JP6362209B2 - 抗血液凝固剤 - Google Patents
抗血液凝固剤 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6362209B2 JP6362209B2 JP2013273308A JP2013273308A JP6362209B2 JP 6362209 B2 JP6362209 B2 JP 6362209B2 JP 2013273308 A JP2013273308 A JP 2013273308A JP 2013273308 A JP2013273308 A JP 2013273308A JP 6362209 B2 JP6362209 B2 JP 6362209B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- lox
- factor
- binding
- antibody
- added
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
- A61K31/35—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom
- A61K31/352—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings, e.g. methantheline
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
- A61K31/35—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom
- A61K31/352—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings, e.g. methantheline
- A61K31/353—3,4-Dihydrobenzopyrans, e.g. chroman, catechin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/10—Immunoglobulins specific features characterized by their source of isolation or production
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Immunology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
本発明の抗血液凝固剤は、LOX−1と第V因子および第Va因子のうちの少なくとも一方との結合を阻害する結合阻害成分を含有することを特徴としている。
本発明の薬学的組成物は、上述の本発明の抗血液凝固剤を含有することを特徴としている。本発明の薬学的組成物によれば、LOX−1と第V因子または第Va因子との結合を阻害することで、LOX−1が関与しない血液凝固カスケードを保ったまま、LOX−1が関与する血液凝固反応を抑制することができるため、血栓症の防止に奏効することが期待される。
血漿中に含まれる、LOX−1に結合するタンパク質を同定した。
表面プラズモン共鳴によって、LOX−1タンパク質とFVおよびFVaとの結合の親和性を評価した。LOX−1タンパク質は、以下の方法によって調製した。まず、FreeStyle293細胞に、LOX−1プラスミド[内部にNM002543(61−273,aa)とpcDNA4と6×HisとIgκ secretion signalとを含んでいる]をトランスフェクトした。なお、Igκ secretion signalはpSecTag/FRT/V5−HisTOPO(Invitrogen)より得られた。そして、培養にてFreeStyle293細胞が分泌したLOX−1タンパク質を回収し、TALON Metal Affinity Resin(TAKARA)によるHis−tag精製を用いてエピトープタグ付組換えLOX−1タンパク質を調製した。FVおよびFVaはHaematologic Technologies Inc.より購入した(FVとしてはHuman Factor V:HCV−0100、FVaとしてはHuman Factor Va:HCVA−0110を用いた)。表面プラズモン共鳴はBiacore(GE Healthcare社製)を用いて行った。センサーチップにFVおよびFVaそれぞれを固相化したものを作製し、0〜400nMのLOX−1タンパク質を流速10μL/minにて流した。
LOX−1とFVおよびFVaとの結合活性をELISA(Enzyme Linked Immunosorbent Assay: 酵素免疫測定法)によって評価した。ELISAは以下のようにして行った。384ウェルプレート(Greiner社製)に5μg/mL/ウェルのLOX−1を4℃、over nightの条件で固相化した。3%BSA/10mM HEPES, 150mM NaCl,pH7.4でブロッキングを行った後、PBS(−)で2回洗浄した。上記プレートに抗LOX−1抗体、またはIgGを加えプレインキュベートを行い、PBS(−)で2回洗浄し、FVまたはFVaを加えて室温で、1時間反応させた。コントロールとして、LOX−1を固相化していないウェル、並びに、抗LOX−1抗体およびIgGのいずれも加えないウェルも作製した。なお、抗LOX−1抗体としては、HUC348(抗体1)、HUC52(抗体2)およびHUC52ヒト化抗体(抗体3)を用いた。
FVaのどの部位がLOX−1と結合しているのかをELISAによって特定した。ELISAは以下のようにして行った。384ウェルプレート(Greiner社製)に5μg/mL/ウェルのLOX−1を4℃、over nightの条件で固相化した。3%BSA/10mM HEPES, 150mM NaCl,pH7.4でブロッキングを行った後、PBS(−)で2回洗浄した。プレートにFVまたはFVaを加え、室温で、1時間反応させた。その後、抗L鎖抗体を加え、さらに2mMのCaCl2溶液または2mMのEDTAを加え、室温、1時間インキュベートした。そして、450nmでの吸光度を測定した。FVaは0μg/mL、0.03μg/mL、0.1μg/mL、0.3μg/mL、1μg/mLまたは3μg/mLの濃度で加えられた。また、LOX−1の代わりにコントロールとしてBSAを用いて同様の測定を行った。さらに、抗L鎖抗体の代わりに抗H鎖抗体を用いて同様の測定を行った。なお、抗L鎖抗体としてはHaematologic Technologies Inc.より購入したAnti-Human Factor V:AHV−5101、抗H鎖抗体としてはHaematologic Technologies Inc.より購入したAnti-Human Factor V:AHV−5146を用いた。
さらにFVのH鎖のどの部位がLOX−1と結合しているのかをELISAによって特定した。FVとしては以下の方法によって調製した組換えFVを用いた。まず、FreeStyle293細胞に、FV H鎖プラスミド[内部にNM000130.4(1−709,aa)とpcDNA3.3とV5−6×HisとIgκ secretion signalとを含んでいる]、FV A1タンパク質プラスミド[内部にNM000130.4(1−303,aa)とpEF6/V5−HisとIgκ secretion signalとを含んでいる]、またはFV A2タンパク質プラスミド[内部にNM000130.4(317−656,aa)とpcDNA3.3とV5−6×HisとIgκ secretion signalとを含んでいる]をトランスフェクトした。なお、Igκ secretion signalはpSecTag/FRT/V5−HisTOPO(Invitrogen)より得られた。そして、培養にてFreeStyle293細胞が分泌したFVのH鎖、A1またはA2を回収し、TALON Metal Affinity Resin(TAKARA)でHis−tag精製を用いて調製した。
さらにLOX−1とFVのH鎖のA2ドメインとの結合が抗LOX−1抗体によって抑制されることをELISAによって確認した。FVとしては実施例5と同様に組換えFVを用いた。抗LOX−1抗体としては、実施例3と同様にHUC348(抗体1)、HUC52(抗体2)およびHUC52ヒト化抗体(抗体3)を用いた。
抗LOX−1抗体による抗血液凝固作用をCa再加血液凝固試験によって確認した。ガラス試験管に組換えLOX−1タンパク質を0μg/mL、0.1μg/mL、0.3μg/mL、1μg/mL、3μg/mLまたは10μg/mLの濃度で加えた。組換えLOX−1タンパク質は実施例2と同様の方法によって得られた。さらに、上記試験管にクエン酸を用いて得られたヒト血漿を加えた。その後、試験管にCa2+を終濃度12.5mMで加えた。試験管を37℃の湯浴中でゆっくり振盪しながら、流動性を確認した。試験管を転倒しても凝固塊が落ちない状態になるまでの時間を凝固時間として測定した。また、組換えLOX−1タンパク質1μg/mLとともに、IgGまたは抗LOX−1抗体を10μg/mL加えた場合についても同様に凝固時間を測定した。さらに組換えLOX−1タンパク質を添加しなかった場合についても同様に凝固時間を測定した。抗LOX−1抗体としては、実施例3と同様にHUC348(抗体1)、HUC52(抗体2)およびHUC52ヒト化抗体(抗体3)を用いた。
FV欠損血漿における凝固反応をCa再加血液凝固試験によって確認した。プラスチック試験管に組換えLOX−1タンパク質を10μg/mLの濃度で加え、固相化した。上記試験管にFVまたはFVaを1μg/mLの濃度で添加した。LOX−1タンパク質に結合していないFVおよびFVaは洗浄して除去した。さらに、上記試験管にFV欠損血漿を加えた。その後、試験管にCa2+を終濃度12.5mMで加え、実施例7と同様に凝固時間を測定した。また、LOX−1の代わりにDectin−1を加えた場合、および、LOX−1もDectin−1も加えなかった場合についても同様に凝固時間を測定した。
プロシアニジンによる抗血液凝固作用をCa再加血液凝固試験によって確認した。ガラス試験管に組換えLOX−1タンパク質1μg/mLおよびプロシアニジン1μg/mLを加えた。その後、実施例8と同様にヒト血漿およびCa2+を加え、凝固時間を測定した。また、プロシアニジンを加えなかった場合についても同様に凝固時間を測定した。さらに組換えLOX−1タンパク質を添加しなかった場合についても同様に凝固時間を測定した。
Claims (3)
- LOX−1と第V因子および第Va因子のうちの少なくとも一方との結合を阻害する結合阻害成分を含有し、
上記結合阻害成分は、抗LOX−1抗体であることを特徴とする抗血液凝固剤。 - 上記結合阻害成分は、LOX−1と、第V因子および第Va因子のうちの少なくとも一方のH鎖との結合を阻害する結合阻害成分であることを特徴とする請求項1に記載の抗血液凝固剤。
- 上記結合阻害成分は、LOX−1と第V因子および第Va因子のうちの少なくとも一方のA2ドメインとの結合を阻害する結合阻害成分であることを特徴とする請求項2に記載の抗血液凝固剤。
Priority Applications (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2013273308A JP6362209B2 (ja) | 2013-12-27 | 2013-12-27 | 抗血液凝固剤 |
US15/107,573 US20170015744A1 (en) | 2013-12-27 | 2014-12-23 | Anticoagulant |
PCT/JP2014/084013 WO2015098901A1 (ja) | 2013-12-27 | 2014-12-23 | 抗血液凝固剤 |
US15/900,341 US20180186877A1 (en) | 2013-12-27 | 2018-02-20 | Method for suppressing blood coagulation reaction for which lox-1 is responsible |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2013273308A JP6362209B2 (ja) | 2013-12-27 | 2013-12-27 | 抗血液凝固剤 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2015127309A JP2015127309A (ja) | 2015-07-09 |
JP6362209B2 true JP6362209B2 (ja) | 2018-07-25 |
Family
ID=53478754
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2013273308A Active JP6362209B2 (ja) | 2013-12-27 | 2013-12-27 | 抗血液凝固剤 |
Country Status (3)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US20170015744A1 (ja) |
JP (1) | JP6362209B2 (ja) |
WO (1) | WO2015098901A1 (ja) |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
UY35620A (es) | 2013-06-21 | 2015-01-30 | Novartis Ag | Anticuerpos del receptor 1 de ldl oxidado similar a lectina y métodos de uso |
AR096601A1 (es) | 2013-06-21 | 2016-01-20 | Novartis Ag | Anticuerpos del receptor 1 de ldl oxidado similar a lectina y métodos de uso |
CN115698713A (zh) * | 2020-03-30 | 2023-02-03 | 国立大学法人信州大学 | 改性hdl的定量方法以及用于该定量方法的分析用试剂 |
Family Cites Families (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2753686B2 (ja) * | 1994-09-02 | 1998-05-20 | 工業技術院長 | 血液凝固阻害物質及び機能性食品 |
CN1096834C (zh) * | 1996-09-20 | 2002-12-25 | 霍华德基金会 | 含黄酮醇的食品增补剂 |
JP4497586B2 (ja) * | 1998-08-06 | 2010-07-07 | 達也 沢村 | 酸化ldl受容体に対する抗体を含んでなる医薬組成物 |
WO2001064862A1 (fr) * | 2000-03-02 | 2001-09-07 | Abgenix, Inc. | Anticorps monoclonaux humains diriges contre le recepteur des ldl oxydees, et utilisation medicale associee |
JP2002326956A (ja) * | 2001-05-01 | 2002-11-15 | Tatsuya Sawamura | 抗血栓剤 |
JP2009013080A (ja) * | 2007-07-02 | 2009-01-22 | Pokka Corp | 血管内皮機能改善剤及び一酸化窒素産生促進剤 |
WO2010147171A1 (ja) * | 2009-06-18 | 2010-12-23 | 株式会社広島バイオメディカル | ニワトリ由来抗lox-1抗体 |
JP5569716B2 (ja) * | 2009-06-23 | 2014-08-13 | 独立行政法人国立循環器病研究センター | レクチン様酸化ldl受容体阻害用医薬品 |
-
2013
- 2013-12-27 JP JP2013273308A patent/JP6362209B2/ja active Active
-
2014
- 2014-12-23 US US15/107,573 patent/US20170015744A1/en not_active Abandoned
- 2014-12-23 WO PCT/JP2014/084013 patent/WO2015098901A1/ja active Application Filing
-
2018
- 2018-02-20 US US15/900,341 patent/US20180186877A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US20180186877A1 (en) | 2018-07-05 |
US20170015744A1 (en) | 2017-01-19 |
WO2015098901A1 (ja) | 2015-07-02 |
JP2015127309A (ja) | 2015-07-09 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
TWI743039B (zh) | 凝血因子xi抗體及使用方法 | |
US7981415B2 (en) | Humanized PAI-1 antibodies | |
US20200129600A1 (en) | Combination therapy using a factor xii inhibitor and a c-1 inhibitor | |
Purdy et al. | P‐and E‐selectin in venous thrombosis and non‐venous pathologies | |
US7771720B2 (en) | Humanized PAI-1 antibodies | |
JP6705785B2 (ja) | トロンビン結合性抗体分子及びその使用 | |
CA2402596A1 (en) | Anti-tissue factor antibodies with enhanced anticoagulant potency | |
McKenzie et al. | Sustained inhibition of whole-blood clot procoagulant activity by inhibition of thrombus-associated factor Xa | |
AU2001250814A1 (en) | Anti-tissue factor antibodies with enhanced anticoagulant potency | |
US20090148383A1 (en) | Anticoagulation Agent and Uses Thereof | |
US7435413B2 (en) | Anti-tissue factor antibodies with enhanced anticoagulant potency | |
CN114478782B (zh) | 抗凝血因子xi抗体 | |
JP6362209B2 (ja) | 抗血液凝固剤 | |
KR20180132831A (ko) | 죽상동맥경화증의 치료 방법 | |
JP2007070359A (ja) | 止血疾患治療用の医薬組成物 | |
US10919967B2 (en) | Antibodies against Mac-1 | |
JP2009503009A (ja) | 抗血小板剤としての直接的および間接的エフェクター細胞プロテアーゼ受容体−1(epr−1)阻害剤 | |
US20030124117A1 (en) | Combinations of anti-tissue factor antibodies and anticoagulant and/or antiplatelet agents | |
US20030143225A1 (en) | Combinations of anti-tissue factor antibodies and anticoagulant and/or antiplatelet agents | |
JP2023532251A (ja) | 抗FXI/FXIa抗体、その抗原結合断片と医薬用途 | |
JP2007505862A (ja) | sPLA2の効果の失効方法 | |
WO2012110843A1 (en) | Methods and pharmaceutical compositions for promoting fibrinolysis and thrombolysis | |
JP2023125047A (ja) | Clec-2および/またはgpviの拮抗剤 | |
JP2017507176A (ja) | Tafiおよびpai−1の二重標的化 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20161227 |
|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20161227 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20161227 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20171031 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20171227 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20180403 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20180517 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20180605 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20180622 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6362209 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
S531 | Written request for registration of change of domicile |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313531 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |