JP6340816B2

JP6340816B2 - 藻類の培養方法

Info

Publication number: JP6340816B2
Application number: JP2014029527A
Authority: JP
Inventors: さと子小松; 福田　裕章; 裕章福田
Original assignee: Denso Corp
Current assignee: Denso Corp
Priority date: 2014-02-19
Filing date: 2014-02-19
Publication date: 2018-06-13
Anticipated expiration: 2034-02-19
Also published as: JP2015149977A

Description

本発明は藻類の培養方法に関する。

近年、藻類が生産する脂質や糖等の有用物質の利活用が注目されている。藻類を開放系の培養槽で培養する場合、原生生物等のコンタミ生物を抑制することが必要である。
ところで、船体から排出されるバラスト水に含まれるコンタミ生物を抑制する方法として、バラスト水中でキャビテーションを発生させる方法が開示されている（特許文献１参照）。

特開２００７−９８２０９号公報

しかしながら、藻類の培養において特許文献１記載の方法を用いると、培養の対象である藻類もキャビテーションによって破砕されてしまうおそれがある。本発明は以上の点に鑑みなされたものであり、コンタミ生物を選択的に抑制できる藻類の培養方法を提供することを目的とする。

本発明の藻類の培養方法は、藻類を培養中の培地に塩を添加する塩添加工程を有し、前記塩添加工程により、前記培地の導電率が５ｍＳ／ｃｍ以上増加することを特徴とする。
本発明の藻類の培養方法によれば、コンタミ生物を選択的に抑制することができる。

前記塩として、例えば、ＮａＣｌを含むことができる。この場合、前記塩添加工程により、前記培地におけるＮａＣｌ濃度を０．３ｗ／ｖ％以上増加させることが好ましい。
また、前記塩添加工程において、例えば、海水を添加することができる。この場合、前記塩添加工程により、前記培地における海水の体積比を１２ｖ／ｖ％以上増加させることが好ましい。

前記塩添加工程後における前記培地のｐＨは、例えば、２〜５の範囲内であることが好ましい。この場合、培地中のバクテリアの数を抑制することができる。
本発明の藻類の培養方法では、例えば、窒素充分条件にある前記藻類を、藻類に対する窒素の割合が７．５〜９質量％の範囲内で設定される所定値に低下するまで培養を行ってから、前記塩添加工程を行うことができる。

藻類の培養に用いる培養システム１００の構成を表すブロック図である。第１の培養槽３における藻体濃度の推移を表すグラフである。培養時間と藻体濃度との関係を表すグラフである。ＮａＣｌ溶液を導入した場合における培地中の原生生物の量を測定した結果を表すグラフである。海水を導入した場合における培地中の原生生物の量を測定した結果を表すグラフである。ＮａＣｌ溶液を導入した場合におけるオイル生産比を表すグラフである。海水を導入した場合におけるオイル生産比を表すグラフである。塩の水溶液を導入した後の培地のｐＨを酸性に調整した場合におけるバクテリアの数の相対値を表すグラフである。塩の水溶液を導入した後の培地のｐＨを調整しなかった場合におけるバクテリアの数の相対値を表すグラフである。

本発明の実施形態を説明する。本発明で培養する藻類は特に限定されず、適宜選択できる。藻類としては、例えば、クロレラ目、トレボウキシア目等を含むトレボウキシア藻網の緑藻植物等が挙げられる。

本発明で使用する培地は特に限定されず、適宜選択できる。培地としては、例えば、AF6培地等が挙げられる。
塩添加工程において添加する塩の種類は特に限定されず、例えば、塩化ナトリウム、塩化マグネシウム、硫酸マグネシウム等が挙げられる。また、２種類以上の塩の混合物を用いてもよい。

また、塩添加工程において、固体の塩（例えば粉末の塩）を添加してもよいし、塩の溶液（例えば水溶液）又は分散液を添加してもよい。また、塩添加工程において、海水、海水を濃縮した液、海水を水で希釈した液等を添加してもよい。海水は、天然海水であってもよいし、人工海水であってもよい。

塩添加工程は、１回であってもよいし、複数回であってもよい。塩添加工程前の培地は、塩添加工程で添加する塩を予め含んでいてもよいし、含んでいなくてもよい。塩添加工程前の培地が、塩添加工程で添加する塩を含んでいない場合、塩添加工程前におけるその培地の導電率は、例えば、０ｍＳ／ｃｍか、それに近い値とすることができる。

本発明において培地の導電率（電気伝導率）は、ｍＳ／ｃｍの単位により表される量である。本発明における導電率は、測定装置として市販の電気伝導率計を用いて測定した値である。

本発明において、塩添加工程により、培地の導電率は、塩添加工程前に比べて、５ｍＳ／ｃｍ以上増加する。導電率の増加量は、６ｍＳ／ｃｍ以上が好ましく、６．５ｍＳ／ｃｍ以上がより好ましく、６．９ｍＳ／ｃｍ以上がさらに好ましい。導電率の増加量が５ｍＳ／ｃｍ以上であることにより、培地中のコンタミ生物を抑制することができる。

なお、導電率の増加により培地中のコンタミ生物を抑制できる理由は、以下のように推定できる。導電率と浸透圧とは比例関係にある。培地における導電率の増加にともない浸透圧が増加すれば、強固な細胞壁を持たず、浸透圧変化に対して脆弱な原生生物等のコンタミ生物が破壊される。一方、藻類は、導電率が増加しても、原生生物に比べ、破壊されにくい。

本発明において、培地における塩濃度（例えばＮａＣｌ濃度）とは、塩を含んでいる単位体積の培地中の塩の重量（ｗ／ｖ％）である。ここで、体積の単位はリットルであり、重さの単位はグラムである。例えば、体積１００ミリリットルの培地が１グラムの塩を含んでいる場合、その培地におけるその塩の濃度は、１ｗ／ｖ％となる。

塩添加工程により、培地における塩濃度が増加し、また、培地の導電率も増加する。塩の添加量は、培地の導電率が上述した値だけ増加する量であることが好ましい。例えば、添加する塩がＮａＣｌである場合、塩添加工程により、培地におけるＮａＣｌ濃度を、０．３ｗ／ｖ％以上（好ましくは０．３７５ｗ／ｖ％以上）増加させることが好ましい。この場合、培地中のコンタミ生物を抑制することができる。なお、塩添加工程においてＮａＣｌを添加する場合の、ＮａＣｌ濃度の増加量と、培地における導電率の増加量との関係は表１に示すとおりとなる。

また、塩添加工程において海水を添加する場合、塩添加工程により、培地における海水の体積比が１２ｖ／ｖ％以上（好ましくは１２．５ｖ／ｖ％以上）増加することが好ましい。この場合、培地中のコンタミ生物を抑制することができる。塩添加工程において海水を添加する場合の、海水の体積比の増加量と、培地における導電率の増加量との関係は表２に示すとおりとなる。

本発明において、海水の体積比とは、以下の意味を有する。培地の体積をａとする。その培地に含まれる海水の、原液（濃縮も希釈もされていない海水）に換算した体積をｂとする。この場合、その培地における海水の体積比は、（ｂ／ａ）×１００（ｖ／ｖ％）となる。

例えば、培地５０ｍｌに、海水の原液５０ｍｌを添加し、添加後の培地の体積が１００ｍｌになったとすると、その培地における海水の体積比は５０ｖ／ｖ％である。
また、培地５０ｍｌに、１／２に希釈した海水５０ｍｌを添加し、添加後の培地の体積が１００ｍｌになったとする。ここで、１／２に希釈した海水とは、海水の原液と、水とを、体積比１：１で混合した液である。添加後の培地における海水の体積比は２５ｖ／ｖ％である。

また、培地５０ｍｌに、１／４に希釈した海水５０ｍｌを添加し、添加後の培地の体積が１００ｍｌになったとする。ここで、１／４に希釈した海水とは、海水の原液と、水とを、体積比１：３で混合した液である。添加後の培地における海水の体積比は１２．５ｖ／ｖ％である。

塩添加工程後の培地における塩の濃度は、藻類の培養を妨げ難い濃度範囲内であることが好ましい。そのような濃度範囲は、例えば、培地の導電率が３４ｍＳ／ｃｍ以下となる範囲であり、好ましくは２６ｍＳ／ｃｍ以下となる範囲である。添加する塩がＮａＣｌである場合、ＮａＣｌの濃度は、２．０ｗ／ｖ％以下の範囲内であることが好ましく、１．５ｗ／ｖ％以下の範囲内であることがさらに好ましい。

塩添加工程後における培地のｐＨは、２〜５の範囲内が好ましく、３〜４の範囲内が一層好ましい。ｐＨがこの範囲内である場合、培地中の生菌（バクテリア）数を抑制することができる。原生生物はバクテリアを捕食するので、培地中のバクテリア数を抑制することで、培地中の原生生物を一層抑制することができる。

本発明において、窒素充分条件とは、藻類が正常な増殖をするのに充分量の窒素を含んでいる状態を意味する。それに対し、窒素欠乏条件とは、藻類の体内に含まれる窒素量が減少し、正常な増殖を維持できない状態を意味する。
（実施例１）
１．藻類の培養に用いる培養システム１００の構成
藻類の培養に用いる培養システム１００の構成を図１に基づいて説明する。培養システム１００は、屋外に設置される開放系のシステムであり、新鮮培地タンク１、第１の培養槽３、第２の培養槽５、７、９を備える。新鮮培地タンク１と第１の培養槽３とは、供給管１１で接続されており、その供給管１１は弁１３で開閉される。

第１の培養槽３と第２の培養槽５、７、９とは、配管系１５で接続されている。配管系１５は、３方弁１７と、弁２１、２３、２５、２７とを備える。３方弁１７は、第２の培養槽５に至る配管１５ａ、第２の培養槽７に至る配管１５ｂ、及び第２の培養槽９に至る配管１５ｃのうち、１つのみを、第１の培養槽３に至る配管１５ｄに連通させ、他の２つは、配管１５ｄに対し閉じる。弁２１、２３、２５、２７は、それぞれ、配管１５ｄ、１５ａ、１５ｂ、１５ｃを開閉する。第２の培養槽５、７、９は、それぞれ、出口配管２９と、その出口配管２９を開閉する弁３１とを備えている。

新鮮培地タンク１は、その内部に新鮮培地を貯留しており、その新鮮培地を、供給管１１を介して第１の培養槽３に供給可能である。第１の培養槽３、第２の培養槽５、７、９は、周知の開放型レースウェイ槽である。それぞれの槽は、図示しないパドルにより、内部の液（培地）を攪拌可能である。

２．藻類の培養方法
藻類の培養法を説明する。初期状態においては、第１の培養槽３、第２の培養槽５、７、９は全て空である。まず、新鮮培地タンク１から第１の培養槽３へ、供給管１１を介して容量Ｖの新鮮培地を供給する。この新鮮培地の種類はAF6培地であり、その組成は以下のとおりである。
（新鮮培地）
AF6培地（100ｍｌ）
NaNO₃ 14 mg
NH₄NO₃ 2.2 mg
MgSO₄ ・ 7H₂O 3 mg
KH₂PO₄ 1 mg
K₂HPO₄ 0.5 mg
CaCl₂ ・ 2H₂O 1 mg
CaCO₃ 1 mg
Fe-citrate 0.2 mg
Citric acid 0.2 mg
Biotin 0.2 μg
Thiamine HCl 1 μg
Vitamin B6 0.1 μg
Vitamin B12 0.1 μg
Trace metals 0.5 mL
Distilled water 99.5 mL
(pH 6.62)
この新鮮培地に含まれる窒素の濃度は２７ｍｇ／Ｌであるが、培地に含まれる窒素量は藻類の培養条件により最適値に変えることができる。

次に、第１の培養槽３に所定量の藻類（シュードココミクサ）を加え、培養を開始する。この培養の開始時点を、ステップＡの始期とする。定期的に、第１の培養槽３から一部の培地をサンプリングし、藻類に対する窒素の割合Ｘ（質量％）を測定する。藻類に対する窒素の割合Ｘは以下の式１で表される。
（式１）Ｘ＝（Ｐ／Ｑ）×１００
ここで、藻類に対する窒素の割合Ｘとは、単位体積の培地中に存在する藻類の乾燥質量Ｑと、単位体積の培地が当初含んでいた窒素の質量Ｐとの割合を示すものである。培養が進み、培地中の窒素が０になっている場合は、単位体積の培地が当初含んでいた窒素の質量Ｐは、藻類に対する窒素の割合ＸとＱとの積に等しくなる。

藻類に対する窒素の割合Ｘは時間の経過とともに減少し、藻類の乾燥質量Ｑは時間と共に増加する。藻類に対する窒素の割合Ｘが７．５質量％（所定値）まで低下すると、ステップＡが終了する。なお、７．５質量％（所定値）という値は、藻類が窒素充分条件にあるときの値である。

ステップＡの終了後、ステップＢを実行する。すなわち、第１の培養槽３内にある培地の半分（１／２Ｖ）を、第２の培養槽５に移送し、それと同時に、新鮮培地タンク１から第１の培養槽３へ、容量１／２Ｖの新鮮培地を補充する。新鮮培地の補充後、第１の培養槽３中の藻類における、藻類に対する窒素の割合Ｘは、７．５質量％（所定値）を超える値となる。

第２の培養槽５には、第１の培養槽３から移送される培地とともに、同量（１／２Ｖ）の、塩の水溶液も導入し、総容量をＶとする。ここで、塩の水溶液には、表３に示すように、３％濃度ＮａＣｌ溶液、１．５％濃度ＮａＣｌ溶液、０．７５％濃度ＮａＣｌ溶液、海水原液、１／２希釈海水、及び１／４希釈海水の６種類がある。

本実施例では、塩の水溶液がそれぞれである場合において、藻類の培養を行った。また、コントロールとして、塩の水溶液の代わりに、同量（１／２Ｖ）の水を導入した場合についても藻類の培養を行った。

３％濃度ＮａＣｌ溶液とは、ＮａＣｌを３ｗ／ｖ％の濃度で含む水溶液である。１．５％濃度ＮａＣｌ溶液とは、ＮａＣｌを１．５ｗ／ｖ％の濃度で含む水溶液である。０．７５％濃度ＮａＣｌ溶液とは、ＮａＣｌを０．７５ｗ／ｖ％の濃度で含む水溶液である。

また、海水原液とは、海水そのもの（濃縮も希釈もしていない液）であり、１／２希釈海水とは、海水の原液と、水とを、体積比１：１で混合した液であり、１／４希釈海水とは、海水の原液と、水とを、体積比１：３で混合した液である。

塩の水溶液として、３％濃度ＮａＣｌ溶液、１．５％濃度ＮａＣｌ溶液、０．７５％濃度ＮａＣｌ溶液を導入した場合、第２の培養槽５中の培地におけるＮａＣｌ濃度は、塩の水溶液の導入前に比べて、増加する。ＮａＣｌ濃度の増加量は、上記表３に示すように、３％濃度ＮａＣｌ溶液の場合、１．５ｗ／ｖ％であり、１．５％濃度ＮａＣｌ溶液の場合、０．７５ｗ／ｖ％であり、０．７５％濃度ＮａＣｌ溶液の場合、０．３７５ｗ／ｖ％である。なお、塩の水溶液を導入する前の培地は、実質的にＮａＣｌを含まないので、ＮａＣｌ濃度の増加量は、塩の水溶液を導入した後の培地におけるＮａＣｌ濃度と等しくなる。

また、塩の水溶液として、海水原液、１／２希釈海水、及び１／４希釈海水を導入した場合、第２の培養槽５中の培地における海水の体積比は、塩の水溶液の導入前に比べて、増加する。海水の体積比の増加量は、上記表３に示すように、海水原液の場合、５０ｖ／ｖ％であり、１／２希釈海水の場合、２５ｖ／ｖ％であり、１／４希釈海水の場合、１２．５ｖ／ｖ％である。なお、塩の水溶液を導入する前の培地は、実質的に海水を含まないので、海水の体積比の増加量は、塩の水溶液を導入した後の培地における海水の体積比と等しくなる。

また、塩の水溶液を導入した後の、第２の培養槽５中の培地における導電率は、塩の水溶液の導入前に比べて、増加する。その増加量は、上記表３に示すとおりである。
塩の水溶液として、３％濃度ＮａＣｌ溶液、１．５％濃度ＮａＣｌ溶液、０．７５％濃度ＮａＣｌ溶液を導入した場合、導入後の培地のｐＨは３〜４である。一方、塩の水溶液として、海水原液、１／２希釈海水、１／４希釈海水を導入した場合、導入後の培地のｐＨは６前後である。なお、コントロールの場合、培地におけるＮａＣｌ濃度、海水の体積比、及び導電率は増加しない。

１／２Ｖ量の塩の水溶液又は水を導入し、培地の容量を増すことにより、第２の培養槽５における培地の攪拌を効率的に行うことができる。以上でステップＢが終了する。
ステップＢの後、再度ステップＡ（第１の培養槽３中の藻に対する窒素の割合Ｘが７．５質量％に低下するまでの培養）を実行し、以後、ステップＢ、ステップＡ・・・を交互に繰り返す。ただし、ステップＢにおいて第１の培養槽３から培地を移送する先は、１回目のステップＢでは第２の培養槽５であり、２回目のステップＢでは第２の培養槽７であり、３回目のステップＢでは第２の培養槽９である。以後同様に、４、７、１０・・・回目のステップＢでは第２の培養槽５に培地を移送し、５、８、１１・・・回目のステップＢでは第２の培養槽７に培地を移送し、６、９、１２・・・回目のステップＢでは第２の培養槽９に培地を移送する。

培地の移送先が第の培養槽７、９の場合でも、第２の培養槽５に移送する場合と同様に、培地と同量（１／２Ｖ）の塩の水溶液も導入し、総容量をＶとする。
なお、４、７、１０・・・回目のステップＢにおいて第２の培養槽５に培地を移送するとき、その３回前のステップＢにおいて第２の培養槽５に移送されていた培地は、既に後述する回収条件に達し、第２の培養槽５から取り出されている。よって、ステップＢにおいて第２の培養槽５に培地を移送するときは、常に空の第２の培養槽５に培地を移送する。第２の培養層７、９への培地の移送についても同様である。

第１の培養槽３における藻体濃度の推移を図２に示す。藻体濃度とは、１Lの培地中に含まれる藻の乾燥質量（ｇ）である。藻体濃度は、ステップＡにおいて増加し、ステップＢにおいて、培地の半分を新鮮培地に入れ替えることにより減少する。ステップＢの直後（ステップＡの初期）においても、藻体濃度は誘導期に対応する藻体濃度よりも高い。なお、誘導期とは、図３に示すように、藻体濃度が小さく、藻体濃度の上昇が緩やかな期間である。

一方、第２の培養槽５では、第１の培養槽３から移送された培地に、同量（１／２Ｖ）の塩の水溶液を添加した培地中で、藻の培養を行う。定期的に第２の培養槽５から一部の培地をサンプリングし、回収条件に達しているか否かを判断する。この回収条件とは、藻に対する窒素の割合Ｘが２〜３質量％になる（窒素欠乏条件になる）条件である。

回収条件に達すると、弁３１を開とし、出口配管２９から第２の培養槽５中の全ての培地を取り出す。なお、取り出された培地中に含まれる藻類からは、オイルが抽出される。第２の培養槽７、９についても、第２の培養槽５の場合と同様に、定期的にサンプリングして回収条件に達したか否かを判断し、回収条件に達すると全ての培地を取り出す。

３．藻類の培養方法が奏する効果を確かめるための試験
（１）原生生物の数の測定
塩の水溶液を培地に導入してから３時間後と、１４０時間後とに、第２の培養槽５、７、９中の培地を一部取り出し、その培地中の原生生物の量を、定量ＰＣＲ法により測定した。その結果を図４、図５に示す。

なお、図４において「ＮａＣｌｘ％増」の表記は、塩の水溶液（ＮａＣｌ水溶液）の導入により、第２の培養槽５、７、９中の培地におけるＮａＣｌ濃度がｘ（ｗ／ｖ％）増加した条件を表す。また、図５において、「海水ｘ％増」の表記は、塩の水溶液（海水）の導入により、第２の培養槽５、７、９中の培地における海水の体積比がｘ（ｖ／ｖ％）増加した条件を表す。図４、図５のグラフにおける縦軸は、コントロールの場合を１とした相対値である。

図４、図５に示されているように、塩の水溶液を培地に導入することで、原生生物の数を顕著に抑制することができた。
（２）オイル生産量の測定
回収条件に達し、第２の培養槽５、７、９から取り出された培地中に含まれる藻類の全乾燥重量α（単位はｍｇ）を測定した。また、単位重量の藻類に含まれるオイル含量β（単位はｗ％）を測定した。そして、αとβとの積を算出し、これをオイル生産量Ｃとした。

上記のオイル生産量Ｃを、導入した塩水溶液の種類ごとに産出した。すなわち、導入した塩の水溶液が３％濃度ＮａＣｌ溶液の場合、１．５％濃度ＮａＣｌ溶液の場合、０．７５％濃度ＮａＣｌ溶液の場合、海水原液の場合、１／２希釈海水の場合、１／４希釈海水の場合、及びコントロールの場合のそれぞれについて、オイル生産量Ｃを算出した。

そして、任意の塩の水溶液の場合のオイル生産量をＣ_iとし、コントロールの場合におけるオイル生産量をＣ₀としたとき、Ｃ_i／Ｃ₀を、その塩の水溶液の場合におけるオイル生産比とした。オイル生産比を、図６、図７に示す。

図６、図７に示すように、いずれの塩の水溶液を培地に導入しても、オイル生産比が大きく低下することはなかった。特に、ＮａＣｌ濃度の増加量が０．７５、１．５（ｗ／ｖ％）の場合、及び海水の体積比の増加量が２５、５０（ｖ／ｖ％）の場合、オイル生産比が１より大きくなった（すなわち、コントロールの場合よりオイル生産量が大きくなった）。
（実施例２）
１．藻類の培養方法
基本的には前記実施例１と同様にして、藻類の培養を行った。ただし、本実施例では、以下の２条件で藻類の培養を行った。

（条件１）塩の水溶液として、１／２Ｖ容量の海水原液を使用した。また、海水原液を導入した後の培地に、ＨＣｌを適量添加し、培地のｐＨを３〜４に調整した。
（条件２）塩の水溶液として、１／２Ｖ容量の海水原液を使用した。海水原液を導入した後の培地に対しｐＨ調整は行わなかった。なお、海水原液を導入した後の培地におけるｐＨは６前後であった。

３．藻類の培養方法が奏する効果を確かめるための試験
塩の水溶液を導入する直前、塩の水溶液を導入してから３時間後、及び塩の水溶液を導入してから１４０時間後に、それぞれ、第２の培養槽５、７、９から培地を取出し、培地に含まれる生菌（バクテリア）の数を計測した。バクテリアの数は、寒天培地で生じるコロニーの数に基づき計測した。そして、塩の水溶液を導入する直前の培地におけるバクテリアの数を１００としたときのバクテリアの数の相対値を算出した。

上記条件１の場合におけるバクテリアの数の相対値を図８に示し、上記条件２の場合におけるバクテリアの数の相対値を図９に示す。
図８、図９に示されているように、上記条件１の場合の方が、バクテリアの数の相対値が低かった。原生生物はバクテリアを捕食するので、条件１を用い、培地中のバクテリア数を抑制すれば、培地中の原生生物を一層抑制することができる。
（参考例）
基本的には前記実施例１と同様にして、藻類の培養を行った。ただし、本実施例では、導入する塩の水溶液を、４％濃度ＮａＣｌ溶液とした。この場合、第２の培養槽５、７、９中の培地におけるＮａＣｌ濃度の増加量は、２．０ｗ／ｖ％となる。

本参考例においても、前記実施例１と同様に、原生生物の数を抑制することができた。ただし、本参考例では、コントロールに比べて、オイル生産比が約０．２低下した。

１…新鮮培地タンク、３…第１の培養槽、５、７、９…第２の培養槽、１１…供給管、１３、２１、２３、２５、２７、３１…弁、１５…配管系、１５ａ、１５ｂ、１５ｃ、１５ｄ…配管、１７…３方弁、２９…出口配管、１００…培養システム

Claims

屋外に設置される開放系の培養槽を用いる藻類の培養方法であって、
前記藻類はシュードココミクサであり、
前記藻類を培養中の培地に塩を添加する塩添加工程を有し、
前記塩添加工程により、前記培地の導電率が５ｍＳ／ｃｍ以上増加し、
前記塩添加工程後における前記培地のｐＨが３〜４の範囲内であることを特徴とする藻類の培養方法。
前記塩としてＮａＣｌを含み、
前記塩添加工程により、前記培地におけるＮａＣｌ濃度が０．３ｗ／ｖ％以上増加することを特徴とする請求項１に記載の藻類の培養方法。
前記塩添加工程において海水を添加し、
前記塩添加工程により、前記培地における海水の体積比が１２ｖ／ｖ％以上増加することを特徴とする請求項１に記載の藻類の培養方法。
窒素充分条件にある前記藻類を、藻に対する窒素の割合が７．５〜９質量％の範囲内で設定される所定値に低下するまで培養を行ってから、前記塩添加工程を行うことを特徴とする請求項１〜３のいずれか１項に記載の藻類の培養方法。