JP6284945B2 - メルファランフルフェナミドの凍結乾燥製剤 - Google Patents

Description

本発明は、メルファランフルフェナミド（melphalan flufenamide）または医薬として許容されるその塩を含む凍結乾燥医薬製剤、それらを調製する方法、凍結乾燥医薬製剤を含む組成物、および癌の治療におけるそれらの使用を対象とする。

癌は、治すのが難しく、命にかかわる恐れのある疾患である。したがって、研究会では癌の新しい療法を開発する取り組みが常に行われている。癌の大多数は固形腫瘍、たとえば、肺癌、乳癌、前立腺癌として存在するが、残りは血液およびリンパ系の悪性腫瘍、たとえば、白血病およびリンパ腫である。

この疾患を治すまたは緩和しようとする際に、化学療法が使用されることが多い。癌細胞は通常急速に分裂するので、化学療法は、通常、急速に分裂する細胞を死滅させることによって作用する。広義では、ほとんどの化学療法薬は、速く分裂する細胞を効率的に標的として、有糸分裂（すなわち細胞分裂）に損傷を与えることによって働く。これらの薬物は細胞に損傷を与えるので、細胞障害性と呼ばれている。ある薬物は、細胞にアポトーシス（いわゆる「プログラム細胞死」）を引き起こす。抗腫瘍効果の最適化、副作用の最小化、耐性発現の防止のために、異なる作用様式を有する２つ以上の薬物が一緒に使用される場合、併用化学療法が使用されることが多い。化学療法で得られる結果は、腫瘍のタイプによって異なる。ある腫瘍は極めて感受性が高いので、治療すれば治癒に至る可能性が高い。

化学療法薬は一般に、アルキル化剤、代謝拮抗剤、アントラサイクリン系薬剤、植物性アルカロイド、トポイソメラーゼ阻害剤、および他の抗腫瘍剤に分類することができる。これらの薬物は、細胞分裂またはＤＮＡ合成に影響を及ぼす。

アルキル化剤、たとえばナイトロジェンマスタード、すなわちビス（２−クロロエチル）アミン誘導体から誘導される薬物は、広範な新生物疾患の治療において化学療法薬として使用されている。アルキル化剤は、細胞内の電気的に陰性の部位にアルキル基を共有結合させる能力がある。よって、これらの薬剤は、生物学的に重要な分子、たとえばＲＮＡ、ＤＮＡおよびタンパク質内のヘテロ原子と共有結合を形成することにより細胞機能に損傷を与えることによって作用する。アルキル化剤の例には、細胞のＤＮＡを化学的に修飾する、メクロレタミン、シクロホスファミド、クロラムブシル、イホスファミド、テモゾロミドおよびメルファランがある。

ＷＯ０１／９６３６７は、ジ−およびトリペプチド、ならびに１つまたは２つの付加アミノ酸またはアミノ酸誘導体のアルキル化を開示している。これらの誘導体は、様々な腫瘍タイプに対して効力が向上することが実証された。

凍結乾燥またはフリーズドライは、安定性を保持するもしくは増大させるまたは分解を止めるために使用される、試料の脱水方法である。凍結乾燥製品の含水率は低く、通常は１〜４％前後であるために、微生物および酵素の作用が阻害され、それによって製品寿命が延びる。凍結乾燥では、凍結乾燥しようとする試料を水性溶液に溶解させ、続いて凍結させ、その後周囲圧力を低下させる。次いで、凍結した水を固相から気相に直接昇華させるために、その試料を、任意に熱を加えることによって昇華に付さす。製品中の最終的な含水率は極めて低く、通常は１％から４％前後である。凍結乾燥は、医薬製品の貯蔵寿命を延ばすために医薬分野で汎用されている。

本発明は、メルファランフルフェナミドとしても知られるメルファラニル−Ｌ−ｐ−フルオロフェニルアラニンエチルエステル、ならびに医薬として許容されるその塩、特に、メルファランフルフェナミド塩酸塩、またはＪ１としても知られる、メルファラニル−Ｌ−ｐ−フルオロフェニルアラニンエチルエステル塩酸塩を含む凍結乾燥製剤に関する。

メルファランフルフェナミドには、水性溶液に難溶性であるという問題がある。したがって、この化合物を溶解させるために、有機溶媒、たとえばＤＭＡ（ジメチルアセトアミド）の使用が必要である。しかし、有機溶媒は、有毒であることが多く、対象、たとえば癌患者に化合物を投与するために使用される医療用具の破損を引き起こす恐れもある。したがって、化合物を有機溶媒に溶解させて供することに伴う問題を克服するために、生理学的に許容される溶液に対する十分な溶解性および最適化された溶解速度を有する、メルファランフルフェナミドの代替医薬製剤が求められている。

本発明の一側面は、メルファランフルフェナミド、または医薬として許容されるその塩、および賦形剤としてのスクロースを含む、凍結乾燥医薬製剤を対象とする。

さらに本発明の側面は、水性溶液に可溶な凍結乾燥医薬製剤である。

さらに本発明の側面は、ここに定義される凍結乾燥医薬製剤を含む第１の容器と生理学的に許容される溶液を含む第２の容器とを含む、構成品のキットである。

さらに本発明の側面は、医薬品として使用するための、ここに記載される凍結乾医薬製剤である。

さらにまた本発明の側面は、医薬品として使用するための、ここに記載される構成品のキットである。

本発明の側面は、癌、たとえば、卵巣癌、肺癌、膀胱癌、中皮腫、多発性骨髄腫、乳癌、および／または任意の固形または血液の癌の治療および／または予防に使用するための、ここに記載される凍結乾燥医薬製剤である。

さらにまた本発明の側面は、癌、たとえば、卵巣癌、肺癌、膀胱癌、中皮腫、多発性骨髄腫、乳癌、および／または任意の固形または血液の癌の治療および／または予防に使用するための、ここに記載される構成品のキットである。

さらに本発明の側面は、ここに記載される凍結乾燥医薬製剤を治療有効用量でそれを必要とする対象に投与することによる、癌、たとえば、卵巣癌、肺癌、膀胱癌、中皮腫、多発性骨髄腫、乳癌、および／または任意の固形または血液の癌を治療および／または予防する方法である。

特に定義のない限り、ここに使用されるすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって通常理解されるものと同じ意味を有する。ここに記載されるものと同様または等しい方法および材料を本発明の実施または試験において使用することができるが、適切な方法および材料は以下に記載される。ここに挙げたすべての刊行物、特許出願、特許および他の参考文献は、参照によりその全体が組み込まれている。矛盾する場合は、定義を含めた本明細書が優先されることとなる。加えて、材料、方法および例は単なる例示であり、限定を意図するものではない。

本発明の他の特徴および利点は、以下の詳細な説明、例、および特許請求の範囲から明らかになるであろう。

発明の詳細な説明

メルファランフルフェナミドまたは医薬として許容されるその塩は水性溶液への溶解性が低いので、前記化合物または医薬として許容されるその塩を溶解させるために、有機溶媒、たとえばＤＭＡ（ジメチルアセトアミド）の使用を必要とすることがある。したがって、メルファランフルフェナミドを患者に投与しようとするとき、患者に投与する前に、その物質を有機溶媒、たとえばＤＭＡに最初に溶解させ、その後輸液で希釈しなければならない。この方法によって患者は有機溶媒に曝露され、その曝露は患者にとって有害である恐れがある。また、有機溶媒は、メルファランフルフェナミドを対象、たとえば癌患者に投与するために使用される医療用具を破損することがある。

本発明の発明者らは、今回驚くべきことに、メルファランフルフェナミドまたは医薬として許容されるその塩をスクロースの存在下で凍結乾燥すると、得られた凍結乾燥医薬製剤は生理学的に許容される溶液への高い溶解性を有し、さらにその溶解速度が高いことを見出し、それは、患者に投与する前または間の溶解させる間メルファランフルフェナミドの分解を防止するのに有益である可能性がある。

以前の調製では、メルファランフルフェナミドは、合成によって結晶形態の白色粉末として得られていた。この結晶形態は強酸性の水性溶液にしか溶解させることができず、それでは実用的な製造を目的とする場合には不可能である。賦形剤が存在しても、それ自体では溶解性が十分に向上しなかった。したがって、以前は、その代わりにメルファランフルフェナミドをＤＭＡ（ジメチルアセトアミド）のグルコース溶液に溶解させていた。その調製は実現可能であるが、不安定である。すなわち、１時間につき７％分解する。さらに二量体化が起こり、溶液が鮮黄色に変わる。しかしながら、この調製は信頼性が低く、重合速度が許容できない様式で変動する。

したがって、十分な溶解速度で可溶であり、かつ安定性が向上した、メルファランフルフェナミドまたは医薬として許容されるその塩を含む製剤を供する代替手段を突き止めることが求められている。さらに、この製剤は、患者に供される製品中に有機溶媒（たとえばＤＭＡ）を有するという良くない問題を避けるために、水溶性であるべきである。

本発明の一側面では、メルファランフルフェナミド、または医薬として許容されるその塩、およびスクロースを含む凍結乾燥医薬製剤が提供される。

この側面の一態様では、前記メルファランフルフェナミドは、メルファランフルフェナミド塩酸塩（Ｊ１）である。

この側面の別の態様では、前記メルファランフルフェナミドとスクロースの重量比（ｗ／ｗ）は、約１：２から約１：５００である。

この側面の別の態様では、前記メルファランフルフェナミドとスクロースの重量比（ｗ／ｗ）は、約１：２、約１：１０、約１：２５、約１：５０、約１：７５、約１：１００または約１：５００から選択される。

この側面の別の態様では、前記メルファランフルフェナミドとスクロースの重量比（ｗ／ｗ）は、約１：２から約１：７５である。

この側面の別の態様では、前記メルファランフルフェナミドとスクロースの重量比（ｗ／ｗ）は、約１：２から約１：５０である。

この側面の別の態様では、前記メルファランフルフェナミドとスクロースの重量比（ｗ／ｗ）は、約１：２５から約１：７５である。

この側面の別の態様では、前記メルファランフルフェナミドとスクロースの重量比（ｗ／ｗ）は、約１：５０である。

この側面の別の態様では、前記凍結乾燥医薬製剤は、約２５ｍｇのメルファランフルフェナミド塩酸塩（Ｊ１）および約１．２５ｇのスクロースを含む。

この側面の別の態様では、前記凍結乾燥医薬製剤は、約５０ｍｇのメルファランフルフェナミド塩酸塩（Ｊ１）および約２．５ｇのスクロースを含む。

この側面の別の態様では、前記凍結乾燥医薬製剤は、約１５ｍｇのメルファランフルフェナミド塩酸塩（Ｊ１）および約０．７５ｇのスクロースを含む。

この側面の別の態様では、前記凍結乾燥医薬製剤は、約２０ｍｇのメルファランフルフェナミド塩酸塩（Ｊ１）および約１．０ｇのスクロースを含む。

この側面の別の態様では、前記凍結乾燥医薬製剤は、約４０ｍｇのメルファランフルフェナミド塩酸塩（Ｊ１）および約２．０ｇのスクロースを含む。

この側面の別の態様では、前記凍結乾燥医薬製剤は、約５５ｍｇのメルファランフルフェナミド塩酸塩（Ｊ１）および約２．７５ｇのスクロースを含む。

この側面の別の態様では、前記凍結乾燥医薬製剤は、約２００ｍｇ以上のメルファランフルフェナミド塩酸塩（Ｊ１）、たとえば、約３００ｍｇ、４００ｍｇ、５００ｍｇ、６００ｍｇ、７００ｍｇまたは８００ｍｇのメルファランフルフェナミド塩酸塩（Ｊ１）を含む。かかる製剤は、単回高用量として、たとえば移植前に、特に有用であり得る。

この側面の別の態様では、前記凍結乾燥医薬製剤は、有機溶媒を含まないまたは実質的に含まない。

使用前に、メルファランフルフェナミド、または医薬として許容されるその塩、およびスクロースを含む凍結乾燥医薬製剤は、有用な組成物を得るために生理学的に許容される溶液で希釈されることとなる。したがって、この側面の別の態様では、本発明によるメルファランフルフェナミドの医薬製剤を含む組成物が提供される。

この側面の別の態様では、前記組成物は生理学的に許容される溶液を含む。好ましくは、前記生理学的に許容される溶液は、グルコース溶液である。通常、グルコースの量は、凍結乾燥製剤の約４．５〜５．５重量％である。

本発明は、乾燥形態で安定であり、かつ有機溶媒の非存在下で水性溶液に可溶な凍結乾燥製剤を提供する。メルファランフルフェナミド単体の凍結乾燥製剤を調製することは以前から可能であったが、かかる製剤は、分解時間と比較すると水性溶液への溶解が遅すぎるものであった。スクロースを凍結乾燥メルファランフルフェナミド製剤に（最初の有機溶媒中の溶液を介して）組み込むと、再溶解時間がかなり向上するが、再溶解したメルファランフルフェナミドの安定性が有意に変わることはない。結果として、再溶解したメルファランフルフェナミドの時間窓が広くなるので、たとえば、必要なら点滴速度を下げることが可能となることによって、患者の治療が向上する。「有機溶媒が存在しない」製剤は、微量の有機溶媒、通常は０．５％（ｗ／ｗ）未満の有機溶媒を含むことがあり得る。

ここに記載されるメルファランフルフェナミドまたは医薬として許容されるその塩の凍結乾燥医薬製剤は白色の飛散性粉末であり、それは、非凍結乾燥メルファランフルフェナミドまたは医薬として許容されるその塩が高密度でやや黄色がかった粉末の形態であり得るのとは対照的である。

通常、凍結乾燥は、４つの工程、すなわち、前処理、凍結、一次乾燥、および二次乾燥を含む。前処理工程では、凍結乾燥しようとする物質を凍結乾燥するための準備を行い、たとえばそれは、許容される結果を得るために、所望の濃度を有する溶液を調製する、または物質をさらなる構成成分と混合することによって行われる。凍結工程は、たとえば、機械冷凍、ドライアイスおよびメタノール、または液体窒素によって冷却された浴中のフリーズドライ用フラスコ内で行われてもよい。凍結乾燥機は、より大規模な凍結乾燥に利用できる。通常、凍結温度は−５０℃〜−８０℃である。

一次乾燥工程では、圧力を数ミリバールの範囲まで下げ、水を材料から昇華させるために熱を供給してもよい。必要な熱量は、昇華する分子の昇華潜熱を使用して算出することができる。継続期間は時と場合によるが、材料の構造を維持するために数日間継続してもよい。

最後の二次乾燥工程の目的は、未凍結の水分子をすべて取り除くことである。この段階では、水分子と凍結された材料の間に形成された物理化学的相互作用を断つために、温度を０℃より高くしてもよい。

本発明の文脈において、メルファランフルフェナミドまたは医薬として許容されるその塩は、凍結乾燥されていることが理解されるべきである。したがって、用語「メルファランフルフェナミドまたは医薬として許容されるその塩の凍結乾燥医薬製剤」は、メルファランフルフェナミドまたは医薬として許容されるその塩が凍結乾燥されていることを意味すると理解される。

本発明のさらなる側面は、凍結乾燥メルファランフルフェナミドまたは医薬として許容されるその塩、かかるメルファランフルフェナミドを含む構成品のキット、かかるメルファランフルフェナミドまたは医薬として許容されるその塩を調製する方法、かかる凍結乾燥メルファランフルフェナミドまたは医薬として許容されるその塩を含む組成物およびそれらの使用を提供する。

本発明の文脈に存在する「凍結乾燥」、「凍結乾燥された」などは、「フリーズドライ」、「フリーズドライされた」などと互換的に使用することができる。

メルファランフルフェナミドは、その１つ以上の原子において、人為的な割合の原子同位体、たとえば重水素（²Ｈ）も含有してもよい。化合物は、放射性同位体、たとえば、三重水素（³Ｈ）、ヨウ素−１２５（¹²⁵Ｉ）または炭素−１４（¹⁴Ｃ）などで放射標識されてもよい。

スクロースを含むと、凍結乾燥製剤がそれ自体で安定し、有機溶媒の非存在下でも分解速度と比較して十分な速度で水に可溶となるので、療法に有用となり、毒性が低下する。

本発明のすべての側面の医薬として許容される塩は、たとえば、十分に塩基性であるここに記載の化合物の酸付加塩、たとえば、無機または有機酸などの、たとえば、塩酸、臭化水素酸、硝酸、メタンスルホン酸、硫酸、リン酸、トリフルオロ酢酸、パラ−トルエンスルホン酸、２−メシチレンスルホン酸（2-mesitylen sulphonic acid）、クエン酸、酢酸、酒石酸、フマル酸、乳酸、コハク酸、リンゴ酸、マロン酸、マレイン酸、１，２−エタンジスルホン酸、アジピン酸、アスパラギン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、エタンスルホン酸またはニコチン酸の酸付加塩であってもよい。

本文書では、用語「メルファランフルフェナミド」が使用されるとき、そうと明記されていなくても、医薬として許容されるその塩（複数可）が含まれることも意図している。

前述の通りに、メルファランフルフェナミドまたは医薬として許容されるその塩をスクロースの存在下で凍結乾燥させると、凍結乾燥医薬製剤の予想外に高い溶解性の増大を得ることができるので、凍結乾燥メルファランフルフェナミドを水性溶液、たとえば生理学的に許容される溶液に直接溶解させることが可能となる。これは、非凍結乾燥メルファランフルフェナミドが、水性溶液に直接溶解させることができず、水性溶液に希釈する前に最初に有機溶媒に溶解させなければならないのとは対照的である。したがって、ここでは、メルファランフルフェナミドまたは医薬として許容されるその塩を含む凍結乾燥医薬製剤であって、メルファランフルフェナミドがスクロースの存在下で凍結乾燥された凍結乾燥医薬製剤が提供される。

非凍結乾燥メルファランフルフェナミドは、薬物を患者に投与するために使用される生理学的に許容される水性溶液への溶解性が低いので、非凍結乾燥メルファランフルフェナミドを有機溶媒、たとえばＤＭＡに最初に溶解させることが必要である。したがって、メルファランフルフェナミドは、ＤＭＡに溶解させて保存することが多い。以前はメルファランフルフェナミドを水性溶液に直接溶解させることができず、有機溶媒を使用しなければならなかった。一旦有機溶媒に溶解させれば、こうしたメルファランフルフェナミドと有機溶媒との溶液を生理学的に許容される溶液に溶解させて、対象に投与することができる。

メルファランフルフェナミドは極めて毒性が高いので、かかる薬物への医療関係者の曝露を最小限にするために、薬物を有機溶媒に溶解させた後に投与用溶液に移すための特殊な用具が使用される。これらの移送用具は、ポリカーボネートを含むプラスチック製チューブであることが多い。しかし、かかるチューブは、有機溶媒、たとえばＤＭＡによって損傷を受けやすく、破損することがある。したがって、投与しようとする薬物がかかる有機溶媒に溶解されている場合、移送用具を使用することができない場合があり、その代わりに、溶解された薬物を、患者に投与する時間の直前に、投与に使用される生理学的に許容される溶液に直接添加しなければならない。これは、医療従事者には有害である恐れがあり、彼らはそのときに有毒な薬物に曝露される危険性がある。

上で述べた通りに、メルファランフルフェナミドの凍結乾燥により、生理学的に許容される溶液へのその溶解性が増大する。メルファランフルフェナミドをスクロースの存在下で凍結乾燥させると、この増大はさらに顕著なものとなり得る。ここに記載した通り、メルファランフルフェナミドをスクロースの存在下で凍結乾燥させると、非凍結乾燥メルファランフルフェナミドと比較して、メルファランフルフェナミドの溶解性を増大させることができる。有機溶媒、たとえばＤＭＡを使用して、最初にメルファランフルフェナミドを溶解させることを避けることができる。

スクロースの存在下で凍結乾燥されたメルファランフルフェナミドは、生理学的に許容される溶液、たとえば、約４．５〜５．５ｗｔ％、たとえば約５％のグルコース溶液またはＮａＣｌ水溶液（たとえば、約０．９ｗｔ％のＮａＣｌ）に直接溶解させることができる。それによって、メルファランフルフェナミドを投与するために使用される、ポリカーボネートを含む用具を使用して、医療関係者を薬物に曝露する危険性を最小限にすることが可能である。また、このようにして有毒なＤＭＡを患者に投与することが避けられる。これにより、患者に投与するのに適した濃度でメルファランフルフェナミドを含む溶液を直接調製することが可能となる。あるいは、メルファランフルフェナミドの凍結乾燥医薬製剤を生理学的に許容される溶液中に含む濃縮溶液を最初に調製し、次いで汎用される移送用具を使用して輸液バッグに移してもよい。

また、メルファランフルフェナミドがＤＭＡに溶解するとき、通常はメルファランフルフェナミドとＤＭＡの間に付加物が形成される。本発明によって提供される凍結乾燥医薬製剤を使用することによって、凍結乾燥されたメルファランフルフェナミドを生理学的に許容される溶液に直接溶解させることができるので、メルファランフルフェナミドをＤＭＡに最初に溶解させなくてもよい。それによって、ＤＭＡ−メルファランフルフェナミド付加物の形成を避けることができ、付加物とＤＭＡをどちらも患者に投与しなくて済む。

ここに定義されるメルファランフルフェナミドまたは医薬として許容されるその塩の凍結乾燥医薬製剤であって、ここに開示する、かかる凍結乾燥製剤を調製する方法によって任意に得られる凍結乾燥医薬製剤を含む、医薬組成物も提供される。かかる医薬組成物は、生理学的に許容される溶液、たとえば、ＮａＣｌ水溶液（たとえば約０．９ｗｔ％）またはグルコース溶液（たとえば約４．５〜５．５ｗｔ％、たとえば約５ｗｔ％のグルコース）をさらに含んでもよい。この医薬組成物は、対象に投与する前に希釈することが意図される濃縮溶液であっても、患者に直接投与できる溶液として存在してもよい。

ここに記載した通り、スクロースの存在下での凍結乾燥後にメルファランフルフェナミドの溶解性が増大するので、メルファランフルフェナミドの溶解液、たとえば、メルファランフルフェナミドまたは医薬として許容されるその塩を含む医薬組成物を調製することが可能であり、この溶液は、有機溶媒、たとえば、ＤＭＡ、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン、２−メチルテトラヒドロフラン、酢酸エチル、アセトン、ジメチルホルムアミド、アセトニトリル、ジメチルスルホキシド、ジオキサン、ジエチルエーテル、酢酸、ｎ−ブタノール、イソプロパノール、ｎ−プロパノール、ｔｅｒｔ−ブタノール、ｓｅｃ−ブタノール、メタノール、エタノール、および酢酸を実質的に含まない。

本文書において「実質的に含まない」とは、医薬組成物が有機溶媒を微量しか含まない、たとえば、有機溶媒ほぼ全体で約１ｗｔ％未満、好ましくは有機溶媒ほぼ全体で約０．５ｗｔ％未満、より好ましくは有機溶媒ほぼ全体で約０．１ｗｔ％未満しか含まないことを意味する。一側面では、凍結乾燥製剤または医薬組成物は、測定可能な量の有機溶媒を何も含有しない。かかる製剤は毒性が低くなると考えられるので、患者の忍容性が良くなる、すなわち、点滴したときに、副作用、たとえば、嘔吐、嘔気または他の全身症状が少なくなると考えられる。

本発明の一側面では、有機溶媒を含まないまたは実質的に含まない、ここに記載される凍結乾燥医薬製剤が提供される。

医薬組成物は、メルファランフルフェナミドまたはその医薬的な塩を含むここに開示される凍結乾燥医薬製剤、および生理学的に許容される溶液、たとえばグルコース溶液からなっていてもよい。

「生理学的に許容される溶液」という表現がここに定義され、それは、水性溶液、たとえばＮａＣｌ溶液（たとえば、約０．９ｗｔ％のＮａＣｌ）またはグルコース溶液、たとえば、約４．５〜５．５ｗｔ％のグルコース、たとえば約５ｗｔ％、または他の生理学的に許容される溶液である。かかる溶液は何れも、任意に緩衝されていてもよい。

凍結乾燥メルファランフルフェナミドおよび生理学的に許容される溶液を含む、対象に直接投与するための医薬組成物は、一般に、メルファランフルフェナミドを約１ｍｇ／ｍｌ以下、たとえば約０．２ｍｇ／ｍｌの濃度で含む。しかし、該医薬組成物は、患者に投与する前に生理学的に許容される溶液で希釈するために、メルファランフルフェナミドを最大約４ｍｇ／ｍｌの濃度で含んでもよい。

本発明の別の側面は、凍結乾燥医薬製剤を調製する方法であって、
ａ．メルファランフルフェナミドまたは医薬として許容されるその塩を有機溶媒に溶解させて、メルファランフルフェナミド溶液を得ること；
ｂ．前記メルファランフルフェナミド溶液をスクロースに添加して、メルファランフルフェナミド／スクロース水溶液を得ること；および
ｃ．前記メルファランフルフェナミド／スクロース水溶液を凍結乾燥に供すること
による方法を提供する。

この側面の一態様では、前記メルファランフルフェナミドとスクロースの重量比（ｗ／ｗ）は、約１：２から、約１：１０、約１：２５、約１：５０、約１：７５、約１：１００、または約１：５００である。

この側面の別の態様では、前記メルファランフルフェナミドとスクロースの重量比（ｗ／ｗ）は、約１：２から約１：５０である。

この側面の別の態様では、前記メルファランフルフェナミドとスクロースの重量比（ｗ／ｗ）は、約１：５０である。

この側面の別の態様では、前記メルファランフルフェナミドとスクロースの重量比（ｗ／ｗ）が約１：２５から約１：７５である方法が提供される。好ましくは、前記メルファランフルフェナミドとスクロースの重量比（ｗ／ｗ）は、約１：５０である。

有機溶媒は、エタノール、酸含有エタノール、グリセリン、プロピレングリコール、ベンジルアルコール、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、Ｎ−メチル−２−ピロリドン、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノール、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル、プロピレングリコール、ジメチルスルホキシド、テトラヒドロフラン、２−メチルテトラヒドロフラン、アセトン、ジメチルホルムアミド、アセトニトリル、ジオキサン、酢酸、乳酸、プロピオン酸、ｎ−ブタノール、イソプロパノール、ｎ−プロパノール、ｔｅｒｔ−ブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノールと水との混合物、ｓｅｃ−ブタノール、メタノール、およびエタノールと水との混合物の何れか１つから選択されてもよい。好ましくは、前記有機溶媒は、ｔｅｒｔ−ブタノールまたはｔｅｒｔ−ブタノールと水との混合物であり、より好ましくは体積比約１：１のｔｅｒｔ−ブタノールと水との混合物である。

本発明の別の側面は、ここに記載される凍結乾燥医薬製剤を調製する方法であって、
ａ） メルファランフルフェナミドまたは医薬として許容されるその塩を有機溶媒に溶解させること；
ｂ） 前記メルファランフルフェナミドまたは医薬として許容されるその塩の溶液を約０．２〜３．０ｍｇ／ｍｌの濃度で得るために、工程ａ）で得られた溶液に水を添加すること；
ｃ） 工程ｂ）で得られた溶液にスクロースを添加すること；および
ｄ） 工程ｃ）で得られた溶液を凍結乾燥に供すること
による方法である。

好ましくは、前記有機溶媒はｔｅｒｔ−ブタノールである。

本発明の別の側面は、ここに記載される凍結乾燥医薬製剤を調製する方法であって、
ａ） メルファランフルフェナミド塩酸塩（Ｊ１）をｔｅｒｔ−ブタノールと水との１：１（ｖ／ｖ）混合物に溶解させて、溶液を得ること；
ｂ） メルファランフルフェナミド塩酸塩（Ｊ１）、ｔｅｒｔ−ブタノール、水およびスクロースの溶液を得るために、工程ａ）での溶液を凍結乾燥スクロースに添加すること；ならびに
ｃ） 工程ｃ）で得られた溶液を凍結乾燥に供すること
による方法である。

工程ａ）におけるメルファランフルフェナミドまたは医薬として許容されるその塩を溶解させるのに有用な有機溶媒の例は、エタノール、酸含有エタノール、グリセリン、プロピレングリコール、ベンジルアルコール、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、Ｎ−メチル−２−ピロリドン、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノール、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル、プロピレングリコール、ジメチルスルホキシド、テトラヒドロフラン、２−メチルテトラヒドロフラン、アセトン、ジメチルホルムアミド、アセトニトリル、ジオキサン、酢酸、乳酸、プロピオン酸、ｎ−ブタノール、イソプロパノール、ｎ−プロパノール、ｔｅｒｔ−ブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノールと水との混合物、ｓｅｃ−ブタノール、メタノール、およびエタノールと水との混合物から選択される任意の１つであり得る。

メルファランフルフェナミドまたは医薬として許容されるその塩がｔｅｒｔ−ブタノールと水とに溶解されるとき、ｔｅｒｔ−ブタノールの濃度は、約１０〜１００ｖｏｌ％、たとえば１０〜９０ｖｏｌ％、３０〜７０ｖｏｌ％、または約５０ｖｏｌ％であってもよい。

本発明による凍結乾燥医薬製剤の試料を溶解させるおよび／または希釈するために使用される水は、滅菌もしくは精製水、または注射用水（ＷＦＩ）である。

凍結乾燥の実施方法についての情報は、たとえば、Ｒｅｙ，Ｌ．およびＭａｙ，Ｊ． Ｆｒｅｅｚｅ Ｄｒｙｉｎｇ／Ｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ（２０１０）、ＩＳＢＮ ９７８−１４３９Ｂ２５７５−４に見出すことができる。凍結工程において、試料は、たとえば、ドライアイス−アセトン浴中、約−７０℃〜−９０℃、たとえば、約−７０℃、−７５℃、−７８℃、−８０℃、−８２℃、−８５℃、−８８℃または−９０℃の温度で、たとえば１０分間から１２０分間凍結される。

あるいは、試料は、冷凍庫内で、約−１４℃から−２５℃、たとえば１４℃、−１６℃、−１８℃、−２０℃、−２２℃、または−２５℃の温度で、たとえば約１０分間から２４時間凍結されてもよい。試料を液体窒素中で凍結させることも可能である。

一次フリーズドライ工程では、圧力を約０．１ｍｂａｒから５０ｍｂａｒ、たとえば１ｍｂａｒから１０ｍｂａｒに下げることができる。温度は、通常０℃未満、たとえば−５０から０℃、または−２０から−１℃、たとえば、−５０、−４０、−３０、−２０、−１０、または−５℃である。この段階は、たとえば、４時間から４８時間、たとえば１２時間から２４時間続いてもよい。

最後の乾燥工程では、大半の水が蒸発していれば、温度は、一次乾燥工程における温度と同様または０℃超であってもよい。

スクロースを、工程ａ）で得られた溶液を希釈する前または後で、かつ凍結乾燥を行う前に、添加することができる。スクロースは通常粉末の形状であるが、水溶液として添加されてもよい。

本発明はまた、上に開示される方法によって得られる、ここに定義される凍結乾燥医薬製剤を対象とする。

ここではまた、
（ｉ）ここに記載されるメルファランフルフェナミドを含む凍結乾燥医薬製剤を含む第１の容器；および
（ｉｉ）生理学的に許容される溶液、たとえばＮａＣｌ溶液（たとえば約０．９ｗｔ％のＮａＣｌ）もしくはグルコース溶液、たとえば約４．５〜５．５ｗｔ％のグルコース溶液、たとえば約５ｗｔ％のグルコース溶液、または他の生理学的に許容される溶液を含む第２の容器
を含む、構成品の組み合わせキット（kit of parts combination）が提供される。

かかるキットは、２つの容器の内容物を互いに混合するための用具および／または得られた混合物を患者に投与するための用具、たとえばグルコース溶液を含むバッグに移すための用具も含んでもよい。

かかるキットは、ここに記載されるメルファランフルフェナミドを含む凍結乾燥医薬製剤を含む第１の容器と、生理学的に許容される溶液を含む第２の容器とからなっていてもよい。キット中のメルファランフルフェナミドはまた、医薬として許容される担体および／または賦形剤との混合物中に存在してもよい。一例は、たとえば１％のアルブミンまたは他のタンパク質もしくは化合物を有する、５％グルコースである。生理学的に許容される溶液の量は、メルファランフルフェナミドを含む凍結乾燥医薬製剤の濃縮溶液を調製するために少量であっても、患者に投与するために望まれる濃度を有する溶液を調製できるように増量されていても、何れであってもよい。あるいは、キットは、凍結乾燥医薬製剤の濃縮溶液を調製するための生理学的に許容される溶液を含む容器と、対象に投与するためにさらに希釈した溶液を調製するために増量した生理学的に許容される溶液を含む第２の容器、たとえば輸液バッグ、の両方を含んでいてもよい。

ここに提供される、凍結乾燥医薬製剤、医薬組成物またはキットは、抗腫瘍剤としてメルファランフルフェナミドまたは医薬として許容されるその塩だけを含んでもよい。しかし、メルファランフルフェナミドはまた、１種以上の抗腫瘍剤、たとえば他の抗腫瘍物質、たとえば、ゲムシタビン、エトポシド、ドキソルビシンまたはタキサンまたは他の治療的に有効な物質と組み合わせてもよい。他の抗腫瘍剤と組み合わせるとき、これらをメルファランフルフェナミドもしくは医薬として許容されるその塩と凍結乾燥前に混合し、したがってメルファランフルフェナミドもしくは医薬として許容されるその塩と一緒に凍結乾燥させてもよく、または凍結乾燥メルファランフルフェナミドもしくは医薬として許容されるその塩と、凍結乾燥後に、たとえばキット中もしくは医薬組成物中で組み合わせてもよい。凍結乾燥メルファランフルフェナミドはまた、メルファランフルフェナミドまたは医薬として許容されるその塩が凍結乾燥された後に、凍結乾燥されていなくても乾燥形態である、１種以上の抗腫瘍物質と混合されてもよい。

ここに提供されるメルファランフルフェナミドは細胞障害活性を有しているので、他で記載されるような癌の予防および／または治療（たとえばＷＯ０１／９６３６７を参照されたい）に使用されてもよい。メルファランフルフェナミドが腫瘍細胞生存を低下させることは、ＷＯ０１／９６３６７において、様々な血液および／または固形腫瘍、たとえば、肺癌、骨髄腫、リンパ腫、白血病、乳癌、および卵巣癌で実証された。さらに、メルファランフルフェナミドは、ＷＯ０１／９６３６７において、メルファラン耐性を回避することが実証された。したがって、メルファランフルフェナミドを癌の予防および／または治療に使用して、腫瘍増殖を減少させるおよび／または腫瘍細胞を死滅させることができる。よって、メルファランフルフェナミドは、癌疾患に罹患した患者の治癒および／または延命に使用することができる。メルファランフルフェナミドは、癌患者の移植前の単回高用量として使用することもできる。

本発明の別の側面は、ここに開示および特許請求される、凍結乾燥医薬製剤、キットまたは医薬組成物の、医薬品としての使用を提供する。

本発明の別の側面は、癌、たとえば、卵巣癌、肺癌、膀胱癌、中皮腫、多発性骨髄腫、乳癌および／または任意の他の固形または血液の癌の治療および／または予防に使用するための、ここに開示および特許請求される、凍結乾燥医薬製剤、キットまたは医薬組成物の使用を提供する。

この側面の一態様では、癌、たとえば、卵巣癌、肺癌、膀胱癌、中皮腫、多発性骨髄腫、乳癌および／または任意の他の固形または血液の癌の治療および／または予防に使用するための、ここに開示および特許請求される、前記凍結乾燥医薬製剤、キットまたは医薬組成物は、３週間毎に、通常３〜６回の治療サイクルの間供される。

本発明の別の側面は、移植前に、癌、たとえば、卵巣癌、肺癌、膀胱癌、中皮腫、多発性骨髄腫、乳癌および／または任意の他の固形または血液の癌に使用するための、ここに開示および特許請求される凍結乾燥医薬製剤、キットまたは医薬組成物の使用を提供する。かかる使用において、製剤は、約２００ｍｇ以上のメルファランフルフェナミド塩酸塩（Ｊ１）、たとえば約３００ｍｇ、４００ｍｇ、５００ｍｇ、６００ｍｇ、７００ｍｇまたは８００ｍｇのメルファランフルフェナミド塩酸塩（Ｊ１）を含む。かかる製剤は、移植前の単回高用量として特に有用であり得る。

本発明の別の側面は、癌、たとえば、卵巣癌、肺癌、膀胱癌、中皮腫、多発性骨髄腫、乳癌および／または任意の他の固形または血液の癌を治療および／または予防するための医薬品を調製するための、ここに開示および特許請求される凍結乾燥医薬製剤、キットまたは医薬組成物の使用を提供する。

本発明の別の側面は、移植前に、癌、たとえば、卵巣癌、肺癌、膀胱癌、中皮腫、多発性骨髄腫、乳癌および／または任意の他の固形または血液の癌の医薬品を調製するための、ここに開示および特許請求される凍結乾燥医薬製剤、キットまたは医薬組成物の使用を提供する。かかる使用において、製剤は、約２００ｍｇ以上のメルファランフルフェナミド塩酸塩（Ｊ１）、たとえば約３００ｍｇ、４００ｍｇ、５００ｍｇ、６００ｍｇ、７００ｍｇまたは８００ｍｇのメルファランフルフェナミド塩酸塩（Ｊ１）を含む。かかる製剤は、移植前の単回高用量として特に有用であり得る。

本発明の別の側面は、癌、たとえば、卵巣癌、肺癌、膀胱癌、中皮腫、多発性骨髄腫、乳癌および／または任意の他の固形または血液の癌の治療および／または予防に使用するための、メルファランフルフェナミド塩酸塩（Ｊ１）を癌の治療に有用な他の薬物を合わせて含む、凍結乾燥医薬製剤、キットまたは医薬組成物を提供する。

さらにまた本発明の側面は、癌、たとえば、卵巣癌、肺癌、膀胱癌、中皮腫、多発性骨髄腫、乳癌および／または任意の他の固形または血液の癌を治療および／または予防する方法である。該方法は、ここに提供される凍結乾燥医薬製剤、キットまたは医薬組成物を、治療有効用量でそれを必要とする対象に投与することを含むことができる。該対象は、通常はヒトまたは家畜である。

この側面の一態様では、治療有効用量を、それを必要とする対象へ、３週間毎に、通常３〜６回の治療サイクルの間投与される、ここに提供される、凍結乾燥医薬製剤、キットまたは医薬組成物である。

さらにまた本発明の側面は、癌、たとえば、卵巣癌、肺癌、膀胱癌、中皮腫、多発性骨髄腫、乳癌および／または任意の他の固形または血液の癌を治療および／または予防する方法であって、メルファランフルフェナミド塩酸塩（Ｊ１）を含む、凍結乾燥医薬製剤、キット、または医薬組成物を、癌の治療に有用な他の薬物と組み合わせて、治療有効用量でそれを必要とする対象に供する方法である。該対象は、通常はヒトまたは家畜である。

さらにまた本発明の側面は、癌、たとえば、卵巣癌、肺癌、膀胱癌、中皮腫、多発性骨髄腫、乳癌および／または任意の他の固形または血液の癌を治療および／または予防する方法であって、メルファランフルフェナミド塩酸塩（Ｊ１）を含む、凍結乾燥医薬製剤、キット、または医薬組成物を、移植前に治療有効用量でそれを必要とする対象に供する方法である。該対象は、通常はヒトまたは家畜である。かかる方法において、該製剤は、約２００ｍｇ以上のメルファランフルフェナミド塩酸塩（Ｊ１）、たとえば約３００ｍｇ、４００ｍｇ、５００ｍｇ、６００ｍｇ、７００ｍｇまたは８００ｍｇのメルファランフルフェナミド塩酸塩（Ｊ１）を含む。かかる製剤は、移植前の単回高用量として特に有用であり得る。

凍結乾燥医薬製剤、キットまたは医薬組成物の、それを必要とする対象への投与は、静脈注射によって行われてもよい。凍結乾燥メルファランフルフェナミドまたはかかる凍結乾燥メルファランフルフェナミドを含む医薬組成物を体腔内に投与すること、たとえば、膀胱内、または腹膜もしくは胸膜腔内への点滴注入も可能である。

メルファランフルフェナミドまたは医薬として許容されるその塩は、投与当たりのメルファランフルフェナミドの総量が、約２０〜１３０ｍｇ、たとえば２５〜７５ｍｇ、たとえば、１５、２０、２５、４０、５０または５５ｍｇの量で投与されてもよい。ここで提供される、メルファランフルフェナミドを含む医薬組成物またはキットは、したがって、この量を投与できるような量の凍結乾燥メルファランフルフェナミドを有してもよい。

メルファランフルフェナミドまたは医薬として許容されるその塩は、投与当たりのメルファランフルフェナミドの総量が、約２０〜１３０ｍｇ、たとえば２５〜７５ｍｇ、たとえば、１５、２０、２５、４０、５０または５５ｍｇの量で投与されてもよい。ここで提供される、メルファランフルフェナミドを含む医薬組成物またはキットは、したがって、この量を３週間毎に通常３〜６回の治療サイクルの間投与できるような量の凍結乾燥メルファランフルフェナミドを有してもよい。

凍結乾燥されたメルファランフルフェナミドまたは医薬として許容されるその塩は、毎日、２日毎もしくは３日毎、１週間毎、２週間、３週間、もしくは４週間毎に、または移植前などの単回高用量としてであっても、治療しようとする対象および癌の形態に応じて投与されてもよい。単回高用量は、約２００ｍｇ以上のメルファランフルフェナミド、たとえば約３００、４００、５００、６００、７００または８００ｍｇのメルファランフルフェナミドであってもよい。

「予防」と言う表現は、ここで使用される場合、ここに記載される任意の癌の形態に対する化学療法を受けてきた患者、および前記癌から生じる転移（methastasis）を何れも予防することを目的として継続的な療法を受けている患者における療法を含むことを意図している。

さらにまた本発明の側面は、メルファランフルフェナミドまたは医薬として許容されるその塩の凍結乾燥製剤における賦形剤としてのスクロースの使用であって、水性溶媒で再溶解させるときに前記メルファランフルフェナミドの凍結乾燥製剤の再溶解時間を短縮するための使用を提供する。

前記メルファランフルフェナミドまたは医薬として許容されるその塩は、好ましくはメルファランフルフェナミド塩酸塩（Ｊ１）である。

前記メルファランフルフェナミドまたは医薬として許容されるその塩は、前記メルファランフルフェナミドを前記賦形剤に供する前に、好ましくはｔｅｒｔ−ブタノールまたはｔｅｒｔ−ブタノールと水との混合物に溶解される。

本文書において、「凍結乾燥」、「フリーズドライ」、「凍結乾燥された」、「フリーズドライされた」などは、互換的に使用することができる。

スクロースは、たとえばＤａｎｓｕｋｋｅｒによって市販され、ＣＡＳ登録番号５７−５０−１を有する。

さらにまた本発明の側面は、メルファランフルフェナミド、好ましくはメルファランフルフェナミド塩酸塩（Ｊ１）の凍結乾燥医薬製剤を調製する方法における、任意に水と混合されているｔｅｒｔ−ブタノールの使用を提供する。好ましくは、前記ｔｅｒｔ−ブタノールは、体積比約１：１で水と混合されている。

メルファランフルフェナミドまたは医薬として許容されるその塩は、ＷＯ０１／９６３６７に開示される通りに調製されてもよく、その開示は参照により組み込まれている。ＷＯ０１／９６３６７の例１は、メルファランフルフェナミド（Ｌ−メルファラニル−Ｌ−ｐ−フルオロフェニルアラニンエチルエステル）、ならびにその塩酸塩であるメルファランフルフェナミド塩酸塩、Ｊ１（Ｌ−メルファラニル−Ｌ−ｐ−フルオロフェニルアラニンエチルエステル、化合物Ｊ１）を作製する合成手順を開示しており、その開示はここに組み込まれている。ＷＯ０１／９６３６７において、メルファランフルフェナミドは、メルファランより低い濃度で使用されるときでさえ、腫瘍に対する殺細胞活性が向上することが実証された。加えて、メルファラン耐性を回避することができた。

本発明は以下の例によってさらに説明されるが、それらは本発明の範囲を限定するものではない。

例１
凍結乾燥メルファランフルフェナミドの溶解速度に及ぼすスクロースの効果
スクロースをＪ１のフリーズドライプロセスに添加することによる、メルファランフルフェナミド塩酸塩（Ｊ１）の溶解速度を試験した。スクロースは、ＦＤＡ（米国食品医薬品局）により一般に安全と認められる（ＧＲＡＳ）配合剤である。

工程１−Ｊ１の調製および凍結乾燥
Ｊ１（５ｍｇ）の溶液を１：１のｔｅｒｔ−ブタノール：水（５ｍｌ）中で作製した。溶液１００μｌを、スクロース０．２ｍｇを含有するバイアルに添加した。バイアルをアルミ箔で覆い、ドライアイス−アセトン上で凍結させた。このバイアルは、０．１ｍｇのＪ１と０．２ｍｇのスクロースからなっていた。その後、試料を有するバイアルを一晩フリーズドライした。フリーズドライは、Ｌｅｙｂｏｌｄ Ｌｙｏｖａｃ ＧＴ２装置で行った。

工程２−溶解用グルコース溶液
５％グルコース溶液（１００ｍｌ）を調製し、この溶液に内部マーカーである３−メトキシ−安息香酸（０．８ｍｇ／ｍｌ）を添加した。

工程３−溶解速度の決定
工程２からのグルコース溶液０．５ｍｌを、工程１からのＪ１の試料を有するフリーズドライされたバイアルに添加した。バイアルを室温で１５秒間振盪し、その後濾過し、ガラス製バイアルに移して、ＨＰＬＣでＪ１の濃度を測定した。溶解したＪ１の量を、ＨＰＬＣおよび検量線を使用して決定した。

結果
工程３の１５秒の間にグルコース溶液に溶解したＪ１の濃度は０．０８ｍｇ／ｍｌであり、それは１５秒でＪ１のおよそ４０％が溶解したことを表す。

例２
スクロースの量が水溶液へのメルファランフルフェナミドの溶解速度に及ぼす効果の試験
メルファランフルフェナミド塩酸塩（Ｊ１）のフリーズドライプロセスに様々な量のスクロースを添加することによる溶解速度を試験した。実験を、上の例１で述べた通りに実行したが、スクロースの量を変化させた。Ｊ１（５ｍｇ）の溶液は、１：１のｔｅｒｔ−ブタノール：水（５ｍｌ）中で作製した。この溶液１００μｌを、フリーズドライしたスクロース０．２ｍｇ、５ｍｇおよび５０ｍｇをそれぞれ含有するバイアルに添加した。バイアルをアルミ箔で覆い、ドライアイス−アセトン上で凍結させた。これらのバイアルは、０．１ｍｇのＪ１と０．２ｍｇのスクロース（比率１：２ｗ／ｗ）、０．１ｍｇのＪ１と５ｍｇのスクロース（比率１：５０ｗ／ｗ）、および０．１ｍｇのＪ１と５０ｍｇのスクロース（比率１：５００ｗ／ｗ）からなっていた。その後、試料を有するバイアルを一晩フリーズドライした。フリーズドライは、Ｌｅｙｂｏｌｄ Ｌｙｏｖａｃ ＧＴ２装置で行った。水溶液（１００ｍｌ）を調製し、この溶液に内部マーカーである３−メトキシ−安息香酸（０．０８ｍｇ／ｍｌ）を添加した。Ｊ１の試料を有するフリーズドライしたバイアルのそれぞれにグルコース溶液０．５ｍｌを添加した。バイアルを室温で１５秒間振盪し、その後濾過し、ガラス製バイアルに移して、ＨＰＬＣでＪ１の濃度を測定した。各バイアル中の溶解したＪ１の量を、ＨＰＬＣおよび検量線を使用して決定した。各バイアルについて１５秒の間に水溶液に溶解したＪ１の濃度を表１に示す。

表１の結果から、前記メルファランフルフェナミドとスクロースの重量比（ｗ／ｗ）が約１：５０であったときに溶解速度の予想外の増加が生じたが、溶解速度の実質的な増加が、前記メルファランフルフェナミドとスクロースの重量比（ｗ／ｗ）が１：２であったときに生じたことが示される。

例３
スクロースの量がメルファランフルフェナミドのグルコース溶液への溶解速度に及ぼす効果の試験
Ｊ１の１ｍｇ／ｍＬ溶液を１：１のｔｅｒｔ−ブタノール／水中で調製した。この溶液１００μＬを、スクロース（０．２ｍｇ、１ｍｇ、２．５ｍｇ、５．０ｍｇ、７．５ｍｇ、１０ｍｇおよび５０ｍｇ）を含有する７個の透明な２ｍＬのガラス製バイアルに添加した。ガラス製バイアルは、フリーズドライ前にＪ１とスクロースの間に均質な混合物が形成されたことを監視できるように使用した。このバイアルを時々振盪した。バイアル１〜３は１〜２分後に透明な溶液（目視検査）を示したが、一方より多くの量のスクロースを含有するバイアル４〜７は、すべての砂糖の塊が溶解する前に最長２０分を要した。バイアル６および７については、二相系（ｔ−ブタノール／水）が観察され、均質な溶液が得られなかった。７個のバイアルを冷却し、３６時間フリーズドライした。

０．０８ｍｇ／ｍＬの３−メトキシ−安息香酸を含有する５％グルコース溶液（０．５ｍＬ）を、Ｊ１：スクロースの凍結乾燥混合物を含有するポリプロピレン製バイアルのそれぞれに一度に１つずつ添加した。バイアルを室温で１５秒間振盪し、この溶液をバイアルに付属の濾過器を通して濾過し、ガラス製バイアルに移して、ＨＰＬＣでＪ１の濃度を分析した。ＨＰＬＣのＪ１のピークの積分値を検量線と比較することによって、ｍｇ／ｍＬにおける濃度を算出することができた。その結果を表２に示す。

表２から、１５秒後のＪ１の溶解速度は、３６％しか溶解しなかった試料６を除き、すべての比率のスクロースで速やかであったことが示される。上記の通りに、試料６および７はフリーズドライ前に不均質であったことから、これは妥当な説明と言えるであろう。

例４
スクロースの量がバイアルを移した場合にメルファランフルフェナミドのグルコース溶液への溶解速度に及ぼす効果の試験
上の例３を繰り返したが、さらなる溶解を防ぐために、濾過した後に混合物をポリプロピレン製フィルターバイアルからガラス製バイアルに移したことが異なる。結果を表３に示す。

Ｊ１の溶解性は、例３に記載されるものよりいくらか低下した。したがって、これらの試験を実施したときにガラス製バイアルに移したことは、さらなる溶解を防止するために重要であると言えるであろう。これらの実験において内標準が１０％低下したことに注目されたい。これは、ガラス製バイアルとフィルターバイアルには圧力の差があり、それがＨＰＬＣへの注入量の差となることによって説明することができよう。

例５
スクロースの量が水溶液へのメルファランフルフェナミドの溶解速度に及ぼす効果の試験
１５秒後のＪ１の溶解にグルコースが及ぼす効果を調べるために、さらなる実験を行った。上の通りにフリーズドライを行うが、５％グルコース溶液の代わりに、０．０８ｍｇ／ｍＬの３−メトキシ安息香酸（０．５ｍＬ）を含有する水溶液を、ガラス製バイアルのそれぞれに一度に１つずつ添加した。バイアルを室温で１５秒間振盪し、ポリプロピレン製バイアルに移し、濾過し、さらなる溶解を防止するためにガラス製バイアルに移した。Ｊ１の濃度をＨＰＬＣで決定した。実験は二重で行った（ａおよびｂ）。その結果を表４に示す。

表４と表３の比較から、１５秒後に溶解したＪ１の量は、水を５％グルコース溶液の代わりに使用したときと程度の差はあるが同じであることが示される。より重要なパラメータは、フリーズドライしたバイアル中のスクロースの量であると思われる。Ｊ１：スクロースの比率≦１：５０での結果は、それより高いＪ１：スクロース比率での結果よりばらつきがないと思われる。

例６
Ｊ１：ｔｅｒｔ−ブタノール溶液の安定性試験
Ｊ１およびｔｅｒｔ−ブタノール：水、１：１（ｖ／ｖ）を含有する溶液の安定性を試験した。ｔｅｒｔ−ブタノール：水、１：１（ｖ／ｖ）および１ｍｇ／ｍｌの濃度のＪ１を含む溶液を、室温で５日間放置した。Ｊ１の量をＨＰＬＣによって測定したところ、そのシグナルは９７．２％から８５．５％に減少した。すなわち、１１．７％の減少であった。Ｊ１を酸性エタノール−水溶液に溶解させた同様の実験では、はるかに速いと思われる分解が示された。

例７
本発明の製剤の投与計画
メルファランフルフェナミド塩酸塩（Ｊ１）およびスクロースを含む本発明の凍結乾燥医薬製剤を臨床的に試験する。パフォーマンスステータスが良好で主要な臓器機能を保持している、進行悪性腫瘍がある患者であって、標準的な抗癌療法に修正することができないが医学的治療を必要とする患者が、この試験に登録される。生物学的に活性なレベル以下で治療され、それにより治療効果を得る可能性が低くなる患者の数を最小限にするために、最初に加速的用量漸増デザイン（accelerated dose titration design）を選択する。各用量レベルで一人の患者が、用量制限毒性が観察されるまで治療される。この試験を次に、最大耐用量まで用量レベルにつき患者３〜６人のコホートを有する保守的なデザインに切り換える。

試験の開始用量は、２５ｍｇの一定用量のＪ１（およそ１４ｍｇ／ｍ²）であり、これは等モルという点でメルファランの用量１４ｍｇまたは８ｍｇ／ｍ²に相当する。用量は、既定の投薬スケジュールに従い、観察される毒性に応じて増量／減量する。用量漸増法（dose escalating regimen）は、個々の患者にできる限り速く治療効果をもたらすという要望（whish）および必要性に基づくものであるが、不都合な毒性から患者を守ることが十分に配慮される。Ｊ１溶液は、許容量および腫瘍縮小効果に応じて、点滴静注として３週間毎に３〜６回の治療サイクルの間投与される。

すべての患者は、Ｊ１溶液を３０分間の点滴静注として各治療サイクルの１日目に受け、治療の間に２１日間置くが、最大３週間延期して臨床的に関連する有害事象がグレード１以下に戻るのを待つ可能性がある。患者は、少なくとも３回の治療サイクルを受けるように計画される。患者は、安全確認のために、各サイクルの８、１０〜１２、１５および２１日目に医療機関に戻る。イベントのスケジュールは、観察される毒性および腫瘍縮小効果に応じて、最大６回の治療サイクルまで治療サイクル毎に繰り返す。

治療的投与
本試験のすべての患者は、少なくとも３回の治療サイクルを、治療的投与の間に２１日間置いて受けるように計画される。３サイクル目の終わりに、疾患が安定的に寛解したまたは腫瘍が客観的に寛解した、毒性が許容できる患者について、治験責任医師の判断により試験の範囲内で治療をさらに３サイクル延長することができる。その後、患者は試験から外れる。試験治療は、標準的な臨床ルーチンに従って埋め込まれる／挿入される中心静脈カテーテルを介して投与される。Ｊ１濃縮物は、薬局によって、２５０ｍｌの５％グルコース中に希釈される。輸液チューブセットには、５％グルコースを予め充填しておくべきである。調製から点滴の終わりまでの時間は６０分を超えるべきではなく、すなわち、点滴は、調製から３０分経った後に開始するべきではなく、できる限り早く開始するべきであり、かつ３０分間の中心静脈点滴として投与されるべきである。Ｊ１溶液の投与の前に制吐薬を用いる予防的治療（たとえば、ナボバン；５ｍｇ ｉｖおよびベタプレッド；４ｍｇ ｉｖ）が推奨される。その後の遅延性嘔吐に対する制吐薬は、治験責任医師の判断により投与される。患者は、試験薬の投与停止後少なくとも２時間医療機関に滞在する。通常は、フェーズＩＩａの開始用量は５０ｍｇである。

腫瘍縮小効果
腫瘍縮小効果は、ベースラインおよび／または３週間毎もしくは９週目／３回目の治療サイクルで判定される。

ベースラインで、腫瘍病変は以下の通りに分類される：
測定可能 従来技法の場合２０ｍｍ以上、またはスパイラルＣＴスキャンもしくはＭＲＩの場合１０ｍｍ以上として、少なくとも１次元（記録すべき最長径）で正確に測定することができる病変。

測定不能 小病変（最長径が、従来技法で２０ｍｍ未満、またはスパイラルＣＴスキャンもしくはＭＲＩで１０ｍｍ未満）、および真の測定不能病変（すなわち、骨病変、軟髄膜疾患、腹水、胸水／心嚢水、炎症性乳房疾患、皮膚／肺のリンパ管症、画像処理技術によって確認および追跡されない腹部腫瘤、ならびに嚢胞性病変）を含めた、他のすべての病変。

関連する臓器のうち代表的な臓器につき最大５箇所、合計で１０箇所の測定可能な病変を標的病変として特定するべきであり、ベースラインとして記録および測定する。標的病変は、その大きさ（最長径を有するもの）およびその正確な繰り返し測定への適合性に基づいて選択するべきである。すべての標的病変の最長径和を算出し、ベースラインの最長径和として報告する。そのベースラインの最長径和を基準として使用し、それにより客観的な腫瘍縮小効果を特徴付ける。

他のすべての病変（または疾患の部位）は非標的病変として特定するべきであり、これらもベースラインで記録するべきである。これらの病変の測定は必要とされていないが、それぞれの存在または非存在は、経過観察の間にわたって注意するべきである。

標的病変の縮小効果の判定基準
完全奏効（ＣＲ） すべての標的病変の消失。

部分奏効（ＰＲ） ベースラインの最長径和を基準として、標的病変の最長径和が少なくとも３０％減少。

安定（ＳＤ） 治療を開始してから最小の最長径和を基準として、部分奏効に値する十分な縮小がなく、進行に値する十分な増加もない。

進行（ＰＤ） 治療の開始から記録された最小の最長径和を基準として、標的病変の最長径和が少なくとも２０％増加、または１箇所以上の新たな病変の出現。

非標的病変の縮小効果の判定基準
完全奏効（ＣＲ） すべての非標的病変の消失および腫瘍マーカーレベルの正常化。

安定（ＳＤ） １箇所以上の非標的病変（複数可）の残存および／または正常な限界値を超える腫瘍マーカーレベルの維持。

進行（ＰＤ） １箇所以上の新たな病変の出現および／または既存の非標的病変の明白な進行。

他の態様
本発明をその詳細な説明と併せて記載してきたが、前述の説明は例示することを意図しており、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲を限定することを意図するものでないことが理解されるべきである。他の側面、利点、および変形は、添付の特許請求の範囲内である。
以下に、本願の種々の実施態様を付記する。
［１］メルファランフルフェナミド、または医薬として許容されるその塩、およびスクロースを含む、凍結乾燥医薬製剤。
［２］前記メルファランフルフェナミドがメルファランフルフェナミド塩酸塩（Ｊ１）である、［１］に記載の凍結乾燥医薬製剤。
［３］前記メルファランフルフェナミドとスクロースの重量比（ｗ／ｗ）が、約１：２から約１：５００である、［１］または［２］に記載の凍結乾燥医薬製剤。
［４］前記メルファランフルフェナミドとスクロースの重量比（ｗ／ｗ）が、約１：２、約１：１０、約１：２５、約１：５０、約１：７５、約１：１００、または約１：５００である、［１］または［２］に記載の凍結乾燥医薬製剤。
［５］前記メルファランフルフェナミドとスクロースの重量比（ｗ／ｗ）が約１：５００である、［１］または［２］に記載の凍結乾燥医薬製剤。
［６］前記メルファランフルフェナミドとスクロースの重量比（ｗ／ｗ）が、約１：２から約１：７５である、［１］または［２］に記載の凍結乾燥医薬製剤。
［７］前記メルファランフルフェナミドとスクロースの重量比（ｗ／ｗ）が、約１：２から約１：５０である、［１］または［２］に記載の凍結乾燥医薬製剤。
［８］前記メルファランフルフェナミドとスクロースの重量比（ｗ／ｗ）が、約１：２５から約１：７５である、［１］または［２］に記載の凍結乾燥医薬製剤。
［９］前記メルファランフルフェナミドとスクロースの重量比（ｗ／ｗ）が約１：５０である、［１］または［２］に記載の凍結乾燥医薬製剤。
［１０］約２５ｍｇのメルファランフルフェナミド塩酸塩（Ｊ１）および約１．２５ｇのスクロースを含む、［１］〜［４］の何れか１に記載の凍結乾燥医薬製剤。
［１１］約５０ｍｇのメルファランフルフェナミド塩酸塩（Ｊ１）および約２．５ｇのスクロースを含む、［１］〜［４］の何れか１に記載の凍結乾燥医薬製剤。
［１２］約１５ｍｇのメルファランフルフェナミド塩酸塩（Ｊ１）および約０．７５ｇのスクロースを含む、［１］〜［４］の何れか１に記載の凍結乾燥医薬製剤。
［１３］約１５ｍｇのメルファランフルフェナミド塩酸塩（Ｊ１）および約０．７５ｇのスクロースを含む、［１］〜［４］の何れか１に記載の凍結乾燥医薬製剤。
［１４］約２０ｍｇのメルファランフルフェナミド塩酸塩（Ｊ１）および約１．０ｇのスクロースを含む、［１］〜［４］の何れか１に記載の凍結乾燥医薬製剤。
［１５］約４０ｍｇのメルファランフルフェナミド塩酸塩（Ｊ１）および約２．０ｇのスクロースを含む、［１］〜［４］の何れか１に記載の凍結乾燥医薬製剤。
［１６］約５５ｍｇのメルファランフルフェナミド塩酸塩（Ｊ１）および約２．７５ｇのスクロースを含む、［１］〜［４］の何れか１に記載の凍結乾燥医薬製剤。
［１７］約２００ｍｇ以上のメルファランフルフェナミド塩酸塩（Ｊ１）を含む、［１］〜［４］の何れか１に記載の凍結乾燥医薬製剤。
［１８］有機溶媒を含まないまたは実質的に含まない、［１］〜［１７］の何れか１に記載の凍結乾燥医薬製剤。
［１９］［１］〜［１８］の何れか１に記載の、メルファランフルフェナミドの凍結乾燥医薬製剤を含む、組成物。
［２０］生理学的に許容される溶液を含む、［１９］に記載の組成物。
［２１］前記生理学的に許容される溶液がグルコース溶液である、［２０］に記載の組成物。
［２２］グルコースの量が、前記凍結乾燥製剤の約４．５〜５．５重量％である、［２１］に記載の組成物。
［２３］（ｉ）［１］〜［１８］の何れか１に記載の凍結乾燥医薬製剤；および
（ｉｉ）生理学的に許容される溶液
を含む、構成品の組み合わせキット。
［２４］前記生理学的に許容される溶液がグルコース溶液である、［２３］に記載の構成品の組み合わせキット。
［２５］グルコースの量が約４．５〜５．５重量％である、［２４］に記載の構成品の組み合わせキット。
［２６］医薬品として使用するための、［１］〜［１８］の何れか１に記載の凍結乾燥医薬製剤。
［２７］癌の治療および／または予防に使用するための、［１］〜［１８］の何れか１に記載の凍結乾燥医薬製剤。
［２８］前記癌が、卵巣癌、肺癌、膀胱癌、中皮腫、多発性骨髄腫、乳癌または血液の癌の何れか１種である、［２７］に記載の使用のための凍結乾燥医薬製剤。
［２９］前記凍結乾燥医薬製剤が３週間毎に供される、［２７］または［２８］に記載の使用のための凍結乾燥医薬製剤。
［３０］前記凍結乾燥医薬製剤が３週間毎に３〜６回の治療サイクルで供される、［２９］に記載の使用のための凍結乾燥医薬製剤。
［３１］移植前の、［２７］に記載の使用のための凍結乾燥医薬製剤。
［３２］癌の治療に使用するための、［２３］〜［２５］の何れか１に記載の構成品の組み合わせキット。
［３３］前記癌が、卵巣癌、肺癌、膀胱癌、中皮腫、多発性骨髄腫、乳癌または血液の癌の何れか１種である、［３２］に記載の構成品の組み合わせキット。
［３４］癌を治療および／または予防する方法であって、［１］〜［１８］の何れか１に記載の凍結乾燥医薬製剤をかかる治療を必要とする対象に投与することによる方法。
［３５］前記癌が、卵巣癌、肺癌、膀胱癌、中皮腫、多発性骨髄腫、乳癌または血液の癌の何れか１種である、［３４］に記載の方法。
［３６］前記凍結乾燥医薬製剤を、かかる治療を必要とする対象に３週間毎に投与する、［３４］または［３５］に記載の方法。
［３７］前記凍結乾燥医薬製剤を、かかる治療を必要とする対象に３週間毎に３〜６回の治療サイクルの間投与する、［３６］に記載の方法。
［３８］［１］〜［１８］の何れか１に記載の凍結乾燥医薬製剤をかかる治療を必要とする対象に投与することによる、癌を治療および／または予防する方法であって、前記凍結乾燥医薬製剤を、移植前に治療有効用量でそれを必要とする対象に供する方法。
［３９］［１］〜［１８］の何れか１に記載の凍結乾燥医薬製剤を調製する方法であって、
ａ．メルファランフルフェナミドまたは医薬として許容されるその塩を有機溶媒に溶解させて、メルファランフルフェナミド溶液を得ること；
ｂ．前記メルファランフルフェナミド溶液をスクロースに添加して、メルファランフルフェナミド／スクロース水溶液を得ること；および
ｃ．前記メルファランフルフェナミド／スクロース水溶液を凍結乾燥に供すること
による方法。
［４０］前記メルファランフルフェナミドとスクロースの重量比（ｗ／ｗ）が、約１：２から、約１：１０、約１：２５、約１：５０、約１：７５、約１：１００、または約１：５００である、［３９］に記載の方法。
［４１］前記メルファランフルフェナミドとスクロースの重量比（ｗ／ｗ）が、約１：２から約１：５０である、［３９］に記載の方法。
［４２］前記メルファランフルフェナミドとスクロースの重量比（ｗ／ｗ）が、約１：２５から約１：７５である、［３９］に記載の方法。
［４３］前記メルファランフルフェナミドとスクロースの重量比（ｗ／ｗ）が約１：５０である、［３９］に記載の方法。
［４４］前記有機溶媒が、ｔｅｒｔ−ブタノールまたはｔｅｒｔ−ブタノールと水との混合物である、［３９］〜［４３］の何れか１に記載の方法。
［４５］前記有機溶媒が、体積比約１：１のｔｅｒｔ−ブタノールと水との混合物である、［４４］に記載の方法。
［４６］前記メルファランフルフェナミドがメルファランフルフェナミド塩酸塩（Ｊ１）である、［３９］〜［４５］の何れか１に記載の方法。
［４７］メルファランフルフェナミドまたは医薬として許容されるその塩の凍結乾燥製剤における賦形剤としてのスクロースの使用であって、水性溶媒で再溶解させるときに前記メルファランフルフェナミドの前記凍結乾燥製剤の再溶解時間を短縮するための使用。
［４８］前記メルファランフルフェナミドまたは医薬として許容されるその塩がメルファランフルフェナミド塩酸塩（Ｊ１）である、［４７］に記載の使用。
［４９］前記メルファランフルフェナミドまたは医薬として許容されるその塩を、前記メルファランフルフェナミドを前記賦形剤に供する前に、ｔｅｒｔ−ブタノールまたはｔｅｒｔ−ブタノールと水との混合物に溶解する、［４７］または［４８］に記載の使用。
［５０］メルファランフルフェナミドの凍結乾燥医薬製剤を調製する方法における、任意に水と混合されているｔｅｒｔ−ブタノールの使用。
［５１］前記ｔｅｒｔ−ブタノールが、体積比約１：１で水と混合されている、［４９］または［５０］に記載の使用。

Claims (30)

1. メルファランフルフェナミド塩酸塩（Ｊ１）およびスクロースを含み、前記メルファランフルフェナミド塩酸塩（Ｊ１）とスクロースの重量比（ｗ／ｗ）が、約１：２５から約１：７５である、凍結乾燥医薬製剤。
2. 前記メルファランフルフェナミド塩酸塩（Ｊ１）とスクロースの重量比（ｗ／ｗ）が約１：５０である、請求項１に記載の凍結乾燥医薬製剤。
3. 約２５ｍｇのメルファランフルフェナミド塩酸塩（Ｊ１）および約１．２５ｇのスクロースを含む、請求項１または２に記載の凍結乾燥医薬製剤。
4. 約５０ｍｇのメルファランフルフェナミド塩酸塩（Ｊ１）および約２．５ｇのスクロースを含む、請求項１または２に記載の凍結乾燥医薬製剤。
5. 約１５ｍｇのメルファランフルフェナミド塩酸塩（Ｊ１）および約０．７５ｇのスクロースを含む、請求項１または２に記載の凍結乾燥医薬製剤。
6. 約２０ｍｇのメルファランフルフェナミド塩酸塩（Ｊ１）および約１．０ｇのスクロースを含む、請求項１または２に記載の凍結乾燥医薬製剤。
7. 約４０ｍｇのメルファランフルフェナミド塩酸塩（Ｊ１）および約２．０ｇのスクロースを含む、請求項１または２に記載の凍結乾燥医薬製剤。
8. 約５５ｍｇのメルファランフルフェナミド塩酸塩（Ｊ１）および約２．７５ｇのスクロースを含む、請求項１または２に記載の凍結乾燥医薬製剤。
9. 約２００ｍｇ以上のメルファランフルフェナミド塩酸塩（Ｊ１）を含む、請求項１または２に記載の凍結乾燥医薬製剤。
10. 有機溶媒を含まないまたは実質的に含まない、請求項１〜９の何れか１項に記載の凍結乾燥医薬製剤。
11. 請求項１〜１０の何れか１項に記載の、メルファランフルフェナミド塩酸塩（Ｊ１）の凍結乾燥医薬製剤を含む、組成物。
12. 生理学的に許容される溶液を含む、請求項１１に記載の組成物。
13. 前記生理学的に許容される溶液がグルコース溶液である、請求項１２に記載の組成物。
14. グルコースの量が、前記凍結乾燥製剤の約４．５〜５．５重量％である、請求項１３に記載の組成物。
15. （ｉ）請求項１〜１０の何れか１項に記載の凍結乾燥医薬製剤；および
    （ｉｉ）生理学的に許容される溶液
    を含む、構成品の組み合わせキット。
16. 前記生理学的に許容される溶液がグルコース溶液である、請求項１５に記載の構成品の組み合わせキット。
17. グルコースの量が約４．５〜５．５重量％である、請求項１６に記載の構成品の組み合わせキット。
18. 医薬品として使用するための、請求項１〜１０の何れか１項に記載の凍結乾燥医薬製剤。
19. 癌の治療および／または予防に使用するための、請求項１〜１０の何れか１項に記載の凍結乾燥医薬製剤。
20. 前記癌が、卵巣癌、肺癌、膀胱癌、中皮腫、多発性骨髄腫、乳癌または血液の癌の何れか１種である、請求項１９に記載の使用のための凍結乾燥医薬製剤。
21. 前記凍結乾燥医薬製剤が３週間毎に供される、請求項１９または２０に記載の使用のための凍結乾燥医薬製剤。
22. 前記凍結乾燥医薬製剤が３週間毎に３〜６回の治療サイクルで供される、請求項２１に記載の使用のための凍結乾燥医薬製剤。
23. 移植前の、請求項１９に記載の使用のための凍結乾燥医薬製剤。
24. 癌の治療に使用するための、請求項１５〜１７の何れか１項に記載の構成品の組み合わせキット。
25. 前記癌が、卵巣癌、肺癌、膀胱癌、中皮腫、多発性骨髄腫、乳癌または血液の癌の何れか１種である、請求項２４に記載の構成品の組み合わせキット。
26. 請求項１〜１０の何れか１項に記載の凍結乾燥医薬製剤を調製する方法であって、
    ａ．メルファランフルフェナミド塩酸塩（Ｊ１）を有機溶媒に溶解させて、メルファランフルフェナミド塩酸塩（Ｊ１）溶液を得ること；
    ｂ．前記メルファランフルフェナミド塩酸塩（Ｊ１）溶液をスクロースに添加して、メルファランフルフェナミド塩酸塩（Ｊ１）／スクロース水溶液を得ること；および
    ｃ．前記メルファランフルフェナミド塩酸塩（Ｊ１）／スクロース水溶液を凍結乾燥に供すること
    による方法。
27. 前記メルファランフルフェナミド塩酸塩（Ｊ１）とスクロースの重量比（ｗ／ｗ）が、約１：２５から約１：７５である、請求項２６に記載の方法。
28. 前記メルファランフルフェナミド塩酸塩（Ｊ１）とスクロースの重量比（ｗ／ｗ）が約１：５０である、請求項２６に記載の方法。
29. 前記有機溶媒が、ｔｅｒｔ−ブタノールまたはｔｅｒｔ−ブタノールと水との混合物である、請求項２６〜２８の何れか１項に記載の方法。
30. 前記有機溶媒が、体積比約１：１のｔｅｒｔ−ブタノールと水との混合物である、請求項２９に記載の方法。