JP6373842B2 - 自己抗体の検出方法、自己免疫疾患の罹患の可能性を試験する方法、自己抗体の検出試薬および自己免疫疾患用の試験試薬 - Google Patents
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Description
本発明の自己抗体の検出方法は、前述のように、MHCクラスII分子により提示された変性タンパク質を含む抗原試薬と、サンプルとを接触させる接触工程、および、前記サンプルにおける自己抗体と前記抗原試薬における前記変性タンパク質との複合体を検出する検出工程を含むことを特徴とする。
本発明において、自己抗体を検出するための抗原試薬は、自己抗体の検出試薬ということもできる。前記抗原試薬は、前述のように、MHCクラスII分子により提示された変性タンパク質である。前記変性タンパク質の形態は、特に制限されない。一例として、前記抗原試薬は、前記変性タンパク質が前記MHCクラスII分子の結合溝に結合した、前記変性タンパク質と前記MHCクラスII分子との複合体の形態があげられる。前記複合体は、例えば、前記複合体のみの形態でもよいし、前記複合体をその表面に提示した細胞(例えば、抗原提示細胞)の形態でもよい。また、その他の例として、前記抗原試薬は、例えば、前記MHCクラスII分子との結合を解離した、前記変性タンパク質(MHCクラスII分子未結合の変性タンパク質)の形態でもよい。
本発明において、前記変性タンパク質は、例えば、MHCクラスII分子の発現系細胞に正常フォールドタンパク質のコード遺伝子を導入することで得られる、MHCクラスII分子により提示された変性タンパク質であることが好ましい。このため、本発明は、例えば、前記接触工程に先立って、前記変性タンパク質/MHCクラスIIを調製する調製工程、すなわち、MHCクラスII分子の発現系細胞に、正常フォールドタンパク質をコードする遺伝子を導入することで、前記正常フォールドタンパク質が変性した前記変性タンパク質が提示されたMHCクラスII分子を調製する調製工程を含んでもよい。
本発明において、前記接触工程は、前記変性タンパク質/MHCクラスIIを含む前記抗原試薬と前記サンプルとを接触させる工程である。
本発明において、前記検出工程は、前記サンプルにおける自己抗体と前記抗原試薬における前記変性タンパク質との複合体を検出する検出工程である。前記検出工程において、例えば、前記複合体の有無の確認(定性分析)、前記複合体の量の測定(定量分析)が可能である。前記複合体は前記自己抗体を含むことから、前記複合体の検出により、間接的に、前記自己抗体を検出できる。
本発明の自己免疫疾患の罹患の可能性を試験する方法は、前述のように、サンプルが、被検体から単離した生体試料であり、前記本発明の自己抗体の検出方法によって、前記サンプルにおける自己抗体と前記MHCクラスII分子により提示された変性タンパク質(前記変性タンパク質/MHCクラスII)との複合体を検出する検出工程、および、前記検出工程における前記複合体の検出結果から、自己免疫疾患の罹患の可能性を試験する試験工程を含むことを特徴とする。
前述した本発明の自己免疫疾患の罹患の可能性を試験する方法は、例えば、自己免疫疾患の診断方法ということもできる。すなわち、本発明の自己免疫疾患の診断方法は、前述のように、サンプルが、被検体から単離した生体試料であり、前記本発明の自己抗体の検出方法によって、前記サンプルにおける自己抗体と前記MHCクラスII分子により提示された変性タンパク質(前記変性タンパク質/MHCクラスII)との複合体を検出する検出工程、および、前記検出工程における前記複合体の検出結果から、自己免疫疾患を診断する診断工程を含むことを特徴とする。
本発明の自己抗体の検出試薬は、前述のように、前記本発明の自己抗体の検出方法に用いる自己抗体の検出試薬であって、MHCクラスII分子により提示された変性タンパク質を含むことを特徴とする。
本発明の自己免疫疾患の検出試薬の製造方法は、前述のように、MHCクラスII分子の発現系細胞に、正常フォールドタンパク質をコードする遺伝子を導入することで、前記正常フォールドタンパク質が変性した前記変性タンパク質が提示されたMHCクラスII分子を調製する調製工程を含むことを特徴とする。本発明の製造方法は、前記本発明の検出方法における前記抗原試薬の製造に関する記載を援用できる。
本発明のスクリーニング方法は、自己免疫疾患に関連する自己抗体に対する抗原タンパク質のスクリーニング方法であり、前述のように、サンプルが、自己免疫疾患の被検体から単離した生体試料であり、前記本発明の自己抗体の検出方法によって、前記サンプルにおける自己抗体とMHCクラスII分子により提示された変性タンパク質との複合体を検出する検出工程、および、前記自己抗体との前記複合体を形成した前記変性タンパク質を、前記自己免疫疾患に関連する自己抗体に対する抗原タンパク質と判断する判断工程を含むことを特徴とする。
(1−1)HLA-DR発現ベクター、HLA-DP発現ベクター
ヒト末梢血単核細胞(3H Biomedical社)またはヒト細胞株のcDNAから、下記表2AおよびBに示すHLA-DRのα鎖およびβ鎖、または下記表3AおよびBに示すHLA-DPのα鎖およびβ鎖をコードするポリヌクレオチドを、それぞれ、pME18Sベクターにクローニングした。なお、前記HLA-DRのcDNAの配列情報は、IMGT/HLA Database(http://www.ebi.ac.uk/imgt/hla/index/html)を参照した。前記クローニングにより作製した発現ベクターは、以下、下記表における遺伝子名で示す(以下、同様)。
マウス脾臓cDNAから、下記表4の分泌型IgG重鎖、膜型IgG重鎖、IgG軽鎖、IgαおよびIgβをコードするポリヌクレオチドを、それぞれ、pME18Sベクターにクローニングした。ヒト甲状腺cDNAから、下記表4のサイログロブリンをコードするポリヌクレオチドを、pME18Sベクターにクローニングした。ヒト末梢血単核球のcDNAから、下記表4のβ2グリコプロテインI(β2−GPI)をコードするポリヌクレオチドを、pME18Sベクターにクローニングした。ヒト甲状腺cDNAから、下記表4の甲状腺刺激ホルモン受容体(TSHR)を、pME18Sベクターにクローニングした。
GTCTTGTCCCAGGTCACCTTGAAGGAGTCTGGTCCTGTGCTGGTGAAACCCACAGAGACCCTCACGCTGACCTGCAGCGTCTCTGGGTTCTCACTCAGCAACGGTAGAATGGGTGTGAGTTGGATCCGTCAGCCCCCAGGGAAGGCCCTGGAGTGGGTTGGACACATTTTTTCGAATGACGACAAATCTTACACCCCATCTCTGGAGAGCAGGCTCACCATCTCCCAGGACACCTTCAGAAGCCAGGTGGTCCTAACCATTACCAACTTGGCCCCCGTGGACACAGGCACATATTATTGTGCACGAATAAGTCGTTCCATTTATGGGGTGCTTACCCCCGGCAGCGTCTGGGGCCAAGGGACCATGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCCACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCCCCGGAGCTGCAACTGGAGGAGAGCTGTGCGGAGGCGCAGGACGGGGAGCTGGACGGGCTGTGGACGACCATCACCATCTTCATCACACTCTTCCTGTTAAGCGTGTGCTACAGTGCCACCGTCACCTTCTTCAAGGTGAAGTGGATCTTCTCCTCGGTGGTGGACCTGAAGCAGACCATCATCCCCGACTACAGGAACATGATCGGACAGGGGGCCTAG
下記文献にしたがって、前記表1のHLA-DRB1*04:04に、リンカーペプチド(配列番号2:GSGSGS)とCw3ペプチド(配列番号3:GSHSMRYFYTAVSRPGR)とを結合させたCw3-pep-HLA-DRB1*04:04をコードするポリヌクレオチドを、pME18Sベクターにクローニングした。これにより、HLA−DRのペプチド結合溝における結合性が阻害される。
文献: Scott, C. A. et al., I. A. Crystal structures of two I-Ad-peptide complexes reveal that high affinity can be achieved without large anchor residues. Immunity 8, 319-329, (1998).
ヒト末梢血単核球のcDNAから、下記表5のインバリアント鎖をコードするポリヌクレオチドを、pME18Sベクターにクローニングした。
GFPをコードする配列番号4に示すポリヌクレオチドを、pME18Sベクターにクローニングした。
atggtgagcaagggcgaggagctgttcaccggggtggtgcccatcctggtcgagctggacggcgacgtaaacggccacaagttcagcgtgtccggcgagggcgagggcgatgccacctacggcaagctgaccctgaagttcatctgcaccaccggcaagctgcccgtgccctggcccaccctcgtgaccaccctgacctacggcgtgcagtgcttcagccgctaccccgaccacatgaagcagcacgacttcttcaagtccgccatgcccgaaggctacgtccaggagcgcaccatcttcttcaaggacgacggcaactacaagacccgcgccgaggtgaagttcgagggcgacaccctggtgaaccgcatcgagctgaagggcatcgacttcaaggaggacggcaacatcctggggcacaagctggagtacaactacaacagccacaacgtctatatcatggccgacaagcagaagaacggcatcaaggtgaacttcaagatccgccacaacatcgaggacggcagcgtgcagctcgccgaccactaccagcagaacacccccatcggcgacggccccgtgctgctgcccgacaaccactacctgagcacccagtccgccctgagcaaagaccccaacgagaagcgcgatcacatggtcctgctggagttcgtgaccgccgccgggatcactctcggcatggacgagctgtacaagtaa
発現ベクターを導入する宿主細胞として、293T(理化学研究所 バイオリソースセンター)を使用し、トランスフェクション試薬として、PEI max(商品名、Polyscience社製)を使用した。前記293T細胞への前記発現ベクターの導入は、PEI max(コスモバイオ社)を2mg/mlとなるように精製水で溶かしたPEI max溶液を使用した。具体的には、Lipofectamine(商標) 2000(Invitrogen社)の使用説明書に従い、Lipofectamine(商標) 2000に代えて、前記PEI max溶液を用いて、前記発現ベクターの導入を行った。前記293T細胞は、DMEM培地を使用し、37℃、培養日数2日の条件下で培養した。
抗体等の試薬は、特に示さない限り、同じ名称のものは、同じ製品を使用した。
本実施例1は、関節リウマチの指標である自己抗体の検出に関する。
HLA−DRとIgG重鎖とを発現させ、細胞表面に、HLA−DRによりIgG重鎖が提示されることを確認した。
・APC標識抗ヒトIgG Fc抗体:Jackson ImmunoResearch社 Code: 109-136-098
・フローサイトメトリー用抗HLA−DR抗体:クローンHL-40、EXBIO社、モノクローナル抗体(mAb)
・APC標識抗マウスIgG 抗体:Jackson ImmunoResearch社 Code: 715-136-150
HLA−DRを免疫沈降し、IgG重鎖が、HLA−DRのペプチド結合溝で結合していることを確認した。
・免疫沈降用ビオチン化抗HLA−DR抗体:クローンL243、ATCC社、mAb
・ペルオキシダーゼ標識抗ウサキIgG抗体:Thermo Fisher
Scientific社 Prod#: 1858415
・ペルオキシダーゼ標識抗ヒトIgG抗体:Jackson ImmunoResearch社 Code: 709-035-149
・ウサギ抗HLA−DRα抗体:品番FL-254、Santa Cruz Biotechnology, Inc.社
リウマチ因子(RF)およびRF61リウマチ因子抗体(RF61、mAb)が、HLA−DRに提示されたIgG重鎖を認識することを確認した。
・APC化抗ヒトIgM抗体:Jackson ImmunoResearch社製 Code: 709-136-073
リウマチ患者由来の血清中のIgMが、HLA−DRに提示されたIgG重鎖を認識することを確認した。
異なるハプロタイプのHLA-DRのIgG重鎖の提示能およびリウマチ患者由来の血清中のIgMが、前記HLA−DRに提示されたIgG重鎖を認識することを確認した。
異なるハプロタイプのβ鎖を有するHLA−DRについて、リウマチ感受性のオッズ比と自己抗原への自己抗体の結合量との相関関係を確認した。
参考文献:Raychaudhuri, S. et al. Five amino acids in three HLA proteins explain most of the association between MHC and seropositive rheumatoid arthritis. Nat. Genet. 44, 291-296, (2012).
・抗Flag抗体:クローンM2、シグマ社
HLA−DRに提示されたIgG重鎖へのリウマチ患者由来の血清中の自己抗体の結合量とRF値とが相関することを確認した。
リウマチ患者由来の血清および健常者由来の血清を採取し、300倍に希釈し、血清サンプルとした。293T細胞に、α鎖発現用ベクターである前記HLA-DRA*01:01ベクター、β鎖発現用ベクターである前記HLA-DRB1*04:04ベクター、前記分泌型IgG重鎖の前記IgGHベクターおよび前記GFPベクターを導入し、培養した。前記培養後の細胞を、前記実施例1Cと同様にして、フローサイトメトリーで分析を行った。また、前記血清サンプルは、公知のELISA法により、RF値を確認済である。具体的には、ヒトIgG Fc断片(Jackson ImmunoResearch社製)を、96マイクロウェルプレート(Costar社製)に吸着させた。次に、前記血清サンプルを加え、前記血清サンプル中のRFをヒトIgG Fc断片に結合させた。さらに、ペルオキシダーゼ標識ウサギ抗ヒトIgM抗体(Jackson ImmunoResearch社製)と反応させ、前記反応後、検出試薬(BD OptiEIA(商標)、BD Bioscience社製)を用い、ペルオキシダーゼ活性を測定した。また、RF値が1060U/mLの標準血清サンプル(GenWay Biotech,Inc社製)を用い、同様にしてペルオキシダーゼ活性を測定し、標準曲線を作製した。そして、前記標準曲線に基づき、前記血清サンプルのペルオキシダーゼ活性の測定値から、前記RF値を算出した。また、コントロールは、前記抗体に代えて、前記APC標識抗ヒトIgM抗体のみと反応させた以外は同様にして、測定した。
前記標準血清サンプルを、0.1%BSA含有HANKS緩衝液で、100倍希釈から3.16倍ずつ希釈し、3.16×106倍希釈までの希釈系列を作成し、これらを標準サンプルとした。前記標準血清サンプルのRF値は、1060U/mlである。
リウマチ患者由来の血清(n=112)、全身性エリテマトーデス(SLE)患者由来の血清(n=19)およびAPS患者由来の血清(n=117)を採取し、前記(2)と同様にして、フローサイトメトリー分析により、前記細胞に対する前記血清中のHLA-DR4/IgGH複合体を認識する自己抗体の結合量を示す平均蛍光強度を算出した。さらに、前記図8の前記RF標準曲線に基づいて、間接的にaHLA-DR/IgGH複合体抗体値(HLA-DR/IgGH複合体システムによる自己抗体値)を算出した。コントロールは、健常者由来の血清(n=127)を用い、同様にして、HLA-DR4/IgGH複合体を認識する自己抗体の結合量の測定、および前記検量線に基づくaHLA-DR/IgGH値(HLA-DR/IgGH複合体システムによる自己抗体値)の算出を行った。また、前記血清サンプルは、前記(1)と同様にしてRF値を確認済である。
本実施例2は、橋本病の指標である自己抗体の検出に関する。
異なるハプロタイプのβ鎖を有するHLA−DRとサイログロブリン(TG)とを発現させ、細胞表面に、前記HLA−DRによりTGが提示されることを確認した。
・抗ヒスチジン抗体:Wako社、クローン9F2、モノクローナル抗体(mAb)
・APC標識抗マウスIgG抗体:Jackson ImmunoResearch社製 Code: 715-136-150
HLA−DRを免疫沈降し、TGが、HLA−DRと結合していることを確認した。
抗ヒトTG抗体:Dako社
橋本病患者由来の血清中のIgG抗体が、HLA−DRに提示されたTGを認識することを確認した。
・ビオチン化抗ヒトIgG抗体:Jackson ImmunoResearch社製
橋本病患者由来の血清中のIgG抗体が、HLA−DRに提示されたTGを認識することを確認した。
橋本病患者由来の血清中のIgG抗体が、HLA−DRに提示されたTGを認識することを確認した。
本実施例3は、抗リン脂質抗体症候群(APS)の指標である自己抗体の検出に関する。
HLA−DRとβ2グリコプロテインI(β2−GPI)とを発現させ、細胞表面に、HLA−DRによりβ2−GPIが提示されること、および、抗β2−GPI抗体および抗カルジオリピン抗体(aCL)が、前記HLA−DRに提示されたβ2−GPIを認識することを確認した。
・抗β2−GPI抗体:ポリクローナル抗体、Atlas antibodies社
・ヒト抗カルジオリピン抗体:クローンEY2C9、北海道大学医学部渥美教授より分与、下記論文参照:Ichikawa, K., M. A. Khamashta, T. Koike, E. Matsuura, and G. R. V. Hughes. 1994. P2-Glycoprotein I reactivity of monoclonal anticardiolipin antibodies from patients with the antiphospholipid syndrome. Arthritis Rheum. 37:1453.
異なるハプロタイプのHLA−DRによるβ2−GPIの提示能を確認した。
HLA−DRを免疫沈降し、β2−GPIが、HLA−DRと結合していることを確認した。
ELISA法を用いない新たなHLA-DR/β2-GPI複合体に対する自己抗体値(aHLA-DR/β2-GPI値)の測定系を構築し、APS患者由来の血清について、自己抗体の間接的な測定を行った。
APS患者由来の血清を、0.1%BSA含有HANKS緩衝液で、100倍希釈から3.16倍ずつ希釈し、3.16×106倍希釈までの希釈系列を作成し、これらを標準サンプルとした。前記APS患者由来の血清は、MESACUP(商標)カルジオリピンテストを使用した公知のELISA法により、抗カルジオリピン抗体測定値(aCL)が47.0U/mlであることを確認済みである。
APS患者(n=120)から血清を採取し、0.1%BSA含有HANKS緩衝液で100倍に希釈し、血清サンプルとした。前記APS患者由来の血清は、前記(1)と同様に、前記ELISA法により抗カルジオリピン抗体測定値(aCL)を確認済みである。また、公知のELISA法により抗β2-GPI抗体値(aβ2GPI)を確認した。
本実施例4は、バセドウ病(Graves病)の指標である自己抗体の検出に関する。
・抗ヒトTSHR抗体:Santa Cruz社製 クローン2C11
・抗ヒトHLA−DP抗体:ExBio社製 クローンHL-38
Claims (13)
- MHCクラスII分子により提示された変性タンパク質を含む抗原試薬と、サンプルとを接触させる接触工程、および、
前記サンプルにおける自己抗体と前記抗原試薬における前記変性タンパク質との複合体を検出する検出工程を含み、
前記変性タンパク質が、正常フォールドタンパク質のフォールディングが変性したミスフォールドタンパク質であることを特徴とする、自己抗体の検出方法。 - 前記変性タンパク質が、MHCクラスII分子の発現系細胞に正常フォールドタンパク質のコード遺伝子を導入することで得られる、MHCクラスII分子により提示された変性タンパク質である、請求項1記載の検出方法。
- 前記変性タンパク質が、自己免疫疾患に関与する正常フォールドタンパク質が変性したタンパク質である、請求項1または2記載の検出方法。
- 前記変性タンパク質が、IgG重鎖、サイログロブリン、β2グリコプロテインIおよび甲状腺刺激ホルモン受容体からなる群から選択された少なくとも一つが変性したタンパク質である、請求項1から3のいずれか一項に記載の検出方法。
- 前記MHCクラスII分子が、HLA−DR、HLA−DPおよびHLA−DQからなる群から選択された少なくとも一つである、請求項1から4のいずれか一項に記載の検出方法。
- 前記MHCクラスII分子が、HLA−DR1、HLA−DR2、HLA−DR3、HLA−DR4、HLA−DR5、HLA−DR6、HLA−DR7、HLA−DR8、HLA−DR13、HLA−DR14、HLA−DR15、HLA−DQ3、HLA−DQ6、HLA−DQ8、HLA−DP4およびHLA−DP5からなる群から選択された少なくとも一つである、請求項1から5のいずれか一項に記載の検出方法。
- 前記MHCクラスII分子と前記変性タンパク質との組合せが、下記(1)から(4)からなる群から選択された少なくとも一つである、請求項1から6のいずれか一項に記載の検出方法。
(1)前記MHCクラスII分子が、HLA−DRを含み、前記変性タンパク質が、IgG重鎖の変性タンパク質である
(2)前記MHCクラスII分子が、HLA−DRを含み、前記変性タンパク質が、サイログロブリンの変性タンパク質である
(3)前記MHCクラスII分子が、HLA−DRを含み、前記変性タンパク質が、β2グリコプロテインIの変性タンパク質である
(4)前記MHCクラスII分子が、HLA−DPを含み、前記変性タンパク質が、甲状腺刺激ホルモン受容体の変性タンパク質である - サンプルが、被検体から単離した生体試料であり、
請求項1から7のいずれか一項に記載の自己抗体の検出方法によって、前記サンプルにおける自己抗体とMHCクラスII分子により提示された変性タンパク質との複合体を検出する検出工程、および、
前記検出工程における前記複合体の検出結果から、自己免疫疾患の罹患の可能性を試験する試験工程を含むことを特徴とする、自己免疫疾患の罹患の可能性を試験する方法。 - 前記検出工程が、前記複合体の形成量を測定する測定工程である、請求項8記載の試験方法。
- 前記試験工程において、前記測定工程で測定した前記複合体形成量の測定値と基準値とを比較し、前記測定値が前記基準値よりも高い場合に、前記被験者は、前記自己免疫疾患の罹患可能性があるとし、
前記基準値が、健常者から単離した生体試料における前記複合体の形成量である、請求項9記載の試験方法。 - 請求項1から7のいずれか一項に記載の自己抗体の検出方法に用いる自己抗体の検出試薬であって、
MHCクラスII分子により提示された変性タンパク質を含み、
前記変性タンパク質が、正常フォールドタンパク質のフォールディングが変性したミスフォールドタンパク質であることを特徴とする、自己抗体の検出試薬。 - 請求項11記載の検出試薬の製造方法であり、
MHCクラスII分子の発現系細胞に、正常フォールドタンパク質をコードする遺伝子を導入することで、前記正常フォールドタンパク質が変性した前記変性タンパク質が提示されたMHCクラスII分子を調製する調製工程を含むことを特徴とする、検出試薬の製造方法。 - サンプルが、自己免疫疾患の被検体から単離した生体試料であり、
請求項1から7のいずれか一項に記載の自己抗体の検出方法によって、前記サンプルにおける自己抗体とMHCクラスII分子により提示された変性タンパク質との複合体を検出する検出工程、および、
前記自己抗体との前記複合体を形成した前記変性タンパク質を、前記自己免疫疾患に関連する自己抗体に対する抗原タンパク質と判断する判断工程を含むことを特徴とする、自己免疫疾患に関連する自己抗体に対する抗原タンパク質のスクリーニング方法。
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