JP6284257B2 - レニン阻害剤、キマーゼ阻害剤又は降圧剤、並びにレニン阻害活性及び/又はキマーゼ阻害活性を有する食品 - Google Patents
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Description
レニンは、主に腎臓の傍糸球体細胞で生合成され様々な刺激で血中に放出される。血中のレニンは、図3に示すように、肝臓で合成された基質タンパクであるアンギオテンシノーゲンに作用してアンジオテンシンIを遊離する。アンジオテンシンIは、主に肺循環中において、アンジオテンシン変換酵素(ACE)によりアンジオテンシンIIに変換される。生じたアンジオテンシンIIは、直接血管壁に作用して血管を収縮させ血圧を上昇させ、また、副腎に作用してアルドステロンの分泌を促進する。
アルドステロンの分泌が促進されると、腎臓でのナトリウムの再吸収が促進され、その作用で血液中の体液量が増加し、さらに、血圧上昇を引き起こす要因となる。
以上のことから、レニン・アンジオテンシン系の制御が血圧調節上非常に重要である。
食物由来のレニン阻害に関する研究としては、ヒト型組換えレニンと消光性蛍光基質を組み合わせたレニン阻害活性の測定方法に関するもの(非特許文献1)があり、食物由来のレニン阻害物質に関する研究として、大豆成分であるソヤサポニンIに関するもの(非特許文献2及び特許文献1)及び米から単離した脂肪酸であるオレイン酸とリノール酸に関するもの(非特許文献3)、及び山菜のウドから単離したレニン阻害物質に関するもの(非特許文献4)がある。
さらに、本発明は、スルカリア・スルカタの抽出物又はロバリア・クロカワエの抽出物を含有するレニン阻害活性及び/又はキマーゼ阻害活性を有する食品を提供する。
スルカリア・スルカタ又はロバリア・クロカワエは、乾燥して、粉砕等して粉末にすることで、そのまま、又は、必要な他の成分と混合してレニン阻害剤、キマーゼ阻害剤又は降圧剤として利用してもよい。
本発明の食品は、食品の形態等の設計に応じて、スルカリア・スルカタの抽出物又はロバリア・クロカワエの抽出物を液状、粉末、顆粒又は錠剤等の固体状、カプセル状等の形態で、食品の製造工程において食品原料等に添加すればよい。
なお、中国産のスルカリア・スルカタは樹花菜、ロバリア・クロカワエは樹蝴蝶として販売されているものを使用した。
スルカリア・スルカタ及びロバリア・クロカワエを室温で1日以上乾燥し、得られた乾燥物を粉砕して、粉末にした。
乾燥粉末1gを、表1の抽出条件で抽出して抽出処理物を得た。得られた抽出処理物を、表1の条件で遠心分離し、採取した上清を乾燥、秤量した後、抽出物が10mg/mlの濃度になるように表1の溶解液に溶かし、試料とした。
非特許文献1に従い、組換え型ヒトレニンを作成した。
組換え型ヒトキマーゼ、ウサギ肺由来アンジオテンシン変換酵素は、シグマ社(セントルイス、米国)から購入した。レニン用基質及びキマーゼ用蛍光消光基質の構造は、2−メチルアミノベンゾイル(Nma)−イソロイシン(Ile)−ヒスチチン(His)−プロリン(Pro)−フェニルアラニン(Phe)−ヒスチジン(His)−ロイシン(Leu)−バリン(Val)−イソロイシン(Ile)−ヒスチジン(His)−トレオニン(Thr)−[Nε−(2, 4−ジニトロフェニル)−リシル][Lys(Dnp)]−[D−アルギニン(Arg)]−[D−アルギニン(Arg)]−アミド(NH2)であり、アンジオテンシン変換酵素用蛍光消光基質の構造は、2−メチルアミノベンゾイル(Nma)−フェニルアラニン(Phe)−ヒスチジン(His)−[Nε−(2, 4−ジニトロフェニル)−リシル][Lys(Dnp)]である。
蛍光消光基質の分解は、蛍光分光光度計(ダブルモノクロメーター式SAFIRE−NAMY、テカンジャパン株式会社)を用いて計測した。反応溶液は、39μLの50mMリン酸緩衝液(pH6.5)、0.1M NaCl、0.02% NaN3、0.02% ツイーン20、1μLの1mMの蛍光消光基質ジメチルスルフォキシド溶液、5μLの組換え型ヒトレニン、および5μLの阻害剤溶液の計50μLの系で反応した。反応溶液を37℃で30分間保温したのち、0.2mlの0.1Mトリエタノールアミン(pH9.5)を添加し、反応を停止した。その後、励起波長340nmおよび蛍光波長440nmで蛍光強度を測定した。
蛍光消光基質の分解は、蛍光分光光度計ダブルモノクロメーター式SAFIRE−NAMY、テカンジャパン株式会社)を用いて計測した。反応溶液は、39μLの0.1M グリシン−HCl, pH 9.0, 0.1M NaCl, 0.02% Triton X−100, 0.02% NaN3、1μLの1mMの蛍光消光基質ジメチルスルフォキシド溶液、5μLの組換え型ヒトキマーゼ、および5μLの阻害剤溶液の計50μLの系で反応した。反応溶液を37℃で30分間保温したのち、0.2mlの0.1Mホウ酸ナトリウム(pH10.5)を添加し、反応を停止した。その後、励起波長340nmおよび蛍光波長440nmで蛍光強度を測定した。
蛍光消光基質の分解は、蛍光分光光度計を用いて計測した。反応溶液は、39μLの0.1M HEPES−HCl、pH7.5、0.3M NaCl、0.01% Triton X−100、0.02% NaN3、1μLの1mMの蛍光消光基質ジメチルスルフォキシド溶液、5μLの組換え型ヒトキマーゼ、および5μLの阻害剤溶液の計50μLの系で反応した。反応溶液を37℃で30分間保温したのち、0.2mlの0.1M ホウ酸ナトリウム(pH10.5)を添加し、反応を停止した。その後、励起波長340nmおよび蛍光波長440nmで蛍光強度を測定した。結果を表2に示す。
スルカリア・スルカタ及びロバリア・クロカワエの乾燥物をハサミで各片1cm2以下に細かくした材料1gに水25gを加えて、115℃、30分間オートクレーブを行った。オートクレーブした材料を10,000×g、20分間遠心分離し、上清を回収して抽出液とした。抽出液を凍結乾燥し乾燥抽出物とした。乾燥抽出物を1〜5mg/mlになるように水に溶解し、動物実験用の試料とした。
試験中SHRの一般状態(外観、行動、呼吸等)は、対照群と有意差は認められなかった。血圧に関しては、全ての試料投与群が対照群に比べ有意に低下が認められた。
すなわち、スルカリア・スルカタ由来の試料投与群4時間後(94±2%、平均値±標準誤差)及び、ロバリア・クロカワエ由来の試料投与群6時間後(94±1%、平均値±標準誤差)が共に、対照群6時間後(コントロール、102±2%、平均値±標準誤差)に比べ有意に低下が認められた(図1及び2参照)。
血圧の実測値の平均値は、スルカリア・スルカタ抽出液投与群4時間後(201±3mmHg、平均値±標準誤差)、対照群4時間後(211±3mmHg、平均値±標準誤差)、ロバリア・クロカワエ由来の試料投与群6時間後(199±6mmHg、平均値±標準誤差)、対照群6時間後(212±3mmHg、平均値±標準誤差)であった 以上の結果から、試料が血圧降下作用を持つことが確認された。
Claims (10)
- スルカリア・スルカタ又はロバリア・クロカワエ、又はスルカリア・スルカタの抽出物
又はロバリア・クロカワエの抽出物を含有する、レニン阻害剤。 - 前記抽出物が、メタノール抽出物、エタノール抽出物又は水抽出物である、請求項1に
記載のレニン阻害剤。 - スルカリア・スルカタ又はロバリア・クロカワエ、又はスルカリア・スルカタの抽出物
又はロバリア・クロカワエの抽出物を含有する、キマーゼ阻害剤。 - 前記抽出物が、メタノール抽出物、エタノール抽出物又は水抽出物である、請求項3に
記載のキマーゼ阻害剤。 - スルカリア・スルカタ又はロバリア・クロカワエ、又はスルカリア・スルカタの抽出物
又はロバリア・クロカワエの抽出物を含有する、降圧剤。 - 前記抽出物が、メタノール抽出物、エタノール抽出物又は水抽出物である、請求項5に
記載の降圧剤。 - スルカリア・スルカタの抽出物又はロバリア・クロカワエの抽出物を含有する、レニン阻害用食品。
- スルカリア・スルカタの抽出物又はロバリア・クロカワエの抽出物が、メタノール抽出物、エタノール抽出物又は水抽出物である、請求項7に記載のレニン阻害用食品。
- スルカリア・スルカタの抽出物又はロバリア・クロカワエの抽出物を含有する、キマーゼ阻害用食品。
- スルカリア・スルカタの抽出物又はロバリア・クロカワエの抽出物が、メタノール抽出物、エタノール抽出物又は水抽出物である、請求項9に記載のキマーゼ阻害用食品。
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