного вакуума (0,01 мбар (1 Па)) и повышения температуры (20-40°С). Поскольку большинство биологических продуктов чувствительно к температуре, температуру для вторичной сушки выбирают на уровне низкой точки температурного интервала, то есть 25°С. Продолжительность сублимационной сушки связана с морозильной камерой, дозой лиофилизированного препарата и контейнером, содержащим лиофилизированный агент.Специалистам в данной области хорошо известно то, как регулировать продолжительность сублимационной сушки.

В том виде, в котором он используется в данном документе, термин "примерно" относится к величине, которая находится в пределах интервала допустимой погрешности для конкретной величины, как определено одним из обычных специалистов в данной области, которая будет зависеть, частично, от того, как данную величину измеряют или определяют, то есть от ограничений системы измерений. Например, термин "примерно" может означать в пределах 1 или более 1 стандартного отклонения в практике данной области. В качестве альтернативы, термин "примерно" или "состоящий по существу из" может означать интервал вплоть до 20%. Кроме того, особенно в отношении биологических систем или процессов, термины могут означать вплоть до порядка величины или вплоть до 5-кратной величины. При упоминании конкретных величин в заявке и формуле изобретения, если не указано иное, значение термина "примерно" или "состоящий по существу из", как предполагают, будет находиться в пределах интервала приемлемой погрешности для данной конкретной величины.

Фармацевтическая композиция по настоящему описанию может достигать стабильного эффекта: антитело, которое может по существу сохранять свою физическую стабильность и/или химическую стабильность, и/или биологическую активность после хранения; предпочтительно, фармацевтическая композиция по существу сохраняет свою физическую стабильность и химическую стабильность, и биологическую активность после хранения. Срок годности обычно выбран на основе предварительно определенного срока годности фармацевтической композиции. В настоящее время существует целый ряд аналитических методик для измерения стабильности белка, посредством которых измеряют стабильность после хранения на протяжении выбранного периода времени при выбранной температуре.

Стабильный фармацевтический препарат антитела представляет собой препарат, в котором не наблюдают значимого изменения в следующих условиях: хранение при температуре холодильного хранения (2-8°С) в течение по меньшей мере 3 месяцев, предпочтительно 6 месяцев, более предпочтительно 1 года и даже более предпочтительно вплоть до 2 лет. Кроме того, стабильный жидкий препарат включает жидкий препарат, который демонстрирует желательную характеристику при хранении, например, при температуре 25°С на протяжении, например, 1 месяца, 3 месяцев и 6 месяцев, или при 40°С на протяжении 1 месяца. Типичные приемлемые критерии стабильности выглядят следующим образом: обычно деградирует не больше чем примерно 10%, предпочтительно не больше чем примерно 5% мономера антитела, как оценивается посредством эксклюзионной ВЭЖХ (Высокоэффективная жидкостная хроматография). Фармацевтический препарат антитела является бесцветным или прозрачным до слегка опалесцирующего белого при визуальном анализе. Концентрация, рН и осмоляльность препарата характеризуются изменением не больше чем плюс/минус 10%. Обычно, наблюдают не больше чем примерно 10%, предпочтительно не больше чем примерно 5% отбрасывания. Обычно, образуется не больше чем примерно 10%, предпочтительно не больше чем примерно 5% агрегирования.

Антитело "сохраняет свою физическую стабильность" в фармацевтическом препарате, если оно не демонстрирует значимого увеличения агрегирования, осаждения и/или денатурации при визуальном осмотре цвета и/или прозрачности, или как измеряется посредством рассеяния УФ (ультрафиолетового)-света, эксклюзионной хроматографии (SEC - size exclusion chromatography) и динамического рассеяния света (DLS - dynamic light scattering). Изменения конформации белка можно оценивать посредством флуоресцентной спектроскопии (которая определяет третичную структуру белка) и посредством FTIR (Fourier transform infrared spectroscopy - инфракрасная спектроскопия на основе преобразования Фурье) спектроскопии (которая определяет вторичную структуру белка).

Антитело "сохраняет свою химическую стабильность" в фармацевтическом препарате, если оно не демонстрирует значимого химического изменения. Химическую стабильность можно оценить посредством выявления и количественной оценки химически измененных форм белка. Процессы деградации, которые часто изменяют химическую структуру белка, включают гидролиз или усечение (оцениваемое способами, такими как эксклюзионная хроматография и SDS-PAGE (sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis - электрофорез в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия)), окисление (оцениваемое способами, такими как белковое картирование совместно с масс-спектроскопией или MALDI/TOF/MS (matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry - времяпролетная масс-спектрометрия с лазерной десорбцией/ионизацией из жидкой матрицы)), дезамидирование (оцениваемое способами, такими как ионообменная хроматография, капиллярное изоэлектрическое фокусирование, пептидное картирование, измерение уровня изоаспарагиновой кислоты), и изомеризацию (оцениваемую посредством измерения содержания изоаспарагиновой кислоты, пептидного картирования и т.д.).

Антитело "сохраняет свою биологическую активность" в фармацевтическом препарате, если биологическая активность антитела в определенный момент времени находится в пределах предварительно определенного диапазона биологической активности, демонстрируемой в то время, когда был получен фармацевтический препарат.Биологическую активность антитела можно определять, например, посредством анализа связывания антигена.

В том виде, в котором он используется в данном документе, термин "склеростин" или "SOST" или "белок SOST" относится к продукту экспрессии гена склеростина (SOST) (белку). Если особым образом не указано иное, как например о мышином SOST (m-SOST) или о SOST яванского макака (cyno-SOST), данный термин относится к человеческому SOST (h-SOST) в настоящем описании. Нуклеотидные последовательности человеческого, мышиного SOST или SOST яванского макака, используемые в настоящем описании, получают из GenBank, например, NP_079513.1 предоставляет последовательность белка SOST человека.

Трехбуквенные коды и однобуквенные коды для аминокислотных остатков, используемые в данном документе, описаны в J. Biol. Chem. 243, p. 3558 (1968).

Термин "антитело", в том виде, в котором он используется в настоящем описании, относится к иммуноглобулину, который представляет собой структуру четырех пептидных цепей, соединенных вместе межцепочечными дисульфидными связями между двумя идентичными тяжелыми цепями и двумя идентичными легкими цепями.

В настоящем описании легкая цепь антитела по настоящему описанию может дополнительно содержать константную область легкой цепи, содержащую цепь κ, λ человека или мыши, или ее вариант.

В настоящем описании тяжелая цепь антитела по настоящему описанию может дополнительно содержать константную область тяжелой цепи, содержащую IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 человека или мыши, или ее вариант.

Аминокислотные последовательности, размером примерно 110 аминокислот, расположенные рядом с N-концом тяжелой и легкой цепей антитела, являются высоко вариабельными, известные как вариабельная область (область Fv); остальная часть аминокислотных последовательностей рядом с С-концом относительно стабильна, известная как константные области. Вариабельная область включает три гипервариабельные области (HVR - hypervariable region) и четыре относительно консервативные каркасные области (FR - framework region). Три гипервариабельные области, которые определяют специфичность антитела, также известны как области, определяющие комплементарность (CDR - complementarity determining region). Каждая вариабельная область легкой цепи (LCVR - light chain variable region) и каждая вариабельная область тяжелой цепи (HCVR - heavy chain variable region) состоит из трех областей CDR и четырех областей FR, причем последовательный порядок от N-конца до С-конца является следующим: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 и FR4. Три области CDR легкой цепи относятся к LCDR1, LCDR2 и LCDR3; три области CDR тяжелой цепи относятся к HCDR1, HCDR2 и HCDR3. Число и положение аминокислотных остатков CDR в областях LCVR и HCVR антитела или антигенсвязывающих фрагментов в данном документе соответствует известным критериям нумерации Kabat (LCDR1-3, HCDE2-3) или соответствует критериям нумерации Kabat и Chothia (HCDR1).

Антитело по настоящему описанию включает мышиное антитело, химерное антитело или гуманизированное антитело, предпочтительно гуманизированное антитело.

Термин "мышиное антитело" в настоящем описании относится к моноклональному антителу против человеческого SOST, полученному в соответствии со знанием и с умениями данной области. Во время получения тестируемому субъекту инъецируют антиген SOST, и затем отделяют гибридому, экспрессирующую антитело, имеющее желаемую последовательность или функциональные свойства.

Термин "химерное антитело" представляет собой антитело, которое образовано слиянием вариабельной области мышиного антитела с константной областью человеческого антитела, и данное химерное антитело может облегчать иммунный ответ, который вызван мышиным антителом. Для конструирования химерного антитела создают гибридому, которая секретирует специфичное мышиное моноклональное антитело, и затем гены вариабельной области клонируют из клеток гибридомы мыши. Затем по желанию клонируют гены константной области человеческого антитела. Ген вариабельной области мыши лигируют с геном константной области человека с образованием химерного гена, который может быть вставлен в человеческий вектор, и, наконец, молекула химерного антитела экспрессируется в эукариотической или прокариотической промышленной системе. В предпочтительном воплощении настоящего описания легкая цепь химерного антитела к SOST дополнительно содержит константные области легкой цепи κ, λ цепи человека или их вариант. Тяжелая цепь химерного антитела к SOST дополнительно содержит константные области тяжелой цепи человеческого IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 или их вариант.

Термин "гуманизированное антитело", также известное как антитело с привитыми CDR, относится к антителу, созданному посредством прививания мышиных последовательностей CDR в каркас вариабельной области человеческого антитела, а именно, антитело, образованное из разных типов последовательностей каркаса антитела зародышевой линии человека. Гуманизированное антитело преодолевает недостаток сильного антительного ответа, вызываемого химерным антителом, которое несет большое количество мышиных белковых компонентов. Такие последовательности каркаса могут быть получены из общедоступной базы данных ДНК, охватывающей последовательности генов антител зародышевой линии, или из опубликованных референсных последовательностей. Например, ДНК-последовательности зародышевой линии генов вариабельных областей тяжелой и легкой цепи человека могут быть найдены в базе данных последовательностей зародышевой линии человека "VBase" (доступна на вебсайте www.mrccpe.com.ac.uk/vbase), а также могут быть найдены в Kabat, ЕА, et al, 1991 Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Для того, чтобы избежать снижения активности с уменьшением иммуногенности, последовательности каркаса в вариабельной области человеческого антитела подвергают минимальным реверсивным мутациям или обратным мутациям для сохранения активности. Гуманизированное антитело по настоящему описанию также включает гуманизированное антитело, на котором выполняется созревание аффинности CDR посредством фагового дисплея.

Термины "антитело против склеростина", "антитело, специфично связывающееся с человеческим склеростином", "антитело против SOST", "антитело к SOST" и "антитело, связывающееся с SOST" в настоящем описании относятся к антителу, которое способно связываться с SOST с достаточной аффинностью, таким образом, что антитело можно использовать в качестве диагностического средства и/или терапевтического средства для нацеливания на SOST.

Термин "связывание с SOST" в настоящем описании относится к способности взаимодействия с человеческим SOST.

В том виде, в котором он используется в данном документе, термин "специфичное связывание с" определяется методиками, доступными в данной области, такими как конкурентный ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay - твердофазный иммуноферментный анализ), анализ BIACORE® или анализ KINEXA®. Например, термин также применим для случая, в котором антигенсвязывающий домен антитела по описанию является специфичным в отношении конкретного эпитопа, который несут многие антигены. В таких случаях антитело, несущее антигенсвязывающий домен, может специфично связываться с множеством антигенов, несущих такой эпитоп.

Термин "антигенсвязывающий фрагмент", упоминаемый в настоящем описании, относится к Fab фрагменту или F(ab')2 фрагменту, обладающему антигенсвязывающей активностью, а также фрагменту scFv (single-chain variable fragment - одноцепочечный вариабельный фрагмент), связывающемуся с человеческим SOST, и другим фрагментам, способным связываться с человеческим SOST, используя VH и VL антитела к SOST; Он содержит одну или более областей CDR антител, описанных в настоящем описании, выбранных из группы, состоящей из SEQ ID NO: 3-9. Фрагмент Fv содержит вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, без константной области, и он представляет собой минимальный фрагмент антитела, обладающий всеми антигенсвязывающими сайтами. Обычно, антитело Fv дополнительно содержит полипептидный линкер между доменами VH и VL, и способно образовывать структуру, необходимую для связывания антигена. Также, разные линкеры можно использовать для соединения вариабельных областей двух антител с образованием полипептидной цепи, называемой одноцепочечным антителом или одноцепочечным Fv (scFv).

Термин "эпитоп" относится к части, расположенной в антигене, которая может распознаваться и с которой может связываться одно или более антител.

"Консервативные модификации" или "консервативное замещение или замена" относится к заменам аминокислот в белке другими аминокислотами, имеющими похожие характеристики (например, заряд, размер боковой цепи, гидрофобность/гидрофильность, конформация главной цепи и жесткость и т.п.), таким образом, что изменения часто могут быть внесены без изменения биологической активности данного белка. Специалисты в данной области признают, что, в общем, единичная аминокислотная замена в заменимых областях полипептида существенно не меняет биологическую активность (см., например, Watson et al. (1987) Molecular Biology of the Gene, The Benjamin/Cummings Pub. Co., p.224 (4.sup.th Ed.)) Кроме того, замены структурно или функционально похожих аминокислот с меньшей вероятностью нарушат биологическую активность.

Термин "идентичность аминокислот" относится к сходству последовательностей у двух белков или у двух полипептидов. Когда положение в обеих двух последовательностях, подлежащих сравнению, занято одним и тем же аминокислотным остатком, например, если положение в каждом из двух полипептидов занято идентичным аминокислотным остатком, молекулы являются идентичными в таком положении. Примерами алгоритмов, подходящих для определения идентичности последовательностей, выраженной в процентах, и сходства последовательностей, выраженного в процентах, являются алгоритмы BLAST и BLAST 2.0, которые описаны в Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 215: 403-410 и Altschul et al. (1977) Nucleic Acids Res. 25:3389-3402, соответственно. Программы для проведения BLAST анализов общедоступны в Национальном центре биотехнологической информации (www.ncbi.nlm.nih.gov/).

Способы получения и очистки антител и антигенсвязывающих фрагментов хорошо известны в данной области и могут быть найдены, например, в руководстве по экспериментальным технологиям с антителами Колд-Спринг-Харбор, главы 5-8 и 15. Антитела или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему описанию генетически модифицированы для введения одной или более чем одной каркасной области человека (FR) в область CDR, происходящую не из человека. Последовательности FR зародышевой линии человека могут быть получены посредством сравнения базы данных с генами вариабельных областей антител зародышевой линии человека FMGT и программы МОЕ, из ImMunoGeneTics (FMGT) через их веб-сайт http://imgt.cines.fr или из The Immunoglobulin FactsBook, 2001ISBN012441351.

Сконструированные антитела или антигенсвязывающие фрагменты по настоящему описанию могут быть получены и очищены традиционными способами. Например, последовательности кДНК (комплементарная ДНК), кодирующие тяжелую цепь и легкую цепь, можно клонировать и подвергать рекомбинации в экспрессионный вектор GS. Рекомбинантным экспрессионным вектором иммуноглобулина можно затем стабильно трансфицировать клетки СНО (Chinese Hamster Ovary lines - линии клеток яичника китайского хомяка). В качестве более рекомендованного способа, хорошо известного в данной области, системы экспрессии млекопитающих будут приводить к гликозилированию антител, обычно на высококонсервативном N-конце в области Fc. Стабильные клоны могут быть получены посредством экспрессии антитела, специфично связывающегося с человеческим SOST. Позитивные клоны могут быть размножены в культуральной среде, не содержащей сыворотку, для получения антител в биореакторах. Культуральную среду, в которую секретировалось антитело, можно очищать традиционными методиками. Например, среду можно с удобством очищать посредством колонки на основе сефарозы FF с белком А или G, которую уравновешивали скорректированным буфером. Колонку промывают для удаления неспецифичных связывающих компонентов. Связанное антитело элюируют посредством градиента рН, и фрагменты антитела выявляют посредством SDS-PAGE и затем объединяют. Антитело можно фильтровать и концентрировать с использованием обычных методик. Растворимую смесь и мультимеры можно также эффективно удалять обычными методиками, включая молекулярное сито или ионный обмен. Полученный продукт может быть сразу же заморожен, например, при минус 70°С, или может быть лиофилизирован.

Термин "введение" и "обработка", при применении к животному, человеку, экспериментальному субъекту, клетке, ткани, органу или биологической жидкости, относится к приведению экзогенного фармацевтического, терапевтического, диагностического средства или композиции в контакт с животным, человеком, субъектом, клеткой, тканью, органом или биологической жидкостью. Термин "введение" и "обработка" может относиться, например, к терапевтическим, фармакокинетическим, диагностическим, исследовательским и экспериментальным способам. Обработка клетки охватывает приведение реагента в контакт с клеткой, а также приведение реагента в контакт с жидкостью, где данная жидкость находится в контакте с клеткой. Термин "введение" и "обработка" также означает обработки in vitro или ex vivo, например, клетки реагентом, диагностическим, связывающим соединением или другой клеткой. Термин "лечение", в том виде, в котором он применяется к субъекту-человеку, субъекту ветеринарии или исследования, относится к терапевтическому лечению, профилактическим или превентивным мерам, к исследовательским и диагностическим применениям.

Термин "лечить" означает вводить терапевтическое средство, такое как композиция, содержащая любое из связывающих соединений по настоящему описанию, внутрь или наружно пациенту, имеющему один или более чем один симптом заболевания, в отношении которого данное средство обладает известной терапевтической активностью. Типично средство вводят в количестве, эффективном для облегчения одного или более чем одного симптома заболевания у пациента или популяции, подлежащих лечению, таким образом, чтобы вызывать регрессию или ингибировать развитие такого(их) симптома(ов) до какой-либо клинически измеряемой степени. Количество терапевтического средства, которое является эффективным для облегчения какого-либо определенного симптома заболевания (также называемое "терапевтически эффективным количеством"), может варьировать в соответствии с факторами, такими как течение заболевания, возраст и масса пациента, и способность лекарственного средства вызывать желаемый ответ у пациента. Был ли облегчен симптом заболевания можно оценить посредством любого клинического измерения, обычно используемого лечащими врачами или другими квалифицированными медицинскими работниками, для оценки тяжести или статуса прогрессирования того симптома. В то время как воплощение настоящего описания (например, способ лечения или изделие производства) может не быть эффективным в облегчении исследуемого(ых) симптома(ов) заболевания у каждого пациента, оно должно облегчать исследуемый(е) целевой(ые) симптом(ы) заболевания у статистически значимого числа пациентов, как определено любым статистическим критерием, известным в данной области, таким как t-критерий Стьюдента, критерий хи-квадрат, U-критерий Манна - Уитни, критерий Краскела - Уоллиса (Н-критерий), критерий Джонкхира-Терпстры и критерий Уилкоксона.

Термин "эффективное количество" охватывает количество, достаточное для смягчения или предупреждения симптома или признака медицинского состояния. Эффективное количество также означает количество, достаточное для обеспечения возможности или облегчения диагностирования. Эффективное количество для конкретного пациента или субъекта ветеринарии может варьировать в зависимости от факторов, таких как состояние, подлежащее лечению, общее здоровье пациента, путь и доза введения и тяжесть побочных эффектов. Эффективное количество может представлять собой максимальную дозу или протокол дозирования, который позволяет избежать значительных побочных эффектов или токсичных действий.

Термин "значение Tm" относится к средней точке термической денатурации белка, а именно, к температуре, при которой половина белка является несвернутой, и пространственная структура белка разрушена. Таким образом, чем выше значение Tm, тем выше будет термостабильность белка.

Воплощения и Примеры анализа

Далее в данном документе настоящее описание дополнительно описано со ссылкой на примеры. Однако, объем настоящего описания не ограничивается ими.

В примерах или примерах анализов настоящего описания, где не описаны конкретные условия, эксперименты обычно проводят в общепринятых условиях или в соответствии с условиями, предложенными производителем сырья или продукта. Когда источник реагентов конкретно не приведен, реагенты представляют собой имеющиеся в продаже традиционные реагенты.

Воплощения

Способы получения и очистки антигена SOST и антител по настоящей заявке раскрыты в WO 2016145961, с датой подачи заявки 16 февраля, 2016 года, и номером заявки PCT/CN 2016/073857, полное содержание которой включено в данный документ посредством ссылки.

Воплощение 1. Получение моноклонального антитела против человеческого SOST Моноклональное антитело против человеческого SOST получают посредством иммунизации мышей. Используют экспериментальных белых мышей SJL, самок, 6-недельного возраста (Beijing Weitong Lihua Experimental Animal Technology Co., Ltd., номер лицензии на производство животных: SCXK (Пекин) 2012-0001). Среда кормления: уровень SPF (specific pathogen free - свободный от специфической патогенной микрофлоры). После приобретения мышей животных держат в лаборатории на протяжении 1 недели, с 12/12-часовым циклом свет/темнота, при температуре 20-25°С и с влажностью 40-60%. Мышей, которые были адаптированы к данной окружающей среде, делили на две группы (А/В), с 10 мышами в каждой группе.

Рекомбинантный белок SOST с His-меткой (His-h-метка) используют в качестве иммуногена. В группе А адъювант Фрейнда (Sigma, номер партии: F5881/F5506) используют для получения эмульсии. Первую иммунизацию проводят с полным адъювантом Фрейнда (CFA - Freund's complete adjuvant), и остальные повторные иммунизации проводят с неполным адъювантом Фрейнда (IFA - Freund's incomplete adjuvant). Соотношение антигена и адъюванта составляло 1:1, 200 мкл/200 мкг/мышь (первая иммунизация), и 200 мкл/100 мкг/мышь (повторная иммунизация). В группе В перекрестную иммунизацию проводили с Titermax (Sigma, номер партии: Т2684) и Alum (Thermo, номер партии: 77161). Соотношение антигена и адъюванта (titermax) составляло 1:1, и соотношение антигена и адъюванта (Alum) составляло 3:1, 200 мкл/200 мкг/мышь (первая иммунизация), и 200 мкл/100 мкг/мышь (повторная иммунизация). Антиген эмульгируют и инокулируют в сутки 0, 14, 28, 42 и 56.

В сутки 0 мышам в группе А/В внутрибрюшинно (в.б.) инъецируют 50 мкг/мышь эмульгированного антигена. В сутки 14 мышам подкожно (п.к.) инъецируют 25 мкг/мышь в несколько мест (обычно 6-8 мест на спине). В сутки 28 и 42 либо инъекцию в спину, либо внутрибрюшинную инъекцию антигена выбирают в соответствии с шишечками на спине и отечными состояниями в области живота. Повторную иммунизацию проводят посредством внутрибрюшинной инъекции (в.б.) раствора антигена, приготовленного с помощью физиологического раствора, в количестве 200 мкг/мышь, за 3 суток до слияния спленоцитов.

Анализ крови проводят на 22, 36, 50 и 64 сутки, и активность связывания мышиной сыворотки с человеческим склеростином измеряют посредством метода ELISA, как описано в Примере анализа 1, и результаты показаны в Таблице 1. После четвертой иммунизации мышей с высоким титром в крови, тяготеющим к платформе, отбирают для слияния спленоцитов. Клетки гибридомы получают в результате слияния спленоцитов с клетками миеломы Sp2/0 (ATCC®CRL-8287™) посредством использования оптимизированного способа слияния, опосредованного ПЭГ (полиэтиленгликоль). Активность антитела против человеческого SOST в мышиной сыворотке в отношении блокирования связывания человеческого SOST с человеческим LRP-6 выявляют в соответствии с Примером анализа 2, и отбирают гибридомную клеточную линию, производящую моноклональные антитела, с хорошей активностью in vitro, Ab-1. Результаты показаны в Таблице 1.

Воплощение 2. Гуманизация мышиного антитела против человеческого склеростина

Отбирают гибридомную клеточную линию, производящую моноклональные антитела, с хорошей активностью in vitro, Ab-1. Последовательности моноклонального антитела клонируют, и в дальнейшем осуществляют их гуманизацию, оценку рекомбинантной экспрессии и активности.

Способ секвенирования гибридомы осуществляют следующим образом. Клетки гибридомы собирают в логарифмическую фазу роста, и РНК выделяют Тризолом (Invitrogen, кат. №15596-018, в соответствии с инструкциями к набору), и затем проводят обратную транскрипцию (Обратная транскриптаза PrimeScript™, Takara, кат. №2680А) РНК в соответствии с указаниями. кДНК, полученную в результате обратной транскрипции, амплифицируют посредством ПЦР с использованием набора праймеров к мышиному Ig (Novagen, ТВ326 Rev.В 0503), и секвенирование проводят в компании по секвенированию. Аминокислотные последовательности, соответствующие полученным ДНК-последовательностям, показаны в виде SEQ ID NO: 1 и SEQ ID NO: 2:

Вариабельная область тяжелой цепи, полученная из клеток гибридомы:

Вариабельная область легкой цепи, полученная из клеток гибридомы:

Гуманизацию мышиного моноклонального антитела против человеческого SOST проводят, как раскрыто во многих литературных источниках в данной области. Кратко, домен константной области исходного антитела (мышиное антитело) заменяют доменом константной области человека, и антитело зародышевой линии человека отбирают в соответствии с гомологией между мышиным и человеческим антителом. Осуществляют гуманизацию молекул - кандидатов, демонстрирующих хорошую активность в настоящем описании, и результаты выглядят следующим образом:

1. Области CDR мышиного антитела против склеростина

Аминокислотные остатки CDR VH/VL идентифицируют и аннотируют в соответствии с системой нумерации Kabat.

Последовательности CDR мышиного Ab-1 по настоящему описанию описаны в Таблице 2:

2. Отбор последовательности области FR зародышевой линии человека

На основе типичной структуры CDR VH/VL полученного мышиного антитела последовательности вариабельных областей тяжелой и легкой цепи сравнивают с базой данных антител зародышевой линии, и отбирают матрицу зародышевой линии человека с высокой гомологией, где каркасная область легкой цепи зародышевой линии человека происходила из гена легкой цепи каппа человека, и предпочтительно в настоящем описании отбирают IGKV1-39*01 или IGKV4-1*01 матрицы легкой цепи зародышевой линии человека. Каркасная область тяжелой цепи зародышевой линии человека происходила из тяжелой цепи человека, и предпочтительно, в настоящем описании отбирают IGHV1-18*01 матрицы тяжелой цепи зародышевой линии человека. Области CDR мышиного антитела Ab-1 прививают в отобранную гуманизированную матрицу, заменяя гуманизированную вариабельную область, и затем осуществляют рекомбинацию с константной областью IgG На основе трехмерной структуры мышиного антитела обратные мутации осуществляют на захваченных остатках, на остатках, которые прямо взаимодействуют с областями CDR, а также остатках, которые оказывают важное действие на конформацию VL и VH, и остатки в областях CDR, которые демонстрируют химическую нестабильность, оптимизируют (CDR2 тяжелой цепи оптимизируют с получением новой последовательности CDR2 тяжелой цепи

, SEQ ID NO: 9), и наконец, получают гуманизированную молекулу. Последовательности вариабельных областей тяжелой цепи гуманизированной молекулы показаны в SEQ ID NO: 10-12, и возможно данные последовательности можно объединять с любой из константных областей тяжелой цепи, показанных в SEQ ID NO: 16-18. Последовательности вариабельных областей легкой цепи гуманизированной молекулы показаны в SEQ ID NO: 13-15, и данные последовательности можно объединять с последовательностями константных областей легкой цепи, показанными в SEQ ID NO: 19, соответственно.

1). Вариабельная область тяжелой цепи:

Вариабельная область тяжелой цепи Ab-5:

Вариабельная область тяжелой цепи Ab-9:

Вариабельная область тяжелой цепи Ab-10:

2) Константная область тяжелой цепи каждого антитела, возможно, выбрана из следующих последовательностей:

Константная область тяжелой цепи человеческого IgG4 (К отсутствует):

Константная область тяжелой цепи человеческого IgG4:

Константная область тяжелой цепи человеческого IgG2:

3) Вариабельная область легкой цепи: Вариабельная область легкой цепи Ab-5:

Вариабельная область легкой цепи Ab-9:

Вариабельная область легкой цепи Ab-10:

Константная область легкой цепи из человеческой цепи к:

Антитела клонируют, экспрессируют и очищают посредством клонирования генов и рекомбинантной экспрессии, и затем выявляют посредством анализа связывания ELISA, анализа блокирования связывания антиген-рецептор, Biacore, выявления клеточной активности и т.д. Наконец, гуманизированные антитела с наилучшей активностью, Ab-5, Ab-9 и Ab-10, отбирают, и данные последовательности показаны ниже:

Гуманизированное антитело Ab-10:

Тяжелая цепь:

Легкая цепь:

Гуманизированное антитело Ab-9:

Тяжелая цепь:

Легкая цепь:

Гуманизированное антитело Ab-5:

Тяжелая цепь:

Примечание: К на конце последовательности тяжелой цепи гуманизированного антитела Ab-5 может быть отщеплена во время экспрессии антитела, таким образом К может присутствовать или отсутствовать на конце тяжелой цепи конечного продукта, но это не будет влиять на эффективность самого продукта.

Легкая цепь:

Иллюстративный способ получения фармацевтических композиций (препаратов), содержащих антитело

Этап 1: Получение раствора лекарственного вещества, содержащего антитело к SOST, с антителом к SOST (таким как Ab-5) и стабильным(ми) агентом(ами), фильтрование и отбор образцов раствора для анализа стерильности. Раствор лекарственного вещества пропускают через 0,22 мкм фильтр на основе ПВДФ (поливинилиденфторид), и собирают фильтрат.

Этап 2: Доведение фильтрата до загрузочного объема 1,1 мл и загрузка фильтрата во флакон, объемом 2 мл, с пробкой; и выявление различий в объеме посредством отбора образцов в начале, середине и конце процедуры загрузки, соответственно.

Этап 3: Укупорка алюминиевым колпачком посредством использования укупорочной машины.

Этап 4: Выполнение визуального осмотра для подтверждения того, имеет ли место какой-либо дефект, такой как неточная загрузка. Печать и наклеивание этикетки на флакон. Помещение флаконов на бумажный лоток, печать и наклеивание этикетки на бумажном лотке.

Воплощение 3. Скрининг буферной системы

Образцы препаратов, содержащего антитело к SOST Ab-5, с концентрацией белка 80 мг/мл получали, используя следующий буфер:

1) 10 мМ раствор уксусной кислоты и ацетата натрия, рН 5,0

2) 10 мМ раствор гистидина и уксусной кислоты, рН 5,0

3) 10 мМ раствор гистидина и уксусной кислоты, рН 5,5

4) 10 мМ раствор гидрофосфата натрия и лимонной кислоты, рН 5,5

5) 10 мМ раствор гидрофосфата натрия и лимонной кислоты, рН 7,0

6) 10 мМ раствор гидрофосфата натрия и лимонной кислоты, рН 7,5

Когда антитело к SOST Ab-5 помещают в буфер с рН 7,0 и 7,5, белок полностью осаждался. В сочетании с его интервалом изоэлектрической точки, это указывает на то, что рН буфера не должен быть выше, чем 5,5.

Образцом успешно помещенного препарата наполняют 2 мл флакон, в объеме 1,5 мл/флакон, герметично закрывают пробкой из хлорбутилкаучука и встряхивают (25°С, 300 об/мин) для отслеживания стабильности. После встряхивания на протяжении 3 суток, система гидрофосфат натрия-лимонная кислота (рН 5,5) была также полностью мутной. Система гистидин-уксусная кислота выглядела молочно-белой после встряхивания, и система уксусной кислоты демонстрировала небольшое количество осадка. Чистота на основе SEC значимо не изменялась в обеих системах. Таким образом, буферная система для препарата антитела к SOST может представлять собой систему гистидин-уксусная кислота или систему уксусная кислота-ацетат натрия, и интервал рН должен составлять 5,0-5,5. Среди них система уксусная кислота-ацетат натрия (рН 5,0) является относительно лучшей буферной системой. См. Таблицу 3:

Образцы препарата антитела к SOST с концентрацией белка 85 мг/мл получали, используя следующий буфер:

1) 10 мМ раствор уксусной кислоты и ацетата натрия, рН 4,8

2) 10 мМ раствор уксусной кислоты и ацетата натрия, рН 5,0

3) 10 мМ раствор уксусной кислоты и ацетата натрия, рН 5,2

4) 30 мМ раствор уксусной кислоты и ацетат натрия, рН 5,0

5) 10 мМ раствор янтарной кислоты и сукцината натрия, рН 5,0

Образцом препарата наполняют флакон, объемом 2 мл, в объеме 1,5 мл/флакон, герметично закрывали пробкой из хлорбутилкаучука и встряхивали (25°С, 300 об/мин) и освещают (4500 лк) для отслеживания стабильности. После встряхивания на протяжении 3 суток система 10 мМ раствора уксусной кислоты и ацетата натрия (рН 4,8) и система 10 мМ раствора янтарной кислоты и сукцината натрия (рН 5.0) были полностью мутными. Стабильность системы 10 мМ раствора уксусной кислоты и ацетата натрия (рН 5,0) и 30 мМ раствора уксусной кислоты и ацетата натрия (рН 5.0) были относительно хорошими, и не было значимого различия между данными двумя системами. После 10 суток светового воздействия чистота главного пика ГЕС (ion exchange chromatography - ионообменная хроматография) антитела к SOST, содержащегося в системах 10 мМ растовора уксусной кислоты и ацетата натрия (рН 5,0) и 10 мМ раствора уксусной кислоты и ацетата натрия (рН 5,2), уменьшалась меньше чем в других трех группах. Таким образом, оптимальной буферной системой для препарата антитела к SOST является система раствора уксусной кислоты и ацетата натрия, и концентрация может составлять 10-30 мМ, предпочтительно 10 мМ, и рН должен быть выше, чем 4,8.

Воплощение 4. Скрининг сахаридов в препарате

Растворы антитела к SOST получают в 10 мМ растворе буфера на основе янтарной кислоты и сукцината натрия, рН 5,5, где концентрация белка Ab-5 составляет 1 мг/мл и растворы содержат 4,5%, 6%, 7,5% и 9% α,α-дигидрата трегалозы или 6% сахарозы, соответственно. Термостабильность антитела к SOST, содержащегося в разных препаратах, измеряют посредством дифференциальной сканирующей калориметрии (ДСК). Результаты показывают, что исходная температура денатурации (Тm_начал) антитела к SOST Ab-5 постепенно возрастала с возрастанием концентрации сахарида; и Тm_начал в трегалозе была значительно выше, чем Тm_начал сахарозы. Можно предположить, что антитело к SOST обладает лучшей термостабильностью в препарате с относительно более высокой концентрацией трегалозы.

Принимая во внимание осмотическое давление, требуемое для инъекционного раствора, 8% α,α-дигидрата трегалозы считается наиболее предпочтительным условием.

Воплощение 5. Скрининг модификаторов вязкости в препарате

Для уменьшения вязкости препарата следующие модификаторы вязкости добавляют к раствору, содержащему 30 мг/мл антитела к SOST, 10 мМ раствор буфера на основе уксусной кислоты и ацетата натрия, рН 5,0, соответственно, для определения того, может ли быть снижена вязкость и улучшена эффективность ультрафильтрации.

1) 90 мг/мл α,α-дигидрата трегалозы

2) 70 мг/мл α,α-дигидрата трегалозы плюс 40 мМ раствор хлорида натрия

3) 90 мг/мл α,α-дигидрата трегалозы плюс 10 мМ раствор хлорида натрия

4) 90 мг/мл α,α-дигидрата трегалозы плюс 10 мМ раствор хлорида магния

5) 150 мМ раствор хлорида натрия

6) 140 мМ раствор гидрохлорида аргинина

7) 10 мМ раствор ацетата кальция

8) 20 мМ раствор хлорида кальция

9) 4,5 мМ раствор хлорида кальция

Результаты экспериментов показали, что сахарид не помогал улучшить эффективность ультрафильтрации. Хлорид натрия и гидрохлорид аргинина могут повышать эффективность ультрафильтрации умеренно, в то время как соли кальция и магния значительно улучшали эффективность ультрафильтрации. Среди них концентрация соли кальция могла находиться в интервале от 4,5 до 20 мМ, и не было значимого различия в эффективности ультрафильтрации в данном интервале.

Воплощение 6. Скрининг поверхностно-активных веществ в препарате

Образцы препарата антитела к SOST, содержащие разные концентрации белка, получают в буферах с разными концентрациями или типами поверхностно-активных веществ, где буфер содержит 10 мМ раствор уксусную кислоту-ацетат натрия (рН 5,0), 4,5 мМ раствор хлорида кальция, 80 мг/мл α,α-дигидрата трегалозы. Схему эксперимента и анализ выполняли посредством DoE, объем выглядит следующим образом:

1) Концентрация белка: 80~100 мг/мл

2) Тип поверхностно-активного вещества: Полисорбат 20 (PS20), Полисорбат 80 (PS80)

3) Концентрация полисорбата: 0,02~0,8 мг/мл

Препараты добавляют в 1 мл шприц для введения BD в количестве 1,2 мл/ветвь, и встряхивают в условиях 25°С/300 об/мин/12 суток. Результаты показывают что, не было значимого изменения в чистоте, определяемой посредством анализов SEC, CE-SDS (Capillary Electrophoresis-Sodium Dodecyl Sulfate - капиллярный электрофорез в присутствии додецилсульфата натрия) в невосстанавливающих условиях и IEC, после 12 суток встряхивания. Результаты демонстрируют хорошую совместимость препаратов антитела к SOST с устройством доставки лекарственного средства. В то же время MFI (mean fluorescent intensity - средняя интенсивность флуоресценции) использовали для выявления количества частиц, невидимых невооруженным глазом, размером больше чем 2 мкм и их изменений, показывая значимые различия между разными препаратами. Согласно результатам подгонки DoE (эффективная модель подгонки), увеличение количества частиц можно контролировать в пределах 500 посредством использования полисорбата 80 и концентрации белка выше, чем 96 мг/мл. Кроме того, кода концентрация полисорбата 80 была установлена на уровне примерно 0,3-0,6 мг/мл, количество частиц в препарате было по меньшей мере в 0 точке.

Воплощение 7. Исследование стабильности ингредиентов препарата

Ab-5 получают в количестве 100 мг/мл в 10 мМ растворе буфера на основе уксусной кислоты и ацетата натрия (рН 5,0), содержащем 4,5 мМ раствора хлорид кальция, 80 мг/мл α,α-дигидрата трегалозы или сахарозы, 0,4 мг/мл полисорбата 20 или 80. Препаратом наполняют флакон, объемом 2 мл, в количестве 1,5 мл/бутыль, герметично закрывают пробкой из хлорбутилкаучука и помещают при 25°С и 2-8°С, соответственно, для отслеживания стабильности. Результаты показывают, что большое количество маленьких частиц появлялось в препарате, содержащем полисорбат 20, после помещения в температуру 2-8°С на 6 месяцев, что не подходило для препарата антитела к SOST Ab-5. В отношении препарата, содержащего полисорбат 80, не было значимого различия между трегалозой и сахарозой, и препарат демонстрировал хорошую стабильность при 25°С на протяжении 3 месяцев или при 2-8°С на протяжении 6 месяцев.

Воплощение 8. Лиофилизация препаратов

Образцы препаратов антитела к SOST получают в буфере, содержащем 10 мМ раствор уксусной кислоты и ацетата натрия рН 5,0, 80 мг/мл трегалозы, 0,4 мг/мл полисорбата 80 и 4,5 мМ раствор хлорида кальция, и концентрация белка антитела к SOST составляла 100 мг/мл. Препаратом наполняют флакон, объемом 2 мл, в количестве 1,1 мл/флакон, помещают в камеру для лиофилизации и лиофилизируют. Процедура лиофилизации включает предварительное замораживание, первичную сушку и вторичную сушку. После окончания процедуры лиофилизации пробку вставляют под вакуумом. Восстановленные образцы сравнивают с образцами до и после процедуры лиофилизации. Результаты показали, что восстановленные растворы сохраняют хорошую эффективность жидкого препарата.

Воплощение 9. Альтернативные препараты

Стабильный фармацевтический препарат, предложенный настоящим описанием, может также представлять собой стабильную комбинацию, выбранную из следующих:

(1) 120 мг/мл антитела к SOST Ab-5, 95 мг/мл трегалозы, 0,5 мг/мл полисорбата 80, 5 мМ раствора буфера на основе уксусной кислоты и ацетата натрия и 15 мМ раствора хлорида кальция, конечный рН 5,5;

(2) 120 мг/мл антитела к SOST Ab-5, 95 мг/мл трегалозы, 0,5 мг/мл полисорбата 80, 5 мМ раствора буфера на основе уксусной кислоты и ацетата натрия и 15 мМ раствора хлорида кальция, конечный рН 5,4;

(3) 120 мг/мл антитела к SOST Ab-5, 95 мг/мл трегалозы, 0,5 мг/мл полисорбата 80, 5 мМ раствора буфера на основе уксусной кислоты и ацетата натрия и 15 мМ раствора хлорида кальция, конечный рН 5,3;

(4) 120 мг/мл антитела к SOST Ab-5, 95 мг/мл трегалозы, 0,5 мг/мл полисорбата 80, 5 мМ раствора буфера на основе уксусной кислоты и ацетата натрия и 15 мМ раствора хлорида кальция, конечный рН составляет 5,1;

(5) 120 мг/мл антитела к SOST Ab-5, 95 мг/мл трегалозы, 0,5 мг/мл полисорбата 80, 5 мМ раствора буфера на основе уксусной кислоты и ацетата натрия и 15 мМ раствора хлорида кальция, конечный рН 4.9;

(6) 120 мг/мл антитела к SOST Ab-5, 95 мг/мл трегалозы, 0,5 мг/мл полисорбата 80, 5 мМ раствора буфера на основе уксусной кислоты и ацетата натрия и 15 мМ раствора хлорида кальция, конечный рН 4,8;

(7) 110 мг/мл антитела к SOST Ab-5, 40 мг/мл трегалозы, 0,5 мг/мл полисорбата 80, 20 мМ раствора буфера на основе уксусной кислоты и ацетата натрия и 7,5 мМ раствора хлорида кальция, конечный рН 5,4;

(8) 110 мг/мл антитела к SOST Ab-5, 40 мг/мл трегалозы, 0,5 мг/мл полисорбата 80, 20 мМ раствора буфера на основе уксусной кислоты и ацетата натрия и 7,5 мМ раствора хлорида кальция, конечный рН 5,3;

(9) 110 мг/мл антитела к SOST Ab-5, 40 мг/мл трегалозы, 0,5 мг/мл полисорбата 80, 20 мМ раствора буфер на основе уксусной кислоты и ацетата натрия и 7,5 мМ раствора хлорида кальция, конечный рН 5,1;

(10) 110 мг/мл антитела к SOST Ab-5, 40 мг/мл трегалозы, 0,5 мг/мл полисорбата 80, 20 мМ раствора буфера на основе уксусной кислоты и ацетата натрия и 7,5 мМ раствора хлорида кальция, конечный рН 4,9;

(11) 100 мг/мл антитела к SOST Ab-5, 50 мг/мл трегалозы, 0,5 мг/мл полисорбата 80, 20 мМ раствора буфера на основе уксусной кислоты и ацетата натрия и 6,0 мМ раствора хлорида кальция, конечный рН 4,9;

(12) 100 мг/мл антитела к SOST Ab-5, 50 мг/мл трегалозы, 0,5 мг/мл полисорбата 80, 20 мМ раствора буфера на основе уксусной кислоты и ацетата натрия и 6,0 мМ раствора хлорида кальция, конечный рН 5,1;

(13) 100 мг/мл антитела к SOST Ab-5, 50 мг/мл трегалозы, 0,5 мг/мл полисорбата 80, 20 мМ раствора буфера на основе уксусной кислоты и ацетата натрия и 6,0 мМ раствора хлорида кальция, конечный рН 5,3;

(14) 100 мг/мл антитела к SOST Ab-5, 50 мг/мл трегалозы, 0,5 мг/мл полисорбата 80, 20 мМ раствора буфера на основе уксусной кислоты и ацетата натрия и 6,0 мМ раствора хлорида кальция, конечный рН 5,4.

(15) 90 мг/мл антитела к SOST Ab-5, 40 мг/мл трегалозы, 0,3 мг/мл полисорбата 80, 5 мМ раствора буфера на основе уксусной кислоты и ацетата натрия (рН 4,8) и 15 мМ раствора хлорида кальция;

(16) 110 мг/мл антитела к SOST Ab-5, 95 мг/мл трегалозы, 0,6 мг/мл полисорбата 80, 20 мМ раствора буфера на основе уксусной кислоты и ацетата натрия (рН 5,5) и 20 мМ раствора хлорида кальция;

(17) 100 мг/мл антитела к SOST Ab-5, 80 мг/мл трегалозы, 0,4 мг/мл полисорбата 80, 10 мМ раствора буфера на основе уксусной кислоты и ацетата натрия (рН 5.0) и 4,5 мМ раствора хлорида кальция.

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> ЦЗЯНСУ ХЭНЖУЙ МЕДСИН КО., ЛТД., ШАНХАЙ ХЭНЖУЙ

ФАРМАСЬЮТИКАЛ КО., ЛТД.

<120> ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ, СОДЕРЖАЩАЯ АНТИТЕЛО К

SOST, И ЕЕ ПРИМЕНЕНИЯ

<130> 780055CPCT

<150> CN201710621754.2

<151> 2017-07-27

<160> 25

<170> PatentIn версии 3.5

<210> 1

<211> 117

<212> БЕЛОК

<213> Мышь

<400> 1

Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Thr

1 5 10 15

Ser Val Lys Ile Pro Cys Gln Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Asn Leu Asp Trp Leu Lys Gln Arg Pro Gly Glu Ser Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Asp Ile Asp Pro Asn Asn Gly Asp Ile Leu Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Arg Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Trp Ala Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Leu Thr Ile Ser Ser

115

<210> 2

<211> 107

<212> БЕЛОК

<213> Мышь

<400> 2

Asn Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Lys Leu Leu Phe Val Ser Ala Gly

1 5 10 15

Asp Arg Ile Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Asp

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Tyr Thr Ser Asn Arg Phe Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly

50 55 60

Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Thr Val Gln Ala

65 70 75 80

Glu Asp Leu Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Asp Tyr Ser Ser Pro Val

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105

<210> 3

<211> 5

<212> БЕЛОК

<213> Мышь

<400> 3

Asp Tyr Asn Leu Asp

1 5

<210> 4

<211> 17

<212> БЕЛОК

<213> Мышь

<400> 4

Asp Ile Asp Pro Asn Asn Gly Asp Ile Leu Tyr Asn Gln Lys Phe Arg

1 5 10 15

Asp

<210> 5

<211> 8

<212> БЕЛОК

<213> Мышь

<400> 5

Arg Trp Ala Tyr Tyr Phe Asp Tyr

1 5

<210> 6

<211> 11

<212> БЕЛОК

<213> Мышь

<400> 6

Lys Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Asp Val Ala

1 5 10

<210> 7

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Мышь

<400> 7

Tyr Thr Ser Asn Arg Phe Thr

1 5

<210> 8

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Мышь

<400> 8

Gln Gln Asp Tyr Ser Ser Pro Val Thr

1 5

<210> 9

<211> 17

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Мутантная HCDR2

<400> 9

Asp Ile Asp Pro Asn Asp Gly Asp Ile Leu Tyr Asn Gln Lys Phe Arg

1 5 10 15

Asp

<210> 10

<211> 117

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная область тяжелой цепи Ab-5

<400> 10

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Asn Leu Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Asp Ile Asp Pro Asn Asn Gly Asp Ile Leu Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Arg Asp Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Trp Ala Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 11

<211> 117

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная область тяжелой цепи Ab-9

<400> 11

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Asn Leu Asp Trp Leu Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Asp Ile Asp Pro Asn Asn Gly Asp Ile Leu Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Arg Asp Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Trp Ala Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 12

<211> 117

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная область тяжелой цепи Ab-10

<400> 12

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Asn Leu Asp Trp Leu Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Asp Ile Asp Pro Asn Asp Gly Asp Ile Leu Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Arg Asp Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Trp Ala Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 13

<211> 107

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная область легкой цепи Ab-5

<400> 13

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Asp

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Tyr Thr Ser Asn Arg Phe Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asp Tyr Ser Ser Pro Val

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 14

<211> 107

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная область легкой цепи Ab-9

<400> 14

Asn Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Asp

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Tyr Thr Ser Asn Arg Phe Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Asp Tyr Ser Ser Pro Val

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 15

<211> 107

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариабельная область легкой цепи Ab-10

<400> 15

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Asp

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Tyr Thr Ser Asn Arg Phe Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Asp Tyr Ser Ser Pro Val

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 16

<211> 326

<212> БЕЛОК

<213> Человек разумный

<400> 16

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg

1 5 10 15

Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr

65 70 75 80

Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

100 105 110

Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

115 120 125

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

130 135 140

Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp

145 150 155 160

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe

165 170 175

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

180 185 190

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu

195 200 205

Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

210 215 220

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys

225 230 235 240

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

245 250 255

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

260 265 270

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

275 280 285

Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser

290 295 300

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

305 310 315 320

Leu Ser Leu Ser Leu Gly

325

<210> 17

<211> 327

<212> БЕЛОК

<213> Человек разумный

<400> 17

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg

1 5 10 15

Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr

65 70 75 80

Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

100 105 110

Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

115 120 125

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

130 135 140

Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp

145 150 155 160

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe

165 170 175

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

180 185 190

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu

195 200 205

Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

210 215 220

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys

225 230 235 240

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

245 250 255

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

260 265 270

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

275 280 285

Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser

290 295 300

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

305 310 315 320

Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

325

<210> 18

<211> 330

<212> БЕЛОК

<213> Человек разумный

<400> 18

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

1 5 10 15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

65 70 75 80

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

100 105 110

Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

115 120 125

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

130 135 140

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

145 150 155 160

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

165 170 175

Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

180 185 190

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

195 200 205

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

210 215 220

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu

225 230 235 240

Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

245 250 255

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

260 265 270

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

275 280 285

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

290 295 300

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

305 310 315 320

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325 330

<210> 19

<211> 107

<212> БЕЛОК

<213> Человек разумный

<400> 19

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

1 5 10 15

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

20 25 30

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

35 40 45

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

50 55 60

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

65 70 75 80

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

85 90 95

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

100 105

<210> 20

<211> 447

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Тяжелая цепь гуманизированного антитела Ab-10

<400> 20

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Asn Leu Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Asp Ile Asp Pro Asn Asn Gly Asp Ile Leu Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Arg Asp Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Trp Ala Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu

115 120 125

Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys

130 135 140

Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser

145 150 155 160

Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser

165 170 175

Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser

180 185 190

Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn

195 200 205

Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His

210 215 220

Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val

225 230 235 240

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

245 250 255

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu

260 265 270

Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

275 280 285

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

290 295 300

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

305 310 315 320

Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile

325 330 335

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro

340 345 350

Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu

355 360 365

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

370 375 380

Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser

385 390 395 400

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

405 410 415

Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu

420 425 430

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 21

<211> 444

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Тяжелая цепь гуманизированного антитела Ab-9

<400> 21

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Asn Leu Asp Trp Leu Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Asp Ile Asp Pro Asn Asn Gly Asp Ile Leu Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Arg Asp Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Trp Ala Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu

115 120 125

Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys

130 135 140

Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser

145 150 155 160

Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser

165 170 175

Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser

180 185 190

Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn

195 200 205

Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro

210 215 220

Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe

225 230 235 240

Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val

245 250 255

Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe

260 265 270

Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro

275 280 285

Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr

290 295 300

Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val

305 310 315 320

Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala

325 330 335

Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln

340 345 350

Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly

355 360 365

Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro

370 375 380

Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser

385 390 395 400

Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu

405 410 415

Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His

420 425 430

Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

435 440

<210> 22

<211> 443

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Тяжелая цепь гуманизированного антитела Ab-5

<400> 22

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Asn Leu Asp Trp Leu Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Asp Ile Asp Pro Asn Asp Gly Asp Ile Leu Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Arg Asp Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Trp Ala Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu

115 120 125

Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys

130 135 140

Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser

145 150 155 160

Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser

165 170 175

Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser

180 185 190

Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn

195 200 205

Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro

210 215 220

Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe

225 230 235 240

Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val

245 250 255

Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe

260 265 270

Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro

275 280 285

Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr

290 295 300

Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val

305 310 315 320

Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala

325 330 335

Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln

340 345 350

Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly

355 360 365

Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro

370 375 380

Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser

385 390 395 400

Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu

405 410 415

Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His

420 425 430

Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly

435 440

<210> 23

<211> 214

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Легкая цепь гуманизированного антитела Ab-10

<400> 23

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Asp

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Tyr Thr Ser Asn Arg Phe Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asp Tyr Ser Ser Pro Val

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 24

<211> 214

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Легкая цепь гуманизированного антитела Ab-9

<400> 24

Asn Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Asp

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Tyr Thr Ser Asn Arg Phe Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Asp Tyr Ser Ser Pro Val

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 25

<211> 214

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Легкая цепь гуманизированного антитела Ab-5

<400> 25

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Asp

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Tyr Thr Ser Asn Arg Phe Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Asp Tyr Ser Ser Pro Val

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<---

Claims (56)

1. Фармацевтическая композиция для лечения заболевания или состояния, связанного с SOST, содержащая антитело к SOST (ген, кодирующий белок склеростин) и буфер, где буфер представляет собой ацетатный буфер, концентрация буфера составляет от 10 до 30 мМ, концентрация антитела к SOST составляет от 80 до 100 мг/мл, при этом легкая цепь антитела к SOST имеет последовательность, как показано в SEQ ID NO: 25, и тяжелая цепь антитела к SOST имеет последовательность:

EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNLDWLRQAPGEGLEWIGDIDPNDGDILYNQKFRDRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWAYYFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK, или

EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNLDWLRQAPGEGLEWIGDIDPNDGDILYNQKFRDRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWAYYFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG; и

где фармацевтическая композиция дополнительно содержит дисахарид, при этом дисахарид выбран из группы, состоящей из трегалозы и сахарозы, где концентрация дисахарида составляет от 45 до 95 мг/мл; и

где фармацевтическая композиция дополнительно содержит поверхностно-активное вещество, представляющее собой полисорбат 80, при этом концентрация поверхностно-активного вещества составляет от 0,3 до 0,6 мг/мл; и

где фармацевтическая композиция дополнительно содержит модификатор вязкости, представляющий собой соль кальция, при этом концентрация соли кальция составляет от 4,5 до 20 мМ, и

где pH фармацевтической композиции составляет от 5,0 до 5,5.

2. Фармацевтическая композиция по п. 1, где концентрация антитела к SOST составляет 100 мг/мл.

3. Фармацевтическая композиция по п. 1 или 2, pH которой составляет от 5,0 до 5,2.

4. Фармацевтическая композиция по п. 3, pH которой составляет 5.0.

5. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 1-4, где концентрация ацетатного буфера составляет от 10 до 20 мМ.

6. Фармацевтическая композиция по п. 5, где концентрация ацетатного буфера составляет 10 мМ.

7. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 1-6, где pH ацетатного буфера составляет от 5,0 до 5,5.

8. Фармацевтическая композиция по п. 7, где pH ацетатного буфера составляет от 5,0 до 5,2.

9. Фармацевтическая композиция по п. 8, где pH ацетатного буфера составляет 5,0.

10. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 1-9, где концентрация трегалозы или сахарозы составляет от 60 до 90 мг/мл.

11. Фармацевтическая композиция по п. 10, где концентрация трегалозы или сахарозы составляет 80 мг/мл.

12. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 1-11, где концентрация полисорбата 80 составляет 0,4 мг/мл.

13. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 1-12, где соль кальция выбрана из группы, состоящей из хлорида кальция и ацетата кальция.

14. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 1-13, где концентрация соли кальция составляет от 4,5 до 10 мМ.

15. Фармацевтическая композиция по п. 14, где концентрация соли кальция составляет 4,5 мМ.

16. Фармацевтическая композиция по п. 1, содержащая:

(а) от 80 до 100 мг/мл антитела к SOST; (б) от 10 до 20 мМ ацетатного буфера, имеющего pH от 5,0 до 5,2; (в) от 60 до 90 мг/мл трегалозы или сахарозы; (г) от 0,3 до 0,6 мг/мл полисорбата 80; и (д) от 4,5 до 20 мМ соли кальция.

17. Фармацевтическая композиция по п. 1, содержащая:

(а) 100 мг/мл антитела к SOST; (б) 10 мМ ацетатного буфера; (в) 75 или 80 мг/мл трегалозы или сахарозы; (г) 0,4 мг/мл полисорбата 80; и (д) 4,5 мМ хлорида кальция,

где pH фармацевтической композиции составляет 5,0.

18. Способ получения лиофилизированного препарата, содержащего антитело к SOST, включающий этап сублимационной сушки фармацевтической композиции по любому из пп. 1-17.

19. Способ получения лиофилизированного препарата по п. 18, где сублимационная сушка включает последовательные этапы предварительного замораживания, первичной сушки и вторичной сушки.

20. Лиофилизированный препарат, содержащий антитело к SOST, для лечения заболевания или состояния, связанного с SOST, полученный способом по п. 18 или 19.

21. Способ получения восстановленного раствора, содержащего антитело к SOST, включающий этап восстановления лиофилизированного препарата по п. 20.

22. Способ получения восстановленного раствора по п. 21, где растворитель для восстановления представляет собой воду для инъекции.

23. Восстановленный раствор для лечения заболевания или состояния, связанного с SOST, полученный способом по п. 21 или 22, содержащий антитело к SOST, буфер, дисахарид, поверхностно-активное вещество и модификатор вязкости, где:

концентрация антитела к SOST составляет от 80 до 100 мг/мл, при этом легкая цепь антитела к SOST имеет последовательность, как показано в SEQ ID NO: 25, и тяжелая цепь антитела к SOST имеет последовательность:

EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNLDWLRQAPGEGLEWIGDIDPNDGDILYNQKFRDRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWAYYFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK, или

EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNLDWLRQAPGEGLEWIGDIDPNDGDILYNQKFRDRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWAYYFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG;

где буфер представляет собой ацетатный буфер, при этом концентрация буфера составляет от 10 до 30 мМ,

где дисахарид выбран из группы, состоящей из трегалозы и сахарозы, при этом концентрация дисахарида составляет от 45 до 95 мг/мл; и

где поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат 80, при этом концентрация поверхностно-активного вещества составляет от 0,3 до 0,6 мг/мл; и

где модификатор вязкости представляет собой соль кальция, при этом концентрация соли кальция составляет от 4,5 до 20 мМ, и

где pH восстановленного раствора составляет от 5,0 до 5,5.

24. Восстановленный раствор по п. 23, где концентрация антитела к SOST составляет 100 мг/мл.

25. Восстановленный раствор по п. 23, pH которого составляет от 5,0 до 5,2.

26. Восстановленный раствор по п. 25, pH которого составляет 5,0.

27. Восстановленный раствор по п. 23, где концентрация буфера составляет 10 мМ.

28. Восстановленный раствор по п. 23, где концентрация дисахарида составляет от 60 до 90 мг/мл.

29. Восстановленный раствор по п. 28, где концентрация дисахарида составляет от 75 до 80 мг/мл.

30. Восстановленный раствор по п. 29, где концентрация дисахарида составляет 80 мг/мл.

31. Восстановленный раствор по п. 23, где концентрация поверхностно-активного вещества составляет 0,4 мг/мл.

32. Восстановленный раствор по п. 23, где соль кальция выбрана из группы, состоящей из хлорида кальция и ацетата кальция.

33. Восстановленный раствор по п. 23, где концентрация соли кальция составляет от 4,5 до 10 мМ.

34. Восстановленный раствор по п. 33, где концентрация соли кальция составляет 4,5 мМ.

35. Применение фармацевтической композиции по любому из пп. 1-17, или лиофилизированного препарата по п. 20, или восстановленного раствора по любому из пп. 23-34 в изготовлении лекарственного средства для лечения заболевания или состояния, связанного с SOST, где заболевание или состояние, связанное с SOST, выбрано из группы, состоящей из остеопороза, остеопении или остеоартрита, ревматоидного артрита, заболевания пародонта и множественной миеломы.

36. Применение по п. 35, где заболевание или состояние, связанное с SOST представляет собой остеопороз.

37. Способ лечения заболевания или состояния, связанного с SOST, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции по любому из пп. 1-17, или лиофилизированного препарата по п. 20, или восстановленного раствора по любому из пп. 23-34, где заболевание или состояние, связанное с SOST, выбрано из группы, состоящей из остеопороза, остеопении или остеоартрита, ревматоидного артрита, заболевания пародонта и множественной миеломы.

38. Способ по п. 37, где заболевание или состояние, связанное с SOST, представляет собой остеопороз.

39. Контейнер для лечения заболевания или состояния, связанного с SOST, содержащий фармацевтическую композицию по любому из пп. 1-17, или лиофилизированный препарат по п. 20, или восстановленный раствор по любому из пп. 23-34.