JP6525889B2 - 自己骨髄由来の幹細胞の迅速な注入 - Google Patents
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Description
1.(a)骨髄幹細胞および/または前駆細胞を含む第1の細胞集団と、
(b)抗凝固剤と、
(c)水性バッファおよび/または自己血清および/または自己血漿画分と
を含む組成物であって:
前記組成物は、粘度が、37℃にて測定されて5.0センチポイズ(cP)以下である、組成物。
2.骨髄幹細胞および/または前駆細胞を含む前記第1の細胞集団は、自己由来である、実施形態1の組成物。
3.骨髄幹細胞および/または前駆細胞を含む前記第1の細胞集団は、患者の骨内骨髄腔に由来する、実施形態2の組成物。
4.骨は、腸骨稜、大腿骨、脛骨、脊柱、胸骨または肋骨である、実施形態3の組成物。
5.骨髄幹細胞を含む前記第1の細胞集団は、腸骨腔内の骨髄腔に由来する、実施形態3の組成物。
6.前記抗凝固剤は、クマリン、ビタミンKアンタゴニスト、間接的トロンビンインヒビタ、ヘパリン、因子Xaインヒビタ、直接的トロンビンインヒビタ、バトロキソビン、ヘメチン(hemetin)、精製植物抽出物、EDTA、シトレート、オキサレートおよびニトロフォリンからなる群から選択される、実施形態1から5の何れかの組成物。
7.前記抗凝固剤は、直接的トロンビンインヒビタである、実施形態1から6の何れかの組成物。
8.前記抗凝固剤は、ビバリルジンを含む、実施形態1から5の何れかの組成物。
9.前記ビバリルジンは、濃度が1mg/mLから50mg/mLであるストック溶液から提供される、実施形態8の組成物。
10.前記ビバリルジンは、濃度が5mg/mLから35mg/mLであるストック溶液から提供される、実施形態8の組成物。
11.前記ビバリルジンは、濃度が10mg/mLから25mg/mLであるストック溶液から提供される、実施形態8の組成物。
12.前記ビバリルジンは、濃度が18mg/mLから22mg/mLであるストック溶液から提供される、実施形態8の組成物。
13.前記ビバリルジンは、濃度が20mg/mLであるストック溶液から提供される、実施形態8の組成物。
14.前記ビバリルジンは、前記組成物中に1mg/mLから3mg/mLの濃度で存在する、実施形態8の組成物。
15.前記ビバリルジンは、前記組成物中に1.5mg/mLから2.5mg/mLの濃度で存在する、実施形態8の組成物。
16.前記ビバリルジンは、前記組成物中に1.8mg/mLから2.2mg/mLの濃度で存在する、実施形態8の組成物。
17.前記ビバリルジンは、前記組成物中に2.0mg/mLの濃度で存在する、実施形態8の組成物。
18.37℃にて測定される前記粘度は、1.0cPから5.0cPである、実施形態1から17の何れかの組成物。
19.37℃にて測定される前記粘度は、1.8cPから3.0cPである、実施形態1から17の何れかの組成物。
20.37℃にて測定される前記粘度は、2.0cPから2.5cPである、実施形態1から17の何れかの組成物。
21.37℃にて測定される前記粘度は、3.1cPから5.0cPである、実施形態1から17の何れかの組成物。
22.前記水性バッファは、イオン性塩を含む、実施形態1から21の何れかの組成物。
23.前記水性バッファは、塩化ナトリウムを含む、実施形態1から21の何れかの組成物。
24.前記水性バッファは、塩化ナトリウムを含み、前記組成物中の前記塩化ナトリウムの量は、0.9%である、実施形態1から21の何れかの組成物。
25.骨髄細胞を含む前記細胞集団は、造血幹細胞、間葉系幹細胞、内皮前駆細胞およびCXCR4陽性細胞からなる群から選択される少なくとも幹細胞および/または前駆細胞を含む単核細胞を含む、実施形態1から24の何れかの組成物。
26.骨髄細胞を含む前記細胞集団は、少なくとも107個の単核細胞を含む、実施形態1から25の何れかの組成物。
27.骨髄細胞を含む前記細胞集団は、109個以下の単核細胞を含む、実施形態1から25の何れかの組成物。
28.骨髄細胞を含む前記細胞集団は、少なくとも104個の造血幹細胞を含む、実施形態1から25の何れかの組成物。
29.骨髄細胞を含む前記細胞集団は、少なくとも5×102個の間葉系幹細胞を含む、実施形態1から25の何れかの組成物。
30.骨髄細胞を含む前記細胞集団は、少なくとも5×102個の内皮前駆細胞を含む、実施形態1から25の何れかの組成物。
31.骨髄細胞を含む前記細胞集団は、少なくとも5×103個のCXCR4陽性細胞を含む、実施形態1から25の何れかの組成物。
32.骨髄細胞を含む前記細胞集団は、少なくとも107個から109個以下の単核細胞、少なくとも104個の造血幹細胞、少なくとも5×102個の間葉系幹細胞、少なくとも5×102個の内皮前駆細胞、および少なくとも5×103個のCXCR4陽性細胞を含む、実施形態1から31の何れかの組成物。
33.前記組成物は、ルーメンサイズが約0.36mmであり、プランジャ力が4.85lbfで28.39psiまでの圧力で保持する5mLのシリンジを用いるカテーテルを通しての、2.5mL/分の流速での送達1時間後に、約40%以下のアポトーシス率または他の細胞死率を示す、実施形態1から32の何れかの組成物。
34.前記組成物は、9101/秒以下の最大剪断にさらされると、カテーテルを通る送達1時間後に、約40%以下のアポトーシス率または他の細胞死率を示す、実施形態1から32の何れかの組成物。
35.再生細胞組成物を調製する方法であって:
(a)骨髄幹細胞および/または前駆細胞を含む第1の細胞集団を提供することと;
(b)抗凝固剤を前記第1の細胞集団と混合して、前記第1の細胞集団および抗凝固剤を含む組成物を生じることと;
(c)前記細胞集団および抗凝固剤を含む前記組成物内の骨髄幹細胞をエンリッチして、エンリッチド骨髄幹細胞および/または前駆細胞を含む第2の細胞集団を生じることと;
(d)エンリッチド骨髄幹細胞および/または前駆細胞を含む前記第2の細胞集団を含む画分を単離することと;
(e)前記画分の粘度を、液体を用いて、37℃にて測定して5.0cP以下の粘度に調整して、前記再生細胞組成物を調製することと
を含む方法。
36.骨髄幹細胞および/または前駆細胞を含む前記第1の細胞集団は、骨髄から吸引される細胞を含む、実施形態35の方法。
37.骨髄から吸引される前記細胞は、針/トロカールが8から14ゲージである吸引針を通して吸引される、実施形態36の方法。
38.骨髄から吸引される前記細胞は、針/トロカールが10から12ゲージである吸引針を通して吸引される、実施形態36の方法。
39.骨髄から吸引される前記細胞は、針/トロカールが11ゲージである吸引針を通して吸引される、実施形態36の方法。
40.吸引される前記細胞は、20psi未満の負圧にて、針/トロカールを通して吸引される、実施形態35から39の何れかの方法。
41.吸引される前記細胞は、15psi未満の負圧にて、針/トロカールを通して吸引される、実施形態35から39の何れかの方法。
42.吸引される前記細胞は、10psi未満の負圧にて、針/トロカールを通して吸引される、実施形態35から39の何れかの方法。
43.吸引される前記細胞は、5psi未満の負圧にて、針/トロカールを通して吸引される、実施形態35から39の何れかの方法。
44.前記液体は、自己血漿画分である、実施形態35の方法。
45.前記液体は、エンリッチド骨髄幹細胞および/または前駆細胞を含む前記第2の細胞集団を含む前記画分が単離された、液体を含む自己血清または血漿画分である、実施形態35の方法。
46.前記抗凝固剤は、対象由来の骨髄幹細胞および/または前駆細胞を含む前記第1の細胞集団が得られる前に、骨髄幹細胞および/または前駆細胞を含む前記第1の細胞集団と接触する、実施形態35の方法。
47.前記抗凝固剤は、前記対象由来の骨髄幹細胞を含む前記第1の細胞集団が得られた後に、骨髄幹細胞を含む前記第1の細胞集団と接触する、実施形態35の方法。
48.前記抗凝固剤は、第1の細胞集団および抗凝固剤を含有するコンテナが手動で撹拌されることによって、少なくとも部分的に前記第1の細胞集団と混合される、実施形態47の方法。
49.前記撹拌は、コンテナを転がすことを含む、実施形態48の方法。
50.前記抗凝固剤は、ビバリルジンを含む、実施形態35から49の何れかの方法。
51.前記ビバリルジンは、1mg/mLから3mg/mLの濃度で提供される、実施形態50の方法。
52.前記ビバリルジンは、1.8mg/mLから2.2mg/mLの濃度で提供される、実施形態50の方法。
53.前記ビバリルジンは、2.0mg/mLの濃度で提供される、実施形態50の方法。
54.37℃にて測定される前記粘度は、1.0cPから5.0cPである、実施形態35から49の何れかの方法。
55.37℃にて測定される前記粘度は、1.8cPから3.0cPである、実施形態35から49の何れかの方法。
56.37℃にて測定される前記粘度は、3.1cPから5.0cPである、実施形態35から49の何れかの方法。
57.前記液体は、イオン性塩を含む水性バッファである、実施形態35から49の何れかの方法。
58.前記水性バッファは、塩化ナトリウムを含む、実施形態57の方法。
59.前記再生細胞組成物中の前記塩化ナトリウムの量は、0.9%である、実施形態58の方法。
60.対象の虚血または虚血と関連する症状を改善する方法であって:
虚血または虚血と関連する症状がある対象を識別することと;
前記対象に:
(a)骨髄幹細胞および/または幹細胞前駆細胞を含む第1の細胞集団と、
(b)抗凝固剤と、
(c)水性バッファおよび/または自己血清および/または自己血漿画分と
を含む組成物であって、
粘度が、37℃にて測定されて5.0センチポイズ(cP)以下である組成物を提供することと;
虚血または虚血と関連する前記症状の改善を、前記対象における、血流の増大、左室駆出分画の改善、心拍出量の改善、心臓スカー形成の低下、心リモデリングの改善、血管形成の増大、血管分布の増大、神経スカー形成の改善、または切断フリーの生存率の増大を測定または観察すること等によって、判定することと
を含む方法。
61.前記組成物は、幹細胞および/または前駆細胞を含む前記第1の細胞集団が得られた後の2時間以下で、前記対象に提供される、実施形態60の方法。
62.前記組成物は、骨髄幹細胞および/または前駆細胞を含む前記第1の細胞集団が得られた後の90分以下で、前記対象に提供される、実施形態60の方法。
63.前記組成物は、骨髄幹細胞および/または前駆細胞を含む前記第1の細胞集団が得られた後の60分以下で、前記対象に提供される、実施形態60の方法。
64.前記対象の虚血性組織の血流は、1から3分間遮断される、実施形態60から63の何れかの方法。
65.前記対象の虚血性組織の血流は、2分間遮断される、実施形態60から64の何れかの方法。
66.前記血流は、膨張可能バルーンによって遮断される、実施形態64または実施形態65の方法。
67.前記バルーンは膨張して、前記バルーンの遠位への血流の少なくとも80%が遮断される、実施形態66の方法。
68.前記組成物は、毎分2.5mL以下の速度で、前記対象に提供される、実施形態60から67の何れかの方法。
69.前記対象に提供される前記組成物は、9101/秒を超える最大剪断にさらされない、実施形態60から68の何れかの方法。
70.前記組成物は、ルーメンサイズが約0.36mmであるカテーテルを通して、前記対象に提供される、実施形態60から69の何れかの方法。
71.前記組成物は、用量あたり5mLの用量で、前記対象に提供される、実施形態60から70の何れかの方法。
72.前記組成物は、表2のパラメータセット1を超えない一組のパラメータ条件下で提供される、実施形態60から70の何れかの方法。
73.前記組成物は、表2のパラメータセット2を超えない一組のパラメータ条件下で提供される、実施形態60から70の何れかの方法。
74.前記組成物は、表2のパラメータセット3を超えない一組のパラメータ条件下で提供される、実施形態60から70の何れかの方法。
75.前記組成物は、表2のパラメータセット4を超えない一組のパラメータ条件下で提供される、実施形態60から70の何れかの方法。
76.前記組成物は、表2のパラメータセット5を超えない一組のパラメータ条件下で提供される、実施形態60から70の何れかの方法。
77.前記組成物は、表2のパラメータセット6を超えない一組のパラメータ条件下で提供される、実施形態60から70の何れかの方法。
78.前記組成物は、単回用量として提供される、実施形態60から71の何れかの方法。
79.前記組成物は、少なくとも2回の用量として提供される、実施形態60から71の何れかの方法。
80.前記組成物は、各5mLの4用量として提供される、実施形態60から71の何れかの方法。
81.前記組成物は、複数日の各日に、1日あたりの単回用量として提供される、実施形態60から71の何れかの方法。
82.前記組成物は、複数日の各日に、1日あたりの少なくとも2回の用量として提供される、実施形態60から71の何れかの方法。
83.前記対象への組成物の提供は、各用量が提供された後に、5分以下の静止期間(resting period)が続く、実施形態60から82の何れかの方法。
84.前記対象への組成物の提供は、各用量が提供された後に、4分以下の静止期間が続く、実施形態60から82の何れかの方法。
85.前記対象への組成物の提供は、各用量が提供された後に、3分以下の静止期間が続く、実施形態60から82の何れかの方法。
86.前記対象への組成物の提供は、各用量が提供された後に、2分以下の静止期間が続く、実施形態60から82の何れかの方法。
87.前記対象への組成物の提供は、各用量が提供された後に、1分以下の静止期間が続く、実施形態60から82の何れかの方法。
88.最後の静止期間の後に、3mL用量のチェイサ溶液が続いて、残りのあらゆる細胞が毎分2.5mLを超えない速度で抜かれる、実施形態83から87の何れかの方法。
89.前記組成物は、血管内に提供される、実施形態60から86の何れかの方法。
90.前記組成物は、筋肉内に提供される、実施形態60から86の何れかの方法。
91.前記組成物は、動脈内に提供される、実施形態60から86の何れかの方法。
92.前記組成物は、冠動脈内に提供される、実施形態60から86の何れかの方法。
93.前記組成物は、生体適合性材料でコーティングされたカテーテルを用いて提供される、実施形態60から92の何れかの方法。
94.前記組成物は、実施形態1から34の何れかの組成物を含む、実施形態60から93の何れかの方法。
95.前記組成物は、実施形態38から61の方法によって調製される何れかの再生細胞組成物を含む、実施形態60から93の何れかの方法。
96.虚血は心虚血である、実施形態60から95の何れかの方法。
97.虚血は重篤な四肢虚血である、実施形態60から95の何れかの方法。
ソース材料として用いる骨髄は、自己由来のものであった。幹細胞を単離する骨髄を、腸骨稜、大腿骨、脛骨、脊柱および肋骨、または他の骨内骨髄腔からなる群から選択した。好ましい骨髄ソースは、腸骨稜であった。骨髄の吸引を始める前に、抗凝固剤溶液を、吸引シリンジ中に充填した。各バイアルは、250mgのビバリルジンを含有する。5mlの滅菌水を注射用に加えた。そして、バイアルを、全ての材料が溶解するまで穏やかにスワールした。溶液を、20mlの滅菌シリンジ中へ注入した。シリンジを、注射用に12.5mlのマークまで0.9%塩化ナトリウムで充填して、20mg/mlの最終濃度をもたらした。次に、3つの滅菌20mlシリンジを、2mlの20mg/mlビバリルジン溶液で充填した。18mlの骨髄を、各シリンジ内に吸引して、20mlの最終容量とした。各シリンジ内のビバリルジンの最終濃度は、吸引した骨髄と併せて、2mg/mlであった。用いた吸引針/トロカールは、11ゲージであった。骨髄を、抗凝固剤溶液で最終の累積容量が120mlから180mlとなるように予備充填したシリンジ内に、吸引した。用いた吸引シリンジは、20mlシリンジであった。
[実施例2−骨髄細胞分析およびプロセシング]
[実施例3−骨髄粘度および分析]
[実施例4−細胞産物の注入プロトコル]
[実施例5−急性心筋梗塞の処置における、アジュバントとしての、自己由来の前駆細胞エンリッチド骨髄濃縮物(BMCEPC)の安全性研究]
[実施例6−60分の迅速なベッドサイド処置が、オプションなし四肢虚血患者の切断を減らす]
Claims (24)
- (a)骨髄幹細胞および/または前駆細胞(progenitor cell)を含む第1の細胞集団と、
(b)抗凝固剤と、
(c)水性バッファおよび/または自己血清および/または自己血漿画分と
を含む組成物であって:
前記組成物は、粘度が、37℃にて測定されて1.8から3.0センチポイズ(cP)である、組成物。 - 骨髄幹細胞および/または前駆細胞を含む前記第1の細胞集団は、患者の骨内骨髄腔に由来し、前記骨は、腸骨稜、大腿骨、脛骨、脊柱、胸骨または肋骨である、請求項1に記載の組成物。
- 前記抗凝固剤は、ビバリルジンを含む、請求項1または2に記載の組成物。
- 前記ビバリルジンは、前記組成物中に1mg/mLから3mg/mLの濃度で存在する、請求項3に記載の組成物。
- 前記ビバリルジンは、前記組成物中に1.5mg/mLから2.5mg/mLの濃度で存在する、請求項3に記載の組成物。
- 前記ビバリルジンは、前記組成物中に1.8mg/mLから2.2mg/mLの濃度で存在する、請求項3に記載の組成物。
- 前記ビバリルジンは、前記組成物中に2.0mg/mLの濃度で存在する、請求項3に記載の組成物。
- 37℃にて測定される前記粘度は、2.0cPから3.0cPである、請求項1から7の何れか一項に記載の組成物。
- 37℃にて測定される前記粘度は、2.0cPから2.5cPである、請求項1から7の何れか一項に記載の組成物。
- 37℃にて測定される前記粘度は、1.8cPから2.5cPである、請求項1から7の何れか一項に記載の組成物。
- 骨髄細胞を含む前記第1の細胞集団は、少なくとも107個から109個以下の単核細胞、少なくとも104個の造血幹細胞、少なくとも5×102個の間葉系幹細胞、少なくとも5×102個の内皮前駆細胞、および少なくとも5×103個のCXCR4陽性細胞を含む、請求項1から10の何れか一項に記載の組成物。
- 前記組成物は、ルーメンサイズが約0.36mmであり、プランジャ力が4.85lbfで28.39psiまでの圧力で保持する5mLのシリンジを用いるカテーテルを通しての、2.5mL/分の流速での送達1時間後に、約40%以下のアポトーシス率または他の細胞死率を示す、請求項1から11の何れか一項に記載の組成物。
- 前記組成物は、9101/秒以下の最大剪断にさらされると、カテーテルを通る送達1時間後に、約40%以下のアポトーシス率または他の細胞死率を示す、請求項1から11の何れか一項に記載の組成物。
- 再生細胞組成物を調製する方法であって:
(a)骨髄幹細胞および/または前駆細胞を含む第1の細胞集団を提供することと;
(b)抗凝固剤を前記第1の細胞集団と混合して、前記第1の細胞集団および抗凝固剤を含む組成物を生じることと;
(c)前記細胞集団および抗凝固剤を含む前記組成物内の骨髄幹細胞をエンリッチして、エンリッチド骨髄幹細胞および/または前駆細胞を含む第2の細胞集団を生じることと;
(d)エンリッチド骨髄幹細胞および/または前駆細胞を含む前記第2の細胞集団を含む画分を単離することと;
(e)前記画分の粘度を、液体を用いて、37℃にて測定して1.0から5.0cPの粘度に調整して、前記再生細胞組成物を調製することと
を含む方法。 - 前記液体は、エンリッチド骨髄幹細胞および/または前駆細胞を含む前記第2の細胞集団を含む前記画分が単離された、液体を含む自己血清または血漿画分である、請求項14に記載の方法。
- 前記抗凝固剤は、対象由来の骨髄幹細胞および/または前駆細胞を含む前記第1の細胞集団が得られる前に、骨髄幹細胞および/または前駆細胞を含む前記第1の細胞集団と接触する、請求項14に記載の方法。
- 前記抗凝固剤は、前記対象由来の骨髄幹細胞を含む前記第1の細胞集団が得られた後に、骨髄幹細胞を含む前記第1の細胞集団と接触する、請求項14に記載の方法。
- 前記抗凝固剤は、前記第1の細胞集団および前記抗凝固剤を含有するコンテナが手動で撹拌されることによって、少なくとも部分的に前記第1の細胞集団と混合される、請求項17に記載の方法。
- 前記撹拌は、前記コンテナを転がすことを含む、請求項18に記載の方法。
- 前記抗凝固剤は、ビバリルジンを含む、請求項14から19の何れか一項に記載の方法。
- 前記ビバリルジンは、1mg/mLから3mg/mLの濃度で提供される、請求項20に記載の方法。
- 37℃にて測定される前記粘度は、1.8cPから3.0cPである、請求項14から21の何れか一項に記載の方法。
- 37℃にて測定される前記粘度は、3.1cPから5.0cPである、請求項14から21の何れか一項に記載の方法。
- 前記液体は、塩化ナトリウムを含む水性バッファである、請求項14から21の何れか一項に記載の方法。
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