JP6438423B2 - 治療用エピトープ及びそれらの使用 - Google Patents
治療用エピトープ及びそれらの使用 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6438423B2 JP6438423B2 JP2016037111A JP2016037111A JP6438423B2 JP 6438423 B2 JP6438423 B2 JP 6438423B2 JP 2016037111 A JP2016037111 A JP 2016037111A JP 2016037111 A JP2016037111 A JP 2016037111A JP 6438423 B2 JP6438423 B2 JP 6438423B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- gliadin
- celiac disease
- epitope
- cells
- peptide
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 title description 9
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 280
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 222
- 208000015943 Coeliac disease Diseases 0.000 claims description 215
- 108010061711 Gliadin Proteins 0.000 claims description 212
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 118
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 105
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 94
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 80
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 80
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 62
- 108060008539 Transglutaminase Proteins 0.000 claims description 47
- 102000003601 transglutaminase Human genes 0.000 claims description 47
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 claims description 46
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 39
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 32
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 claims description 31
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 claims description 31
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 claims description 31
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 30
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 29
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 29
- 230000006240 deamidation Effects 0.000 claims description 28
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 26
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims description 22
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 claims description 21
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims description 20
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims description 20
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 19
- 241000209219 Hordeum Species 0.000 claims description 18
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 claims description 18
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 14
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 13
- 241000209140 Triticum Species 0.000 claims description 10
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 7
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 7
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 7
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 7
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 7
- 230000028327 secretion Effects 0.000 claims description 6
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 6
- 208000032309 susceptibility to 1 celiac disease Diseases 0.000 claims description 6
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 5
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 claims description 4
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 claims description 4
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 claims description 4
- 230000004044 response Effects 0.000 description 168
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 129
- 108010068370 Glutens Proteins 0.000 description 101
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 93
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 87
- 235000021312 gluten Nutrition 0.000 description 83
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 82
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 58
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 53
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 51
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 46
- 235000006171 gluten free diet Nutrition 0.000 description 45
- 235000020884 gluten-free diet Nutrition 0.000 description 45
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 44
- 238000003114 enzyme-linked immunosorbent spot assay Methods 0.000 description 44
- 244000098338 Triticum aestivum Species 0.000 description 42
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 41
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 36
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 36
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 36
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 36
- 239000000047 product Substances 0.000 description 32
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 31
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 31
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 30
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 29
- 230000009258 tissue cross reactivity Effects 0.000 description 29
- 235000008429 bread Nutrition 0.000 description 27
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 26
- 108010047762 HLA-DQ8 antigen Proteins 0.000 description 23
- 238000011510 Elispot assay Methods 0.000 description 22
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 22
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 22
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 21
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 20
- 230000008859 change Effects 0.000 description 19
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 19
- 235000007238 Secale cereale Nutrition 0.000 description 18
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 18
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 17
- 241000209056 Secale Species 0.000 description 17
- HZWWPUTXBJEENE-UHFFFAOYSA-N 5-amino-2-[[1-[5-amino-2-[[1-[2-amino-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-oxopentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-oxopentanoic acid Chemical compound C1CCC(C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)N2C(CCC2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(O)=O)N1C(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 HZWWPUTXBJEENE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 15
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 15
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 15
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 14
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 14
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 14
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 14
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 14
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 13
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 13
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 12
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 12
- 229940122450 Altered peptide ligand Drugs 0.000 description 11
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 11
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 11
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 11
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 10
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 10
- 125000000291 glutamic acid group Chemical group N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)* 0.000 description 10
- 235000004554 glutamine Nutrition 0.000 description 10
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 10
- 108090000317 Chymotrypsin Proteins 0.000 description 9
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 9
- 101710183587 Omega-gliadin Proteins 0.000 description 9
- 229960002376 chymotrypsin Drugs 0.000 description 9
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 9
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 9
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 8
- 101710087459 Gamma-gliadin Proteins 0.000 description 8
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 8
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 8
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 8
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 8
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 8
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 8
- 229920006225 ethylene-methyl acrylate Polymers 0.000 description 8
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 125000000404 glutamine group Chemical class N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 8
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 8
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 8
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 8
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 7
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 7
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 7
- 239000000463 material Substances 0.000 description 7
- 210000005105 peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 description 7
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 7
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 7
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 6
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 6
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 6
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 6
- 102000054765 polymorphisms of proteins Human genes 0.000 description 6
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 241000894007 species Species 0.000 description 6
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 6
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 6
- 101150106931 IFNG gene Proteins 0.000 description 5
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 description 5
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 5
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 5
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 5
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 5
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 5
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 5
- 230000008485 antagonism Effects 0.000 description 5
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 5
- 238000004422 calculation algorithm Methods 0.000 description 5
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 description 5
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 5
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 5
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 5
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 5
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 5
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 5
- 102000006495 integrins Human genes 0.000 description 5
- 108010044426 integrins Proteins 0.000 description 5
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 5
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 5
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 5
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 4
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 description 4
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 4
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 4
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 4
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 4
- 108700039882 Protein Glutamine gamma Glutamyltransferase 2 Proteins 0.000 description 4
- 102100038095 Protein-glutamine gamma-glutamyltransferase 2 Human genes 0.000 description 4
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 4
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010027597 alpha-chymotrypsin Proteins 0.000 description 4
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 4
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 4
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 4
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 4
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 4
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 230000004043 responsiveness Effects 0.000 description 4
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 4
- 230000002483 superagonistic effect Effects 0.000 description 4
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000012794 white bread Nutrition 0.000 description 4
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101710102315 Alpha/beta-gliadin Proteins 0.000 description 3
- 244000075850 Avena orientalis Species 0.000 description 3
- 235000007319 Avena orientalis Nutrition 0.000 description 3
- 235000007558 Avena sp Nutrition 0.000 description 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 3
- 108010027412 Histocompatibility Antigens Class II Proteins 0.000 description 3
- 102000018713 Histocompatibility Antigens Class II Human genes 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 3
- 235000019714 Triticale Nutrition 0.000 description 3
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 3
- 150000001294 alanine derivatives Chemical group 0.000 description 3
- -1 amino, acetyl Chemical group 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 3
- 238000013461 design Methods 0.000 description 3
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 3
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 3
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010050792 glutenin Proteins 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 3
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 3
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 3
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 3
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 3
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 3
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 3
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000228158 x Triticosecale Species 0.000 description 3
- LWTDZKXXJRRKDG-KXBFYZLASA-N (-)-phaseollin Chemical compound C1OC2=CC(O)=CC=C2[C@H]2[C@@H]1C1=CC=C3OC(C)(C)C=CC3=C1O2 LWTDZKXXJRRKDG-KXBFYZLASA-N 0.000 description 2
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 2
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- 206010011968 Decreased immune responsiveness Diseases 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100036243 HLA class II histocompatibility antigen, DQ alpha 1 chain Human genes 0.000 description 2
- 108010062347 HLA-DQ Antigens Proteins 0.000 description 2
- 108010086786 HLA-DQA1 antigen Proteins 0.000 description 2
- 108010058597 HLA-DR Antigens Proteins 0.000 description 2
- 102000006354 HLA-DR Antigens Human genes 0.000 description 2
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- 102000043131 MHC class II family Human genes 0.000 description 2
- 108091054438 MHC class II family Proteins 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 108091008109 Pseudogenes Proteins 0.000 description 2
- 102000057361 Pseudogenes Human genes 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000005859 cell recognition Effects 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 2
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 2
- USIUVYZYUHIAEV-UHFFFAOYSA-N diphenyl ether Chemical compound C=1C=CC=CC=1OC1=CC=CC=C1 USIUVYZYUHIAEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 2
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 2
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 2
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 2
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-L glutamate group Chemical group N[C@@H](CCC(=O)[O-])C(=O)[O-] WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-L 0.000 description 2
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 2
- 230000002363 herbicidal effect Effects 0.000 description 2
- 239000004009 herbicide Substances 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 2
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 2
- 108060006613 prolamin Proteins 0.000 description 2
- 125000001500 prolyl group Chemical group [H]N1C([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 2
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 2
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 2
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 2
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 2
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IAJOBQBIJHVGMQ-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4-[hydroxy(methyl)phosphoryl]butanoic acid Chemical compound CP(O)(=O)CCC(N)C(O)=O IAJOBQBIJHVGMQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010020183 3-phosphoshikimate 1-carboxyvinyltransferase Proteins 0.000 description 1
- OEDUIFSDODUDRK-UHFFFAOYSA-N 5-phenyl-1h-pyrazole Chemical compound N1N=CC=C1C1=CC=CC=C1 OEDUIFSDODUDRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150001232 ALS gene Proteins 0.000 description 1
- 208000004998 Abdominal Pain Diseases 0.000 description 1
- 206010048998 Acute phase reaction Diseases 0.000 description 1
- 101710105034 Alpha/beta-gliadin MM1 Proteins 0.000 description 1
- ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N Ammonium bicarbonate Chemical compound [NH4+].OC([O-])=O ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000013 Ammonium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 101100272041 Arabidopsis thaliana ATS3 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100410782 Arabidopsis thaliana PXG1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100532518 Arabidopsis thaliana SAHH1 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- 206010003694 Atrophy Diseases 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 229930192334 Auxin Natural products 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 1
- 150000008574 D-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- 108700016256 Dihydropteroate synthases Proteins 0.000 description 1
- 208000035240 Disease Resistance Diseases 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010015150 Erythema Diseases 0.000 description 1
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 description 1
- 229930191978 Gibberellin Natural products 0.000 description 1
- MPZWMIIOPAPAKE-BQBZGAKWSA-N Glu-Arg Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N MPZWMIIOPAPAKE-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- 239000005561 Glufosinate Substances 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 239000005562 Glyphosate Substances 0.000 description 1
- 108030006517 Glyphosate oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- 102100036241 HLA class II histocompatibility antigen, DQ beta 1 chain Human genes 0.000 description 1
- 108010080451 HLA-DQ6 antigen Proteins 0.000 description 1
- 108010045618 HLA-DQ7 antigen Proteins 0.000 description 1
- 108010065026 HLA-DQB1 antigen Proteins 0.000 description 1
- 101150096276 HOG1 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010033040 Histones Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 1
- 108010036012 Iodide peroxidase Proteins 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010021466 Mutant Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000008300 Mutant Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241000187479 Mycobacterium tuberculosis Species 0.000 description 1
- 101710202365 Napin Proteins 0.000 description 1
- 206010028813 Nausea Diseases 0.000 description 1
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 1
- 208000007117 Oral Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- CHNUNORXWHYHNE-UHFFFAOYSA-N Oxadiazon Chemical compound C1=C(Cl)C(OC(C)C)=CC(N2C(OC(=N2)C(C)(C)C)=O)=C1Cl CHNUNORXWHYHNE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108700020962 Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 101710163504 Phaseolin Proteins 0.000 description 1
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 108010003581 Ribulose-bisphosphate carboxylase Proteins 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 240000000111 Saccharum officinarum Species 0.000 description 1
- 235000007201 Saccharum officinarum Nutrition 0.000 description 1
- DYAHQFWOVKZOOW-UHFFFAOYSA-N Sarin Chemical compound CC(C)OP(C)(F)=O DYAHQFWOVKZOOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100395426 Schizosaccharomyces pombe (strain 972 / ATCC 24843) sty1 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000034189 Sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 244000082988 Secale cereale Species 0.000 description 1
- 240000006394 Sorghum bicolor Species 0.000 description 1
- 235000011684 Sorghum saccharatum Nutrition 0.000 description 1
- 229940100389 Sulfonylurea Drugs 0.000 description 1
- 230000017274 T cell anergy Effects 0.000 description 1
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 102000014267 Thyroid peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 1
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- HPDFFWOTIYEPLZ-UHFFFAOYSA-N [[2-[methyl(methylsulfonyl)amino]-2-oxoethyl]amino]methylphosphonic acid Chemical compound CS(=O)(=O)N(C)C(=O)CNCP(O)(O)=O HPDFFWOTIYEPLZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- NUFNQYOELLVIPL-UHFFFAOYSA-N acifluorfen Chemical compound C1=C([N+]([O-])=O)C(C(=O)O)=CC(OC=2C(=CC(=CC=2)C(F)(F)F)Cl)=C1 NUFNQYOELLVIPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000004658 acute-phase response Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001270 agonistic effect Effects 0.000 description 1
- 235000013334 alcoholic beverage Nutrition 0.000 description 1
- 229940060587 alpha e Drugs 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 238000003277 amino acid sequence analysis Methods 0.000 description 1
- 235000012538 ammonium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001099 ammonium carbonate Substances 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000037444 atrophy Effects 0.000 description 1
- 101150033568 ats1 gene Proteins 0.000 description 1
- 239000002363 auxin Substances 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 150000004657 carbamic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 125000000837 carbohydrate group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000010370 cell cloning Methods 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 1
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 1
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000546 chi-square test Methods 0.000 description 1
- 230000009137 competitive binding Effects 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 244000038559 crop plants Species 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001945 cysteines Chemical group 0.000 description 1
- UQHKFADEQIVWID-UHFFFAOYSA-N cytokinin Natural products C1=NC=2C(NCC=C(CO)C)=NC=NC=2N1C1CC(O)C(CO)O1 UQHKFADEQIVWID-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004062 cytokinin Substances 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 1
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000012470 diluted sample Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 1
- 210000003038 endothelium Anatomy 0.000 description 1
- 231100000321 erythema Toxicity 0.000 description 1
- 210000003238 esophagus Anatomy 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 125000001153 fluoro group Chemical group F* 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 108091008053 gene clusters Proteins 0.000 description 1
- 238000003205 genotyping method Methods 0.000 description 1
- IXORZMNAPKEEDV-UHFFFAOYSA-N gibberellic acid GA3 Natural products OC(=O)C1C2(C3)CC(=C)C3(O)CCC2C2(C=CC3O)C1C3(C)C(=O)O2 IXORZMNAPKEEDV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003448 gibberellin Substances 0.000 description 1
- XDDAORKBJWWYJS-UHFFFAOYSA-N glyphosate Chemical compound OC(=O)CNCP(O)(O)=O XDDAORKBJWWYJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940097068 glyphosate Drugs 0.000 description 1
- 239000003630 growth substance Substances 0.000 description 1
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 1
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 1
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 125000001165 hydrophobic group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 description 1
- 230000002390 hyperplastic effect Effects 0.000 description 1
- UGQQAJOWXNCOPY-VBCJEVMVSA-N i1osj03h46 Chemical compound C([C@H]12)C[C@H]3[C@@](C4(Cl)Cl)(Cl)C(Cl)=C(Cl)[C@@]4(Cl)[C@H]3CC[C@@H]1[C@]1(Cl)C(Cl)=C(Cl)[C@@]2(Cl)C1(Cl)Cl UGQQAJOWXNCOPY-VBCJEVMVSA-N 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 230000001024 immunotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 1
- SEOVTRFCIGRIMH-UHFFFAOYSA-N indole-3-acetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(CC(=O)O)=CNC2=C1 SEOVTRFCIGRIMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004941 influx Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 239000000644 isotonic solution Substances 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 125000001909 leucine group Chemical group [H]N(*)C(C(*)=O)C([H])([H])C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 108091005601 modified peptides Proteins 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 239000003471 mutagenic agent Substances 0.000 description 1
- 231100000707 mutagenic chemical Toxicity 0.000 description 1
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008693 nausea Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 101800002712 p27 Proteins 0.000 description 1
- 239000004031 partial agonist Substances 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 229940021222 peritoneal dialysis isotonic solution Drugs 0.000 description 1
- 210000004303 peritoneum Anatomy 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- LWTDZKXXJRRKDG-UHFFFAOYSA-N phaseollin Natural products C1OC2=CC(O)=CC=C2C2C1C1=CC=C3OC(C)(C)C=CC3=C1O2 LWTDZKXXJRRKDG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008121 plant development Effects 0.000 description 1
- 230000008635 plant growth Effects 0.000 description 1
- 239000011505 plaster Substances 0.000 description 1
- 108010040003 polyglutamine Proteins 0.000 description 1
- 229920000155 polyglutamine Polymers 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 238000011533 pre-incubation Methods 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- YEENEYXBHNNNGV-XEHWZWQGSA-M sodium;3-acetamido-5-[acetyl(methyl)amino]-2,4,6-triiodobenzoate;(2r,3r,4s,5s,6r)-2-[(2r,3s,4s,5r)-3,4-dihydroxy-2,5-bis(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]oxy-6-(hydroxymethyl)oxane-3,4,5-triol Chemical compound [Na+].CC(=O)N(C)C1=C(I)C(NC(C)=O)=C(I)C(C([O-])=O)=C1I.O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 YEENEYXBHNNNGV-XEHWZWQGSA-M 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 230000030118 somatic embryogenesis Effects 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- 235000020790 strict gluten-free diet Nutrition 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- YROXIXLRRCOBKF-UHFFFAOYSA-N sulfonylurea Chemical class OC(=N)N=S(=O)=O YROXIXLRRCOBKF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 1
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 210000001685 thyroid gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 238000011426 transformation method Methods 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 238000011870 unpaired t-test Methods 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 238000011179 visual inspection Methods 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/415—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from plants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Public Health (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Botany (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Obesity (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Description
(a)宿主からのサンプルを、(i)配列番号:1(PQPELPY)又は配列番号:2(QLQPFPQPELPYPQPQS)である配列、又は配列番号:3により表されるグリアジンの天然に生じる相同体からの均等な配列を含むエピトープ、(ii)グリアジン蛋白質由来の単離されたオリゴペプチドである、配列番号:1を含むか又は配列番号:3により表されるグリアジンの天然に生じる相同体からの均等な配列(表1に示される)を含むエピトープ、(iii)(i)又は(ii)を認識するT細胞受容体により認識され得る(i)又は(ii)の類似体であって、ペプチドの場合は類似体が50アミノ酸の長さを超えない上記類似体、又は(iv)(i),(ii)又は(iii)において定義された2つ又はそれより多い薬剤(agent)を含む生成物からなる群から選択される薬剤と接触させ、そして(b)サンプル中のT細胞が薬剤を認識するか否かをインビトロにて決定して、T細胞による認識が、個体がセリアック病を有するか又はセリアック病に感受性であることを示す
ことを含む。
トープも含む。
とを含む。幾つかの態様において、上記薬剤は、HLA−DQ2−制限されるか、HLA−DQ8−制限されるか、又は一つの薬剤がHLA−DQ2−制限されており、そして第2の薬剤がHLA−DQ8−制限されている。幾つかの態様において、上記薬剤は、コムギのエピトープ、ライムギのエピトープ、オオムギのエピトープ又はそれらの組み合わせの何れかを、単一の薬剤として又は複数の薬剤として含む。
ことによりセリアック病を予防するか又は治療する方法も提供する。
された薬剤を含む。
て、b)発現された蛋白質を回収することを含む。
発明の詳細な説明
用語「セリアック病」は、グルテンの感度を変更することにより引き起こされる症状の範囲を包含し、小腸の粘膜により特徴付けられる重度の形態(過形成絨毛萎縮)及び温和な兆候により特徴付けされる他の形態を含む。
薬剤
薬剤は、典型的にはペプチドであり、例えば7から50アミノ酸の長さ、例えば10から40、又は15から30アミノ酸の長さである。
Sである。配列番号:3は表1に示され、そしてA−グリアジンの全配列である。配列番号:1の4位(配列番号:2の9位に均等)のグルタミン酸は、A−グリアジンのトランスグルタミナーゼ処理により生成される。
する物質、例えば類似体に対する抗体への類似体の結合をTCRsが阻害するか否かを決定することにより、のちに示すことができる。典型的には、上記類似体は、結合アッセイのそのような阻害においてクラスII MHC分子(例えば、HLA−DQ2)に結合する。
36:290−300;Altschul,S.F et al(1990)J Mol 215:403−10に記載されるとおりである
BLAST分析を実施するためのソフトウエアは、例えば、「www.ncbi.nlm.nih.gov/」においてインターネットを通して全世界のウエブ上でNational Center for Biotechnology Informationを通して公的に利用可能である。このアルゴリズムは、データベース配列中で同じ長さのワードと並べられたときに幾つかの正の値の閾値スコアに適合するか又は当該値を満たす質問配列中の長さWの短いワードを同定することにより、高いスコアリングの配列対(HSPs)を最初に同定することを含む。Tは隣接ワードスコア閾値を意味する(Altschul et al,前出)。これらの最初の隣接ワードのヒットは、それらを含むHSPsを見つけるための検索を始めるための種として作用する。蓄積したアラインメントスコアがその最大に達成された値から量Xだけ低下する場合;一つ又は複数の負のスコアリング剰余アラインメントの蓄積のため、蓄積したスコアがゼロ又はそれ以下になった場合;又は何れかの配列の末端に到達した場合、各方向におけるワードヒットに関する延長が停止する。BLASTアルゴリズムのパラメーターW,T及びXは、アラインメントの感度と速度を決定する。BLASTプログラムはデフォルトとして11のワードの長さ(W)、50のBLOSUM62スコアリングマトリックス(Henikoff and Henikoff(1992)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89:
10915−1を参照)アラインメント(B)、10の期待値(E),M=5,N=4,及び両方の鎖の比較を用いる。
診断
上記のとおり、発明の診断方法は、薬剤を結合するT細胞の検出又は薬剤を認識する抗体の検出に基づいてよい。
上記の方法に典型的に存在するAPCはT細胞と同じ個体から又は別の宿主からであってよい。APCは天然のAPC又は人工のAPCであってよい。APCは上記ペプチドを細胞に提示することができる細胞である。それは典型的にはB細胞、樹状細胞又はマクロファージである。それは典型的にはT細胞と同じサンプルから分離され、典型的にはT細胞と同時精製される。即ち、APCはMCs又はPBMCs上に存在してよい。APCは典型的には新たに単離されたエクスビボ細胞又は培養細胞である。それは細胞系の形態、例えば短期間細胞系又は不死の細胞系であってよい。APCはその表面上に空のMHCクラスII分子を発現してよい。
きるか、又は各々が一つ又は複数の薬剤を含む別々のアッセイ中に分配して置くことができる。
以下に論じられる、発明により提供されるポリヌクレオチドの特性の何れかを有する。典型的には、0.001から1000μg、例えば0.01から100μg又は0.1から10μgのポリヌクレオチドを投与する。
治療
本明細書にて記載された免疫上優勢なエピトープ及び他のエピトープの同定は、このエピトープを認識するT細胞を標的とする治療用生成物が作成されるのを可能にさせる(そのようなT細胞はグリアジンに対する免疫応答に参加するものである)。これらの発見は、抗体又はエピトープに対するT細胞応答を抑圧(寛容)することによりセリアック病の予防又は治療を可能にもする。
はセリアック病を予防又は治療するのに使用することもできる。アンタゴニストはT細胞応答の低下を導く。一つの態様において、アンタゴニストはT細胞のTCRに結合する(一般に、HLA−DQ2又は−DQ8との複合体の形態にて)が、正常な機能活性化を導く代わりに、T細胞内シグナリングカスケードを通して異常なシグナルを通過させることを導き、T細胞が低下した機能活性を持つように導く(例えば、エピトープの認識に応答して、典型的には本明細書にて言及された適当なアンタゴニストの何れかにより測定される)。
組成物がセリアック病を引き起こすか否かを試験する
上で論じられたとおり、発明は、組成物がセリアック病を引き起こすことができるか否かを決定する方法を提供し、トランスグルタミナーゼにより発明の薬剤又はエピトープを含む配列に修飾され得る蛋白質配列の存在を検出することを含む(そのようなトランスグルタミナーゼ活性はヒトの腸のトランスグルタミナーゼ活性であってよい)。典型的には、これは、特定の様式にて配列に結合するモイエティを組成物に接触させる結合アッセイ
を用いて実施され、そして配列/モイエティ複合体の形成を検出して薬剤の存在を確認するのに使用する。そのようなモイエティは、本明細書にて言及された何れかの適当な物質(又は物質の種類)であってよく、そして典型的には特異的抗体である。結合アッセイのあらゆる適当なフォーマットを使用することができる(例えば、本明細書にて言及されたもの)。
結合アッセイ
本明細書にて言及された2つの物質間の結合の決定は、結合に際して変化する一方又は両方の物質の特性、例えば分光学上の変化を測定することにより実施してよい。
変異体グリアジン蛋白質
発明は、本発明の配列又はそのような配列を提供するためにトランスグルタミナーゼにより修飾され得る配列が変異することによりもはやエピトープを認識するT細胞応答を導かないか又はエピトープを認識するT細胞応答により認識されないような、グリアジン蛋白質を提供する。このコンテクストにおいて、用語認識はT細胞の正常な(非拮抗)抗原−特異的機能活性が生じるような様式におけるエピトープのTCR結合を意味する。
はエピトープは、よって、発明の診断の側面に関して、本明細書にて言及されたアッセイの何れかにおいて認識を示さないか又は低下した認識を示すことになる。
キット
発明は、一つ又はそれより多い薬剤、及び任意にT細胞による薬剤の検出のための手段を含む、上記方法を実施するためのキットも提供する。典型的には、異なる薬剤を、同時、別々又は連続する使用のために提供する。提供、認識を検出する手段は、上で論じられた技術に基づいて検出を可能にするか又は補助する。
質に対して特異的であってよいが、第1モイエティとは上記物質に対して異なる部位において結合する。
ポリヌクレオチド、細胞、トランスジェニック哺乳類及び抗体
発明は、薬剤又は変異グリアジン蛋白質を提供するための発現可能なポリヌクレオチドも提供する。典型的には、当該ポリヌクレオチドは、DNA又はRNAで、単鎖又は二重鎖である。当該ポリヌクレオチドは、好ましくは、少なくとも50塩基又は塩基対、例えば50から100、100から500、500から1000又は1000から2000又はそれより多い塩基又は塩基対を含むことになる。当該ポリヌクレオチドは、よって、配列番号:1又は2又は本明細書にて言及された他の薬剤の何れかの配列をコードする配列を含む。このコーディング配列の5’及び3’に、発明のポリヌクレオチドは対応するグリアジン遺伝子内のこれら配列に対して5’及び3’の配列又はコドンと異なる配列又はコドンを有する。
変異グリアジン蛋白質を発現するか又はアンタゴニストとして作用し得る配列を含む蛋白質を発現する植物細胞又は植物
発明の細胞は、植物細胞、例えばイネ科の単子葉植物種の細胞であってよい。当該種は、その野生型形態がグリアジン、本明細書にて言及されたグリアジン蛋白質の何れかを発現する種であってよい(配列番号:3に対して何れかの程度の相同性を有するグリアジンを含む)。そのようなグリアジンはヒトにおいてセリアック病を引き起こすかもしれない。上記細胞は、コムギ、トウモロコシ、エンバク、ライムギ、イネ、オオムギ、ライコムギ、モロコシ、又はサトウキビの細胞であってよい。典型的には、上記細胞は、コムギ(Triticum)属、例えばパンコムギ(aestivum)、スペルトコムギ(spelta)、ポーランドコムギ(polonicum)又はヒトツブコムギ(monococcum)の細胞である。
植物細胞由来の蛋白質を含む食物を摂取した個体において低下した兆候(例えば兆候なし)のセリアック病を引き起こす。
前の世代に属する発明のトランスジェニック植物からトランスジェニック種子を得て、次にトランスジェニック種子を成長させることにより新世代の発明のトランスジェニック子孫植物を得て;そして/又は
前の世代に属する発明のトランスジェニック植物をクローンとして増殖させることにより新世代に属する発明のトランスジェニック子孫植物を提供し;そして/又は
前の世代に属する発明の第1世代のトランスジェニック植物を別の匹敵する植物と交配することにより、新世代に属する発明のトランスジェニック子孫植物を提供し;そして/任意に
そうして得られた子孫から一つ又はそれより多いさらなる世代のトランスジェニック子孫植物を得ること
により生産してよい。
はグリフォセートオキシドレダクターゼ(WO92/000377)遺伝子)をコードするトランス遺伝子から;又は、フォサメチン;ジハロベンゾニトリル;グルフォシネートに対する寛容をコードするトランス遺伝子から、例えばホスフィノチリシナセチルトランスフェラーゼ(PAT)又はグルタミンシンターゼ遺伝子(EP−A−0242,236参照)を用いて;アスラム、例えば、ジヒドロプテロエートシンターゼ遺伝子(EP−A−0 369,367参照);又はスルフォニルウレア、例えば、ALS遺伝子を用いて;ジフェニルエーテル、例えば、アシフルオルフェン又はオキサジアゾン、例えば、プロトポルフィロジェンオキシダーゼ遺伝子;環状イミド、例えば、クロロフサリム;フェニルピラゾール、例えば、TNP、又はフェノピレート又はそのカルバメート類似体;さらなるトランス遺伝子を選択してよい。
変異グリアジン蛋白質又はアンタゴニストとして作用することができる配列を含む蛋白質を含む生成物
発明は、変異グリアジン蛋白質又はアンタゴニストとして作用することができる配列を含む蛋白質を含む生成物を提供する。これは、典型的には、そのような蛋白質を発現する本明細書にて言及された植物に由来するか又は植物の部分を含む。そのような生成物は、発明の植物を直接収穫するか又は間接に収穫し、そしてさらに加工することにより得ることが可能であってよい。直接に得ることが可能な生成物は穀物を含む。あるいは、そのような生成物は、回収してさらに加工することにより間接に得ることが可能であってよい。さらに加工することにより得ることが可能な生成物の例は、小麦粉又は蒸留されたアルコール飲料;直接得ることができるか又はさらに加工した材料、例えば小麦粉から作られた焼いた製品(例えば、パン)から作られる食物製品である。典型的には、そのような食物製品はヒト個体により摂取可能であって消化可能である(即ち、非毒性であって栄養価値がある)。
我々は、完全に特性決定されたグリアジン、「A−グリアジン」の全配列にわたる51セットの合成15マーペプチドを使用することによりセリアック病のエピトープマッピングを実施した(表1参照)。A−グリアジンペプチドはtTGにより個々に処理されることにより、インビボで生成したものを模倣したかもしれない生成物を生成した3。我々は
、実験上の感染及び自己免疫疾患において記載されたとおり、エピトープの「拡散」又は「消費」が起きたかもしれない可能性を避けるために、疾患の消滅の開始点においてセリアック病患者を研究しようとも努めた。
3日及び10日のパンチャレンジによる臨床上及びA−グリアジン特異的なT細胞応答
パイロット研究において、セリアック病の2人の患者が緩解したが、血清の抗−筋内膜抗体(EMA)の不在により定義され、グルテンフリーダイエットは彼らの通常のグルテンフリーダイエットに加えて、標準のグルテン含有白パン4スライスを毎日給仕された。被験者1は3日後に腹痛、口の潰瘍及びゆるい下痢のためにパンを停止したが、被験者2は1週間目に軽い吐き気があっただけで10日間継続した。EMAは被験者2においてパンチャレンジの1週間後に陽性になったことから、使用したパンがセリアック病の再発を導いたことを示す。しかし、被験者1においては、EMAはパンチャレンジから2カ月まで陰性のままであった。両被験者において、パンチャレンジにより出現した兆候はグルテンフリーダイエットに戻って2日以内に解消した。
グルテンフリーダイエットの別の6人のセリアック病被験者の内の5人において(表1参照)、3日間のパンチャレンジはtTG処理されたペプチドをプール3に同定し、特に、PBMCからIFNγを導く唯一のA−グリアジン成分としての56−70(12)及び60−75(13)に相当するペプチドであった(図2参照)。IFNγ ELISPOTと平行して流したIL−10 ELISPOTは、tTG処理されたペプチド12又は13に対してIL−10の応答を示さなかった。一人の被験者においては、パンチャレンジの4日前、4日間又は4日目まで、あらゆるA−グリアジンペプチド又はα−キモトリプシン消化されたグリアジンに対してIFNγ応答はなかった。パンチャレンジの2カ月後まで測定した場合に、これらのセリアック病被験者の誰にも基底ラインからEMA状態が変化しなかった。
(12)及び60−75(13)への誘導は、セリアック病特異的であった(7/8対0/4、p<0.01,カイ2乗分析による)。
最小のA−グリアジンT細胞エピトープのファインマッピング
A−グリアジン56−75の末端削除に相当するtTG処理したペプチドは、同じコアペプチド配列QPQLP(配列番号:9)が評価された5人のセリアック病被験者の全てにおいて抗原性に必須であったことを明らかにした(図3参照)。PBMC IFNγは、7マーのPQPQLPY(配列番号:4)で始まるこのコア配列にわたり、長さを伸ばしたtTG処理ペプチドに応答することから、tTG処理された17マーのQLQPFPQPQLPYPQPQS(配列番号:19)(A−グリアジン57−73)がIFNγ ELISPOTにおいて最大の活性を所有したことを示した(図4参照)。
tTGによるQ65の脱アミド化はA−グリアジン中の免疫上優勢なT細胞エピトープを生じる
HPLC分析は、A−グリアジンのtTG処理が、親ペプチドにおいてあとで隣接して溶出した単一の生成物を生じたことを証明した。アミノ酸配列決定は、A−グリアジン56−75中に含まれる6つのグルタミン(Q)残基の中から選択的にtTGにより脱アミド化されたことを示した(図5参照)。グルタミン酸(E)置換されたQ65のコアA−グリアジン62−68からの連続伸長物(serial expansions)に相当するペプチドの生物活性は、tTG処理後のQ65を有する同じペプチドと均等であった(図4a参照)。Q57及びQ72のEによる両方又は単独の置換にE65が伴うと、調査された3人のセリアック病被験者において、上記17マーの抗原性を増強しなかった(図6参照)。グリアジンペプチドにおいてグルタミン残基にプロリンが続くと、インビトロにおいてtTGにより脱アミド化されないため、Q57及びQ72を調査した(W.Vader et al,Proceedings 8th International
Symposium Coeliac Disease)。よって、免疫上優勢なT細胞エピトープをQLQPFPQPELPYPQPQS(配列番号:2)と定義した。
免疫上優勢なT細胞エピトープ応答はDQ−2制限され且つCD4依存性である
HLA−DQα1*0501,β1*0201に関して同型接合の(homozygous)2人のセリアック病被験者において、抗−DQモノクローナル抗体がtTG処理されたA−グリアジン56−75に対するELISPOT IFNγ応答をブロックしたが、抗−DP及び−DR抗体はブロックしなかった(図7参照)。2人のセリアック病被験者からのPBMCの抗−CD4及び−CD8磁気ビーズ除去(depletion)は、tTG処理されたA−グリアジン56−75に対するIFNγ応答がCD4 T細胞媒介性であることを示した。
考察
この研究において、我々は、配列:QLQPFPQPELPYPQPQS(配列番号:2)(残基57−73)のtTG処理されたA−グリアジン17マーに応答性のセリアック病被験者の末梢血においてCD4 T細胞の一過性集団を誘導するために、普通の白パンを用いたむしろ単純なダイエット抗原チャレンジを記載した。A−グリアジン(Q→E65)に対する免疫応答はセリアック病関連対立遺伝子DQα1*0501,β1*0201に限定される。インビトロにおける組織のトランスグルタミナーゼ作用はQ65を選択的に脱アミド化する。置換Q→E65を有する合成A−グリアジンペプチドに対する誘導された末梢血IFNgの応答は、tTG処理されたQ65 A−グリアジンペプチドに均等であり;両者は未修飾のQ65 A−グリアジンペプチドよりもIFNg ELISPOTにおいて10倍にまで、より多くのT細胞を刺激する。
A−グリアジンペプチドに対する免疫応答の時間の経過順の階層(temporal hierarchy)が存在することを示し;tTGにより修飾されたA−グリアジン57−73はP中のもっとも強いIFNg応答を誘導するのみならず、第1のIFNg応答も出現する。
実施例2
免疫上優勢なエピトープ内の置換に対するT細胞認識の効果
57−73A−グリアジンエピトープにおける65位のグルタミンの置換の効果を、合成ペプチドを用いてIFNγ ELISPOTアッセイにおいて置換されたエピトープに対する末梢血応答を測定することにより決定した(50μg/mlにおいて)。応答は3人のセリアック病患者においてグルテンチャレンジを始めて6日後に測定した(3日間4スライスのパンを毎日)。結果を表3及び図8に示す。グルタミン酸から、ヒスチジン、チロシン、トリプトファン、リジン、プロリン又はアルギニンへの置換において観察され得るように、免疫上優勢なエピトープに対する応答の大きさの10%より低い大きさの応答を刺激した。即ち、この位置におけるA−グリアジンの変異は、免疫反応性を低下させるか又は不在にする変異グリアジンを生成するのに使用することができた。
実施例3
他の天然に生じるグリアジンからの均等なペプチドの免疫反応性の試験
他の天然に生じるコムギのグリアジン由来の均等なペプチドの免疫反応性を、天然に生じる配列に相当する合成ペプチドをトランスグルタミナーゼにより処理して使用することにより、評価した。これらのペプチドは、ELISPOTにおいて、実施例2に記載されたのと同じ被験者からのPBMCを用いて同じ様式にて試験した。少なくとも5つのペプチドがA−グリアジン57−73 E65ペプチドに匹敵する免疫反応性を示す(トランスグルタミナーゼ処理後)ことから、コムギ中の他のグリアジン蛋白質も同ようにこのセリアック病特異的免疫応答を誘導することを示唆する(表4及び図9)。
方法
被験者:研究において使用した患者は、英国のオックスフォードにおいてセリアック病クリニックにかかっている。セリアック病は、特有の小腸の組織構造、及び兆候の標準化及びグルテンフリーダイエットの小腸組織構造に基づいて診断された。
組織型判定:組織型判定は、EDTA抗凝血末梢血から抽出されたDNAを用いて実施した。HLA−DQA及びDQB遺伝子型判定は、PCRにより配列特異的プライマーミックスを用いて実施した6−8。
抗筋内膜抗体アッセイ:EMAは、サルの食道(oesophagus)を用いて1:5に希釈された患者の血清を用い、続いてFITCコンジュゲートヤギ抗−ヒトIgAを用いた間接免疫蛍光により検出した。IgAをEMAの前に定量したが、どの被験者もIgA欠損ではなかった。
抗原チャレンジ:グルテンフリーダイエット後のセリアック病被験者に、4スライスのグルテン含有パンを毎日3又は10日間食べ尽くさせた(セインズベリーズの標準の「白サンドイッチパン」)。パンチャレンジを始める前の週及び2カ月後まで、EMAを査定し
た。グルテンフリーダイエットを4週間経験した健康な被験者は、3日間グルテン含有パン4スライスを含む彼らの通常のダイエットを食べつくし、そして次にさらに4日間グルテンフリーダイエットに戻った。
IFNγ及びIL−10 ELISPOT:Ficoll−Hypaque密度遠心分離により50−100mlの静脈血からPBMCを調製した。3回洗浄後に、PBMCを再度、10%熱不活性化ヒトAB血清を含む完全RPMIに懸濁した。IFNγ及びIL−10の単一細胞の分泌に関するELISPOTアッセイを、市販のキット(Mabtech;ストックホルム、スエーデン)を用いて96−ウエルプレート(MAIP−S−45;Millipore,ベッドフォード、MA)により、製造者の指示書(ほかで記載されたとおり9)に従い、2−5x105(IFNγ)又は二重のウエルにて査定し、そしてミコバクテリウムツベルクロシスの精製された蛋白質誘導体(PPD RT49)(Serum Institute;コペンハーゲン、デンマーク)(20μg/ml)を全てのアッセイにおいて陽性対照として含ませた。
ペプチド:合成ペプチドはResearch Genetics(ハンツビル、アラバマ)から購入し、質量分光分析及びHPLCにより確認されたペプチドの真正度は70%>精製度であった。グリアジン(Sigma;G−3375)(100mg/ml)のα−キモトリプシン(Sigma;C−3142)200:1(w/w)による消化は、0.1M NH4HCO3中で2M尿素と共に室温において実施し、98℃において10分間加熱することにより24時間後に中止した。遠心分離(13,000g,10分間)後に、グリアジン消化上清をフィルター滅菌した(0.2mm)。グルテンの消化をSDS−PAGEにより確認して、蛋白質濃度を査定した。α−キモトリプシン−消化されたグリアジン(640μg/ml)及び合成グリアジンペプチド(15マー:160μg/ml,他のペプチド:0.1mM)を個別にtTG(Sigma;T−5398)(50μg/ml)によりPBS中にてCaCl2を1mM加えて、2時間37℃において処理した。ペプチド及びペプチドプールを滅菌96−ウエルプレートに分配して、使用まで−20℃に凍結保存した。
ペプチドのアミノ酸配列決定:逆相HPLCを使用して、A−グリアジン56−75のtTG処理によるペプチドを精製した。単一生成物を同定して、アミノ酸配列決定(自動化配列決定機モデル494A,Applied Biosystems,フォスターシティー、カリフォルニア)に供した。未修飾のG56−75の配列はLQLQPFPQPQLPYPQPQSFP(配列番号:5)と確認され、そしてtTG処理されたG56−75はLQLQPFPQPELPYPQPQSFP(配列番号:11)と確認された。グルタミン残基の脱アミド化は、アミノ酸配列決定のサイクル2、4、8、10、15及び17において回収されたグルタミン及びグルタミン酸の合わせた量のパーセントとして表された、回収されたグルタミン酸の量(pmol)として定義された。tTGに帰する脱アミド化は、(tTG処理されたペプチド中のグルタミンの脱アミド化の%−未処理のペプチド中の脱アミド化の%)/(100−未処理のペプチド中の脱アミド化の%)として定義された。
CD4/CD8及びHLAクラスII制限:抗−CD4又は抗−CD8コートされた磁気ビーズ(Dynal,オスロ、ノルウエー)をRPMIにより4回洗浄し、次に10%熱不活性化ヒトAB血清を含む完全RPMI中のPBMCと共に、30分間氷の上でインキュベートした。ビーズを磁石により取り出して、残る細胞を計数した。tTG処理されたA−グリアジン56−75に対する免疫応答のインビボのHLA−クラスII制限は、PBMC(5x106細胞/ml)を抗−HLA−DR(L243),−DR(L2),及び−DP(B7.21)モノクローナル抗体(10μg/ml)と、室温において、ペプチドの添加前に1時間インキュベートすることにより、確立した。
実施例4
グリアジン−特異的末梢血リンパ球による粘膜インテグリンの発現
内皮とリンパ球のアドレシンの間の相互作用は、器官特異的なリンパ球のホーミングを促進させる。多数のアドレシンが公知である。ヘテロダイマーα4β7は粘膜固有層消化
管及び他の粘膜リンパ球に特異的であり、そしてαEβ7は消化管及び皮膚において内皮リンパ球内に特異的である。末梢血CD4 T細胞の約30%がα4β7を発現し、そして粘膜部位へ移動中であると推定され、末梢血CD4 T細胞の5%がαEβ7を発現する。αE又はβ7特異的な抗体をコートされた免疫磁気ビーズは、それぞれ、αEβ7又はαEβ7及びα4β7を発現する細胞のPBMCを除去する。ELISpotアッセイとの組み合わせにより、免疫磁気ビーズの除去は、これらの細胞を粘膜表面へのホーミングとして同定するかもしれないグリアジン特異的T細胞のアドレシン発現の決定を可能にする。おもしろいことに、インビボのグルテンチャレンジは小腸の粘膜固有層へのCD4
T細胞の迅速な流入に関連しており(内皮部位内ではなく)、90%を超えるリンパ球がα4β7を発現する。
実施例5
最適なT細胞エピトープの長さ
A−グリアジン中の優勢なT細胞エピトープのコアにわたる7から17の長さのアミノ酸からのペプチドを試験する以前のデータは、3日間のグルテンチャレンジ開始から6日後にセリアック病のボランティアからの末梢血単核細胞(PBMC)を用いたインターフェロンガンマElispotにおいて17マーのA−グリアジン57−73 QE65(配列番号:2)が最大の応答を誘導したことを示した。
実施例6
A−グリアジン57−73 QE65とセリアック病における他のDQ2−制限されるT細胞エピトープの比較
セリアック病の腸の生検からのグルテン特異的T細胞クローン及び系列のT細胞エピトープに相当する未修飾及びトランスグルタミナーゼ処理ペプチドに相当するペプチドを用いて、用量応答研究を実施した。ペプチドに対する応答はA−グリアジン57−73 QE65に対する応答のパーセントとして表現した。全ての被験者はHLA−DQ2+であった(誰もDQ8+でなかった)。
実施例7
末梢血中でのグリアジン−及びA−グリアジン57−73 QE65の比較
セリアック病におけるグリアジンに対する全T細胞応答に対しての、優勢なエピトープA−グリアジン57−73 QE65の相対的な寄与は重大な問題である。ペプシン−トリプシン及びキモトリプシンにより消化されたグリアジンが、セリアック病におけるT細胞系列及びクローンの分化のための抗原として伝統的に使用されてきた。しかしながら、これらのプロテアーゼは特定のペプチドエピトープを分断するかもしれないと言える。事実、組換えα9−グリアジンのキモトリプシン消化はペプチドQLQPFPQPELPY(配列番号:13)を生じるが、最適エピトープ配列QLQPFPQPELPYPQPQS(配列番号:2)の末端削除体である(上を参照)。トランスグルタミナーゼ処理は、実質上、グリアジン特異的T細胞クローン及び系列の増殖アッセイにおいて、キモトリプシン消化されたグリアジンの能力を増加させる。よって、トランスグルタミナーゼ処理されたキモトリプシンで消化されたグリアジン(tTGグリアジン)は理想的な抗原ではないかもしれないが、この混合物に対する応答はグリアジンに特異的な末梢血リンパ球の「全」数に近似するかもしれない。ELISpotアッセイにおけるA−グリアジン57−73 QE65及びtTGグリアジンに対する応答の比較は、セリアック病におけるグリアジンに対する全免疫応答へのこの優勢なエピトープの寄与の指標を提供し、またエピトープ拡散の基準でもある。
実施例8
セリアック病において生物活性なグリアジンペプチドの定義:A−グリアジン57−73の多型
A−グリアジンの全配列にわたるオーバーラップする15マーのペプチドを査定することにより、セリアック病の免疫上優勢な配列を同定した。A−グリアジンは最初に全配列を決定されたアルファグリアジン蛋白質及び遺伝子であったが、コムギにおいて約30−50の関連するアルファグリアジン蛋白質のひとつである。蛋白質データベースSwiss−Prot及びTREMBLを検索することにより、25の別々のアルファ−グリアジン遺伝子が同定され、さらに8つのアルファグリアジンを記述した。これら25のアルファグリアジンに含まれたのは、A−グリアジン57−73に相当する16の異なる多型である(表7参照)。
「野生型」ペプチドの生物活性はトランスグルタミナーゼ処理により実質増加した(>5倍)。野生型ペプチドのトランスグルタミナーゼ処理は10位においてグルタミン酸により置換された同じペプチドの生物活性と同様な生物活性をもたらした。5つのグルタミン酸置換ペプチド(B,C,K,L,M)の生物活性はA−グリアジン57−73 QE65の>70%であったが、A−グリアジン57−73 QE65よりも顕著に高い生物活性のものはなかった。2.5及び250mcg/mlの濃度においてグルタミン酸置換されたペプチドに対するPBMC応答は25mcg/mlにおけるのと同等であった。6つのグルタミン酸置換グリアジンペプチド(H,I,J,N,O,P)は、A−グリアジン57−73 QE65の生物活性の<15%であった。他のペプチドは生物活性において中間であった。
実施例9
コアエピトープ配列の定義:
N−末端又はC−末端からのA−グリアジン56−75の末端削除に相当するペプチドの比較は、T細胞エピトープのコア配列がPELPY(A−グリアジン64−68)であることを示した。非アゴニスト及びアンタゴニストを定義する試みは、その生物活性に実質貢献する残基において置換されたA−グリアジンのバリアントに焦点を注ぐことになる。
実施例10
A−グリアジン57−73 QE65の置換されたバリアントのアゴニスト活性
A−グリアジン60−70 QE65は、A−グリアジンにおいて優勢なT細胞エピトープのコア配列である。このエピトープのアンタゴニスト及び非アゴニストペプチドバリアントは、このコア配列の修飾により生成されるらしい。最初に、対照的な特性を有する、10の異なるアミノ酸を用いて60−70位において置換されたA−グリアジン57−73 QE65を、3日間のグルテンチャレンジ開始から6日後にセリアック病の被験者からのPBMCを用いたIFNガンマELISPOTにおいて査定する。A−グリアジン57−73 QE65のバリアントの第2群(システイン以外、全ての他の天然に生じるアミノ酸により置換されている)も第2ラウンドにおいて査定した。両群のペプチド(全て50mcg/mlにおいて、二重)を8人の被験者からのPBMCを用いて査定して、未修飾のペプチドと比較した(アッセイあたり20反復)。様々な研究が、このアッセイにおけるA−グリアジン57−73 QE65の最適な濃度が10から100mcg/mlの間であることを示す。
ドを同定した。バリアントの生物活性(50mcg/ml):P65,K64,K65及びY65(生物活性7−8%)はブランク(7%)と同等であった。全部で、A−グリアジン57−73 QE65の57の変異バリアントがA−グリアジン57−73 QE65の30%又はそれ未満の生物活性であった。
実施例11
置換されたバリアントのアンタゴニスト活性
HLA−DQ2+被験者におけるA−グリアジン57−73 QE65に対するPBL
T細胞応答の均質性は、PBL T細胞応答がポリクローナル又はオリゴクローナルであるらしいとしても、PBMCにおいてか又はエクスビボにおいて拮抗可能な変更されたペプチドリガンド(APL)が存在するかもしれないことを示唆する。APLアンタゴニストは一般に弱いアゴニストである。30%又はそれ未満のアゴニスト活性のA−グリアジン57−73 QE65の57の単一アミノ酸置換バリアントが同定されて、APLアンタゴニストとしての適切な候補である。さらに、A−グリアジン57−73 QE65の特定の弱い生物活性の天然に生じる多型も同定されて(以下参照)、「天然に生じる」APLアンタゴニストかもしれない。また、MHCへの結合が抗原特異的T細胞免疫とも拮抗するかもしれないことが示唆された。よって、グルテンチャレンジ後にセリアックPBMCにおいてIFNガンマ応答を誘導しないがHLA−DQ2に結合することが知られている非グリアジンペプチドは、A−グリアジン57−73 QE65により誘導されるT細胞応答を低下させることができるかもしれない。HLA−DQ2へ貪欲に結合する2つのペプチドはHLAクラス1α46−60(HLA 1a)(PRAPWIEQEGPEYW(配列番号:15))及びチロイドペルオキシダーゼ(tp)632−645Y(IDVWLGGLLAENFLPY(配列番号:16))である。
MCのインターフェロンガンマ応答は、特定の単一アミノ酸A−グリアジン57−73 QE65バリアント、A−グリアジン57−73 QE65の多型、及び5倍過剰にHLA−DQ2を結合することが公知の非関連ペプチドの同時投与により低下する。これらの発見は、A−グリアジン57−73 QE65の変更されたペプチドリガンドアンタゴニストが存在することを示唆する。仮想上のAPLのみならず、HLA−DQ2を結合する特定のペプチドも、A−グリアジン57−73 QE65に対するPBL T細胞応答を有効に低下させる。
実施例12
PBMC及びA−グリアジン57−73 QE65及びP04724 84−100 QE92をセリアック病の診断法として使用したインターフェロンガンマELISpotの開発:新たに診断されたセリアック病における免疫応答の定義
インターフェロン番号ELISpotにおいて測定されたPBMC中の優勢なA−グリアジンT細胞エピトープに対する応答性の誘導を、長期間の厳格なグルテンフリーダイエット(GFD)を受けたほとんど全てのDQ2+セリアック病被験者においてはグルテンチャレンジに続いて行ったが、厳格なGFDを受けて4週間後の健康なDQ2+被験者においては続いて行わなかった。A−グリアジン57−73 QE65応答はグルテンチャレンジ前のセリアック病被験者のPBMCにおいて測定不可能であり、そしてパイロットデータはこれらの応答が未処理の被験者のPBMCにおいて測定できなかったことを示唆した。これらのデータは、セリアック病において、A−グリアジン57−73 QE65に対する免疫応答性が抗原排除(GFD)後に復元することを示唆する。ELISpotアッセイ及びPBMCを用いて診断試験が開発されるとしたら、グルテンチャレンジが
血液中のA−グリアジン57−73 QE65及び他の免疫反応性グリアジンペプチドに対する応答を誘導できる前に必要とされるGFDの期間を定義することが望まれる。
QP65(P65)(非生物活性バリアント、上記参照)(全て25mcg/ml)を査定した。
実施例13
コムギグリアジンT細胞エピトープの包括的マッピング
抗原チャレンジは末梢血中で抗原特異的T細胞を誘導する。セリアック病においては、グルテンがこの免疫媒介性疾患を維持する抗原である。グルテンフリーダイエットで処置されたセリアック病のグルテンチャレンジは末梢血中のグルテン特異的T細胞の出現を導き、グルテンT細胞エピトープの分子特異性の決定を可能にさせる。上記のとおり、我々はモデルグルテン蛋白質中の単一の優勢なエピトープ、A−グリアジン(Q65において脱アミド化された57−73)を同定した。この実施例においては、セリアック病患者のグルテンチャレンジを用いて、GenBank中の111エントリーに由来する各公知のコムギグリアジン蛋白質中の全ての有力な12のアミノ酸配列を試験した。全部で、652の20マーペプチドをHLA−DQ2及びHLA−DQ8関連のセリアック病において試験した。セリアック病において90%を超えて存在する古典的なHLA−DQ2複合体(HLA−DQA1*05,HLA−DQB1*02)のセリアック病被験者9人のうちの7人は、末梢血中に誘導可能なA−グリアジン57−73 QE65−及びグリアジン−特異的T細胞応答を有した。A−グリアジン57−73は、HLA−DQ2関連セリアック病において、唯一の重要なα−グルテンT細胞エピトープであり、並びにもっとも有力なグリアジンT細胞エピトープであった。さらに、インターフェロン−γ ELISp
otアッセイにおいてA−グリアジン57−73ほど有効性のある10%から70%の構造上関連したペプチドの5ファミリーほど存在した。これらの新規なT細胞エピトープは、γ−及びω−グリアジンに由来しており、そしてA−グリアジン57−73のコア配列(コア配列:FPQPQLPYP(配列番号:18))、例えばFPQPQQPFP(配列番号:19)及びPQQPQQPFP(配列番号:20)と構造上極めて類似しているが同一ではない共通配列を含んだ。A−グリアジン57−73の相同体はライムギ又はオオムギにおいて見いだされなかったが、他の2つの穀類はセリアック病において毒性であり、γ−及びω−グリアジン中の新たに定義されたT細胞エピトープはライムギ及びオオムギの保存蛋白質において完全に適合した(それぞれ、セカリン(secalins)及びホルデイン(hordeins))。
ジン遺伝子はコムギでは染色体1APL上に位置しており、ライムギ及びオオムギのセカリン及びホルデインに相同である。
A−グリアジン57−73のT細胞エピトープとしての相同体
A−グリアジン57−73(PQLPY<配列番号:12>)のコア配列をコードする穀物遺伝子に関するSwissProt及びTrembl遺伝子データベースの最初の検索は、α/β−グリアジンを明らかにしただけであった。しかしながら、A−グリアジン57−73 QE65エピトープの我々の初期のマッピング研究は、コア領域(PQLP)中の許容可能な点の置換が限定された数であることを明らかにした(Q65はエピトープ中で実際に脱アミド化されている)。よって、我々は、配列XXXXXXXPQ[ILMP][PST]XXXXXX(配列番号:23)を有するペプチドをコードするSwissProt及びTremblデータベースの中の遺伝子に我々の検索を拡大した。相同体は、γ−グリアジン、グルテニン、ホルデイン及びセカリンの間に同定された(表12参照)。さらなる相同体は、GenBankにおいて3つのω−グリアジンエントリーの可視検索によりω−グリアジン中に同定された。
方法
全ての可能性のあるコムギグリアジンT−細胞エピトープにわたるペプチドのセットのデザイン
公知のパンコムギ(Triticum aestivum)のグリアジン遺伝子又は遺伝子断片によりコードされた全ての可能なT細胞エピトープを同定するため(GenBank中の61α/β−,47γ−,及び3ω−グリアジンエントリー)、遺伝子由来の蛋白質配列を、CustalWソフトウエア(MegAlign)を用いてアラインメント
を行い、そして分類することにより系統発生グループ化した(表22参照)。多くのエントリーは、より長い配列の末端削除を表し、そして多くの遺伝子セグメントは、ポリグルタミン繰り返しの長さ又は稀な置換を除いて同一であった。よって、公知のコムギ遺伝子によりコードされる全ての有力な12アミノ酸配列を有理化して(rationalize)652の20マーペプチドのセットに含ませることができた。(シグナルペプチド配列は含まれなかった)。ペプチド配列を表23に掲載する。
包括的エピトープマッピング
4週間グルテンフリーダイエットを受けた健康な対照(HLA−DQ2+ n=10,及びHLA−DQ8+ n=1)、及び長期間のグルテンフリーダイエットを受けたセリアック病の被験者(6人のHLA−DQ2,4人の複合同型接合HLA−DQ2/8、及び3人のHLA−DQ8/X)(表13参照)を、グルテンチャレンジの前及び後の6及び7日目に調査した(標準の白パン50gスライス4切れ−セインズベリーズサンドイッチパン、毎日)。末梢血(7日間にわたり全部で300g)を採血して、末梢血単核細胞(PBMC)をLymphoprep密度勾配により分離した。PBMCを6又は8の20マーペプチド、又はtTGにより脱アミド化されたか又はされていない単一のペプチドのプールと、一晩、インターフェロンガンマ(IFNγ)ELISpotアッセイにおいてインキュベートした。
血清を含むRPMI中に含むように、実施した。脱アミド化されたペプチドプールを一つの96−ウエルELISpotプレート中で査定し、そして第2プレート上で脱アミド化なしのペプチドプール(同一のレイアウト)を0日目及び6日目に査定した。脱アミド化されたペプチドを含むプレート中の全てのウエルがtTGを含んだ(64μg/ml)。各ELISpotプレート中に、ペプチドプールを含む83のウエルが存在し(各ウエル中唯一のプール)、そして「対照」ペプチドのウエルのシリーズ(ペプチドは全て>90%の純度、MS及びHPLCにより特性決定された、Research Genetics):P04722 77−93(QLQPFPQPQLPYPQPQP(配列番号:26)、P04722 77−93 QE85(二重)(QLQPFPQPELPYPQPQP(配列番号:27)、P02863 77−93(QLQPFPQPQLPYSQPQP(配列番号:28)、P02863 77−93 QE85(QLQPFPQPELPYSQPQP(配列番号:29)、及びキモトリプシン消化されたグリアジン(500μg/ml)、ペプシン消化されたグリアジン(500μg/ml)、キモトリプシン(20μg/ml)単独、ペプシン(10μg/ml)単独、及びブランク(PBS+/−tTG)(二重)。
結果
健康なHLA−DQ2被験者
1カ月グルテンフリーダイエットを受けた健康なHLA−DQ2+被験者の誰も、グルテンチャレンジの前又は後にA−グリアジン57−73の相同体に対してIFNγELISpot応答を有さなかった。しかしながら、10人の健康な被験者のうち9人において、グルテンチャレンジが、グリアジンのペプシン消化及びキモトリプシン消化の両方に対するIFNγ応答の顕著な増加を伴い、0日目の0−4sfcの中央値/百万から16−29sfcの中央値/百万であった(表14参照)。健康な被験者のグリアジン応答は脱アミド化により影響されなかった(表15参照)。健康な被験者のうち、特定のグリアジンペプチドプールに対するIFNγ応答の、グルテンチャレンジとの一致した誘導はなかった(図30、及び表16参照)。IFNγELISpot応答は場合によりみられたが、弱く、そして脱アミド化により影響されなかった。プールに対するもっとも強い応答の
多くも0日目には存在しなかった(表17、被験者H2,H8及びH9参照)。4人の健康な被験者はプール50に対して明確な応答を示し、6日目にもっとも強い応答をもった2人は0日目にも応答を有した。両被験者において、プール50に対するチャレンジ後の応答はペプチド390(QQTYPQRPQQPFPQTQQPQQ(配列番号:30))によった。
HLA−DQ2セリアック病被験者
HLA−DQ2+セリアック病被験者におけるグルテンチャレンジの後、P04722
77−93 QE85に対する中央値のIFNγELISPpot応答は0から133sfc/百万の中央値から上がった(表4参照)。6人のセリアック病被験者のうちの一人(C06)はP04722 77−93 QE85(2sfc/百万)に応答せず、そしてグリアジンペプチドプールに弱く応答しただけであった(最大:プール50+tTG
27sfc/百万)。前の研究に一致して、野生型P04722の生物活性はtTGによる脱アミド化により6.5倍上昇した(表15参照)。グリアジン消化に対するインターフェロンガンマ応答はベースラインに存在したが、キモトリプシン−グリアジンに関しては20から92sfcの中央値/百万まで、そしてペプシン−グリアジンに関しては44から176sfcの中央値/百万まで、グルテンチャレンジにより実質上は増加した。グリアジンの脱アミド化は、キモトリプシン−グリアジンに関して3.2倍の中央値、そしてペプシン−グリアジンに関して1.9倍の中央値だけ生物活性を増加させた(表15参照)。(ペプシンによる消化に要求される酸性度はグリアジンの部分脱アミド化をもたらすらしい。)
健康な被験者とは対照的に、グルテンチャレンジは、α−,γ−、及びω−グリアジンを含む83の処理されたプールのうちの22に対してIFNγELISpot応答を誘導した(図31及び表17参照)。プールの生物活性は被験者間で一致していた(表18参照)。ペプチドプールにより誘導されたIFNγELISpot応答は脱アミド化によりほとんどいつも増加した(表17参照)。だが、脱アミド化によるプールの生物活性の増強は、A−グリアジン57−73の相同体を含むプールに関してさえ、P04722 77−73 QE85ほど顕著ではなかった。これは、Pepsetペプチドが合成又は調製の間に部分的に脱アミド化されていたことを示唆し、例えばPepsetペプチドはトリフルオロ酢酸(TFA)の塩としてTFA溶液からの凍結乾燥後にデリバリーされる。
て、異なるファミリーからのペプチドの生物活性は付加的らしい。例えば、tTG処理されたプール81の中央値生物活性はP04722 QE85の141%であったが、個々のペプチドの生物活性は:ペプチド631(A−グリアジン57−73の相同体)61%、636(626の相同体)51%、そして635 19%、629 16%、そして634 13%(全て396の相同体)の順位の序列であった。
HLA−DQ8関連セリアック病
7人のHLA−DQ8+セリアック病被験者をグルテンチャレンジの前と後に研究した。これらのHLA−DQ8+(HLA−DQA0*0301−3,HLA−DQB0*0302)被験者のうちの5人も、セリアック病関連HLA−DQ2複合体(DQA0*05,DQB0*02)の一方又は両方を有した。両方のセリアック病関連HLA−DQ複合体を有する3人の被験者のうちの2人は、質的及び量的にHLA−DQ2セリアック病被験者と同一であったグリアジンペプチドプール(及びP04722 77−93 QE85を含む個々のペプチド)に対して有効な応答性を有した(図33及び34、及び表18を参照)。脱アミド化されたペプチドプール74は両HLA−DQ2/8被験者において生物活性であったが、6人のHLA−DQ2/X被験者の一人においてのみであった。プール74のtTGによる前処理は生物活性を3.8倍から22倍増強し、そして3人の応答者におけるtTG処理されたプール74の生物活性は、P04722 77−93 E85の生物活性の78%及び350%の間に等しい。現在、何れのペプチドが被験者C02,C07及びC08においてプール74において生物活性であるかわかっていない。
ピトープ(QQYPSGQGSFQPSQQNPQ(配列番号:44))の多型を含む(下線を引かれたGlnは脱アミド化されて生物活性を運ぶ)(van der Wal et al 1998)。現在、何れのペプチドがプール33において被験者C11において生物活性であるか分かっていない。
実施例14
幾つかのELISpotアッセイを前記のとおりに実施して、以下の結果及び/又は結論を生じた:
PQLPYによる複数のα−グリアジン多型の拡大
A−グリアジン57−73QEの有効なアゴニスト(G01)は、QLQPFPQPELPYPQPQS(G01),PQL−Y−−−−−−−−−−−−−−P(G10),及びPQPQPFL−−−−−−−−−−−−−(G12)を含む。有効性が劣るのは、−−−−−−−−−−−−L−−−−−−−−P(G04),−−−−−−−−−−−−−R−−−−−−−−−−−P(G05),及び−−−−−−−−−−−−S−−−−−P(G06)を含む。有効性がさらに劣るのは、−−−−−−L−−−−−−−−S−−−−−P(G07),−−−−−S−−−−−−−−−−S−−−−−−−−−P(G08)−−−−−−−−−−−−−−−S−−S−−−−−P(G09),及びPQPQPFP−−−−−−−−−−−−−−−−−(G13)を含む。ダッシュは特定の位置にお
けるG01配列との同一性を示す。
グルテンチャレンジは新たに診断されたセリアック病においてたった2週間のグルテンフリーダイエット後にA−グリアジン57−73 QE65 T細胞を含む
追加の分析は、tTG脱アミド化されたグリアジン応答が新たに診断されたセリアック病において2週間後に変化することを示した。他の分析は、脱アミド化されたグリアジン特異的T細胞がCD4+α4β7 +HLA−DQ2制限されることを示した。
最適なエピトープ(クローン対グルテンチャレンジ)
「優勢な」エピトープがγIFN ELISpotによりグルテンチャレンジ後に定義される。QLQPFPQPELPYPQPQS(100%ELISpot応答)。腸のT細胞クローンにより定義されたエピトープ:QLQPFPQPELPY(27%),PQPELPYPQPELPY(52%),及びOOLPQPEQPQQSFPEQERPF(9%)。
個々のペプチド配列間の順位
順位はコムギ又はライムギに依存する。コムギに関して、優勢なペプチドは、ペプチド番号89、90及び91を含む(表23における番号を参照)。ライムギに関して、優勢なペプチドは、ペプチド番号368、369、370、371、及び372を含む(表23における番号を参照)。635及び636(表23における番号を参照)を含む幾つかのペプチドは、ライムギ及びコムギの両方において活性を示した。
インビボグルテンチャレンジはT細胞エピトープのヒエラルキーがセリアック病に関して定義されることを可能にする
エピトープのヒエラルキーはHLA−DQ2+セリアック病の間で一致しているが、HLA−DQ8+セリアック病に関しては異なる。ヒエラルキーはコムギ穀物が消費されることに依存する。脱アミド化はほとんど全てのグリアジンエピトープを生成する。HLA−DQ2,DQ8及びDR4が脱アミド化されたペプチドを提示する。HLA−DQ2/8−関連のセリアック病は優先的にDQ2−関連グリアジンエピトープを提示する。グリアジンエピトープは、エピトープに基づく治療剤の開発を正当であると理由付けするのに十分制限される。
PBMCによる個々のELISpot応答(ELISpotリーダーにより測定されたスポット形成細胞)
29人の被験者の652のペプチドからのデータを扱うため、又は特定の応答が真実の陽性のペプチド特異的T細胞応答であるかを決定するため、又はペプチドに対する応答が別の構造上関連するペプチドとの交差反応性によるかを決定するために、特定のペプチド応答の発現を「優勢な」ペプチド応答のパーセンテージとすることができる。或いは、当該発現はペプチド応答間の相関係数としての「遅延(retardness)」とし得るか、又はバイオインフォマティックスにより得る。
追加のエピトープ
代表的な結果は次の通りである:
ペプチドのP04722Eとの組み合わせ(全て20mcg/ml)(n=4)
単独 P04722E+
Pep626 60 135
P04722E 100 110
HLAa 0 85
(P04722Eのパーセントとして表された)
626+tT:PQQPQQPQQPFPQPQQPFPW
04722E:QLQPFPQPELPYPQPQL
ペプチド626のtTG脱アミド化(n=12)
tTGなし=100%
tTG=170%
特定の位置における置換
ペプチド626PQQP[Q1]QP[Q2]QPFPQP[Q3]QPFPVの置換(n=12)
Glu Arg
Q1 95 90
Q2 145 80
Q3 155 10
(野生型ペプチドのパーセントとして表された)
tTG処理された15マーに及ぶペプチド626/627(PQQPQQPQQPFPQPQQPFPWQP)(n=8)
P1−15 5
P2−16 4
P3−17 3
P4−18 38
P5−19 65
P6−20 95
P7−21 65
P8−22 90
(最大の15マー応答のパーセントとして表された)
複数エピトープ:
P04722E:QLQPFPQPQLPYPQPQL
626+tTG:PQQPQQPQQPFPQPQQPFPW
最小エピトープ:QPQQPFPQPQQPFPW
抗−CD4によりコードされたビーズ及び抗インテグリンβ7によるPBMCの免疫磁気除去はIFNγELISpot応答を除去させたが、抗−CD8によりコードされたビーズ又は抗アルファEインテグリンによるPBMCの免疫磁気除去はそうでなかった。即ち、IFNγを分泌するPBMCはCD4+及びα4β7+であり、消化管内の粘膜固有層へのホーミングに関連した。
セリアック病のT細胞エピトープ
他の研究者らは、特定の腸T細胞クローンエピトープを特性決定した。例えば、Vader et al.,Gastroenterology 2002,122:1729−37;Arentz−Hansen et al.,Gastroenterology 2002,123:803−809を参照。これらは、T細胞をクローン化するために使用されたインビトロ技術のためにその関係がいくらよく見ても不明であるエピトープの例である。
腸対末梢血クローン
腸:1)腸生検、2)グルテンのペプシン−トリプシン消化に対して生じさせたT細胞クローン、3)全てHLA−DQ2制限される、4)クローンはトランスグルタミナーゼにより脱アミド化されたグリアジンに応答する。
末梢血:グルテンに対して生じさせたT細胞クローンはHLA−DR,DQ及びDP制限される。結果:腸T細胞クローンはセリアック病関連エピトープをマップするのに限定的に使用することができる。
GDA_9コムギ307aa定義アルファ/ベータ−グリアジンMM1前駆体(プロラミ
ン)受け入れ番号P18573−−GenBank(その全体を引用により本明細書に編入する)
腸T細胞クローンエピトープ
腸T細胞クローンエピトープの定義は、例えば、Arentz−Hansen et al.,J Exp Med.2000,191:603−12に見いだすことができる。また、腸T細胞クローンに関するグルテンエピトープも開示されている。脱アミド化されたQLQPFPQPQLPYがエピトープであり、QLQPFPQPELPYの脱アミド化配列もある。HLA−DQ2制限がある。相同性検索は他の生物活性γアルファ−グリアジンがPQPQLPYを単独又は二重に含むことを示す。大多数のT細胞クローンはDQ2−αI:QLQPFPQPELPY DQ2−αII:PQPELPYPQPELPYの何れかに応答する。
優勢なグリアジンT細胞エピトープ
全てトランスグルタミナーゼにより脱アミド化される。
グルテンチャレンジ6日後の末梢血:A−グリアジン57−73:
QLQPFPQPELPYPQPQS
腸T細胞クローン:DQ2−αI:QLQPFPQPELPY DQ2−αII:PQPELPYPQPELPY
腸T細胞クローンエピトープマッピング
未処理のセリアック病を1、2又は8週間グルテンフリーダイエットさせ、次にグルテン暴露し(3日 パン200g/日)、次にグルテンフリーダイエットをさせた。
0日目:なし(0)、1週(1)、2週(2)、8週(1)
6日目:なし(0)、1週(4)、2週(28)、8週(48)
結果2:グルテンフリーダイエットの期間及びグルテンチャレンジの0日目及び6日目のIFNγELISpot応答:tTG−グリアジン57−73 QE65(IFNγ特
異的スポット/百万PPBMCとして表された結果)
0日目:なし(45)、1週(62)、2週(5)、8週(5)
6日目:なし(0)、1週(67)、2週(40)、8週(60)
結果3:グルテンフリーダイエットの期間及びグルテンチャレンジの0日目及び6日目のIFNγELISpot応答:A−グリアジン57−73 P65(IFNγ特異的スポット/百万PPBMCとして表された結果)
0日目:なし(1)、1週(2)、2週(1)、8週(1)
6日目:なし(0)、1週(0)、2週(0)、8週(0)
結果4:グルテンフリーダイエットの期間及びグルテンチャレンジの0日目及び6日目のIFNγELISpot応答:PPD(IFNγ特異的スポット/百万PPBMCとして表された結果)
0日目:なし(90)、1週(88)、2週(210)、8週(150)
6日目:なし(0)、1週(100)、2週(210)、8週(100)
結果5:グルテンフリーダイエットの期間及びグルテンチャレンジの0日目及び6日目のIFNγELISpot応答:tTG(IFNγ特異的スポット/百万PPBMCとして表された結果)
0日目:なし(5)、1週(4)、2週(3)、8週(2)
6日目:なし(0)、1週(4)、2週(1)、8週(2)
長期間のグルテンに対するHLA−DQ2セリアック病におけるグルテンチャレンジ
抗グリアジンT細胞応答の特性決定を、末梢血において、3日間のグルテンチャレンジの6−8日後に実施した。
結果1:PBMC 6日目長期間グルテンフリーダイエット(抗HLA−DR及び−DQ抗体と前インキュベーション)(%阻害として表現)
DR−:tTG−グリアジン100mcg/ml(105),A−グリアジン57−73 QE65 50mcg/ml(90),PPD 5mcg/ml(30)
DQ−:tTG−グリアジン 100mcg/ml(5),A−グリアジン57−73
QE65 50mcg/ml(22),PPD 5mcg/ml(78)。
B7除去:tTG−グリアジン n=6(7),A−グリアジン57−73 n=9(6),PPD n=8(62)
AE除去:tTG−グリアジン n=6(120),A−グリアジン57−73 ん=9(80)、PPD n=8(110)。
治療用ペプチドは限定ではないが以下を含む
以下のとおりのマッピング目的のためにもELISpotアッセイを実施した。
優勢なDQ−8関連エピトープのファインマッピング
IFNγ−ELISpotにおけるグリアジンエピトープの生物活性(25mcg/ml,n=6)(A−グリアジン57−73 QE65応答の%として表された)
DQ2−AII:野生型(WT)(4),WT+tTG(52),Glu−置換された(52)
DQ2−AI:野生型(WT)(2),WT+tTG(22),Glu−置換された(28)
GDA09:野生型(WT)(1),tTG(7),Glu−置換された(8)
A−G31−49:野生型(WT)(2),tTG(3),Glu−置換された(0)A−グリアジン57−73 QE65(G01E)の用量応答(n=8)(G01Eの最大応答の%として表された)
0.025mcg/ml(1),0.05mcg/ml(8),0.1mcg/ml(10),0.25mcg/ml(22),0.5mcg/ml(38)<1mcg/ml(43),2.5mcg/ml(52),5mcg/ml(70),10mcg/ml(81),25mcg/ml(95),50mcg/ml(90),100mcg/ml(85)。
単独:DQ2−A1(20),DQ2−A2(55),オメガG1(50),tTGグリアジン(80)、PPD(220),DQ2バインダー(0)
G01E+:DQ2−A1(90),DQ2−A2(95),オメガG1(100),tTGグリアジン(120)、PPD(280),DQ2バインダー(80)
個々のセリアック病被験者におけるIFNγELISpot応答に対するA−グリアジン57−73 QE65のアラニン及びリジン置換の効果(n=8)
エピトープ配列:QLQPFPQPELPYPQPQS
57−59位及び72−73位におけるアラニンの置換はA−グリアジン57−73 QE65応答の%において、ほとんど又は全く低下を示さなかった。60−62位及び68−71位におけるアラニンの置換はA−グリアジン57−73 QE65応答の%において穏やかな低下を示した。63−67位におけるアラニンの置換はA−グリアジン57−73 QE65応答の%において最大の低下を示した。
個々のセリアック病被験者におけるIFNγELISpot応答に対するA−グリアジン57−73 QE65のリジン置換の効果(n=8)
エピトープ配列:QLQPFPQPELPYPQPQS
57−59位及び71−73位におけるリジンの置換はA−グリアジン57−73 QE65応答の%において、ほとんど又は全く低下を示さなかった。60−61位及び69−70位におけるリジンの置換はA−グリアジン57−73 QE65応答の%において穏やかな低下を示した。62−68位におけるリジンの置換はA−グリアジン57−73
QE65応答の%において最大の低下を示した。
実施例17
表24は、コムギ又はライムギでチャレンジした数人の患者を用いた652のペプチドを試験する分析の結果を示す。
Claims (37)
- 個体から得られたサンプルにおいて、セリアック病を検出するか又はセリアック病に感受性であることを検出する方法であって、
配列番号18、20〜22、32、33、36、40〜44、及び46、並びにトランスグルタミナーゼにより脱アミド化された配列番号18、20、21、32、33、36、40〜44、及び46からなる群から選択される配列を含む少なくとも1つのエピトープを含むペプチドを含む少なくとも1つの薬剤を、個体からのサンプルに接触させ、そして
サンプル中のT細胞が上記薬剤を認識するか否かをインビトロにて決定する、
ことを含み、T細胞による認識は、個体がセリアック病を有するか又はセリアック病に感受性であることを示す、前記方法。 - セリアック病を治療又は予防するための医薬の製造のための薬剤の使用であって、薬剤は、配列番号18、20〜22、32、33、36、40〜44、及び46、並びにトランスグルタミナーゼにより脱アミド化された配列番号18、20、21、32、33、36、40〜44、及び46からなる群から選択される配列を含む少なくとも1つのエピトープを含むペプチドを含む、前記使用。
- 薬剤がHLA−DQ2−制限される、請求項2に記載の使用。
- 薬剤がHLA−DQ8−制限される、請求項2に記載の使用。
- 1つの薬剤がHLA−DQ2−制限され、そして第2の薬剤がHLA−DQ8制限される、請求項2に記載の使用。
- 薬剤がコムギのエピトープを含む、請求項2に記載の使用。
- 1つの薬剤がコムギのエピトープを含み、そして1つの薬剤がライムギのエピトープを含む、請求項2に記載の使用。
- 1つの薬剤がコムギのエピトープを含み、そして1つの薬剤がオオムギのエピトープを含む、請求項2に記載の使用。
- 1つの薬剤がライムギのエピトープを含み、そして1つの薬剤がオオムギのエピトープを含む、請求項2に記載の使用。
- 1つの薬剤がコムギのエピトープを含み、1つの薬剤がオオムギのエピトープを含み、そして1つの薬剤がライムギのエピトープを含む、請求項2に記載の使用。
- 単一の薬剤がコムギのエピトープ、オオムギのエピトープ、及びライムギのエピトープを含む、請求項2に記載の使用。
- 薬剤が、薬学上受容可能なキャリアー又は希釈剤を含む薬学組成物中に存在する、請求項2に記載の使用。
- 薬剤が、薬剤に応答性のT細胞又は抗体の生産を抑圧するために、個体を寛容化するための組成物中に含まれる、請求項2に記載の使用。
- 配列番号18、20〜22、32、33、36、40〜44、及び46、並びにトランスグルタミナーゼにより脱アミド化された配列番号18、20、21、32、33、36、40〜44、及び46からなる群から選択される配列を含む少なくとも1つのエピトープを含むペプチドを含む少なくとも1つの薬剤、及び
薬学上受容可能なキャリアー又は希釈剤、
を含む薬学組成物。 - T細胞の生産、又は
配列番号18、20〜22、32、33、36、40〜44、及び46、並びにトランスグルタミナーゼにより脱アミド化された配列番号18、20、21、32、33、36、40〜44、及び46からなる群から選択される配列を含む少なくとも1つのエピトープを含むペプチドを含む少なくとも1つの薬剤に対する抗体応答、
を抑圧するために、個体をグリアジン蛋白質に対して寛容にするための組成物であって、当該薬剤を含む、前記組成物。 - 個体から得られたサンプルにおいて、セリアック病を検出するか又はセリアック病に感受性であることを検出する方法における使用のための診断手段の製造のための請求項1に記載の薬剤の使用であって、上記方法は、個体のT細胞が薬剤を認識するか否かを決定することを含み、T細胞による認識は、個体がセリアック病を有するか又はセリアック病に感受性であることを示す、前記使用。
- ペプチドが、当該ペプチドに結合できるHLA分子又はHLA分子の断片に結合している、請求項1に記載の方法。
- ペプチドが、当該ペプチドに結合できるHLA分子又はHLA分子の断片に結合している、請求項16に記載の使用。
- HLA分子又は断片が、4つのHLA分子又はHLA分子の断片を含む複合体中にある、請求項17に記載の方法。
- HLA分子又は断片が、4つのHLA分子又はHLA分子の断片を含む複合体中にある、請求項18に記載の使用。
- 方法が、薬剤を個体の皮膚に投与し、そして投与の部位において炎症の存在を検出することを含み、炎症の検出は、個体のT細胞が薬剤を認識することを示す、請求項16、18、又は20に記載の使用。
- サンプルが血液サンプルである、請求項1、17、又は19に記載の方法。
- 決定の前に、抗原特異的様式にてインビボにおいてT細胞が再刺激されない、請求項1、17、19、又は22に記載の方法。
- T細胞による薬剤の認識が、T細胞によるサイトカインの分泌を検出することにより決定される、請求項1、17、19、又は22に記載の方法。
- T細胞による薬剤の認識が、T細胞によるサイトカインの分泌を検出することにより決定される、請求項16、18、20、又は21に記載の使用。
- サイトカインがIFN−γである、請求項24に記載の方法。
- サイトカインがIFN−γである、請求項25に記載の使用。
- サイトカインに特異的な固定化された抗体へサイトカインを結合させ、次に抗体/サイトカイン複合体の存在を検出することによりサイトカインを検出する、請求項24又は26に記載の方法。
- サイトカインに特異的な固定化された抗体へサイトカインを結合させ、次に抗体/サイトカイン複合体の存在を検出することによりサイトカインを検出する、請求項25又は27に記載の使用。
- 薬剤がT細胞受容体に結合するか否かを測定することにより上記決定を行う、請求項1、17、19、又は22に記載の方法。
- 薬剤がT細胞受容体に結合するか否かを測定することにより上記決定を行う、請求項16、18、20、又は21に記載の使用。
- 個体から得られたサンプルにおいて、セリアック病又はセリアック病に対する感受性を検出する方法であって、配列番号18、20〜22、32、33、36、40〜44、及び46、並びにトランスグルタミナーゼにより脱アミド化された配列番号18、20、21、32、33、36、40〜44、及び46からなる群から選択される配列を含むエピトープのエピトープに結合する抗体の、個体からのサンプル中の存在を決定することを含み、抗体の存在は、個体がセリアック病を有するか又はセリアック病に感受性であることを示す、前記方法。
- 組成物がセリアック病を引き起こし得るか否かを決定する方法であって、配列番号18、20〜22、32、33、36、40〜44、及び46、並びにトランスグルタミナーゼにより脱アミド化された配列番号18、20、21、32、33、36、40〜44、及び46からなる群から選択される配列を有する蛋白質へ、トランスグルタミナーゼにより修飾され得る蛋白質が、組成物中に存在するか否かを決定することを含み、蛋白質の存在は、組成物がセリアック病を引き起こし得ることを示す、前記方法。
- 上記配列に修飾され得る配列に特異的な抗体に組成物を接触させることにより上記決定を行い、組成物中の蛋白質への抗体の結合は、組成物がセリアック病を引き起こし得ることを示す、請求項33に記載の方法。
- 請求項1及び17〜30のいずれか1項に記載の方法又は使用を実施するためのキットであって、
配列番号18、20〜22、32、33、36、40〜44、及び46、並びにトランスグルタミナーゼにより脱アミド化された配列番号18、20、21、32、33、36、40〜44、及び46からなる群から選択される配列を含む少なくとも1つのエピトープを含むペプチドを含む少なくとも1つの薬剤、及び
T細胞によるペプチドの認識を検出する手段、
を含む、前記キット。 - 認識を検出する手段が、IFN−γに対する抗体を含む、請求項35に記載のキット。
- 抗体が固相支持体上に固定されている、請求項36に記載のキット。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GBGB0212885.8A GB0212885D0 (en) | 2002-06-05 | 2002-06-05 | Therapeutic epitopes and uses thereof |
GB0212885.8 | 2002-06-05 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2013021737A Division JP6055689B2 (ja) | 2002-06-05 | 2013-02-06 | 治療用エピトープ及びそれらの使用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2016122016A JP2016122016A (ja) | 2016-07-07 |
JP6438423B2 true JP6438423B2 (ja) | 2018-12-12 |
Family
ID=9937994
Family Applications (6)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2004511341A Withdrawn JP2006512893A (ja) | 2002-06-05 | 2003-06-05 | 治療用エピトープ及びそれらの使用 |
JP2010110683A Expired - Lifetime JP5635302B2 (ja) | 2002-06-05 | 2010-05-12 | 治療用エピトープ及びそれらの使用 |
JP2013021737A Expired - Lifetime JP6055689B2 (ja) | 2002-06-05 | 2013-02-06 | 治療用エピトープ及びそれらの使用 |
JP2014162664A Expired - Lifetime JP5977293B2 (ja) | 2002-06-05 | 2014-08-08 | 治療用エピトープ及びそれらの使用 |
JP2014198382A Pending JP2015052599A (ja) | 2002-06-05 | 2014-09-29 | 治療用エピトープ及びそれらの使用 |
JP2016037111A Expired - Lifetime JP6438423B2 (ja) | 2002-06-05 | 2016-02-29 | 治療用エピトープ及びそれらの使用 |
Family Applications Before (5)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2004511341A Withdrawn JP2006512893A (ja) | 2002-06-05 | 2003-06-05 | 治療用エピトープ及びそれらの使用 |
JP2010110683A Expired - Lifetime JP5635302B2 (ja) | 2002-06-05 | 2010-05-12 | 治療用エピトープ及びそれらの使用 |
JP2013021737A Expired - Lifetime JP6055689B2 (ja) | 2002-06-05 | 2013-02-06 | 治療用エピトープ及びそれらの使用 |
JP2014162664A Expired - Lifetime JP5977293B2 (ja) | 2002-06-05 | 2014-08-08 | 治療用エピトープ及びそれらの使用 |
JP2014198382A Pending JP2015052599A (ja) | 2002-06-05 | 2014-09-29 | 治療用エピトープ及びそれらの使用 |
Country Status (16)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US10053497B2 (ja) |
EP (3) | EP2292649B1 (ja) |
JP (6) | JP2006512893A (ja) |
AU (1) | AU2003244771B2 (ja) |
CA (1) | CA2488218C (ja) |
CY (1) | CY1115730T1 (ja) |
DK (1) | DK1513873T3 (ja) |
ES (1) | ES2510440T3 (ja) |
GB (1) | GB0212885D0 (ja) |
HK (2) | HK1074451A1 (ja) |
MX (2) | MXPA04012117A (ja) |
NZ (1) | NZ537226A (ja) |
PT (1) | PT1513873E (ja) |
SI (1) | SI1513873T1 (ja) |
WO (1) | WO2003104273A2 (ja) |
ZA (1) | ZA200409740B (ja) |
Families Citing this family (49)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB9923306D0 (en) | 1999-10-01 | 1999-12-08 | Isis Innovation | Diagnostic and therapeutic epitope, and transgenic plant |
DK1572127T4 (da) | 2002-02-14 | 2014-11-24 | Univ Leland Stanford Junior | Enzymbehandling af fødevarer til cøliaki |
US8143210B2 (en) | 2002-02-14 | 2012-03-27 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Enzyme treatment of foodstuffs for celiac sprue |
US7462688B2 (en) * | 2002-05-14 | 2008-12-09 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Peptides for diagnostic and therapeutic methods for celiac sprue |
US7202216B2 (en) * | 2002-05-14 | 2007-04-10 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Drug therapy for celiac sprue |
WO2003096979A2 (en) * | 2002-05-14 | 2003-11-27 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Drug therapy for celiac sprue |
US7265093B2 (en) * | 2002-05-14 | 2007-09-04 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Drug therapy for Celiac Sprue |
GB0212885D0 (en) * | 2002-06-05 | 2002-07-17 | Isis Innovation | Therapeutic epitopes and uses thereof |
DK1563300T3 (da) | 2002-11-20 | 2012-07-23 | Univ Leland Stanford Junior | Diagnostisk fremgangsmåde til cøliaki |
US7579313B2 (en) | 2003-11-18 | 2009-08-25 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Transglutaminase inhibitors and methods of use thereof |
DE602005026287D1 (de) * | 2004-04-16 | 2011-03-24 | Univ Alberta | Anti-gluten-eigelb-antikörper zur behanldung von zoeliakie |
US7534426B2 (en) * | 2004-04-26 | 2009-05-19 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Glutenase enzyme assays |
US7628985B2 (en) * | 2004-04-26 | 2009-12-08 | The Board Of Regents Of The Leland Stanford Junior University | Therapeutic enzyme formulations and uses thereof in celiac sprue and/or dermatitis herpetoformis |
US7563864B2 (en) * | 2004-04-26 | 2009-07-21 | Celiac Sprue Research Foundation | Prolyl endopeptidase mediated destruction of T cell epitopes in whole gluten |
US10105437B2 (en) | 2004-04-28 | 2018-10-23 | Btg International Limited | Epitopes related to coeliac disease |
EP2486934A1 (en) | 2004-04-28 | 2012-08-15 | BTG International Limited | Epitopes Related To Coeliac Disease |
AU2011247868B2 (en) * | 2004-04-28 | 2014-05-22 | Btg International Limited | Epitopes related to coeliac disease |
EP2136833B1 (en) | 2007-03-16 | 2019-05-01 | The Board of Trustees of the Leland Stanford Junior University | Combination enzyme therapy for digestion of dietary gluten |
US8282928B2 (en) | 2007-05-30 | 2012-10-09 | The Governors Of The University Of Alberta | Anti-gluten egg yolk antibodies for the treatment of celiac disease |
DE102007044673A1 (de) * | 2007-09-18 | 2009-03-19 | Zimmer, Klaus-Peter, Prof. Dr. med. | Impfstoff zur Behandlung von Zöliakie und Verfahren zur Herstellung des Impfstoffes, Verwendung einer mit einem bakteriellen Toxin konjugierten Peptidsequenz zur Aktivierung des Immunsystems gegen Prolamine sowie Designerpeptid |
US8835603B2 (en) * | 2008-11-30 | 2014-09-16 | Immusant, Inc. | Agents for the treatment of celiac disease |
AU2013204429B9 (en) * | 2008-11-30 | 2017-01-05 | Immusant, Inc. | Compositions and methods for treatment of celiac disease |
US9517257B2 (en) | 2010-08-10 | 2016-12-13 | Ecole Polytechnique Federale De Lausanne (Epfl) | Erythrocyte-binding therapeutics |
US9850296B2 (en) | 2010-08-10 | 2017-12-26 | Ecole Polytechnique Federale De Lausanne (Epfl) | Erythrocyte-binding therapeutics |
US9518087B2 (en) | 2010-08-10 | 2016-12-13 | Ecole Polytechnique Federale De Lausanne (Epfl) | Erythrocyte-binding therapeutics |
US20140037661A1 (en) * | 2011-02-08 | 2014-02-06 | Phadia Ab | Wheat Antigens and Peptides for Diagnosis of Wheat Induced Hypersensitivity |
ES2402286B1 (es) * | 2011-09-29 | 2014-03-04 | Universidad De Valladolid | Péptido inmunogénico del gluten y sus aplicaciones. |
CA3191015A1 (en) | 2012-02-07 | 2013-08-15 | Vibrant Holdings, Llc | Substrates, peptide arrays, and methods |
US10006909B2 (en) | 2012-09-28 | 2018-06-26 | Vibrant Holdings, Llc | Methods, systems, and arrays for biomolecular analysis |
US10286376B2 (en) | 2012-11-14 | 2019-05-14 | Vibrant Holdings, Llc | Substrates, systems, and methods for array synthesis and biomolecular analysis |
WO2014127328A2 (en) | 2013-02-15 | 2014-08-21 | Vibrant Holdings, Llc. | Methods and compositions for amplified electrochemiluminescence detection |
EP3043812A1 (en) | 2013-09-10 | 2016-07-20 | Immusant Inc. | Dosage of a gluten peptide composition |
US10946079B2 (en) | 2014-02-21 | 2021-03-16 | Ecole Polytechnique Federale De Lausanne | Glycotargeting therapeutics |
EP3909603A1 (en) | 2014-02-21 | 2021-11-17 | Ecole Polytechnique Fédérale de Lausanne (EPFL) | Glycotargeting therapeutics |
US10953101B2 (en) | 2014-02-21 | 2021-03-23 | École Polytechnique Fédérale De Lausanne (Epfl) | Glycotargeting therapeutics |
US10046056B2 (en) | 2014-02-21 | 2018-08-14 | École Polytechnique Fédérale De Lausanne (Epfl) | Glycotargeting therapeutics |
EP3134737A4 (en) | 2014-04-24 | 2018-01-17 | Immusant Inc. | Methods of diagnosis and treatment of celiac disease in children |
NZ742911A (en) | 2014-09-10 | 2024-02-23 | Vibrant Holdings Llc | Peptide microarrays and novel biomarkers for celiac disease |
WO2016054038A1 (en) | 2014-09-29 | 2016-04-07 | Immusant, Inc. | Use of hla genetic status to assess or select treatment of celiac disease |
AU2015349728A1 (en) | 2014-11-21 | 2017-07-13 | Immusant, Inc. | Peptides for use in treatment and diagnosis of type 1 diabetes |
EP3109255A1 (en) * | 2015-06-26 | 2016-12-28 | Institut National De La Recherche Agronomique | Immunogenic composition |
EP3313868A1 (en) * | 2015-06-26 | 2018-05-02 | Institut National De La Recherche Agronomique (INRA) | Immunogenic composition |
JP6738888B2 (ja) * | 2016-02-23 | 2020-08-12 | 田中貴金属工業株式会社 | グリアジン検出用免疫クロマト分析装置、免疫クロマト分析キットおよび免疫クロマト分析方法 |
US10538808B2 (en) | 2017-05-26 | 2020-01-21 | Vibrant Holdings, Llc | Photoactive compounds and methods for biomolecule detection and sequencing |
WO2018232176A1 (en) | 2017-06-16 | 2018-12-20 | The University Of Chicago | Compositions and methods for inducing immune tolerance |
JP6568193B2 (ja) * | 2017-12-19 | 2019-08-28 | ホーユー株式会社 | エピトープ |
US20220251148A1 (en) * | 2019-07-04 | 2022-08-11 | Ukko Inc. | De-epitoped alpha gliadin and use of same for the management of celiac disease and gluten sensitivity |
EP4034144A1 (en) | 2019-09-27 | 2022-08-03 | Intrexon Actobiotics NV d/b/a Precigen Actobio | Treatment of celiac disease |
GB202113858D0 (en) * | 2021-09-28 | 2021-11-10 | Nextera As | Peptides |
Family Cites Families (86)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4459355A (en) | 1982-07-12 | 1984-07-10 | International Paper Company | Method for transforming plant cells |
US4536475A (en) | 1982-10-05 | 1985-08-20 | Phytogen | Plant vector |
NL8300698A (nl) | 1983-02-24 | 1984-09-17 | Univ Leiden | Werkwijze voor het inbouwen van vreemd dna in het genoom van tweezaadlobbige planten; agrobacterium tumefaciens bacterien en werkwijze voor het produceren daarvan; planten en plantecellen met gewijzigde genetische eigenschappen; werkwijze voor het bereiden van chemische en/of farmaceutische produkten. |
JPS6047683A (ja) | 1983-08-24 | 1985-03-15 | Kirin Brewery Co Ltd | プロモ−タ− |
US4945050A (en) | 1984-11-13 | 1990-07-31 | Cornell Research Foundation, Inc. | Method for transporting substances into living cells and tissues and apparatus therefor |
US5100792A (en) | 1984-11-13 | 1992-03-31 | Cornell Research Foundation, Inc. | Method for transporting substances into living cells and tissues |
US5036006A (en) | 1984-11-13 | 1991-07-30 | Cornell Research Foundation, Inc. | Method for transporting substances into living cells and tissues and apparatus therefor |
US4943674A (en) | 1987-05-26 | 1990-07-24 | Calgene, Inc. | Fruit specific transcriptional factors |
DK162399C (da) | 1986-01-28 | 1992-03-23 | Danisco | Fremgangsmaade til ekspression af gener i baelgplanteceller, dna-fragment, rekombineret dna-fragment samt plasmid til brug ved udoevelsen af fremgangsmaaden |
ES2018274T5 (es) | 1986-03-11 | 1996-12-16 | Plant Genetic Systems Nv | Celulas vegetales resistentes a los inhibidores de glutamina sintetasa, preparadas por ingenieria genetica. |
US5107065A (en) | 1986-03-28 | 1992-04-21 | Calgene, Inc. | Anti-sense regulation of gene expression in plant cells |
US5187073A (en) | 1986-06-30 | 1993-02-16 | The University Of Toledo | Process for transforming gramineae and the products thereof |
US5177010A (en) | 1986-06-30 | 1993-01-05 | University Of Toledo | Process for transforming corn and the products thereof |
NZ221259A (en) | 1986-07-31 | 1990-05-28 | Calgene Inc | Seed specific transcriptional regulation |
EP0267159A3 (de) | 1986-11-07 | 1990-05-02 | Ciba-Geigy Ag | Verfahren zur genetischen Modifikation monokotyler Pflanzen |
US4866247A (en) | 1986-12-11 | 1989-09-12 | The Lincoln Electric Company | Apparatus and method of short circuiting arc welding |
US4971908A (en) | 1987-05-26 | 1990-11-20 | Monsanto Company | Glyphosate-tolerant 5-enolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthase |
US5356799A (en) | 1988-02-03 | 1994-10-18 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Antisense gene systems of pollination control for hybrid seed production |
US5371014A (en) | 1988-02-12 | 1994-12-06 | Daicel Chemical Industries, Ltd. | Process for the production of optically active 2-hydroxy acid esters using microbes to reduce the 2-oxo precursor |
US5179022A (en) | 1988-02-29 | 1993-01-12 | E. I. Du Pont De Nemours & Co. | Biolistic apparatus for delivering substances into cells and tissues in a non-lethal manner |
US5614395A (en) | 1988-03-08 | 1997-03-25 | Ciba-Geigy Corporation | Chemically regulatable and anti-pathogenic DNA sequences and uses thereof |
US5250515A (en) | 1988-04-11 | 1993-10-05 | Monsanto Company | Method for improving the efficacy of insect toxins |
US5565346A (en) | 1988-07-27 | 1996-10-15 | Calgene, Inc. | Transformation and regeneration system for legumes |
US5428146A (en) | 1988-11-07 | 1995-06-27 | Max-Planck-Gesellschaft Zur Forderung | Wound-stimulated DNA-sequence from solanum tuberosum and its use |
US5110732A (en) | 1989-03-14 | 1992-05-05 | The Rockefeller University | Selective gene expression in plants |
US5086169A (en) | 1989-04-20 | 1992-02-04 | The Research Foundation Of State University Of New York | Isolated pollen-specific promoter of corn |
US5629183A (en) | 1989-05-08 | 1997-05-13 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Plant transformation by gene transfer into pollen |
US5097025A (en) | 1989-08-01 | 1992-03-17 | The Rockefeller University | Plant promoters |
US7705215B1 (en) | 1990-04-17 | 2010-04-27 | Dekalb Genetics Corporation | Methods and compositions for the production of stably transformed, fertile monocot plants and cells thereof |
JPH05501352A (ja) | 1989-08-09 | 1993-03-18 | ディカルブ ジェネティクス コーポレイション | 安定な形質転換稔性単子葉植物およびそれらの細胞を製造するための方法および組成物 |
US5550318A (en) | 1990-04-17 | 1996-08-27 | Dekalb Genetics Corporation | Methods and compositions for the production of stably transformed, fertile monocot plants and cells thereof |
US4919813A (en) | 1989-08-25 | 1990-04-24 | The United States Of America As Represented By The Department Of Energy | Photoenhanced anaerobic digestion of organic acids |
EP0497884B1 (en) | 1989-10-27 | 2004-04-28 | The Salk Institute For Biological Studies | Glutamate receptor compositions and methods |
US5589583A (en) | 1990-01-11 | 1996-12-31 | Monsanto Company | Plant promoter |
US5484956A (en) | 1990-01-22 | 1996-01-16 | Dekalb Genetics Corporation | Fertile transgenic Zea mays plant comprising heterologous DNA encoding Bacillus thuringiensis endotoxin |
HU220773B1 (hu) | 1990-01-22 | 2002-05-28 | Dekalb Genetics Corporation | Eljárás termő transzgenikus kukoricanövények előállítására |
EP0442174A1 (en) | 1990-02-13 | 1991-08-21 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Stable transformation of plant cells |
US5618988A (en) | 1990-03-02 | 1997-04-08 | Amoco Corporation | Enhanced carotenoid accumulation in storage organs of genetically engineered plants |
US5204253A (en) | 1990-05-29 | 1993-04-20 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Method and apparatus for introducing biological substances into living cells |
US5187267A (en) | 1990-06-19 | 1993-02-16 | Calgene, Inc. | Plant proteins, promoters, coding sequences and use |
AU655197B2 (en) | 1990-06-25 | 1994-12-08 | Monsanto Technology Llc | Glyphosate tolerant plants |
NZ239977A (en) | 1990-11-14 | 1993-08-26 | Pioneer Hi Bred Int | Transforming plants by the use of agrobacterium |
US5932782A (en) | 1990-11-14 | 1999-08-03 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Plant transformation method using agrobacterium species adhered to microprojectiles |
EP0559742A1 (en) | 1990-11-26 | 1993-09-15 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Herbicidal oxazine ethers |
US5459252A (en) | 1991-01-31 | 1995-10-17 | North Carolina State University | Root specific gene promoter |
EP0570422B1 (en) | 1991-02-07 | 2007-12-19 | Bayer BioScience N.V. | Stamen-specific promoters from corn |
IL101508A0 (en) | 1991-04-08 | 1992-12-30 | Rhone Poulenc Agrochimie | Chimeric plant genes based on upstream regulatory elements of helianthinin |
DE69232132T3 (de) | 1991-05-15 | 2008-08-14 | Monsanto Technology Llc. | Verfahren zur schöpfung einer transformierten reispflanze |
WO1993004178A1 (en) | 1991-08-23 | 1993-03-04 | University Of Florida | A novel method for the production of transgenic plants |
WO1994000977A1 (en) | 1992-07-07 | 1994-01-20 | Japan Tobacco Inc. | Method of transforming monocotyledon |
NZ257181A (en) | 1992-10-29 | 1997-07-27 | Medical Res Council | Transcription factor dp-1, dna, vectors and host cells therefor |
US5389226A (en) | 1992-12-17 | 1995-02-14 | Amorphous Technologies International, Inc. | Electrodeposition of nickel-tungsten amorphous and microcrystalline coatings |
TW360548B (en) | 1993-04-08 | 1999-06-11 | Powderject Res Ltd | Products for therapeutic use |
WO1994025613A1 (en) | 1993-05-03 | 1994-11-10 | Cornell Research Foundation, Inc. | Isolated dna elements that direct pistil-specific and anther-specific gene expression and methods of using same |
US5670349A (en) | 1993-08-02 | 1997-09-23 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | HMG2 promoter expression system and post-harvest production of gene products in plants and plant cell cultures |
EP0672752B1 (en) | 1993-09-03 | 2004-05-26 | Japan Tobacco Inc. | Method of transforming monocotyledon by using scutellum of immature embryo |
US5495007A (en) | 1994-04-29 | 1996-02-27 | Thompson; Gary A. | Phloem-specific promoter |
US5633363A (en) | 1994-06-03 | 1997-05-27 | Iowa State University, Research Foundation In | Root preferential promoter |
US5646333A (en) | 1994-09-02 | 1997-07-08 | Drexel University | Plant promoter useful for directing the expression of foreign proteins to the plant epidermis |
HUT76355A (en) | 1995-11-24 | 1997-08-28 | Bay Zoltan Alkalmazott Kutatas | Plant gene-expression vector family based on dna fragments regulating alfalfa h3 histon gene variant (ms h3g1) |
US6036983A (en) | 1996-05-20 | 2000-03-14 | Novo Nordisk A/S | Method of obtaining protein hydrolysates |
CA2257972A1 (en) | 1996-06-13 | 1997-12-18 | Consejo Superior De Investigaciones Cientificas | Plant proteins |
GB9624456D0 (en) | 1996-11-25 | 1997-01-15 | Isis Innovation | Assay method |
US5959175A (en) | 1997-04-09 | 1999-09-28 | Thomas; Terry L. | Sunflower albumin 5' regulatory region for the modification of plant seed lipid composition |
US5977436A (en) | 1997-04-09 | 1999-11-02 | Rhone Poulenc Agrochimie | Oleosin 5' regulatory region for the modification of plant seed lipid composition |
ES2132025B1 (es) | 1997-06-12 | 2000-12-01 | Consejo Superior Investigacion | Proteinas urag de las plantas. |
EP0905518A1 (en) | 1997-09-23 | 1999-03-31 | Academisch Ziekenhuis Leiden | Peptides specific for gluten-sensitive T-cells and use thereof |
US6100450A (en) | 1997-10-22 | 2000-08-08 | Rhone-Poulenc Agrochimie | Seed specific promoters based on arabidopsis genes |
US6232445B1 (en) | 1997-10-29 | 2001-05-15 | Sunol Molecular Corporation | Soluble MHC complexes and methods of use thereof |
EP1068334A2 (en) | 1998-04-09 | 2001-01-17 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Cell cycle regulatory proteins cdc-16, dp-1, dp-2 and e2f from plants |
WO1999058681A2 (en) | 1998-05-08 | 1999-11-18 | Consejo Superior De Investigaciones Cientificas | Transgenic plant cells expressing a recombinant plant e2f peptide |
CA2341760A1 (en) * | 1998-09-03 | 2000-03-16 | Pia Vaag | 17 kda foam protein |
AU3230200A (en) | 1999-02-12 | 2000-08-29 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Transgenic plants with modified expression of the dp protein |
GB9923306D0 (en) * | 1999-10-01 | 1999-12-08 | Isis Innovation | Diagnostic and therapeutic epitope, and transgenic plant |
MXPA03009313A (es) * | 2001-04-12 | 2004-11-12 | Academish Ziekenhuis Leiden | Metodos y medios para uso de receptores de celulas t restringidos por hla-dq y peptidos derivados de prolamina unidos a hla-dq. |
EP1332760A1 (en) | 2002-02-04 | 2003-08-06 | Academisch Ziekenhuis Leiden | Novel epitopes for celiac disease and autoimmune diseases, methods for detecting those and novel non-antigenic food compounds |
US7320788B2 (en) * | 2002-02-14 | 2008-01-22 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Enzyme treatment of foodstuffs for Celiac Sprue |
DK1572127T4 (da) * | 2002-02-14 | 2014-11-24 | Univ Leland Stanford Junior | Enzymbehandling af fødevarer til cøliaki |
US7202216B2 (en) | 2002-05-14 | 2007-04-10 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Drug therapy for celiac sprue |
WO2003096979A2 (en) | 2002-05-14 | 2003-11-27 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Drug therapy for celiac sprue |
GB0212885D0 (en) | 2002-06-05 | 2002-07-17 | Isis Innovation | Therapeutic epitopes and uses thereof |
DK1563300T3 (da) | 2002-11-20 | 2012-07-23 | Univ Leland Stanford Junior | Diagnostisk fremgangsmåde til cøliaki |
US6992916B2 (en) | 2003-06-13 | 2006-01-31 | Taiwan Semiconductor Manufacturing Co., Ltd. | SRAM cell design with high resistor CMOS gate structure for soft error rate improvement |
EP2486934A1 (en) | 2004-04-28 | 2012-08-15 | BTG International Limited | Epitopes Related To Coeliac Disease |
US8835603B2 (en) * | 2008-11-30 | 2014-09-16 | Immusant, Inc. | Agents for the treatment of celiac disease |
JP6520175B2 (ja) | 2015-02-10 | 2019-05-29 | 富士通株式会社 | 無線通信装置、基地局システム及び無線通信装置制御方法 |
-
2002
- 2002-06-05 GB GBGB0212885.8A patent/GB0212885D0/en not_active Ceased
-
2003
- 2003-06-05 NZ NZ537226A patent/NZ537226A/en not_active IP Right Cessation
- 2003-06-05 EP EP10181717.9A patent/EP2292649B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2003-06-05 EP EP14184972.9A patent/EP2826787B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2003-06-05 PT PT37382561T patent/PT1513873E/pt unknown
- 2003-06-05 EP EP03738256.1A patent/EP1513873B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2003-06-05 US US10/516,837 patent/US10053497B2/en active Active
- 2003-06-05 ES ES03738256.1T patent/ES2510440T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2003-06-05 AU AU2003244771A patent/AU2003244771B2/en not_active Expired
- 2003-06-05 CA CA2488218A patent/CA2488218C/en not_active Expired - Lifetime
- 2003-06-05 SI SI200332396T patent/SI1513873T1/sl unknown
- 2003-06-05 MX MXPA04012117A patent/MXPA04012117A/es active IP Right Grant
- 2003-06-05 WO PCT/GB2003/002450 patent/WO2003104273A2/en active Application Filing
- 2003-06-05 JP JP2004511341A patent/JP2006512893A/ja not_active Withdrawn
- 2003-06-05 DK DK03738256.1T patent/DK1513873T3/da active
-
2004
- 2004-12-01 ZA ZA200409740A patent/ZA200409740B/en unknown
- 2004-12-03 MX MX2012011506A patent/MX338122B/es unknown
-
2005
- 2005-09-14 HK HK05108027.5A patent/HK1074451A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2010
- 2010-05-12 JP JP2010110683A patent/JP5635302B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
2013
- 2013-02-06 JP JP2013021737A patent/JP6055689B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
2014
- 2014-08-08 JP JP2014162664A patent/JP5977293B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2014-09-29 JP JP2014198382A patent/JP2015052599A/ja active Pending
- 2014-11-07 CY CY20141100928T patent/CY1115730T1/el unknown
-
2015
- 2015-07-06 HK HK15106399.7A patent/HK1205748A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2016
- 2016-02-29 JP JP2016037111A patent/JP6438423B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
2018
- 2018-04-11 US US15/951,116 patent/US20180334484A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6438423B2 (ja) | 治療用エピトープ及びそれらの使用 | |
JP5371890B2 (ja) | 診断及び治療用エピトープ並びにトランスジェニック植物 | |
JP5946231B2 (ja) | セリアック病に関連するエピトープ | |
AU2013204994B2 (en) | Epitopes related to coeliac disease | |
ANDERSON et al. | Patent 2386089 Summary | |
ANDERSON et al. | Sommaire du brevet 2960504 | |
ANDERSON et al. | Patent 2960504 Summary |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20170330 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20170601 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20171002 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20180404 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20180629 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20181003 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20181018 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20181116 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6438423 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
EXPY | Cancellation because of completion of term |