KR102194376B1 - 세포독성 디펩티드의 동결건조 제제 - Google Patents

세포독성 디펩티드의 동결건조 제제 Download PDF

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Abstract

본 발명은 세포독성 디펩티드, 예컨대 멜팔란 플루펜아미드, 및 폴리소르베이트; 폴리에틸렌 글리콜; β-사이클로덱스트린; α-사이클로덱스트린; 하이드록시프로필-β-사이클로덱스트린; 설포부틸에테르-β-사이클로덱스트린; 락토스; 벤질 알콜; 디소듐 석시네이트; 프로필렌 글리콜; 크레모포르 EL; 디메틸 설폭사이드; D-만니톨; 트레할로스; 수크로스; 및 아미노산을 포함하는 그룹 중에서 선택된 하나 이상의 부형제(들)를 포함하는 신규한 동결건조 약제학적 제제에 관한 것이다. 본 제제는 추가로 제형화될 수 있으며 암 치료법에 유용하다.

Description

세포독성 디펩티드의 동결건조 제제{Lyophilized preparation of cytotoxic dipeptides}
본 발명은 세포독성 디펩티드 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염을 포함하는 동결건조 약제학적 제제, 그의 제조 방법, 동결건조 약제학적 제제를 포함하는 조성물 및 암의 치료에 있어서의 그의 용도에 관한 것이다.
암은 치유가 어렵고 치명적일 수 있는 질환이다. 따라서, 암의 새로운 치료법을 개발하기 위한 노력이 연구 분야에서는 지속적으로 이루어지고 있다. 암의 대부분은 고형암, 예를 들어, 폐암, 유방암, 전립선암으로 존재하는 한편, 나머지는 혈액 및 림프계 악성 종양, 예를 들어, 백혈병 및 림프종이다.
화학요법은 종종 질환을 치유하거나 완화시키기 위한 시도로 사용된다. 암세포는 전형적으로 신속하게 분열하기 때문에 화학요법은 보통 신속하게 분열하는 세포를 사멸시킴으로써 작용한다. 넓은 의미에서, 대부분의 화학요법 약물은 유사분열(즉, 세포 분열)을 손상시킴으로써 작용하며, 빠르게 분열하는 세포를 효과적인 목표로 한다. 이들 약물이 세포를 손상시키기 때문에 이들을 세포독성제라 부른다. 어떤 약물은 세포가 아폽토시스(소위 "프로그래밍된 세포 사멸")를 겪게 한다. 항종양 효과를 최적화하고, 부작용을 최소화하고, 내성 발달을 예방하기 위하여 상이한 작용 방식을 나타내는 2가지 이상의 약물이 함께 사용되는 경우, 종종 조합 요법이 이용된다. 화학요법으로 얻어지는 결과는 종양 유형에 따라 달라진다. 어떤 종양은 매우 민감하며, 이런 경우 치료는 높은 확률로 치유에 이르게 한다.
화학요법제는 일반적으로 알킬화제, 항대사제, 안트라사이클린, 식물 알칼로이드, 토포아이소머라제 저해제 및 기타 항종양제로 나뉠 수 있다. 약물은 세포 분열 또는 DNA 합성에 영향을 준다.
알킬화제, 예를 들어, 질소 머스터드 유래의 약물인 비스(2-클로로에틸)아민 유도체는 광범위한 종양성 질환의 치료에 화학요법제로 사용된다. 알킬화제는 세포의 음전기 부위(electronegative site)에 알킬기를 공유적으로 결합시키는 능력을 나타낸다. 따라서, 이들 제제는 생물학적으로 중요한 분자, 예를 들어, RNA, DNA 및 단백질 중의 헤테로원자와 공유 결합을 형성함으로써 세포 기능을 손상시키는 작용을 한다. 알킬화제의 예로는 세포의 DNA를 화학적으로 변형시키는 메클로레타민, 사이클로포스파미드, 클로람부실, 이포스파미드, 테모졸로미드 및 멜팔란을 들 수 있다.
WO 01/96367호는 알킬화 디- 및 트리펩티드 및 하나 또는 두개의 부가적인 아미노산 또는 아미노산 유도체를 개시한다. 이들 유도체는 다양한 종양 유형에 대해 개선된 효능을 나타내는 것으로 입증되었다.
멜팔란, 즉, p-[비스-(2-클로로에틸)아미노]페닐알라닌은 질소 머스타드와 아미노산인 페닐알라닌의 컨쥬게이트로서, 1950년대 중반에 합성되었다(미국 특허 제3,032,584호). 이 전통적인 알킬화 물질은 곧 화학요법제 분야에 유용한 약물이 되었으며 여전히 예를 들어 골수종의 치료에 중요하다. 그러나, 후기 고형 종양의 치료에서 멜팔란의 임상적 이용은 제한된 효능을 나타낸다. 따라서, 악성종양 세포에 대한 보다 선택적인 작용을 탐색하던 중에 멜팔란 유사체가 합성되었다.
문헌(Larionov L. F., Cancer Res (1961), 21, 99-104)에서는 다양한 멜팔란-관련 유도체들을 개시하고 있다.
문헌(STN registry files RN: 1060633-95-5, RN: 88 7609-28-1, RN 790650-89-4, RN: 781606-39-1, RN: 773046-98-3, RN: 767621-58-9, RN: 760165-58-0 및 RN: 757941-61-0)에서는 다양한 멜팔란-관련 유도체들을 개시하고 있다.
문헌(Koltun, M et al., Biopharmaceutics & Drug disposition (210), 31, 450-454)에서는 멜팔란의 형태들을 개시하고 있다.
문헌(Ma D Q et al., International Journal of Pharmaceutics (1999), 189, 227-234)에서는 멜팔란의 형태들을 개시하고 있다.
문헌(Murav'ev I et al., Farmatsiya (1978), 27, (2), 13-15 (with abstract in Chemical Abstracts no. 1978:412066))에서는 멜팔란-관련 유도체들을 개시하고 있다.
동결건조(lyophilization) 또는 냉동-건조(freeze-drying)는 보존 또는 안정성 증가 또는 분해 정지를 위해 사용되어온, 시료를 탈수시키는 방법이다. 전형적으로 약 1-4%인 동결건조 산물의 낮은 물 함량으로 인하여 미생물 및 효소의 작용이 저해되며 이에 따라 제품 수명(product life)이 연장된다. 동결건조에서는, 동결건조시키고자 하는 시료를 수용액에 용해시킨 다음 동결시키고 주변 압력을 감소시킨다. 그 후, 직접 고체상으로부터 기체상으로 냉동된 물을 승화시키기 위하여, 임의로 열을 적용함에 의해 시료를 승화시킨다. 산물 내의 최종 물 함량은 매우 낮아서, 전형적으로 약 1% 내지 4%이다. 동결건조는 보통 약제학적 산물의 저장 수명을 증가시키기 위하여 약제학적 분야에서 사용된다.
일반적으로, 친유성 디펩티드 에스테르 유도체는 수용액 중의 낮은 용해도 문제를 가지고 있다. 따라서, 이러한 디펩티드를 용해시키기 위해 DMA(디메틸아세트아미드)와 같은 유기 용매를 사용할 필요가 있다. 그러나, 유기 용매는 종종 독성이 있으며, 또한 암환자와 같은 대상에게 디펩티드를 투여하기 위해 사용되는 의료 장치의 파괴를 유발할 수 있다. 결과적으로, 유기 용매 중에 세포독성 디펩티드를 용해시키고 제공함에 있어서 나타나는 문제를 극복하기 위해서, 생리학적으로 허용되는 용액 중에 충분한 용해도를 나타내는 세포독성 디펩티드의 대안적인 약제학적 제제가 요구된다.
본 발명은 멜팔란 플루펜아미드로도 공지되어 있는 멜팔라닐-L-p-플루오로페닐알라닌 에틸 에스테르 뿐아니라 그의 약제학적으로 허용되는 염, 특히 멜팔란 플루펜아미드 하이드로클로라이드 또는 J1으로도 공지되어 있는 멜팔라닐-L-p-플루오로페닐알라닌 에틸 에스테르 하이드로클로라이드를 포함하는 동결건조 제제에 관한 것이다.
본 발명의 한 측면은
(i) 멜팔란 플루펜아미드 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염; 및
(ii) 폴리소르베이트; 폴리에틸렌 글리콜; β-사이클로덱스트린; α-사이클로덱스트린; 하이드록시프로필-β-사이클로덱스트린; 설포부틸에테르-β-사이클로덱스트린; 락토스; 벤질 알콜; 디소듐 석시네이트; 프로필렌 글리콜; 크레모포르 EL; 디메틸 설폭사이드; D-만니톨; 트레할로스; 수크로스; 및 아미노산을 포함하는 그룹 중에서 선택된 적어도 하나의 부형제를 포함하는 동결건조 약제학적 제제에 관한 것이다.
본 발명의 다른 측면은 수용액에 가용성인 동결건조 약제학적 제제이다.
본 발명의 다른 측면은
a. 멜팔란 플루펜아미드 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염을 유기 용매에 용해시켜 멜팔란 플루펜아미드 용액을 얻는 단계;
b. 약 0.2-3.0 mg/ml의 농도로 멜팔란 플루펜아미드 수용액을 얻기 위해 멜팔란 플루펜아미드 용액에 물을 가하는 단계;
c. 폴리소르베이트; 폴리에틸렌 글리콜; β-사이클로덱스트린; α-사이클로덱스트린; 하이드록시프로필-β-사이클로덱스트린; 설포부틸에테르-β-사이클로덱스트린; 락토스; 벤질 알콜; 디소듐 석시네이트; 프로필렌 글리콜; 크레모포르 EL; 디메틸 설폭사이드; D-만니톨; 트레할로스; 수크로스 및 아미노산을 포함하는 그룹 중에서 선택된 적어도 하나의 부형제를 멜팔란 플루펜아미드 용액에 가하는 단계; 및
d. 부형제(들)을 함유하는 멜팔란 플루펜아미드 수용액을 동결건조시키는 단계에 의해 본 명세서에 기재된 동결건조 약제학적 제제를 제조하는 방법이다.
본 발명의 다른 측면은 본 명세서에 정의된 동결건조 약제학적 제제를 포함하는 제1 용기 및 생리학적으로 허용되는 용액을 포함하는 제2 용기를 포함하는, 부품의 키트이다.
본 발명의 다른 측면은 의약품으로서 사용하기 위한, 본 명세서에 기재된 동결건조 약제학적 제제이다.
본 발명의 다른 측면은 의약품으로서 사용하기 위한, 본 명세서에 기재된 부품의 키트이다.
본 발명의 다른 측면은 난소암, 폐암, 방광암, 중피종, 다발성 골수종, 유방암 및/또는 임의의 고형암 또는 혈액암과 같은 암의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한, 본 명세서에 기재된 동결건조 약제학적 제제이다.
본 발명의 다른 측면은 난소암, 폐암, 방광암, 중피종, 다발성 골수종, 유방암 및/또는 임의의 고형암 또는 혈액암과 같은 암의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한, 본 명세서에 기재된 부품의 키트이다.
본 발명의 다른 측면은 본 명세서에 기재된 동결건조 약제학적 제제를 이를 필요로 하는 대상에게 치료적 유효 용량으로 투여함에 의해 난소암, 폐암, 방광암, 중피종, 다발성 골수종, 유방암 및/또는 임의의 고형암 또는 혈액암과 같은 암을 치료 및/또는 예방하는 방법이다.
달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속하는 기술 분야의 당업자에 의해 통상 이해되는 것과 동일한 의미를 나타낸다. 비록 본 명세서에 기재된 것과 유사하거나 균등한 방법 및 재료들이 본 발명의 실시 또는 테스트에 사용될 수 있지만, 적합한 방법 및 재료들은 후술되어 있다. 본 명세서에 언급된 모든 공개문헌, 특허 출원, 특허 및 기타 참조문헌들은 그 전체 내용이 원용에 의해 포함된다. 상충되는 경우, 정의들을 포함한 본 명세서가 대체할 것이다. 또한, 재료들, 방법들 및 실시예들은 설명을 위한 것일 뿐 제한하고자 하는 것이 아니다.
본 발명의 다른 특징 및 이점은 하기 상세한 설명, 도면, 실시예 및 특허청구범위로부터 명백해질 것이다.
본 발명은 세포독성 디펩티드인 멜팔란 플루펜아미드를 포함하는 신규한 동결건조 약제학적 제제에 관한 것이다. 본 발명에 따른 약제학적 제제는 암의 예방 및 치료에 유용하게 사용될 수 있다.
도 1a-d는 실시예 2의 방법 A에 따라 부형제 부재하에 동결건조된 멜팔란 플루펜아미드의 4회 반복된 용해 속도 측정의 그래프를 나타낸다. 표시된 시점에 시료를 채취하고 용해된 멜팔란 플루펜아미드의 양을 HPLC로 결정하였다. y-축은 멜팔란 플루펜아미드의 양을 mg/ml 단위로 보여준다.
도 2a-e는 실시예 2의 방법 A에 따라 도면에 표시된 부형제 존재하에 동결건조된 멜팔란 플루펜아미드의 용해 속도 측정의 그래프를 나타낸다. 표시된 시점에 시료를 채취하고 용해된 멜팔란 플루펜아미드의 양을 HPLC로 결정하였다. y-축은 멜팔란 플루펜아미드의 양을 mg/ml 단위로 보여준다.
도 3은 실시예 2의 방법 B에 따라 부형제 부재하에 멜팔란 플루펜아미드의 용해 속도 측정의 그래프를 나타낸다. 표시된 시점에 시료를 채취하고 용해된 멜팔란 플루펜아미드의 양을 HPLC로 결정하였다. y-축은 멜팔란 플루펜아미드의 양을 mg/ml 단위로 보여준다.
도 4a-e는 방법 B에 따라 도면에 표시된 부형제 존재하에 동결건조된 멜팔란 플루펜아미드의 용해 속도 측정의 그래프를 나타낸다. 표시된 시점에 시료를 채취하고 용해된 멜팔란 플루펜아미드의 양을 HPLC로 결정하였다. y-축은 멜팔란 플루펜아미드의 양을 mg/ml 단위로 보여준다.
도 5는 다음과 같은 용해 속도 측정의 그래프를 나타낸다, a: 폴리소르베이트 80 부재하에 동결건조된 멜팔란 플루펜아미드; b: 10% 폴리소르베이트 80 존재하에 동결건조된 멜팔란 플루펜아미드; c: 50% 폴리소르베이트 80 존재하에 동결건조된 멜팔란 플루펜아미드; d: 100% 폴리소르베이트 80 존재하에 동결건조된 멜팔란 플루펜아미드. 양은 멜팔란 플루펜아미드의 양을 기준으로 한다. y-축은 HPLC를 사용하여 결정된, 내부 표준을 기준으로 하는, 용해된 멜팔란 플루펜아미드 양을 보여준다.
도 6은 동결건조 후에 50%(mol)의 폴리소르베이트 80을 함유하거나(좌측) 폴리소르베이트 80을 함유하지 않는(우측) 5% 글루코스 용액에 1 mg/ml 농도로 용해된 멜팔란 플루펜아미드(J1)가 들어있는 유리 튜브의 사진이다.
도 7은 멜팔란 플루펜아미드(L-멜팔라닐-L-p-플루오로페닐알라닌 에틸 에스테르), L-멜팔라닐-L-p-플루오로페닐알라닌 이소프로필 에스테르(JV28), L-프롤리닐-L-멜팔라닐-L-p-플루오로페닐알라닌 에틸 에스테르(J3)의 구조식을 나타낸다.
동결건조되지 않은 세포독성 디펩티드 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염은 수용액에서의 용해도가 낮을 수 있으며, 상기 디펩티드 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염을 용해시키기 위해서는 유기 용매, 예를 들어, DMA(디메틸아세트아미드)를 사용할 필요가 있을 수 있다. 따라서, 세포독성 디펩티드를 환자에게 투여하고자 하는 경우에는, 먼저 물질을 DMA와 같은 유기 용매에 용해시켜야 하고, 다음에 환자에게 투여하기 전에 주사 용액에 희석시켜야 한다. 이런 방법에 의해 환자는 유기 용매에 노출되며, 이러한 노출은 환자에게 위험할 수 있다. 또한, 유기 용매는 멜팔란 플루펜아미드를 대상, 예를 들어, 암 환자에게 투여하는데 사용되는 의료 장치를 파괴할 수 있다.
본 발명자들은 놀랍게도 소정의 세포독성 디펩티드 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염이 부형제의 존재하에 동결건조되면 생성된 동결건조 약제학적 제제는 생리학적으로 허용되는 용액 중에서 훨씬 더 높은 용해도를 나타낼 수 있음을 발견하였다. 실제로, 용해도가 매우 높아 세포독성 디펩티드 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염을 유기 용매 중에 용해시키는 단계를 생략하고 세포독성 디펩티드를 직접 생리학적으로 허용되는 수용액 중에 용해시켜 환자에게 투여할 수 있다. 바람직하게, 상기 세포독성 디펩티드는 멜팔란 플루펜아미드 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염이다.
기존 제제에서, 멜팔란 플루펜아미드는 결정형 백색 분말로서 합성을 통해 얻어졌다. 이 결정형은 산성도가 높은 수용액 중에만 용해될 수 있으며, 이는 실제의 제조 목적상 불가능한 조건이다. 그와 같은 부형제의 존재는 용해도를 충분히 개선시키지 못하였다. 따라서, 기존에는 그 대신에 멜팔란 플루펜아미드를 글루코스 용액 중의 DMA(디메틸아세트아미드)에 용해시켰다. 제제는 실현가능하였지만 불안정하여 7% 분해/시간을 나타내었다. 또한, 이량화가 발생하고 용액은 밝은 황색으로 변하였다. 그러나, 이 제제는 신뢰할 수 없고 중합 속도는 허용되지 않는 방식으로 변화하였다.
따라서, 안정성이 증가되고 가용성인 멜팔란 플루펜아미드 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염을 포함하는 제제를 제공하는 대안적인 방법을 찾아낼 필요가 있다. 또한, 환자에게 제공되는 제품 내에 유기 용매(예를 들어, DMA)가 존재하는 부정적인 문제를 피하기 위하여 제제는 수용성이어야 한다.
본 발명의 한 측면은
(i) 멜팔란 플루펜아미드 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염; 및
(ii) 폴리소르베이트; 폴리에틸렌 글리콜; β-사이클로덱스트린; α-사이클로덱스트린; 하이드록시프로필-β-사이클로덱스트린; 설포부틸에테르-β-사이클로덱스트린; 락토스; 벤질 알콜; 디소듐 석시네이트; 프로필렌 글리콜; 크레모포르 EL; 디메틸 설폭사이드; D-만니톨; 트레할로스; 수크로스; 및 아미노산을 포함하는 그룹 중에서 선택된 적어도 하나의 부형제를 포함하는 동결건조 약제학적 제제이다.
이 측면의 한 실시양태에서, 상기 부형제는 폴리소르베이트 80; PEG 400; 락토스; 벤질 알콜; 디소듐 석시네이트; 프로필렌 글리콜; PEG 300; 크레모포르 EL; 디메틸 설폭사이드; D-만니톨; 트레할로스; 수크로스; 및 히스티딘을 포함하는 그룹 중에서 선택된다.
이 측면의 다른 실시양태에서, 상기 멜팔란 플루펜아미드는 멜팔란 플루펜아미드 하이드로클로라이드(J1)이다.
본 발명의 다른 측면에서,
(i) 멜팔란 플루펜아미드 하이드로클로라이드(J1); 및
(ii) 폴리소르베이트; 폴리에틸렌 글리콜; β-사이클로덱스트린; α-사이클로덱스트린; 하이드록시프로필-β-사이클로덱스트린; 설포부틸에테르-β-사이클로덱스트린; 락토스; 벤질 알콜; 디소듐 석시네이트; 프로필렌 글리콜; 크레모포르 EL; 디메틸 설폭사이드; D-만니톨; 트레할로스; 수크로스; 및 아미노산을 포함하는 그룹 중에서 선택된 적어도 하나의 부형제를 포함하는 약제학적 제제가 제공된다.
이 측면의 한 실시양태에서, 상기 적어도 하나의 부형제는 폴리소르베이트 또는 폴리에틸렌 글리콜이다.
이 측면의 다른 실시양태에서, 상기 적어도 하나의 부형제는 폴리소르베이트 80이다.
이 측면의 다른 실시양태에서, 상기 적어도 하나의 부형제는 계면활성제 특성을 나타낸다. 이러한 특성은 동결건조 약제학적 제제의 안정성을 증가시킨다. 계면활성제 특성을 나타내는 상기 적어도 하나의 부형제는 폴리소르베이트 또는 폴리에틸렌 글리콜, 예를 들어, 폴리소르베이트 80 또는 PEG 400일 수 있다.
이 측면의 다른 실시양태에서, 제제는 멜팔란 플루펜아미드 하이드로클로라이드(J1) 및 부형제 폴리소르베이트 80을 포함한다. 부형제 폴리소르베이트 80의 존재는 동결건조 약제학적 제제의 안정성을 증가시킨다. 또한, 최종 제제는 유기 용매를 결여하거나 본질적으로 결여할 수 있으므로 독성이 적다.
본 발명은 건조 형태에서 안정하고 유기 용매의 부재하에 수용액에 가용성인 동결건조 제제를 제공한다. 기존에도 멜팔란 플루펜아미드 단독의 동결건조 제제를 제조하는 것이 가능하였으나, 이 제제는 분해 시간과 비교하여 수용액 중에 너무 서서히 용해되었다. 동결건조 멜팔란 플루펜아미드 제제에 부형제를 포함시키면(유기 용매 중의 초기 용액을 통해) 재구성 시간을 상당히 개선하지만, 재구성된 멜팔란 플루펜아미드의 안정성을 유의적으로 변화시키지 못한다. 그 결과, 재구성된 멜팔란 플루펜아미드의 시간 윈도(time window)가 확대되며, 이는 필요한 경우 예를 들어 주입 속도의 저하를 허용함으로써 환자의 치료를 개선한다. "유기 용매 부재하의" 제제는 미량의, 전형적으로 0.5%(w/w) 미만의 유기 용매를 포함할 수 있었다.
본 명세서에 기재된 멜팔란 플루펜아미드 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염의 동결건조 약제학적 제제는 백색의 거품상 분말인 것과 대조적으로, 동결건조되지 않은 멜팔란 플루펜아미드 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염은 밀도가 크고 약간 황색을 띠는 분말의 형태일 수 있다.
전형적으로, 동결건조는 전처리, 냉동, 1차 건조 및 2차 건조의 4 단계를 포함한다. 전처리 단계에서, 예를 들어, 허용가능한 결과를 얻기 위해 물질을 추가의 성분과 혼합하거나 목적하는 농도의 용액을 준비함으로써 동결건조시키고자 하는 물질을 동결건조시킬 준비를 한다. 냉동 단계는, 예를 들어, 기계적 냉각, 드라이아이스 및 메탄올, 또는 액체 질소에 의해 냉각된 배스 내의 냉동-건조 플라스크에서 실행될 수 있다. 더 큰 규모로 동결건조시키기 위해 냉동-건조 기계를 이용할 수 있다. 보통, 냉동 온도는 -50℃ 내지 -80℃이다.
1차 건조 단계에서, 압력을 몇 밀리바의 범위로 낮추고, 물이 재료로부터 승화하도록 열을 공급할 수 있다. 필요한 열의 양은 승화하는 분자의 승화 잠열을 이용하여 계산할 수 있다. 이러한 지속 기간은 다를 수 있지만 물질 구조를 보존하기 위하여 수일간 지속될 수 있다.
최종적인 2차 건조 단계의 목적은 임의의 냉동되지 않은 물 분자를 제거하기 위한 것이다. 이 단계에서는, 물 분자와 냉동된 물질 사이에 형성된 임의의 물리화학적 상호작용을 깨뜨리기 위하여 온도가 0℃를 초과하는 정도일 수 있다.
본 발명의 맥락에서, 멜팔란 플루펜아미드 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염이 동결건조되는 것으로 이해된다. 따라서, 용어 "멜팔란 플루펜아미드 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염의 동결건조 약제학적 제제"는 멜팔란 플루펜아미드 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염이 동결건조된 것을 의미하는 것으로 이해된다.
본 발명의 추가 측면은 동결건조된 멜팔란 플루펜아미드 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염, 이러한 멜팔란 플루펜아미드를 포함하는 부품의 키트, 이러한 멜팔란 플루펜아미드 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염의 제조 방법, 이러한 동결건조된 멜팔란 플루펜아미드 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염을 포함하는 조성물, 및 그의 용도를 제공한다.
본 발명의 맥락에서 "동결건조", "동결건조된" 등은 "냉동-건조", "냉동-건조된" 등과 호환가능하게 사용될 수 있다.
본 명세서에 기재된 바와 같이 동결건조될 수 있는 세포독성 디펩티드의 예는 WO 01/96367호에 설명되어 있다. 분자의 N-말단은 바람직하게 아미드 또는 카바메이트로서 보호되어서는 안된다. 화합물의 보호 형태가 일반적으로 상응하는 유리 형태보다 낮은 세포독성 활성을 나타내기 때문에, 이는 화학식 I의 R4가 바람직하게 포르밀, 아세틸 또는 프로피오닐, 또는 벤조일과 같은 보호기여서는 안된다는 것을 의미한다. 천연 아미노산은 정상적으로 존재하며 살아있는 유기체에서 이들의 기능을 발휘하는 아미노산을 지칭한다. 개질된 아미노산은 어떤 방식으로든 천연 아미노산과 상이한 화학 구조 및 화학 조성으로 개질된 아미노산을 지칭한다. 천연 사이클릭 아미노산의 예는 프롤린이다. 방향족 아미노산의 예는 페닐알라닌, 타이로신, 트립토판 및 히스티딘이다.
세포독성 디펩티드, 예를 들어, 멜팔란 플루펜아미드는 또한 그의 원자들의 하나 이상에서 비천연 비율의 원자 동위원소를 함유할 수 있다. 예를 들어, 화합물은 방사성 동위원소, 예를 들어, 삼중 수소(3H), 이중 수소(2H), 요오드-125(125I) 또는 탄소-14(14C)로 방사능 표지될 수 있다.
세포독성 디펩티드 멜팔란 플루펜아미드는 하기 점에서 멜팔란과 명백하게 상이하다:
- 구조의 차이(멜팔란 플루펜아미드는 C-말단에서 멜팔란의 카복실산 대신에에틸 에스테르이다. 이에 따라 멜팔란은 양성이온이지만, 멜팔란 플루펜아미드는 그렇지 않다).
- 크기의 차이(멜팔란 플루펜아미드는 디펩티드로서 멜팔란 크기의 약 2배이다).
- 친유성의 차이, 여기에서 멜팔란 플루펜아미드는 명백히 좀더 친유성이다.
- 수용액에서의 안정성의 차이. 멜팔란는 J1과 비교하여 수용액 중에서 10　000배 더 안정하다. J1은 물 중에서 신속하게 가수분해된다.
- 분해 경로의 차이. 멜팔란 플루펜아미드에서의 주된 분해 경로는 에틸 에스테르의 가분분해를 포함하지만, 멜팔란에서의 주된 분해는 (클로로)알킬기의 반응성에 관한 것이다.
상기 차이로 한정되지는 않지만 이에 기초할 때, 멜팔란 및 특히 그의 제조 및 제형에 관한 교시는 멜팔란 플루펜아미드 및 그의 제조 및 제형에 적용되지 않음이 명백하다.
적어도 하나의 부형제(예를 들어, 계면활성제 특성을 지닌 폴리소르베이트 80)를 포함시키면 그 자체로서 안정하며 유기 용매의 부재하에 분해 속도와 비교하여 충분한 속도로 수용성인 동결건조 제제를 제공하며, 이에 의해 치료법에 유용하고 독성이 적다.
본 발명에 따른 동결건조 약제학적 제제는 멜팔란 플루펜아미드 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염 만을 함유하거나 멜팔란 플루펜아미드와 하나 이상의 다른 세포독성 디펩티드 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염의 혼합물을 함유할 수 있다. 또한, 동결건조 약제학적 제제는 두가지 이상의 상이한 약제학적으로 허용되는 염의 혼합물을 함유할 수 있다.
본 발명의 한 측면은
(i) 멜팔란 플루펜아미드; 및
(ii) 폴리소르베이트; 폴리에틸렌 글리콜; β-사이클로덱스트린; α-사이클로덱스트린; 하이드록시프로필-β-사이클로덱스트린; 설포부틸에테르-β-사이클로덱스트린; 락토스; 벤질 알콜; 디소듐 석시네이트; 프로필렌 글리콜; 크레모포르 EL; 디메틸 설폭사이드; D-만니톨; 트레할로스; 수크로스; 및 아미노산을 포함하는 그룹 중에서 선택된 두가지 이상의 부형제의 조합을 포함하는 동결건조 약제학적 제제이다.
본 발명의 다른 측면은
(i) 멜팔란 플루펜아미드 하이드로클로라이드(J1); 및
(ii) 폴리소르베이트; 폴리에틸렌 글리콜; β-사이클로덱스트린; α-사이클로덱스트린; 하이드록시프로필-β-사이클로덱스트린; 설포부틸에테르-β-사이클로덱스트린; 락토스; 벤질 알콜; 디소듐 석시네이트; 프로필렌 글리콜; 크레모포르 EL; 디메틸 설폭사이드; D-만니톨; 트레할로스; 수크로스; 및 아미노산을 포함하는 그룹 중에서 선택된 두가지 이상의 부형제의 조합을 포함하는 동결건조 약제학적 제제이다.
이 측면의 한 실시양태에서, 상기 부형제 조합은 폴리소르베이트 80 및 PEG 400의 혼합물이다.
본 발명의 모든 측면에 있어서 약제학적으로 허용되는 염은, 예를 들어, 충분히 염기성인 본 명세서에 기재된 화합물의 산부가염, 예컨대, 무기 또는 유기산, 예컨대 염산, 브롬화수소산, 질산, 메탄설폰산, 황산, 인산, 트리플루오로아세트산, 파라-톨루엔 설폰산, 2-메시틸렌 설폰산, 시트르산, 아세트산, 타르타르산, 푸마르산, 락트산, 석신산, 말산, 말론산, 말레산, 1,2-에탄디설폰산, 아디프산, 아스파르트산, 벤젠설폰산, 벤조산, 에탄설폰산 또는 니코틴산과의 산부가염일 수 있다.
본 명세서에서, 용어 "멜팔란 플루펜아미드"가 사용되는 경우, 명시적으로 언급되지 않은 경우에도 그의 약제학적으로 허용되는 염(들)도 포함시키고자 한다.
앞에서 언급된 바와 같이, 멜팔란 플루펜아미드 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염이 약제학적으로 허용되는 부형제, 예를 들어, 폴리소르베이트; 폴리에틸렌 글리콜; β-사이클로덱스트린; α-사이클로덱스트린; 하이드록시프로필-β-사이클로덱스트린; 설포부틸에테르-β-사이클로덱스트린; 락토스; 벤질 알콜; 디소듐 석시네이트; 프로필렌 글리콜; 크레모포르 EL; 디메틸 설폭사이드; D-만니톨; 트레할로스; 수크로스; 및 아미노산 중에서 선택된 어느 하나의 존재하에 동결건조되는 경우, 동결건조 약제학적 제제의 예기치않게 높은 용해도 증가가 얻어질 수 있으며, 이는 동결건조된 멜팔란 플루펜아미드가 수용액, 예를 들어, 생리학적으로 허용되는 용액 중에 직접 용해될 수 있도록 한다. 이는 수용액에 직접 용해될 수 없으며, 수용액 중에 희석되기 전에 먼저 유기 용매에 용해되어야 하는 동결건조되지 않은 멜팔란 플루펜아미드와 대조적이다. 따라서, 멜팔란 플루펜아미드 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염을 포함하며, 여기에서 멜팔란 플루펜아미드가 부형제의 존재하에 동결건조된 동결건조 약제학적 제제가 본 명세서에서 제공된다. 바람직하게, 상기 부형제는 폴리소르베이트 또는 폴리에틸렌 글리콜, 예를 들어, 폴리소르베이트 80 또는 PEG 400 중에서 선택된다.
멜팔란 플루펜아미드 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염은 하나 이상의 부형제(들)(예: 1 가지, 2 가지, 3 가지, 4 가지, 5 가지 또는 그 이상의 부형제들)의 존재하에 동결건조될 수 있다. 본 명세서에 기재된 바와 같이 사용될 수 있는 부형제의 예는 비제한적으로 폴리소르베이트, 예컨대 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 40, 폴리소르베이트 60 및 폴리소르베이트 80; 폴리에틸렌 글리콜, 예컨대 PEG 400 및 PEG 300; β-사이클로덱스트린, α-사이클로덱스트린, 설포부틸에테르-β-사이클로덱스트린, 하이드록시프로필-β-사이클로덱스트린, 락토스, 벤질 알콜, 디소듐 석시네이트, 프로필렌 글리콜, 크레모포르 EL, 디메틸 설폭사이드, D-만니톨, 트레할로스, 수크로스 및 아미노산, 예컨대 히스티딘을 포함한다.
본 발명의 한 측면에서, 부형제는 폴리소르베이트 80; PEG 400; β-사이클로덱스트린; α-사이클로덱스트린; 하이드록시프로필-β-사이클로덱스트린, 설포부틸에테르-β-사이클로덱스트린; 락토스; 벤질 알콜; 디소듐 석시네이트; 프로필렌 글리콜; PEG 300; 크레모포르 EL; 디메틸 설폭사이드; D-만니톨; 트레할로스; 수크로스; 및 히스티딘의 어느 하나 중에서 선택된다.
본 발명의 한 측면에서, 부형제는 폴리소르베이트 80; PEG 400; 락토스; 벤질 알콜; 디소듐 석시네이트; 프로필렌 글리콜; PEG 300; 크레모포르 EL; 디메틸 설폭사이드; D-만니톨; 트레할로스; 수크로스; 및 히스티딘, 또는 상기 부형제의 2가지 이상의 조합 중에서 선택된다.
이 측면의 한 실시양태에서, 부형제는 폴리소르베이트 80 및 PEG 400, 또는 상기 2 가지 부형제의 조합 중에서 선택된다.
폴리소르베이트 80, PEG 400 또는 β-사이클로덱스트린과 같은 부형제의 양은 전형적으로 멜팔란 플루펜아미드 양의 약 10-100 중량%, 예를 들어, 멜팔란 플루펜아미드 양의 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20 또는 10 중량%이다.
본 발명의 다른 측면에서, 폴리소르베이트 80, PEG 400 또는 β-사이클로덱스트린과 같은 부형제의 양은 전형적으로 멜팔란 플루펜아미드 양의 약 10-50 중량%, 예를 들어, 멜팔란 플루펜아미드 양의 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20 또는 10 중량%이다.
이 측면의 한 실시양태에서, 부형제는 폴리소르베이트 80 또는 PEG 400을 나타내고, 그의 양은 전형적으로 멜팔란 플루펜아미드 양의 약 10-50 중량%, 예를 들어, 멜팔란 플루펜아미드 양의 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20 또는 10 중량%이다.
본 발명의 다른 측면은
(i) 멜팔란 플루펜아미드 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염; 및
(ii) 폴리소르베이트 80; PEG 400; β-사이클로덱스트린; α-사이클로덱스트린; 하이드록시프로필-β-사이클로덱스트린; 설포부틸에테르-β-사이클로덱스트린; 락토스; 벤질 알콜; 디소듐 석시네이트; 프로필렌 글리콜; PEG 300; 크레모포르 EL; 디메틸 설폭사이드; D-만니톨; 트레할로스; 수크로스; 및 히스티딘을 포함하는 그룹 중에서 선택된 적어도 하나의 부형제를 포함하며;
여기에서 부형제의 양은 멜팔란 플루펜아미드의 약 10-100 중량%인 동결건조 약제학적 제제이다.
이 측면의 한 실시양태에서, 적어도 하나의 부형제가 폴리소르베이트 80 및 PEG 400 중에서 선택된다.
이 측면의 다른 실시양태에서, 멜팔란 플루펜아미드는 멜팔란 플루펜아미드 하이드로클로라이드(J1)에 의해 나타낸다.
본 발명의 다른 측면은
(i) 멜팔란 플루펜아미드 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염; 및
(ii) 폴리소르베이트 80; PEG 400; β-사이클로덱스트린; α-사이클로덱스트린; 하이드록시프로필-β-사이클로덱스트린; 설포부틸에테르-β-사이클로덱스트린; 락토스; 벤질 알콜; 디소듐 석시네이트; 프로필렌 글리콜; PEG 300; 크레모포르 EL; 디메틸 설폭사이드; D-만니톨; 트레할로스; 수크로스; 및 히스티딘을 포함하는 그룹 중에서 선택된 적어도 하나의 부형제를 포함하며;
여기에서 부형제의 양은 멜팔란 플루펜아미드 하이드로클로라이드(J1)의 약 10-50 중량%인 동결건조 약제학적 제제이다.
이 측면의 한 실시양태에서, 적어도 하나의 부형제가 폴리소르베이트 80 및 PEG 400 중에서 선택된다.
이 측면의 다른 실시양태에서, 멜팔란 플루펜아미드는 멜팔란 플루펜아미드 하이드로클로라이드(J1)에 의해 나타낸다.
본 발명의 다른 측면은
(i) 멜팔란 플루펜아미드 하이드로클로라이드(J1); 및
(ii) 폴리소르베이트 80; PEG 400; β-사이클로덱스트린; α-사이클로덱스트린; 하이드록시프로필-β-사이클로덱스트린; 설포부틸에테르-β-사이클로덱스트린; 락토스; 벤질 알콜; 디소듐 석시네이트; 프로필렌 글리콜; PEG 300; 크레모포르 EL; 디메틸 설폭사이드; D-만니톨; 트레할로스; 수크로스; 및 히스티딘을 포함하는 그룹 중에서 선택된 적어도 하나의 부형제를 포함하며;
여기에서 부형제의 양은 멜팔란 플루펜아미드 하이드로클로라이드(J1)의 약 10-100 중량%인 동결건조 약제학적 제제이다.
이 측면의 한 실시양태에서, 적어도 하나의 부형제가 폴리소르베이트 80 및 PEG 400 중에서 선택된다.
본 발명의 다른 측면은
(i) 멜팔란 플루펜아미드 하이드로클로라이드(J1); 및
(ii) 폴리소르베이트 80; PEG 400; β-사이클로덱스트린; α-사이클로덱스트린; 하이드록시프로필-β-사이클로덱스트린; 설포부틸에테르-β-사이클로덱스트린; 락토스; 벤질 알콜; 디소듐 석시네이트; 프로필렌 글리콜; PEG 300; 크레모포르 EL; 디메틸 설폭사이드; D-만니톨; 트레할로스; 수크로스; 및 히스티딘을 포함하는 그룹 중에서 선택된 적어도 하나의 부형제를 포함하며;
여기에서 부형제의 양은 멜팔란 플루펜아미드 하이드로클로라이드(J1)의 약 10-50 중량%인 동결건조 약제학적 제제이다.
이 측면의 한 실시양태에서, 적어도 하나의 부형제가 폴리소르베이트 80 및 PEG 400 중에서 선택된다.
본 발명의 한 실시양태에서, 폴리소르베이트 80 또는 PEG 400과 같은 부형제의 양은 임상적으로 허용되는 양 이하일 수 있다.
본 발명의 한 실시양태에서, 폴리소르베이트 80 또는 PEG 400과 같은 부형제의 양은 임상적으로 허용되는 양 이하일 수 있다.
유일한 부형제로서 사용되는 경우, 폴리소르베이트 80 또는 PEG 400의 양은, 예를 들어, 멜팔란 플루펜아미드 하이드로클로라이드(J1) 양의 약 50 중량%이다.
본 발명의 한 측면은 부형제 폴리소르베이트 80 및 PEG 400의 조합이다.
본 발명의 한 측면은 부형제 폴리소르베이트 80, PEG 400 및 β-사이클로덱스트린, 예를 들어, 멜팔란 플루펜아미드 양의 80 중량%의 폴리소르베이트 80, 80 중량%의 PEG 400 및 50 중량%의 β-사이클로덱스트린의 조합이다. 멜팔란 유도체 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염의 동결건조 약제학적 제제는 본 발명에 따라 하나 이상의 멜팔란 유도체(들) 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염(들), 및 하나 이상의 본 명세서에 정의된 부형제(들)을 포함할 수 있다.
앞에서 언급한 바와 같이, 동결건조 동안 부형제가 존재함으로 인한 한가지 효과는 생성된 멜팔란 플루펜아미드를 포함하는 동결건조 약제학적 제제가 멜팔란 플루펜아미드가 본 명세서에 기재된 부형제 부재하에 동결건조되는 경우와 비교하여 수용액, 예를 들어, 생리학적으로 허용되는 용액에서 용해도 증가를 나타낸다는 점이다. 특히, 부형제(들) 존재하에 동결건조되는 경우 멜팔란 플루펜아미드의 수용액 내 용해도는 동결건조되지 않은 제품의 용해도와 비교하여 더 크다. 특히, 본 명세서에 기재된 부형제 존재하에 동결건조되는 경우 멜팔란 플루펜아미드의 이러한 용해도 증가는 멜팔란 플루펜아미드를 환자에게 투여하게 되는 경우 동결건조되지 않은 제품과 비교하여 실질적인 이점을 나타낸다.
약물을 환자에게 투여하기 위해 사용되는 생리학적으로 허용되는 수용액에서 동결건조되지 않은 멜팔란 플루펜아미드의 낮은 용해도로 인하여, 동결건조되지 않은 멜팔란 플루펜아미드를 유기 용매, 예를 들어, DMA에 먼저 용해시킬 필요가 있다. 따라서, 멜팔란 플루펜아미드는 종종 DMA에 용해된 채로 보관된다. 기존에는 멜팔란 플루펜아미드를 수용액에 직접 용해시키는 것이 가능하지 않았고, 유기 용매가 사용되어야만 하였다. 일단 유기 용매에 용해되면, 멜팔란 플루펜아미드 및 유기 용매의 상기 용액은 대상에게 투여되기 위하여 생리학적으로 허용되는 용액에 용해될 수 있다.
멜팔란 플루펜아미드의 독성이 크기 때문에, 이러한 약물에 의료인의 노출을 최소화하기 위하여, 유기 용매에 용해된 후 약물을 투여용 용액으로 이동시키기 위한 특별한 장치가 사용된다. 이들 이동 장치는 종종 폴리카보네이트를 포함하는 플라스틱 배관이다. 그러나, 이러한 배관은 DMA와 같은 유기 용매에 민감하여 이에 의해 파손될 수 있다. 따라서, 투여될 약물이 이러한 유기 용매에 용해되어 있는 경우에는, 이동 장치를 사용하는 것이 가능하지 않을 수 있고, 그 대신에 용해된 약물은 환자에게 투여되는 시점 직전에 투여에 사용되는 생리학적으로 허용되는 용액에 직접 첨가되어야만 한다. 이는 의료계 직원에게 위험할 수 있고, 그 직원은 독성 약물에 노출된 위험한 상태에 있을 수 있다.
앞에서 언급한 바와 같이, 멜팔란 플루펜아미드의 동결건조는 생리학적으로 허용되는 용액에서 용해도를 증가시킨다. 이러한 증가는 멜팔란 플루펜아미드가 하나 이상의 부형제 존재하에 동결건조되는 경우 훨씬 더 확연할 수 있다. 본 명세서에 기재한 바와 같이, 멜팔란 플루펜아미드가 본 명세서에 개시된 부형제 존재하에 동결건조되는 경우, 멜팔란 플루펜아미드의 용해도는 동결건조되지 않은 멜팔란 플루펜아미드와 비교하여 증가될 수 있다. 우선 멜팔란 플루펜아미드를 용해시키기 위해 DMA와 같은 유기 용매를 사용하는 것을 피할 수 있다.
적어도 하나의 부형제, 예를 들어, 폴리소르베이트 80일 수 있는 폴리소르베이트; 예를 들어, PEG 400 또는 PEG 300일 수 있는 폴리에틸렌 글리콜; β-사이클로덱스트린; α-사이클로덱스트린; 하이드록시프로필-β-사이클로덱스트린; 설포부틸에테르-β-사이클로덱스트린; 락토스; 벤질 알콜; 디소듐 석시네이트; 프로필렌 글리콜; 크레모포르 EL; 디메틸 설폭사이드; D-만니톨; 트레할로스; 수크로스; 또는 히스티딘과 같은 아미노산; 또는 2가지 이상의 이들 부형제 조합의 존재하에 동결건조된 멜팔란 플루펜아미드는 생리학적으로 허용되는 용액, 예를 들어, 약 4.5-5.5 wt%, 예컨대 약 5%의 글루코스 용액 또는 NaCl 수용액(예: 약 0.9 wt% NaCl)에 직접 용해될 수 있다. 이에 따라, 폴리카보네이트를 포함하며 멜팔란 플루펜아미드의 투여에 사용되는 장치가 사용되어 약물에 의료인이 노출되는 위험을 최소화할 수 있다. 또한, 이런 방식으로 독성 DMA를 환자에게 투여하는 것을 피할 수 있다. 이는 환자에게 투여하기에 적합한 농도로 멜팔란 플루펜아미드를 포함하는 용액을 직접 제조할 수 있게 한다. 대안적으로, 생리학적으로 허용되는 용액 중에 멜팔란 플루펜아미드의 동결건조 약제학적 제제를 포함하는 농축된 용액을 먼저 제조한 다음 보통 사용되는 이동 장치를 사용하여 주입백으로 이동시킬 수 있다.
또한, 멜팔란 플루펜아미드가 DMA에 용해되는 경우, 멜팔란 플루펜아미드와 DMA 사이의 어덕트(adduct)가 형성될 수 있다. 본 발명에 따라 제공된 동결건조 약제학적 제제를 사용함으로써 멜팔란 플루펜아미드를 DMA에 먼저 용해시키는 것을 피하면서 동결건조된 멜팔란 플루펜아미드를 직접 생리학적으로 허용되는 용액에 용해시킬 수 있다. 이에 따라, DMA-멜팔란 플루펜아미드 어덕트의 형성을 피할 수 있고, 어덕트도 DMA도 환자에게 투여될 필요가 없다.
또한, 임의로 본 명세서에 개시된 바와 같은 동결건조 제제를 제조하는 방법에 의해 얻을 수 있는, 본 명세서에 정의된 멜팔란 플루펜아미드 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염의 동결건조 약제학적 제제를 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다. 이러한 약제학적 조성물은 생리학적으로 허용되는 용액, 예를 들어, NaCl 수용액(예: 약 0.9 wt%) 또는 글루코스 용액(예: 약 4.5-5.5 wt%, 예컨대 약 5 wt%의 글루코스)을 추가로 포함할 수 있다. 이 약제학적 조성물은 대상에게 투여되기 전 희석되도록 농축된 용액이거나 환자에게 직접 투여될 수 있는 용액일 수 있다.
본 명세서에 기재된 하나 이상의 부형제 존재하에 동결건조된 후 멜팔란 플루펜아미드의 증가된 용해도로 인하여, 용해된 멜팔란 플루펜아미드 용액, 예를 들어, DMA, 디클로로메탄, 테트라하이드로푸란, 2-메틸 테트라하이드로푸란, 에틸 아세테이트, 아세톤, 디메틸포름아미드, 아세토니트릴, 디메틸 설폭사이드, 디옥산, 디에틸 에테르, 아세트산, n-부탄올, 이소프로판올, n-프로판올, tert-부탄올, sec-부탄올, 메탄올, 에탄올 및 아세트산과 같은 유기 용매가 실질적으로 없는, 멜팔란 플루펜아미드 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염을 포함하는 약제학적 조성물을 제조할 수 있다. 본 명세서에서 "실질적으로 없는"은 약제학적 조성물이 미량의 유기 용매, 예를 들어, 총 약 0.1 wt% 미만의 유기 용매 만을 포함함을 의미한다. 한 측면에서, 동결건조 제제 또는 약제학적 조성물은 임의의 측정가능한 양의 유기 용매를 함유하지 않는다. 이러한 제제는 독성이 적으므로 환자에 의해 더 잘 용인되어 구토, 오심 또는 주입시의 기타 일반적인 증상과 같은 부작용이 줄어들 것이다.
본 발명의 한 측면에서, 유기 용매가 없거나 실질적으로 없는, 본 명세서에 기재된 동결건조 약제학적 제제가 제공된다.
약제학적 조성물은 멜팔란 플루펜아미드 또는 그의 약제학적 염을 포함하는, 본 명세서에 개시된 동결건조 약제학적 제제, 및 생리학적으로 허용되는 용액, 예를 들어, 글루코스 용액으로 구성될 수 있다. 앞에서 개시한 바와 같이, 멜팔란 유도체는 멜팔란 플루펜아미드 또는 멜팔란 플루펜아미드와 하나 이상의 상이한 세포독성 디펩티드가 함께 또는 제각각 동결건조된 혼합물일 수 있다.
약제학적 조성물은 멜팔란 플루펜아미드 또는 그의 약제학적 염을 생리학적으로 허용되는 용액에 용해시켜 얻을 수 있다. 따라서, 멜팔란 플루펜아미드 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염을 포함하는 동결건조 약제학적 제제를 생리학적으로 허용되는 용액에 용해시키는 단계를 포함하는 약제학적 조성물의 제조 방법이 또한 본 명세서에 제공된다.
본 명세서에 정의된 용어 "생리학적으로 허용되는 용액"은 수용액, 예를 들어, NaCl 용액(예컨대, 약 0.9 wt-% NaCl) 또는 예컨대 약 4.5-5.5 wt-% 글루코스, 예컨대, 약 5 wt-%의 글루코스 용액, 또는 다른 생리학적으로 허용되는 용액이다. 임의의 이러한 용액은 임의로 완충될 수 있다.
대상에게 직접 투여하기 위한 동결건조된 멜팔란 플루펜아미드 및 생리학적으로 허용되는 용액을 포함하는 약제학적 조성물은 일반적으로 약 1 mg/ml 이하, 예컨대 약 0.2 mg/ml의 농도로 멜팔란 플루펜아미드를 포함한다. 그러나, 약제학적 조성물은 환자에게 투여되기 전에 생리학적으로 허용되는 용액에 희석할 용도로 약 4 mg/ml 이하의 농도로 멜팔란 플루펜아미드를 포함할 수 있다.
본 발명의 한 측면은
a) 멜팔란 플루펜아미드 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염을 유기 용매에 용해시켜 멜팔란 플루펜아미드 용액을 얻는 단계;
b) 약 0.2-3.0 mg/ml의 농도로 멜팔란 플루펜아미드 수용액을 얻기 위해 멜팔란 플루펜아미드 용액에 물을 가하는 단계;
c) 폴리소르베이트; 폴리에틸렌 글리콜; β-사이클로덱스트린; α-사이클로덱스트린; 하이드록시프로필-β-사이클로덱스트린; 설포부틸에테르-β-사이클로덱스트린; 락토스; 벤질 알콜; 디소듐 석시네이트; 프로필렌 글리콜; 크레모포르 EL; 디메틸 설폭사이드; D-만니톨; 트레할로스; 수크로스 및 아미노산을 포함하는 그룹 중에서 선택된 적어도 하나의 부형제를 멜팔란 플루펜아미드 용액에 가하는 단계; 및
d) 부형제(들)을 함유하는 멜팔란 플루펜아미드 수용액을 동결건조시키는 단계에 의해 동결건조 약제학적 제제를 제조하는 방법을 제공한다.
이 측면의 한 실시양태에서,
a) 멜팔란 플루펜아미드 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염을 유기 용매에 용해시키는 단계;
b) 약 0.2-3.0 mg/ml의 농도로 상기 멜팔란 플루펜아미드 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염의 용액을 얻기 위해 단계 a)에서 얻어진 용액에 물을 가하는 단계;
c) 폴리소르베이트; 폴리에틸렌 글리콜; β-사이클로덱스트린; α-사이클로덱스트린; 하이드록시프로필-β-사이클로덱스트린; 설포부틸에테르-β-사이클로덱스트린; 락토스; 벤질 알콜; 디소듐 석시네이트; 프로필렌 글리콜; 크레모포르 EL; 디메틸 설폭사이드; D-만니톨; 트레할로스; 수크로스 및 아미노산을 포함하는 그룹 중에서 선택된 적어도 하나의 부형제를 단계 b)에서 얻어진 용액에 가하는 단계; 및
d) 단계 c)에서 얻어진 용액을 동결건조시키는 단계에 의한 방법이 제공된다.
유기 용매는 에탄올, 에탄올 함유 산, 글리세린, 프로필렌 글리콜, 벤질 알콜, 디메틸아세트아미드(DMA), N-메틸-2-피롤리돈, 이소프로판올, n-부탄올, tert-부탄올, 메틸 tert-부틸 에테르, 프로필렌 글리콜, 디메틸설폭사이드, 테트라하이드로푸란, 2-메틸 테트라하이드로푸란, 아세톤, 디메틸포름아미드, 아세토니트릴, 디옥산, 아세트산, 락트산, 프로피온산, n-부탄올, 이소프로판올, n-프로판올, tert-부탄올, sec-부탄올, 메탄올, 및 에탄올과 물의 혼합물 중의 어느 하나로부터 선택될 수 있다. 바람직하게, 상기 유기 용매는 에탄올이다.
부형제는 폴리소르베이트 80; PEG 400; β-사이클로덱스트린; α-사이클로덱스트린; 하이드록시프로필-β-사이클로덱스트린; 설포부틸에테르-β-사이클로덱스트린; 락토스; 벤질 알콜; 디소듐 석시네이트; 프로필렌 글리콜; PEG 300; 크레모포르 EL; 디메틸 설폭사이드; D-만니톨; 트레할로스; 수크로스; 및 히스티딘을 포함하는 그룹 중에서 선택될 수 있다. 바람직하게, 상기 부형제는 폴리소르베이트 80 및 PEG 400 중에서 선택된다.
상기 방법에서 멜팔란 플루펜아미드는 바람직하게 멜팔란 플루펜아미드 하이드로클로라이드(J1)이다.
본 발명의 한 측면은
a) 멜팔란 플루펜아미드 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염을 유기 용매에 용해시키는 단계;
b) 약 0.2-3.0 mg/ml의 농도로 상기 멜팔란 플루펜아미드 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염의 용액을 얻기 위해 단계 a)에서 얻어진 용액에 물을 가하는 단계;
c) 본 명세서에 정의된 적어도 하나의 부형제를 단계 b)에서 얻어진 용액에 가하는 단계; 및
d) 단계 c)에서 얻어진 용액을 동결건조시키는 단계에 의해, 본 명세서에 기재된 동결건조 약제학적 제제를 제조하는 방법이다.
바람직하게, 상기 유기 용매는 에탄올이다.
본 발명의 한 측면은
a) 멜팔란 플루펜아미드 하이드로클로라이드(J1)를 유기 용매에 용해시키는 단계;
b) 약 0.2-3.0 mg/ml의 농도로 상기 멜팔란 플루펜아미드 하이드로클로라이드(J1) 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염의 용액을 얻기 위해 단계 a)에서 얻어진 용액에 물을 가하는 단계;
c) 본 명세서에 정의된 적어도 하나의 부형제를 단계 b)에서 얻어진 용액에 가하는 단계; 및
d) 단계 c)에서 얻어진 용액을 동결건조시키는 단계에 의해, 본 명세서에 기재된 동결건조 약제학적 제제를 제조하는 방법이다.
단계 a)에서 멜팔란 플루펜아미드 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염을 용해시키는데 사용가능한 유기 용매의 예는 에탄올, 에탄올 함유 산, 글리세린, 프로필렌 글리콜, 벤질 알콜, 디메틸아세트아미드(DMA), N-메틸-2-피롤리돈, 이소프로판올, n-부탄올, tert-부탄올, 메틸 tert-부틸 에테르, 프로필렌 글리콜, 디메틸설폭사이드, 테트라하이드로푸란, 2-메틸 테트라하이드로푸란, 아세톤, 디메틸포름아미드, 아세토니트릴, 디옥산, 아세트산, 락트산, 프로피온산, n-부탄올, 이소프로판올, n-프로판올, tert-부탄올, sec-부탄올, 메탄올, 및 에탄올과 물의 혼합물 중에서 선택된 어느 하나일 수 있다.
본 발명의 한 측면은
a) 멜팔란 플루펜아미드 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염을 에탄올, 에탄올 함유 산, 글리세린, 프로필렌 글리콜, 벤질 알콜, 디메틸아세트아미드(DMA), N-메틸-2-피롤리돈, 이소프로판올, n-부탄올, tert-부탄올, 메틸 tert-부틸 에테르, 프로필렌 글리콜, 디메틸설폭사이드, 테트라하이드로푸란, 2-메틸 테트라하이드로푸란, 아세톤, 디메틸포름아미드, 아세토니트릴, 디옥산, 아세트산, 락트산, 프로피온산, n-부탄올, 이소프로판올, n-프로판올, tert-부탄올, sec-부탄올, 메탄올, 및 에탄올과 물의 혼합물의 어느 하나로부터 선택된 유기 용매에 용해시키는 단계;
b) 약 0.2-3.0 mg/ml의 농도로 상기 멜팔란 플루펜아미드 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염의 용액을 얻기 위해 단계 a)에서 얻어진 용액에 물을 가하는 단계;
c) 본 명세서에 정의된 적어도 하나의 부형제를 단계 b)에서 얻어진 용액에 가하는 단계; 및
d) 단계 c)에서 얻어진 용액을 동결건조시키는 단계에 의해, 본 명세서에 기재된 동결건조 약제학적 제제를 제조하는 방법이다.
본 발명의 한 측면은
a) 멜팔란 플루펜아미드 하이드로클로라이드(J1)를 에탄올, 에탄올 함유 산, 글리세린, 프로필렌 글리콜, 벤질 알콜, 디메틸아세트아미드(DMA), N-메틸-2-피롤리돈, 이소프로판올, n-부탄올, tert-부탄올, 메틸 tert-부틸 에테르, 프로필렌 글리콜, 디메틸설폭사이드, 테트라하이드로푸란, 2-메틸 테트라하이드로푸란, 아세톤, 디메틸포름아미드, 아세토니트릴, 디옥산, 아세트산, 락트산, 프로피온산, n-부탄올, 이소프로판올, n-프로판올, tert-부탄올, sec-부탄올, 메탄올, 및 에탄올과 물의 혼합물의 어느 하나로부터 선택된 유기 용매에 용해시키는 단계;
b) 약 0.2-3.0 mg/ml의 농도로 상기 멜팔란 플루펜아미드 하이드로클로라이드(J1) 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염의 용액을 얻기 위해 단계 a)에서 얻어진 용액에 물을 가하는 단계;
c) 본 명세서에 정의된 적어도 하나의 부형제를 단계 b)에서 얻어진 용액에 가하는 단계; 및
d) 단계 c)에서 얻어진 용액을 동결건조시키는 단계에 의해, 본 명세서에 기재된 동결건조 약제학적 제제를 제조하는 방법이다.
본 발명의 한 측면은
a) 멜팔란 플루펜아미드 하이드로클로라이드(J1)를 유기 용매에 용해시키는 단계;
b) 약 0.2-3.0 mg/ml의 농도로 상기 멜팔란 플루펜아미드 하이드로클로라이드(J1)의 용액을 얻기 위해 단계 a)에서 얻어진 용액에 물을 가하는 단계;
c) 본 명세서에 정의된 적어도 하나의 부형제를 단계 b)에서 얻어진 용액에 가하는 단계; 및
d) 단계 c)에서 얻어진 용액을 동결건조시키는 단계를 포함하며;
여기에서 상기 적어도 하나의 부형제가 폴리소르베이트 80 및 PEG 400 중에서 선택됨에 의해, 본 명세서에 기재된 동결건조 약제학적 제제를 제조하는 방법이다.
상기 방법의 단계 a)에서 에탄올 함유 산이 멜팔란 플루펜아미드 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염을 용해시키기 위해 사용되는 경우, 산은 예를 들어 5-20 mM 농도의 HCl일 수 있거나, HCl 농도는 예를 들어 에탄올 중에서 10 mM일 수 있다.
멜팔란 플루펜아미드 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염이 에탄올 및 물에 용해되는 경우, 에탄올 농도는 약 10-100 vol-%, 예컨대 10-90 vol-%, 50-90 vol-%, 또는 약 70 vol-%일 수 있다.
본 발명에 따라 동결건조 약제학적 제제의 시료를 용해시키고/시키거나 희석하기 위해 사용되는 물은 멸균수 또는 정제수이거나 주사용수(WFI)이다.
에탄올이 멜팔란 플루펜아미드 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염을 용해시키기 위해 사용되는 경우, 단계 a)에서 얻어진 용액은 에탄올 농도가 약 2-100 부피%, 예컨대 약 2, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 또는 100%, 또는 예컨대 5-15 %, 또는 예컨대 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 또는 15 %로 되도록 단계 b)에서 희석된다. 전형적으로, 희석 단계 b) 후의 에탄올 농도는 약 9%이다.
단계 b)에서 얻어진 용액은 동결건조 단계 c) 이전에 멸균 여과될 수 있다.
동결건조 단계 c)는 본 명세서에 기재된 바와 같이 전형적인 냉동 및 1차 및 2차 건조 단계를 포함한다. 어떻게 동결건조를 실행할 것인지에 대한 정보는 예를 들어 문헌(Rey, L. and May, J. Freeze Drying/Lyophilization of Pharmaceutical and Biological Products (2010), ISBN 978-1439B2575-4)에서 찾을 수 있다. 냉동 단계에서, 시료는 예를 들어 약 -70℃ 내지 -90℃, 예컨대 약 -70℃, -75℃, -78℃, -80℃, -82℃, -85℃, -88℃ 또는 -90℃의 온도에서 예를 들어 10분 내지 120분 동안 드라이아이스-아세톤 배스에서 냉동된다.
대안적으로, 시료는 약 -14℃ 내지 -25℃, 예컨대 -14℃, -16℃, -18℃, -20℃, -22℃ 또는 -25℃의 온도에서 예를 들어 약 10분 내지 24시간 동안 냉동고에서 냉동될 수 있다. 시료를 액체 질소에서 냉동시키는 것도 가능하다.
단계 c)는 동결건조에 대한 통상의 기술을 적용하여 실행할 수 있다(참조: 예를 들어, Rey, L. and May, J. Freeze Drying/Lyophilization of Pharmaceutical and Biological Products (2010), ISBN 978-1439B2575-4).
예를 들어, 1차 건조 단계에서, 압력은 약 0.1 mbar 내지 50 mbar, 예컨대 1 mbar 내지 10 mbar로 저하될 수 있다. 온도는 전형적으로 0℃ 아래, 예컨대 -50 내지 0℃, 또는 -20 내지 -1℃, 예를 들어, -50, -40, -30, -20, -10 또는 -5℃이다. 이 상태는 예를 들어 4 시간 내지 48 시간, 예컨대 12 시간 내지 24 시간 동안 지속될 수 있다.
최종적인 2차 건조 단계에서, 대부분의 물이 증발되었을 때, 온도는 1차 건조 단계에서와 같거나, 0℃를 초과할 수 있다.
본 명세서에 정의된 바와 같은 하나 이상의 부형제가 동결건조 중에 존재하는 경우, 이들은 단계 a)에서 얻어진 용액을 희석시키기 전 또는 후에 단계 b)에서 그리고 동결건조를 실행하기 전에 첨가될 수 있다. 부형제는 분말 형태로 첨가될 수 있지만 일반적으로 수용액으로서 첨가된다. 따라서, 부형제는 동결건조 중에 존재할 수 있다.
본 발명은 또한 상기 개시된 방법에 의해 얻을 수 있는, 본 명세서에 정의된 동결건조 약제학적 제제에 관한 것이다.
또한,
(i) 본 명세서에 기재된 멜팔란 플루펜아미드를 포함하는 동결건조 약제학적 제제를 포함하는 제1 용기; 및
(ii) 생리학적으로 허용되는 용액, 예를 들어, NaCl 용액(예컨대 약 0.9 wt% NaCl) 또는 글루코스 용액, 예컨대 약 4.5-5.5 wt% 글루코스 용액, 예컨대 약 5 wt% 글루코스 용액, 또는 기타 생리학적으로 허용되는 용액을 포함하는 제2 용기를 포함하는 부품의 키트가 본 명세서에서 제공된다.
이러한 키트는 2개 용기의 내용물을 서로 혼합하고/하거나 글루코스 용액을 포함하는 백과 같이 환자에게 투여하기 위한 장치로 생성된 혼합물을 전달하기 위한 장치를 포함할 수도 있다.
이러한 키트는 본 명세서에 기재된 멜팔란 플루펜아미드를 포함하는 동결건조 약제학적 제제를 포함하는 제1 용기와 생리학적으로 허용되는 용액을 포함하는 제2 용기로 구성될 수 있다. 키트 내의 멜팔란 플루펜아미드는 또한 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제와의 혼합물일 수 있다. 일례는 5% 글루코스와 함께 예를 들어 1% 알부민 또는 다른 단백질 또는 화합물이다. 생리학적으로 허용되는 용액의 양은 멜팔란 플루펜아미드를 포함하는 동결건조 약제학적 제제의 농축된 용액을 제조하기 위한 소량이거나, 환자에게 투여하기 위한 목적 농도를 갖는 용액을 제조하기 위한 다량일 수 있다. 대안적으로, 키트는 동결건조 약제학적 제제의 농축된 용액을 제조하기 위한 생리학적으로 허용되는 용액을 포함하는 제1 용기 및 대상에게 투여하기 위해 좀 더 희석된 용액의 제조를 위한 다량의 생리학적으로 허용되는 용액을 포함하는 제2 용기, 예컨대 주입백을 둘 다 포함할 수 있다.
본 명세서에 제공된 동결건조 약제학적 제제, 약제학적 조성물 또는 키트는 항종양제로서 멜팔란 플루펜아미드 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염만을 포함할 수 있다. 그러나, 멜팔란 플루펜아미드는 하나 이상의 항종양제, 예를 들어, 다른 항종양 물질, 예컨대 겜시타빈, 에토포시드, 독소루비신 또는 탁산 또는 다른 치료적으로 유효한 물질과 조합될 수도 있다. 다른 항종양제와 조합되는 경우, 이들은 동결건조 전에 멜팔란 플루펜아미드 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염과 혼합되어 멜팔란 플루펜아미드 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염과 함께 동결건조되거나, 동결건조 후에 예컨대 키트 또는 약제학적 조성물에서 동결건조된 멜팔란 플루펜아미드 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염과 조합될 수 있다. 동결건조된 멜팔란 플루펜아미드는 멜팔란 플루펜아미드 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염의 동결건조 후에 비록 동결건조되지 않았다 하더라도 건조 형태인 하나 이상의 항종양 물질과 혼합될 수도 있다.
본 명세서에 제공된 멜팔란 플루펜아미드는 세포독성 활성을 나타내며 따라서 다른 문헌(참조: WO 01/96367)에 기재된 바와 같이 암의 예방 및/또는 치료에 사용될 수 있다. 이들 화합물이 종양 세포 생존을 저하시키는 것이 WO 01/96367호에서 상이한 혈액 및/또는 고형 종양, 예를 들어, 폐암, 골수종, 림프종, 백혈병, 유방암 및 난소 암종에 대해 입증되었다. 또한, 이들 화합물은 WO 01/96367호에서 멜팔란 내성을 피해가는 것으로 입증되었다. 따라서 이들 화합물은 암의 예방 및/또는 치료, 종양 성장의 저하 및/또는 종양 세포의 살해에 사용될 수 있다. 따라서, 본 화합물은 암 질환으로 고통받는 환자의 치유 및/또는 생존기간의 연장에 사용될 수 있다.
본 발명은 또한 의약품으로서 사용하기 위한, 본 명세서에 개시되고 청구된 동결건조 약제학적 제제, 키트 또는 약제학적 조성물을 제공한다. 본 발명은 또한 암, 예컨대 난소암, 폐암, 방광암, 중피종, 다발성 골수종, 유방암 및/또는 임의의 다른 고형암 또는 혈액암의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한, 동결건조 약제학적 제제, 키트 또는 약제학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 한 측면은 암, 예컨대 난소암, 폐암, 방광암, 중피종, 다발성 골수종, 유방암 및/또는 임의의 다른 고형암 또는 혈액암을 치료 및/또는 예방하기 위한 의약의 제조를 위한, 본 명세서에 개시되고 청구된 동결건조 약제학적 제제, 키트 또는 약제학적 조성물의 용도이다.
본 발명의 다른 측면은 암, 예컨대 난소암, 폐암, 방광암, 중피종, 다발성 골수종, 유방암 및/또는 임의의 다른 고형암 또는 혈액암을 치료 및/또는 예방하는데 사용하기 위한, 암의 치료에 유용한 다른 약물과 조합된 멜팔란 플루펜아미드 하이드로클로라이드(J1)를 포함하는 동결건조 약제학적 제제, 키트 또는 약제학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 다른 측면은 암, 예컨대 난소암, 폐암, 방광암, 중피종, 다발성 골수종, 유방암 및/또는 임의의 다른 고형암 또는 혈액암을 치료 및/또는 예방하는 방법이다. 이 방법은 이를 필요로 하는 대상에게 치료적 유효 용량으로 본 명세서에 제공된 동결건조 약제학적 제제, 키트 또는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함할 수 있다. 대상은 전형적으로 인간 또는 가축이다.
본 발명의 다른 측면은 암, 예컨대 난소암, 폐암, 방광암, 중피종, 다발성 골수종, 유방암 및/또는 임의의 다른 고형암 또는 혈액암을 치료 및/또는 예방하는 방법이며, 여기에서 멜팔란 플루펜아미드 하이드로클로라이드(J1)를 포함하는 동결건조 약제학적 제제, 키트 또는 약제학적 조성물은 암의 치료에 유용한 다른 약물과 조합하여 이를 필요로 하는 대상에게 치료적 유효 용량으로 제공된다. 대상은 전형적으로 인간 또는 가축이다.
동결건조 약제학적 제제, 키트 또는 약제학적 조성물을 이를 필요로 하는 대상에게 투여하는 것은 정맥내 주사에 의해 이루어질 수 있다. 동결건조된 멜팔란 플루펜아미드 또는 이러한 동결건조된 멜팔란 플루펜아미드를 포함하는 약제학적 조성물을 체강내, 예컨대 방광내 또는 복강 또는 흉강내 점적주입으로 투여할 수도 있다.
멜팔란 플루펜아미드 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염은 투여당 멜팔란 플루펜아미드의 총량으로서 약 20-130 mg, 예컨대 30-75 mg, 예를 들어 50 mg의 양으로 투여될 수 있다. 따라서, 멜팔란 플루펜아미드를 포함하는, 본 명세서에서 제공된 약제학적 조성물 또는 키트는 이러한 양이 투여될 수 있도록 하는 양으로 동결건조된 멜팔란 플루펜아미드를 가질 수 있다.
동결건조된 멜팔란 플루펜아미드 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염은 대상 및 치료될 암의 형태에 따라 매일, 2일 마다, 또는 3일 마다, 매주, 2주 마다, 3주 또는 4주 마다 또는 심지어 고 단일 용량(예: 이식 전)으로 투여될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 용어 "예방"은 본 명세서에 기재된 임의의 암 형태에 대한 화학요법을 받으며, 상기 암으로부터 발생하는 임의의 전이를 예방할 목적으로 지속적인 요법을 받는 환자에서의 치료법을 포함하고자 한다.
본 발명의 다른 측면은 수성 용매에서 재구성되는 경우 멜팔란 플루펜아미드 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염의 동결건조 제제의 재구성 시간을 감소시키기 위한, 멜팔란 플루펜아미드 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염의 동결건조 제제에서 폴리소르베이트 80; PEG 400; β-사이클로덱스트린; α-사이클로덱스트린; 하이드록시프로필-β-사이클로덱스트린; 설포부틸에테르-β-사이클로덱스트린; 락토스; 벤질 알콜; 디소듐 석시네이트; 프로필렌 글리콜; PEG 300; 크레모포르 EL; 디메틸 설폭사이드; D-만니톨; 트레할로스; 수크로스; 및 히스티딘을 포함하는 그룹 중에서 선택된 부형제의 용도를 제공한다.
상기 멜팔란 플루펜아미드 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염은 바람직하게 멜팔란 플루펜아미드 하이드로클로라이드(J1)이다.
상기 부형제는 바람직하게 폴리소르베이트 80 및 PEG 400으로부터 선택된다.
상기 멜팔란 플루펜아미드 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염은 상기 멜팔란 플루펜아미드를 상기 부형제에 적용하기 전에 바람직하게 에탄올에 용해된다.
본 명세서에서, "동결건조", "냉동-건조", "동결건조된", "냉동-건조된" 등은 호환적으로 사용될 수 있다.
폴리소르베이트 80(화학명은 폴리옥시에틸렌 20 솔비탄 모노올리에이트이고 CAS 등록번호는 9005-65-6임)은 예를 들어 플루카(Fluka) 또는 시그마-알드리치(Sigma-Aldrich)로부터 상업적으로 구입가능하다.
PEG 400은 HOCH2(CH2OCH2)mCH2OH의 실험식을 나타내며, 여기에서 m은 8.7이고, 평균 분자량은 380-420이며, 예를 들어 플루카 또는 시그마-알드리치로부터 상업적으로 구입가능하다.
PEG 300은 HOCH2(CH2OCH2)mCH2OH의 실험식을 나타내며, 여기에서 m은 6.4이고, 평균 분자량은 285-315이며, 예를 들어 플루카 또는 시그마-알드리치로부터 상업적으로 구입가능하다.
크레모포르 EL®은 시그마-알드리치에 의해 시판되는 상표명이며, CAS 등록 번호 61791-12-6인 폴리옥시에틸렌 피마자유이다.
본 명세서에 기재된 바와 같이 사용될 수 있는 예시적인 세포독성 디펩티드는 WO01/96367호에도 기재되어 있으며 하기 화학식 V로 나타낼 수 있고, 또한 그의 약제학적으로 허용되는 염이다:
Figure 112020058215872-pat00001
(V)
상기 식에서
R1은 알킬옥시, 사이클로알킬옥시, 아릴옥시, 아릴알킬옥시, NH2, 알킬아미노, 사이클로알킬아미노 또는 아릴아미노이고;
R3는 NH2, OH, O-알킬, N-알킬, O-아실, NH-아실, N(CH2CH2Cl)2, NO2, F, CF3 또는 H이며;
R4는 천연 또는 개질된 사이클릭 또는 방향족 아미노산, 또는 H이다.
또한, 본 명세서에 기재된 바와 같이 사용될 수 있는 세포독성 펩티드는 R3가 F인 화학식 I 또는 V의 펩티드를 포함한다. 디펩티드는 R1이 알킬옥시이고; R3가 F, CF3, H, OH, O-알킬, NO2, N(CH2CH2Cl)2, NH-아실 또는 NH2이며; R4가 H인 화학식 I 또는 V의 펩티드의 예이다.
트리펩티드는 R1이 알킬옥시이고; R3가 F, CF3, H, OH, O-알킬, NH-아실, NO2, N(CH2CH2Cl)2 또는 NH2이며; R4가 천연 또는 개질된 사이클릭 또는 방향족 아미노산인 화학식 I 또는 V의 펩티드의 예이다.
멜팔란 플루펜아미드 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염은 WO 01/96367호에 개시된 바와 같이 제조될 수 있으며, 그 개시내용은 원용에 의해 본 명세서에 포함된다. WO 01/96367호의 실시예 1은 멜팔란 플루펜아미드(L-멜팔라닐-L-p-플루오로페닐알라닌 에틸 에스테르) 뿐아니라 그의 하이드로클로라이드 염 - 멜팔란 플루펜아미드 하이드로클로라이드 J1(L-멜팔라닐-L-p-플루오로페닐알라닌 에틸 에스테르, 화합물 J1)을 제조하기 위한 합성 과정을 개시하고 있으며, 그 개시내용은 본 명세서에 포함된다.
WO 01/96367호에 개시된 디펩티드 유도체는 당해 문헌에 개시된 바와 같이 tert-부톡시카보닐(Boc)-보호된 멜팔란으로부터 합성할 수 있으며, 본 명세서에 기재된 바와 같이 동결건조되고 사용될 수 있다. 또한, WO 01/96367호는 트리펩티드 유도체의 제조를 개시하고 있으며, 여기에서 Boc-보호된 아미노산이 커플링제로서 EDC/NMM/HOBt를 사용하여 멜팔란 함유 디펩티드 유도체와 커플링된다(EDC는 트리에틸아민 또는 1-[3-디메틸아미노)프로필]-3-에틸카보디이미드 하이드로클로라이드이고, NMM은 N-메틸몰폴린이며 HOBt는 1-하이드록시벤조트리아졸이다). 이러한 트리펩티드 유도체는 본 명세서에 기재된 바와 같이 동결건조되고 사용될 수 있다.
모든 측면에서 본 명세서에 기재된 바와 같이 동결건조되고 사용될 수 있는 멜팔란 유도체의 예는 비제한적으로 멜팔란 플루펜아미드, L-멜팔라닐-L-p-플루오로페닐알라닌 이소프로필 에스테르(JV28), L-프롤리닐-L-멜팔라닐-L-p-플루오로페닐알라닌 에틸 에스테르(J3)(도 7) 및 그의 약제학적으로 허용되는 염을 포함한다. 이들 화합물은 기존에 WO 01/96367호에 개시되어 있으며, 이 문헌은 또한 이들의 제조방법을 제공한다. 멜팔란 플루펜아미드, JV28 및 J3는 체내에서 멜팔란으로 변환될 수 있다. WO 01/96367호에서는, 이들 유도체가 멜팔란보다 낮은 농도로 사용되는 경우에도 종양에 대한 세포 살해 활성 증가를 나타내는 것으로 입증되었다. 또한, 멜팔란 내성은 피할 수 있다.
본 발명은 하기 실시예를 이용하여 추가로 기재될 것이나, 이는 본 발명의 범위를 제한하지 않는다.
실험 섹션
실시예 1: 상이한 조건하에서 멜팔란 플루펜아미드 하이드로클로라이드(J1) 의 동결건조
본 실험에서는 다양한 조건하에서 멜팔란 플루펜아미드 하이드로클로라이드(J1)의 동결건조를 시험하였다.
실시예 1A
계량한 양의 J1을 약간 가열하면서 초음파 배스에서 다양한 부피의 탈이온수에 용해시켜 맑은 용액을 얻었다. 시료를 드라이아이스-아세톤 배스(-78℃, 시료 A1-A3) 또는 -16℃의 냉동고(시료 B1-B3)에서 냉동시켰다. 그 후, 건조 플라스크 및 펌프사이의 드라이아이스-아세톤(-78℃) 트랩으로 실온에서 1 mbar의 압력하에 16 시간동안 냉동-건조를 실행하였다.
건조 후의 시각적 외관은 표 1에 요약한 바와 같다.
[표 1]
다양한 냉동 농도 또는 온도에서 J1의 6가지 상이한 용액
Figure 112020058215872-pat00002
실시예 1B
건조 화합물 시료를 50% 수성 아세토니트릴에 용해시키고 HPLC(ACE-칼럼, C8, 50x3 mm, 3분간 10-97% CH3CN, 1 mL/분)로 분석하였다. 한 경우(J1A1)에는 수용액을 냉동-건조 전에 HPLC로 분석하였다(J1A1-스타트). 건조 후 순도는 표 2에 요약한 바와 같다.
[표 2]
냉동 건조 후의 순도. Rt= 체류 시간
Figure 112020058215872-pat00003
실시예 1C
다음에는, 약산성의 물(예를 들어, 0.01% HCl)을 사용하여 용해 속도를 증진하거나 먼저 J1을 에탄올에 용해시킨 후 물(중성 또는 약산성)을 가하는 것을 시험하였다.
멜팔란 플루펜아미드(ca 3 mg)를 70% 수성 에탄올(0.5 mL)에 용해시켜 J1의 3가지 시료를 제조하였다. 용액을 5 mM HCl로 희석하여 0.4 mg/mL의 농도가 되게 하였다. 멜팔란 플루펜아미드는 수성 에탄올에 신속하게 용해되기 때문에 맑은 용액을 얻기 위하여 초음파 배스를 사용하거나 가열할 필요는 없었다. 그 후 용액을 건조 플라스크와 펌프 사이의 드라이아이스-아세톤(-78℃) 트랩의 배스에서 냉동시켰다. 건조 후 시각적 외관은 표 3에 요약한 바와 같다.
[표 3]
에탄올 및 산에 용해된 J1의 3회 반복실험
Figure 112020058215872-pat00004
실시예 1D
각 시료에 대해 2번의 HPLC를 실행하였다: 하나는 플라스크로부터 제거될 수 있는 고체 화합물이고, 하나는 플라스크 내의 화합물의 나머지를 용해시킨 것이다(표 4).
[표 4]
냉동 건조 후의 순도
Figure 112020058215872-pat00005
결론적으로, J1을 70% 에탄올에 용해시키고, 5 mM HCl로 희석하고 냉동-건조시킴으로써 3가지 시료는 > 95%의 순도로 얻어졌다.
실시예 1E
산을 생략하는 대신에 에탄올을 탈이온수로 희석하는 것을 시험하였다. J1(ca 3 mg)을 실온에서 70% 수성 에탄올(0.5 mL)에 용해시켜 J1의 3가지 시료를 준비하였다. 용액을 탈이온수로 희석하여 0.4 mg/mL의 농도가 되게 하였다. 그 후, 용액을 드라이아이스-아세톤(-78℃) 배스에서 냉동시켰다. 그 후 건조 플라스크와 펌프 사이의 드라이아이스-아세톤(-78℃) 트랩으로 실온에서 1 mbar의 압력하에 16 시간 동안 냉동-건조를 실행하였다. 건조 후 시각적 외관은 표 5에 요약한 바와 같고, 순도는 표 6에 요약한 바와 같다.
[표 5]
에탄올 및 물에 용해된 J1의 3회 반복실험
Figure 112020058215872-pat00006
[표 6]
냉동 건조 후의 순도
Figure 112020058215872-pat00007
J1을 70% 에탄올에 용해시키고, 물로 희석하고 냉동-건조함으로써; 출발 물질과 동일한 순도로 3회 반복실험 시료를 얻었다.
실시예 2: 동결건조된 멜팔란 플루펜아미드의 용해 속도에 대한 부형제의 효과
본 실험에서는, 멜팔란 플루펜아미드 하이드로클로라이드(J1)의 냉동-건조 과정에 부형제를 첨가하여 용해 속도에 대한 효과를 시험하였다. 하기 부형제를 사용하였으며, 이들은 모두 FDA(미국 식품 의약품 안전청)에 따라 일반적으로 안전한 물질로 인정되는(Generally Considered As Safe; GRAS) 통상의 제형 제제이다:
- D-만니톨, 트레할로스 및 수크로스;
- 트리즈마 하이드로클로라이드 및 L-히스티딘;
- 폴리소르베이트 80, β-사이클로덱스트린.
J1이 모든 실험에서 사용되었다.
D-만니톨은 시그마 번호 33440으로부터 구입하였고;
D-(+)-트레할로스 2수화물은 시그마 번호 T9449-25 g이었으며;
트리즈마 하이드로클로라이드는 시그마 번호 T3253-100 g이었고;
β-사이클로덱스트린 수화물은 시그마 번호 856088-5 g이었으며;
폴리소르베이트 80은 플루카 59924-100 g이었다.
Leybold Lyovac GT2 장비에서 냉동-건조를 수행하였다. LCMS(액체 크로마토그래피-질량 분광법)를 아세토니트릴-0.1% 트리플루오로아세트산 수용액을 용출액으로 사용하는 HP1100-시스템에서 실행하였다. ACE-칼럼 C8, 50 x 3 mm 및 3분간의 10-97% 아세토니트릴 구배를 사용하였다. 여과 바이알은 왓트만(Whatman)에서 구입하였고 Mini-UniPrep, 0.45 ㎛였다.
(i) 방법 A, 냉동-건조
멜팔란 플루펜아미드(30.1 mg)를 1 mM HCl로 5 mL의 70% 에탄올에 용해시켰으며, 총 용해는 18-19℃에서 12분 이내였다. 용액을 물(70 mL)로 희석하고 부형제(예: β-사이클로덱스트린, 9 mg)의 존재 및 부재하에 250 mL의 둥근 바닥 플라스크로 분배하였다(10 mL). 모든 물질이 용해되었을 때, 용액을 -78℃에서 드라이아이스/아세톤 배스에 침지시켜 냉동시켰다. 냉동된 용액을 실온에서 밤새 <0.1 mbar에서 냉동-건조시켰으며, 건조될 때까지 증발에 의해 시료를 냉동상태로 유지하였다.
(ii) 방법 A, 용해 속도 측정
5% 글루코스 용액(10 mL)을 18.5-19℃에서 한번에 냉동-건조된 물질에 가하고 자석으로 교반하였다. 다양한 시점에 알리코트(ca 0.3 mL)를 1-mL 주사기로 취하고 여과 바이알(0.45 ㎛)을 통해 여과하였다. 여액(8 ㎕)을 HPLC로 분석하였다.
(iii) 방법 B, 냉동-건조
멜팔란 플루펜아미드(10.2 mg)를 5 mM HCl로 1.67 mL의 70% 에탄올에 용해시켰으며, 총 용해는 25℃에서 5분 이내였다. 용액을 물(23.3 mL)로 희석하고 부형제(예: β-사이클로덱스트린, 9 mg)의 존재 및 부재하에 플라스크 내로 분주하였다(10 mL). J1 및 부형제 용액을 피팅 인서트(fitting insert) 0.45 ㎛ 필터를 지닌 플라스틱 바이알로 분주하였다(각 바이알에 0.25 mL). 바이알을 -78℃에서 드라이아이스/아세톤 배스에 침지시켜 냉동한 다음 받침대에 고정시킨 바이알에서 밤새 -20℃로 유지하였다. 교차-오염을 방지하기 위하여 냉동된 바이알을 알루미늄 호일로 덮고 받침대에서 -20℃로 예비냉각시키면서 받침대를 밤새 데시케이터 내에서 <0.1 mbar에 노출시키고 건조될 때까지 증발에 의해 시료를 냉동상태로 유지하였다.
(iv) 방법 B, 용해 속도 측정
5% 글루코스 용액(0.5 mL)을 첨가하였으며, 이는 내부 표준(3-메톡시벤조산, 0.08 mg/mL)을 함유하였다. 다양한 시간 후(15초-12분) 바이알의 내용물을 여과하고, 여액을 바로 유리 바이알로 옮겨 용해되지 않은 물질이 여액으로 누출되는 것을 방지하며, 8 ㎕의 여액을 LCMS에 주입하였다.
용해 속도의 결정
첫 번째 연구, 방법 A에서 상이한 첨가제를 포함하는 J1의 수용액을 둥근 바닥 플라스크에서 냉동-건조시켰다. 제어된 교반 하에 각각의 냉동건조된 화합물에 글루코스 용액을 첨가하였다. 특정 시간에 주사기를 사용하여 소량의 알리코트를 취하고 0.45 ㎛ GHP 주사기 필터를 통해 여과하였다. 그 후, 여액 내 J1의 용해 정도를 HPLC로 결정하였다. 이 방법을 단독 또는 D-만니톨, 트레할로스, 수크로스, 폴리소르베이트 80 및 β-사이클로덱스트린과 혼합된 냉동-건조된 멜팔란 플루펜아미드에 대해 사용하였다. 이들 시험의 결과는 J1이 부형제와 무관하게 2-4분 이내에 완전히 용해됨을 보여주었다(도 1: 부형제 부재, 및 도 2: 부형제 존재 참조. 또한 표 7 참조). 사실상, 부형제와 함께 동결건조된 J1의 용해 속도는 실제로 이 방법을 사용하여 측정될 수 있는 것보다 더 신속하였다.
[표 7]
냉동-건조시 J1(4 mg)에 부형제 첨가, 방법 A
Figure 112020058215872-pat00008
정확성을 개선하고 더 짧은 간격으로 용해 측정을 가능하게 하기 위하여 방법 B를 개발하였다. 이 방법에서는 멜팔란 플루펜아미드와 부형제의 수용액(표 2 참조)을 2 mL 플라스틱 바이알에 가하고 냉동-건조시켰다. 그 후, 내부 표준 3-메톡시벤조산을 포함하는 글루코스 용액을 교반없이 가하였다. 다양한 시간 후(15초-6분) 바이알의 내용물을 0.45 ㎛ GHP 바이알 인서트로 여과하고, 여액을 유리 바이알로 옮기고, 내부 표준과 함께 멜팔란 플루펜아미드 하이드로클로라이드(J1)의 용해도를 HPLC로 결정하였다. 교반을 하지 않음으로써 더 느린 용해 과정이 가능해지며, 속도론적 측정에 있어 임상적으로 더 관련있고 더 용이해졌다.
이 방법으로 냉동-건조된 J1의 용해 속도론에 따라 3-4분 후 완전한 용해에 이르게 되었다(도 3: 부형제 부재 및 도 4: 부형제 존재 참조, 또한 표 8 참조).
[표 8]
냉동-건조시 J1(4 mg)에 부형제 첨가, 방법 B.
Figure 112020058215872-pat00009
첨가제 존재 또는 부재하에 방법 A 및 방법 B에 의해 결정된 J1의 용해 속도는 표 9에 요약하였다.
[표 9]
첨가제 존재 또는 부재하에 방법 A 및 B에 의한 J1의 용해 시간 요약
Figure 112020058215872-pat00010
J1의 순도 및 회수
멜팔란 플루펜아미드 하이드로클로라이드(J1) 시료를 50% 아세토니트릴 수용액에 용해시키고 즉시 LCMS(액체 크로마토그래피-질량 분광법)로 분석한 결과, 단지 1개의 피크를 나타내었다(>99%). 1 mM HCl 또는 5 mM HCl을 함유하는 70% 에탄올에 용해시킨 직후 J1의 순도는 ca 97%이며, 부산물은 ca 3%로 확인되었다. 이 부산물의 양은 용액을 실온에 놔두는 경우 증가하였다.
이 결과는 교반과 함께 글루코스 용액에서 냉동-건조된 J1의 용해 속도가 측정될 수 있는 것보다 신속하여(방법 A) 부형제 첨가의 효과를 볼 수 없게 함을 입증한다. 임상적으로 더욱 관련있는 방법 B를 교반없이 이용하면, 냉동-건조된 멜팔란 플루펜아미드를 글루코스 용액에서 3-4분 후 완전한 용해에 이르게 하였다. 냉동-건조 전 멜팔란 플루펜아미드 용액에 부형제 β-사이클로덱스트린, 폴리소르베이트 80, 만니톨 및 트레할로스를 첨가하면 모두 1분 미만에 완전한 용해를 제공하였다. 폴리소르베이트 80을 첨가하는 경우 가장 빠른 용해를 나타내어, 첫 번째 시점인 15초에 완전히 용해되었다.
실시예 3: 멜팔란 플루펜아미드의 용해 속도에 대한 부형제 폴리소르베이트 80의 농도 효과 시험
하기 시험은 멜팔란 플루펜아미드의 냉동-건조 과정에 첨가되는 부형제 폴리소르베이트 80의 양을 시험하고 5% 글루코스 용액에서의 용해 속도를 최대화하기 위하여 실행하였다. 멜팔란 플루펜아미드를 기준으로 폴리소르베이트 80을 0, 10, 50 및 100 중량% 양으로 사용하였다. 실험을 이중으로 수행하였다.
모든 실험에 멜팔란 플루펜아미드 하이드로클로라이드(J1)를 사용하였다. 사용된 폴리소르베이트 80은 플루카, 59924-100 g이었다.
Leybold Lyovac GT2 장비에서 냉동-건조를 수행하였다. LCMS를 아세토니트릴-0.1% 트리플루오로아세트산 수용액을 용출액으로 사용하는 HP1100-시스템에서 실행하였다. ACE-칼럼 C8, 50 x 3 mm 및 3분간의 10-97% 아세토니트릴 구배를 사용하였다. 여과 바이알은 왓트만에서 구입하였고 Mini-UniPrep, 0.45 ㎛였다.
냉동-건조 전의 멜팔란 플루펜아미드 2 mg/mL 저장 용액의 일반적인 준비는 다음과 같이 수행하였다:
11.0 mg 멜팔란 플루펜아미드를 무수 EtOH 중의 10 mM HCl 용액(0.5 mL)에 현탁시켰다. 혼합물을 30분간 교반한 후 0.2 mL 물을 가하였다. 혼합물을 실온에서 10분간 교반한 다음(맑은 용액) 0℃의 수용액(4.8 mL)에 가하였다. 0.25 mL의 용액을 10 중량%, 50 중량% 또는 100 중량% 폴리소르베이트 80을 함유하는 플라스틱 바이알로 옮겼다. 바이알을 진탕하고 냉각시키고 냉동-건조시켰다.
물(15 mL)에 3-메톡시벤조산(1.2 mg)을 용해시켜 내부 표준 3-메톡시벤조산을 포함하는 5% 글루코스 용액을 준비하였다. 혼합물을 1 시간동안 교반한 후 750 mg의 글루코스를 가하면서 교반하였다. 각각의 냉동-건조된 플라스틱 바이알에 0.5 mL의 5% 글루코스 용액을 가하고, 혼합물을 상이한 시점에 여과하고, 유리 바이알로 옮긴 후 J1의 용해를 HPLC로 결정하였다.
용해 속도의 결정
J1(11 mg)을 EtOH(0.5 mL)에 현탁시키고 실온에서 30분간 교반한 다음 물(5 mL)을 가하였다. 0 중량%, 10 중량%, 50 중량% 또는 100 중량%(J1 기준)의 폴리소르베이트 80을 함유하는 4개의 상이한 플라스크 내로 용액을 나누었다. 용액을 2 mL 플라스틱 바이알로 옮겨 밤새 냉동-건조시켰다.
내부 표준 3-메톡시벤조산을 포함하는 5% 글루코스 용액을 교반 없이 각각의 바이알에 가하고 상이한 시점(2-300초)에 0.45 ㎛ GHP 바이알 인서트를 통해 혼합물을 여과하였다. 여액을 즉시 유리 바이알로 옮겨 용해되지 않은 물질로부터 누출되는 것을 방지하였다. 내부 표준을 기준으로 용해된 J1의 양을 HPLC로 결정하였다.
결과
폴리소르베이트 80의 존재 또는 부재하에 J1(5% 글루코스 용액 내 1 mg/mL)의 용해 속도를 표 10에 요약하고 도 5에 도시하였다.
[표 10]
Figure 112020058215872-pat00011
표 10은 냉동-건조된 J1 및 부형제 폴리소르베이트 80을 함유하는 모든 시료가 부형제 부재하에 냉동-건조된 J1을 함유하는 것에 비해 훨씬 더 빨리 용해됨을 보여준다. 10% 폴리소르베이트 80을 함유하는 시료가 특별히 주목되며, 이 실험에서의 시점은 여과 직후, 2초, 15초, 30초 및 5분이었다. 시료를 여과한 직후인 첫 번째 시점에서, 약 40%가 용해되었고, 2초 후에는 약 70%가 용해되었다. 30-60초 후에 완전한 용해가 달성되었다.
5% 글루코스 용액에서 다양한 양의 폴리소르베이트 80을 함유하는 1 mg/mL로 냉동-건조된 J1의 용해 속도는 모든 시료에서 1분 미만이었다. 신속한 용해를 위한 폴리소르베이트 80의 가장 적은 양은 10 내지 50 중량% 범위였다.
실시예 4: 멜팔란 플루펜아미드의 용해 속도에 대한 부형제 폴리소르베이트 80, PEG 400 및 β-사이클로덱스트린의 농도 효과 시험
본 실시예는 궁극적으로 보관시 안정하고 투약을 위한 제조가 용이한 동결건조 물질을 개발하기 위해 5% 글루코스 용액에서의 용해도 및 용해 속도를 최대화하고자 멜팔란 플루펜아미드의 냉동-건조 과정에 첨가된 부형제 폴리소르베이트 80, PEG 400 및 β-사이클로덱스트린의 상이한 농도 효과를 연구하기 위하여 수행되었다.
모든 실험에 멜팔란 플루펜아미드 하이드로클로라이드(J1)를 사용하였다. 사용된 폴리소르베이트 80은 플루카(59924-100 g)로부터, β-사이클로덱스트린은 알드리치(856088)로부터, 그리고 PEG 400은 클라리언트(Clariant; 100316)로부터 구입하였다.
Leybold Lyovac GT2 장비에서 냉동-건조를 수행하였다. LCMS를 아세토니트릴-0.1% 트리플루오로아세트산 수용액을 용출액으로 사용하는 HP1100-시스템에서 실행하였다. ACE-칼럼 C8, 50 x 3 mm 및 3분간의 10-97% 아세토니트릴 구배를 사용하였다. 여과 바이알은 왓트만에서 구입하였고 Mini-UniPrep, 0.45 ㎛였다.
냉동 건조를 위한 멜팔란 플루펜아미드 2 mg/mL 저장 용액의 일반적인 준비
11.1 mg 멜팔란 플루펜아미드를 무수 EtOH 중의 10 mM HCl 용액(0.5 mL)에 현탁시켰다. 혼합물을 30분간 교반한 후 0.2 mL 물을 가하였다. 혼합물을 실온에서 10분간 교반한 다음(맑은 용액) 0℃의 수용액(4.8 mL)에 적가하였다. 0.25 mL 또는 0.5 mL의 용액을 부형제를 함유하는 플라스틱 바이알로 옮겼다. 바이알을 진탕하고 냉각시키고 냉동-건조시켰다.
용해도 실험
3-메톡시벤조산(1.2 mg)을 물(15 mL)에 용해시켜 내부 표준을 포함하는 5% 글루코스 용액을 준비하였다. 혼합물을 1시간동안 교반한 후 750 mg의 글루코스를 교반하면서 가하였다. 각각의 냉동-건조된 플라스틱 바이알에 0.2 mL의 5% 글루코스 용액을 가하고 혼합물을 10-15초간 진탕하고 5분 후 여과하였다. 여액을 유리 바이알로 옮기고, HPLC와 보정 곡선에 의해 멜팔란 플루펜아미드의 용해도를 결정하였다.
용해도 결정
이전 실험에서와 같이 멜팔란 플루펜아미드 하이드로클로라이드(J1)의 2 mg/mL 저장 용액을 사용하였다.
5% 글루코스 용액에서 2.5 mg/mL의 J1의 용해도를 위해, 실험 디자인에 의해 결정된 부형제 혼합물을 함유하는 2 mL 플라스틱 바이알로 0.25 mL의 저장 용액을 분주하고 혼합물을 즉시 냉각시키고 냉동-건조시켰다.
각 부형제의 고/저 수준(멜팔란 플루펜아미드를 기준으로 하는 중량%)은 다음과 같다: 폴리소르베이트 80(8%-80%), PEG 400(80%-400%) 및 β-사이클로덱스트린(10%-50%). 각 부형제의 최대량은 등록된 IV-투여 약물의 FDA 불활성 성분 데이터베이스로부터 결정하였다. β-사이클로덱스트린은 FDA의 GRAS(일반적으로 안전한 물질로 인정되는) 리스트에 있지만 본 발명자들이 아는 바로는 정맥내 주사에 권장되지 않으며, 이는 상당히 적게 잡은(conservative) 고수준이 설정되어야 하기 때문이다. 멜팔란 플루펜아미드 하이드로클로라이드(J1)(중량)을 기준으로 각 부형제의 중량 퍼센트는 표 11에 나타내었다.
[표 11]
J1을 기준으로하는 각 부형제의 중량 퍼센트
Figure 112020058215872-pat00012
본 명세서의 다른 실험에서 입증되는 바와 같이, J1의 용해 속도는 냉동 건조 과정에서 폴리소르베이트 80의 첨가에 의해 현저하게 증가하였다. 5 mg/mL의 용해도에 도달하도록 3회의 실험을 수행하였다. 폴리소르베이트 80(멜팔란 플루펜아미드를 기준으로 10 중량%, 50 중량% 및 100 중량%)을 함유하는 3개의 상이한 플라스틱 바이알(실험 12, 13 및 14)에 J1의 저장 용액을 가하였다. 혼합물을 즉시 냉각시키고 냉동-건조시켰다.
내부 표준(3-메톡시벤조산)을 포함하는 5% 글루코스 용액을 각각의 바이알에 가하고 바이알을 진탕하고 5분간 방치하였다. 0.45 ㎛ GHP 필터 바이알을 통해 혼합물을 여과하고, 여액을 즉시 유리 바이알로 옮겨 용해되지 않은 물질로부터 누출되는 것을 방지하였다. HPLC와 보정 곡선을 사용하여 용해된 J1의 양을 결정하였다.
결과
부형제 폴리소르베이트 80, PEG 400 및 β-사이클로덱스트린의 고/저 수준에서 mg/mL 단위의 J1 용해도를 표 12에 요약하였다.
[표 12]
J1의 용해도(mg/mL)
Figure 112020058215872-pat00013
실험 15-16은 냉동-건조된 J1을 사용하지 않았으며, 실험 15에서는 세말(fine powder)을 사용하였고 실험 16에서는 더 큰 덩어리가 사용되었다.
표 12의 결과는 냉동-건조되지 않은 J1과 비교하여 부형제를 함유하는 모든 실험에서 J1의 용해도가 증가하였음을 입증한다(항목 15 및 16). 항목 15는 백색 세말의 현탁액인 반면 항목 16은 더 큰 덩어리로서 더 낮은 용해 속도 및 이에 따라 5분 내에 더 낮은 J1 용해도를 나타내었으므로 냉동-건조되지 않은 J1의 용해도에 있어서의 큰 차이는 아마도 배치별로 상이한 입경때문인 것으로 보인다. 분석의 정확성은 동일한 부형제 농도를 갖는 중앙 실험 9-11(1.9, 1.8 및 1.7)로부터 보여진다. 부형제로서 폴리소르베이트 80을 포함하는 3가지 시료(10, 50 및 100%)는 각각 1.0, 1.2 및 1.4 mg/mL의 용해도를 나타내었다.
부형제 폴리소르베이트 80, Peg 400 및 β-사이클로덱스트린의 혼합물을 포함하는 항목은 2.0 mg/mL 또는 이에 근접한 용해도의 여러 가지 조합을 나타내었다. 가장 높게 결정된 용해도 2.0(항목 3, 5 및 7)은 높은 수준의 PEG 400에서만 얻어질 수 있었으며, 냉동 건조 후에는 액체 또는 반고체를 제공하였다.
더 낮은 양의 PEG 400을 포함하는 시료(항목 2, 4, 6 및 8)는 냉동 건조 후에 백색 거품상 분말을 형성하였으며, 가장 높게 결정된 용해도는 항목 8의 1.9 mg/mL였다. PEG 400의 양을 저하시키고 β-사이클로덱스트린의 양을 증가시킴으로써 더 큰 용해도를 얻을 수 있다면, 이는 시험을 촉발하였다. 부가적인 시료(표 12의 17행)는 50% 폴리소르베이트 80, 80%의 PEG 400 및 100%의 β-사이클로덱스트린을 함유하여 냉동-건조시켰다. 이러한 부형제 혼합물에 의한 J1의 용해도는 1.2 mg/mL였다.
결과적으로 부형제의 조합에 의한 J1의 최대 용해도는 2 mg/mL에 근접한 것으로 입증되었다.
실험 13에 의해, 50% 폴리소르베이트를 포함하는 J1 용액이 단독으로 약 1.2 mg/mL의 용해도를 제공하면서, 1.0 mg/mL 제형에 충분하고, PEG 400 및 β-사이클로덱스트린을 배제시킬 수 있는 것으로 나타났다.
시각적 확인 실험
좀 더 임상적으로 관련된 상황에서 용해를 확인하기 위하여, 플라스틱 바이알 대신에 투명한 유리 바이알에서의 더 큰 규모의 실험을 수행하였다. 바이알 1은 4.8 mg 멜팔란 플루펜아미드 하이드로클로라이드(J1) 및 2.4 mg 폴리소르베이트 80의 용액을 함유하였다. 대조군으로서 바이알 2는 4.8 mg 멜팔란 플루펜아미드 하이드로클로라이드(J1)를 함유하고 폴리소르베이트 80을 함유하지 않았다. 바이알을 밤새 냉동-건조시켰다.
백색 거품상 물질로서 냉동-건조된 멜팔란 J1을 함유하는 각각의 바이알에 4.70 mL의 5% 글루코스 용액을 가하여 1.02 mg/mL의 J1 농도가 되게 하였다. 혼합물을 10-15초 동안 진탕하면 J1 및 50% 폴리소르베이트 80을 함유하는 시험 튜브는 15초 후에 맑은 용액을 보여주었다(도 6, 좌측 바이알 참조). 폴리소르베이트를 함유하지 않는 냉동-건조된 J1을 포함하는 참조 튜브는 작은 입자를 보였으며 30분 후에도 완전히 용해되지 않았다(도 6, 우측 바이알 참조). LC-MS 분석 결과, 양쪽 바이알에서 30분 후의 멜팔란 플루펜아미드 순도가 >95%인 것으로 밝혀졌다.
본 명세서에 제공된 결과는 5% 글루코스 용액에서 J1의 용해도가 부형제 폴리소르베이트 80, Peg 400 및 β-사이클로덱스트린의 혼합물을 사용하여 1.9 mg/mL까지 증가될 수 있음을 입증한다. 이러한 부형제 혼합물과 J1은 동결건조시 백색 거품상 고체를 생성하였다.
50 중량%의 폴리소르베이트 80과 함께 J1을 동결건조하면 5% 글루코스 용액에 신속하게 용해되는 백색 거품상 고체를 생성하였다. 포화 농도 1.2 mg/mL는 1.0 mg/mL로 제제를 투약하기 위한 임상적 상황에서 사용하기에 충분하다.
실시예 5: 안정성 시험
본 연구의 첫 번째 부품의 목적은 5% 글루코스 용액에서 멜팔란 플루펜아미드 하이드로클로라이드(J1)(폴리소르베이트 80과 함께 냉동-건조됨)의 용해 속도를 조사하는 것이었다.
폴리소르베이트 80을 함유하는 5% 글루코스 용액에서 J1(냉동-건조됨)의 용해 속도는 다른 실험에서 측정될 것이다.
마지막으로, 폴리소르베이트 80을 함유하는 5% 글루코스 용액에서 냉동-건조되지 않은 J1의 용해 속도가 측정될 것이다.
두 번째 부품은 상승된 온도의 2가지 상이한 제제에서 J1의 분해를 조사하는 것이다. 첫 번째 제제는 폴리소르베이트 80을 함유하는 냉동 건조된 고체였고 두 번째는 N,N-디메틸아세트아미드(DMA)에서 J1의 25 mg/ml 용액이었다. 2가지 제제를 사용하여, +40℃에서 1달간 분해가 이루어졌다.
(i) 용해 속도의 결정
J1을 함유하는 각각의 플라스틱 바이알에 5% 글루코스 용액을 가하였다. 바이알을 진탕하고 상이한 시점에 여과하였다. 여액을 유리 바이알로 옮기고 용해된 J1의 양을 HPLC로 결정하였다.
(ii) 가속 안정성 연구 디자인
냉동-건조된 J1 및 폴리소르베이트 80을 포함하는 10개 바이알, 및 J1의 DMA 용액을 포함하는 10개 바이알을 40℃에서 1달간 저장하였다. 냉동-건조된 물질의 2개 바이알(하기 표에서 냉동 건조 1 및 2로 명명함) 및 DMA 용액의 1개 바이알(하기 표에서 DMA로 명명함)을 40℃ 챔버에서 취하여 -20℃에서 저장하고 J1의 순도를 검정하는 것과 동일한 시간에 분석하였다. 시료 채취 시간은 0, 1, 3, 10 및 30일이었다. 각각의 냉동 건조 바이알은 0.25 mg의 J1을 함유하였다. 25 mg/ml의 DMA 용액을 온코펩티드(Oncopeptides)로부터 구입하였다.
(iii) 분석 및 결과
냉동 건조된 시료를 왓트만 0.45 ㎛ 필터 바이알에서 500 ㎕ DMA에 용해시켰다. 시료를 간단히 볼텍싱한 후 바이알의 2개 부품을 함께 누름으로써 시료를 여과하였다. 20 ㎕의 용액을 HPLC 바이알에 나누어 담고 980 ㎕의 DMA로 희석함으로써 25 mg/ml 용액 시료를 DMA로 희석하였다. 4 ㎕를 크로마토그래피 시스템에 주입하였다.
냉동 건조된 바이알 내의 J1 양에 약간씩 차이가 있기 때문에 상대 순도로서 안정성을 평가하였다. 상대 순도를 사용함으로써, 각각의 시료를 그 자신에 대해 표준화하고, 안정성 결과에 대해 J1의 양이 변화함에 따른 효과를 최소화하였다.
PS의 존재하에 5% 글루코스에서 J1의 용해 속도를 표 13에 요약하였다:
[표 13]
용해 실험의 요약
Figure 112020058215872-pat00014
안정성 시험 결과
[표 14]
40℃에서의 안정성 시험 결과, +40℃/주변 상대 습도에서 DMA 용액과 냉동-건조된 J1 사이의 비교
Figure 112020058215872-pat00015
표 14의 결과는 냉동 건조 물질이 시험 기간 동안 본질적으로 변화하지 않음을 보여준다. 순도에 있어서의 작은 변화만이 관찰될 수 있다. 또한 5% 글루코스 용액에서 1 mg/mL로 냉동-건조된 J1의 용해 속도가 폴리소르베이트 80 존재하에 1분 미만이었다. 폴리소르베이트 80을 함유하는 5% 글루코스 용액에서 1 mg/mL로 냉동-건조되지 않은 J1의 용해 속도는 1-2분으로 산정되었다.
DMA 용액에서의 J1은 1달간 40℃에서의 저장중에 유의하게 분해되었다. 상대적인 양은 약 96.8%에서 86.9%로 감소하였다. 냉동 건조된 고체로서 저장된 J1은 동일한 기간중에 98.7%에서 98.3%로의 적은 분해 만을 보여주었다.
다른 실험
본 발명이 상세한 설명과 연계하여 기재되었지만, 전기 상세한 설명은 본 발명을 설명하기 위한 것이지 첨부된 특허청구범위에 의해 정의된 발명의 범위를 한정하기 위한 것이 아님을 이해하여야 한다. 다른 측면, 이점 및 변형도 하기 특허청구범위 내에 있다.

Claims (40)

  1. (i) 멜팔란 플루펜아미드 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염; 및
    (ii) 트레할로스를 포함하는 동결건조 약제학적 제제.
  2. 제1항에 있어서, 멜팔란 플루펜아미드가 멜팔란 플루펜아미드 하이드로클로라이드(J1)인, 동결건조 약제학적 제제.
  3. 제1항에 있어서, 트레할로스의 양이 멜팔란 플루펜아미드의 10-100 중량%인, 동결건조 약제학적 제제.
  4. 제1항에 있어서, 생리학적으로 허용되는 용액을 추가로 포함하는, 동결건조 약제학적 제제.
  5. 제4항에 있어서, 생리학적으로 허용되는 용액이 글루코스 용액인, 동결건조 약제학적 제제.
  6. 제1항에 있어서, 유기 용매가 없거나 실질적으로 없는, 동결건조 약제학적 제제.
  7. (i) 제1항에 따른 동결건조 약제학적 제제; 및
    (ii) 생리학적으로 허용되는 용액을 포함하는 부품 조합의 키트.
  8. 제7항에 있어서, 생리학적으로 허용되는 용액이 글루코스 용액인, 부품 조합의 키트.
  9. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항, 또는 제7항 및 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 의약품으로서 사용하기 위한, 동결건조 약제학적 제제 또는 키트.
  10. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항, 또는 제7항 및 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 암의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한, 동결건조 약제학적 제제 또는 키트.
  11. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항 또는 제7항 및 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 암의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한 것으로, 상기 암이 난소암, 폐암, 방광암, 중피종, 다발성 골수종, 유방암 또는 혈액암 중 어느 하나인, 동결건조 약제학적 제제 또는 키트.
  12. a) 멜팔란 플루펜아미드 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염을 유기 용매에 용해시켜 멜팔란 플루펜아미드 용액을 얻는 단계;
    b) 0.2-3.0 mg/ml의 농도로 멜팔란 플루펜아미드 수용액을 얻기 위해 멜팔란 플루펜아미드 용액에 물을 가하는 단계;
    c) 트레할로스를 멜팔란 플루펜아미드 용액에 가하는 단계; 및
    d) 부형제(들)을 함유하는 멜팔란 플루펜아미드 수용액을 동결건조시키는 단계에 의해 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 따른 동결건조 약제학적 제제를 제조하는 방법.
  13. 제12항에 있어서,
    a) 멜팔란 플루펜아미드 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염을 유기 용매에 용해시키는 단계;
    b) 0.2-3.0 mg/ml의 농도로 멜팔란 플루펜아미드 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염의 용액을 얻기 위해 단계 a)에서 얻어진 용액에 물을 가하는 단계;
    c) 트레할로스를 단계 b)에서 얻어진 용액에 가하는 단계; 및
    d) 단계 c)에서 얻어진 용액을 동결건조시키는 단계에 의한, 방법.
  14. 제12항에 있어서, 유기 용매가 에탄올, 에탄올 함유 산, 글리세린, 프로필렌 글리콜, 벤질 알콜, 디메틸아세트아미드(DMA), N-메틸-2-피롤리돈, 이소프로판올, n-부탄올, tert-부탄올, 메틸 tert-부틸 에테르, 프로필렌 글리콜, 디메틸설폭사이드, 테트라하이드로푸란, 2-메틸 테트라하이드로푸란, 아세톤, 디메틸포름아미드, 아세토니트릴, 디옥산, 아세트산, 락트산, 프로피온산, n-부탄올, 이소프로판올, n-프로판올, tert-부탄올, sec-부탄올, 메탄올, 및 에탄올과 물의 혼합물 중의 어느 하나로부터 선택되는, 방법.
  15. 제12항에 있어서, 멜팔란 플루펜아미드가 멜팔란 플루펜아미드 하이드로클로라이드(J1)인, 방법.
  16. 제12항에 있어서, 유기 용매가 에탄올인 방법.
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KR1020207016300A 2011-04-28 2012-04-25 세포독성 디펩티드의 동결건조 제제 KR102194376B1 (ko)

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