JP2002326956A - 抗血栓剤 - Google Patents
抗血栓剤Info
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- JP2002326956A JP2002326956A JP2001134741A JP2001134741A JP2002326956A JP 2002326956 A JP2002326956 A JP 2002326956A JP 2001134741 A JP2001134741 A JP 2001134741A JP 2001134741 A JP2001134741 A JP 2001134741A JP 2002326956 A JP2002326956 A JP 2002326956A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 新規な抗血栓剤を提供する。
【解決手段】 酸化ＬＤＬ受容体に結合して、該酸化Ｌ
ＤＬ受容体の生体内における血小板凝集作用を阻害する
物質（例、酸化ＬＤＬ受容体の抗体）を有効成分として
含む抗血栓剤。
ＤＬ受容体の生体内における血小板凝集作用を阻害する
物質（例、酸化ＬＤＬ受容体の抗体）を有効成分として
含む抗血栓剤。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、新規な抗血栓剤に
関するものである。
関するものである。
【０００２】
【従来の技術】レクチン様の酸化低密度リポ蛋白質受容
体である酸化ＬＤＬ受容体は、本発明者によって初め
て、哺乳動物の血管内皮細胞から取り出され、その化学
構造が決定された物質であり、既に、ネイチャー、３８
６、７３−７７、及び特開平９−９８７８７号公報など
に、その化学構造及び諸特性が開示されている。
体である酸化ＬＤＬ受容体は、本発明者によって初め
て、哺乳動物の血管内皮細胞から取り出され、その化学
構造が決定された物質であり、既に、ネイチャー、３８
６、７３−７７、及び特開平９−９８７８７号公報など
に、その化学構造及び諸特性が開示されている。
【０００３】上記の酸化ＬＤＬ受容体の生体内における
役割については、その後も、本発明者等によって研究が
続けられ、その結果、酸化ＬＤＬ受容体の生体内におけ
る様々な機能が判明してきている。例えば、特開平２０
００−１０９４３５には、酸化ＬＤＬ受容体への血小板
もしくは活性化血小板の結合、または該酸化ＬＤＬ受容
体を発現する細胞による血小板もしくは活性化血小板の
取り込み作用に注目して、生体内でのそれらの酸化ＬＤ
Ｌ受容体の作用を阻害する物質（例、抗体）を利用す
る、血小板減少を伴う疾患の治療剤、腎臓疾患治療剤、
白血球組織浸潤阻害剤（例、動脈硬化治療剤、心筋虚血
再潅流障害治療剤、あるいは経皮的冠動脈血栓溶解手術
の術後もしくは経皮的冠血管形成手術の術後の炎症反応
の治療剤）などへの利用可能性が明らかにされている。
役割については、その後も、本発明者等によって研究が
続けられ、その結果、酸化ＬＤＬ受容体の生体内におけ
る様々な機能が判明してきている。例えば、特開平２０
００−１０９４３５には、酸化ＬＤＬ受容体への血小板
もしくは活性化血小板の結合、または該酸化ＬＤＬ受容
体を発現する細胞による血小板もしくは活性化血小板の
取り込み作用に注目して、生体内でのそれらの酸化ＬＤ
Ｌ受容体の作用を阻害する物質（例、抗体）を利用す
る、血小板減少を伴う疾患の治療剤、腎臓疾患治療剤、
白血球組織浸潤阻害剤（例、動脈硬化治療剤、心筋虚血
再潅流障害治療剤、あるいは経皮的冠動脈血栓溶解手術
の術後もしくは経皮的冠血管形成手術の術後の炎症反応
の治療剤）などへの利用可能性が明らかにされている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、上記の酸化
ＬＤＬ受容体の新規な用途を提供するものであり、特に
新規な抗血栓剤を提供することにある。
ＬＤＬ受容体の新規な用途を提供するものであり、特に
新規な抗血栓剤を提供することにある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者は、上記酸化Ｌ
ＤＬ受容体の生体内における存在および役割の研究をさ
らに進める過程に於いて、該酸化ＬＤＬ受容体が血小板
に発現することを初めて発見し、さらに血小板の該酸化
ＬＤＬ受容体に基づいて血小板の凝集を強く引き起こす
ことを見出した。
ＤＬ受容体の生体内における存在および役割の研究をさ
らに進める過程に於いて、該酸化ＬＤＬ受容体が血小板
に発現することを初めて発見し、さらに血小板の該酸化
ＬＤＬ受容体に基づいて血小板の凝集を強く引き起こす
ことを見出した。
【０００６】従って、本発明は、酸化ＬＤＬ受容体に結
合して、該酸化ＬＤＬ受容体の生体内における血小板凝
集作用を阻害する物質を有効成分として含む抗血栓剤
を、その要旨とするものである。
合して、該酸化ＬＤＬ受容体の生体内における血小板凝
集作用を阻害する物質を有効成分として含む抗血栓剤
を、その要旨とするものである。
【０００７】上記の血小板凝集作用阻害物質の例として
は、該酸化ＬＤＬ受容体の抗体あるいは拮抗物質（アン
タゴニスト）を挙げることができる。
は、該酸化ＬＤＬ受容体の抗体あるいは拮抗物質（アン
タゴニスト）を挙げることができる。
【０００８】
【０００９】本発明の血小板凝集作用阻害物質の投与方
法は、経口投与でも非経口投与でもよい。経口投与剤の
剤型としては、錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤および
シロップ剤が挙げられる。非経口投与の方法としては、
粘膜投与、体表投与、血管投与および組織内投与があ
る。粘膜投与の場合は、点眼剤、吸入剤、噴霧剤あるい
は座剤として使用する。体表投与の場合は、軟膏剤とし
て使用する。血管投与および組織内投与の場合は、注射
剤として使用する。
法は、経口投与でも非経口投与でもよい。経口投与剤の
剤型としては、錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤および
シロップ剤が挙げられる。非経口投与の方法としては、
粘膜投与、体表投与、血管投与および組織内投与があ
る。粘膜投与の場合は、点眼剤、吸入剤、噴霧剤あるい
は座剤として使用する。体表投与の場合は、軟膏剤とし
て使用する。血管投与および組織内投与の場合は、注射
剤として使用する。
【００１０】上記経口投与剤の製造は、通常の賦形剤、
崩壊剤、結合剤、滑沢剤、色素や希釈剤を用いて行なう
ことができる。賦形剤としては、ブドウ糖や乳糖が一般
に使用される。崩壊剤の例には、澱粉およびカルボキシ
メチルセルロースカルシウムが含まれる。滑沢剤として
は、ステアリン酸マグネシウムおよびタルクが挙げられ
る。結合剤としては、ヒドロキシプロピルセルロース、
ゼラチンおよびポリビニルアルコールが用いられる。非
経口投与製剤も通常の方法で製造できる。例えば、注射
剤の場合、通常の注射用蒸留水、生理食塩水あるいはリ
ンゲル液を用いればよい。
崩壊剤、結合剤、滑沢剤、色素や希釈剤を用いて行なう
ことができる。賦形剤としては、ブドウ糖や乳糖が一般
に使用される。崩壊剤の例には、澱粉およびカルボキシ
メチルセルロースカルシウムが含まれる。滑沢剤として
は、ステアリン酸マグネシウムおよびタルクが挙げられ
る。結合剤としては、ヒドロキシプロピルセルロース、
ゼラチンおよびポリビニルアルコールが用いられる。非
経口投与製剤も通常の方法で製造できる。例えば、注射
剤の場合、通常の注射用蒸留水、生理食塩水あるいはリ
ンゲル液を用いればよい。
【００１１】本発明の抗血栓剤の投与量は、血小板凝集
作用阻害物質換算の投与量として、通常成人において、
注射剤で一日０．０１乃至５００ｍｇ、経口投与で一日
１乃至１０００ｍｇである。もちろん、投与量は、該阻
害物質の種類、さらに年齢、人種、症状などに応じて増
減する。
作用阻害物質換算の投与量として、通常成人において、
注射剤で一日０．０１乃至５００ｍｇ、経口投与で一日
１乃至１０００ｍｇである。もちろん、投与量は、該阻
害物質の種類、さらに年齢、人種、症状などに応じて増
減する。
【００１２】
【実施例】［実施例１］ヒト血小板上での酸化ＬＤＬ受
容体の発現 従来ＬＯＸ−１（酸化ＬＤＬ受容体）が内皮細胞あるい
はマクロファージに発現することは知られていたが、Ｌ
ＯＸ−１は血小板にも発現することが、下記の実験より
判明した。すなわち、ヒト血小板ｍＲＮＡの下記ＲＴ−
ＰＣＲ分析により、ＬＯＸ−１ｍＲＮＡの存在が明らか
となった。同様な条件下でヒト循環血の単球、白血球、
好中球にはＬＯＸ−１ｍＲＮＡは検出されず、血小板の
ＬＯＸ−１シグナルは確実であることが証明される。ま
た、血小板産生細胞として知られる巨核球細胞、ＨＥ
Ｌ、ＭＥＧ−０１及びＭＥＧ−０１ｓにおいてもＬＯＸ
−１の発現が同定された（第１図：ｍＲＮＡ）。ＨＥＬ
細胞では、巨核球細胞の分化を誘起するＤＭＳＯにより
ＬＯＸ−１の発現は増大した。ウエスタンブロット分析
により、血小板及び巨核球細胞系におけるＬＯＸ−１ｍ
ＲＮＡのたんぱく質への翻訳が確認された。ヒト血小板
及び巨核球におけるＬＯＸ−１たんぱく質は約４５Ｋｄ
ａたんぱく質として検出され（第１図ＰＲＯＴＥＩ
Ｎ）、トランスフェクション細胞及び動脈内皮細胞の場
合と一致している。
容体の発現 従来ＬＯＸ−１（酸化ＬＤＬ受容体）が内皮細胞あるい
はマクロファージに発現することは知られていたが、Ｌ
ＯＸ−１は血小板にも発現することが、下記の実験より
判明した。すなわち、ヒト血小板ｍＲＮＡの下記ＲＴ−
ＰＣＲ分析により、ＬＯＸ−１ｍＲＮＡの存在が明らか
となった。同様な条件下でヒト循環血の単球、白血球、
好中球にはＬＯＸ−１ｍＲＮＡは検出されず、血小板の
ＬＯＸ−１シグナルは確実であることが証明される。ま
た、血小板産生細胞として知られる巨核球細胞、ＨＥ
Ｌ、ＭＥＧ−０１及びＭＥＧ−０１ｓにおいてもＬＯＸ
−１の発現が同定された（第１図：ｍＲＮＡ）。ＨＥＬ
細胞では、巨核球細胞の分化を誘起するＤＭＳＯにより
ＬＯＸ−１の発現は増大した。ウエスタンブロット分析
により、血小板及び巨核球細胞系におけるＬＯＸ−１ｍ
ＲＮＡのたんぱく質への翻訳が確認された。ヒト血小板
及び巨核球におけるＬＯＸ−１たんぱく質は約４５Ｋｄ
ａたんぱく質として検出され（第１図ＰＲＯＴＥＩ
Ｎ）、トランスフェクション細胞及び動脈内皮細胞の場
合と一致している。
【００１３】（１）ヒト血小板の調製 健常者から得た静脈血に、１／１０の比率にて３．８％
（ｗ／ｖ）のクエン酸ナトリウムを加え、室温にて１０
分間、２００Ｇにて遠心分離して、多血小板血漿（ＦＲ
Ｐ）を得た。有核細胞のコンタミネーションを除くた
め、ＦＲＰの上層１／３を別のチューブに移した。次い
で、ＰＲＰを１０％ＡＣＤ緩衝液（０．８％クエン酸、
２．２％クエン酸ナトリウム、及び２．４％デキストロ
ース）の存在下、１５分間、１０００Ｇで遠心分離し、
血小板ペレットを得た。このペレットを、Ｃａ2+を含ま
ないタイロード緩衝液（ＮａＣｌ：１３４ミリモル／
Ｌ、ＫＣｌ：２．７ミリモル／Ｌ、ＭｇＣｌ2：１．０
モリモル／Ｌ、ＮａＨＣＯ3：１１．９ミロモル／Ｌ、
ＮａＨ2ＰＯ4：０．３５ミリモル／Ｌ、Ｄ−グルコー
ス：５．５ミリモル／Ｌ、ＢＳＡ：３．５ｍｇ／ｍＬ、
ＨＥＰＥＳ：５．０ミリモル／Ｌ、ｐＨ７．４）で二回
洗浄し、最後に各実験に適した緩衝液中に再懸濁させ
た。活性化に際しては、血小板を１ミリモル／ＬのＣａ
Ｃｌ2含有タイロード緩衝液中でトロンビンと室温にて
１５分間インキュベートした。
（ｗ／ｖ）のクエン酸ナトリウムを加え、室温にて１０
分間、２００Ｇにて遠心分離して、多血小板血漿（ＦＲ
Ｐ）を得た。有核細胞のコンタミネーションを除くた
め、ＦＲＰの上層１／３を別のチューブに移した。次い
で、ＰＲＰを１０％ＡＣＤ緩衝液（０．８％クエン酸、
２．２％クエン酸ナトリウム、及び２．４％デキストロ
ース）の存在下、１５分間、１０００Ｇで遠心分離し、
血小板ペレットを得た。このペレットを、Ｃａ2+を含ま
ないタイロード緩衝液（ＮａＣｌ：１３４ミリモル／
Ｌ、ＫＣｌ：２．７ミリモル／Ｌ、ＭｇＣｌ2：１．０
モリモル／Ｌ、ＮａＨＣＯ3：１１．９ミロモル／Ｌ、
ＮａＨ2ＰＯ4：０．３５ミリモル／Ｌ、Ｄ−グルコー
ス：５．５ミリモル／Ｌ、ＢＳＡ：３．５ｍｇ／ｍＬ、
ＨＥＰＥＳ：５．０ミリモル／Ｌ、ｐＨ７．４）で二回
洗浄し、最後に各実験に適した緩衝液中に再懸濁させ
た。活性化に際しては、血小板を１ミリモル／ＬのＣａ
Ｃｌ2含有タイロード緩衝液中でトロンビンと室温にて
１５分間インキュベートした。
【００１４】（２）細胞培養 ヒト巨核球細胞、ＨＥＬ、ＭＥＧ−０、そしてＭＥＧ−
１ｓを１０％ＦＣＳを補充したＲＰＭＩ１６４０培養液
（ＧＩＢＣＯ）中で培養した。ＨＥＬ細胞は、１．２５
％（ｖ／ｖ）のジメチルスルホキシドで処理して、巨核
球に分化誘導した。４８時間培養した後、細胞を採取し
て、下記の分析を行なった。 （３）ＲＴ−ＰＣＲ分析 上記の細胞から全ＲＮＡ１μｇを分離し、沢村らの文献
に記載の方法に従い、５０μＬの反応混合物中でｃＤＮ
Ａに逆転写した。反応の５％を、ＬＡ−Ｔａｃ・ＤＮＡ
ポリメラーゼ（タカラ製）により、ヒトＬＯＸ−１・ｃ
ＤＮＡに特異的なプライマー対（センスプライマー：
５’−ｔｇｃｃｔｇｇｇａｔｔａｇｔａｇｔｇａｃｃ−
３’；アンチセンスプライマー：５’−ｃｃａｇｔｔａ
ａａｔｇａｇｃｃｃｇａｇｇ−３’）を用いて増幅し
た。ＰＣＲプロファイルは、９４℃、４０秒；５６℃、
１分；６８℃、１分を１サイクルとして、３５サイクル
にセットした。
１ｓを１０％ＦＣＳを補充したＲＰＭＩ１６４０培養液
（ＧＩＢＣＯ）中で培養した。ＨＥＬ細胞は、１．２５
％（ｖ／ｖ）のジメチルスルホキシドで処理して、巨核
球に分化誘導した。４８時間培養した後、細胞を採取し
て、下記の分析を行なった。 （３）ＲＴ−ＰＣＲ分析 上記の細胞から全ＲＮＡ１μｇを分離し、沢村らの文献
に記載の方法に従い、５０μＬの反応混合物中でｃＤＮ
Ａに逆転写した。反応の５％を、ＬＡ−Ｔａｃ・ＤＮＡ
ポリメラーゼ（タカラ製）により、ヒトＬＯＸ−１・ｃ
ＤＮＡに特異的なプライマー対（センスプライマー：
５’−ｔｇｃｃｔｇｇｇａｔｔａｇｔａｇｔｇａｃｃ−
３’；アンチセンスプライマー：５’−ｃｃａｇｔｔａ
ａａｔｇａｇｃｃｃｇａｇｇ−３’）を用いて増幅し
た。ＰＣＲプロファイルは、９４℃、４０秒；５６℃、
１分；６８℃、１分を１サイクルとして、３５サイクル
にセットした。
【００１５】［実施例２］酸化ＬＤＬ受容体による血栓
形成促進作用の確認 （１）ヒト血小板の調製 実施例１の（１）と同様にしてヒト血小板を調製した。
形成促進作用の確認 （１）ヒト血小板の調製 実施例１の（１）と同様にしてヒト血小板を調製した。
【００１６】（２）血小板結合アッセイ 血小板を１μＭカルセイン−アセトキシメチルエステル
（モレキュラー・プローブ・インコーポレイテッド製）
と共に、３７℃にて３０分間インキュベートして、蛍光
標識した血小板試料を得た。次に、過剰のカルセイン−
アセトキシメチルエステルを除くため、蛍光標識血小板
試料を０．３％ＢＳＡ（シグマ社製）含有ヘペス（Ｈｅ
ｐｅｓ）−タイロード緩衝液で二回洗浄した。次いで、
血小板試料の密度を１０％新生ウシ血清（ＮＢＣＳ）
（ギブコ社製）含有ヘペス−タイロード緩衝液で調整し
て、１×１０8血小板／ｍＬとした。
（モレキュラー・プローブ・インコーポレイテッド製）
と共に、３７℃にて３０分間インキュベートして、蛍光
標識した血小板試料を得た。次に、過剰のカルセイン−
アセトキシメチルエステルを除くため、蛍光標識血小板
試料を０．３％ＢＳＡ（シグマ社製）含有ヘペス（Ｈｅ
ｐｅｓ）−タイロード緩衝液で二回洗浄した。次いで、
血小板試料の密度を１０％新生ウシ血清（ＮＢＣＳ）
（ギブコ社製）含有ヘペス−タイロード緩衝液で調整し
て、１×１０8血小板／ｍＬとした。
【００１７】ＨＬＯＸ−１−ＣＨＯ及びＣＨ０−Ｋ１を
培養液で二回洗浄し、血小板と一緒にして３７℃で６０
分間培養した。非結合血小板は細胞をＰＢＳで三回洗浄
して除去した。次いで、細胞を採取し、フローサイトメ
トリー（ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ、ベクトン−ディッキ
ンソン社製）により分析した。血小板の細胞への結合は
１０，０００細胞当りの蛍光強度の合計の増加として表
わした（ＦＬ−１−Ｈ：励起：４８８ｎｍ、発光：５１
５−５４５ｎｍ）。
培養液で二回洗浄し、血小板と一緒にして３７℃で６０
分間培養した。非結合血小板は細胞をＰＢＳで三回洗浄
して除去した。次いで、細胞を採取し、フローサイトメ
トリー（ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ、ベクトン−ディッキ
ンソン社製）により分析した。血小板の細胞への結合は
１０，０００細胞当りの蛍光強度の合計の増加として表
わした（ＦＬ−１−Ｈ：励起：４８８ｎｍ、発光：５１
５−５４５ｎｍ）。
【００１８】得られた結果を第２図に示す。第２図にお
いて、「Ｒｅｓｔｉｎｇ」は、非活性血小板を表わし、
「Ａｃｔｉｖａｔｅｄ」は、活性化血小板を表わし、そ
して「Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｏｆ ｂｏｕｎｄ
Ｄｉｌ−ＯｘＬＤＬ（Ｕｎｉｔ）」は、結合した希釈酸
化ＬＤＬの蛍光量（単位）を表わす。
いて、「Ｒｅｓｔｉｎｇ」は、非活性血小板を表わし、
「Ａｃｔｉｖａｔｅｄ」は、活性化血小板を表わし、そ
して「Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｏｆ ｂｏｕｎｄ
Ｄｉｌ−ＯｘＬＤＬ（Ｕｎｉｔ）」は、結合した希釈酸
化ＬＤＬの蛍光量（単位）を表わす。
【００１９】第２図に示した結果から、活性化血小板に
おいて、ＩｇＧの添加系では、不添加系（コントロー
ル）に対して有意な血小板凝集阻害作用を示さないが、
抗ＬＯＸ−１（抗酸化ＬＤＬ受容体）添加系では、顕著
な血小板凝集阻害作用を示すことが分る。なお、このよ
うな抗ＬＯＸ−１（抗酸化ＬＤＬ受容体）添加による顕
著な血小板凝集阻害作用は、非活性な血小板については
観察されない。
おいて、ＩｇＧの添加系では、不添加系（コントロー
ル）に対して有意な血小板凝集阻害作用を示さないが、
抗ＬＯＸ−１（抗酸化ＬＤＬ受容体）添加系では、顕著
な血小板凝集阻害作用を示すことが分る。なお、このよ
うな抗ＬＯＸ−１（抗酸化ＬＤＬ受容体）添加による顕
著な血小板凝集阻害作用は、非活性な血小板については
観察されない。
【００２０】（３）出血時間の測定 ラットをウレタン（１．３ｇ／ｋｇ）腹腔内注射で麻酔
し、３７℃にて保温した。３０分後、ラットの尾を末端
から５ｍｍの位置で剃刀で切断した。そして、出血の継
続を、血液を１５秒間毎にろ紙に吸収させて確認するこ
とによりモニターした。これをコントロール（対照）と
した。
し、３７℃にて保温した。３０分後、ラットの尾を末端
から５ｍｍの位置で剃刀で切断した。そして、出血の継
続を、血液を１５秒間毎にろ紙に吸収させて確認するこ
とによりモニターした。これをコントロール（対照）と
した。
【００２１】同様にラットに麻酔処理し、その尾の切断
６０分前に、酸化ＬＤＬ受容体抗体を尾静脈から投与し
た（１０ｍｇ／ｋｇ）。実験後、腹部動脈から血漿を採
取した。そして、血漿中のＰＴ（プロトロンビン時間）
及びＡＰＴＴ（活性化部分トロンボプラスチノン時間）
を自動凝固計（ＳＴＳｃｏｍｐａｃｔ、ロシュ社（スイ
ス）製）を用いて測定した。
６０分前に、酸化ＬＤＬ受容体抗体を尾静脈から投与し
た（１０ｍｇ／ｋｇ）。実験後、腹部動脈から血漿を採
取した。そして、血漿中のＰＴ（プロトロンビン時間）
及びＡＰＴＴ（活性化部分トロンボプラスチノン時間）
を自動凝固計（ＳＴＳｃｏｍｐａｃｔ、ロシュ社（スイ
ス）製）を用いて測定した。
【００２２】これらの結果を、第３図の（ａ）、
（ｂ）、（ｃ）に示す。第３図の（ａ）から、酸化ＬＤ
Ｌ受容体抗体（ａｎｔｉ−ＬＯＸ）の投与により、出血
時間が延長され、従って、血栓の発生の抑制が実現して
いることが分る。また、第３図の（ｂ）と（ｃ）から、
血漿中のＰＴ（プロトロンビン時間）及びＡＰＴＴ（活
性化部分トロンボプラスチノン時間）は、酸化ＬＤＬ受
容体抗体の投与による影響を受けないことが分る。これ
は、内因性及び外因性凝集カスケードは、該抗体による
影響を殆ど受けていないことを示唆している。従って、
出血時間延長効果については、血小板と酸化ＬＤＬ受容
体との相互作用の影響が、血小板の凝集作用の影響より
大きいと理解される。
（ｂ）、（ｃ）に示す。第３図の（ａ）から、酸化ＬＤ
Ｌ受容体抗体（ａｎｔｉ−ＬＯＸ）の投与により、出血
時間が延長され、従って、血栓の発生の抑制が実現して
いることが分る。また、第３図の（ｂ）と（ｃ）から、
血漿中のＰＴ（プロトロンビン時間）及びＡＰＴＴ（活
性化部分トロンボプラスチノン時間）は、酸化ＬＤＬ受
容体抗体の投与による影響を受けないことが分る。これ
は、内因性及び外因性凝集カスケードは、該抗体による
影響を殆ど受けていないことを示唆している。従って、
出血時間延長効果については、血小板と酸化ＬＤＬ受容
体との相互作用の影響が、血小板の凝集作用の影響より
大きいと理解される。
【００２３】（４）光化学誘発血栓（ＰＩＴ）モデル 体重３５０ｇの雄性Ｌｅｗｉｓラット（チャールスリバ
ー）に、チオバルビタール（和光純薬株式会社製）を腹
腔投与して（１００ｍｇ／ｋｇ）、麻酔を行なってＰＩ
Ｔモデルを得た。このラットを仰臥固定し、左大腿動脈
を露出させ、血流モニターのため、鼠径部靭帯の末端部
に、パルス−ドップラーフロープローブ（Ｍｏｄｅｌ
ＰＤＶ−２０、クリスタル・ビオテック・アメリカン社
製）を装着した。次いで、血圧と心拍数をモニターし、
また抗体を注入するため、反対側の大腿動脈および静脈
にそれぞれポリエチレンチューブを挿入した。フロープ
ローブに近い方の右大腿動脈に、キセノンランプ（ｍｏ
ｄｅｌ Ｌ−４８８７、浜松フォトニクス株式会社製）
を用いて、緑色光（５４０ｎｍ）を照射した。次いで、
ローズベンガル溶液を左大腿動脈から注入した（２０ｍ
ｇ／ｋｇ）。１０分後に、緑色光の照射を止め、血流モ
ニタリングを９０分間行なった。
ー）に、チオバルビタール（和光純薬株式会社製）を腹
腔投与して（１００ｍｇ／ｋｇ）、麻酔を行なってＰＩ
Ｔモデルを得た。このラットを仰臥固定し、左大腿動脈
を露出させ、血流モニターのため、鼠径部靭帯の末端部
に、パルス−ドップラーフロープローブ（Ｍｏｄｅｌ
ＰＤＶ−２０、クリスタル・ビオテック・アメリカン社
製）を装着した。次いで、血圧と心拍数をモニターし、
また抗体を注入するため、反対側の大腿動脈および静脈
にそれぞれポリエチレンチューブを挿入した。フロープ
ローブに近い方の右大腿動脈に、キセノンランプ（ｍｏ
ｄｅｌ Ｌ−４８８７、浜松フォトニクス株式会社製）
を用いて、緑色光（５４０ｎｍ）を照射した。次いで、
ローズベンガル溶液を左大腿動脈から注入した（２０ｍ
ｇ／ｋｇ）。１０分後に、緑色光の照射を止め、血流モ
ニタリングを９０分間行なった。
【００２４】上記の操作を、コントロール（対照）とし
て、ＩｇＧを投与した系（投与は光照射６０分前に、投
与量１０ｍｇ／ｋｇにて実施）、と酸化ＬＤＬ受容体抗
体（ａｎｔｉ−ＬＯＸ）を投与した系（投与は同じく、
光照射６０分前に、投与量１０ｍｇ／ｋｇにて実施）に
て実施した。その結果を第４図と第５図に示す。第４図
の結果は、動脈損傷後の閉塞までの時間が抗酸化ＬＤＬ
受容体抗体の投与により延長されることが示唆している
（但し、これらのデータの統計処理結果からは有意な差
と結論することはできなかった）。一方、第５図の結果
は、７匹の対照のラット（ｎ＝７）については、その多
くが、動脈損傷後に速やかに血管が閉塞するのに対し
て、５匹（ｎ＝５）の酸化ＬＤＬ受容体抗体投与のラッ
トでは、一時的に閉塞することがあるにしても、酸化Ｌ
ＤＬ受容体抗体による血栓形成抑制作用のため、すぐに
閉塞が解け、血流の循環が継続することを意味してい
る。
て、ＩｇＧを投与した系（投与は光照射６０分前に、投
与量１０ｍｇ／ｋｇにて実施）、と酸化ＬＤＬ受容体抗
体（ａｎｔｉ−ＬＯＸ）を投与した系（投与は同じく、
光照射６０分前に、投与量１０ｍｇ／ｋｇにて実施）に
て実施した。その結果を第４図と第５図に示す。第４図
の結果は、動脈損傷後の閉塞までの時間が抗酸化ＬＤＬ
受容体抗体の投与により延長されることが示唆している
（但し、これらのデータの統計処理結果からは有意な差
と結論することはできなかった）。一方、第５図の結果
は、７匹の対照のラット（ｎ＝７）については、その多
くが、動脈損傷後に速やかに血管が閉塞するのに対し
て、５匹（ｎ＝５）の酸化ＬＤＬ受容体抗体投与のラッ
トでは、一時的に閉塞することがあるにしても、酸化Ｌ
ＤＬ受容体抗体による血栓形成抑制作用のため、すぐに
閉塞が解け、血流の循環が継続することを意味してい
る。
【００２５】
【発明の効果】本発明の、酸化ＬＤＬ受容体に結合し
て、該酸化ＬＤＬ受容体の生体内における血小板凝集作
用を阻害する物質（例、酸化ＬＤＬ受容体の抗体）を投
与することにより、生体内の血栓の形成が顕著に抑制さ
れる。
て、該酸化ＬＤＬ受容体の生体内における血小板凝集作
用を阻害する物質（例、酸化ＬＤＬ受容体の抗体）を投
与することにより、生体内の血栓の形成が顕著に抑制さ
れる。
【図１】酸化ＬＤＬ受容体（ＬＯＸ−１）が血小板にも
発現すること示す電気泳動図である。
発現すること示す電気泳動図である。
【図２】実施例２で確認された、活性化血小板について
は、ＩｇＧの添加系では、不添加系（コントロール）に
対して有意な血小板凝集阻害作用を示さないが、抗ＬＯ
Ｘ−１（抗酸化ＬＤＬ受容体）添加系では、顕著な血小
板凝集阻害作用を示すことを示すデータである。
は、ＩｇＧの添加系では、不添加系（コントロール）に
対して有意な血小板凝集阻害作用を示さないが、抗ＬＯ
Ｘ−１（抗酸化ＬＤＬ受容体）添加系では、顕著な血小
板凝集阻害作用を示すことを示すデータである。
【図３】実施例２において確認された、抗酸化ＬＤＬ受
容体抗体による血栓の発生の抑制による出血時間の延長
効果を示すデータである。
容体抗体による血栓の発生の抑制による出血時間の延長
効果を示すデータである。
【図４】実施例２において、ラットの動脈損傷後の閉塞
までの時間への抗酸化ＬＤＬ受容体抗体の投与による影
響を調べた結果を示すデータである。
までの時間への抗酸化ＬＤＬ受容体抗体の投与による影
響を調べた結果を示すデータである。
【図５】実施例２において、ラットの動脈損傷後の閉塞
までの時間への抗酸化ＬＤＬ受容体抗体の投与による影
響を調べた結果をラット個体別に示すデータである。
までの時間への抗酸化ＬＤＬ受容体抗体の投与による影
響を調べた結果をラット個体別に示すデータである。
フロントページの続き (72)発明者 眞崎 知生 京都府京都市左京区岩倉花園町541−32 Ｆターム(参考） 4C084 AA17 NA14 ZA542 ZC022 4C085 AA13 BB11 EE01
Claims (2)
- 【請求項１】 酸化ＬＤＬ受容体に結合して、該酸化Ｌ
ＤＬ受容体の生体内における血小板凝集作用を阻害する
物質を有効成分として含む抗血栓剤。 - 【請求項２】 該血小板凝集作用阻害物質が酸化ＬＤＬ
受容体の抗体である請求項１に記載の抗血栓剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001134741A JP2002326956A (ja) | 2001-05-01 | 2001-05-01 | 抗血栓剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001134741A JP2002326956A (ja) | 2001-05-01 | 2001-05-01 | 抗血栓剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2002326956A true JP2002326956A (ja) | 2002-11-15 |
Family
ID=18982364
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2001134741A Withdrawn JP2002326956A (ja) | 2001-05-01 | 2001-05-01 | 抗血栓剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2002326956A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2015098901A1 (ja) * | 2013-12-27 | 2015-07-02 | 独立行政法人国立循環器病研究センター | 抗血液凝固剤 |
-
2001
- 2001-05-01 JP JP2001134741A patent/JP2002326956A/ja not_active Withdrawn
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2015098901A1 (ja) * | 2013-12-27 | 2015-07-02 | 独立行政法人国立循環器病研究センター | 抗血液凝固剤 |
| JP2015127309A (ja) * | 2013-12-27 | 2015-07-09 | 国立研究開発法人国立循環器病研究センター | 抗血液凝固剤 |
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