JP6564361B2 - 核酸送達のための組成物 - Google Patents
核酸送達のための組成物 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6564361B2 JP6564361B2 JP2016506488A JP2016506488A JP6564361B2 JP 6564361 B2 JP6564361 B2 JP 6564361B2 JP 2016506488 A JP2016506488 A JP 2016506488A JP 2016506488 A JP2016506488 A JP 2016506488A JP 6564361 B2 JP6564361 B2 JP 6564361B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- group
- nucleic acid
- polymer
- sirna
- compound
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 title claims description 189
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 title claims description 188
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 title claims description 188
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 102
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 208
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 132
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 claims description 109
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 claims description 108
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 88
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 76
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 70
- 108010020346 Polyglutamic Acid Proteins 0.000 claims description 69
- 229920002643 polyglutamic acid Polymers 0.000 claims description 69
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 66
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 claims description 65
- 229920000805 Polyaspartic acid Polymers 0.000 claims description 64
- 108010064470 polyaspartate Proteins 0.000 claims description 62
- 229920001400 block copolymer Polymers 0.000 claims description 59
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims description 59
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 claims description 57
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 claims description 54
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims description 53
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 claims description 47
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 44
- 229920001600 hydrophobic polymer Polymers 0.000 claims description 44
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 claims description 44
- 125000003710 aryl alkyl group Chemical group 0.000 claims description 42
- 229960000984 tocofersolan Drugs 0.000 claims description 42
- 235000004835 α-tocopherol Nutrition 0.000 claims description 42
- 239000002076 α-tocopherol Substances 0.000 claims description 42
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 claims description 34
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 33
- 125000003302 alkenyloxy group Chemical group 0.000 claims description 24
- 125000003282 alkyl amino group Chemical group 0.000 claims description 24
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 23
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 20
- 238000012228 RNA interference-mediated gene silencing Methods 0.000 claims description 19
- 125000006323 alkenyl amino group Chemical group 0.000 claims description 19
- 125000004453 alkoxycarbonyl group Chemical group 0.000 claims description 19
- 230000009368 gene silencing by RNA Effects 0.000 claims description 19
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 19
- 125000006297 carbonyl amino group Chemical group [H]N([*:2])C([*:1])=O 0.000 claims description 17
- 150000001483 arginine derivatives Chemical class 0.000 claims description 15
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 claims description 14
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 14
- 125000006165 cyclic alkyl group Chemical group 0.000 claims description 12
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 11
- 125000000816 ethylene group Chemical group [H]C([H])([*:1])C([H])([H])[*:2] 0.000 claims description 11
- 125000001570 methylene group Chemical group [H]C([H])([*:1])[*:2] 0.000 claims description 11
- 125000001302 tertiary amino group Chemical group 0.000 claims description 10
- QYSXJUFSXHHAJI-XFEUOLMDSA-N Vitamin D3 Natural products C1(/[C@@H]2CC[C@@H]([C@]2(CCC1)C)[C@H](C)CCCC(C)C)=C/C=C1\C[C@@H](O)CCC1=C QYSXJUFSXHHAJI-XFEUOLMDSA-N 0.000 claims description 8
- 150000003710 vitamin D derivatives Chemical class 0.000 claims description 8
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 claims description 7
- 238000003402 intramolecular cyclocondensation reaction Methods 0.000 claims description 6
- 235000005282 vitamin D3 Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000011647 vitamin D3 Substances 0.000 claims description 6
- 229940021056 vitamin d3 Drugs 0.000 claims description 6
- 230000009471 action Effects 0.000 claims description 5
- WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N gamma-tocopherol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC1CCC2C(C)C(O)C(C)C(C)C2O1 WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- QYSXJUFSXHHAJI-YRZJJWOYSA-N vitamin D3 Chemical compound C1(/[C@@H]2CC[C@@H]([C@]2(CCC1)C)[C@H](C)CCCC(C)C)=C\C=C1\C[C@@H](O)CCC1=C QYSXJUFSXHHAJI-YRZJJWOYSA-N 0.000 claims description 5
- 150000003712 vitamin E derivatives Chemical class 0.000 claims description 5
- GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N (R)-alpha-Tocopherol Natural products OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N 0.000 claims description 4
- OTXNTMVVOOBZCV-UHFFFAOYSA-N 2R-gamma-tocotrienol Natural products OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C)(C)CCC2=C1 OTXNTMVVOOBZCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- RZFHLOLGZPDCHJ-DLQZEEBKSA-N alpha-Tocotrienol Natural products Oc1c(C)c(C)c2O[C@@](CC/C=C(/CC/C=C(\CC/C=C(\C)/C)/C)\C)(C)CCc2c1C RZFHLOLGZPDCHJ-DLQZEEBKSA-N 0.000 claims description 4
- WGVKWNUPNGFDFJ-DQCZWYHMSA-N β-tocopherol Chemical compound OC1=CC(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C WGVKWNUPNGFDFJ-DQCZWYHMSA-N 0.000 claims description 4
- GZIFEOYASATJEH-VHFRWLAGSA-N δ-tocopherol Chemical compound OC1=CC(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1 GZIFEOYASATJEH-VHFRWLAGSA-N 0.000 claims description 4
- MECHNRXZTMCUDQ-UHFFFAOYSA-N Vitamin D2 Natural products C1CCC2(C)C(C(C)C=CC(C)C(C)C)CCC2C1=CC=C1CC(O)CCC1=C MECHNRXZTMCUDQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 125000002947 alkylene group Chemical group 0.000 claims description 3
- 229960002061 ergocalciferol Drugs 0.000 claims description 3
- MECHNRXZTMCUDQ-RKHKHRCZSA-N ergocalciferol group Chemical group CC(C)[C@@H](C)\C=C\[C@@H](C)[C@H]1CC[C@H]2\C(\CCC[C@]12C)=C\C=C/1\C[C@@H](O)CCC1=C MECHNRXZTMCUDQ-RKHKHRCZSA-N 0.000 claims description 3
- 235000001892 vitamin D2 Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000011653 vitamin D2 Substances 0.000 claims description 3
- FGYKUFVNYVMTAM-UHFFFAOYSA-N (R)-2,5,8-trimethyl-2-(4,8,12-trimethyl-trideca-3t,7t,11-trienyl)-chroman-6-ol Natural products OC1=CC(C)=C2OC(CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C)(C)CCC2=C1C FGYKUFVNYVMTAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- ODADKLYLWWCHNB-UHFFFAOYSA-N 2R-delta-tocotrienol Natural products OC1=CC(C)=C2OC(CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C)(C)CCC2=C1 ODADKLYLWWCHNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- GZIFEOYASATJEH-UHFFFAOYSA-N D-delta tocopherol Natural products OC1=CC(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1 GZIFEOYASATJEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229940087168 alpha tocopherol Drugs 0.000 claims description 2
- 229940064063 alpha tocotrienol Drugs 0.000 claims description 2
- 229940066595 beta tocopherol Drugs 0.000 claims description 2
- FGYKUFVNYVMTAM-YMCDKREISA-N beta-Tocotrienol Natural products Oc1c(C)c2c(c(C)c1)O[C@@](CC/C=C(\CC/C=C(\CC/C=C(\C)/C)/C)/C)(C)CC2 FGYKUFVNYVMTAM-YMCDKREISA-N 0.000 claims description 2
- 235000010389 delta-tocopherol Nutrition 0.000 claims description 2
- BTNBMQIHCRIGOU-UHFFFAOYSA-N delta-tocotrienol Natural products CC(=CCCC(=CCCC(=CCCOC1(C)CCc2cc(O)cc(C)c2O1)C)C)C BTNBMQIHCRIGOU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- FGYKUFVNYVMTAM-MUUNZHRXSA-N epsilon-Tocopherol Natural products OC1=CC(C)=C2O[C@@](CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C)(C)CCC2=C1C FGYKUFVNYVMTAM-MUUNZHRXSA-N 0.000 claims description 2
- OTXNTMVVOOBZCV-YMCDKREISA-N gamma-Tocotrienol Natural products Oc1c(C)c(C)c2O[C@@](CC/C=C(\CC/C=C(\CC/C=C(\C)/C)/C)/C)(C)CCc2c1 OTXNTMVVOOBZCV-YMCDKREISA-N 0.000 claims description 2
- 235000010382 gamma-tocopherol Nutrition 0.000 claims description 2
- RZFHLOLGZPDCHJ-XZXLULOTSA-N α-Tocotrienol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CC/C=C(C)/CC/C=C(C)/CCC=C(C)C)(C)CCC2=C1C RZFHLOLGZPDCHJ-XZXLULOTSA-N 0.000 claims description 2
- 235000019145 α-tocotrienol Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000011730 α-tocotrienol Substances 0.000 claims description 2
- 235000007680 β-tocopherol Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000011590 β-tocopherol Substances 0.000 claims description 2
- 235000019151 β-tocotrienol Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000011723 β-tocotrienol Substances 0.000 claims description 2
- FGYKUFVNYVMTAM-WAZJVIJMSA-N β-tocotrienol Chemical compound OC1=CC(C)=C2O[C@@](CC/C=C(C)/CC/C=C(C)/CCC=C(C)C)(C)CCC2=C1C FGYKUFVNYVMTAM-WAZJVIJMSA-N 0.000 claims description 2
- QUEDXNHFTDJVIY-DQCZWYHMSA-N γ-tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1 QUEDXNHFTDJVIY-DQCZWYHMSA-N 0.000 claims description 2
- 239000002478 γ-tocopherol Substances 0.000 claims description 2
- 235000019150 γ-tocotrienol Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000011722 γ-tocotrienol Substances 0.000 claims description 2
- OTXNTMVVOOBZCV-WAZJVIJMSA-N γ-tocotrienol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CC/C=C(C)/CC/C=C(C)/CCC=C(C)C)(C)CCC2=C1 OTXNTMVVOOBZCV-WAZJVIJMSA-N 0.000 claims description 2
- 239000002446 δ-tocopherol Substances 0.000 claims description 2
- 235000019144 δ-tocotrienol Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000011729 δ-tocotrienol Substances 0.000 claims description 2
- ODADKLYLWWCHNB-LDYBVBFYSA-N δ-tocotrienol Chemical compound OC1=CC(C)=C2O[C@@](CC/C=C(C)/CC/C=C(C)/CCC=C(C)C)(C)CCC2=C1 ODADKLYLWWCHNB-LDYBVBFYSA-N 0.000 claims description 2
- 125000006527 (C1-C5) alkyl group Chemical group 0.000 claims 2
- 125000001183 hydrocarbyl group Chemical group 0.000 claims 2
- 125000001020 α-tocopherol group Chemical group 0.000 claims 1
- -1 vitamin A nucleic acid Chemical class 0.000 description 195
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 175
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 description 175
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 88
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 71
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 66
- 150000002430 hydrocarbons Chemical group 0.000 description 64
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N d-alpha-tocopherol Natural products OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 48
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 45
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 44
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 44
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 43
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 42
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 40
- ZDLDXNCMJBOYJV-YFKPBYRVSA-N L-arginine, methyl ester Chemical compound COC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ZDLDXNCMJBOYJV-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 40
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 39
- AOBORMOPSGHCAX-DGHZZKTQSA-N tocofersolan Chemical compound OCCOC(=O)CCC(=O)OC1=C(C)C(C)=C2O[C@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C AOBORMOPSGHCAX-DGHZZKTQSA-N 0.000 description 37
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 35
- 238000000034 method Methods 0.000 description 33
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 29
- REYJJPSVUYRZGE-UHFFFAOYSA-N Octadecylamine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCN REYJJPSVUYRZGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 28
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 28
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 27
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 26
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 25
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 25
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 24
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 24
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 24
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 24
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 24
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 23
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 23
- ZAFNJMIOTHYJRJ-UHFFFAOYSA-N Diisopropyl ether Chemical compound CC(C)OC(C)C ZAFNJMIOTHYJRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 22
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 21
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 21
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 21
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 21
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 20
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 description 20
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 18
- 238000000790 scattering method Methods 0.000 description 18
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 17
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 17
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 17
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 17
- 125000001165 hydrophobic group Chemical group 0.000 description 16
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 15
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 15
- BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N diisopropylcarbodiimide Natural products CC(C)NC(=O)NC(C)C BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 15
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 15
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 14
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 14
- 125000004430 oxygen atom Chemical group O* 0.000 description 14
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 13
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 13
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 13
- IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N N-Heptane Chemical compound CCCCCCC IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 229940125898 compound 5 Drugs 0.000 description 12
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 12
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 12
- 125000004123 n-propyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 12
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 11
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 11
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 10
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 10
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical group CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000000306 component Substances 0.000 description 10
- 229940126214 compound 3 Drugs 0.000 description 10
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 10
- 239000005267 main chain polymer Substances 0.000 description 10
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 9
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 9
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 9
- 230000009881 electrostatic interaction Effects 0.000 description 9
- 125000004108 n-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 9
- QGLWBTPVKHMVHM-KTKRTIGZSA-N (z)-octadec-9-en-1-amine Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCCN QGLWBTPVKHMVHM-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 8
- HMUNWXXNJPVALC-UHFFFAOYSA-N 1-[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]-2-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethanone Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)N1CCN(CC1)C(CN1CC2=C(CC1)NN=N2)=O HMUNWXXNJPVALC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- ZRPAUEVGEGEPFQ-UHFFFAOYSA-N 2-[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]pyrazol-1-yl]-1-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethanone Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C=1C=NN(C=1)CC(=O)N1CC2=C(CC1)NN=N2 ZRPAUEVGEGEPFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000006482 condensation reaction Methods 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 8
- 125000001280 n-hexyl group Chemical group C(CCCCC)* 0.000 description 8
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 7
- 125000006017 1-propenyl group Chemical group 0.000 description 7
- AGNFWIZBEATIAK-UHFFFAOYSA-N 4-phenylbutylamine Chemical compound NCCCCC1=CC=CC=C1 AGNFWIZBEATIAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 7
- 125000004423 acyloxy group Chemical group 0.000 description 7
- 125000005194 alkoxycarbonyloxy group Chemical group 0.000 description 7
- 239000011246 composite particle Substances 0.000 description 7
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 7
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 6
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 6
- 125000004644 alkyl sulfinyl group Chemical group 0.000 description 6
- 125000004390 alkyl sulfonyl group Chemical group 0.000 description 6
- 125000004414 alkyl thio group Chemical group 0.000 description 6
- 125000004104 aryloxy group Chemical group 0.000 description 6
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 6
- 239000002585 base Substances 0.000 description 6
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 6
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 6
- 229940125773 compound 10 Drugs 0.000 description 6
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 6
- 125000000113 cyclohexyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 6
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 6
- 125000002485 formyl group Chemical group [H]C(*)=O 0.000 description 6
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 description 6
- 125000003827 glycol group Chemical group 0.000 description 6
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 6
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 6
- 125000003253 isopropoxy group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(O*)C([H])([H])[H] 0.000 description 6
- ZLVXBBHTMQJRSX-VMGNSXQWSA-N jdtic Chemical compound C1([C@]2(C)CCN(C[C@@H]2C)C[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H]2NCC3=CC(O)=CC=C3C2)=CC=CC(O)=C1 ZLVXBBHTMQJRSX-VMGNSXQWSA-N 0.000 description 6
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 125000004355 nitrogen functional group Chemical group 0.000 description 6
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 6
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 6
- 125000004434 sulfur atom Chemical group 0.000 description 6
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 6
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 125000004973 1-butenyl group Chemical group C(=CCC)* 0.000 description 5
- 125000006023 1-pentenyl group Chemical group 0.000 description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- XQYZOBNLCUAXLF-XRIGFGBMSA-N [(2s)-5-[[amino(azaniumyl)methylidene]amino]-1-methoxy-1-oxopentan-2-yl]azanium;dichloride Chemical compound Cl.Cl.COC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N XQYZOBNLCUAXLF-XRIGFGBMSA-N 0.000 description 5
- 125000004442 acylamino group Chemical group 0.000 description 5
- 125000005907 alkyl ester group Chemical group 0.000 description 5
- 125000004397 aminosulfonyl group Chemical group NS(=O)(=O)* 0.000 description 5
- 125000005135 aryl sulfinyl group Chemical group 0.000 description 5
- 125000004391 aryl sulfonyl group Chemical group 0.000 description 5
- 125000005110 aryl thio group Chemical group 0.000 description 5
- 125000000051 benzyloxy group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])O* 0.000 description 5
- 125000003917 carbamoyl group Chemical group [H]N([H])C(*)=O 0.000 description 5
- 125000001951 carbamoylamino group Chemical group C(N)(=O)N* 0.000 description 5
- 125000002837 carbocyclic group Chemical group 0.000 description 5
- 150000001841 cholesterols Chemical class 0.000 description 5
- 229940125782 compound 2 Drugs 0.000 description 5
- 125000004663 dialkyl amino group Chemical group 0.000 description 5
- 125000003438 dodecyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 5
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 5
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 5
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 5
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 5
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 5
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 5
- 125000000250 methylamino group Chemical group [H]N(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 5
- 125000000740 n-pentyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 5
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 5
- 229920001467 poly(styrenesulfonates) Polymers 0.000 description 5
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 5
- 125000003808 silyl group Chemical group [H][Si]([H])([H])[*] 0.000 description 5
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 5
- 125000006296 sulfonyl amino group Chemical group [H]N(*)S(*)(=O)=O 0.000 description 5
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 5
- 125000005208 trialkylammonium group Chemical group 0.000 description 5
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 description 5
- 125000004191 (C1-C6) alkoxy group Chemical group 0.000 description 4
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Substances CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 13-cis retinol Natural products OCC=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- YJLUBHOZZTYQIP-UHFFFAOYSA-N 2-[5-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]-1,3,4-oxadiazol-2-yl]-1-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethanone Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C1=NN=C(O1)CC(=O)N1CC2=C(CC1)NN=N2 YJLUBHOZZTYQIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000000094 2-phenylethyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 4
- LZTWGIDKKJSTEZ-VKHMYHEASA-N C(=O)=N[C@H]1CC(=O)OC1=O Chemical compound C(=O)=N[C@H]1CC(=O)OC1=O LZTWGIDKKJSTEZ-VKHMYHEASA-N 0.000 description 4
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229920002845 Poly(methacrylic acid) Polymers 0.000 description 4
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 4
- 125000004466 alkoxycarbonylamino group Chemical group 0.000 description 4
- FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N all-trans-retinol Chemical compound OC\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N 0.000 description 4
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 4
- 150000001509 aspartic acid derivatives Chemical group 0.000 description 4
- 125000000440 benzylamino group Chemical group [H]N(*)C([H])([H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 4
- UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N beta-alanine Chemical compound NCCC(O)=O UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 4
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 4
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 4
- 125000004093 cyano group Chemical group *C#N 0.000 description 4
- 125000001511 cyclopentyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C1([H])[H] 0.000 description 4
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 4
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 4
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 4
- DDXLVDQZPFLQMZ-UHFFFAOYSA-M dodecyl(trimethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C DDXLVDQZPFLQMZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- JRBPAEWTRLWTQC-UHFFFAOYSA-N dodecylamine Chemical compound CCCCCCCCCCCCN JRBPAEWTRLWTQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000001301 ethoxy group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])O* 0.000 description 4
- 125000000031 ethylamino group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])N([H])[*] 0.000 description 4
- 150000002306 glutamic acid derivatives Chemical group 0.000 description 4
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 125000000959 isobutyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 4
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 description 4
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000004584 polyacrylic acid Substances 0.000 description 4
- 229920001444 polymaleic acid Polymers 0.000 description 4
- 125000002914 sec-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 4
- 125000004079 stearyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 4
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 125000004213 tert-butoxy group Chemical group [H]C([H])([H])C(O*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 4
- 125000006318 tert-butyl amino group Chemical group [H]N(*)C(C([H])([H])[H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 4
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 4
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 4
- 125000003258 trimethylene group Chemical group [H]C([H])([*:2])C([H])([H])C([H])([H])[*:1] 0.000 description 4
- 150000003721 vitamin K derivatives Chemical class 0.000 description 4
- LDZLXQFDGRCELX-UHFFFAOYSA-N 4-phenylbutan-1-ol Chemical compound OCCCCC1=CC=CC=C1 LDZLXQFDGRCELX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- JLLYLQLDYORLBB-UHFFFAOYSA-N 5-bromo-n-methylthiophene-2-sulfonamide Chemical compound CNS(=O)(=O)C1=CC=C(Br)S1 JLLYLQLDYORLBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108700011259 MicroRNAs Proteins 0.000 description 3
- AFCARXCZXQIEQB-UHFFFAOYSA-N N-[3-oxo-3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)propyl]-2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound O=C(CCNC(=O)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F)N1CC2=C(CC1)NN=N2 AFCARXCZXQIEQB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N Succinic acid Natural products OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N Vitamin A Natural products OC/C=C(/C)\C=C\C=C(\C)/C=C/C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N 0.000 description 3
- 229930003427 Vitamin E Natural products 0.000 description 3
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 3
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 3
- 229920006317 cationic polymer Polymers 0.000 description 3
- 229940125904 compound 1 Drugs 0.000 description 3
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 3
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 229920001002 functional polymer Polymers 0.000 description 3
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 3
- 238000007327 hydrogenolysis reaction Methods 0.000 description 3
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 3
- 125000001160 methoxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])OC(*)=O 0.000 description 3
- MGJXBDMLVWIYOQ-UHFFFAOYSA-N methylazanide Chemical compound [NH-]C MGJXBDMLVWIYOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 description 3
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 3
- 125000001421 myristyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 3
- OKDQKPLMQBXTNH-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethyl-2h-pyridin-1-amine Chemical compound CN(C)N1CC=CC=C1 OKDQKPLMQBXTNH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 3
- SHUZOJHMOBOZST-UHFFFAOYSA-N phylloquinone Natural products CC(C)CCCCC(C)CCC(C)CCCC(=CCC1=C(C)C(=O)c2ccccc2C1=O)C SHUZOJHMOBOZST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 3
- 229920001308 poly(aminoacid) Polymers 0.000 description 3
- XUWVIABDWDTJRZ-UHFFFAOYSA-N propan-2-ylazanide Chemical compound CC(C)[NH-] XUWVIABDWDTJRZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- 125000000467 secondary amino group Chemical group [H]N([*:1])[*:2] 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 235000019155 vitamin A Nutrition 0.000 description 3
- 239000011719 vitamin A Substances 0.000 description 3
- 229940046009 vitamin E Drugs 0.000 description 3
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 description 3
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 description 3
- 229940045997 vitamin a Drugs 0.000 description 3
- 125000000008 (C1-C10) alkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 125000000923 (C1-C30) alkyl group Chemical group 0.000 description 2
- KZEVSDGEBAJOTK-UHFFFAOYSA-N 1-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)-2-[5-[2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidin-5-yl]-1,3,4-oxadiazol-2-yl]ethanone Chemical compound N1N=NC=2CN(CCC=21)C(CC=1OC(=NN=1)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F)=O KZEVSDGEBAJOTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BMVXCPBXGZKUPN-UHFFFAOYSA-N 1-hexanamine Chemical compound CCCCCCN BMVXCPBXGZKUPN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000004343 1-phenylethyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- XDIAMRVROCPPBK-UHFFFAOYSA-N 2,2-dimethylpropan-1-amine Chemical compound CC(C)(C)CN XDIAMRVROCPPBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VZSRBBMJRBPUNF-UHFFFAOYSA-N 2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)-N-[3-oxo-3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)propyl]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C(=O)NCCC(N1CC2=C(CC1)NN=N2)=O VZSRBBMJRBPUNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LDXJRKWFNNFDSA-UHFFFAOYSA-N 2-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)-1-[4-[2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]ethanone Chemical compound C1CN(CC2=NNN=C21)CC(=O)N3CCN(CC3)C4=CN=C(N=C4)NCC5=CC(=CC=C5)OC(F)(F)F LDXJRKWFNNFDSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SXAMGRAIZSSWIH-UHFFFAOYSA-N 2-[3-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]-1,2,4-oxadiazol-5-yl]-1-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethanone Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C1=NOC(=N1)CC(=O)N1CC2=C(CC1)NN=N2 SXAMGRAIZSSWIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JVKRKMWZYMKVTQ-UHFFFAOYSA-N 2-[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]pyrazol-1-yl]-N-(2-oxo-3H-1,3-benzoxazol-6-yl)acetamide Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C=1C=NN(C=1)CC(=O)NC1=CC2=C(NC(O2)=O)C=C1 JVKRKMWZYMKVTQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VXZBYIWNGKSFOJ-UHFFFAOYSA-N 2-[4-[5-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrazin-2-yl]pyrazol-1-yl]-1-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethanone Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC=1N=CC(=NC=1)C=1C=NN(C=1)CC(=O)N1CC2=C(CC1)NN=N2 VXZBYIWNGKSFOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KDSNLYIMUZNERS-UHFFFAOYSA-N 2-methylpropanamine Chemical compound CC(C)CN KDSNLYIMUZNERS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YLZOPXRUQYQQID-UHFFFAOYSA-N 3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)-1-[4-[2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]propan-1-one Chemical compound N1N=NC=2CN(CCC=21)CCC(=O)N1CCN(CC1)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F YLZOPXRUQYQQID-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000004195 4-methylpiperazin-1-yl group Chemical group [H]C([H])([H])N1C([H])([H])C([H])([H])N(*)C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 2
- CONKBQPVFMXDOV-QHCPKHFHSA-N 6-[(5S)-5-[[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]methyl]-2-oxo-1,3-oxazolidin-3-yl]-3H-1,3-benzoxazol-2-one Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)N1CCN(CC1)C[C@H]1CN(C(O1)=O)C1=CC2=C(NC(O2)=O)C=C1 CONKBQPVFMXDOV-QHCPKHFHSA-N 0.000 description 2
- 108020005544 Antisense RNA Proteins 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XSINLXBNUOELJT-BYPYZUCNSA-N C(=O)=N[C@H]1CCC(=O)OC1=O Chemical compound C(=O)=N[C@H]1CCC(=O)OC1=O XSINLXBNUOELJT-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 125000000739 C2-C30 alkenyl group Chemical group 0.000 description 2
- 239000004215 Carbon black (E152) Chemical group 0.000 description 2
- 235000005956 Cosmos caudatus Nutrition 0.000 description 2
- MHZGKXUYDGKKIU-UHFFFAOYSA-N Decylamine Chemical compound CCCCCCCCCCN MHZGKXUYDGKKIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- MJVAVZPDRWSRRC-UHFFFAOYSA-N Menadione Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(C)=CC(=O)C2=C1 MJVAVZPDRWSRRC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 2
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- AOBORMOPSGHCAX-UHFFFAOYSA-N Tocophersolan Chemical compound OCCOC(=O)CCC(=O)OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C AOBORMOPSGHCAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930003316 Vitamin D Natural products 0.000 description 2
- 229930003448 Vitamin K Natural products 0.000 description 2
- 125000002015 acyclic group Chemical group 0.000 description 2
- 125000005073 adamantyl group Chemical group C12(CC3CC(CC(C1)C3)C2)* 0.000 description 2
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 2
- 150000004347 all-trans-retinol derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 2
- 229940000635 beta-alanine Drugs 0.000 description 2
- HQABUPZFAYXKJW-UHFFFAOYSA-N butan-1-amine Chemical compound CCCCN HQABUPZFAYXKJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DNSISZSEWVHGLH-UHFFFAOYSA-N butanamide Chemical compound CCCC(N)=O DNSISZSEWVHGLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 2
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 description 2
- 230000009918 complex formation Effects 0.000 description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 2
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 2
- 125000001995 cyclobutyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])(*)C1([H])[H] 0.000 description 2
- ZIQIQOUPRHPOIT-UHFFFAOYSA-N cyclobutylazanide Chemical compound [NH-]C1CCC1 ZIQIQOUPRHPOIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GCFAUZGWPDYAJN-UHFFFAOYSA-N cyclohexyl 3-phenylprop-2-enoate Chemical compound C=1C=CC=CC=1C=CC(=O)OC1CCCCC1 GCFAUZGWPDYAJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PAFZNILMFXTMIY-UHFFFAOYSA-N cyclohexylamine Chemical compound NC1CCCCC1 PAFZNILMFXTMIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NISGSNTVMOOSJQ-UHFFFAOYSA-N cyclopentanamine Chemical compound NC1CCCC1 NISGSNTVMOOSJQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000006255 cyclopropyl carbonyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C1([H])C(*)=O 0.000 description 2
- 125000001559 cyclopropyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C1([H])* 0.000 description 2
- HWDVTQAXQJQROO-UHFFFAOYSA-N cyclopropylazanide Chemical compound [NH-]C1CC1 HWDVTQAXQJQROO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 125000002704 decyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 125000002147 dimethylamino group Chemical group [H]C([H])([H])N(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 238000002296 dynamic light scattering Methods 0.000 description 2
- 125000003754 ethoxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC)* 0.000 description 2
- 125000004494 ethyl ester group Chemical group 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 2
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DKAGJZJALZXOOV-UHFFFAOYSA-N hydrate;hydrochloride Chemical compound O.Cl DKAGJZJALZXOOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930195733 hydrocarbon Chemical group 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- UKVIEHSSVKSQBA-UHFFFAOYSA-N methane;palladium Chemical compound C.[Pd] UKVIEHSSVKSQBA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000004702 methyl esters Chemical class 0.000 description 2
- 125000004573 morpholin-4-yl group Chemical group N1(CCOCC1)* 0.000 description 2
- PSHKMPUSSFXUIA-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylpyridin-2-amine Chemical compound CN(C)C1=CC=CC=N1 PSHKMPUSSFXUIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000001971 neopentyl group Chemical group [H]C([*])([H])C(C([H])([H])[H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 230000001293 nucleolytic effect Effects 0.000 description 2
- 125000002347 octyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 125000000913 palmityl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- 125000004194 piperazin-1-yl group Chemical group [H]N1C([H])([H])C([H])([H])N(*)C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 2
- 125000000587 piperidin-1-yl group Chemical group [H]C1([H])N(*)C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 2
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 2
- 229940113116 polyethylene glycol 1000 Drugs 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 125000001501 propionyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- NJSJBTVAKUBCKG-UHFFFAOYSA-N propylazanide Chemical compound CCC[NH-] NJSJBTVAKUBCKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 description 2
- BHRZNVHARXXAHW-UHFFFAOYSA-N sec-butylamine Chemical compound CCC(C)N BHRZNVHARXXAHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N serine phosphoethanolamine Chemical compound [NH3+]CCOP([O-])(=O)OCC([NH3+])C([O-])=O UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 description 2
- 239000001384 succinic acid Substances 0.000 description 2
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 2
- YBRBMKDOPFTVDT-UHFFFAOYSA-N tert-butylamine Chemical compound CC(C)(C)N YBRBMKDOPFTVDT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 2
- 229930003799 tocopherol Natural products 0.000 description 2
- 239000011732 tocopherol Substances 0.000 description 2
- 235000010384 tocopherol Nutrition 0.000 description 2
- 229960001295 tocopherol Drugs 0.000 description 2
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 2
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 2
- 235000019166 vitamin D Nutrition 0.000 description 2
- 239000011710 vitamin D Substances 0.000 description 2
- 235000019168 vitamin K Nutrition 0.000 description 2
- 239000011712 vitamin K Substances 0.000 description 2
- 229940046008 vitamin d Drugs 0.000 description 2
- 229940046010 vitamin k Drugs 0.000 description 2
- 229940041603 vitamin k 3 Drugs 0.000 description 2
- PSLCKQYQNVNTQI-BHFSHLQUSA-N (2s)-2-aminobutanedioic acid;(2s)-2-aminopentanedioic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O.OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O PSLCKQYQNVNTQI-BHFSHLQUSA-N 0.000 description 1
- HOQYLPODHTVCSD-VKHMYHEASA-N (2s)-2-isocyanatobutanedioic acid Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)N=C=O HOQYLPODHTVCSD-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- QYIXCDOBOSTCEI-QCYZZNICSA-N (5alpha)-cholestan-3beta-ol Chemical compound C([C@@H]1CC2)[C@@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]2(C)CC1 QYIXCDOBOSTCEI-QCYZZNICSA-N 0.000 description 1
- 125000003161 (C1-C6) alkylene group Chemical group 0.000 description 1
- ODIGIKRIUKFKHP-UHFFFAOYSA-N (n-propan-2-yloxycarbonylanilino) acetate Chemical compound CC(C)OC(=O)N(OC(C)=O)C1=CC=CC=C1 ODIGIKRIUKFKHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DTCCVIYSGXONHU-CJHDCQNGSA-N (z)-2-(2-phenylethenyl)but-2-enedioic acid Chemical compound OC(=O)\C=C(C(O)=O)\C=CC1=CC=CC=C1 DTCCVIYSGXONHU-CJHDCQNGSA-N 0.000 description 1
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004214 1-pyrrolidinyl group Chemical group [H]C1([H])N(*)C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- YQTCQNIPQMJNTI-UHFFFAOYSA-N 2,2-dimethylpropan-1-one Chemical group CC(C)(C)[C]=O YQTCQNIPQMJNTI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WZFUQSJFWNHZHM-UHFFFAOYSA-N 2-[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]-1-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethanone Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)N1CCN(CC1)CC(=O)N1CC2=C(CC1)NN=N2 WZFUQSJFWNHZHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004974 2-butenyl group Chemical group C(C=CC)* 0.000 description 1
- HYPYXGZDOYTYDR-HAJWAVTHSA-N 2-methyl-3-[(2e,6e,10e,14e)-3,7,11,15,19-pentamethylicosa-2,6,10,14,18-pentaenyl]naphthalene-1,4-dione Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(C/C=C(C)/CC/C=C(C)/CC/C=C(C)/CC/C=C(C)/CCC=C(C)C)=C(C)C(=O)C2=C1 HYPYXGZDOYTYDR-HAJWAVTHSA-N 0.000 description 1
- WDBQJSCPCGTAFG-QHCPKHFHSA-N 4,4-difluoro-N-[(1S)-3-[4-(3-methyl-5-propan-2-yl-1,2,4-triazol-4-yl)piperidin-1-yl]-1-pyridin-3-ylpropyl]cyclohexane-1-carboxamide Chemical compound FC1(CCC(CC1)C(=O)N[C@@H](CCN1CCC(CC1)N1C(=NN=C1C)C(C)C)C=1C=NC=CC=1)F WDBQJSCPCGTAFG-QHCPKHFHSA-N 0.000 description 1
- BWGRDBSNKQABCB-UHFFFAOYSA-N 4,4-difluoro-N-[3-[3-(3-methyl-5-propan-2-yl-1,2,4-triazol-4-yl)-8-azabicyclo[3.2.1]octan-8-yl]-1-thiophen-2-ylpropyl]cyclohexane-1-carboxamide Chemical compound CC(C)C1=NN=C(C)N1C1CC2CCC(C1)N2CCC(NC(=O)C1CCC(F)(F)CC1)C1=CC=CS1 BWGRDBSNKQABCB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003836 4-phenylbutoxy group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])O* 0.000 description 1
- 108020004491 Antisense DNA Proteins 0.000 description 1
- AKGWUHIOEVNNPC-LURJTMIESA-N Arg-OEt Chemical compound CCOC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N AKGWUHIOEVNNPC-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 108090000994 Catalytic RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000053642 Catalytic RNA Human genes 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- SNRUBQQJIBEYMU-UHFFFAOYSA-N Dodecane Natural products CCCCCCCCCCCC SNRUBQQJIBEYMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 239000004606 Fillers/Extenders Substances 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000575639 Homo sapiens Ribonucleoside-diphosphate reductase subunit M2 Proteins 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical class NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 239000012097 Lipofectamine 2000 Substances 0.000 description 1
- 239000012098 Lipofectamine RNAiMAX Substances 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- ABSPRNADVQNDOU-UHFFFAOYSA-N Menaquinone 1 Natural products C1=CC=C2C(=O)C(CC=C(C)C)=C(C)C(=O)C2=C1 ABSPRNADVQNDOU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylacetamide Chemical compound CN(C)C(C)=O FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LFZAGIJXANFPFN-UHFFFAOYSA-N N-[3-[4-(3-methyl-5-propan-2-yl-1,2,4-triazol-4-yl)piperidin-1-yl]-1-thiophen-2-ylpropyl]acetamide Chemical compound C(C)(C)C1=NN=C(N1C1CCN(CC1)CCC(C=1SC=CC=1)NC(C)=O)C LFZAGIJXANFPFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 206010029260 Neuroblastoma Diseases 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 108020002230 Pancreatic Ribonuclease Proteins 0.000 description 1
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102000005891 Pancreatic ribonuclease Human genes 0.000 description 1
- 108091093037 Peptide nucleic acid Proteins 0.000 description 1
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 102100026006 Ribonucleoside-diphosphate reductase subunit M2 Human genes 0.000 description 1
- 238000003120 Steady-Glo Luciferase Assay System Methods 0.000 description 1
- ODJLBQGVINUMMR-UHFFFAOYSA-N Strophanthidin Natural products CC12CCC(C3(CCC(O)CC3(O)CC3)C=O)C3C1(O)CCC2C1=CC(=O)OC1 ODJLBQGVINUMMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 108700025695 Suppressor Genes Proteins 0.000 description 1
- 102000044209 Tumor Suppressor Genes Human genes 0.000 description 1
- 108700025716 Tumor Suppressor Genes Proteins 0.000 description 1
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 125000000738 acetamido group Chemical group [H]C([H])([H])C(=O)N([H])[*] 0.000 description 1
- PWUBONDMIMDOQY-UHFFFAOYSA-N acetonitrile;hydrochloride Chemical compound Cl.CC#N PWUBONDMIMDOQY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003668 acetyloxy group Chemical group [H]C([H])([H])C(=O)O[*] 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000000304 alkynyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229930002945 all-trans-retinaldehyde Natural products 0.000 description 1
- SHGAZHPCJJPHSC-YCNIQYBTSA-N all-trans-retinoic acid Chemical compound OC(=O)\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C SHGAZHPCJJPHSC-YCNIQYBTSA-N 0.000 description 1
- QYIXCDOBOSTCEI-UHFFFAOYSA-N alpha-cholestanol Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)CCCC(C)C)C1(C)CC2 QYIXCDOBOSTCEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003862 amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000002424 anti-apoptotic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003816 antisense DNA Substances 0.000 description 1
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 description 1
- CREXVNNSNOKDHW-UHFFFAOYSA-N azaniumylideneazanide Chemical group N[N] CREXVNNSNOKDHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JPYQFYIEOUVJDU-UHFFFAOYSA-N beclamide Chemical compound ClCCC(=O)NCC1=CC=CC=C1 JPYQFYIEOUVJDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000043 benzamido group Chemical group [H]N([*])C(=O)C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 125000003236 benzoyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 125000001231 benzoyloxy group Chemical group C(C1=CC=CC=C1)(=O)O* 0.000 description 1
- JSCSSJKVVXQJON-NSHDSACASA-N benzyl (2s)-2-amino-5-(diaminomethylideneamino)pentanoate Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)OCC1=CC=CC=C1 JSCSSJKVVXQJON-NSHDSACASA-N 0.000 description 1
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 125000002843 carboxylic acid group Chemical group 0.000 description 1
- 125000006244 carboxylic acid protecting group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002057 carboxymethyl group Chemical group [H]OC(=O)C([H])([H])[*] 0.000 description 1
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 230000004700 cellular uptake Effects 0.000 description 1
- 239000012295 chemical reaction liquid Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 125000000596 cyclohexenyl group Chemical group C1(=CCCCC1)* 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 1
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 1
- 125000004915 dibutylamino group Chemical group C(CCC)N(CCCC)* 0.000 description 1
- 125000001664 diethylamino group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])N(*)C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- QKIUAMUSENSFQQ-UHFFFAOYSA-N dimethylazanide Chemical compound C[N-]C QKIUAMUSENSFQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DMBHHRLKUKUOEG-UHFFFAOYSA-N diphenylamine Chemical compound C=1C=CC=CC=1NC1=CC=CC=C1 DMBHHRLKUKUOEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 239000002532 enzyme inhibitor Substances 0.000 description 1
- 125000006627 ethoxycarbonylamino group Chemical group 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 125000002541 furyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000030279 gene silencing Effects 0.000 description 1
- 238000012226 gene silencing method Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002334 glycols Chemical class 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002883 imidazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000001041 indolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 229920000831 ionic polymer Polymers 0.000 description 1
- 125000000842 isoxazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 150000002668 lysine derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 229940100434 menadiol Drugs 0.000 description 1
- 125000006626 methoxycarbonylamino group Chemical group 0.000 description 1
- YACKEPLHDIMKIO-UHFFFAOYSA-N methylphosphonic acid Chemical compound CP(O)(O)=O YACKEPLHDIMKIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002816 methylsulfanyl group Chemical group [H]C([H])([H])S[*] 0.000 description 1
- 125000006216 methylsulfinyl group Chemical group [H]C([H])([H])S(*)=O 0.000 description 1
- 125000004170 methylsulfonyl group Chemical group [H]C([H])([H])S(*)(=O)=O 0.000 description 1
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- DIAIBWNEUYXDNL-UHFFFAOYSA-N n,n-dihexylhexan-1-amine Chemical group CCCCCCN(CCCCCC)CCCCCC DIAIBWNEUYXDNL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OOHAUGDGCWURIT-UHFFFAOYSA-N n,n-dipentylpentan-1-amine Chemical group CCCCCN(CCCCC)CCCCC OOHAUGDGCWURIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001624 naphthyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005186 naphthyloxy group Chemical group C1(=CC=CC2=CC=CC=C12)O* 0.000 description 1
- 125000005146 naphthylsulfonyl group Chemical group C1(=CC=CC2=CC=CC=C12)S(=O)(=O)* 0.000 description 1
- 125000005029 naphthylthio group Chemical group C1(=CC=CC2=CC=CC=C12)S* 0.000 description 1
- 125000004593 naphthyridinyl group Chemical group N1=C(C=CC2=CC=CN=C12)* 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 125000002971 oxazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000005426 pharmaceutical component Substances 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 description 1
- 125000000951 phenoxy group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(O*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 125000003356 phenylsulfanyl group Chemical group [*]SC1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 125000003170 phenylsulfonyl group Chemical group C1(=CC=CC=C1)S(=O)(=O)* 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-L phosphoramidate Chemical compound NP([O-])([O-])=O PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000019175 phylloquinone Nutrition 0.000 description 1
- 239000011772 phylloquinone Substances 0.000 description 1
- MBWXNTAXLNYFJB-NKFFZRIASA-N phylloquinone Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(C/C=C(C)/CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)=C(C)C(=O)C2=C1 MBWXNTAXLNYFJB-NKFFZRIASA-N 0.000 description 1
- 229960001898 phytomenadione Drugs 0.000 description 1
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 description 1
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 1
- 229920000570 polyether Polymers 0.000 description 1
- 239000004626 polylactic acid Substances 0.000 description 1
- 230000000379 polymerizing effect Effects 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 229920002635 polyurethane Polymers 0.000 description 1
- 239000004814 polyurethane Substances 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M potassium benzoate Chemical compound [K+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1 XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 150000003138 primary alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 150000003141 primary amines Chemical class 0.000 description 1
- 125000004805 propylene group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([*:1])C([H])([H])[*:2] 0.000 description 1
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 125000003226 pyrazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004076 pyridyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005554 pyridyloxy group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005030 pyridylthio group Chemical group N1=C(C=CC=C1)S* 0.000 description 1
- 125000000714 pyrimidinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000168 pyrrolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002294 quinazolinyl group Chemical group N1=C(N=CC2=CC=CC=C12)* 0.000 description 1
- 125000005493 quinolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 230000002207 retinal effect Effects 0.000 description 1
- NCYCYZXNIZJOKI-OVSJKPMPSA-N retinal group Chemical group C\C(=C/C=O)\C=C\C=C(\C=C\C1=C(CCCC1(C)C)C)/C NCYCYZXNIZJOKI-OVSJKPMPSA-N 0.000 description 1
- 229930002330 retinoic acid Natural products 0.000 description 1
- 229960003471 retinol Drugs 0.000 description 1
- 235000020944 retinol Nutrition 0.000 description 1
- 239000011607 retinol Substances 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 108091092562 ribozyme Proteins 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 125000005920 sec-butoxy group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001743 silencing effect Effects 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 230000010473 stable expression Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- ODJLBQGVINUMMR-HZXDTFASSA-N strophanthidin Chemical compound C1([C@H]2CC[C@]3(O)[C@H]4[C@@H]([C@]5(CC[C@H](O)C[C@@]5(O)CC4)C=O)CC[C@@]32C)=CC(=O)OC1 ODJLBQGVINUMMR-HZXDTFASSA-N 0.000 description 1
- 150000003900 succinic acid esters Chemical class 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 125000001981 tert-butyldimethylsilyl group Chemical group [H]C([H])([H])[Si]([H])(C([H])([H])[H])[*]C(C([H])([H])[H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000000037 tert-butyldiphenylsilyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[Si]([H])([*]C(C([H])([H])[H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 125000000383 tetramethylene group Chemical group [H]C([H])([*:1])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[*:2] 0.000 description 1
- QIWDGSYHBCMXSI-UHFFFAOYSA-J tetrasodium;(2-methyl-4-phosphonatooxynaphthalen-1-yl) phosphate;hexahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=CC=CC2=C(OP([O-])([O-])=O)C(C)=CC(OP([O-])([O-])=O)=C21 QIWDGSYHBCMXSI-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 description 1
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K thiophosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=S RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 229960001727 tretinoin Drugs 0.000 description 1
- 125000001425 triazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- IMFACGCPASFAPR-UHFFFAOYSA-N tributylamine Chemical group CCCCN(CCCC)CCCC IMFACGCPASFAPR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RKBCYCFRFCNLTO-UHFFFAOYSA-N triisopropylamine Chemical group CC(C)N(C(C)C)C(C)C RKBCYCFRFCNLTO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000025 triisopropylsilyl group Chemical group C(C)(C)[Si](C(C)C)(C(C)C)* 0.000 description 1
- GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N trimethylamine Chemical group CN(C)C GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000026 trimethylsilyl group Chemical group [H]C([H])([H])[Si]([*])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 1
- NCYCYZXNIZJOKI-UHFFFAOYSA-N vitamin A aldehyde Natural products O=CC=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C NCYCYZXNIZJOKI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019143 vitamin K2 Nutrition 0.000 description 1
- 239000011728 vitamin K2 Substances 0.000 description 1
- 235000012711 vitamin K3 Nutrition 0.000 description 1
- 239000011652 vitamin K3 Substances 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
- A61K31/7105—Natural ribonucleic acids, i.e. containing only riboses attached to adenine, guanine, cytosine or uracil and having 3'-5' phosphodiester links
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
- A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
- A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
- A61K47/645—Polycationic or polyanionic oligopeptides, polypeptides or polyamino acids, e.g. polylysine, polyarginine, polyglutamic acid or peptide TAT
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
- C12N15/88—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation using microencapsulation, e.g. using amphiphile liposome vesicle
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Neurology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
近年、遺伝子治療の一つの方法として、RNA干渉(RNA interference、以下RNAiと略す)が発見された。RNAiは、30塩基以下の短鎖RNAが疾病原因遺伝子の機能抑制発現にかかわる主要分子である。この短鎖RNAは、siRNA(small interfering RNA)と名付けられている(特許文献1)。2001年に哺乳類細胞におけるRNAiが報告されて以来(非特許文献1)、RNAiをあらゆる疾患治療へ適用することを目指した研究開発が活発に行われている。しかしながら、核酸医薬は一般的に化学的安定性に乏しく、静脈内投与等の全身投与による治療効果を得ることはできない。特にRNAは、血中に存在する様々な酵素により容易に分解される物性であり、siRNAを核酸医薬として用いることの大きな障害となっている。このためsiRNAを核酸医薬として用いる治療剤は、目や呼吸器など、siRNAの局所投与により治療効果が得られる疾病に限られており、治療できる疾病の適応範囲が限定的である。このため、siRNA等の遺伝子治療に用いる核酸医薬を血中投与に適用して、体内の疾病患部に安定かつ効率的に送達する技術の開発が求められている。
以上のように、全身投与型核酸送達システムを完成させるには、(i)投与から標的患部到達までの間、核酸を安定に保持して血中分解酵素との接触を回避して安定性を確保すると共に、標的患部組織以外の細胞への核酸導入を抑制すること、(ii)患部到達後は、核酸を保持したまま細胞内に侵入すること、(iii)細胞質内に到達後は、核酸(siRNA)を放出すること、(iv)生体親和的であること、が求められる。
しかしながら、特許文献2記載の方法では、カチオンとアニオンとの静電相互作用のみでミセルを形成しているため、プラスミドDNAと比較して電荷密度の低いsiRNA等では静電相互作用が弱く、血中安定性の確保が困難である。また、非特許文献2記載の方法では、粒子安定性が高く優れた血中滞留性を確保できるものの、siRNA等を放出するための技術的要素が考慮されていない。
[1] カチオン性官能基と炭化水素基が導入された二官能性ポリマー(a)、ポリエチレングリコールセグメントと疎水性ポリマーセグメントが連結したブロック型コポリマー(b)並びにビタミンA誘導体、ビタミンD誘導体、ビタミンE誘導体、ビタミンK誘導体及びコレステロール誘導体からなる群から選択される1種以上の脂溶性添加剤(c)、を含有することを特徴とする核酸輸送用組成物。
[2] 前記二官能性ポリマー(a)の前記炭化水素基が、直鎖状または分岐鎖状の(C8〜C40)のアルキル基、直鎖状または分岐鎖状の(C8〜C40)のアルケニル基及び直鎖状または分岐鎖状の(C8〜C40)のアラルキル基からなる群から選択される1種以上の炭化水素基である前記[1]に記載の核酸輸送用組成物。
[3] 前記二官能性ポリマー(a)の前記カチオン性官能基が、アミノ基、ジアルキルアミノ基、トリアルキルアンモニウム基及びグアニジル基からなる群から選択される1種以上のカチオン性官能基である前記[1]または[2]に記載の核酸輸送用組成物。
[4] 前記二官能性ポリマー(a)が、ポリアスパラギン酸誘導体またはポリグルタミン酸誘導体であり、該ポリアスパラギン酸誘導体または該ポリグルタミン酸誘導体は、側鎖カルボキシ基に直接または結合基を介して、前記カチオン性官能基及び前記炭化水素基が導入されており、該二官能性ポリマー1分子当りの該カチオン性官能基導入率が10〜100モル当量/ポリマー分子であり、該カチオン性官能基と該炭化水素基の含有モル当量比率(カチオン性官能基含有モル当量:炭化水素基含有モル当量)が1〜5:1である前記[1]〜[3]の何れか一項に記載の核酸輸送用組成物。
[5] 前記ポリエチレングリコールセグメントと疎水性ポリマーセグメントが連結したブロック型コポリマー(b)が、該疎水性ポリマーセグメントがポリアスパラギン酸誘導体またはポリグルタミン酸誘導体であり、該ポリアスパラギン酸誘導体または該ポリグルタミン酸誘導体は、側鎖カルボキシ基に疎水性基が直接または結合基を介して結合したセグメント構造であり、該疎水性基が、直鎖状または分岐鎖状の(C1〜C30)のアルキル基、直鎖状または分岐鎖状の(C2〜C30)のアルケニル基または直鎖状または分岐鎖状の(C7〜C30)のアラルキル基からなる群から選択される1種以上である前記[1]〜[4]の何れか一項に記載の核酸輸送用組成物。
[6] 前記ブロック型コポリマー(b)が、ポリエチレングリコールセグメントが、エチレンオキシ単位;(CH2CH2O)が5〜11,500の繰り返し単位構造であり、疎水性ポリマーセグメントが、アスパラギン酸誘導体単位またはグルタミン酸誘導体単位が5〜200の繰り返し単位構造のポリアスパラギン酸誘導体またはポリグルタミン酸誘導体であり、該ポリアスパラギン酸誘導体またはポリグルタミン酸誘導体の側鎖カルボキシ基に、前記疎水性基が直接または結合基を介して結合したアスパラギン酸誘導体単位またはグルタミン酸誘導体単位が3〜200である前記[5]に記載の核酸輸送用組成物。
[7] 前記二官能性ポリマー(a)が、一般式(1)
[8] 前記一般式(1)で示される二官能性ポリマー(a)において、R4は(C8〜C30)の直鎖状または分岐鎖状のアルキル基、(C8〜C30)の直鎖状または分岐鎖状のアルケニル基及び(C8〜C30)の直鎖状または分岐鎖状のアラルキル基からなる群から選択される1種以上の炭化水素基を示し、(a+b+c+d+e+f+g)は15〜200の整数であり、(a+b)は10〜150の整数であり、(c+d)は5〜100の整数であり、(a+b):(c+d)が1〜3:1である前記[7]に記載の核酸輸送用組成物。
[9] 前記ブロック型コポリマー(b)が、一般式(2)
[10] 前記一般式(2)で示されるブロック型コポリマーにおいて、R14が直鎖状または分岐鎖状の(C8〜C30)のアルキル基、直鎖状または分岐鎖状の(C8〜C30)のアルケニル基及び直鎖状または分岐鎖状の(C7〜C20)のアラルキル基からなる群から選択される1種以上であり、(m+n+o+p+q)は6〜150の整数を示し、(m+n)は3〜150の整数である前記[9]に記載の核酸輸送用組成物。
[11] 前記二官能性ポリマー(a)、前記ブロック型コポリマー(b)及び前記脂溶性添加剤(c)の含有比率(w/w)が(a):(b):(c)=1:0.1〜5:0.1〜5である前記[1]〜[10]の何れか一項に記載の核酸輸送用組成物。
[12] 前記[1]〜[11]の何れか一項に記載の核酸輸送用組成物に、核酸を含有させた医薬組成物。
[13] 前記核酸がRNA干渉(RNAi)を利用した標的遺伝子の発現抑制作用を有するRNAである前記[12]に記載の医薬組成物。
[14] 前記[12]または[13]に記載の医薬組成物を含有する遺伝子治療剤。
[15] 一般式(1)
当該核酸医薬組成物の、核酸医薬と前記二官能性ポリマー(内核形成ポリマー)の複合体と、前記ブロック型コポリマー(外殻形成ポリマー)は、比較的弱い疎水性相互作用による会合体が形成されるため、該複合体は比較的容易に放出され得る。一方、脂溶性添加剤が、該複合体と該ブロック型コポリマーの会合体形成力を高める。以上の構成を用いた本発明は、核酸医薬の安定な保持と放出性の確保を両立する核酸輸送用組成物を提供する。
本発明の核酸輸送用組成物を用いた核酸医薬は、核酸分解酵素に対する抵抗性を示すことから核酸安定性に優れ、血中投与に適用することができる。また、投与された該核酸医薬は、標的部位において核酸医薬を放出し、標的組織細胞内へ取り込ませ、細胞質内で核酸医薬を放出して機能発現させることを可能とする。該核酸医薬は、細胞質内での核酸放出と、核酸機能発現の目安となる標的タンパク発現の抑制作用(サイレンシング効果)が認められており、本発明は、血中投与にて機能発現させる核酸医薬組成物を提供する。
本発明において、カチオン性官能基と炭化水素基が導入された二官能性ポリマー(a)とは、単鎖のポリマー主鎖に、複数のカチオン性官能基と複数の炭化水素基が、それぞれ分岐型に官能基修飾されたポリマー構造体である。
当該二官能性ポリマーのポリマー主鎖は、カチオン性官能基と炭化水素基の2つの官能基修飾可能なカルボキシ基、アミノ基、水酸基等の反応性置換基を複数有する単鎖ポリマーが好ましい。該単鎖ポリマー主鎖構造としては、ポリアミノ酸、ポリビニル誘導体、ポリエステル類、ポリエーテル類、ポリアミド類、ポリウレタン類を挙げることができ、これらの単鎖ポリマーにカルボキシ基、アミノ基、水酸基等の反応性置換基を複数有する単鎖ポリマーが好ましい。中でも好ましくは、複数のカルボキシ基で修飾された単鎖ポリマーであり、ポリアスパラギン酸、ポリグルタミン酸、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、ポリマレイン酸、ポリ(スチレン−マレイン酸)等のポリカルボン酸高分子誘導体を挙げることができる。すなわち、これらのポリカルボキシ基修飾ポリマーを主鎖として用い、側鎖のカルボキシ基に、複数のカチオン性官能基と複数の炭化水素基をエステル結合またはアミド結合により、それぞれの官能基を導入した二官能性ポリマーを用いることが好ましい。
該二官能性ポリマーの分子量は特に限定されるものではないが、本発明は血中投与を指向していることから、本発明組成物として水溶液で用いられる分子量を用いることが好ましい。該二官能性ポリマーは、平均分子量として1,000〜100,000のポリマーを用いることが好ましい。なお、該平均分子量はGPC法等の常法のポリマー分子量測定方法により測定される分子量にて規定される値を用いてもよい。しかしながら、該二官能性ポリマーは、カチオン性官能基と炭化水素基を導入する必要があることから、単位重量当たりの側鎖官能基含量にて平均分子量を算出する方法が好ましい。側鎖官能基がカルボキシ基である場合は、NMR法または滴定法によりカルボキシ基含量を求めることが好ましい。より好ましくは滴定法によるカルボキシ基含量を用い、該二官能性ポリマーの分子量を規定することが望まれる。
好ましくは、置換基を有していてもよい直鎖状または分岐鎖状の(C8〜C40)のアルキル基、置換基を有していてもよい直鎖状または分岐鎖状の(C8〜C40)のアルケニル基または置換基を有していてもよい直鎖状または分岐鎖状の(C8〜C40)のアラルキル基である。特に好ましくは、置換基を有していてもよい直鎖状または分岐鎖状の(C8〜C30)のアルキル基、置換基を有していてもよい直鎖状または分岐鎖状の(C8〜C30)のアルケニル基または置換基を有していてもよい直鎖状または分岐鎖状の(C8〜C30)のアラルキル基である。
前記置換基を有していてもよい直鎖状または分岐鎖状の(C8〜C30)のアルキル基としては、例えば、オクチル基、デシル基、ドデシル基、テトラデシル基、ヘキサデシル基、オクタデシル基が挙げられる。
前記置換基を有していてもよい直鎖状または分岐鎖状の(C8〜C30)のアルケニル基としては、例えば、9−ヘキサデセニル基、cis−9−オクタデセニル基、cis、cis−9、12−オクタデカジエニル基等が挙げられる。
前記置換基を有していてもよい直鎖状または分岐鎖状の(C8〜C30)のアラルキル基としては、例えば、2‐フェニルエチル基、4−フェニルブチル基、8−フェニルオクチル基等が挙げられる。
前記アルキルチオ基としては(C1〜C8)のアルキルチオ基を示し、例えば、メチルチオ基、イソプロピルチオ基、ベンジルチオ基等が挙げられる。
前記アリールチオ基としては、例えば、フェニルチオ基、ナフチルチオ基、ピリジルチオ基等が挙げられる。
前記アルキルスルフィニル基としては(C1〜C8)のアルキルスルフィニル基を示し、例えば、メチルスルフィニル基、イソプロピルスルフィニル基、シクロヘキシルスルフィニル基、ベンジルスルフィニル基等が挙げられる。
前記アリールスルフィニル基としては、例えば、フェニルスルフィニル基、ナフチルスルフィニル基、ピリジルスルフィニル基等が挙げられる。
前記アルキルスルホニル基としては(C1〜C8)のアルキルスルホニル基を示し、例えば、メチルスルホニル基、イソプロピルスルホニル基、ベンジルスルホニル基等が挙げられる。
前記アリールスルホニル基としては、例えば、フェニルスルホニル基、ナフチルスルホニル基、ピリジルスルホニル基等が挙げられる。
前記スルファモイル基としては、例えば、ジメチルスルファモイル基、フェニルスルファモイル基等が挙げられる。
前記アリールオキシ基としては、例えば、フェノキシ基、ナフチルオキシ基、ピリジルオキシ基等が挙げられる。
前記アシルオキシ基としては(C1〜C8)のアシルオキシ基を示し、例えば、アセトキシ基、ベンゾイルオキシ基等が挙げられる。
前記アルコキシカルボニルオキシ基としては(C1〜C8)のアルコキシカルボニルオキシ基を示し、例えば、メトキシカルボニルオキシ基、トリフルオロメトキシカルボニル基等が挙げられる。
前記カルバモイルオキシ基としては、例えば、ジメチルカルバモイルオキシ基、フェニルカルバモイルオキシ基等が挙げられる。
前記アシルアミノ基としては、例えば、アセチルアミノ基、ベンゾイルアミノ基等が挙げられる。
前記アルコキシカルボニルアミノ基としては、例えば、メトキシカルボニルアミノ基、エトキシカルボニルアミノ基、ベンジルオキシカルボニルアミノ基等が挙げられる。
前記ウレイド基としては、例えば、トリメチルウレイド基、1−メチル−3−フェニル−ウレイド基等が挙げられる。
前記スルホニルアミノ基としては、例えば、メタンスルホニルアミノ基、ベンゼンスルホニルアミノ基等が挙げられる。
前記スルファモイルアミノ基としては、例えば、ジメチルスルファモイルアミノ基等が挙げられる。
前記アシル基としては、例えば、アセチル基、ピバロイル基、ベンゾイル基、ピリジンカルボニル基等が挙げられる。
前記アルコキシカルボニル基としては、例えば、メトキシカルボニル基、ベンジルオキシカルボニル基等が挙げられる。
前記カルバモイル基としては、例えば、ジメチルカルバモイル基、フェニルカルバモイル基等が挙げられる。
前記シリル基としてはトリメチルシリル基、トリイソプロピルシリル基、tert−ブチルジメチルシリル基、tert−ブチルジフェニルシリル基等が挙げられる。
前記二官能性ポリマー(a)に導入される炭化水素基は、二官能性ポリマー(a)と核酸により形成される複合体が、疎水性を示す物性を付与できる炭化水素基であれば良く、置換基を有していてもよい炭化水素基としては、特に限定されるものではなく適用することができる。特に好ましくは無置換体、アルコキシ基、アリールオキシ基、アシルオキシ基、アルコキシカルボニルオキシ基である。無置換体の炭化水素基を用いることが、特に好ましい。
前記ジアルキルアミノ基としては、好ましくは(C1〜C8)のジアルキルアミノ基を示し、例えば、ジメチルアミノ基、ジエチルアミノ基、ジイソプロピルアミノ基、ジブチルアミノ基、ジペンチルアミノ基、ジシクロヘキシルアミノ基、ジベンジルアミノ基等が挙げられる。また、2つのアルキル基が環状である環状2級アミノ基も含まれ、例えば、モルホリノ基、ピペラジン−1−イル基、4−メチルピペラジン−1−イル基、ピペリジン−1−イル基、ピロリジン−1−イル基等が挙げられる。
前記トリアルキルアンモニウム基としては、好ましくは(C1〜C8)のトリアルキルアンモニウム基を示し、例えば、トリメチルアンモニウム基、トリエチルアンモニウム基、トリイソプロピルアンモニウム基、トリブチルアンモニウム基、トリペンチルアンモニウム基、トリヘキシルアンモニウム基等が挙げられる。
前記アミン性窒素官能基を含む置換基としては、前記アミン性窒素官能基が置換した他の置換基を有していてもよい(C1〜10)のアルキル基であってもよい。好ましくは置換基を有していてもよい−(CH2)h−X基(該X基が前記アミン性窒素官能基であり、hは1〜10の整数を示す)または置換基を有していてもよい−(CH2)i−NH−(CH2)j−X基(該X基が前記アミン性窒素官能基であり、i及びjは1〜5の整数を示す)である。
すなわち、置換基を有していてもよい−NH−(CH2)h−X基(該X基及びhは前述と同義である)若しくは置換基を有していてもよい−NH−(CH2)i−NH−(CH2)j−X基(該X基及びi、jは前述と同義である)、または置換基を有していてもよい−O−(CH2)h−X基(該X基及びhは前述と同義である)若しくは置換基を有していてもよい−O−(CH2)i−NH−(CH2)j−X基(該X基及びi、jは前述と同義である)が好ましい。
前記置換基において、有していてもよい置換基としては、メルカプト基、水酸基、ハロゲン原子、ニトロ基、シアノ基、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、炭素環若しくは複素環アリール基、アルキルチオ基、アリールチオ基、アルキルスルフィニル基、アリールスルフィニル基、アルキルスルホニル基、アリールスルホニル基、スルファモイル基、アルコキシ基、アリールオキシ基、アシルオキシ基、アルコキシカルボニルオキシ基、カルバモイルオキシ基、置換または無置換アミノ基、アシルアミノ基、アルコキシカルボニルアミノ基、ウレイド基、スルホニルアミノ基、スルファモイルアミノ基、ホルミル基、アシル基、カルボキシ基、アルコキシカルボニル基、N−アルキルアミド基、カルバモイル基またはシリル基等を挙げることができる。
特に、アルコキシカルボニル基(−CO−ORa;該Ra基が(C1〜C10)のアルキル基または(C7〜C12)アラルキル基を示す)またはN−アルキルアミド基(−CO−NH−Rb;該Rb基が(C1〜C10)のアルキル基または(C7〜C12)アラルキル基を示す)が置換された−NH−(CH2)h−X基(該X基が前記アミン性窒素官能基であり、hは1〜10の整数を示す)が殊更好ましい。
前記−NH−(CH2)h−X基の−NH−に隣接するメチレン基に、該アルコキシカルボニル基またはN−アルキルアミド基を有する場合、アミノ酸誘導体が特に好ましく、アミノ酸エステル誘導体またはアミノ酸アミド誘導体を用いることができる。すなわち、アミン性窒素官能基を有するリジン誘導体、オルニチン誘導体、アルギニン誘導体が好ましい。より好ましくはアルギニン誘導体である。
前記アルギニン誘導体としては、例えば、アルギニンアルキルエステルまたはアルギニンアルキルアミドを挙げることができる。アルギニンアルキルエステルとしては、例えば、アルギニンメチルエステル、アルギニンエチルエステル、アルギニンイソプロピルエステル、アルギニン−tert−ブチルエステル、アルギニンベンジルエステル等が挙げられる。アルギニンアルキルアミドとしてはアルギニンメチルアミド、アルギニンエチルアミド、アルギニンイソプロピルアミド、アルギニン−tert−ブチルアミド、アルギニンベンジルアミド、アルギニンジメチルアミド等が挙げられる。
主鎖として用いるポリアスパラギン酸またはポリグルタミン酸としては、α−アミド結合酸型重合体であっても、側鎖カルボキシ基とのβ−アミド結合型またはγ−アミド結合型であっても、その混合物であってもよい。該ポリアミノ酸の平均分子量としては、1,000〜100,000であることが好ましく、重合数としては8〜800の範囲のものを用いることが好ましい。より好ましくは、平均分子量が2,000〜50,000であり、重合数としては20〜400の範囲のポリアミノ酸である。
ポリアスパラギン酸またはポリグルタミン酸の側鎖カルボキシ基と、該カチオン性官能基及び該炭化水素基を結合させる態様としては、側鎖カルボキシ基に直接的に結合させてもよく、適当な結合基を介して結合させてもよい。
該結合基としては特に限定されるものではないが、例えば、片末端がカルボニル基との結合性官能基であり、もう一方の片末端が前記カチオン性官能基及び前記炭化水素基との結合性官能基を有する連結基が挙げられる。
該結合基としては、例えば、酸素原子(−O−)、−NH−、硫黄原子(−S−)、−NH−(CH2)x−(xは1〜10の整数を示す)、−NH−(CH2)x−O−(xは1〜10の整数を示す)、−NH−(CH2)x−NH−(xは1〜10の整数を示す)、−NH−(CH2)x−S−(xは1〜10の整数を示す)、−O−(CH2)y−(yは1〜10の整数を示す)、−O−(CH2)y−O−(yは1〜10の整数を示す)、−O−(CH2)y−NH−(yは1〜10の整数を示す)、−O−(CH2)y−S−(yは1〜10の整数を示す)等を挙げることができる。
また、該結合基としてアミノ酸を用いてもよい。結合基として用いられるアミノ酸は、天然型アミノ酸、非天然型アミノ酸のいずれでよく、L体であってもD体であってもよい。アミノ酸を結合基として用いる場合は、二官能性ポリマーのポリスパラギン酸またはポリグルタミン酸のカルボニル基と、該アミノ酸のN末アミノ基が結合し、他方C末カルボキシ基とエステル結合またはアミド結合を介して、前記カチオン性官能基及び前記炭化水素基を結合させる態様を挙げることができる。結合基として用いるアミノ酸としては、グリシン、アラニン、β−アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、フェニルアラニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、リシン、アルギニン、ヒスチジン等を挙げることができる。
一方、該二官能性ポリマー(a)において、前記炭化水素基は前記核酸との複合体に疎水性を具備させるために必要であり、該二官能性ポリマー(a)のポリマー1分子当りに該カチオン性官能基が10モル当量以上を有することが望ましい。前記炭化水素基と前記カチオン性官能基との導入比率は、好ましくは、カチオン性官能基モル当量と前記置換基を有していてもよい炭化水素基のモル当量の比率(カチオン性官能基モル当量:前記置換基を有していてもよい炭化水素基モル当量)が1〜5:1である。より好ましくは該比率が1〜3:1である。
また前記R1及びR6における(C7〜C10)のアラルキル基としては、ベンジル基、1−フェニルエチル基、2−フェニルエチル基、4−フェニルブチル基等を挙げることができる。
一般式(1)において、R6は、一分子中において同一官能基であっても、異なった置換基の組み合せであってもよい。好ましくは、R6は同一の官能基を用いることである。
前記R3における(C1〜C6)のアルコキシカルボニル基としては、メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、tert−ブトキシカルボニル基、シクロへキシルオキシカルボニル基等が挙げられる。
該R4における直鎖状または分岐鎖状の(C8〜C40)のアルケニル基とは、例えば9−ヘキサデセニル基、cis−9−オクタデセニル基、cis、cis−9、12−オクタデカジエニル基等が挙げられる。
該R4における直鎖状または分岐鎖状の(C8〜C40)のアラルキル基としては、例えば2−フェニルエチル基、4−フェニルブチル基、8−フェニルオクチル基等が挙げられる。
これら該R4の(C8〜C40)のアルキル基、(C8〜C40)のアルケニル基及び(C8〜C40)のアラルキル基は、それぞれ適当な置換基を有していてもよい。
該置換基としては、メルカプト基、水酸基、ハロゲン原子、ニトロ基、シアノ基、炭素環若しくは複素環アリール基、アルキルチオ基、アリールチオ基、アルキルスルフィニル基、アリールスルフィニル基、アルキルスルホニル基、アリールスルホニル基、スルファモイル基、アルコキシ基、アリールオキシ基、アシルオキシ基、アルコキシカルボニルオキシ基、カルバモイルオキシ基、置換または無置換アミノ基、アシルアミノ基、アルコキシカルボニルアミノ基、ウレイド基、スルホニルアミノ基、スルファモイルアミノ基、ホルミル基、アシル基、カルボキシ基、アルコキシカルボニル基、カルバモイル基またはシリル基等を挙げることができる。芳香環上の置換位置は、オルト位でも、メタ位でも、パラ位でもよい。該置換基の定義は前述と同義である。
一般式(1)において、一分子中におけるR4は、同一官能基であっても、異なった置換基の組み合せであってもよい。好ましくは、R4は同一の官能基を用いることである。
エステル誘導体としては、直鎖状、分岐鎖状または環状の(C1〜C10)のアルキルエステルが好ましい。前記直鎖状アルキルエステルとしては、例えばメチルエステル、エチルエステル、n−プロピルエステル、n−ブチルエステル、n−へキシルエステル、n−デシルエステル等を挙げることができる。前記分岐鎖状アルキルエステルとしては、例えばイソプロピルエステル、tert−ブチルエステル、1−メチル−プロピルエステル、2−メチル−プロピルエステル、2,2−ジメチルプロピルエステル等が挙げられる。前記環状アルキルエステルとしては、例えばシクロプロピルエステル、シクロブチルエステル、シクロペンチルエステル、シクロヘキシルエステル、アダマンチルエステル等が挙げられる。
前記アミド誘導体としては、直鎖状、分岐鎖状または環状の(C1〜C10)のアルキルアミドが好ましい。直鎖状アルキルアミドとしては、例えばメチルアミド、エチルアミド、n−プロピルアミド、n−ブチルアミド、n−へキシルアミド、n−デシルアミド等を挙げることができる。前記分岐鎖状アルキルアミドとしては、例えばイソプロピルアミド、tert−ブチルアミド、1−メチル−プロピルアミド、2−メチル−プロピルアミド、2,2−ジメチルプロピルアミド等が挙げられる。前記環状アルキルアミドとしては、例えばシクロプロピルアミド、シクロブチルアミド、シクロペンチルアミド、シクロヘキシルアミド、アダマンチルアミド等が挙げられる。
該R7及びR8における3級アミノ基で置換されていてもよい(C1〜C5)のアルキル基としては、3−ジメチルアミノプロピル基、5−ジメチルアミノペンチル基等が挙げられる。
一般式(1)において、前記R5は、水酸基、カルボキシ基が保護されたアミノ酸または−N(R7)CONH(R8)であるが、一分子中においてこれらを1種以上含む置換基である。好ましくは、水酸基と−N(R7)CONH(R8)が共存した置換基である。
また、該結合基としてアミノ酸を用いてもよい。結合基として用いられるアミノ酸は、天然型アミノ酸、非天然型アミノ酸のいずれでもよく、L体であってもD体であってもよい。アミノ酸を結合基として用いる場合は、主鎖ポリマーの側鎖カルボニル基と、該アミノ酸のN末アミノ基が結合し、他方C末カルボキシ基とエステル結合またはアミド結合を介して、アルギニン誘導体、R4またはR6を結合させる態様を挙げることができる。結合基として用いるアミノ酸としては、グリシン、アラニン、β−アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、フェニルアラニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、リシン、アルギニン、ヒスチジン等を挙げることができる。
また、カルボニル基と、アルギニン誘導体、R4またはR6が直接結合できる場合であって、相当する結合性官能基がない場合は、該X1、X2及びX3は結合を表す。
一般式(1)において、該X1、X2及びX3は一分子中で同一結合基であってもよく、異なる結合基の混合体であってもよい。
そのうち、アルギニン誘導体が結合した構成単位は必須構成であり、その総含量数(a+b)は5〜200の整数である。疎水性の炭化水素基であるR4が結合した構成単位も必須構成であり、その総含量数(c+d)は5〜200の整数である。なお、R5が結合した構成単位及び側鎖カルボキシ基が分子内環化型構成単位は、任意の構成である。
また、ポリマー主鎖の重合数である(a+b+c+d+e+f+g)は15〜200の整数であることが好ましい。
更に、アルギニン誘導体が結合した構成単位の総含量数(a+b)は10〜150の整数であり、疎水性の炭化水素基であるR4が結合した構成単位の総含量数(c+d)は5〜100の整数であり、(a+b):(c+d)が1〜3:1であることが好ましい。
本二官能性ポリマー(a)は、官能基修飾が可能なカルボキシ基、アミノ基、水酸基等の反応性官能基を複数有する単鎖ポリマーに対し、適当な結合性官能基を有するカチオン性官能基含有化合物と、適当な結合性官能基を有する炭化水素基含有化合物を反応させることで調製することができる。主鎖に用いる単鎖ポリマーは、市販品をそのまま用いてもよく、重合反応により合成したものを用いてもよい。2つの官能基の反応様式は、該単鎖ポリマーの反応性官能基と、該カチオン性官能基含有化合物及び該炭化水素基含有化合物の各結合性官能基の組み合せにより、適宜設定することができる。
好ましくは、該単鎖ポリマーは反応性官能基がカルボキシ基である高分子化ポリカルボン酸化合物を用い、該カチオン性官能基含有化合物及び該炭化水素基含有化合物の各結合性官能基はアミノ基及び/または水酸基であり、アミド結合様式及び/またはエステル結合様式で結合させた二官能性ポリマーが用いられる。その場合、高分子化ポリカルボン酸化合物と、該カチオン性官能基含有化合物及び該炭化水素基含有化合物を、適当な縮合条件で反応させることで、当該二官能性ポリマーを合成することができる。縮合条件は、通常の有機合成反応で用いることができる方法を適宜使用することができる。
適当な1級アミン化合物または1級アルコール化合物に、N−カルボニルアスパラギン酸無水物を順次反応させ、片末端に1級アミン結合残基または1級アルコール結合残基を有するポリアスパラギン酸誘導体を合成する。この場合、N−カルボニルアスパラギン酸無水物において、アスパラギン酸側鎖のカルボキシ基は、ベンジルエステル等の適当なカルボン酸保護基修飾体を用いることが好ましい。得られたポリアスパラギン酸誘導体は、更に任意に、もう一方の末端基(N末端)をアシル化することもできる。このポリアスパラギン酸誘導体の側鎖カルボキシ基の保護基を、適当な条件により脱保護基反応を行うことにより、二官能性ポリマー(a)の主鎖ポリマーとなるポリアスパラギン酸を得ることができる。
該カルボジイミド脱水縮合剤としては、ジシクロヘキシルカルボジイミド(DCC)、ジイソプロピルカルボジイミド(DIPCI)、1−エチル−3−(3−ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩(WSC)等を用いることができる。該脱水縮合反応の際に、N,N−ジメチルアミノピリジン(DMAP)等の反応補助剤を用いてもよい。
本発明において、カチオン性官能基と炭化水素基の導入量は、脱水縮合反応において、各官能基含有化合物の仕込み量を適宜増減させることで調整することができる。なお、カルボジイミド縮合剤としてジシクロヘキシルカルボジイミド(DCC)を用いた場合、−N(R7)CONH(R8)のR7及びR8はシクロへキシル基となる。ジイソプロピルカルボジイミド(DIPCI)を用いて縮合反応を行った場合、R7及びR8はイソプロピル基となる。1−エチル−3−(3−ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩(WSC)を用いた場合、−N(R7)CONH(R8)のR7及びR8はエチル基と3−ジメチルアミノプロピルの混合置換体となる。
前記反応終了後に任意の精製工程を経由して本発明の二官能性ポリマー(a)を製造することができる。
前記二官能性ポリマー(a)の主鎖ポリマーとして、好ましく用いられるポリグルタミン酸の合成方法は、前述の合成例におけるN−カルボニルアスパラギン酸無水物に代えて、N−カルボニルグルタミン酸無水物を用いてポリグルタミン酸を得て、その後、該カチオン性官能基含有化合物並びに該炭化水素基含有化合物を導入させれば、主鎖ポリマーがポリグルタミン酸の二官能性ポリマー(a)を合成することができる。
本発明において、ポリエチレングリコールセグメントと疎水性ポリマーセグメントが連結したブロック型コポリマー(b)が用いられる。該ブロック型コポリマー(b)は、ポリエチレングリコールセグメントと疎水性ポリマーセグメントが適当な連結基にて結合したABブロック型コポリマーである。
該ポリエチレングリコールセグメントとは、(CH2CH2O)単位構造の重合度が5〜20,000のポリエチレングリコール鎖を含むポリマー部を示す。好ましくは、該重合度が5〜11,500である。特に好ましくは、該重合度が40〜2,500のポリエチレングリコール鎖を含むポリマー部である。該ポリエチレングリコールフラグメントのポリエチレングリコール相当の平均分子量は、500〜900,000、好ましくは500〜500,000であり、特に好ましくは2,000〜100,000である。なお、該ポリエチレングリコールセグメントの分子量とは、ポリエチレングリコール標準品を基準としたGPC法(Gel Permeation Chromatography)により測定されるピークトップ分子量である。
該疎水性ポリマーセグメントとしては、疎水性の程度を容易に調整することが可能である理由から、ポリアスパラギン酸やポリグルタミン酸、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、ポリマレイン酸等のポリカルボン酸含有ポリマーを用い、このカルボキシ基に複数の疎水性置換基を導入したポリカルボン酸エステルまたはポリカルボン酸アミドを用いることが好ましい。より好ましくは、ポリアスパラギン酸の側鎖に、疎水性官能基を結合させたポリアスパラギン酸エステル若しくはポリアスパラギン酸アミド、またはポリグルタミン酸の側鎖に、疎水性官能基を結合させたポリグルタミン酸エステル若しくはポリグルタミン酸アミドである。
該疎水性ポリマーセグメントとしてポリカルボン酸含有ポリマーを用いる場合、疎水基を導入するためのカルボン酸基当量に基づき該疎水性ポリマーセグメントの分子量を規定することが好ましい。該カルボン酸当量は、疎水性ポリマーセグメント当りカルボキシ基が10モル当量〜300モル当量が好ましく、より好ましくはカルボキシ基が15モル当量〜100モル当量である。すなわち、ポリアスパラギン酸またはポリグルタミン酸を用いた場合、その重合数としては10〜300が好ましく、重合数15〜100がより好ましい。
該アルキル基としては、例えば、メチル基、エチル基、n−プロピル基、n−ブチル基、n−ペンチル基、n−ヘキシル基、n−オクチル基、n−デシル基、n−ドデシル基、n−テトラデシル基、n−ヘキサデシル基、n−オクタデシル基等が挙げられる。
該アルケニル基としては、例えば、エテニル基、1−プロペニル基、1−ブテニル基、1−ペンテニル基、9−ヘキサデセニル基、cis−9−オクタデセニル基、cis、cis−9、12−オクタデカジエニル基等が挙げられる。
該アラルキル基としては、例えば、ベンジル基、4−フェニルブチル基等が挙げられる。
前記の疎水性官能基は、ポリカルボン酸含有ポリマーのカルボキシ基とエステル型またはアミド型で結合されることが好ましい。したがって、前記疎水性官能基としては、対応する疎水性官能基を有するアルコール誘導体またはアミン誘導体としてポリカルボン酸含有ポリマーに導入される態様が好ましい。
前記疎水性官能基は、該ブロック型コポリマー(b)の疎水性ポリマーセグメントの疎水性物性を構成するものであり、該疎水性官能基の導入量及び導入率により疎水性ポリマーセグメントの疎水性物性が決定される。すなわち、該疎水性官能基の導入量が多く、また該疎水性官能基の導入率が高い程、高い疎水性物性となる。疎水基導入率は、ブロック型コポリマー(b)の両親媒性を考慮して決定するべきである。
より好ましくは、ブロック型コポリマー(b)において、ポリエチレングリコールセグメントが、エチレンオキシ単位;(CH2CH2O)が5〜11,500の繰り返し単位構造である。また、疎水性ポリマーセグメントが、アスパラギン酸誘導体単位またはグルタミン酸誘導体単位が5〜200の繰り返し単位構造のポリアスパラギン酸誘導体またはポリグルタミン酸誘導体である。更には、該疎水性基が側鎖カルボキシ基に直接または結合基を介して結合しており、該疎水性基が、直鎖状または分岐鎖状の(C1〜C30)のアルキル基、直鎖状または分岐鎖状の(C2〜C30)のアルケニル基または直鎖状または分岐鎖状の(C7〜C30)のアラルキル基から選択される1種以上の疎水性基であり、疎水性基が結合したアスパラギン酸誘導体単位または疎水基が結合したグルタミン酸誘導体単位が3〜200を有するブロック型コポリマー(b)である。
例えば、酸素原子(−O−)、−NH−、硫黄原子(−S−)、−NH−(CH2)x’−(x’は1〜10の整数を示す)、−NH−(CH2)x’−O−(x’は1〜10の整数を示す)、−NH−(CH2)x’−NH−(x’は1〜10の整数を示す)、−NH−(CH2)x’−S−(x’は1〜10の整数を示す)、−O−(CH2)y’−(y’は1〜10の整数を示す)、−O−(CH2)y’−O−(y’は1〜10の整数を示す)、−O−(CH2)y’−NH−(y’は1〜10の整数を示す)、−O−(CH2)y’−S−(y’は1〜10の整数を示す)等を挙げることができる。
また、該結合基としてアミノ酸を用いてもよい。アミノ酸としては、天然型アミノ酸、非天然型アミノ酸のいずれでも良い。結合基としてのアミノ酸は、N末端アミノ基がポリマー主鎖のカルボキシ基とアミド結合し、もう一方のC末端カルボキシ基が、エステル結合またはアミド結合を介して、前記疎水性基と結合した態様を挙げることができる。
前記R13の(C1〜C6)のアシル基としては、ホルミル基、アセチル基、プロピオニル基、ブチロイル基、シクロプロピルカルボニル基、シクロペンタンカルボニル基等が挙げられる。
前記R13における(C1〜C6)のアルコキシカルボニル基としては、メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、tert−ブトキシカルボニル基、シクロへキシルオキシカルボニル基等が挙げられる。
前記R14の(C2〜C30)のアルケニル基としては、置換基を有していてもよい直鎖状または分岐鎖状の(C2〜C30)のアルケニル基である。例えば、エチレン基、プロピレン基、2−ブテニル基、シクロヘキセニル基、9−ヘキサデセニル基、cis−9−オクタデセニル基、cis、cis−9、12−オクタデカジエニル基等が挙げられる。
前記R14の(C7〜C30)アラルキル基としては、置換基を有していてもよい直鎖状または分岐鎖状の(C7〜C30)アラルキル基である。例えば、ベンジル基、1−フェニルエチル基、2−フェニルエチル基、4−フェニルブチル基、6−フェニルへキシル基等を挙げることができる。
該エステル誘導体は直鎖状、分岐鎖状または環状の(C1〜C10)のアルキルエステルが好ましい。直鎖状アルキルエステルとしては、例えばメチルエステル、エチルエステル、n−プロピルエステル、n−ブチルエステル、n−へキシルエステル、n−デシルエステル等を挙げることができる。分岐鎖状アルキルエステルとしては、例えばイソプロピルエステル、tert−ブチルエステル、1−メチル−プロピルエステル、2−メチル−プロピルエステル、2,2−ジメチルプロピルエステル等が挙げられる。環状アルキルエステルとしては、例えばシクロプロピルエステル、シクロブチルエステル、シクロペンチルエステル、シクロヘキシルエステル、アダマンチルエステル等が挙げられる。
該アミド誘導体としては、直鎖状、分岐鎖状または環状の(C1〜C10)アルキルアミドが好ましい。直鎖状アルキルアミドとしては、例えばメチルアミド、エチルアミド、n−プロピルアミド、n−ブチルアミド、n−へキシルアミド、n−デシルアミド等を挙げることができる。分岐鎖状アルキルアミドとしては、例えばイソプロピルアミド、tert−ブチルアミド、1−メチル−プロピルアミド、2−メチル−プロピルアミド、2,2−ジメチルプロピルアミド等が挙げられる。環状アルキルアミドとしては、例えばシクロプロピルアミド、シクロブチルアミド、シクロペンチルアミド、シクロヘキシルアミド、アダマンチルアミド等が挙げられる。
また、X11はカルボニル基とR14が直接結合できる場合であって、相当する結合性官能基がない場合は、該X11は結合を表す。
更に、X11としてアミノ酸結合残基を結合基して用いてもよい。結合基として用いられるアミノ酸は、天然型アミノ酸、非天然型アミノ酸のいずれでもよい。X11がアミノ酸結合残基であり、該結合基としてアミノ酸を用いる場合、疎水性ポリマーセグメントのカルボニル基と、該アミノ酸のN末アミノ基が結合し、他方C末カルボキシ基とエステル結合またはアミド結合を介してR14基を結合させる態様を挙げることができる。したがって、X11としてアミノ酸結合残基を用いる場合、X11は−NH−C(R20)−COO−(R20は用いるアミノ酸の側鎖を示す)で示される結合基である。
なお、一般式(2)において、疎水性ポリマーセグメントであるポリアスパラギン酸誘導体セグメントまたはポリグルタミン酸誘導体セグメントにおいて、R14が結合した構成単位、R15が結合した構成単位及び側鎖カルボキシ基が分子内環化型構成単位は、それぞれ独立してランダムな配列である。すなわち、ポリアスパラギン酸誘導体セグメントまたはポリグルタミン酸誘導体セグメントの側鎖カルボキシ基に、R14が結合した構成単位及びR15が結合した構成単位、並びに側鎖カルボキシ基が分子内環化型構造をとる構成単位が、それぞれ任意の順番で配列した態様であってもよく、それぞれの構成単位が局在化して偏局した配列の態様であってもよく、それぞれの構成単位に規則性がないランダム配列で構成されたポリマー構造であってもよい。
また、疎水性ポリマーセグメントであるポリアスパラギン酸誘導体またはポリグルタミン酸誘導体のポリマー主鎖の重合数である(m+n+o+p+q)は6〜150の整数であり、R14基が結合した構成単位の総含量数(m+n)が3〜150の整数であることが好ましい。
本発明のブロック型コポリマー(b)の製造方法は特に限定されるものではないが、あらかじめそれぞれ調製したポリエチレングリコールセグメントと疎水性ポリマーセグメントを結合する方法でもよく、ポリエチレングリコールセグメントに対し、疎水性ポリマーセグメントの重合性モノマー体を逐次重合反応させてブロック型コポリマーを構築する方法であってもよい。若しくは、ポリエチレングリコールと疎水性ポリマーセグメントの前駆体を結合させたABブロック型コポリマーをあらかじめ調製し、これに適当な疎水性官能基を導入して調製する方法であってもよい。
好ましくは、疎水性ポリマーセグメントの前駆体として、ポリアスパラギン酸等のポリカルボン酸ポリマーセグメントを用い、ポリエチレングリコールとポリカルボン酸ポリマーセグメントを結合させたABブロック型コポリマーをあらかじめ調製し、これに適当な疎水性官能基をアミド結合様式及び/またはエステル結合様式により、適当な縮合条件で反応させることで製造することができる。縮合条件は、通常の有機合成反応で用いることができる方法を適宜使用することができる。
一方の末端がアミノ基であるポリエチレングリコール誘導体(例えば、メトキシポリエチレングリコール−1−プロピルアミン)に、β−ベンジルエステル等の適当な側鎖カルボキシ基保護のN−カルボニルアスパラギン酸無水物を順次反応させて、逐次重合によりポリエチレングリコールセグメントとポリアスパラギン酸セグメントが連結したABブロック型コポリマー骨格を構築する。その後、適当な脱保護反応を施し、複数のカルボン酸を備えるABブロック型コポリマーを合成する。ポリアスパラギン酸側鎖がβ−ベンジルエステルの場合、アルカリ条件下での加水分解や、加水素分解反応により脱保護基反応をすることができる。
この複数のカルボン酸を備えるABブロック型コポリマーに対し、アミノ基及び/または水酸基を有する炭化水素基等の疎水性基含有化合物を、カルボジイミド脱水縮合剤等の縮合反応条件にて反応させればよい。この製造方法によれば、ABブロック型コポリマーに、一般式(2)に係るR15に相当する−N(R17)CONH(R18)基を同時に導入することができることから、有利な製造方法である。
ブロック型コポリマー(b)の炭化水素基等の疎水性官能基の導入量は、脱水縮合反応において、各疎水性基含有化合物の仕込み量を適宜増減させることで調整することができる。なお、カルボジイミド縮合剤としてジシクロヘキシルカルボジイミド(DCC)を用いた場合、−N(R17)CONH(R18)のR17及びR18はシクロへキシル基となる。ジイソプロピルカルボジイミド(DIPCI)を用いて縮合反応を行った場合、R17及びR18はイソプロピル基となる。1−エチル−3−(3−ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩(WSC)を用いた場合、−N(R17)CONH(R18)のR17及びR18はエチル基と3−ジメチルアミノプロピルの混合置換体となる。
前記反応終了後に、任意の精製工程を経由して本発明のブロック型コポリマー(b)を製造することができる。
前記ブロック型コポリマー(b)の疎水性ポリマーセグメントとして、好ましく用いられるポリグルタミン酸の合成方法は、前述の合成例におけるN−カルボニルアスパラギン酸無水物に代えて、N−カルボニルグルタミン酸無水物を用いてポリグルタミン酸を得て、その後、該炭化水素基含有化合物を導入させれば、疎水性ポリマーセグメントがポリグルタミン酸のブロック型頃リマー(b)を合成することができる。
本発明における脂溶性添加剤(c)としては、例えば、ビタミンA及びその誘導体、ビタミンD及びその誘導体、ビタミンE及びその誘導体、ビタミンK及びその誘導体並びにコレステロール及びその誘導体等が挙げられる。
R21としてはアルキル基、アルケニル基が挙げられ、好ましくは(C1〜C20)のアルキル基、(C2〜C20)のアルケニル基が挙げられる。
R22としてはアルキル基、アルケニル基、アルコキシ基、アルキルアミノ基、アルケニルオキシ基、アルケニルアミノ基、ポリエチレングリコール等が挙げられ、好ましくは(C1〜C20)のアルキル基、(C2〜C20)のアルケニル基、(C1〜C20)のアルコキシ基、(C1〜C20)のアルキルアミノ基、(C2〜C20)のアルケニルオキシ基、(C2〜C20)のアルケニルアミノ基、または分子量100〜10,000のポリエチレングリコール等が挙げられる。
前記R20、R21、R22における前記アルケニル基としては、例えば、エテニル基、1−プロペニル基、1−ブテニル基、1−ペンテニル基、9−ヘキサデセニル基、cis−9−オクタデセニル基、cis、cis−9、12−オクタデカジエニル基等が挙げられる。
前記R20における前記アルコキシ基としては、例えば、メトキシ基、エトキシ基、イソプロポキシ基、tert−ブトキシ基、ベンジルオキシ基、ドデカノキシ基、オクタドデカノキシ基等が挙げられる。
前記R20における前記アルキルアミノ基としては、例えば、メチルアミノ基、エチルアミノ基、イソプロピルアミノ基、tert−ブチルアミノ基、ベンジルアミノ基、n−ドデシルアミノ基、n−オクタデシルアミノ基等が挙げられる。
前記R20における前記アルケニルオキシ基としては、例えば、エテニルオキシ基、1−プロペニルオキシ基、1−ブテニルオキシ基、9−ヘキサデセニルオキシ基、cis−9−オクタデセニルオキシ基、cis、cis−9、12−オクタデカジエニルオキシ基等が挙げられる。
前記R20における前記アルケニルアミノ基としては、例えば、エテニルアミノ基、1−プロペニルアミノ基、1−ブテニルアミノ基、9−ヘキサデセニルアミノ基、cis−9−オクタデセニルアミノ基、cis、cis−9、12−オクタデカジエニルアミノ基等が挙げられる。
前記R20における前記ポリエチレングリコールとしては、(CH2CH2O)基の繰り返し構造を含む基であり、分子量100〜10,000のセグメント構造を指す。該ポリエチレングリコールの末端基としては、水酸基、(C1〜C6)のアルコキシ基である。また、一般式(3)における結合側末端は、結合、酸素原子(−O−)、−NH−、−OCO−(CH2)n’−COO−(n’は1〜4の整数を示す)、−O−(CH2)n’−COO−(n’は1〜4の整数を示す)、−O−(CH2)n’−O−(n’は1〜4の整数を示す)等の結合基であってよい。
一般式(7)で表される化合物中、R32としてはアルキル基、アルケニル基、アルコキシ基、アルキルアミノ基、アルケニルオキシ基、アルケニルアミノ基、ポリエチレングリコール等が挙げられ、好ましくは(C1〜C20)のアルキル基、(C2〜C20)のアルケニル基、(C1〜C20)のアルコキシ基、(C1〜C20)のアルキルアミノ基、(C2〜C20)のアルケニルオキシ基、(C2〜C20)のアルケニルアミノ基、または分子量100〜10,000のポリエチレングリコール等が挙げられる。
前記R31、R32における前記アルケニル基としては、例えば、エテニル基、1−プロペニル基、1−ブテニル基、1−ペンテニル基、9−ヘキサデセニル基、cis−9−オクタデセニル基、cis、cis−9、12−オクタデカジエニル基等が挙げられる。
前記R31、R32における前記アルコキシ基としては、例えば、メトキシ基、エトキシ基、イソプロポキシ基、t−ブトキシ基、ベンジルオキシ基、ドデカノキシ基、オクタドデカノキシ基等が挙げられる。
前記R31、R32における前記アルキルアミノ基としては、例えば、メチルアミノ基、エチルアミノ基、イソプロピルアミノ基、tert−ブチルアミノ基、ベンジルアミノ基、n−ドデシルアミノ基、n−オクタデシルアミノ基等が挙げられる。
前記R31、R32における前記アルケニルオキシ基としては、例えば、エテニルオキシ基、1−プロペニルオキシ基、1−ブテニルオキシ基、9−ヘキサデセニルオキシ基、cis−9−オクタデセニルオキシ基、cis、cis−9、12−オクタデカジエニルオキシ基等が挙げられる。
前記R31、R32における前記アルケニルアミノ基としては、例えば、エテニルアミノ基、1−プロペニルアミノ基、1−ブテニルアミノ基、9−ヘキサデセニルアミノ基、cis−9−オクタデセニルアミノ基、cis、cis−9、12−オクタデカジエニルアミノ基等が挙げられる。
前記R31、R32における前記ポリエチレングリコールとしては、(CH2CH2O)基の繰り返し構造を含む基であり、分子量100〜10,000のセグメント構造を指す。該ポリエチレングリコールの末端基としては、水酸基、(C1〜C6)のアルコキシ基である。また、一般式(6)及び(7)における結合側末端は、結合、酸素原子(−O−)、−NH−、−OCO−(CH2)n’−COO−(n’は1〜4の整数を示す)、−O−(CH2)n’−COO−(n’は1〜4の整数を示す)、−O−(CH2)n’−O−(n’は1〜4の整数を示す)等の結合基であってよい。
前記R41における前記アルケニル基としては、例えば、エテニル基、1−プロペニル基、1−ブテニル基、1−ペンテニル基、9−ヘキサデセニル基、cis−9−オクタデセニル基、cis、cis−9、12−オクタデカジエニル基等が挙げられる。
前記R41における前記アルコキシ基としては、例えば、メトキシ基、エトキシ基、イソプロポキシ基、tert−ブトキシ基、ベンジルオキシ基、ドデカノキシ基、オクタドデカノキシ基等が挙げられる。
前記R41における前記アルキルアミノ基としては、例えば、メチルアミノ基、エチルアミノ基、イソプロピルアミノ基、tert−ブチルアミノ基、ベンジルアミノ基、ドデシルアミノ基、オクタデシルアミノ基等が挙げられる。
前記R41における前記アルケニルオキシ基としては、例えば、エテニルオキシ基、1−プロペニルオキシ基、1−ブテニルオキシ基、9−ヘキサデセニルオキシ基、cis−9−オクタデセニルオキシ基、cis、cis−9、12−オクタデカジエニルオキシ基等が挙げられる。
前記R41における前記アルケニルアミノ基としては、例えば、エテニルアミノ基、1−プロペニルアミノ基、1−ブテニルアミノ基、9−ヘキサデセニルアミノ基、cis−9−オクタデセニルアミノ基、cis、cis−9、12−オクタデカジエニルアミノ基等が挙げられる。
前記R41における前記ポリエチレングリコールとしては、(CH2CH2O)基の繰り返し構造を含む基であり、分子量100〜10,000のセグメント構造を指す。該ポリエチレングリコールの末端基としては、水酸基、(C1〜C6)のアルコキシ基である。また、一般式(8)における結合側末端は、結合、酸素原子(−O−)、−NH−、−OCO−(CH2)n’−COO−(n’は1〜4の整数を示す)、−O−(CH2)n’−COO−(n’は1〜4の整数を示す)、−O−(CH2)n’−O−(n’は1〜4の整数を示す)等の結合基であってよい。トコフェロール−ポリエチレングリコール結合誘導体の結合基としては、コハク酸結合基が好ましく、例えば、α−トコフェロール−ポリエチレングリコールコハク酸エステル、β−トコフェロール−ポリエチレングリコールコハク酸エステル、γ−トコフェロール−ポリエチレングリコールコハク酸エステル、δ−トコフェロール−ポリエチレングリコールコハク酸エステル等を用いることができる。
R51における前記アルケニル基としては、例えば、エテニル基、1−プロペニル基、1−ブテニル基、1−ペンテニル基、9−ヘキサデセニル基、cis−9−オクタデセニル基、cis、cis−9、12−オクタデカジエニル基等が挙げられる。
R51における前記アルコキシ基としては、例えば、メトキシ基、エトキシ基、イソプロポキシ基、tert−ブトキシ基、ベンジルオキシ基、ドデカノキシ基、オクタドデカノキシ基等が挙げられる。
R51における前記アルキルアミノ基としては、例えば、メチルアミノ基、エチルアミノ基、イソプロピルアミノ基、tert−ブチルアミノ基、ベンジルアミノ基、ドデシルアミノ基、オクタデシルアミノ基等が挙げられる。
R51における前記アルケニルオキシ基としては、例えば、エテニルオキシ基、1−プロペニルオキシ基、1−ブテニルオキシ基、9−ヘキサデセニルオキシ基、cis−9−オクタデセニルオキシ基、cis、cis−9、12−オクタデカジエニルオキシ基等が挙げられる。
R51における前記アルケニルアミノ基としては、例えば、エテニルアミノ基、1−プロペニルアミノ基、1−ブテニルアミノ基、9−ヘキサデセニルアミノ基、cis−9−オクタデセニルアミノ基、cis、cis−9、12−オクタデカジエニルアミノ基等が挙げられる。
前記R51における前記ポリエチレングリコールとしては、(CH2CH2O)基の繰り返し構造を含む基であり、分子量100〜10,000のセグメント構造を指す。該ポリエチレングリコールの末端基としては、水酸基、(C1〜C6)のアルコキシ基である。また、一般式(9)における結合側末端は、結合、酸素原子(−O−)、−NH−、−OCO−(CH2)n’−COO−(n’は1〜4の整数を示す)、−O−(CH2)n’−COO−(n’は1〜4の整数を示す)、−O−(CH2)n’−O−(n’は1〜4の整数を示す)等の結合基であってよい。
本発明で用いる脂溶性添加剤(c)としては、市販品として入手できるものであり、流通している化合物をそのまま用いてよい。
該核酸輸送用組成物において、該ブロック型コポリマー(b)及び該脂溶性添加剤(c)の添加量を増やすことにより、これらの成分に強固な相互作用が生じ、強い会合性複合体を調製することができ、核酸医薬の強固な保持と血中投与における血中滞留性を指向することができる。一方、該ブロック型コポリマー(b)及び該脂溶性添加剤(c)の添加量を減量することで、緩やかな相互作用による会合性複合体とすることができ、核酸医薬成分の速い放出を指向することができる。
核酸放出性を高めた核酸輸送用組成物とする場合、該二官能性ポリマー(a)と該ブロック型コポリマー(b)は、互いの疎水性官能基及びポリマー主鎖が異なる構造とすることが好ましい。すなわち、例えば該二官能性ポリマー(a)がポリグルタミン酸をポリマー主鎖とし、疎水性官能基として直鎖状の(C8〜C30)のアルキル基を結合させた構造の場合、該ブロック型コポリマー(b)は疎水性ポリマーセグメントのポリマー主鎖をポリアスパラギン酸とし、疎水性官能基として(C7〜C30)のアラルキル基を結合させた構造を組み合わせる組成を挙げることができる。またその逆の態様として、ポリアスパラギン酸を主鎖として、疎水性官能基として(C7〜C30)のアラルキル基を導入した該二官能性ポリマー(a)を用いた場合、組み合わせる該ブロック型コポリマー(b)は、ポリグルタミン酸を疎水性ポリマーセグメントの主鎖とし、直鎖状の(C8〜C30)のアルキル基疎水性官能基として付与した組成とすることが好ましい。
このような組成とすることにより、該二官能性ポリマー(a)が核酸と形成する複合体と、該ブロック型コポリマー(b)の間に生じる疎水性相互作用は比較的弱くなるため、該複合体と該ブロック型コポリマー(b)による会合体形成は弱い凝集力に基づくものとなる。したがって、生体内に投与された後に、核酸を包含する該複合体の速やかな解離−放出を促すことができる。このように、本発明の核酸輸送用組成物の二官能性ポリマー(a)及びブロック型コポリマー(b)の各ポリマー構造は、核酸成分の放出性を調整することを目的に、適宜、設計すればよい。
本発明において、核酸医薬組成物に使用される核酸は制限されない。即ち、該核酸としてはDNA、RNA、天然または非天然の核酸類縁体(例えばペプチド核酸等)、改変核酸、修飾核酸等が挙げられるが、何れであってもよい。また、核酸は一本鎖でも二本鎖でも良く、タンパク質のコード化の有無やその他の機能の有無も制限されない。
但し、核酸としては、生体内に送達された場合に生体、組織、細胞等に対して何らかの作用を及ぼしうる機能性核酸であることが好ましい。機能性核酸としては、プラスミドDNA、siRNA、miRNA(マイクロRNA)、アンチセンスRNA、アンチセンスDNA、デコイ核酸、リボザイム、DNA酵素、各種抑制遺伝子(癌抑制遺伝子等)、機能性の改変核酸・修飾核酸(例えば、核酸のリン酸部分がホスホロチオエート、メチルホスホナート、ホスフェートトリエステル、ホスホロアミデート等に改変された核酸や、コレステロールやビタミンE等の疎水性官能基が結合された核酸)等が挙げられる。これらは核酸送達用組成物の用途に応じて選択される。
また、siRNAとしては、RNA干渉(RNAi)を利用して目的の遺伝子の発現を抑制し得るものであればよい。RNA干渉の目的遺伝子としては、癌(腫瘍)遺伝子、抗アポトーシス遺伝子、細胞周期関連遺伝子、増殖シグナル遺伝子等が好ましくあげられる。また、siRNAの塩基長は限定されないが、通常30塩基未満、好ましくは10〜25塩基である。
本発明において、核酸としては、RNA干渉(RNAi)を利用した標的遺伝子の発現抑制作用を有するRNAを用いることが好ましく、siRNA、miRNA、アンチセンスRNAを用いることが好ましい。特に好ましくは、塩基長が10〜25塩基であるsiRNAを適用することが好ましい。
本発明の核酸医薬組成物を用いて核酸を標的細胞または組織に送達するには、核酸医薬組成物が標的細胞または組織と接触し得る状態にすればよい。
インビトロで本発明の核酸医薬組成物と標的細胞または組織との接触を達成するには、本発明の核酸医薬組成物の存在下で、標的細胞または組織を培養するか、標的細胞または組織の培養物中に該核酸医薬組成物を添加すればよい。
インビボで本発明の核酸医薬組成物と標的細胞または組織との接触を達成するには、遺伝子治療等の当該技術分野で常用されている投与方法により、本発明の核酸医薬組成物を、当該核酸の導入を必要とする個体(または処置すべき個体)に投与すればよい。このような個体としては、限定されるものではないが、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、サル、ウシ、ウマ、ブタ、鳥類等を挙げることができる。投与方法としては、標的細胞または組織の近傍または組織内への直接導入または移植、静脈注入、動脈注入、筋肉注入、経口投与、経肺投与等を挙げることができる。投与量、投与回数及び投与期間などの各条件は、被験動物の種類及び状態等に合わせて適宜設定することができる。
本発明の医薬組成物の形態も任意であるが、通常は静脈内注射剤(点滴を含む)が採用され、例えば単位投与量アンプルまたは他投与量容器の状態等で提供される。
本発明の医薬組成物の使用方法も任意である。核酸輸送用組成物を含む医薬組成物であればそのまま投与することが可能である。
なお使用したsiRNAは、siCON(ランダム配列(分子量約13K)、siRNA濃度100μMのHEPES溶液(pH7);北海道システムサイエンス社製)、siLuc(ルシフェラーゼコード(分子量約13K)、siRNA濃度100μMのHEPES溶液(pH7);北海道システムサイエンス社製)、FAM−siLuc(ルシフェラーゼコードの蛍光標識体(分子量約13K)、siRNA濃度100μMのHEPES溶液(pH7);北海道システムサイエンス社製)、siR2B(RRM2コード(分子量約13K)、siRNA濃度100μMのHEPES溶液(pH7);コスモ・バイオ株式会社製)を用いた。
また本発明品及び比較例において、水溶液中で構成する会合体の分析平均粒子径は、動的光散乱法(ゼータサイザーナノ−ZS、Malvern社製)にて測定した。
n−ブチルアミン(東京化成製)23μLをDMSO20mLに溶解後、γ−ベンジル−L−グルタミン酸−N−カルボン酸無水物3gを加え、30℃にて一夜攪拌した。反応液に、エタノール80mL及びジイソプロピルエーテル320mLを加えて、室温にて3時間攪拌し、沈析物を濾取してエタノール/ジイソプロピルエーテル(1/4(v/v)、40mL)で洗浄した。
沈析物を真空乾燥して得られた固形物(2.6g)を、DMF50mLに50℃にて溶解後、室温にて無水酢酸1mLを加えて、同温度で一夜攪拌した。反応液に、酢酸エチル100mL及びジイソプロピルエーテル400mLを加えて、室温にて3時間攪拌した。沈析物を濾取して、酢酸エチル/ジイソプロピルエーテル(1/4(v/v)、50mL)で洗浄した。沈析物を真空乾燥して得られた固形物(2.5g)を得た。
この沈析固形物2gに、DMF42mLを添加して50℃で溶解後、室温にて、5%パラジウム−炭素(NEケムキャット社製)200mgを加え、室温にて一夜、加水素分解を行った。反応液に活性炭400mgを加えたのち、濾過を行い、触媒等を濾別した。その後、反応液に酢酸エチル192mL及びジイソプロピルエーテル768mLを加えて、室温にて3時間攪拌し、沈析物を濾取して酢酸エチル/ジイソプロピルエーテル(1/4(v/v)、100mL)で洗浄した。沈析物を真空乾燥して、化合物1(1.6g)を得た。
1H−NMR(400MHz、D2O、ppm):0.70(t、n−ブチルアミン末端CH3、3H、積分値3.00)、4.16(dd、グルタミン酸αCH、1H、積分値54.93)
積分値から算出されたモル比から、重合数は55と算出された。
n−ブチルアミン(東京化成製)11μLをDMSO40mlに溶解後、γ−ベンジル−L−グルタミン酸−N−カルボン酸無水物3gを加え、30℃にて一夜攪拌した。反応液に、酢酸エチル160mL及びジイソプロピルエーテル640mLを加えて、室温にて3時間攪拌し、沈析物を濾取して酢酸エチル/ジイソプロピルエーテル(1/4(v/v)、100mL)で洗浄した。
沈析物を真空乾燥して得られた固形物(2.4g)を、DMF50mLに50℃にて溶解後、室温にて無水酢酸1mLを加えて、同温度で一夜攪拌した。反応液に、酢酸エチル100mL及びジイソプロピルエーテル400mLを加えて、室温にて3時間攪拌し、沈析物を濾取して、酢酸エチル/ジイソプロピルエーテル(1/4(v/v)、50mL)で洗浄した。沈析物を真空乾燥して、固形物(2.4g)を得た。
この沈析固形物2gに、DMF42mLを添加して50℃にて溶解後、室温にて5%パラジウム−炭素(NEケムキャット社製)200mgを加え、室温にて一夜、加水素分解を行った。反応液に活性炭400mgを加えたのち、濾過を行い、触媒等を濾別後、反応液に酢酸エチル192mL及びジイソプロピルエーテル768mLを加えて室温にて3時間攪拌し、沈析物を濾取して酢酸エチル/ジイソプロピルエーテル(1/4(v/v)、100mL)で洗浄した。沈析物を真空乾燥して、化合物2(1.5g)を得た。
1H−NMR(400MHz、D2O、ppm):0.71(t、n−ブチルアミン末端CH3、3H、積分値3.00)、4.15(dd、グルタミン酸αCH、1H、積分値101.73)
積分値から算出されたモル比から、重合数は102と算出された。
合成例1で得られた化合物1(76mg)をDMF2mLに溶解し、25℃にてステアリルアミン(東京化成製)48mg、1−ヒドロキシベンゾトリアゾール(以下、HOBtと記載)88mg、ジイソプロピルカルボジイミド(以下、DIPCIと記載)183μLを加えて、25℃にて1時間撹拌後、別容器にて調製したL‐アルギニンメチルエステル2塩酸塩(国産化学製)108mg、トリエチルアミン115μL、DMF1.4mLの混合液を投入し、さらに25℃にて一夜撹拌した。反応液に、エタノール13mL及びジイソプロピルエーテル53mLを加えて、室温にて2時間攪拌し、沈析物を濾取してエタノール/ジイソプロピルエーテル(1/4(v/v)、20mL)で洗浄した。得られた沈析物を0.1N塩酸水1mLに懸濁後、アセトン20mLを加えて30分撹拌した。沈析物を集め、アセトン5mLで洗浄し乾燥後、水40mLに溶解し、不溶物を濾別後、アセトニトリル100mLを加え、イオン交換樹脂カラム(ダウケミカル製 ダウエックス50(H+)、5mL)に通塔し、アセトニトリル/水(1/1(v/v)、10mL)にて溶出した。得られた溶出画分から、アセトニトリルを減圧下留去し、次いで、凍結乾燥することにより化合物3(132mg)を得た。
1H−NMR(400MHz、DMSO、ppm):1.1〜1.3(Br、ステアリルCH2+アルギニンCH2、34H、積分値66.52)、3.61(s、アルギニンメチルエステル、3H、積分値9.43)、4.22(Br、アルギニンαCH+グルタミン酸αCH、2H、積分値8.17)
各積分値から、化合物3に結合したステアリルアミンとL‐アルギニンメチルエステルの平均個数は、グルタミン酸の重合数が55個に対して、ステアリルアミンは20.5個、L‐アルギニンメチルエステルは34.3個と算出された。
合成例2で得られた化合物2(76mg)をDMF2mLに溶解し、25℃にてステアリルアミン(東京化成製)48mg、HOBt88mg、DIPCI183μLを加えて、25℃にて1時間撹拌後、別容器にて調製したL‐アルギニンメチルエステル2塩酸塩(国産化学製)108mg、トリエチルアミン115μL、DMF1.4mLの混合液を投入し、さらに25℃にて一夜撹拌した。反応液にエタノール13mL及びジイソプロピルエーテル53mLを加えて室温にて2時間攪拌し、沈析物を濾取してエタノール/ジイソプロピルエーテル(1/4(v/v)、20mL)で洗浄した。得られた沈析物を0.1N塩酸水1mLに懸濁後、アセトン20mLを加えて30分撹拌した。沈析物を集め、アセトン5mLで洗浄し乾燥後、水40mLに溶解し不溶物を濾別後、アセトニトリル100mLを加え、イオン交換樹脂カラム(ダウケミカル製 ダウエックス50(H+)、5mL)に通塔し、アセトニトリル/水(1/1(v/v)、10mL)にて溶出した。得られた溶出画分からアセトニトリルを減圧下留去し、次いで、凍結乾燥することにより化合物4(141mg)を得た。
1H−NMR(400MHz、DMSO、ppm):1.1〜1.3(Br、ステアリルCH2+アルギニンCH2、34H、積分値74.32)、3.61(s、アルギニンメチルエステル、3H、積分値10.19)、4.21(Br、アルギニンαCH+グルタミン酸αCH、2H、積分値9.65)
各積分値から、化合物4に結合したステアリルアミンとL‐アルギニンメチルエステルの平均個数は、グルタミン酸の重合数が102個に対して、ステアリルアミンは34.3個、L‐アルギニンメチルエステルは55.3個と算出された。
合成例2で得られた化合物2(100.0mg)をDMF3.6mLに溶解し、25℃にてオレイルアミン(Sigma Aldrich製)61.6mg、HOBt129.3mg、DIPCI193.8μLを加えて、25℃にて1時間撹拌後、別容器にて調製したL‐アルギニンメチルエステル2塩酸塩(国産化学製)140.4mg、ジイソプロピルエチルアミン187.2μL、DMF1.4mLの混合液を投入し、さらに25℃にて一夜撹拌した。反応液にエタノール18mL及びジイソプロピルエーテル72mLを加えて室温にて1時間攪拌し、沈析物を濾取してエタノール/ジイソプロピルエーテル(1/4(v/v)、20mL)で洗浄した。得られた沈析物をジメチルアセトアミドに溶解させ、透析膜(MWCO 3,500)を用いて、外液を0.1N塩酸アセトニトリル/水(1/1(v/v)、500mL)及び水500mLを用いて、透析を行った。次いで、凍結乾燥することにより化合物5(116.2mg)を得た。
1H−NMR(400MHz、DMSO、ppm):3.61(s、アルギニンメチルエステル、3H、積分値3.13)、4.22(Br、アルギニンαCH+グルタミン酸αCH、2H、積分値3.16)、5.30(Br、オレイルアミン、2H、積分値1.66)
各積分値から、化合物5に結合したオレイルアミンとL‐アルギニンメチルエステルの平均個数は、グルタミン酸の重合数が102個に対して、ステアリルアミンは39.9個、L‐アルギニンメチルエステルは50.1個と算出された。
合成例2で得られた化合物2(78mg)をDMF2mLに溶解し、25℃にて4−フェニルブチルアミン(東京化成製)29μL、HOBt90mg、DIPCI188μLを加えて、25℃にて1時間撹拌後、別容器にて調製したL‐アルギニンメチルエステル2塩酸塩(国産化学製)111mg、トリエチルアミン118μL、DMF1.4mLの混合液を投入し、さらに25℃にて一夜撹拌した。反応液にエタノール13mL及びジイソプロピルエーテル53mLを加えて室温にて2時間攪拌し、沈析物を濾取してエタノール/ジイソプロピルエーテル(1/4(v/v)、20mL)で洗浄した。得られた沈析物を0.1N塩酸水1mLに溶解後、アセトン20mLを加えて30分撹拌した。沈析物を集めアセトン5mLで洗浄し乾燥後、水4mLに溶解し不溶物を濾別後、アセトニトリル16mLを加え、イオン交換樹脂カラム(ダウケミカル製 ダウエックス50(H+)、3mL)に通塔し、アセトニトリル/水(1/1(v/v)、9mL)にて溶出した。得られた溶出画分からアセトニトリルを減圧下留去し、次いで、凍結乾燥することにより化合物6(131mg)を得た。
1H−NMR(400MHz、D2O、ppm):3.57(Brs、アルギニンメチルエステル、3H、積分値15.81)、4.21(m、アルギニンαCH+グルタミン酸αCH、2H、積分値15.81)、6.83(m、4−フェニルブチルアミンのフェニル、5H、積分値17.88)
各積分値から、化合物6に結合したステアリルアミンとL‐アルギニンメチルエステルの平均個数は、グルタミンの重合数が102個に対して、4−フェニルブチルアミンは34.6個、L‐アルギニンメチルエステルは50.9個と算出された。
合成例2で得られた化合物2(100.0mg)をDMF3.4mLに溶解し、25℃にてドデシルアミン(東京化成製)52.9μL、HOBt129.3mg、DIPCI237.8μLを加えて、25℃にて1時間撹拌後、別容器にて調製したL‐アルギニンメチルエステル2塩酸塩(国産化学製)140.4mg、ジイソプロピルエチルアミン187.2μL、DMF1.6mLの混合液を投入し、さらに25℃にて一夜撹拌した。反応液に、エタノール18mL及びジイソプロピルエーテル72mLを加えて、室温にて1時間攪拌し、沈析物を濾取してエタノール/ジイソプロピルエーテル(1/4(v/v)、20mL)で洗浄した。得られた沈析物を、0.1N塩酸水1.3mLに溶解後、アセトン1.3mLを加え、透析膜(MWCO 3,500)を用いて、外液を水500mLを用いて透析を行った。次いで、凍結乾燥することにより化合物7(161.5mg)を得た。
1H−NMR(400MHz、D2O、ppm):1.1〜1.4(Br、ドデシルCH2+アルギニンCH2、22H、積分値112.25)、3.61(s、アルギニンメチルエステル、3H、積分値27.42)、4.23(Br、アルギニンαCH+グルタミン酸αCH、2H、積分値25.4)
各積分値から、化合物7に結合したドデシルアミンとL‐アルギニンメチルエステルの平均個数は、グルタミン酸の重合数が102個に対して、ドデシルアミンは29.4個、L‐アルギニンメチルエステルは57.2個と算出された。
特開平6−206815号公報に記載された方法に基づき調製したメトキシポリエチレングリコール−ポリアスパラギン酸ブロック共重合体(ポリエチレングリコール分子量12,000、ポリアスパラギン酸の重合数43)5gと、4−フェニルブチルアミン(東京化成製)1.2mLを、DMF90mLに溶解し、DMAP1.6g、DIPCI7.9mLを加え、23℃にて47時間撹拌した。
反応液に、酢酸エチル540mL及びn−ヘプタン1,080mLを加え、室温にて2時間攪拌した。その後、沈析物を濾取し、酢酸エチル/n−ヘプタン(1/2(v/v)、300mL)で洗浄した。得られた沈析物をアセトニトリル/水(9/1(v/v)、265mL)に溶解後、イオン交換樹脂カラム(ダウケミカル社製 ダウエックス50(H+)、20mL)に通塔し、アセトニトリル/水(9/1(v/v)、30mL)にて溶出した。得られた溶出画分に、水70mLを加えた後、減圧濃縮を行い、終了後、水にて溶液量を200mLに調製したうえで凍結乾燥し、化合物8(6.0g)を得た。
1H−NMR(400MHz、DMSO、ppm):3.49(m、PEG、273×4=1092H、積分値1786)、7.1〜7.3(m、フェニル、5H、積分値215)
各積分値から、化合物8に結合した4−フェニルブチルアミンの平均個数は、アスパラギン酸の重合数が43個に対して、26.3個と算出された。
特許第4757633号公報に記載された方法に基づき、化合物9を合成した。
得られた化合物9を50mg量り、アセトニトリル4mLを加えて溶解し、0.5mol/L水酸化ナトリウム水溶液4mLを加えて混合し、20分間静置することで加水分解した。この液に、1mol/L塩酸2mLを加え、水/アセトニトリル混液(1:1)を加えて正確に50mLとした。この溶液を、HPLCを用いて4−フェニルブタノールを定量分析した。分析値から、化合物9に結合した4−フェニルブチルアルコールの個数が、アスパラギン酸の重合数42個に対して21.6個と算出された。
特開平6−206815号公報に記載された方法に基づき調製したメトキシポリエチレングリコール−ポリアスパラギン酸ブロック共重合体(アスパラギン酸の重合数43)200mgと、ステアリルアミン(シグマアルドリッチ製)27.4mgを、DMF4mLに溶解し、N,N’−ジメチルアミノピリジン(以下、DMAP)62.1mg、DIPCI157.4μLを加え、25℃にて27時間撹拌した。
反応液に、酢酸エチル26.7mL及びn−ヘプタン53.3mLを加え、室温にて1時間攪拌した。その後、沈析物を濾取し、酢酸エチル/n−ヘプタン(1/2(v/v)、10mL)で洗浄した。得られた沈析物をアセトニトリル/水(9/1(v/v)、10mL)に溶解後、イオン交換樹脂カラム(ダウケミカル社製 ダウエックス50(H+)、2mL)に通塔し、アセトニトリル/水(9/1(v/v)、5mL)にて溶出した。得られた溶出画分の減圧濃縮を行いた後に凍結乾燥し、化合物10(199.6mg)を得た。
1H−NMR(400MHz、DMSO、ppm):1.1〜1.4(Br、ステアリルアミン、32H、積分値21.73)、3.51(m、PEG、273×4=1092H、積分値100)
各積分値から、化合物10に結合した4−フェニルブチルアミンの平均個数は、アスパラギン酸の重合数が43個に対して、7.4個と算出された。
化合物3/化合物8/蒸留水を6mg/1.5mg/0.2mLになるように混合し、40℃程度まで加温しながら、ボルテックスミキサーを用いて浸透撹拌と超音波処理を繰り返して溶解液を調製した。得られた溶解液から17μLを採取し、siRNAのHEPES溶液(siCON、100μM)25μLを、化合物3のカチオン基(N)とsiRNAのリン酸基(P)によるN/P比が10となるように添加して、siRNAとの複合粒子を調製した。そのうちの8μLに、D−α−トコフェロール(東京化成製)のエタノール溶液(6.1mg/mL)8μLを加えて、ボルテックスミキサーで浸透撹拌した。次に蒸留水184μLを徐々に加え、ボルテックスミキサーでの浸透撹拌と超音波処理を繰り返して化合物3の二官能性ポリマー(a):化合物8のブロック型ポリマー(b):脂溶性添加剤(c)としてD−α−トコフェロール=1/0.25/0.5となる実施例1−1のsiRNA複合体溶液を調製した。
動的散乱法でsiRNA複合体の平均粒子径を測定したところ250nmであった。
化合物3/化合物8/蒸留水を6mg/1.5mg/0.2mLになるように混合し、40℃程度まで加温しながら、ボルテックスミキサーを用いて浸透撹拌と超音波処理を繰り返して溶解液を調製した。得られた溶解液から3.6μLを採取し、siRNAのHEPES溶液(FAM−siLuc、100μM)5μLを、化合物3のカチオン基(N)とsiRNAのリン酸基(P)によるN/P比が10となるように添加して複合粒子を調製した。そこに、D−α−トコフェロール(東京化成製)のエタノール溶液(6mg/mL)9μLを加えて、ボルテックスミキサーで浸透撹拌した。次に蒸留水182μLを徐々に加え、ボルテックスミキサーでの浸透撹拌と超音波処理を繰り返して化合物3の二官能性ポリマー(a):化合物8のブロック型ポリマー(b):脂溶性添加剤(c)としてD−α−トコフェロール=1/0.25/0.5となる実施例1−2のsiRNA複合体溶液を調製した。
化合物4/化合物8/蒸留水を6mg/1.5mg/0.2mLになるように混合し、40℃程度まで加温しながら、ボルテックスミキサーを用いて浸透撹拌と超音波処理を繰り返して溶解液を調製した。得られた溶解液から9μLを採取し、siRNAのHEPES溶液(siCON、100μM)25μLを、化合物4のカチオン基(N)とsiRNAのリン酸基(P)によるN/P比が5となるように添加して複合粒子を調製した。そのうちの6μLに、D−α−トコフェロール(東京化成製)のエタノール溶液(4.0mg/mL)6μLを加えてボルテックスミキサーで浸透撹拌した。次に蒸留水188μLを徐々に加え、ボルテックスミキサーでの浸透撹拌と超音波処理を繰り返して化合物4の二官能性ポリマー(a):化合物8のブロック型ポリマー(b):脂溶性添加剤(c)としてD−α−トコフェロール=1/0.25/0.5となる実施例2−1のsiRNA複合体溶液を調製した。
動的散乱法でsiRNA複合体の平均粒子径を測定したところ293nmであった。
化合物4/化合物8/蒸留水を6mg/1.5mg/0.2mLになるように混合し、40℃程度まで加温しながら、ボルテックスミキサーを用いて浸透撹拌と超音波処理を繰り返して溶解液を調製した。得られた溶解液から7.2μLを採取し、siRNAのHEPES溶液(FAM−siLuc、100μM)5μLを、化合物4のカチオン基(N)とsiRNAのリン酸基(P)によるN/P比が20となるように添加して複合粒子を調製した。そこに、D−α−トコフェロール(東京化成製)のエタノール溶液(9mg/mL)12μLを加えて、ボルテックスミキサーで浸透撹拌した。次に蒸留水176μLを徐々に加え、ボルテックスミキサーでの浸透撹拌と超音波処理を繰り返して化合物4の二官能性ポリマー(a):化合物8のブロック型ポリマー(b):脂溶性添加剤(c)としてD−α−トコフェロール=1/0.25/0.5となる実施例2−2のsiRNA複合体溶液を調製した。
化合物4/化合物8/蒸留水を6mg/6mg/0.2mLになるように混合し、40℃程度まで加温しながら、ボルテックスミキサーを用いて浸透撹拌と超音波処理を繰り返して溶解液を調製した。得られた溶解液から6.9μLを採取し、D−α−トコフェロール(東京化成製)のエタノール溶液(17.1mg/mL)12μLを加えてボルテックスミキサーで浸透撹拌した。次いで、siRNAのHEPES溶液(siR2B、100μM)5.1μLを、化合物4のカチオン基(N)とsiRNAのリン酸基(P)によるN/P比が20となるように加えてボルテックスミキサーで浸透撹拌した。次に蒸留水318.8μLを徐々に加え、ボルテックスミキサーでの浸透撹拌と超音波処理を繰り返して化合物4の二官能性ポリマー(a):化合物8のブロック型ポリマー(b):脂溶性添加剤(c)としてD−α−トコフェロール=1/1/1となる実施例3−1のsiRNA複合体溶液を調製した。
動的散乱法でsiRNA複合体の平均粒子径を測定したところ47nmであった。
前記実施例3−1において、用いるsiRNAをsiR2BからFAM−siLucに変更し、その他を実施例3−1と同様の手法を用いることで化合物4の二官能性ポリマー(a):化合物8のブロック型ポリマー(b):脂溶性添加剤(c)としてD−α−トコフェロール=1/1/1となる実施例3−2のsiRNA複合体溶液を調製した。
動的散乱法でsiRNA複合体の平均粒子径を測定したところ50nmであった。
前記実施例3−1において、用いるsiRNAをsiR2BからsiCONに変更し、その他を実施例3−1と同様の手法を用いることで化合物4の二官能性ポリマー(a):化合物8のブロック型ポリマー(b):脂溶性添加剤(c)としてD−α−トコフェロール=1/1/1となる実施例3−3のsiRNA複合体溶液を調製した。
動的散乱法でsiRNA複合体の平均粒子径を測定したところ、25nm及び150nmの混成であった。
前記実施例3−1において、用いるsiRNAをsiR2BからsiLucに変更し、その他を実施例3−1と同様の手法を用いることで化合物4の二官能性ポリマー(a):化合物8のブロック型ポリマー(b):脂溶性添加剤(c)としてD−α−トコフェロール=1/1/1となる実施例3−4のsiRNA複合体溶液を調製した。
動的散乱法でsiRNA複合体の平均粒子径を測定したところ、58nmと305nmの混成であった。
化合物4/化合物8/TPGS/蒸留水を6mg/6mg/21.1mg/1.0mLになるように混合し、40℃程度まで加温しながら、ボルテックスミキサーでの浸透撹拌と、超音波処理を繰り返して溶解液を調製した。得られた溶解液から200μLを採取し、siRNAのHEPES溶液(siR2B、50μM)50μLを、化合物4のカチオン基(N)とsiRNAのリン酸基(P)によるN/P比が20となるように加えてボルテックスミキサーで浸透撹拌して化合物4の二官能性ポリマー(a):化合物8のブロック型ポリマー(b):脂溶性添加剤(c)としてD−α−トコフェロール−ポリエチレングリコール1000コハク酸エステル=1/1/1となる実施例4−1のsiRNA複合体溶液を調製した。
動的散乱法でsiRNA複合体の平均粒子径を測定したところ5nmであった。
化合物4/化合物8/蒸留水を30mg/30mg/1mLになるように混合し、40℃程度まで加温しながら、ボルテックスミキサーでの浸透撹拌と超音波処理を繰り返して溶解液を調製した。得られた溶解液から100μLを採取し、コレカルシフェロール(東京化成製)のエタノール溶液(17.1mg/mL)175.4μLを加えて、ボルテックスミキサーで浸透撹拌した。そのうちの15.7μLに、siRNAのHEPES溶液(siR2B、100μM)4.3μLを、化合物4のカチオン基(N)とsiRNAのリン酸基(P)によるN/P比が20となるように加えてボルテックスミキサーで浸透撹拌した。次に蒸留水265.7μLを徐々に加え、ボルテックスミキサーでの浸透撹拌と超音波処理を繰り返して化合物4の二官能性ポリマー(a):化合物8のブロック型ポリマー(b):脂溶性添加剤(c)としてコレカルシフェロール=1/1/1となる実施例5−1のsiRNA複合体溶液を調製した。
動的散乱法でsiRNA複合体の平均粒子径を測定したところ88nmであった。
化合物4/化合物9/蒸留水を6mg/6mg/0.2mLになるように混合し、40℃程度まで加温しながら、ボルテックスミキサーでの浸透撹拌と超音波処理を繰り返して溶解液を調製した。得られた溶解液から24.0μLを採取し、D−α−トコフェロール(東京化成製)のエタノール溶液(17.4mg/mL)42.0μLを加えて、ボルテックスミキサーで浸透撹拌した。そのうちの22.0μLに、siRNAのHEPES溶液(siR2B、100μM)6.0μLを、化合物4のカチオン基(N)とsiRNAのリン酸基(P)によるN/P比が20となるように加えてボルテックスミキサーで浸透撹拌した。次に蒸留水372.0μLを徐々に加え、ボルテックスミキサーでの浸透撹拌と超音波処理を繰り返して化合物4の二官能性ポリマー(a):化合物9のブロック型ポリマー(b):脂溶性添加剤(c)としてD−α−トコフェロール=1/1/1となる実施例6−1のsiRNA複合体溶液を調製した。
動的散乱法でsiRNA複合体の平均粒子径を測定したところ、20nm及び116nmの混成であった。
前記実施例6−1において、用いるsiRNAをsiR2BからをFAM−siLucに変更し、その他を実施例6−1と同様の手法を用いることで化合物4の二官能性ポリマー(a):化合物9のブロック型ポリマー(b):脂溶性添加剤(c)としてD−α−トコフェロール=1/1/1となる実施例6−2のしRNA複合体溶液を調製した。
動的散乱法でsiRNA複合体の平均粒子径を測定したところ85nmであった。
化合物4/化合物10/蒸留水を6mg/6mg/0.2mLになるように混合し、40℃程度まで加温しながら、ボルテックスミキサーでの浸透撹拌と超音波処理を繰り返して溶解液を調製した。得られた溶解液から24.0μLを採取し、D−α−トコフェロール(東京化成製)のエタノール溶液(17.4mg/mL)42.0μLを加えて、ボルテックスミキサーで浸透撹拌した。そのうちの22.0μLに、siRNAのHEPES溶液(siR2B、100μM)6.0μLを、化合物4のカチオン基(N)とsiRNAのリン酸基(P)によるN/P比が20となるように加えてボルテックスミキサーで浸透撹拌した。次に蒸留水372.0μLを徐々に加え、ボルテックスミキサーでの浸透撹拌と超音波処理を繰り返して化合物4の二官能性ポリマー(a):化合物10のブロック型ポリマー(b):脂溶性添加剤(c)としてD−α−トコフェロール=1/1/1となる実施例7−1のsiRNA複合体溶液を調製した。
動的散乱法でsiRNA複合体の平均粒子径を測定したところ20nmであった。
化合物5/化合物8/蒸留水を6mg/6mg/0.2mLになるように混合し、40℃程度まで加温しながら、ボルテックスミキサーでの浸透撹拌と超音波処理を繰り返して溶解液を調製した。得られた溶解液から30.3μLを採取し、D−α−トコフェロール(東京化成製)のエタノール溶液(18.8mg/mL)48.3μLを加えて、ボルテックスミキサーで浸透撹拌した。そのうちの26.2μLに、siRNAのHEPES溶液(siR2B、100μM)6.0μLを、化合物5のカチオン基(N)とsiRNAのリン酸基(P)によるN/P比が20となるように加えてボルテックスミキサーで浸透撹拌した。次に蒸留水373.7μLを徐々に加え、ボルテックスミキサーでの浸透撹拌と超音波処理を繰り返して化合物5の二官能性ポリマー(a):化合物8のブロック型ポリマー(b):脂溶性添加剤(c)としてD−α−トコフェロール=1/1/1となる実施例8−1のsiRNA複合体溶液を調製した。
動的散乱法でsiRNA複合体の平均粒子径を測定したところ21nm及び90nmの混成であった。
前記実施例8−1において、用いるsiRNAをsiR2BからFAM−siLucに変更し、その他を実施例8−1と同様の手法を用いることで化合物5の二官能性ポリマー(a):化合物8のブロック型ポリマー(b):脂溶性添加剤(c)としてD−α−トコフェロール=1/1/1となる実施例8−2のsiRNA複合体溶液を調製した。
動的散乱法でsiRNA複合体の平均粒子径を測定したところ59nmであった。
前記実施例8−1において、用いるsiRNAをsiR2BからsiCONに変更し、その他を実施例8−1と同様の手法を用いることで化合物5の二官能性ポリマー(a):化合物8のブロック型ポリマー(b):脂溶性添加剤(c)としてD−α−トコフェロール=1/1/1となる実施例8−3のsiRNA複合体溶液を調製した。
動的散乱法でsiRNA複合体の平均粒子径を測定したところ、31nm及び129nmの混成であった。
前記実施例8−1において、用いるsiRNAをsiR2BからsiLucに変更し、その他を実施例8−1と同様の手法を用いることで化合物5の二官能性ポリマー(a):化合物8のブロック型ポリマー(b):脂溶性添加剤(c)としてD−α−トコフェロール=1/1/1となる実施例8−4のsiRNA複合体溶液を調製した。
動的散乱法でsiRNA複合体の平均粒子径を測定したところ、46nm及び433nmの混成であった。
化合物4/化合物8/蒸留水を6mg/1.5mg/0.2mLになるように混合し、40℃程度まで加温しながら、ボルテックスミキサーでの浸透撹拌と超音波処理を繰り返して溶解液を調製した。得られた溶解液から9μLを採取し、siRNAのHEPES溶液(siCON、100μM)25μLを、化合物4のカチオン基(N)とsiRNAのリン酸基(P)によるN/P比が5となるように加えて添加して複合粒子を調製した。そのうちの6μLに、蒸留水194μLを徐々に加え、ボルテックスミキサーでの浸透撹拌と超音波処理を繰り返して、比較例1のsiRNA複合体溶液を調製した。
動的散乱法でsiRNA複合体の平均粒子径を測定したところ、83nmと398nmの混成であった。
化合物4/化合物8/蒸留水を6mg/1.5mg/0.2mLになるように混合し、40℃程度まで加温しながら、ボルテックスミキサーでの浸透撹拌と超音波処理を繰り返して溶解液を調製した。得られた溶解液から9μLを採取し、siRNAのHEPES溶液(siCON、100μM)25μLを、化合物4のカチオン基(N)とsiRNAのリン酸基(P)によるN/P比が5となるように添加して複合粒子を調製した。そのうちの6μLに、4−フェニルブタノール(東京化成製)のエタノール溶液(40mg/mL)6μLを加えてボルテックスミキサーで浸透撹拌した。次に蒸留水188μLを徐々に加え、ボルテックスミキサーでの浸透撹拌と超音波処理を繰り返して、比較例2のsiRNA複合体溶液を調製した。
動的散乱法でsiRNA複合体の平均粒子径を測定したところ323nmであった。
ドデシルトリメチルアンモニウムクロリド(東京化成製)/化合物8/蒸留水を30mg/10mg/1mLになるように混合し、40℃程度まで加温しながら、ボルテックスミキサーでの浸透撹拌と超音波処理を繰り返して溶解液を調製した。得られた溶解液から5μLを採取し、siRNAのHEPES溶液(siCON、100μM)25μLを、ドデシルトリメチルアンモニウムクロリドの添加当量(N)とsiRNAのリン酸基(P)によるN/P比が5となるように添加して、複合粒子を調製した。そのうちの5μLに、D−α−トコフェロール(東京化成製)のエタノール溶液(2.5mg/mL)5μLを加えて、ボルテックスミキサーで浸透撹拌した。次に蒸留水190μLを徐々に加え、ボルテックスミキサーでの浸透撹拌と超音波処理を繰り返して比較例3のsiRNA複合体溶液を調製した。
動的散乱法でsiRNA複合体の平均粒子径を測定したところ354nmであった。
本発明の核酸輸送用組成物を構成要素とするsiRNA複合体が、生体内に存在する核酸分解酵素によるsiRNAの分解に対して高い抵抗性を示すことを検証するため、siRNAを含む本発明の核酸複合体の、RNase A(QIAGEN社)中での安定性を調べた。
実施例1−1〜8−1及び比較例1、2によるsiRNA複合体(siRNA:最終濃度1μM)に、RNase(終濃度50μg/ml,QIAGEN社)を加え、37℃で約3時間インキュベートした。その後、終濃度0.04%になるようにラウリル硫酸ナトリウム(SDS、ナカライテスク)を加えることで、分解反応を停止させ、該siRNA複合体からsiRNAを解離させた。
得られた試験試料を、15%ポリアクリルアミドゲル(Tris−ホウ酸−EDTA(TBE))を用いて、100ボルト、60分の条件で電気泳動を行い、SYBR GREEN II (ライフテクノロジーズジャパン社)で染色することで、試験試料に含まれるsiRNAを検出した。ゲル中のsiRNAのバンドを、モレキュラー・イメージャーFX(BioRad社)で解析し、siRNAの安定性を評価した。なお、siRNAのコントロール試料として、Liciferase(GL3)(コスモバイオ社)を用いた。結果を表1及び図1に示す。
本発明の核酸輸送用組成物を用いたsiRNA複合体である実施例1−1〜8−1は、RNaseで3時間処理した後においても、siRNAのバンドが確認されており、RNaseに対する安定性が確認された。一方、脂溶性添加剤(c)が存在しない比較例1や適当な脂溶性添加剤(c)ではない比較例2は、RNase処理によりsiRNAのバンドが確認されず、siRNAがRNaseにより分解していることが確認された(図1及び表1)。
本発明の核酸輸送用組成物を構成要素とするsiRNA複合体が、siRNAを培養条件下において細胞内に取り込ませることができることを検証するため、蛍光標識siRNAを含む本発明の核酸複合体を用いて、経時的な細胞内取り込み能を調べた。
10% 胎児牛血清(Tissue Culture Biologicals社製)を添加したEagle‘s Medium Essential Medium培地(Corning社)を用いて、ヒト膠芽種細胞U87MG(ATCC)を、37℃、5%CO2インキュベーター下で継代培養維持した。
ヒト膠芽種細胞U87MGを、100,000細胞/ガラスボトムディッシュ(1mL)になるように播種して、37℃のCO2インキュベーターで4日間培養を行った。その後、蛍光標識siRNAであるFAM−siLucを含有する実施例1−2、2−2、3−2、6−2、8−2を100nM(siRNA濃度)で培地に添加し、U87MG細胞に接触させた。各siRNA複合体添加後、2時間、7時間及び24時間後に、共焦点顕微鏡(Leica社)を用いて、試験細胞の画像を採取した。得られた画像写真を図2及び3に示した。
なお、本試験はsiRNA導入試薬の陽性対照として、市販キャリアであるLipofectamine RNAi Max(ライフテクノロジー社)を用い、製造者の指示に基づいてFAM−siLucとの複合体を調製して用いた。また,陰性対照として、FAM−siLucのみ(naked FAM−siLuc)を添加した。
試験細胞の画像を市販の画像処理ソフト(Media Cybernetics社、Image−Pro Plus)によって、1細胞当たりのFAM蛍光量をpixcel数としてカウントし、各サンプルにおける画像から10細胞の平均pixcel数を求めた。結果を表2に示す。
本発明の核酸輸送用組成物に、ルシフェラーゼを標的とするsiLucあるいはFAM−siLucを用いたsiRNA複合体を調製し、これを用いて細胞内のルシフェラーゼ遺伝子の発現が抑制されることを検証するため、ルシフェラーゼ安定発現ヒト膠芽種細胞U87MGを構築し、ルシフェラーゼ阻害活性を評価した。
培養細胞に遺伝子発現ベクターを導入し、薬剤耐性マーカーによる選択圧をかけることで定常発現株を樹立する方法により、ルシフェラーゼ安定発現細胞を作製した。薬剤は、Geneticine(Invitrogen社製)を使用した。10cmシャーレに、5×105個のヒト膠芽種細胞U87MGを播種し、37℃、5%CO2インキュベーター下で1日間培養した。その後、ルシフェラーゼ発現ベクターであるpGL3neo(promega社製)ベクターを、Lipofectamine 2000(Invitrogen社製)を用いて、製造者の指示に従いU87MG細胞に導入した。37℃、5%CO2インキュベーター下で2日間培養後、0.25% Tripsin(Invitrogen社製)/0.02% EDTA(Invitrogen社製)により細胞を剥離し、10倍希釈した細胞を新たな培養メディウムに移し、37℃、5%CO2インキュベーター下で1晩培養した。細胞がシャーレに張り付いたことを確認し、300μg/mL濃度のGeneticine(Invitrogen社製)を含む培養メディウムを用いて、37℃、5%CO2インキュベーター下で培養した。1週間ごとにメディウムを交換し、Geneticine耐性コロニーが直径3〜5mmになったら、滅菌したクローニングリング(IWAKI、直径5mm)を用いて単離することにより、ルシフェラーゼ安定発現ヒト膠芽種細胞U87MGを作製した。
樹立したルシフェラーゼ安定発現ヒト膠芽種細胞U87MG細胞を、96ウエルプレートへ9×104細胞/ウエル播種し、37℃、5%CO2インキュベーター下で1日間培養した。その後、実施例1−2(FAM−siLuc)、2−2(FAM−siLuc)、3−4(siLuc)及び8−4(siLuc)によるsiRNA複合体(siRNA濃度として100nM,n=3)を添加した。添加から、3日後に、該U87MG細胞のルシフェラーゼの発光活性を、Steady−Glo Luciferase Assay System(Promega)を用いて検出した。なお、RNA干渉効果は、対応するsiCONを含有するsiRNA複合体(実施例1−1、2−1、3−3、8−3)を添加した場合のルシフェラーゼの発光値(Relative Light Unit、RLU)を比較対象として、下記の式を用いて本発明のsiRNA複合体(実施例1−2、2−2、3−4及び8−4)のルシフェラーゼ発現阻害率(%)を求め、RNA干渉効果を評価した。結果を図4に示した。
[式] 発現阻害率(%)=(siCONの発光値−siLUCの発光値)/siCONの発光値 × 100
以上の、試験例1〜3の結果から、本発明の二官能性ポリマー(a)、ブロック型ポリマー(b)、脂溶性添加剤(c)による核酸輸送用組成物を用いた核酸医薬複合体は、血中投与に適用し、該核酸医薬を標的組織まで送達し、標的組織細胞へ導入して、細胞内にて該核酸医薬を機能発現させる機能を具備することが示された。
Claims (5)
- カチオン性官能基と炭化水素基が導入された二官能性ポリマー(a)、
ポリエチレングリコールセグメントと疎水性ポリマーセグメントが連結したブロック型コポリマー(b)、並びに
ビタミンD誘導体及びビタミンE誘導体からなる群から選択される1種以上の脂溶性添加剤(c)、
を含有することを特徴とする核酸輸送用組成物であって、
前記二官能性ポリマー(a)が、一般式(1)
R1は、水素原子、(C1〜C10)のアルキル基または(C7〜C10)のアラルキル基を示し、
R2は、メチレン基またはエチレン基を示し、
R3は、水素原子、(C1〜C6)のアシル基及び(C1〜C6)のアルコキシカルボニル基からなる群から選択される1種を示し、
R4は、(C8〜C30)の直鎖状または分岐鎖状のアルキル基、(C8〜C30)の直鎖状または分岐鎖状のアルケニル基及び(C8〜C30)の直鎖状または分岐鎖状のアラルキル基からなる群から選択される1種以上の炭化水素基を示し、
R5は、水酸基、カルボキシ基が保護されたアミノ酸及び−N(R7)CONH(R8)からなる群から選択される1種以上の置換基を示し、該R7及びR8は、同一でも異なっていてもよく、(C3〜C6)の直鎖状、分岐鎖状または環状アルキル基、若しくは3級アミノ基で置換されていてもよい(C1〜C5)のアルキル基を示し、
R6は、(C1〜C10)の直鎖状または分岐鎖状のアルキル基または(C7〜C10)の直鎖状または分岐鎖状のアラルキル基を示し、
X1、X2及びX3は、結合基又は結合を示し、
a、b、c、d、e、f及びgは、それぞれ独立に0〜200の整数を示し、
ポリアスパラギン酸誘導体またはポリグルタミン酸誘導体の単位構成の総重合数である(a+b+c+d+e+f+g)は、15〜200の整数であり、(a+b)は10〜150の整数であり、(c+d)は5〜100の整数であり、(a+b):(c+d)が1〜3:1であり、
アルギニン誘導体が結合した構成単位、R4が結合した構成単位、R5が結合した構成単位及び側鎖カルボキシ基が分子内環化型の構成単位は、それぞれ独立してランダムに配列する。]
で示されるポリアスパラギン酸誘導体またはポリグルタミン酸誘導体であり、
前記ブロック型コポリマー(b)が、一般式(2)
R11は、水素原子若しくは(C1〜C10)の直鎖状または分岐鎖状のアルキル基を示し、
R12は、メチレン基またはエチレン基を示し、
R13は、水素原子、(C1〜C6)のアシル基及び(C1〜C6)のアルコキシカルボニル基からなる群から選択される1種を示し、
R14は、(C8〜C30)の直鎖状または分岐鎖状のアルキル基、(C8〜C30)の直鎖状または分岐鎖状のアルケニル基及び(C7〜C20)の直鎖状または分岐鎖状のアラルキル基からなる群から選択される1種以上であり、
R15は、水酸基及び/または−N(R17)CONH(R18)を示し、ここでR17及びR18は同一でも異なっていてもよく、(C3〜C6)の直鎖、分岐鎖状または環状のアルキル基もしくは3級アミノ基で置換されていてもよい(C1〜C5)のアルキル基を示し、
R16は、(C1〜C6)のアルキレン基を示し、
X11は、結合基又は結合を示し、
tは、5〜11500の整数を示し、
m、n、o、p及びqは、独立に0〜200の整数を示し、
ポリアスパラギン酸誘導体またはポリグルタミン酸誘導体の単位構成の総重合数である(m+n+o+p+q)は、6〜150の整数を示し、(m+n)は3〜150の整数であり、
R14が結合した構成単位、R15が結合した構成単位及び側鎖カルボキシ基が分子内環化型の構成単位は、それぞれ独立してランダムに配列する。]
で示されるブロック型コポリマーであり、
前記ビタミンD誘導体が、エルゴカルシフェロール、コレカルシフェロール、一般式(6)
で表される化合物、及び一般式(7)
で表される化合物からなる群から選択される1種以上であり、
前記ビタミンE誘導体が、α−トコフェロール、β−トコフェロール、γ−トコフェロール、δ−トコフェロール、α−トコトリエノール、β−トコトリエノール、γ−トコトリエノール、δ−トコトリエノール、及び一般式(8)
で表される化合物からなる群から選択される1種以上である、
核酸輸送用組成物。 - 前記二官能性ポリマー(a)、前記ブロック型コポリマー(b)及び前記脂溶性添加剤(c)の含有比率(w/w)が、(a):(b):(c)=1:0.1〜5:0.1〜5である、請求項1に記載の核酸輸送用組成物。
- 前記請求項1または2に記載の核酸輸送用組成物に、核酸を含有させた医薬組成物。
- 前記核酸が、RNA干渉(RNAi)を利用した標的遺伝子の発現抑制作用を有するRNAである、請求項3に記載の医薬組成物。
- 前記請求項3または4に記載の医薬組成物を含有する遺伝子治療剤。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2014044573 | 2014-03-07 | ||
JP2014044573 | 2014-03-07 | ||
PCT/JP2015/056144 WO2015133449A1 (ja) | 2014-03-07 | 2015-03-03 | 核酸送達のための組成物 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2015133449A1 JPWO2015133449A1 (ja) | 2017-04-06 |
JP6564361B2 true JP6564361B2 (ja) | 2019-08-21 |
Family
ID=54055255
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016506488A Active JP6564361B2 (ja) | 2014-03-07 | 2015-03-03 | 核酸送達のための組成物 |
Country Status (3)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP6564361B2 (ja) |
TW (1) | TWI644683B (ja) |
WO (1) | WO2015133449A1 (ja) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105348506B (zh) * | 2015-12-01 | 2017-06-13 | 沈阳药科大学 | 谷氨酸‑tpgs嵌段共聚物的制备及其在靶向药物传递中的应用 |
CN115671294A (zh) * | 2021-07-27 | 2023-02-03 | 中国医学科学院基础医学研究所 | St类脂质化合物在制备核酸递送试剂中的应用及相关产品 |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP3270592B2 (ja) * | 1992-10-26 | 2002-04-02 | 日本化薬株式会社 | ブロック共重合体−抗癌剤複合体医薬製剤 |
CA2637931A1 (en) * | 2006-01-23 | 2007-07-26 | Abbott Laboratories | Chemically modified polycation polymer for sirna delivery |
FR2915748B1 (fr) * | 2007-05-03 | 2012-10-19 | Flamel Tech Sa | Acides polyglutamiques fonctionnalises par des groupes cationiques et des groupements hydrophobes et leurs applications, notamment therapeutiques |
CA2804815C (en) * | 2010-07-09 | 2016-06-07 | The University Of Tokyo | Nucleic acid delivery composition and carrier composition, pharmaceutical composition using the same, and method for nucleic acid delivery |
-
2015
- 2015-03-03 WO PCT/JP2015/056144 patent/WO2015133449A1/ja active Application Filing
- 2015-03-03 JP JP2016506488A patent/JP6564361B2/ja active Active
- 2015-03-06 TW TW104107324A patent/TWI644683B/zh not_active IP Right Cessation
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
TWI644683B (zh) | 2018-12-21 |
JPWO2015133449A1 (ja) | 2017-04-06 |
WO2015133449A1 (ja) | 2015-09-11 |
TW201615227A (zh) | 2016-05-01 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
AU2012337721B2 (en) | Block copolymer having phenylboronic acid group introduced therein, and use thereof | |
US8153110B2 (en) | Environment-responding siRNA carrier using disulfide-cross-linked polymeric micelle | |
ES2453317T3 (es) | Poliaminoácido catiónico de cadena corta y uso del mismo | |
EP2591792B1 (en) | Composition for nucleic acid delivery, carrier composition, pharmaceutical composition using the composition for nucleic acid delivery or the carrier composition, and method for delivering nucleic acid | |
Yi et al. | Cyclen-based lipidic oligomers as potential gene delivery vehicles | |
JP7246730B2 (ja) | 核酸送達用組成物及び核酸含有組成物 | |
JP6564361B2 (ja) | 核酸送達のための組成物 | |
US20090233365A1 (en) | Arginine-conjugated bioreducible poly(disulfide amine) polymers for gene delivery systems | |
JP6358661B2 (ja) | 界面活性剤様化合物 | |
US20240301138A1 (en) | Polmeric transfection reagents to deliver nucleic acids for host cell modification | |
JP6513635B2 (ja) | 核酸送達用組成物及び核酸含有医薬組成物 | |
CN111514303B (zh) | 一种三阴性乳腺癌靶向药物载体及其制备和应用 | |
Ryu et al. | Fusion peptide-mediated siRNA delivery using self-assembled nano-complex | |
JP6924191B2 (ja) | 新規な高分子誘導体、及びそれらを用いた新規な高分子誘導体イメージングプローブ | |
WO2021259783A1 (en) | Polymer-cargo-complexes comprising cross-linked copolymers and cargo molecules | |
JP2022502384A (ja) | 両親媒性ポリアミノ酸、該両親媒性ポリアミノ酸を用いたブロックコポリマー、および該両親媒性ポリアミノ酸または該ブロックコポリマーと核酸とを含む複合体 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20180117 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20181127 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20190121 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20190402 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20190621 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20190701 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20190723 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20190726 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6564361 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |