JP6280578B2 - 新規のアレルゲン - Google Patents
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Description
1997)。このようなアレルゲンとしては、イネ科植物の産物、木、草類、動物の鱗屑、
昆虫、食物、薬物および化学物質が挙げられる。アトピー性アレルギーに関与する抗体は、主として免疫グロブリンEアイソタイプ(IgE)に属する。IgEは、特異的な高親和性受容体FcεRIを介して好塩基球、肥満細胞および樹状細胞に結合する。アレルゲンに曝露されると、細胞表面にアレルゲン特異的なIgE抗体と架橋を形成し、それによりヒスタミンやロイコトリエンなどの炎症性メディエータの放出が起こり、結果としてアレルギーの生理学的徴候が生じる(Akdis 2006)。
くの場合、それにより過敏症の診断を改善することができる(Stumvoll et al. 2003)。またCRDの使用は、最適な免疫療法における処置の選択にも役立つことが示唆されている(Valenta et al. 2007)。さらに個々のアレルゲンは、抽出物にアレルゲン構成要素
を加えることによって抽出物の診断感度を高めるのに用いられることもある。結論付けると、各アレルゲン源中の全ての重要なアレルゲンタンパク質を同定して特徴付けることは、上記の理由から非常に重要である。
。一定の免疫療法のさらなる開発は、未精製の天然抽出物の代わりに、1種または数種の精製アレルゲンタンパク質を使用することである。このような免疫療法は、イネ科植物の花粉アレルギー患者には成功しており(Jutel et al. 2005)、さらに動物の鱗屑に対す
るアレルギーも治療することが示唆されている(Gronlund et al. 2009)。
ることができる(Kim et al. 2005)。ある研究では、ウマ鱗屑に対するIgE感作は、
喘息を発祥させる高い危険と関連することが示された(Ronmark et al. 2003)。
保存されたタンパク質であり、他の哺乳動物アルブミンに対して広範な交差反応性を示す(Goubran Botros et al. 1996)。Equc4/5は、最初に精製され、ウマ鱗屑におけるIgE結合タンパク質として報告されたものであるが(Goubran Botros et al. 1998; Goubran Botros et al. 2001)、ウマの汗のラセリン(latherin)と同定されたのは後になってからである(McDonald et al. 2009)。Equc1は、既知のウマアレルゲンのなかでも最も重要なものと言われており(Dandeu et al. 1993)、組換えタンパク質のIgE抗体認識は、研究対象のウマアレルギーの被験者の76%で観察されている(Saarelainen et al. 2008)。精製した天然アレルゲンを用いた別の研究では、ウマアレルギー患
者のうち33%しかEquc2に感作されておらず、Equc4/5には23%しか感作されていなかった(Goubran Botros et al. 1998)。いくつかの研究で、ウマ血清アルブミンへのIgE結合の頻度を検討したところ、ウマアレルギーの被験者の最大40%において反応性が認められた(Spitzauer et al. 1993; Cabanas et al. 2000)。しかしながら、血清アルブミンに感作すると、それに伴い他のアレルゲン構成要素に対するIgE抗体がより高濃度になることが多いことから、その特異的な臨床的関連性は不明確である。
善された非アナフィラキシー性を有する純粋なアレルゲンタンパク質またはフラグメントおよびそれらの変異体も使用される可能性がある(Valenta et al. 1999)(Cromwell et
al. 2006)(Saarne et al. 2005);(Jutel et al. 2005);(Cromwell et al. 2006)。
ような変異体およびフラグメントは、このような抗体と少なくとも約50%まで交差反応する。このような変異体およびフラグメントとしては、例えば、同じ種由来の関連アレルゲンが挙げられる。以下で説明されるその他の本発明の形態においても、用語「Equc15k」は、便宜上、このようなそれらの変異体およびフラグメントも含むものとして用いられる。
さらなる形態において、本発明は、Equc15kで「スパイクされた」アレルゲン組成物に関する。このようなアレルゲン組成物は、Equc15k含量がゼロか低いアレルゲン抽出物または精製もしくは組換えアレルゲン構成要素の混合物であってもよく、ここでEquc15kは、自身のIgEが組成物中の他のアレルゲン構成要素と結合しないか、または不十分にしか結合しないと予想される患者由来のIgEと結合させるために添加される。またこの本発明の形態は、このような組成物を生産する方法にも関し、本方法は、例えばアレルゲン抽出物などのアレルゲン組成物(任意に他の構成要素でスパイクされていてもよい)、または、精製した天然または組換えアレルゲン構成要素の混合物にEquc15kを添加する工程を含む。
上述した形態において、野生型Equc15k分子は、上述したように、以下で定義されるような、野生型タンパク質と共通の抗体に対するエピトープを有するEquc15kの天然または人工のフラグメントまたは変異体で置き換えることができる。
al. 2007)などの免疫療法におけるEquc15kの使用にも関する。この形態の一実
施態様において、Equc15kは、その天然の形態で用いてもよいし、または、天然分子と類似した生化学的および免疫学的な特性を示す組換えの形態で用いてもよい。その他の実施態様において、Equc15kは、治療された個体においてそのIgE抗体結合能力を排除(abrogate)するかまたは弱める(attenuate)ために、同時に好ましくはIg
G反応を惹起できるようにするために化学的または遺伝学的に生成した改変された形態で用いてもよい。改変例としては、これらに限定されないが、分子の断片化、トランケーション、タンデム化もしくは凝集、内部セグメントの欠失、アミノ酸残基の置換、他の高分
子構造または他方の低分子量化合物へのジスルフィド架橋または結合を壊すことによるドメインの再構成もしくは少なくとも部分的な三次構造の破壊が挙げられる。この形態のさらにその他の実施態様において、改変されたEquc15kとして、無傷の分子と比較して低いIgE結合活性を示すEquc15kの個々の10kDaおよび/または5kDaのサブユニットが用いられる。
定義
ここで述べられるアレルギーを起こすウマタンパク質であるEquc15kは、セクレトグロビンタンパク質ファミリーに属しており、具体的には2個のヘテロ二量体サブユニットによって形成された四量体タンパク質を含む1つのサブファミリーに属する。ヘテロ二量体は、ジスルフィド架橋によって一緒に連結した異なる遺伝子から誘導された2つの鎖からなる(Klug et al. 2000)。ここで述べられるウマセクレトグロビンは、本明細書においてEquc15kと称される15kDaのヘテロ二量体であって、これは、それぞれ5±2kDaのサブユニットと10±2kDaのサブユニットとからなり、これらはそれぞれ、本発明の目的において5および10kDaサブユニットと称される。分子量の割り当ては、以下の実施例4で説明されてるSDS−PAGEで観察されたそれらの見かけの分子量に従う。当然ながら見かけの分子量は、例えば電気泳動による分離の媒体およびそれらの濃度、用いられる直線的または濃度勾配のある緩衝液などの分離条件に応じて変動すると予想される。また10kDaサブユニットにはN−グリコシル化部位が含まれるが、グリカン構造にこのような部位が含まれると、見かけの分子量に影響を与える可能性がある。
et al. 2003; Ebo et al. 2004)などの細胞活性化分析によって決定した場合に、生物
学的なアレルゲン活性がないか、または極めて低い生物学的なアレルゲン活性しか示さない改変されたEquc15kまたはEquc15kの変異体もしくはフラグメントであると解釈されるべきである。
以下の実施例は、ウマからのセクレトグロビンの単離および使用によって本発明を説明するものである。これらの実施例は単なる説明であり、本発明を制限するものと解釈すべきではなく、本発明は添付の請求項の範囲によって定義される。
Equc1、Equc2およびEquc4/5を精製するための出発原料としてウマ鱗屑を用い、一方でウマ血清からEquc3を精製した。
を抽出し、遠心分離で透明にし、0.45μmの混合型のセルロースエステルフィルター(ミリポア(Millipore),米国マサチューセッツ州ビレリカ)を通過させてろ過した。
3種全てのウマ鱗屑アレルゲンにとって第一の精製工程として、透明化した抽出物を、サ
イズ排除クロマトグラフィー(SEC)のためにスーパーデックス(SuperdexTM)75カラム(XK26/100,Vt=505mL,GEヘルスケア・ライフサイエンス(GE Healthcare Life Sciences)、スウェーデン国ウプサラ)に適用し、MBSを用いて流速
2mL/分で溶出した。
Equc1を精製するために、図1AにおけるピークAを2MのNH4SO4に調整し、20mMトリス(pH8.0)中の2MのNH4SO4で平衡化したフェニルセファロース(Phenyl SepharoseTM)HPカラム(HR10/10,Vt=9.0mL,GEヘルスケアライフサイエンス)に適用した。2M〜0MのNH4SO4の直線的なNH4SO4濃度勾配で溶出させた。勾配の中央でEquc1を含む2つのピーク(図1BにおけるピークCおよびD)が溶出した。20mMのMOPS(pH7.6)、0.5MのNaClで平衡化したセファデックス(SephadexTM)G25ファインカラム(XK16/20,Vt=34mL,GEヘルスケアライフサイエンス)で各ピークを脱塩した後、それぞれのnEquc1調製物をドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動(SDS−PAGE)で、サンプルと100mMのβ−メルカプトエタノールを含むNuPAGE LDSサンプル緩衝液(インビトロジェン)とを1:3で混合することによって製造
された還元サンプルのNuPAGE MES緩衝液系(10%NuPAGEゲル,インビ
トロジェン(Invitrogen),米国カリフォルニア州カールスバッド)を用いて処理した。見かけの分子量の指標として、マーク12(Mark12TM)標準(インビトロジェン)を用いた。いずれのnEquc1調製物もSDS−PAGEでの判断から純粋であることがわかった(図1E)。
固相に固定した(Marknell DeWitt et al. 2002)。
Equc2
Equc2を精製するために、SECからの第二のピーク(図1AにおけるピークB)を1MのNH4SO4に調整し、疎水性相互作用クロマトグラフィー(HIC)において20mMトリス(pH8.0)中の1MのNH4SO4で平衡化したフェニルセファロースTMHPカラム(HR10/10,Vt=9.0mL,GEヘルスケアライフサイエンス)で処理した。同じ緩衝液中の1M〜0MのNH4SO4の直線的なNH4SO4濃度勾配で溶出させた。分画(図1CにおけるピークE)を通過したフロー中にEquc2が含まれており、これをプールして、20mMのビストリスプロパン(pH8.5)で平衡化したセファデックスTMG25ファインカラム(XK26/20,Vt=90mL,GEヘルスケアライフサイエンス)で脱塩した。脱塩したEquc2プールを最終的に20mMのビストリスプロパン(pH8.5)で平衡化した陰イオン交換カラムソース(SourceTM)15Q(HR16/10,Vt=9mL,GEヘルスケアライフサイエンス)に適用した。同じ緩衝液中の0〜0.40Mの直線的なNaCl濃度勾配で溶出させたところ、タンパク質は3つのピークに分解し、これらはいずれも、SDS−PAGE解析で純粋な17kDaのバンドを示した。最も大きい2つのピークをN末端の配列解析(プロサイス(ProciseTM)LC452、アプライド・バイオシステムズ(Applied Biosystems),米国カリフォルニア州フォスターシティー)で解析し、これらはいずれも配列DQDPQSEDTYを有しており、これらはEquc2.0201と同定された(図1DピークHおよびI)。説明されている通りに、IgE結合反応性を評価するために、これらのピークをプールし、イムノCAPTM固相に固定した(Marknell DeWitt et al. 2002)。
SECからの第二のピーク(図1AのピークB)を用いてEquc4/5の精製を行った。このプールを1MのNH4SO4に調整し、疎水性相互作用クロマトグラフィー(HIC)において20mMトリス(pH8.0)中の1MのNH4SO4で平衡化したフェニルセファロースTMHPカラム(HR10/10,Vt=9.0mL,GEヘルスケアライフサイエンス)で処理した。同じ緩衝液中の1M〜0MのNH4SO4の直線的なNH4SO4濃度勾配で溶出させた。Equc4/5タンパク質は、勾配の中央で2つの別個のピーク(図1CにおけるピークFおよびG)に溶出した。第一のピークのSDS−PAGE解析から14kDaのバンドとして移動するタンパク質が明らかになり、第二のピークは19kDaのバンドを含むことが明らかになった。その後、20mMのビストリスプロパン(pH8.5)で平衡化したセファデックスTMG25ファインカラム(XK26/20,Vt=90mL,GEヘルスケアライフサイエンス)で脱塩した。いずれのタンパク質もSDS−PAGEにより純粋であることがわかった(図1E)。これら2種の調製物はいずれもN末端配列VGPLLGPSDAを示し、これは、ウマラセリンまたはEquc4/5と同定された。
Equc3
天然Equc3を、実質的に説明されている通りに、ブルー・セファロース(Blue Sepharose)FF、(GEヘルスケアライフサイエンス)を用いたアフィニティークロマトグラフィー、陰イオン交換クロマトグラフィー(AIEC)およびSECによって、ウマ血清から精製した(van Eijk et al. 1999)。
A型およびB型と名付けられたEquc1の2つの形態のIgE結合活性を、(社内の血清コレクションから得られた)ウマ鱗屑に感作された血清1セットを用いて評価した。図2Aで示されるように、Equc1の2つの形態は、同等のIgE結合活性を示した。従って以下の分析にはnEquc1Aで得られた値のみを用いた。ウマ鱗屑反応性血清の類似のセットを用いて、Equc4/5の2つの形態へのIgE抗体結合を比較したところ、図2Bで示されるように、それらは極めて類似していることがわかった。
前もって特徴付けられているウマ鱗屑アレルゲンを精製するプロセスの間に、これまでに知られていたウマアレルゲン以外のタンパク質を含む数種の分画が同定された。上記の実施例2で同定された血清を用いてIgE結合活性を解析するために特に興味深い3種の分画を選択した。分画Aには、矢印で示された(図3A)Equc2の陰イオン交換による精製工程から得られた10kDaのバンド(還元SDS−PAGE)が含まれていた。それぞれ13kDaおよび10kDaのバンド(還元SDS−PAGE)を含む分画BおよびCをEquc1のHIC精製工程から得て、これは図3Bにおいて矢印で示した。説明されている通りに、実験用イムノCAPTM(ファディア)試験を調製し(Marknell DeWitt et al. 2002)、これを血清解析に用いた。
分画Cからのウマ鱗屑タンパク質の精製
分画Cに存在する10kDaのタンパク質をより高度に標的化した方法で精製するために、ウマ鱗屑抽出物を実施例1で説明されているようにしてSECで処理した。図で指定された通りに(図4AにおけるピークA)、SDS−PAGE解析に従ってEquc1を含むピークをプールした。ピークAの右側部分だけに10kDaバンドが含まれており、これをプールした。実施例1においてEquc1に関して説明されている通りに、このプールを2MのNH4SO4に調整し、HICで処理した(図4B)。図4BにおけるピークJを20mMのトリス(pH8.0)で1:3に希釈し、同じ緩衝液で平衡化したソースTM15Qカラム(PE4.6/100,Vt=1.7mL;GEヘルスケアライフサイエンス)に適用した。0〜0.4MのNaClの直線的な濃度勾配で溶出させたところ、濃度勾配の中央において優勢なピーク、それに続いてより小さいピークが得られた(図4CにおけるピークKおよびL)。実施例1で説明されているようにNuPAGE ME
S緩衝液系を用いてSDS−PAGE解析を行ったが、ここでサンプルは、それぞれ還元および非還元条件に応じた4%β−メルカプトエタノール含有または非含有のNuPAGE LDS緩衝液で1:3に希釈することによってサンプルを調製した。両方のピークの
SDS−PAGE解析(図4D)から、非還元条件下でおよそ15kDaのバンドが出現した。サンプルを還元した際に、15kDaのバンドが消失したが、同時におよそ5および10kDaの2つのバンドが現れたことから、非還元の15kDaのバンドは、1個またはそれより多くのジスルフィド架橋で互いに連結した5kDaおよび10kDaのバンドを形成するポリペプチドで構成されていることが示唆される。両方のピークは同じタンパク質を含むようにみえるが、大きいピーク(K)のみをさらなる生化学的解析で処理した。IgE結合を研究ために、RPC精製工程でサンプルを0.065%TFAの水溶液で平衡化したソースTM5RPCカラム(ST2.1/150,Vt=0.52mL;GEヘルスケアライフサイエンス)に適用することにより精製を行った。0.05%TFAを含む90%アセトニトリルからなる緩衝液Bの0〜70%の直線的な濃度勾配で溶出させた。濃度勾配の終わり付近でタンパク質が単一のピークで溶出した(図4EにおけるピークM)。
SDS−PAGEゲルから切り出し抽出した還元型5kDaおよび10kDaのタンパク質バンドをN末端の配列解析によって解析した。5kDaのバンドの解析から、アミノ
酸配列ATxPAVATDIASFFLLPDSL(x:未解析の残基)が明らかになり、これは、「LppABに類似」と表示されたエクウス・カバルス(Equus caballus)の
予測配列(Genbank登録番号XP_001502544)(配列番号1)の残基22〜41とマッチした。10kDaのバンドの解析から、配列GSGxQLLEDVVEKTITAELS(x:未解析の残基)が明らかになり、これは、「リポフィリンCL2に類似」と表示されたエクウス・カバルス由来の予測配列(GenBank登録番号XP_001494564)(配列番号2)の残基19〜38とマッチした。
れによりヘテロ二量体タンパク質が形成されることを示す証拠となる。従って、この解析は、配列番号4をコードする遺伝子を、これまで知られていなかったヘテロ二量体のセクレトグロビンタンパク質を共に構成する配列番号5をコードする異なる遺伝子と結びつけるものである。
IgEのタンパク質への反応性がEquc15kのどのサブユニットに対するものなのかを決定するために、還元および非還元条件の両方を用いた免疫ブロット解析を行った。
体積)NaCl、0.3%(質量/体積)デキストランT10)を用いてタンパク質ブロットを室温で1時間ブロッキングし、それぞれブロッキング緩衝液で1:4.8および1:13.5に希釈した患者3および12の血清と共に一晩インキュベートした。0.5%(体積/体積)トゥイーン−20を含む0.15MのNaCl溶液で洗浄した後に、メンブレンをブロッキング緩衝液中でHRPで標識した抗ヒトIgE抗体と共に3時間インキュベートし、洗浄した後、結合したIgEを、ECLアドバンス(ECL Advance)ウェス
タンブロッティング検出キット(GEヘルスケアライフサイエンス)およびLAS4000ミニCCDカメラ(フジフィルム(Fujifilm),日本国東京)を用いて蛍光分析によって検出した。
組換えEquc15kのクローニングおよび精製
5kDaおよび10kDaサブユニットのアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列と、(Gly−Gly−Gly−Gly−Ser)を3回含むリンカーペプチドをコードする配列とを組み合わせることによってEquc15k一本鎖の合成遺伝子を設計した。この合成遺伝子全長を、固定した金属イオンアフィニティークロマトグラフィー(IMAC)によるタンパク質精製ができるようにC末端にヘキサヒスチジンタグを添加したベクターpET23a(+)(ノバジェン(Novagen),米国ウィスコンシン州マディソン)のNdeIおよびXhoI部位にクローニングした。
質転換し、3リットルのバイオリアクター(ベラーチ・バイオテクニーク(Belach Bioteknik),スウェーデン国ソルナ)を用いて組換えEquc15k一本鎖タンパク質を生産した。
0kPaで通過させて溶解させた。懸濁液を遠心分離した後、ペレット化した封入体を6M塩酸グアニジン、20mMトリス(pH8.0)、0.5MのNaCl、5mMのイミダゾールに溶解させ、0.45μmの混合型のセルロースフィルター(ミリポア)を通過させてろ過した。ろ過した上清をNiSO4を充填したキレート化セファロースFFカラム(GEヘルスケアライフサイエンス)に入れた。6M尿素を含む20mMのトリス−HCl(pH8.0)、0.15MのNaCl、20mMのイミダゾールを用いてカラムを洗浄し、続いて同じ緩衝液中の6M〜2M尿素の直線的な濃度勾配でその場で復元した。復元させた後、同じ緩衝液中の20〜500mMのイミダゾールの直線的な濃度勾配によって組換えタンパク質を溶出させた。QセファロースTMFFカラム(GEヘルスケアライフサイエンス)を用いた20mMのトリス−HCl(pH8.0)でのAIECによってさらなる組換えタンパク質の精製を行った。0〜0.5MのNaClの直線的な濃度勾配を用いてタンパク質を溶出させ、SDS−PAGEの結果に従って分画をプールした。280nmにおける吸光度から1mg/mLあたり0.44の吸光係数により計算して最終的な調製物のタンパク質濃度を決定した。
組換えEquc15kを実験用イムノCAPTMに固定し、説明されている通りに、36人のウマ鱗屑に感作された被験者の血清に対するIgEの反応性を決定した(Marknell
DeWitt et al. 2002)。
この研究には、スペイン(n=20)およびスウェーデン(n=5)からの25人のウマアレルギーの被験者の血清が用いられた。全ての患者は、喘息、鼻結膜炎およびじんましんなどの症状、ならびにウマ鱗屑抽出物に対する皮膚プリックテスト陽性を有するウマアレルギーという医者の診断を受けていた。サンプルおよびデータが寄託されているバイオバンクに寄与する各センターにおける地域倫理委員会の承認の元に、全てのサンプルおよび臨床データを回収した。
(anaph)である。
Equc15kはセクレトグロビンタンパク質ファミリーに属することから、同じタンパク質ファミリーに属する主要なネコアレルゲンであるFeld1との免疫学的な関係を調査した。36人のウマ鱗屑に感作された被験者(実施例7で説明した25人のウマアレルギー患者を含む)の血清におけるFeld1に対するIgE結合のレベルを評価した。組換えEquc15に対するIgEレベルとrFeld1に対するIgEレベルとの間に有意な相関(r=0.36)は観察されず(図9)、これは、Equc15kに対するIgE抗体反応は、主としてEquc15kおよびFeld1間の交差反応性の結果によるものではない(逆もまた同様)ことを示唆している。
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Claims (14)
- 単離されたウマアレルゲンであって、非還元条件下で15kDaの分子量を有するセクレトグロビンであり、一緒に連結した、アミノ酸配列
ATCPAVATDIASFFLLPDSLFKLQLIKYQAPPEAKDATM QVKQCINEISAGDRYIITETLGKIVLQCGA(配列番号4)
を含み、5kDaの分子量を有する第一のペプチド鎖と、
アミノ酸配列
GSGCQLLEDVVEKTITAELSPAEYVEAVQEFIPDEATEK
AAIQLKQCYLKQSNETLNDFRTMMNSMYNSAYCALF(配列番号5)
を含み、10kDaの分子量を有する第二のペプチド鎖と
を含むウマセクレトグロビンである、ウマアレルゲン、
または前記セクレトグロビンの変異体およびフラグメントであって、該15kDaのウマセクレトグロビンに感作した患者由来のIgE抗体の結合能を有し、前記セクレトグロビンと少なくとも90%の配列同一性を有する変異体およびフラグメントである、ウマアレルゲン。 - 非還元条件下で15kDaの分子量を有するセクレトグロビンである単離されたウマアレルゲンであって、
アミノ酸配列
ATCPAVATDIASFFLLPDSLFKLQLIKYQAPPEAKDATM QVKQCINEISAGDRYIITETLGKIVLQCGA(配列番号4)
を含み、5kDaの分子量を有する第一のペプチド鎖が、
アミノ酸配列
GSGCQLLEDVVEKTITAELSPAEYVEAVQEFIPDEATEK
AAIQLKQCYLKQSNETLNDFRTMMNSMYNSAYCALF(配列番号5)
を含み、10kDaの分子量を有する第二のペプチド鎖と連結したもの
を含む、単離されたウマアレルゲン。 - ウマから精製された、または、組換え生産された、請求項1または2に記載のウマアレルゲン。
- 請求項1から3のいずれか一項に記載のウマアレルゲンをコードする単離された核酸分子。
- 請求項4に記載の核酸分子を含むベクター。
- 請求項5に記載のベクターを含む宿主細胞。
- インビトロでの1型アレルギーの診断に使用するための請求項1から3のいずれか一項に記載のウマアレルゲン。
- インビトロでの1型アレルギーの診断のための診断剤組成物を製造するための、請求項1から3のいずれか一項に記載のウマアレルゲンの使用。
- アレルゲン抽出物および/または少なくとも1種の精製したアレルゲン構成要素を含む組成物に、請求項1から3のいずれか一項に記載のウマアレルゲンを添加する工程を含む、アレルゲン組成物の製造方法。
- 請求項1から3のいずれか一項に記載のウマアレルゲン、およびアレルゲン抽出物および/または少なくとも1種の精製したアレルゲン構成要素を含む組成物を含む、アレルゲン組成物。
- インビトロでの1型アレルギーの検出を補助する方法であって、該方法は:
1型アレルギーを有する疑いのある患者からの免疫グロブリンを含む体液サンプルを、請求項1から3のいずれか一項に記載のウマアレルゲンと接触させる工程、および、
サンプル中の、前記ウマアレルゲンに特異的に結合するIgE抗体の存在を検出する工程、
を含み、ここで、このような前記ウマアレルゲンに特異的に結合するIgE抗体が存在することは、1型アレルギーであることを示す、上記方法。 - 請求項1から3のいずれか一項に記載のウマアレルゲンを含む、請求項11に記載の方法を行うための診断キット。
- 1型アレルギーの予防的または治療的処置に使用するための、請求項1から3のいずれか一項に記載のウマアレルゲン。
- 1型アレルギーの予防的または治療的処置のための治療用組成物を製造するための、請求項1から3のいずれか一項に記載のウマアレルゲンの使用。
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