JP6447912B2 - 藻類油脂の抽出方法、及び超音波処理装置 - Google Patents
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Description
藻類からのTAG(トリアシルグリセロール)を抽出するための従来法の一例としては、まず藻類を培養した藻類培養液を静置後、固液分離を行って藻類を濃縮又は乾燥させる(1段階目)。次いで、得られた藻類の濃縮物に対して、ホモジナイザー等を用いた物理的抽出や、溶剤抽出等による化学的抽出などを行うことにより、藻類の濃縮物から油脂分を抽出する(2段階目)。だが、従来法で得られた油脂分はTAGの精製度が低いため、さらにカラム分離操作などを行う必要がある(3段階目)(非特許文献1〜2)。
現状では、油脂精製コストが、バイオディーゼル生産コストのかなりの部分を占めており、バイオディーゼル燃料実用化に向けての障害の一つとなっている。このような経緯から、新たな藻類油脂の抽出法の開発が求められている。
前記藻類を含む藻類含有液に酸素を溶存させる工程と、
酸素が溶存された前記藻類含有液に超音波を与えて前記藻類を破砕し、藻類破砕液を得る工程と、
を有することを特徴とする藻類油脂の抽出方法。
(2)前記藻類破砕液から、有機溶媒を用いて前記藻類油脂を回収する工程をさらに有する前記(1)に記載の藻類油脂の抽出方法。
(3)前記超音波の周波数が500kHz以上である前記(1)又は(2)に記載の藻類油脂の抽出方法。
(4)前記超音波の周波数が1MHz以上2.5MHz未満の範囲である前記(1)〜(3)のいずれか一つに記載の藻類油脂の抽出方法。
(5)前記超音波の周波数が1.3MHz以上2MHz以下の範囲である前記(1)〜(4)のいずれか一つに記載の藻類油脂の抽出方法。
(6)前記藻類含有液中の一重項酸素濃度が、20μM〜270μMとなるように前記藻類含有液に酸素を添加する前記(1)〜(5)のいずれか一つに記載の藻類油脂の抽出方法。
(7)前記藻類含有液中のヒドロキシルラジカル濃度が、10μM〜100μMとなるように前記藻類含有液に酸素を添加する前記(1)〜(6)のいずれか一つに記載の藻類油脂の抽出方法。
(8)前記藻類含有液への酸素の添加が、藻類含有液へ酸素含有気体をバブリングにより送り込むものである前記(1)〜(7)のいずれか一つに記載の藻類油脂の抽出方法。
(9)藻類を培養して前記藻類含有液を得る培養工程を有する前記(1)〜(8)のいずれか一つに記載の藻類油脂の抽出方法。
(10)藻類を含む藻類含有液を溜めるための処理槽と、
前記処理槽中の藻類含有液に超音波を与えて前記藻類を破砕し、藻類破砕液を得るための超音波発生手段と、を備えたことを特徴とする超音波処理装置。
(11)前記超音波の周波数が500kHz以上の範囲に選定されている前記(10)に記載の超音波処理装置。
(12)前記超音波の周波数が1MHz以上2.5MHz未満の範囲に選定されている前記(10)又は(11)に記載の超音波処理装置。
(13)前記超音波の周波数が1.3MHz以上2MHz以下の範囲に選定されている前記(10)〜(12)のいずれか一つに記載の超音波処理装置。
(14)前記藻類含有液に酸素含有気体を送り込むための送込管を備えた前記(10)〜(13)のいずれか一つに記載の超音波処理装置。
(15)前記処理槽中の前記藻類含有液へと前記超音波発生手段より発せられた超音波を伝播する作用液を溜めるための作用液槽を備え、
前記処理槽が、前記作用液槽内部に配置された前記(10)〜(14)のいずれか一つに記載の超音波処理装置。
(16)更に、前記藻類破砕液から藻類油脂を回収するための有機溶媒をためる有機溶媒貯蔵槽を備えた前記(10)〜(15)のいずれか一つに記載の超音波処理装置。
本発明の超音波処理装置によれば、簡便に、高品質の藻類油脂を高収率に得ることを可能とする。
本発明の藻類油脂の抽出方法は、藻類に含有される藻類油脂を抽出する藻類油脂の抽出方法であって、前記藻類を含む藻類含有液に酸素を溶存させる工程と、酸素が溶存された前記藻類含有液に超音波を与えて前記藻類を破砕し、藻類破砕液を得る工程と、を有するものである。
本発明において「藻類油脂を抽出する」とは、藻類の体内に存在する油脂を藻類体外へ取り出すこと、又は藻類体外へと放出させることを意味する。藻類油脂の抽出に伴い、藻類は破砕されてもよい。
以下、本発明の好ましい実施形態について説明する。
上記藻類含有液中には藻類の培養のための塩類やビタミン、炭水化物等の各種栄養素が含まれていてもよい。また、藻類含有液中には、塩が含まれていることが好ましい。藻類含有液中に塩が含まれている場合、藻類含有液中に塩が含まれてない場合と比べて、藻類含有液中のヒドロキシルラジカルおよび一重項酸素の生成量を増加させることが可能となる。そのため、藻類から藻類油脂を高効率に抽出することができる。上記塩としては、金属塩であることが好ましく、遷移金属の金属塩であることがより好ましい。
超音波によって細胞や組織を破砕することは、超音波破砕法として、超音波ホモジナイザーを用いる等により従来行われてきた。
しかし、発明者らが詳細に検討したこところ、藻類含有液に酸素を溶存させる工程を行い、酸素が溶存された前記藻類含有液に超音波を与えることで、油脂の収率及び純度の点からも、非常に好ましい状態で藻類が破砕された藻類破砕液が得られることが判明した。この藻類破砕液中に放出された藻類油脂は、高収率、高純度のまま前記藻類破砕液から、回収することも可能である。以下、前記各工程について説明する。
物理的に藻類を破砕する場合、藻類含有液に超音波を与えることで、藻類含有液中を超音波が伝播し、液中に含まれる藻類が破砕される。また、超音波が比較的低周波である場合には、主に物理的な細胞の破砕が生じる。具体的には、液に振動を与えることによる圧力の発生による藻類の物理的な破砕、微細な泡の発生によるキャビテーションによる藻類の物理的な破砕が挙げられる。
ここで、藻類含有液に酸素を溶存させる工程を行うことで、ヒドロキシルラジカルが溶存酸素と反応してハイドロトリオキシドラジカル(HOOO・)を中間体として生成し、さらに反応が進行する事でヒドロキシルラジカルと一重項酸素(1O2)が生成する。ここで生成したヒドロキシルラジカルもまた溶存酸素と反応し、結果として一重項酸素の濃度が高まる。
また、発明者らは、1.65 MHzの高周波数帯の超音波を水に照射したときに、25〜100 kHzの低周波数帯の超音波を水に照射したときに比べて100倍近い濃度のヒドロキシルラジカル(OH・)が生成するとの知見を得た。そして、後述する実施例において示されるように、発明者らは、1.65 MHzの高周波数帯の超音波を藻類含有液に与えることにより、純度の高い高品質な油脂を高収率に得ることができることを見出した。上記の知見を考慮し、藻類含有液に与える超音波の周波数としては、1MHz以上5MHz以下であることが好ましく、1MHz超5MHz以下であることが好ましく、1.3MHz以上5MHz以下であることがより好ましい。
また、発明者らは、2.5MHzの高周波数帯の超音波を水に照射したときには、1.65 MHzの高周波数帯の超音波を水に照射したときに比べてヒドロキシルラジカル(OH・)の生成が低下するとの知見を得た。これらの知見を考慮し、藻類含有液に与える超音波の周波数としては、2.5MHz未満であることが好ましく、500kHz以上2.5MHz未満であることがさらに好ましく、600 kHz以上2.5MHz未満であることがさらに好ましく、1MHz以上2.5MHz未満であることがさらに好ましく、1MHz超2.5MHz未満であることがさらに好ましく、1.3MHz以上2.5MHz未満であることがさらに好ましく、1.3MHz以上2MHz以下であることがさらに好ましく、1.5MHz以上2MHz以下であることが特に好ましく、1.5MHz以上1.8MHz以下であることが特に好ましい。
上記方法のなかでは、簡便に効率よく藻類含有液に酸素を溶存させることができることから、バブリングにより藻類含有液へ酸素含有気体を送り込む方法がより好ましく、バブリングにより藻類含有液へ空気を送り込む方法がさらに好ましい。
藻類含有液中の一重項酸素濃度が上記範囲となるよう、藻類含有液への酸素の溶存及び超音波処理を行うことで、藻類の破砕の状態をより好ましいものとすることができる。
また例えば、超音波が与えられる藻類含有液中のヒドロキシルラジカル濃度が、10μM〜100μMであることが好ましく、40μM〜100μMであることが好ましく、25μM〜60μMであることがより好ましく、30μM〜50μMであることがさらに好ましい。
藻類含有液中のヒドロキシルラジカル濃度が上記範囲となるよう、藻類含有液への酸素の溶存及び超音波処理を行うことで、藻類の破砕の状態をより好ましいものとすることができる。
しかし、従来の藻類油脂の抽出方法における藻類細胞の破砕は物理的な藻類細胞の破砕であり、おそらく細胞の破砕程度が高すぎるため、目的とする油脂成分以外に色素等の不純物の混入が生じることが問題であった。
このように、本実施形態の藻類油脂抽出方法は、短時間で且つ低コストに高純度の油脂抽出を可能とする画期的な方法である。
上記前記藻類破砕液から、前記藻類油脂を回収する方法は、特に限定されず、例えば、適当な溶剤を藻類破砕液に接触させ、藻類破砕液に溶剤を重層させて静置し、溶剤を回収する方法が挙げられる。溶剤としては有機溶媒が好ましく、上記方法は一般的に溶媒抽出法として知られる方法である。前記有機溶媒としては、炭素数6〜10の直鎖状、分岐鎖状、又は環状の飽和炭化水素であることが好ましく、ヘキサンがさらに好ましい。
溶媒抽出法は、溶剤を藻類破砕液に重層さえることのみで、油脂を回収できることから、油脂回収コストを低く抑えることができる点においても、好ましい。しかし、従来の油脂抽出方法に溶媒抽出法を採用した場合には、溶媒中に目的の油脂成分以外に不純物も回収されてしまう場合があった。対して、本実施形態の油脂抽出方法では、油脂を抽出することに非常に適した状態で藻類細胞が破砕された藻類破砕液が得られるので、精製の工程を経ずとも溶媒抽出のみで、高品質の油脂を回収することができる。
本発明の超音波処理装置は、藻類を含む藻類含有液を溜めるための処理槽と、前記処理槽中の藻類含有液に超音波を与えて前記藻類を破砕し、藻類破砕液を得るための超音波発生手段と、を備える。
本発明の超音波処理装置は、本発明の藻類油脂の抽出方法の実施にあたり、好適に用いることができる。以下、図を参照しながら、本発明に係る超音波処理装置の好ましい実施形態について説明するが、本発明の藻類油脂の抽出方法は、以下の超音波処理装置を用いた方法に限定されない。
本実施形態の超音波処理装置は、藻類を含む藻類含有液を溜めるための処理槽と、前記処理槽中の前記藻類含有液へと前記超音波発生手段より発せられた超音波を伝播する作用液を溜めるための作用液槽と、前記処理槽中の藻類含有液に超音波を与えて前記藻類を破砕し、藻類破砕液を得るための超音波発生手段と、前記藻類含有液に酸素含有気体を送り込むための送込管と、を備え、前記処理槽が、前記作用液槽内部に配置されたものである。
また、発明者らは、1.65 MHzの高周波数帯の超音波を水に照射したときに、25〜100 kHzの低周波数帯の超音波を水に照射したときに比べて100倍近い濃度のヒドロキシルラジカル(OH・)が生成するとの知見を得た。そして、後述する実施例において示されるように、発明者らは、1.65 MHzの高周波数帯の超音波を藻類含有液に与えることにより、純度の高い高品質な油脂を高収率に得ることができることを見出した。上記の知見を考慮し、超音波発生手段の超音波の周波数としては、1MHz以上5MHz以下であることが好ましく、1MHz超5MHz以下であることが好ましく、1.3MHz以上5MHz以下であることがより好ましい。
また、発明者らは、2.5MHzの高周波数帯の超音波を水に照射したときには、1.65 MHzの高周波数帯の超音波を水に照射したときに比べてヒドロキシルラジカル(OH・)の生成が低下するとの知見を得た。これらの知見を考慮し、超音波発生手段の超音波の周波数としては、2.5MHz未満であることが好ましく、500kHz以上2.5MHz未満であることがさらに好ましく、600 kHz以上2.5MHz未満であることがさらに好ましく、1MHz以上2.5MHz未満であることがさらに好ましく、1MHz超2.5MHz未満であることがさらに好ましく、1.3MHz以上2.5MHz未満であることがさらに好ましく、1.3MHz以上2MHz以下であることがさらに好ましく、1.5MHz以上2MHz以下であることが特に好ましく、1.5MHz以上1.8MHz以下であることが特に好ましい。
なお、本実施形態においては、超音波発生手段3が作用液槽2内に配設された態様を例示したが、例えば、超音波発生手段3が作用液槽2外の作用液槽2の壁面に取り付けられていてもよく、超音波発生手段3が作用液槽2の壁内部に埋設されていてもよい。
本実施形態において示したように、作用液槽2を設け、超音波発生手段3は作用液槽内2内に配設され構成とすることにより、超音波発生手段と藻類含有液とを直接に接することなく超音波処理することが可能となる。このような構成とすることにより、超音波発生手段にとっては藻類含有液の影響を受けにくいため、管理性、耐久性等に優れた超音波処理装置とすることができる。
図3に示すように、本実施形態の超音波処理装置20は、前記藻類破砕液から藻類油脂を回収するための有機溶媒をためる有機溶媒貯蔵槽6及び配管7をさらに備えている点で、図2に示す超音波処理装置10と異なっている。その他構成は、超音波処理装置10と同一であり、上記第1の実施形態の超音波処理装置10と共通する点について説明を省略し、同じ構成要素に対しては、超音波処理装置10で使用したものと同一の符号を用いている。
藻類はクラミドモナスの野生株 (C9株CC−408 mt−)を用いた。通常培養においては、液体TAP培地の改変培地を使用し、20〜40 μE m−2 s−1の連続光下、23℃で旋回培養した。油脂を多量に蓄積させるために、該液体TAP培地の改変培地からはリンのイオンを除いてある。以下、当該液体TAP培地の改変培地をTAP改変培地(−P)という。実験には、TAP改変培地(−P)に移して培養した細胞を使用した。移し替える過程は以下の通りである。対数増殖期にあるクラミドモナス藻体を遠心で回収し( 5分、1,800 × g )、TAP改変培地(−P)で2回洗い、1.0 × 105 cells/mLの細胞濃度になるようにTAP改変培地(−P)に懸濁し、20〜40 μE m−2 s−1の連続光下、23℃で8日間、旋回培養した。
上記(1.藻類の培養)に記載とおり、藻類の培養を行い、培養後の藻体を、1〜2 ×107 cells/mLの細胞数になるようにTAP改変培地(−P)に懸濁し、これを藻類培養液とし、1 mLを超音波処理に用いた。超音波処理は、超音波処理装置(スピンナノ装置IV(株式会社 ニモ製))を用いて、出力36 V、1.65MHzで10秒間、20秒間、30秒間、又は60秒間の超音波処理(室温)、或いは出力48 V、1.65MHzで10分間の超音波処理(室温)、で行った。藻類培養液への超音波処理は、上記スピンナノ装置付属の槽であり、槽内部に超音波振動子が設けられた槽に水を入れ、槽にためられた水の中に藻類培養液を入れた試験管を沈めた状態で行った。また、対照群として、超音波洗浄装置(BRANSONIC3210、日本エマソン社製)を用いて、出力47kHzで10分間、又は30分間の藻類培養液への超音波処理(室温)を行った。上記超音波処理装置の槽にためられた水の中に、藻類培養液を入れた試験管を沈めた状態で行った。
超音波処理後すぐに光学顕微鏡で観察を行なった。
図4は、出力36 V、1.65MHzで10秒間の超音波処理後、図5は、出力36 V、1.65MHzで20秒間の超音波処理後、図6は、出力36 V、1.65MHzで30秒間の超音波処理後、図7は、出力36 V、1.65MHzで60秒間の超音波処理後の藻類細胞の様子である。
図8は、超音波処理前、図9は、出力48 V、1.65MHzで10分間の超音波処理後の藻類細胞の様子である。
図10は、47kHzで10分間の超音波処理後、図11は、47kHzで30分間の超音波処理後の藻類細胞の様子である。
一方、1.65MHzの超音波処理では、図4〜7に示されるように、超音波処理の処理時間を長くするほど、藻類細胞が破砕されていくことがわかる。また、図9に示されるように、10分間の超音波処理によって、藻類細胞が良好に破壊されたことがわかる。
上記(1.藻類の培養)に記載とおり、藻類の培養を行い、1〜2 × 107 cells/mL の細胞数になるように藻体を調製し、1 mLを超音波破砕に用いた。処理条件は出力48 V、1.65MHzで10分間処理をした。処理前と処理後のサンプルを適宜希釈して粒子径をレーザ回折式粒子径分布測定装置によって測定した。レーザ回折式粒子径分布測定装置には島津製作所のSALD−2300を使用した。
上記(1.藻類の培養)に記載とおり、藻類の培養を行い、1〜2 × 107 cells/mL の細胞数になるように藻体を調製してこれを藻類培養液とし、1 mLを超音波破砕に用いた。超音波処理条件は出力48 V、1.65MHzとし、藻類培養液温度50℃で、5分間、10分間、20分間又は30分間の超音波処理を行った。
藻類培養液1mLのそれぞれに、1 mLのヘキサンを重層して一晩静置した。その後ヘキサン層を回収し、薄層クロマトグラフィー (TLC Silica gel 60, 20x20 cm, メルク, 製品コード1.05721.0009、展開溶媒組成は、ヘキサン:ジエチルエーテル:酢酸 = 160 : 40 : 4 (vol/vol/vol))を行った。
上記プレートから油脂トリアシルグリセロール(TAG)のスポットをかきとって含量の測定を行った。
15:0脂肪酸を内部標準試料として、TAGをメタノリシス処理した。具体的には、ネジ栓付きガラス試験管内で、TAGを含むシリカゲル粉末に100μlの1 mM 15:0ヘキサン溶液(pentadecanoic acid, シグマアルドリッチ, P−6125)および350μlの5% (vol/vol)塩化水素メタノール溶液(和光純薬、089−03971)を添加して85℃で1時間処理した。メタノリシス処理後、ヘキサンで脂肪酸メチルエステルを回収し、窒素ガスで乾固後、60μlのヘキサンで回収し、そのうち3μlをガスクロマトグラフィーで解析した。ガスクロマトグラフィー (島津製作所、GC−2014、カラムは信和化工株式会社のHR−SS−10 (25 m × 0.25 mm ID)、カラム温度180℃、気化室および検出器250℃、入口圧(kPa)68.2、カラム流量 (ml/min) 0.53、スプリット比 68.8、計測時間15分)を用いて分離・定量を行った。
上記ヘキサン層へのTAG回収率は、Bligh and Dyer法(Can. J. Biochem. Phsiol. (1959) 37巻, 911頁)に基づき超音波処理をしていない藻体から総脂質を抽出後、上述と同様に薄層クロマトグラフィー、ガスクロマトグラフィーを用いてTAGを定量し、その値を100%として回収率を計算した。
超音波処理、及び超音波処理に加えてバブリング処理をした場合の、ヒドロキシルラジカル及び一重項酸素の発生量の測定した。バブリング処理は、酸素バブリング処理と、空気バブリング処理の両方の場合で測定した。
一重項酸素濃度とヒドロキシルラジカル濃度はXバンド電子スピン共鳴(ESR)装置(JES−FA−100、日本電子株式会社製)を用いて定量した。ヒドロキシルラジカル濃度の測定では150 μLのTAP改変培地(−P)と50 μLの 5,5−ジメチル−1−ピロリン−N−オキシド(DMPO) (1.2 M)の混合液を用意した。一重項酸素濃度の測定では750 μLのTAP改変培地(−P)培地と250 μLの 2、2、5、5−テトラメチル−3−ピロリン−3−カルボキサミド(TPC)(100 mM)の混合液を用意した。
それぞれのサンプルを出力48 V、1.65MHzで1分間または5分間超音波処理し、ESRスペクトルを測定した。また、それぞれのサンプルを上記超音波処理する5分前から超音波処理が終了する時点まで、酸素又は空気を100 mL/分で吹き込むバブリング処理を行った。
ESR測定条件は、マイクロ波出力1 mW、マイクロ波周波数 9.428 GHz、掃引磁場330.5から340.5 mT、変調周波数100 kHz、変調幅0.1 mT、掃引時間2分、時定数0.1秒、ESRスペクトロメーターは日本電子株式会社のJES−FA−100を用いた。各々のラジカル濃度は、内部標準物質の酸化マンガンに由来するMn2+のシグナル面積とサンプル由来のシグナル面積を用いて、20 μMのTEMPOLのラジカル濃度を基準として算出した。
図14(c)は、サンプルに超音波処理のみを行った場合と、超音波処理及び空気バブリング処理を行った場合とで、サンプル中の一重項酸素濃度を比較したグラフである。図14(d)は、サンプルに超音波処理のみを行った場合と、超音波処理及び空気バブリング処理を行った場合とで、サンプル中のヒドロキシルラジカル濃度を比較したグラフである。
酸素バブリング処理、及び空気バブリング処理のどちらのバブリング処理を行った場合でも、培地中の一重項酸素濃度が上昇したことが示された。
ヒドロキシルラジカル濃度については、一重項酸素濃度とは異なる変動の様子がみられたが、これは、ヒドロキシルラジカルの生成が水の分解とハイドロトリオキシドラジカルの分解の2過程から生成するとともに溶存酸素との反応で消費されたことによるものと考えられる。
(実施例1)
上記(1.藻類の培養)に記載とおり、藻類の培養を行った。培養後の藻体は、1〜2×107 cells/mLの細胞数になるようにTAP改変培地(−P)に懸濁し、藻類培養液とした。この藻類培養液1 mLを超音波処理及びバブリング処理に用いた。
上記藻類培養液に、出力48 V、1.65MHzで10分間、室温で超音波処理を行った。また、超音波処理する5分前から超音波処理が終了する時点まで、藻類培養液に酸素を100 mL/分で吹き込む酸素バブリング処理を行った。
酸素に代えて、空気を藻類培養液に100 mL/分で吹きこんだ以外は、実施例1と同様にして、藻類培養液への超音波処理及び空気バブリング処理を行った。
実施例1と同様にして藻類培養液を得た。藻類培養液には、超音波処理もバブリング処理も行わなかった。
実施例1と同様にして藻類培養液を得た後、実施例1と同様にして、藻類培養液へ超音波処理を行った。藻類培養液にはバブリング処理は行わなかった。
上記実施例2で超音波処理及び空気バブリング処理を受けた藻類培養液1mLと、上記比較例4で超音波処理を受けた藻類培養液1mLのそれぞれに、1 mLのヘキサンを重層して一晩静置した。その後ヘキサン層を回収し、薄層クロマトグラフィー (TLC Silica gel 60, 20x20 cm, メルク, 製品コード1.05721.0009、展開溶媒組成は、ヘキサン:ジエチルエーテル:酢酸 = 160 : 40 : 4 (vol/vol/vol))を行った。
結果を図15に示す。水層をスポットした方のプレート(図15(b))では、油脂(トリアシルグリセロール)のスポット他に、色素、ジアシルグリセロール、膜脂質に代表されるその他極性脂質の分離が観察された。一方、ヘキサン層をスポットした方のプレート(図15(a))では、油脂(トリアシルグリセロール)のスポットのみが観察され、色素、ジアシルグリセロール、膜脂質に代表されるその他極性脂質の分離はほとんど確認できなかった。
このことから、超音波処理を経た藻類培養液から、ヘキサン層に回収された油脂の純度は、非常に高純度であることが明らかとなった。また、超音波処理及び空気バブリング処理を経た藻類培養液から、ヘキサン層に回収された油脂の純度も、非常に高純度であることが明らかとなった。回収されたこれらの油脂は、従来の油脂の抽出方法では通常必要とされる油脂の精製が必要ないほどに、高純度であると考えられる。
上記プレートから油脂トリアシルグリセロール(TAG)のスポットをかきとって含量の測定を行った。
15:0脂肪酸を内部標準試料として、TAGをメタノリシス処理した。具体的には、ネジ栓付きガラス試験管内で、TAGを含むシリカゲル粉末に100μlの1 mM 15:0ヘキサン溶液(pentadecanoic acid, シグマアルドリッチ, P−6125)および350μlの5% (vol/vol)塩化水素メタノール溶液(和光純薬、089−03971)を添加して85℃で1時間処理した。メタノリシス処理後、ヘキサンで脂肪酸メチルエステルを回収し、窒素ガスで乾固後、60μlのヘキサンで回収し、そのうち3μlをガスクロマトグラフィーで解析した。ガスクロマトグラフィー (島津製作所、GC−2014、カラムは信和化工株式会社のHR−SS−10 (25 m × 0.25 mm ID)、カラム温度180℃、気化室および検出器250℃、入口圧(kPa)68.2、カラム流量 (ml/min) 0.53、スプリット比 68.8、計測時間15分)を用いて分離・定量を行った。
上記ヘキサン層へのTAG回収率は、Bligh and Dyer法(Can. J. Biochem. Phsiol. (1959) 37巻, 911頁)に基づき超音波処理をしていない藻体から総脂質を抽出後、上述と同様に薄層クロマトグラフィー、ガスクロマトグラフィーを用いてTAGを定量し、その値を100%として回収率を計算した。
比較例1及び比較例3の藻類培養液からのTAGの回収率と比較して、実施例1の藻類培養液からのTAGの回収率が飛躍的に上昇しており、高い油脂回収率を達成できたことが示された。
比較例2及び比較例4の藻類培養液からのTAGの回収率と比較して、実施例2の藻類培養液からのTAGの回収率が飛躍的に上昇しており、高い油脂回収率を達成できたことが示された。
したがって、酸素バブリングよりも簡便な空気バブリングによっても、高い油脂回収率を達成できたことが示された。
Claims (14)
- 油脂抽出のために培養された藻類に含有される藻類油脂を抽出する藻類油脂の製造方法であって、
前記藻類を含む藻類含有液に酸素を溶存させる工程と、
酸素が溶存された前記藻類含有液に周波数が600kHz以上の超音波を与えて前記藻類を破砕し、藻類破砕液を得る工程と、
前記藻類破砕液から、有機溶媒を用いて前記藻類油脂を回収する工程と、
を有することを特徴とする藻類油脂の製造方法。 - 前記超音波の周波数が1MHz以上2.5MHz未満の範囲である請求項1に記載の藻類油脂の製造方法。
- 前記超音波の周波数が1.3MHz以上2MHz以下の範囲である請求項1又は2に記載の藻類油脂の製造方法。
- 前記藻類含有液中の一重項酸素濃度が、20μM〜270μMとなるように前記藻類含有液に酸素を添加する請求項1〜3のいずれか一項に記載の藻類油脂の製造方法。
- 前記藻類含有液中のヒドロキシルラジカル濃度が、10μM〜100μMとなるように前記藻類含有液に酸素を添加する請求項1〜4のいずれか一項に記載の藻類油脂の製造方法。
- 前記藻類含有液への酸素の添加が、藻類含有液へ酸素含有気体をバブリングにより送り込むものである請求項1〜5のいずれか一項に記載の藻類油脂の製造方法。
- 藻類を培養して前記藻類含有液を得る培養工程を有する請求項1〜6のいずれか一項に記載の藻類油脂の製造方法。
- 藻類を含む藻類含有液を溜めるための処理槽と、
前記処理槽中の藻類含有液に超音波を与えて前記藻類を破砕し、藻類破砕液を得るための超音波発生手段と、
前記藻類破砕液から藻類油脂を回収するための有機溶媒をためる有機溶媒貯蔵槽と、
を備え、
前記超音波の周波数が600kHz以上の範囲に選定されていることを特徴とする藻類油脂抽出装置。 - 請求項1〜7のいずれか一項に記載の藻類油脂の製造方法に用いられる藻類油脂抽出装置であって、
藻類を含む藻類含有液を溜めるための処理槽と、
前記処理槽中の藻類含有液に超音波を与えて前記藻類を破砕し、藻類破砕液を得るための超音波発生手段と、を備え、
前記超音波の周波数が600kHz以上の範囲に選定されていることを特徴とする藻類油脂抽出装置。 - 更に、前記藻類破砕液から藻類油脂を回収するための有機溶媒をためる有機溶媒貯蔵槽を備えた請求項9に記載の藻類油脂抽出装置。
- 前記超音波の周波数が1MHz以上2.5MHz未満の範囲に選定されている請求項8〜10のいずれか一項に記載の藻類油脂抽出装置。
- 前記超音波の周波数が1.3MHz以上2MHz以下の範囲に選定されている請求項8〜11のいずれか一項に記載の藻類油脂抽出装置。
- 前記藻類含有液に酸素含有気体を送り込むための送込管を備えた請求項8〜12のいずれか一項に記載の藻類油脂抽出装置。
- 前記処理槽中の前記藻類含有液へと前記超音波発生手段より発せられた超音波を伝播する作用液を溜めるための作用液槽を備え、
前記処理槽が、前記作用液槽内部に配置された請求項8〜13のいずれか一項に記載の藻類油脂抽出装置。
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