JP6257520B2 - 人工多能性幹細胞または分化細胞を作製するための自動化されたシステム - Google Patents
人工多能性幹細胞または分化細胞を作製するための自動化されたシステム Download PDFInfo
- Publication number
- JP6257520B2 JP6257520B2 JP2014544949A JP2014544949A JP6257520B2 JP 6257520 B2 JP6257520 B2 JP 6257520B2 JP 2014544949 A JP2014544949 A JP 2014544949A JP 2014544949 A JP2014544949 A JP 2014544949A JP 6257520 B2 JP6257520 B2 JP 6257520B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cells
- cell
- automated
- unit
- automated system
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 title claims description 519
- 210000004263 induced pluripotent stem cell Anatomy 0.000 title claims description 82
- 230000008672 reprogramming Effects 0.000 claims description 97
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 claims description 76
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 47
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 claims description 46
- 238000007747 plating Methods 0.000 claims description 34
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 33
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 claims description 32
- 230000006698 induction Effects 0.000 claims description 28
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 28
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims description 27
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims description 26
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 26
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 claims description 24
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 22
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 19
- 238000003860 storage Methods 0.000 claims description 18
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims description 14
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 claims description 13
- 241000711408 Murine respirovirus Species 0.000 claims description 12
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 10
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 claims description 10
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 claims description 8
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 8
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 8
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 8
- 241000204003 Mycoplasmatales Species 0.000 claims description 7
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 claims description 7
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 claims description 4
- 238000010257 thawing Methods 0.000 claims description 4
- 238000013354 cell banking Methods 0.000 claims description 3
- 238000012795 verification Methods 0.000 claims description 3
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 claims description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims 2
- 238000000034 method Methods 0.000 description 88
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 58
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 58
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 53
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 47
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 47
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 42
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 40
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 35
- QHGVXILFMXYDRS-UHFFFAOYSA-N pyraclofos Chemical compound C1=C(OP(=O)(OCC)SCCC)C=NN1C1=CC=C(Cl)C=C1 QHGVXILFMXYDRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 33
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 31
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 26
- 230000008569 process Effects 0.000 description 26
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 22
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 20
- 210000002242 embryoid body Anatomy 0.000 description 19
- 230000008859 change Effects 0.000 description 18
- 210000001654 germ layer Anatomy 0.000 description 18
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 18
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 18
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 17
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 16
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 14
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 14
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 13
- 239000013610 patient sample Substances 0.000 description 13
- 102100022749 Aminopeptidase N Human genes 0.000 description 12
- 101000757160 Homo sapiens Aminopeptidase N Proteins 0.000 description 12
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 12
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 12
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 12
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 12
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 11
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 10
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 10
- 238000011160 research Methods 0.000 description 10
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 10
- 102100035423 POU domain, class 5, transcription factor 1 Human genes 0.000 description 9
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 9
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 9
- 210000001778 pluripotent stem cell Anatomy 0.000 description 9
- 101710126211 POU domain, class 5, transcription factor 1 Proteins 0.000 description 8
- 101100247004 Rattus norvegicus Qsox1 gene Proteins 0.000 description 8
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 8
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 8
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 8
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 7
- YMHOBZXQZVXHBM-UHFFFAOYSA-N 2,5-dimethoxy-4-bromophenethylamine Chemical compound COC1=CC(CCN)=C(OC)C=C1Br YMHOBZXQZVXHBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 108700021430 Kruppel-Like Factor 4 Proteins 0.000 description 7
- -1 NANOG Proteins 0.000 description 7
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 7
- 241000545067 Venus Species 0.000 description 7
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 7
- 210000002459 blastocyst Anatomy 0.000 description 7
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 7
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 7
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 7
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 7
- 210000003716 mesoderm Anatomy 0.000 description 7
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 7
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 6
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 6
- 210000001900 endoderm Anatomy 0.000 description 6
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 6
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 6
- 238000010191 image analysis Methods 0.000 description 6
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 6
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 6
- 210000002894 multi-fate stem cell Anatomy 0.000 description 6
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 6
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 5
- 101001067186 Mus musculus Plexin-A2 Proteins 0.000 description 5
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 5
- 210000004504 adult stem cell Anatomy 0.000 description 5
- 238000003491 array Methods 0.000 description 5
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 5
- 210000004413 cardiac myocyte Anatomy 0.000 description 5
- 210000001612 chondrocyte Anatomy 0.000 description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 description 5
- 210000003981 ectoderm Anatomy 0.000 description 5
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 5
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 5
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 5
- 101150111214 lin-28 gene Proteins 0.000 description 5
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 5
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 5
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 5
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101100239628 Danio rerio myca gene Proteins 0.000 description 4
- 101000687905 Homo sapiens Transcription factor SOX-2 Proteins 0.000 description 4
- 101000976622 Homo sapiens Zinc finger protein 42 homolog Proteins 0.000 description 4
- 102100024270 Transcription factor SOX-2 Human genes 0.000 description 4
- 102100023550 Zinc finger protein 42 homolog Human genes 0.000 description 4
- 206010002026 amyotrophic lateral sclerosis Diseases 0.000 description 4
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 4
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 4
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 4
- 239000012595 freezing medium Substances 0.000 description 4
- 230000006870 function Effects 0.000 description 4
- 238000003633 gene expression assay Methods 0.000 description 4
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 4
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 4
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 4
- 150000002484 inorganic compounds Chemical class 0.000 description 4
- 229910010272 inorganic material Inorganic materials 0.000 description 4
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 4
- 210000001178 neural stem cell Anatomy 0.000 description 4
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 4
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 4
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 4
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 4
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 4
- 210000001988 somatic stem cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 4
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 4
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 4
- ZAYHVCMSTBRABG-JXOAFFINSA-N 5-methylcytidine Chemical compound O=C1N=C(N)C(C)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 ZAYHVCMSTBRABG-JXOAFFINSA-N 0.000 description 3
- 108010051109 Cell-Penetrating Peptides Proteins 0.000 description 3
- 102000020313 Cell-Penetrating Peptides Human genes 0.000 description 3
- 102000007665 Extracellular Signal-Regulated MAP Kinases Human genes 0.000 description 3
- 108010007457 Extracellular Signal-Regulated MAP Kinases Proteins 0.000 description 3
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 description 3
- 101001139134 Homo sapiens Krueppel-like factor 4 Proteins 0.000 description 3
- 102100020677 Krueppel-like factor 4 Human genes 0.000 description 3
- 108700011259 MicroRNAs Proteins 0.000 description 3
- 102100038895 Myc proto-oncogene protein Human genes 0.000 description 3
- 101710135898 Myc proto-oncogene protein Proteins 0.000 description 3
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101710150448 Transcriptional regulator Myc Proteins 0.000 description 3
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 3
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 3
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 3
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 3
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 3
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 3
- 230000032459 dedifferentiation Effects 0.000 description 3
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 238000007876 drug discovery Methods 0.000 description 3
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 238000010195 expression analysis Methods 0.000 description 3
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 3
- 210000000630 fibrocyte Anatomy 0.000 description 3
- 210000003128 head Anatomy 0.000 description 3
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 3
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 3
- 108010082117 matrigel Proteins 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 238000002493 microarray Methods 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 3
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 3
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 3
- 238000011536 re-plating Methods 0.000 description 3
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 3
- 238000007390 skin biopsy Methods 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 3
- 210000001635 urinary tract Anatomy 0.000 description 3
- LLJYFDRQFPQGNY-QINSGFPZSA-N (z)-5-(4-chlorophenyl)-3-phenylpent-2-enoic acid Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(=C/C(=O)O)\CCC1=CC=C(Cl)C=C1 LLJYFDRQFPQGNY-QINSGFPZSA-N 0.000 description 2
- SXUXMRMBWZCMEN-UHFFFAOYSA-N 2'-O-methyl uridine Natural products COC1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=O)C=C1 SXUXMRMBWZCMEN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GJTBSTBJLVYKAU-XVFCMESISA-N 2-thiouridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=S)NC(=O)C=C1 GJTBSTBJLVYKAU-XVFCMESISA-N 0.000 description 2
- HIJMSZGHKQPPJS-UHFFFAOYSA-N 3-(6-methylpyridin-2-yl)-n-phenyl-4-quinolin-4-ylpyrazole-1-carbothioamide Chemical compound CC1=CC=CC(C=2C(=CN(N=2)C(=S)NC=2C=CC=CC=2)C=2C3=CC=CC=C3N=CC=2)=N1 HIJMSZGHKQPPJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZAYHVCMSTBRABG-UHFFFAOYSA-N 5-Methylcytidine Natural products O=C1N=C(N)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 ZAYHVCMSTBRABG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100030755 5-aminolevulinate synthase, nonspecific, mitochondrial Human genes 0.000 description 2
- OGHAROSJZRTIOK-KQYNXXCUSA-O 7-methylguanosine Chemical compound C1=2N=C(N)NC(=O)C=2[N+](C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OGHAROSJZRTIOK-KQYNXXCUSA-O 0.000 description 2
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 2
- AQGNHMOJWBZFQQ-UHFFFAOYSA-N CT 99021 Chemical compound CC1=CNC(C=2C(=NC(NCCNC=3N=CC(=CC=3)C#N)=NC=2)C=2C(=CC(Cl)=CC=2)Cl)=N1 AQGNHMOJWBZFQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100021429 DNA-directed RNA polymerase II subunit RPB1 Human genes 0.000 description 2
- 201000009051 Embryonal Carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 108700039887 Essential Genes Proteins 0.000 description 2
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 description 2
- 101150055682 HK gene Proteins 0.000 description 2
- 102000003964 Histone deacetylase Human genes 0.000 description 2
- 108090000353 Histone deacetylase Proteins 0.000 description 2
- 101000843649 Homo sapiens 5-aminolevulinate synthase, nonspecific, mitochondrial Proteins 0.000 description 2
- 101000756632 Homo sapiens Actin, cytoplasmic 1 Proteins 0.000 description 2
- 101001106401 Homo sapiens DNA-directed RNA polymerase II subunit RPB1 Proteins 0.000 description 2
- 101000984042 Homo sapiens Protein lin-28 homolog A Proteins 0.000 description 2
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 2
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 2
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 2
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 description 2
- 208000032319 Primary lateral sclerosis Diseases 0.000 description 2
- 102100025460 Protein lin-28 homolog A Human genes 0.000 description 2
- 229930185560 Pseudouridine Natural products 0.000 description 2
- PTJWIQPHWPFNBW-UHFFFAOYSA-N Pseudouridine C Natural products OC1C(O)C(CO)OC1C1=CNC(=O)NC1=O PTJWIQPHWPFNBW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- REFJWTPEDVJJIY-UHFFFAOYSA-N Quercetin Chemical compound C=1C(O)=CC(O)=C(C(C=2O)=O)C=1OC=2C1=CC=C(O)C(O)=C1 REFJWTPEDVJJIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 2
- FHYUGAJXYORMHI-UHFFFAOYSA-N SB 431542 Chemical compound C1=CC(C(=O)N)=CC=C1C1=NC(C=2C=C3OCOC3=CC=2)=C(C=2N=CC=CC=2)N1 FHYUGAJXYORMHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101150086694 SLC22A3 gene Proteins 0.000 description 2
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 description 2
- 206010046298 Upper motor neurone lesion Diseases 0.000 description 2
- 108091007416 X-inactive specific transcript Proteins 0.000 description 2
- 108091035715 XIST (gene) Proteins 0.000 description 2
- BKPRVQDIOGQWTG-ICOOEGOYSA-N [(1s,2r)-2-phenylcyclopropyl]azanium;[(1r,2s)-2-phenylcyclopropyl]azanium;sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O.[NH3+][C@H]1C[C@@H]1C1=CC=CC=C1.[NH3+][C@@H]1C[C@H]1C1=CC=CC=C1 BKPRVQDIOGQWTG-ICOOEGOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- WGDUUQDYDIIBKT-UHFFFAOYSA-N beta-Pseudouridine Natural products OC1OC(CN2C=CC(=O)NC2=O)C(O)C1O WGDUUQDYDIIBKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 2
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 2
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 2
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 2
- 230000002032 cellular defenses Effects 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 2
- FPUGCISOLXNPPC-IOSLPCCCSA-N cordysinin B Chemical compound CO[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 FPUGCISOLXNPPC-IOSLPCCCSA-N 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 238000003066 decision tree Methods 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 2
- 238000012252 genetic analysis Methods 0.000 description 2
- 230000009395 genetic defect Effects 0.000 description 2
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000004989 laser desorption mass spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 201000010901 lateral sclerosis Diseases 0.000 description 2
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 2
- 230000005389 magnetism Effects 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 208000005264 motor neuron disease Diseases 0.000 description 2
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 2
- 210000000663 muscle cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000000107 myocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 229940087824 parnate Drugs 0.000 description 2
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 2
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 2
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 201000008752 progressive muscular atrophy Diseases 0.000 description 2
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 2
- PTJWIQPHWPFNBW-GBNDHIKLSA-N pseudouridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1C1=CNC(=O)NC1=O PTJWIQPHWPFNBW-GBNDHIKLSA-N 0.000 description 2
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 2
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 230000004043 responsiveness Effects 0.000 description 2
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 238000010374 somatic cell nuclear transfer Methods 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 208000002320 spinal muscular atrophy Diseases 0.000 description 2
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 2
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 2
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 2
- IGLYMJRIWWIQQE-QUOODJBBSA-N (1S,2R)-2-phenylcyclopropan-1-amine (1R,2S)-2-phenylcyclopropan-1-amine Chemical compound N[C@H]1C[C@@H]1C1=CC=CC=C1.N[C@@H]1C[C@H]1C1=CC=CC=C1 IGLYMJRIWWIQQE-QUOODJBBSA-N 0.000 description 1
- GRYSXUXXBDSYRT-WOUKDFQISA-N (2r,3r,4r,5r)-2-(hydroxymethyl)-4-methoxy-5-[6-(methylamino)purin-9-yl]oxolan-3-ol Chemical compound C1=NC=2C(NC)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1OC GRYSXUXXBDSYRT-WOUKDFQISA-N 0.000 description 1
- OTFGHFBGGZEXEU-PEBGCTIMSA-N 1-[(2r,3r,4r,5r)-4-hydroxy-5-(hydroxymethyl)-3-methoxyoxolan-2-yl]-3-methylpyrimidine-2,4-dione Chemical compound CO[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)N(C)C(=O)C=C1 OTFGHFBGGZEXEU-PEBGCTIMSA-N 0.000 description 1
- QPHRQMAYYMYWFW-FJGDRVTGSA-N 1-[(2r,3s,4r,5r)-3-fluoro-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]pyrimidine-2,4-dione Chemical compound O[C@]1(F)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 QPHRQMAYYMYWFW-FJGDRVTGSA-N 0.000 description 1
- FPUGCISOLXNPPC-UHFFFAOYSA-N 2'-O-Methyladenosine Natural products COC1C(O)C(CO)OC1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 FPUGCISOLXNPPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RFCQJGFZUQFYRF-UHFFFAOYSA-N 2'-O-Methylcytidine Natural products COC1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)N=C(N)C=C1 RFCQJGFZUQFYRF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVYNGSFVYRPRCG-UHFFFAOYSA-N 2'-O-Methylguanosine Natural products COC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC(N)=NC2=O)=C2N=C1 OVYNGSFVYRPRCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RFCQJGFZUQFYRF-ZOQUXTDFSA-N 2'-O-methylcytidine Chemical compound CO[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)N=C(N)C=C1 RFCQJGFZUQFYRF-ZOQUXTDFSA-N 0.000 description 1
- OVYNGSFVYRPRCG-KQYNXXCUSA-N 2'-O-methylguanosine Chemical compound CO[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(N=C(N)NC2=O)=C2N=C1 OVYNGSFVYRPRCG-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- SXUXMRMBWZCMEN-ZOQUXTDFSA-N 2'-O-methyluridine Chemical compound CO[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 SXUXMRMBWZCMEN-ZOQUXTDFSA-N 0.000 description 1
- MXHRCPNRJAMMIM-BBVRLYRLSA-N 2'-deoxyuridine Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 MXHRCPNRJAMMIM-BBVRLYRLSA-N 0.000 description 1
- UFBJCMHMOXMLKC-UHFFFAOYSA-N 2,4-dinitrophenol Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O UFBJCMHMOXMLKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GZPHSAQLYPIAIN-UHFFFAOYSA-N 3-pyridinecarbonitrile Chemical compound N#CC1=CC=CN=C1 GZPHSAQLYPIAIN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZLOIGESWDJYCTF-UHFFFAOYSA-N 4-Thiouridine Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=S)C=C1 ZLOIGESWDJYCTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZLOIGESWDJYCTF-XVFCMESISA-N 4-thiouridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=S)C=C1 ZLOIGESWDJYCTF-XVFCMESISA-N 0.000 description 1
- IPRQAJTUSRLECG-UHFFFAOYSA-N 5-[6-(dimethylamino)purin-9-yl]-2-(hydroxymethyl)-4-methoxyoxolan-3-ol Chemical compound COC1C(O)C(CO)OC1N1C2=NC=NC(N(C)C)=C2N=C1 IPRQAJTUSRLECG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000022309 Alcoholic Liver disease Diseases 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 101800002011 Amphipathic peptide Proteins 0.000 description 1
- 108020005544 Antisense RNA Proteins 0.000 description 1
- 208000032467 Aplastic anaemia Diseases 0.000 description 1
- 108091023037 Aptamer Proteins 0.000 description 1
- 210000002237 B-cell of pancreatic islet Anatomy 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108060000903 Beta-catenin Proteins 0.000 description 1
- 102000015735 Beta-catenin Human genes 0.000 description 1
- 206010007269 Carcinogenicity Diseases 0.000 description 1
- 206010007559 Cardiac failure congestive Diseases 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 230000004568 DNA-binding Effects 0.000 description 1
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 101150084967 EPCAM gene Proteins 0.000 description 1
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- 102100027286 Fanconi anemia group C protein Human genes 0.000 description 1
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 102000001267 GSK3 Human genes 0.000 description 1
- 108060006662 GSK3 Proteins 0.000 description 1
- 102100027362 GTP-binding protein REM 2 Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 206010019280 Heart failures Diseases 0.000 description 1
- 102100031573 Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Human genes 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000600756 Homo sapiens 3-phosphoinositide-dependent protein kinase 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000581787 Homo sapiens GTP-binding protein REM 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000777663 Homo sapiens Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Proteins 0.000 description 1
- 101001046587 Homo sapiens Krueppel-like factor 1 Proteins 0.000 description 1
- 101001139146 Homo sapiens Krueppel-like factor 2 Proteins 0.000 description 1
- 101001139130 Homo sapiens Krueppel-like factor 5 Proteins 0.000 description 1
- 101000615488 Homo sapiens Methyl-CpG-binding domain protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 101001109685 Homo sapiens Nuclear receptor subfamily 5 group A member 2 Proteins 0.000 description 1
- 101001094700 Homo sapiens POU domain, class 5, transcription factor 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000652321 Homo sapiens Protein SOX-15 Proteins 0.000 description 1
- 101000884271 Homo sapiens Signal transducer CD24 Proteins 0.000 description 1
- 101000713275 Homo sapiens Solute carrier family 22 member 3 Proteins 0.000 description 1
- 101000652332 Homo sapiens Transcription factor SOX-1 Proteins 0.000 description 1
- 101000652326 Homo sapiens Transcription factor SOX-18 Proteins 0.000 description 1
- 101000687911 Homo sapiens Transcription factor SOX-3 Proteins 0.000 description 1
- 101001117146 Homo sapiens [Pyruvate dehydrogenase (acetyl-transferring)] kinase isozyme 1, mitochondrial Proteins 0.000 description 1
- 208000023105 Huntington disease Diseases 0.000 description 1
- 208000026350 Inborn Genetic disease Diseases 0.000 description 1
- 229930010555 Inosine Natural products 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N Inosine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C2=NC=NC(O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- 102100022248 Krueppel-like factor 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100020675 Krueppel-like factor 2 Human genes 0.000 description 1
- 102100020680 Krueppel-like factor 5 Human genes 0.000 description 1
- 101710128836 Large T antigen Proteins 0.000 description 1
- 241000713666 Lentivirus Species 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 208000015439 Lysosomal storage disease Diseases 0.000 description 1
- 102000043136 MAP kinase family Human genes 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 102100021299 Methyl-CpG-binding domain protein 2 Human genes 0.000 description 1
- 102000009664 Microtubule-Associated Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010020004 Microtubule-Associated Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108090000744 Mitogen-Activated Protein Kinase Kinases Proteins 0.000 description 1
- 101001026869 Mus musculus F-box/LRR-repeat protein 3 Proteins 0.000 description 1
- ZBYRSRLCXTUFLJ-IOSLPCCCSA-O N(2),N(7)-dimethylguanosine Chemical compound CNC=1NC(C=2[N+](=CN([C@H]3[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)C=2N=1)C)=O ZBYRSRLCXTUFLJ-IOSLPCCCSA-O 0.000 description 1
- VQAYFKKCNSOZKM-IOSLPCCCSA-N N(6)-methyladenosine Chemical compound C1=NC=2C(NC)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O VQAYFKKCNSOZKM-IOSLPCCCSA-N 0.000 description 1
- SQVRNKJHWKZAKO-PFQGKNLYSA-N N-acetyl-beta-neuraminic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-PFQGKNLYSA-N 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 description 1
- 108010069196 Neural Cell Adhesion Molecules Proteins 0.000 description 1
- 102100027347 Neural cell adhesion molecule 1 Human genes 0.000 description 1
- 208000025966 Neurological disease Diseases 0.000 description 1
- 102100022669 Nuclear receptor subfamily 5 group A member 2 Human genes 0.000 description 1
- 108091005461 Nucleic proteins Proteins 0.000 description 1
- GHPGVCHKQHZMPS-UHFFFAOYSA-N OC(=O)CN1C(=O)C1=O Chemical compound OC(=O)CN1C(=O)C1=O GHPGVCHKQHZMPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010031243 Osteogenesis imperfecta Diseases 0.000 description 1
- 208000006735 Periostitis Diseases 0.000 description 1
- 208000018262 Peripheral vascular disease Diseases 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 102100030244 Protein SOX-15 Human genes 0.000 description 1
- ZVOLCUVKHLEPEV-UHFFFAOYSA-N Quercetagetin Natural products C1=C(O)C(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=C(O)C(O)=C(O)C=C2O1 ZVOLCUVKHLEPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HWTZYBCRDDUBJY-UHFFFAOYSA-N Rhynchosin Natural products C1=C(O)C(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=CC(O)=C(O)C=C2O1 HWTZYBCRDDUBJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000012010 Sialomucins Human genes 0.000 description 1
- 108010061228 Sialomucins Proteins 0.000 description 1
- 102100038081 Signal transducer CD24 Human genes 0.000 description 1
- 241000710960 Sindbis virus Species 0.000 description 1
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 1
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 206010043275 Teratogenicity Diseases 0.000 description 1
- 206010043276 Teratoma Diseases 0.000 description 1
- 102100030248 Transcription factor SOX-1 Human genes 0.000 description 1
- 102100030249 Transcription factor SOX-18 Human genes 0.000 description 1
- 102100024276 Transcription factor SOX-3 Human genes 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 102100024148 [Pyruvate dehydrogenase (acetyl-transferring)] kinase isozyme 1, mitochondrial Human genes 0.000 description 1
- 108010076089 accutase Proteins 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 210000004381 amniotic fluid Anatomy 0.000 description 1
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 1
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004703 blastocyst inner cell mass Anatomy 0.000 description 1
- 210000001109 blastomere Anatomy 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 210000004271 bone marrow stromal cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 230000007670 carcinogenicity Effects 0.000 description 1
- 231100000260 carcinogenicity Toxicity 0.000 description 1
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 238000000423 cell based assay Methods 0.000 description 1
- 230000011712 cell development Effects 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000007882 cirrhosis Effects 0.000 description 1
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000013377 clone selection method Methods 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 230000005757 colony formation Effects 0.000 description 1
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 238000012864 cross contamination Methods 0.000 description 1
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000006196 deacetylation Effects 0.000 description 1
- 238000003381 deacetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000008260 defense mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 210000004207 dermis Anatomy 0.000 description 1
- MXHRCPNRJAMMIM-UHFFFAOYSA-N desoxyuridine Natural products C1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=O)C=C1 MXHRCPNRJAMMIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NIJJYAXOARWZEE-UHFFFAOYSA-N di-n-propyl-acetic acid Natural products CCCC(C(O)=O)CCC NIJJYAXOARWZEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 210000005064 dopaminergic neuron Anatomy 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 210000001705 ectoderm cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000001162 elastic cartilage Anatomy 0.000 description 1
- 210000002308 embryonic cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004039 endoderm cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 210000001339 epidermal cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000005175 epidermal keratinocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000008995 epigenetic change Effects 0.000 description 1
- 230000001973 epigenetic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 210000002219 extraembryonic membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 description 1
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 238000010230 functional analysis Methods 0.000 description 1
- 150000002270 gangliosides Chemical class 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 208000016361 genetic disease Diseases 0.000 description 1
- 210000004392 genitalia Anatomy 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000034659 glycolysis Effects 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 210000000442 hair follicle cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002064 heart cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 210000003284 horn Anatomy 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 238000012760 immunocytochemical staining Methods 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 238000010820 immunofluorescence microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 229960003786 inosine Drugs 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 1
- 230000010468 interferon response Effects 0.000 description 1
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 1
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 description 1
- 210000004153 islets of langerhan Anatomy 0.000 description 1
- MWDZOUNAPSSOEL-UHFFFAOYSA-N kaempferol Natural products OC1=C(C(=O)c2cc(O)cc(O)c2O1)c3ccc(O)cc3 MWDZOUNAPSSOEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KXCLCNHUUKTANI-RBIYJLQWSA-N keratan Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@H](O[C@@H](O[C@H]3[C@H]([C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H](O)[C@@H]3O)O)[C@H](NC(C)=O)[C@H]2O)COS(O)(=O)=O)O[C@H](COS(O)(=O)=O)[C@@H]1O KXCLCNHUUKTANI-RBIYJLQWSA-N 0.000 description 1
- 238000001638 lipofection Methods 0.000 description 1
- 238000010859 live-cell imaging Methods 0.000 description 1
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 238000007422 luminescence assay Methods 0.000 description 1
- 238000002796 luminescence method Methods 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 239000006148 magnetic separator Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 210000002752 melanocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 210000001259 mesencephalon Anatomy 0.000 description 1
- 210000001704 mesoblast Anatomy 0.000 description 1
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 1
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 1
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 1
- 238000007479 molecular analysis Methods 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000472 morula Anatomy 0.000 description 1
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 description 1
- NFVJNJQRWPQVOA-UHFFFAOYSA-N n-[2-chloro-5-(trifluoromethyl)phenyl]-2-[3-(4-ethyl-5-ethylsulfanyl-1,2,4-triazol-3-yl)piperidin-1-yl]acetamide Chemical compound CCN1C(SCC)=NN=C1C1CN(CC(=O)NC=2C(=CC=C(C=2)C(F)(F)F)Cl)CCC1 NFVJNJQRWPQVOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 210000000933 neural crest Anatomy 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 1
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 1
- 238000012758 nuclear staining Methods 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 1
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 210000001706 olfactory mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 230000005868 ontogenesis Effects 0.000 description 1
- 210000000287 oocyte Anatomy 0.000 description 1
- 150000002902 organometallic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 210000004681 ovum Anatomy 0.000 description 1
- 235000006408 oxalic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 210000002571 pancreatic alpha cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000816 peptidomimetic Substances 0.000 description 1
- 210000003460 periosteum Anatomy 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- HJCHEUYGJODGNT-HSUXUTPPSA-N phosphono [(2r,3r,4s)-2,3,4,6-tetrahydroxy-5-oxohexyl] hydrogen phosphate Chemical compound OCC(=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)COP(O)(=O)OP(O)(O)=O HJCHEUYGJODGNT-HSUXUTPPSA-N 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 210000005059 placental tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 102000004401 podocalyxin Human genes 0.000 description 1
- 108090000917 podocalyxin Proteins 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 102000054765 polymorphisms of proteins Human genes 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 1
- 238000007388 punch biopsy Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 229960001285 quercetin Drugs 0.000 description 1
- 235000005875 quercetin Nutrition 0.000 description 1
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-JXOAFFINSA-N ribothymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-JXOAFFINSA-N 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 210000000717 sertoli cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000002924 silencing RNA Substances 0.000 description 1
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 1
- MFBOGIVSZKQAPD-UHFFFAOYSA-M sodium butyrate Chemical compound [Na+].CCCC([O-])=O MFBOGIVSZKQAPD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000020431 spinal cord injury Diseases 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 1
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 1
- 238000012289 standard assay Methods 0.000 description 1
- 238000009168 stem cell therapy Methods 0.000 description 1
- 238000009580 stem-cell therapy Methods 0.000 description 1
- 239000012879 subculture medium Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000007474 system interaction Effects 0.000 description 1
- 231100000211 teratogenicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 239000003104 tissue culture media Substances 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 238000003151 transfection method Methods 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 229960003741 tranylcypromine Drugs 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- MSRILKIQRXUYCT-UHFFFAOYSA-M valproate semisodium Chemical compound [Na+].CCCC(C(O)=O)CCC.CCCC(C([O-])=O)CCC MSRILKIQRXUYCT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229960000604 valproic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 1
- 238000012070 whole genome sequencing analysis Methods 0.000 description 1
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0696—Artificially induced pluripotent stem cells, e.g. iPS
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
- C12M23/02—Form or structure of the vessel
- C12M23/04—Flat or tray type, drawers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M35/00—Means for application of stress for stimulating the growth of microorganisms or the generation of fermentation or metabolic products; Means for electroporation or cell fusion
- C12M35/02—Electrical or electromagnetic means, e.g. for electroporation or for cell fusion
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M35/00—Means for application of stress for stimulating the growth of microorganisms or the generation of fermentation or metabolic products; Means for electroporation or cell fusion
- C12M35/08—Chemical, biochemical or biological means, e.g. plasma jet, co-culture
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M47/00—Means for after-treatment of the produced biomass or of the fermentation or metabolic products, e.g. storage of biomass
- C12M47/04—Cell isolation or sorting
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0607—Non-embryonic pluripotent stem cells, e.g. MASC
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
- C12N5/0662—Stem cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2506/00—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells
- C12N2506/13—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells from connective tissue cells, from mesenchymal cells
- C12N2506/1307—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells from connective tissue cells, from mesenchymal cells from adult fibroblasts
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Clinical Laboratory Science (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Electromagnetism (AREA)
- Physiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Computer Hardware Design (AREA)
Description
本発明は基本的に、分化した成体細胞から人工多能性幹細胞(iPSC)を作製するための自動化されたシステム、より具体的には、組織試料から体細胞を単離し、そのような細胞をリプログラミングすることで分化した成体細胞からiPSC株を作製し、他の細胞の中からリプログラミングされた多能性成体細胞を同定し、そして同定したリプログラミングされた細胞を増殖させるための自動化されたシステムに関する。
幹細胞は、長期間にわたり、細胞分裂を介して自己再生する性質の特定していない細胞であり、特定の機能をもった細胞、つまり分化細胞へと誘導可能な細胞である。このような性質によって幹細胞は、様々な病状で損傷をうけた細胞や組織を取り替えるための治療で応用するのに大いに将来性がある。胚性幹(ES)細胞は初期胚の胚盤胞に由来し、内胚葉、外胚葉、および中胚葉(三胚葉)へと発生する能力を有する(つまり、ESは「多能性」である)。インビトロでES細胞は、自発的に様々な種類の組織に分化する傾向にあり、それらの分化方向を制御するのは難しい可能性がある。ヒトES細胞を回収するために胚の破壊に関連する倫理的な問題は未だ解決しておらず、これらの問題は研究および治療での応用対する歯止めとなっている。
プレート上に体細胞を置くための、体細胞プレーティングユニット;および
体細胞プレーティングユニット上の体細胞と、iPSCを作製するためのリプログラミング因子とを接触させることによって、体細胞を自動的にリプログラミングするための誘導ユニット
を含む。
プレート上に幹細胞を置くための幹細胞プレーティングユニット;および
幹細胞プレーティングユニット上の細胞と、分化した成体細胞を作製するためのリプログラミング因子とを接触させることによって、幹細胞を自動的にリプログラミングするための誘導ユニット
を含む。一実施形態においてこのシステムは、誘導ユニットで作製された分化した成体細胞を選択的に選別および単離するための選別ユニットをさらに含む。
プレート上にiPSCを置くためのiPSCプレーティングユニット;および
iPSCプレーティングユニット上のiPSCと、分化した成体細胞を作製するためのリプログラミング因子とを接触させることによって、iPSCを自動的にリプログラミングするための誘導ユニット
を含む。さらなる態様においてこのシステムは、分化した成体細胞に特異的なマーカーを同定することで、誘導ユニットで作製された分化した成体細胞を選択的に選別および単離する選別ユニットを含む。
[本発明1001]
プレート上に細胞を置くための細胞プレーティングユニット;および
前記プレーティングユニット上の前記細胞を、iPSCを作製するためのリプログラミング因子と接触させることによって、細胞を自動的にリプログラミングするための誘導ユニット
を含む、iPSCを生成するための自動化されたシステム。
[本発明1002]
iPS特異的マーカーを同定することによって、前記誘導ユニットにより作製された前記iPSCを、選択的に選別および単離するための選別ユニットをさらに含む、本発明1001のシステム。
[本発明1003]
前記単離したiPSCを増殖させ、かつ前記増殖させたiPSCを選択するための増殖ユニットをさらに含む、本発明1002のシステム。
[本発明1004]
前記単離したiPSCを凍結させるための凍結ユニットをさらに含む、本発明1001のシステム。
[本発明1005]
前記iPSCの培養密度を確認し、前記iPSCが培養密度の特徴を有しているか否かを決定する培養密度確認ユニット
をさらに含む、本発明1001のシステム。
[本発明1006]
前記培養密度確認ユニットが、前記iPSCの前記培養密度を定期的に確認する、本発明1005のシステム。
[本発明1007]
前記培養密度確認ユニットが、経時的に、より高頻度で、前記iPSCの前記培養密度を定期的に確認する、本発明1005のシステム。
[本発明1008]
前記培養密度確認ユニットが、前記培養密度の特徴が70%〜100%の範囲に入っているか否かを確認する、本発明1005のシステム。
[本発明1009]
前記誘導ユニットが、ウイルスベクターを使用してリプログラミングを開始する、本発明1001のシステム。
[本発明1010]
前記誘導ユニットが、レトロウイルスまたはセンダイウイルスを使用して、リプログラミングを開始する、本発明1009のシステム。
[本発明1011]
前記誘導ユニットが、小分子、ペプチド、タンパク質または核酸を使用してリプログラミングを開始する、本発明1001のシステム。
[本発明1012]
前記細胞を電気穿孔するための電気穿孔ユニットをさらに含む、本発明1001のシステム。
[本発明1013]
前記選別ユニットが磁気選別ユニットを含む、本発明1001のシステム。
[本発明1014]
前記プレーティングユニットで使用される細胞を得るための細胞バンキングユニットをさらに含む、本発明1001のシステム。
[本発明1015]
前記バンキングユニットが、
生検材料をプレート上に置くための生検材料プレーティングユニット;
細胞を生育するための増殖および継代ユニット;ならびに
マイコプラズマの存在を試験するためのマイコプラズマ試験ユニット
を含む、本発明1014のシステム。
[本発明1016]
前記マイコプラズマ試験ユニットが、発光法(glow luminescence)試験装置を含む、本発明1015のシステム。
[本発明1017]
増殖させた細胞を分配するための分配ユニット;ならびに
前記細胞を保存するための貯蔵および回収システム
をさらに含む、本発明1015のシステム。
[本発明1018]
前記貯蔵および回収システムが前記細胞を凍結する、本発明1017のシステム。
[本発明1019]
前記増殖ユニットが、より高品質のクローンを自動的に増殖させかつ選択する、本発明1003のシステム。
[本発明1020]
前記細胞が体細胞である、本発明1001のシステム。
[本発明1021]
前記体細胞が線維芽細胞である、本発明1020のシステム。
[本発明1022]
プレート上に細胞を置くための幹細胞プレーティングユニット;および
前記幹細胞プレーティングユニット上の前記細胞を、分化した成体細胞を作製するためのリプログラミング因子と接触させることによって、細胞を自動的にリプログラミングするための誘導ユニット
を含む、幹細胞から分化した成体細胞を生成するための自動化されたシステム。
[本発明1023]
前記誘導ユニットで作製された前記分化した成体細胞を選択的に選別および単離するための選別ユニットをさらに含む、本発明1022のシステム。
[本発明1024]
前記単離した分化した成体細胞を増殖させ、かつ前記増殖させた分化した成体細胞を選択するための増殖ユニット
をさらに含む、本発明1023のシステム。
[本発明1025]
前記単離した分化した成体細胞を凍結するための凍結ユニットをさらに含む、本発明1024のシステム。
[本発明1026]
前記幹細胞が、iPSC、胚性幹細胞、造血幹細胞、神経幹細胞または間葉幹細胞である、本発明1022のシステム。
[本発明1027]
前記分化した成体細胞の培養密度を確認し、前記分化した成体細胞が培養密度の特徴を有しているか否かを決定する培養密度確認ユニット
をさらに含む、本発明1024のシステム。
[本発明1028]
前記培養密度確認ユニットが前記分化した成体細胞の培養密度を定期的に確認する、本発明1027のシステム。
[本発明1029]
前記誘導ユニットがウイルスベクターを使用してリプログラミングを開始する、本発明1022のシステム。
[本発明1030]
前記誘導ユニットがレトロウイルスまたはセンダイウイルスを使用してリプログラミングを開始する、本発明1029のシステム。
[本発明1031]
前記誘導ユニットが小分子、ペプチド、タンパク質または核酸を使用してリプログラミングを開始する、本発明1022のシステム。
[本発明1032]
前記細胞を電気穿孔するための電気穿孔ユニットをさらに含む、本発明1022のシステム。
[本発明1033]
前記選別ユニットが磁気選別ユニットを含む、本発明1022のシステム。
[本発明1034]
前記細胞プレーティングユニットで使用される細胞を得るためのバンキングユニットをさらに含む、本発明1022のシステム。
[本発明1035]
前記バンキングユニットが、
生検材料をプレート上に置くための生検材料プレーティングユニット;
細胞を生育するための増殖および継代ユニット;ならびに
マイコプラズマの存在を試験するためのマイコプラズマ試験ユニット
を含む、本発明1034のシステム。
[本発明1036]
増殖させた分化した成体細胞を分配するための分配ユニット;ならびに
前記分化した成体細胞を保存するための貯蔵および回収システム
をさらに含む、本発明1035のシステム。
[本発明1037]
前記貯蔵および回収システムが前記細胞を凍結させる、本発明1036のシステム。
[本発明1038]
プレート上にiPSCを置くためのiPSCプレーティングユニット;および
前記iPSCプレーティングユニット上の前記iPSCと、分化した成体細胞を作製するためのリプログラミング因子とを接触させることによって、iPSCを自動的にリプログラミングするための誘導ユニット
を含む、人工多能性幹細胞(iPSC)から分化した成体細胞を生成するための自動化されたシステム。
[本発明1039]
前記分化した成体細胞に特異的なマーカーを同定することにより、前記誘導ユニットで作製された前記分化した成体細胞を選択的に選別および単離するための選別ユニット
をさらに含む、本発明1038のシステム。
[本発明1040]
前記単離した分化した成体細胞を増殖させ、かつ前記増殖させた分化した成体細胞を選択するための増殖ユニット
をさらに含む、本発明1038のシステム。
[本発明1041]
前記単離した分化した成体細胞を凍結するための凍結ユニットをさらに含む、本発明1038のシステム。
[本発明1042]
前記誘導ユニットがウイルスベクターを使用して分化を開始する、本発明1038のシステム。
[本発明1043]
前記誘導ユニットがレトロウイルスまたはセンダイウイルスを使用して分化を開始する、本発明1042のシステム。
[本発明1044]
前記誘導ユニットが小分子、ペプチド、タンパク質または核酸を使用して分化を開始する、本発明1038のシステム。
[本発明1045]
前記プレーティングユニットで使用される分化細胞を得るためのバンキングユニットをさらに含む、本発明1038のシステム。
[本発明1046]
前記細胞バンキングユニットが、
生検材料をプレート上に置くための生検材料プレーティングユニット;
細胞を生育するための増殖および継代ユニット;ならびに
マイコプラズマの存在を試験するためのマイコプラズマ試験ユニット
を含む、本発明1038のシステム。
[本発明1047]
本発明1001のシステムを使用して作製された人工多能性幹細胞。
[本発明1048]
本発明1001のシステムを使用して作製された人工多能性幹細胞の集団。
[本発明1049]
本発明1001、1022または1038のいずれかのシステムから作製された前記細胞を含むアレイ。
[本発明1050]
前記アレイが、少なくとも6、24、96、384、1536サイズのアレイである、本発明1049のアレイ。
[本発明1051]
前記分化細胞が、造血幹細胞、筋細胞、心筋細胞、肝細胞、軟骨細胞、上皮細胞、尿路細胞、およびニューロン細胞からなる群より選択される、本発明1022または1038のシステム。
[本発明1052]
本発明1001、1022または1038のいずれかのシステムによって作製された細胞バンク。
[本発明1053]
より高品質のクローンが、固定する前よりも少ない枚数のプレートに固定される、本発明1019のシステム。
本発明は、iPSCおよび分化細胞を作製するための自動化されたシステムの作製に基づいている。本発明のシステムは、標準化されたiPSC株作製の効率および再現性を大きく向上させる。典型的には、研究者は手作業でiPSCを生成しており、そのため、研究者の交代によって細胞の有用性が限られ、多量の細胞を生成することができない。本発明のシステムは、組織または細胞試料を受け取るところから、詳細に特徴の明らかになったiPSC株の大量のストックを保存するところまでを完全に自動化したシステムにより、これらの問題を克服するものである。このシステムにより、多くの提供源からの多数の細胞を一貫して不変的に生成することができ、このことによって、多くの疾患の治療法および治癒法を発見するためのiPSC技術の使用が促進されるだろう。
プレート上に細胞を置くための、体細胞、例えば線維芽細胞プレーティングユニット;および
プレーティングユニット上の細胞と、iPSCを作製するためのリプログラミング因子とを接触させることによって、自動的にリプログラミングするための誘導ユニット
を含む。さらなる実施形態では、本発明のシステムは、誘導ユニットで作製されたiPSCを、iPSC特異的マーカー、例えば細胞表面マーカーまたは形質転換用ベクターに導入された緑色蛍光タンパク質を同定することによって、選択的に選別および単離するための、選別ユニットを含む。体細胞は、細胞株、生検材料または血液などを含む他の組織試料から得ることができる。
プレート上に細胞、例えば、iPSC、ESまたはMS細胞を置くための幹細胞プレーティングユニット;および
幹細胞プレーティングユニット上の細胞と、分化した成体細胞を作製するためのリプログラミング因子とを接触させることによって、細胞を自動的にリプログラミングするための誘導ユニット
を含む。一実施形態においてこのシステムはさらに、誘導ユニットで作製された分化した成体細胞を、分化した成体細胞に特異的なマーカーを同定することで、選択的に選別および単離するための選別ユニットを含む。
プレート上にiPSCを置くためのiPSCプレーティングユニット;および
iPSCプレーティングユニット上のiPSCと、分化した成体細胞を作製するためのリプログラミング因子とを接触させることによって、iPSCを自動的にリプログラミングするための誘導ユニット
を含む。一実施形態においてこのシステムはさらに、誘導ユニットで作製された分化した成体細胞を、分化した成体細胞に特異的なマーカーを同定することで、選択的に選別および単離するための選別ユニットを含む。
ワークフローシステムは、それぞれ独立して操作される、4つのユニットに分けられる。
(1)隔離所体細胞単離および成長(システム1);
(2)隔離所アッセイ(システム2);
(3)融解、感染および同定(システム3、4、および5);ならびに
(4)維持、QC、増殖、および凍結(システム6、7、および8)
1.技師は、1週間当たり40個の生検材料を6ウェルディッシュにプレーティングする;
2.6ウェルプレートを、200枚のプレートを入れることができる隔離所インキュベーター中で維持する;
3.一体化されたCyntellect Celigo血球計算器を使用して、定期的に培養密度を確認する。
1.インキュベーターから、隔離所Growth STARletのデッキに戻し、ELISAを利用したマイコプラズマ試験用に、培地をウェルからプレートに回収する。
2.96ウェルアッセイプレートを隔離所アッセイSTARletに手動で移す。
1.増殖させた線維芽細胞を、複数の凍結用バイアルに分配し、フタをして、−80℃のSAMに移す。
1.発光法(glow luminescence method)を用いるLonza MycoAlertによる試験。
2.スペクトル収集装置による発光プレートの測定。
融解モジュールと感染モジュール
1.−80℃のSAMから凍結用チューブを回収する(61、190)
2.加温ブロック上で融解する(122)
3.フタを取る(Hamilton Capper Decapper)(126)
4.培地を加えて凍結保護物質を希釈する(122)
5.短時間遠心する(128)
6.プレーティングデータ中に再懸濁する(122)
7.6ウェルの1ウェル当たり1つの試料をプレーティングする(62、122)
8.インキュベーターに移動する(130、132)
9.線維芽細胞を約3〜4日間回復させる
10.Cyntellect Celigo血球計算器で培養密度を確認する(124)11.リプログラミング当日に、全ウェルの線維芽細胞を継代する(122)
12.バッチ内で、トリプシンをウェルに通過させる(122)
13.Cyntellect Celigo血球計算器で細胞を計数する(124)
14.24ウェルプレートの1〜3つのウェルに一定数の細胞をプレーティングし、最小限の枚数の24ウェルプレートに試料を固定する(64、122)
15.一晩、プレートをインキュベーターに戻す(130、132)
16.プレートを回収し、チューブ形式内のウイルスを融解し、24ウェルプレートに入っている線維芽細胞のそれぞれのウェルに加える(130、122)
17.毎日、培地の一部を交換する(122)
18.アキュターゼ(accutase)で培養物を回収し、単一細胞の懸濁液にする(134)
19.染色用緩衝液で希釈する(134)
20.線維芽細胞表面マーカーに対する磁気ビーズで染色する(134)
21.洗浄工程(134)
22.磁気(Dynalビーズの場合)またはカラム(Miltenyiシステムの場合)にかける(134、136)
23.磁気を帯びてない画分を回収し、新しいウェルに移す(134)
24.Cyntellect Celigo血球計算器で細胞を計数する(124)
25.継代培地に入れた細胞を、96ウェルプレートの各ウェルにつき1〜10個移すことで、細胞を適切な密度に希釈する(66、134)
26.4℃のインキュベーターから、新しいマトリゲルまたはマトリックスでコーティングされている96ウェルプレートを回収する(142)
27.細胞を計数した数に基づいて、例えば、感染1回分のプレート1枚当たり2つの細胞を、96ウェルマトリックスプレートに分配する(66、134)
28.プレートをインキュベーターに戻す(132)
29.毎日、培地の一部を交換する(122)
30.96ウェルプレートを、インキュベーターからコロニー同定用の液体取扱い機に戻す(66、132、138)
31.多能性表面マーカーを使った生細胞染色を行う(138)
32.Cyntellect Celigo血球計算器で撮影(140)
33.コロニーの境界が明確で、単一のマーカーに陽性なコロニーの入ったウェルを同定する(140)
34.技師は当たりを再確認して、継代用に最初の試料から6つの試料を選択し、プレートおよび陽性ウェルのIDを回収する。
35.単一のマーカー陽性コロニーが入ったウェルを選ぶ(138)
36.4℃のインキュベーターから、新しいマトリゲルまたはマトリックスでコーティングされている96ウェルプレートを回収する(68、142)
37.選択したウェルを回収し、新しい96ウェルマトリックスプレートに継代して、最小限の枚数のプレートにクローンを固定し、それぞれを継代培地中でプレーティングする(68、138)
38.毎日、培地の一部を交換する(122)
維持モジュール
39.コロニーが十分に高い密度になるまで、96ウェルのマトリックスでコーティングされている新しいプレート中に1:1で連続して継代していく(68〜72、160)
40.毎日、96チップヘッドを使っておよそ75%の培地を交換することで、全てのプレートに栄養を供給する(160)
41.Cyntellect Celigo血球計算器を用い、コロニーの密度と成長速度を定期的にモニタリングする(166)
42.プレートを複製し、クローンQC用のプレートを作製する(74〜86、160)
43.最終目標は、性質の良くないクローンを排除し、最初の試料よりも2〜3倍品質の高いクローンを残すための複数のQCアッセイで使用するために、複数のプレート上でクローンを増殖させることである。
44.QC工程に合格したクローンを選んで再度整列させ、最小限の枚数のプレートに固定する。同時に、合格しなかったクローンは除去する(80、86、160)。
45.この過程を行っている間は毎日、栄養の供給を行う(160)
46.細胞を回収する(74、150)
47.細胞を計数する(164)
48.V型底プレートに、一定数の細胞(細胞数は、1ウェル当たり5000〜10000個の範囲)をプレーティングする。1株につき、2〜6つの複製を準備する(84、150)
49.インキュベーターに戻す(1g凝集)(172)
50.2日後に培地の交換を行う(150)
51.インキュベーター中でさらに12日間インキュベートする(172)
52.2日毎に培地を一部交換する(150)
53.ウェル中に胚様体を残したままウェルから培地を除去するために、核酸調製ステーションに移動させる(84、192)
54.各試料の複製をまとめて混合するためにRNA溶解緩衝液で再懸濁し、Nanostring nCounterアッセイでの解析に使用できるプレートを作製する(84、192)
55.継代し、増殖させた後の96ウェルプレートから始める(88)
56.インキュベーター中で6日間インキュベートする(172)
57.毎日、培地の一部を交換する(154)
58.インキュベーターからプレートを取り出す(88、162)
59.培地を除去する(完全に除去する)(154)
60.冷えた予備凍結培地(成長培地で希釈したマトリゲル)を加える(154)
61.インキュベーター中で1時間インキュベートする(172)
62.培地を除去する(完全に除去する)(154)
63.冷やした凍結培地を少量加える(154)
64.プレートを密閉する(88、164)
65.試料を−80℃の貯蔵庫に移し、凍結させる(190)
66.気相の液体窒素中で保存する
67.継代し、増殖させた後の96ウェルプレートから始める(90)
68.6日間インキュベートする(172)
69.毎日、培地の一部を交換する(154)
70.ウェルを1:1の割合で24ウェルプレートに継代する(92、154)
71.6日間インキュベートする(172)
72.毎日、培地の一部を交換する(154)
73.ウェルを1:1の割合で6ウェルプレートに継代する(94、154)
74.4〜6日間インキュベートする(172)
75.毎日、培地の一部を交換する(154)
76.インキュベーターからプレートを取り出す(162)
77.培地の一部を予備凍結培地に置換する(154)
78.インキュベーター中で1時間インキュベートする(172)
79.通常の継代の場合、細胞を凍結用に回収する(154)
80.マトリックスチューブに移す。1ウェルにつき、チューブは2〜3本(96、154)
81.短時間遠心して、培地を除去する(168、154)
82.冷凍結培地を加える(154)
83.チューブのフタをする(170)
84.試料を−80℃の貯蔵庫に移す(190)
図5A、5B、5Cは、ワークフローを達成するために必要とされる機器構成の例を図示している。図5Aに、線維芽細胞バンクの自動的な増殖および品質管理用のシステム構成を示す。図5Bは、患者試料、例えば線維芽細胞を自動的に融解するため、リプログラミング因子を患者試料、例えば線維芽細胞に自動的に導入するため、MultiMACSを使った自動化セルソーティング、および自動的なコロニーの同定および再配列のためのシステムの構成を示している。図5Cは、iPSクローンの自動的な増殖、自動的な胚様体産生、および自動的な凍結用のシステム構成を示している。
一例として、線維芽細胞バンクを誘導するために使用されたハードウェアの構成は、以下のハードウェア部品に接続したHamilton STARlet液体取扱いロボット(100)を含む:細胞培養のインキュベートを可能にするCytomat 24 CGLS自動インキュベーター(108)、自動的に画像を収集し、解析するためのCyntellect Celigo 血球計算器(102)、プレートまたはチューブに入った細胞を遠心分離するためのAgilent V−Spin自動遠心分離機(106)、および凍結用チューブのフタを自動で開け閉めするHamilton Capper DeCapper(104)。これらの部品はさらに、全ての装置と通信し、細胞培養用ウェアとハードウェア部品間での細胞の操作を制御するPC内のプログラム可能なソフトウェアによって制御される(118)。コントローラソフトウェアはさらに、計画設定ソフトウェア(120)と通信して、システムの相互作用を関連させる。Hamilton STARlet(100)は、4/8/12チャネルのピペット操作、8チャネルのピペット操作用のModular Arm、iSWAPプレート取扱い機、プレートおよびフタ取扱い用のCO−RE Gripper、Multi Flex傾きモジュール、Hamilton Heated Shaker2.0、ならびに、プレートおよびフタ置き場、ピペット台、娘プレート台および培地を保持するための窪みを含む液体取扱いプラットフォームを柔軟に配置するためのキャリヤーパッケージを備えている。Cyntellect Celigo(102)は、画像化ユニットおよび画像収集と画像解析を制御するためのPC内のプログラム可能なソフトウェアで構成されている。Celigoは撮影している間に培養プレートを動かさず、プレーティングされている生検材料の撹拌が抑えられるため、Celigoが好ましい。Hamilton Capper Decapper(104)とAgilentのV−Spin遠心分離機(106)は、細胞培養プレートを操作している間、動作環境を無菌的に維持するために、NuAire BSL IIバイオセイフティーキャビネット(110)内に設置されたHamilton STARletの中に置かれる。
1.6ウェル生検材料プレート(22、24)をSTARlet(100)に負荷し、Cytomatインキュベーター(108)に移す。
2.Celigo(102)で培養密度を確認し(26、28)、STARlet(100)上で培地を交換する。
3.Celigo(102)で培養密度を確認する(28)
4.STARlet(100)で、培地を全部変える(30)
5.STARlet(100)とAgilent V−Spin遠心分離機(106)を使ってアッセイプレートを準備する(34)
6.STARlet(100)上で継代する(44)
7.STARlet(100)上で継代および選ぶ(42)
8.STARlet(100)上で、継代、回収および凍結する
9.Cytomat(108)からSTARlet(100)にプレートを戻す(46、40)
BioTek Synergy HTリーダー(114)に接続したHamilton STARlet液体取扱いロボット(112)から成る、別の独立したハードウェア構成を用いて線維芽細胞バンクのマイコプラズマ試験を実施する。これらの部品はさらに、全ての装置と通信し、細胞培養用ウェアとハードウェア部品間での細胞の操作を制御するPC内のプログラム可能なソフトウェアによって制御される(116)。Hamilton STARlet(112)は、4/8/12チャネルのピペット操作、8チャネルのピペット操作用のModular Arm、iSWAPプレート取扱い機、プレートおよびフタ取扱い用のCO−RE Gripper、ならびにプレートおよびフタ置き場、ピペット台、娘プレート台および、アッセイに必要な試薬を保持するための窪みを含む液体取扱いプラットフォームを柔軟に配置するためのキャリヤーパッケージを備えている。
線維芽細胞を融解し、リプログラミングウイルスを線維芽細胞に感染させ、プログラミングされた細胞を磁気ソートし、及び幹細胞コロニーを同定するために必要とされるハードウェア構成は、3つのHamilton STAR液体取扱いユニット(122、136、138)、2つのCytomat 48Cインキュベーター(132)、1つのCytomat 2C425インキュベーター(142)、2つのCyntellect Celigo 血球計算器(124、140)、Hamilton Capper Decapper(126)、Agilent V−Spin(128)、Miltenyi MultiMACS磁気分離装置(136)から構成される。液体取扱い機であるCeligo、Hamilton Capper DeCapperおよびAgilent V−Spinは全て、Hamilton Rack Runnerロボティクスレール(130)によって繋げられている。HamiltonSTARはそれぞれ、4/8/12チャネルピペット操作用、8チャネルのピペット操作用のModular Arm、iSWAPプレート取扱い機、プレートおよびフタ取扱い用のCO−RE Gripper、培地を交換している間にプレートを傾けるための、1つ以上のMulti Flex傾きモジュール、1つ以上のHamilton Heated Shaker 2.0、ならびにプレートおよびフタ置き場、ピペット台、娘プレート台および培地を保持するための窪みを含む液体取扱いプラットフォームを柔軟に配置するためのキャリヤーパッケージを備えている。HamiltonSTAR液体取扱い機の内の1つ(122)は、96ウェルピペット操作用ヘッドも備えている。Celigoのうちの1つ(140)とCytomat 2Cインキュベーター(142)はHamiltonSTARのうちの1つ(138)と直接繋がっており、自動化セルソーティングを促す。HamiltonSTARは、細胞培養プレートを操作している間、動作環境を無菌的に維持するために、NuAire BSL IIバイオセイフティーキャビネット(144、146、148)内に設置される。残りの部品は、細胞培養プレートを装置間で移動させる間、動作環境を無菌的に維持するために、Hepaフィルターの付いたフードで覆われている。Cytomat 48Cインキュベーター(132)は、Rack Runner輸送用レール(130)によって、システムのその他の部品と接続されている。
1.マイコプラズマを含まない6ウェル生検材料プレート(48)をSTAR(122)に負荷し、cleanの成長条件(60)でCytomatインキュベーター(132)に移す。
2.Celigo(124)で培養密度を確認し(50)、STAR(122)上で培地を交換する。
3.STAR(122)上で、継代、回収(52)および凍結(54、56)する。
4.融解法:線維芽細胞の入った凍結用チューブ(61)をSTAR(122)に負荷して融解し、その後チューブのフタを開け(126)、線維芽細胞を洗浄し、次いで、細胞をプレーティング培地で再懸濁し、線維芽細胞を6ウェルプレートにプレーティングし(62)、Cytomatインキュベーター(132)に移す。
5.STARlet(122)上で、培地全部を変える。
6.Celigo(124)で培養密度を確認する。
7.STARlet(122)上で、24ウェルプレート(64)に入っている線維芽細胞を継代し、播種する。
8.STARlet(122)で線維芽細胞(64)に感染するための方法
9.STARのウェルに一定量の培地を加える方法(122、138、144)
10.STARで、培地の半量を交換する方法(122、138、144)
11.Miltenyi MultiMACS(136)およびCeligo(124)に付属のSTAR(144)における、磁気を用いた選別、希釈およびプレーティングの方法(66)
12.STAR(122、138、144)で、培地の4分の3量を交換する方法
13.STAR(138)およびCeligo(140)を使用して、生きた状態でコロニーを免疫細胞化学的染色し、そのコロニーを自動的に画像化する方法(66)
14.STAR(138)の選択したウェルから、コロニーを回収し、選び、再度プレーティグする方法(68)
15.Cytomat(132)からプレートをSTARlet(122、138、144)に戻す。
リプログラミングされた幹細胞のコロニーを増殖させ、品質管理アッセイ用にコロニーのプレートを生成し、かつ凍結貯蔵用にプレートとチューブを作製するために必要とされるハードウェア構成は、3つのHamiltonSTAR液体取扱いユニット(150、154、160)、Cytomat 24Cインキュベーター(172)、1つのCytomat 2C425インキュベーター(174)、1つのCyntellect Celigo血球計算器(166)、Hamilton Capper Decapper(170)、Agilent V−Spin(168)、およびAgilent PlateLocプレート密封機(164)から構成される。液体取扱い機であるCeligo、Hamilton Capper DeCapper、Agilent V−Spin、およびAgilent PlateLocプレート密封機は全て、Hamilton Rack Runnerロボティクスレール(162)によって繋がれている。HamiltonSTARおよびSTARletは、4/8/12チャネルのピペット操作用、8チャネルのピペット操作用のModular Arm、iSWAPプレート取扱い機、プレートおよびフタ取扱い用のCO−RE Gripper、培地を交換している間にプレートを傾けるための1つ以上のMultiFlex傾きモジュール、1つ以上のHamilton Heated Shaker 2.0、ならびに、プレートおよびフタ置き場、ピペット台、娘プレート台および培地を保持するための窪みを含む液体取扱いプラットフォームを柔軟に配置するためのキャリヤーパッケージを備えている。STARのうちの1つ(160)は、96チャネルマルチチャネルピペット操作ヘッドも備えており、培地の交換と継代を促進する。Cytomat 2CおよびCytomat 24Cインキュベーターは、HamiltonRack Runner輸送用レール(162)でHamiltonSTARと繋がれており、自動的な培地交換を促進する。HamiltonSTARは、細胞培養プレートを操作している間の動作環境を無菌的に維持するために、NuAire BSL IIバイオセイフティーキャビネット(176、178、180)内に設置されている。残りの部品は、細胞培養プレートを装置間で移動させる間、動作環境を無菌的に維持するために、Hepaフィルターの付いたフードで覆われている。
1.前述の段階からプレート(68)を受け取り、Cytomatインキュベーター(172)に入れる、STAR(160)での負荷方法。
2.傾きモジュールと8−チャネルのピペット操作アームを使い、STAR(150、154、160)上で、培地全量を変える。
3.STAR(150、154、160)およびCytomatインキュベーター(172)へ、およびSTAR(150、154、160)およびCytomatインキュベーター(172)から、プレートを移動させるのに関連する方法により、Celigo(166)で培養密度を確認する。
4.STAR(150、154、160)上で、96ウェルプレート(68〜90)に入っているiPSCを継代および播種する方法
5.STAR(150、154、160)上で、培地を部分的に交換する方法
6.STAR(150、154、160)上で、選択した96ウェルのウェルから、新しい96ウェルプレート(80、82、86、88)に、コロニーを回収し、選び、再度プレーティングする方法。
7.STAR(154)で、選択した96ウェルのウェルから新しい24ウェルプレート(90、92)に、コロニーを回収し、選び、再度プレーティングする方法。
8.STAR(154)上で、選択した24ウェルのウェルから新しい6ウェルプレート(92、94)に、コロニーを回収し、選び、再度プレーティングする方法。
9.STAR(154)上で、凍結プレート(88)内の細胞を、継代、回収および分配する。
10.STAR(154)上で、凍結用チューブ(96)内の細胞を、継代、回収および分配する。
11.プレートを、Cytomat 24C(172)またはCytomat 2C(174)からSTAR(150、154、160)に戻す。
リプログラミング用線維芽細胞バンクの作製
患者試料からiPSCを誘導するワークフローでの第一工程は、成体細胞を得て、増殖させることである。この工程は例えば、皮膚パンチ生検材料または廃棄された皮膚組織を得て、次いで、そのような組織から線維芽細胞を単離し、培養物を増殖させることによって達成される。本発明者らのワークフローにおいてこの工程は、システム1と2から構成される自動化されたシステムで達成される。システム1と2(100〜120)、およびシステム3(122〜132、154、190)の自動化部品は、患者試料由来の凍結用チューブ(61)に入った状態で保存される線維芽細胞バンクを誘導するのに必要とされる工程を実施し、この工程には、患者の生検材料をプレーティングすること(2、22〜24)、増殖させ、継代すること(4、26〜32)(液体取扱いロボット上での回転生産)、QC(6、34〜46)(自動化されたマイコプラズマに関する試験)、および液体取扱いロボットを使った自動的な凍結(8、48〜56)を含む。例えば、生検材料から線維芽細胞を生産するためのワークフローおよび決定木は、隔離所(58)およびClean段階(60)の2つに分けられる。生検材料が設備に投入されたら、技師が生検材料を6ウェルプレートにプレーティングし(22)、プレートを自動インキュベーターに集めて(24)、隔離所ワークフローを開始させる。所定の時間が経過し、生検材料がプレートに接着したら、液体取扱いロボットが、栄養を供給し、プレーティングした組織からの成体線維芽細胞の成長の増殖密度を自動顕微鏡で確認するために、プレートを自動インキュベーターから戻す(26)。プレートをインキュベーターに戻し、成長を続けさせる(28)。液体取扱い機によって、インキュベーターからプレートを取り出し、培地を、抗生物質および抗真菌剤を含まない培地と交換して(30)、マイコプラズマ試験に備える。ロボットによって、プレートはインキュベーターに戻され、さらに5日間インキュベートされる(32)。その後、ロボットによってプレートが取り出され、マイコプラズマ試験用に培地を娘プレートに回収する(34)。マイコプラズマ試験用に、娘プレートを隔離所アッセイシステムに移動する(36)。アッセイの陽性シグナルに基づいて選択を行う(38)。マイコプラズマアッセイの結果、6ウェルプレートの全てのウェルが陽性であったら(40)それらは廃棄する。6ウェルプレートの全てのウェルが陰性で、マイコプラズマを含まなかったら、そのプレートを、隔離所から、システム3、4、5によって提供されるclean成長環境に移す(46)。いくつかのウェルが陽性で、いくつかのウェルが陰性の場合、陰性のウェルを隔離所中で維持する(42)。陰性のウェルを新しいプレートに継代し(44)、インキュベーターに移し、陽性のウェルを含むもとのプレートを廃棄する。これらの培養物を、工程に沿って、マイコプラズマの再検査まで進める(24〜38)。Clean培養物の成長をモニタリングし(50)、継代し(52)そして凍結バイアル中で凍結させる(54、56、61)。
iPSCを作製するには、凍結用チューブに入った線維芽細胞(61)を自動化されたシステムでプレーティングし(10)、自動化されたシステムでリプログラミング因子を導入し(12)、システム内での自動的な選別および単離によってiPSCを単離し(14)、所望のクローンを自動化されたシステムで選択し(16)、および自動化されたシステムで増殖させ(16)、マーカーアッセイおよび胚様体アッセイによる多能性状態に関する自動化されたシステム(QC)によって自動的に品質確認を行い(18)、その後、自動化されたシステムによって、所望の細胞を自動的に凍結させ、貯蔵する(20)。これらの工程は、自動化されたシステム3、4、5、6、7、および8(122〜192)で達成される。
いくつかの態様では、Nanostring nCounter Plex2アッセイキットは、その集団の中では変化の見られない400の遺伝子座を標的とするために使用され、細胞株同一性の「フィンガープリント」追跡と併用される一体化された分子の核型解析を可能にする。分子の核型解析では平均して、染色体腕1本当たり8つのプローブを使用し、iPSC株の細胞培養誘導の経過中および増殖中のゲノムの安定性を確認する。個々のゲノムを明確に同定することができる一般的な30のコピー数多型(CNV)に基づいて、全ての細胞株について同一性解析も実施する。
一態様では、例えばCeligo自動撮像装置でモニタリングされる、表面マーカー染色を行い、細胞がTra−1−60表面マーカー陽性であることを示す。PSC株は、多能性遺伝子を有意なレベルで示さなくてはならない。一実施例において本発明者らは、多能性に関する6つのマーカー(Oct4、Klf4、cMyc、Nanog、Lin28、ZFP42、およびSox2)を含む、100遺伝子のプローブセット(以下で説明する)を使用する。この解析を行うには、細胞の試料を溶解し、RNAを回収する。本発明者らは、nCounter Plex2アッセイキットを使用して、複数の試料における発現レベルと、数百もの遺伝子標的の発現レベルを同時に解析する。これにより、PSCを高処理系で解析する事が可能になる。nCounter遺伝子発現アッセイは定量的であるため、選択基準は、同一の条件で生育・解析される、確立したhESC株の対照パネルと比較して、ある範囲に入った発現レベルに基づく。多能性遺伝子発現の基準を満たした細胞株は、胚様体(EB)アッセイにおいて、インビトロでさらに増殖・分化させる。
ヒト多能性細胞株では一般的に、後成的な変化や転写レベルでの変化があり、この変化が細胞株の有用性に大きな影響を及ぼす可能性があることが分かっている。例証となる実施例では、遺伝子マーカーのパネルには、以下が含まれる:
三胚葉のそれぞれから選択された、83種の異なる遺伝子マーカー(83)
5種のレトロウイルス導入遺伝子(検出プローブ1つを含む4因子、1プローブ)
5種のセンダイ導入遺伝子(4因子+ベクターのみ、5)
Oct4、Klf4、cMyc、Nanog、Lin28、ZFP42(多能性、Sox2は胚葉群、6プローブ)
性別マーカーSRY、XIST(2)−ドナーの性別と一致することが必須。そうでなければその細胞株は拒絶される。
ハウスキーピング遺伝子、ACTB、POLR2A、ALAS1(3プローブ)。
自動的な増殖
初期の細胞を6ウェルプレートの2つの別々のウェルにプレーティングし、その後、それらをCO2インキュベーター内に置いて、培養密度が最大95%になるまで成長させることで、細胞株を増殖させる。
まず、バイアルをSAM−80冷凍庫に置き、徐々に冷やす。このシステムは自動的に温度をモニタリングし、システムにアクセスのあった時間を記録する。
iPSCおよびEB遺伝子発現解析−EBアッセイにおいて胚葉分化をモニタリングするための系統分化アッセイ得点表(100遺伝子)を含むプローブセット、多能性マーカー、性別マーカーおよび導入遺伝子の発現
凍結融解解析
細胞を回収後、計数し、6ウェルプレートの1つのウェルにプレーティングする。コロニーが出現した当日とその5日後に撮影する。コロニーの倍加時間は36時間以下でなければならない。
Celigo自動撮像装置を用いたTra−1−60染色の高密度撮像を使う自動化されたシステムにより、表面マーカー解析を実施する。
多能性遺伝子の発現-iPSCクローンは、多能性遺伝子を有意なレベルで示さなくてはならない。本発明者らは、多能性に関する6つのマーカー(Oct4、Klf4、cMyc、Nanog、Lin28、ZFP42、およびSox2)を含む、100遺伝子マーカーのプローブセット(以下で説明する)を使用する。この解析を行うには、細胞の試料を溶解し、RNAを回収する。本発明者らは、nCounter Plex2アッセイキットを使用して、複数の試料における発現レベルと、数百もの遺伝子標的の発現レベルを同時に解析する。これにより、iPSCを高処理系で解析する事が可能になる。nCounter遺伝子発現アッセイは定量的であるため、選択基準は、同一の条件で生育・解析される、確立したhESC株の対照パネルと比較して、ある範囲に入った発現レベルに基づく。選択したクローンのうち、多能性遺伝子発現の基準を満たしたものは、胚様体アッセイにおいて、インビトロでさらに増殖・分化させる。
三胚葉のそれぞれから選択された、83種の異なる遺伝子マーカー(83)
5種のレトロウイルス導入遺伝子(検出プローブ1つを含む4因子、1プローブ)
5種のセンダイ導入遺伝子(4因子+ベクターのみ、5)
Oct4、Klf4、cMyc、Nanog、Lin28、ZFP42(多能性、Sox2は胚葉群、6プローブ)
性別マーカーSRY、XIST(2)
ハウスキーピング遺伝子、ACTB、POLR2A、ALAS1(3プローブ)
細胞株を承認する前であって、かつ、各増殖の最後に、Nanostring nCounter Plex2アッセイキットを使用して、細胞株同一性の「フィンガープリント」追跡と併用した一体化された分子の核型解析を可能にする400の遺伝子座を標的とする。分子の核型解析では平均して、染色体腕1本当たり8つのプローブを使用し、iPSC株の細胞培養誘導の経過中および増殖中のゲノムの安定性を確認する。「フィンガープリント」による同一性の追跡解析は、多型性の遺伝子座で共通の30種のコピー数多型(CNV)に基づいた特徴の組み合わせに依存し、これによって、個々のゲノムを明確に同定することができる。加えて、関連があることが分かっている組織提供者は理論的に類似したCNVを有する可能性があることから、誤同定を避けるために、これらを同じバッチでは処理しない。同一性解析のデータと最初のCNVのデータを相互参照し、本発明者らのLIMSシステムが全細胞株を正確に追跡していることを担保する。
凍結融解解析
凍結保存後、1本のバイアルを融解する。回復させた後、細胞を計数し、6ウェルプレートの1つのウェルにプレーティングする。培養物を毎日観察する。コロニーが出現した当日とその5日後に撮影する。コロニーは、最初に観察された日から5日以内に、直径が少なくとも2倍にならなければならない。
本発明のシステムを使用すれば、自動化されかつ追跡可能な画像解析によって、生検材料ならびに他の組織源の増殖を追跡することができる。図6に示すように、画像と成長速度は、生産過程の間追跡される。図6Aでは、生検または廃棄された組織が6ウェルディッシュの複数のウェルにプレーティングされ、栄養を供給し、撮像し、継代し、増殖した線維芽細胞を凍結する自動化されたシステムによって維持される。典型的な試料に関する、画像解析インターフェースの例を示す。提供された試料ごとに1枚のプレートを使用し、相互汚染を最小限に抑える。(B)それぞれ独立して生成した検量線に由来する直線回帰に基づいて、培養密度から細胞数を補外する。(C)本発明者らの自動化されたシステムで維持した、典型的な生検材料の増殖に関する細胞数の例である。患者試料1つにつき、補外した細胞数を、各ウェル当たりで独立してプロットすることで(上段)、その試料の増殖全体を算出することができる(下段)。
Claims (21)
- プレート上に細胞を置くための自動化された細胞プレーティングユニット;および
前記自動化されたプレーティングユニット上の前記細胞を、iPSCを作製するためのリプログラミング因子と接触させるための自動化された誘導ユニット
を含む、人工多能性幹細胞(iPSC)を生成するための自動化されたシステムであって、
前記自動化された細胞プレーティングユニットおよび前記自動化された誘導ユニットは融解および感染用液体取扱い機に含まれ、
第1の自動顕微鏡および生成された前記iPSCを選択的に選別し単離するための自動細胞選別用液体取扱い機を備える自動化されたコロニー同定用液体取扱い機が、磁気選別ユニットを含み、
前記液体取扱い機は、さらに第1のインキュベーター、第2のインキュベーター、第2の自動顕微鏡、自動遠心分離機および自動開蓋機に接続されたロボティクス輸送レールに接続されており、
コントローラソフトウェアを含む、前記自動化されたシステム。 - 前記磁気選別ユニットが、iPS特異的マーカーを同定することによって、前記自動化された誘導ユニットにより作製された前記iPSCを、選択的に選別および単離する、請求項1に記載の自動化されたシステム。
- 前記単離したiPSCを増殖させ、かつ前記増殖させたiPSCを選択するための増殖ユニットをさらに含む、請求項2に記載の自動化されたシステム。
- 前記単離したiPSCを凍結させるための凍結ユニットをさらに含む、請求項1に記載の自動化されたシステム。
- 前記iPSCの培養密度を確認し、前記iPSCが培養密度の特徴を有しているか否かを決定する培養密度確認ユニット
をさらに含む、請求項1に記載の自動化されたシステム。 - 前記培養密度確認ユニットが、前記iPSCの前記培養密度を定期的に確認する、請求項5に記載の自動化されたシステム。
- 前記培養密度確認ユニットが、経時的に、より高頻度で、前記iPSCの前記培養密度を定期的に確認する、請求項5に記載の自動化されたシステム。
- 前記培養密度確認ユニットが、前記培養密度の特徴が70%〜100%の範囲に入っているか否かを確認する、請求項5に記載の自動化されたシステム。
- 前記自動化された誘導ユニットが、ウイルスベクターを使用してリプログラミングを開始する、請求項1に記載の自動化されたシステム。
- 前記自動化された誘導ユニットが、レトロウイルスまたはセンダイウイルスを使用して、リプログラミングを開始する、請求項9に記載の自動化されたシステム。
- 前記自動化された誘導ユニットが、小分子、ペプチド、タンパク質または核酸を使用してリプログラミングを開始する、請求項1に記載の自動化されたシステム。
- 前記細胞を電気穿孔するための電気穿孔ユニットをさらに含む、請求項1に記載の自動化されたシステム。
- 前記自動化された細胞プレーティングユニットで使用される細胞を得るための細胞バンキングユニットをさらに含む、請求項1に記載の自動化されたシステム。
- 前記バンキングユニットが、
生検材料をプレート上に置くための生検材料プレーティングユニット;
細胞を生育するための増殖および継代ユニット;ならびに
マイコプラズマの存在を試験するためのマイコプラズマ試験ユニット
を含む、請求項13に記載の自動化されたシステム。 - 前記マイコプラズマ試験ユニットが、発光法(glow luminescence)試験装置を含む、請求項14に記載の自動化されたシステム。
- 増殖させた細胞を分配するための分配ユニット;ならびに
前記細胞を保存するための貯蔵および回収システム
をさらに含む、請求項14に記載の自動化されたシステム。 - 前記貯蔵および回収システムが前記細胞を凍結する、請求項16に記載の自動化されたシステム。
- 前記増殖ユニットが、より高品質のクローンを自動的に増殖させかつ選択する、請求項3に記載の自動化されたシステム。
- 前記細胞が体細胞である、請求項1に記載の自動化されたシステム。
- 前記体細胞が線維芽細胞である、請求項19に記載の自動化されたシステム。
- より高品質のクローンが、固定する前よりも少ない枚数のプレートに固定される、請求項18に記載の自動化されたシステム。
Applications Claiming Priority (7)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201161565818P | 2011-12-01 | 2011-12-01 | |
US61/565,818 | 2011-12-01 | ||
US201161580007P | 2011-12-23 | 2011-12-23 | |
US61/580,007 | 2011-12-23 | ||
US201261700792P | 2012-09-13 | 2012-09-13 | |
US61/700,792 | 2012-09-13 | ||
PCT/US2012/067417 WO2013082509A1 (en) | 2011-12-01 | 2012-11-30 | Automated system for producing induced pluripotent stem cells or differentiated cells |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2015502747A JP2015502747A (ja) | 2015-01-29 |
JP6257520B2 true JP6257520B2 (ja) | 2018-01-10 |
Family
ID=48536128
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2014544949A Active JP6257520B2 (ja) | 2011-12-01 | 2012-11-30 | 人工多能性幹細胞または分化細胞を作製するための自動化されたシステム |
Country Status (14)
Country | Link |
---|---|
US (4) | US10273459B2 (ja) |
EP (2) | EP2785829B1 (ja) |
JP (1) | JP6257520B2 (ja) |
KR (5) | KR20240019378A (ja) |
CN (2) | CN110724636A (ja) |
AU (3) | AU2012345676B2 (ja) |
BR (2) | BR112014013152B1 (ja) |
CA (2) | CA2857295C (ja) |
DK (1) | DK2785829T3 (ja) |
ES (1) | ES2773863T3 (ja) |
IL (3) | IL299477A (ja) |
IN (1) | IN2014CN04920A (ja) |
WO (1) | WO2013082509A1 (ja) |
ZA (2) | ZA201403945B (ja) |
Families Citing this family (32)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US10428309B2 (en) * | 2011-12-01 | 2019-10-01 | New York Stem Cell Foundation, Inc. | Systems and methods for producing stem cells and differentiated cells |
JP6257520B2 (ja) | 2011-12-01 | 2018-01-10 | ニューヨーク ステム セル ファウンデーション インコーポレイテッド | 人工多能性幹細胞または分化細胞を作製するための自動化されたシステム |
WO2014201412A1 (en) * | 2013-06-13 | 2014-12-18 | The New York Stem Cell Foundation Inc. | Pluripotent stem cells derived from non-cryoprotected frozen tissue and methods for making and using the same |
WO2014210533A1 (en) * | 2013-06-27 | 2014-12-31 | The New York Stem Cell Foundation | Improved systems and methods for producing stem cells and differentiated cells |
US10202568B2 (en) * | 2013-08-12 | 2019-02-12 | Invivosciences Inc. | Automated cell culture system and method |
US20160222355A1 (en) * | 2014-12-26 | 2016-08-04 | New York Stem Cell Foundation, Inc. | Systems and methods for producing stem cells differentiated cells, and genetically edited cells |
US9828634B2 (en) | 2015-01-22 | 2017-11-28 | Regenerative Medical Solutions, Inc. | Markers for differentiation of stem cells into differentiated cell populations |
JP7370529B2 (ja) * | 2015-08-31 | 2023-10-30 | 剛士 田邊 | 多能性幹細胞製造システム、幹細胞の誘導方法、幹細胞の浮遊培養方法、幹細胞の浮遊培養器、人工多能性幹細胞の作製方法、及び動物細胞から特定の体細胞を作製する方法 |
CN105567642B (zh) * | 2016-02-01 | 2019-07-12 | 中国科学院生物物理研究所 | 一种着色性干皮病人多能干细胞的制备方法 |
CA3016575A1 (en) | 2016-03-03 | 2017-09-08 | New York Stem Cell Foundation, Inc. | Microglia derived from pluripotent stem cells and methods of making and using the same |
US20210284948A1 (en) * | 2016-07-21 | 2021-09-16 | Celyad | Method and apparatus for automated independent parallel batch-processing of cells |
US10354218B2 (en) | 2016-08-04 | 2019-07-16 | Fanuc Corporation | System and method for iPS cell bank using internet technology |
US11259520B2 (en) * | 2016-08-04 | 2022-03-01 | Fanuc Corporation | Stem cell manufacturing system, stem cell information management system, cell transport apparatus, and stem cell frozen storage apparatus |
US10373109B2 (en) | 2016-08-04 | 2019-08-06 | Fanuc Corporation | System and method for iPS cell bank using media |
EP3541922A4 (en) * | 2016-11-18 | 2020-06-03 | New York Stem Cell Foundation, Inc. | MICROFLUIDIC SYSTEM AND METHOD OF USE THEREOF |
EP3556842A4 (en) | 2017-01-20 | 2020-01-15 | FUJIFILM Corporation | CELL CULTURE APPARATUS AND METHOD |
CA3054119A1 (en) * | 2017-02-24 | 2018-08-30 | I Peace, Inc. | Cell treatment device, suspension culture vessel, and stem cell induction method |
CN110392733B (zh) * | 2017-02-27 | 2021-02-26 | 田边刚士 | 体细胞制造系统 |
EP3587550A4 (en) * | 2017-02-27 | 2021-06-16 | Koji Tanabe | CELL PROCESSING SYSTEM AND CELL PROCESSING DEVICE |
SI3645719T1 (sl) * | 2017-06-30 | 2022-07-29 | Inscripta, Inc., | Postopki, moduli, instrumenti in sistemi za avtomatizirano obdelavo celic |
GB2564437B (en) * | 2017-07-10 | 2020-11-04 | Univ Brunel | Method of testing a gene therapy vector using induced pluripotent stem cells |
AU2018324180A1 (en) | 2017-09-01 | 2020-03-19 | Lonza Cologne Gmbh | End-to-end cell therapy automation |
US10443074B2 (en) * | 2017-09-30 | 2019-10-15 | Inscripta, Inc. | Modification of cells by introduction of exogenous material |
EP3808834A4 (en) * | 2018-06-13 | 2021-08-11 | FUJIFILM Corporation | INFORMATION PROCESSING DEVICE, DERIVATION METHOD AND DERIVATION PROGRAM |
JP7090337B2 (ja) * | 2019-03-20 | 2022-06-24 | アイ ピース,インコーポレイテッド | 細胞処理システム及び細胞処理装置 |
JP6530874B1 (ja) * | 2019-03-20 | 2019-06-12 | 剛士 田邊 | 細胞処理システム及び細胞処理装置 |
JP6530577B1 (ja) * | 2019-03-20 | 2019-06-12 | 剛士 田邊 | 細胞処理システム及び細胞処理装置 |
JP2022551117A (ja) * | 2019-10-04 | 2022-12-07 | ニューヨーク ステム セル ファウンデーション インコーポレイテッド | 撮像システムおよびその使用方法 |
CN115087730A (zh) * | 2019-11-28 | 2022-09-20 | 香港大学 | 间充质基质细胞作为ipsc诱导的重编程来源 |
EP4355853A1 (en) * | 2021-06-17 | 2024-04-24 | Genentech, Inc. | Automated cell culture system |
CN114606198A (zh) * | 2022-03-25 | 2022-06-10 | 深圳临研医学有限公司 | 成骨发育不全诱导多能干细胞及其构建方法 |
WO2024020572A1 (en) | 2022-07-22 | 2024-01-25 | New York Stem Cell Foundation, Inc. | Methods and compositions for the treatment of ptsd |
Family Cites Families (31)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5843780A (en) | 1995-01-20 | 1998-12-01 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Primate embryonic stem cells |
US5994619A (en) | 1996-04-01 | 1999-11-30 | University Of Massachusetts, A Public Institution Of Higher Education Of The Commonwealth Of Massachusetts, As Represented By Its Amherst Campus | Production of chimeric bovine or porcine animals using cultured inner cell mass cells |
US5945577A (en) | 1997-01-10 | 1999-08-31 | University Of Massachusetts As Represented By Its Amherst Campus | Cloning using donor nuclei from proliferating somatic cells |
EP0996736A1 (en) | 1997-08-11 | 2000-05-03 | Chiron Corporation | Methods for genetically modifying t cells |
US8026096B1 (en) | 1998-10-08 | 2011-09-27 | Protein Sciences Corporation | In vivo active erythropoietin produced in insect cells |
US20110171185A1 (en) * | 1999-06-30 | 2011-07-14 | Klimanskaya Irina V | Genetically intact induced pluripotent cells or transdifferentiated cells and methods for the production thereof |
US6429013B1 (en) | 1999-08-19 | 2002-08-06 | Artecel Science, Inc. | Use of adipose tissue-derived stromal cells for chondrocyte differentiation and cartilage repair |
US6959438B2 (en) | 2000-12-06 | 2005-10-25 | Microsoft Corporation | Interface and related methods for dynamically generating a filter graph in a development system |
US8492140B2 (en) * | 2002-04-08 | 2013-07-23 | Octane Biotech Inc. | Automated tissue engineering system |
EP1445320A1 (en) | 2003-02-05 | 2004-08-11 | ARTEMIS Pharmaceuticals GmbH | Automated gene-targeting using non-toxic detectable markers |
ES2602559T3 (es) * | 2004-03-19 | 2017-02-21 | Cytori Therapeutics, Inc. | Soporte celular y dispositivos de contención de soporte celular que contienen células regenerativas |
US20070238175A1 (en) | 2006-04-06 | 2007-10-11 | Chi Alfred L | Standardization of processes for culturing primary cells |
GB0704406D0 (en) | 2007-03-07 | 2007-04-18 | Stem Cell Sciences Uk Ltd | Automated culture of stem cells |
JP2008307007A (ja) | 2007-06-15 | 2008-12-25 | Bayer Schering Pharma Ag | 出生後のヒト組織由来未分化幹細胞から誘導したヒト多能性幹細胞 |
KR20160005142A (ko) * | 2007-06-29 | 2016-01-13 | 셀룰러 다이내믹스 인터내셔널, 인코포레이티드 | 배아줄기세포 배양을 위한 자동화 방법 및 장치 |
US20100196923A1 (en) * | 2007-08-14 | 2010-08-05 | Anthony Atala | Pluripotent adult stem cells |
WO2010017562A2 (en) | 2008-08-08 | 2010-02-11 | Mayo Foundation For Medical Education And Research | Induced pluripotent stem cells |
US9045737B2 (en) | 2008-12-13 | 2015-06-02 | Dnamicroarray, Inc. | Artificial three-dimensional microenvironment niche culture |
EP3312269A1 (en) | 2008-12-17 | 2018-04-25 | The Scripps Research Institute | Generation and maintenance of stem cells |
EP2398897B1 (en) * | 2009-02-20 | 2017-06-28 | Cellular Dynamics International, Inc. | Methods and compositions for the differentiation of stem cells |
WO2010099539A1 (en) * | 2009-02-27 | 2010-09-02 | Cellular Dynamics International, Inc. | Differentiation of pluripotent cells |
CN101580816B (zh) | 2009-04-23 | 2012-02-29 | 中国科学院广州生物医药与健康研究院 | 诱导多能性干细胞快速高效产生的新型无血清培养基以及使用其的方法 |
US20110020814A1 (en) * | 2009-06-05 | 2011-01-27 | Ipierian, Inc. | Methods and compositions for selection of stem cells |
CN103087991B (zh) * | 2009-06-05 | 2018-06-12 | 富士胶片细胞动力公司 | 重编程t细胞和造血细胞的方法 |
WO2011026222A1 (en) * | 2009-09-01 | 2011-03-10 | Mcmaster University | Transformed human pluripotent stem cells and associated methods |
WO2011037301A1 (ko) * | 2009-09-22 | 2011-03-31 | 서울대학교병원 | 성체세포로부터 만능줄기세포를 유도하는 방법 및 그 방법에 의해 제조된 만능줄기세포 |
CA2796464C (en) | 2010-04-16 | 2021-08-03 | Immune Disease Institute, Inc. | Sustained polypeptide expression from synthetic, modified rnas and uses thereof |
US20110306516A1 (en) | 2010-06-15 | 2011-12-15 | The New York Stem Cell Foundation | Methods for producing induced pluripotent stem cells |
CA2822638C (en) | 2010-12-22 | 2021-02-16 | Fate Therapeutics, Inc. | Cell culture platform for single cell sorting and enhanced reprogramming of ipscs |
EP2481795A1 (en) | 2011-01-28 | 2012-08-01 | Universität für Bodenkultur Wien | Method of generating induced pluripotent stem cells and differentiated cells |
JP6257520B2 (ja) | 2011-12-01 | 2018-01-10 | ニューヨーク ステム セル ファウンデーション インコーポレイテッド | 人工多能性幹細胞または分化細胞を作製するための自動化されたシステム |
-
2012
- 2012-11-30 JP JP2014544949A patent/JP6257520B2/ja active Active
- 2012-11-30 BR BR112014013152-0A patent/BR112014013152B1/pt active IP Right Grant
- 2012-11-30 KR KR1020247003083A patent/KR20240019378A/ko not_active Application Discontinuation
- 2012-11-30 EP EP12852680.3A patent/EP2785829B1/en active Active
- 2012-11-30 KR KR1020217024088A patent/KR102439238B1/ko active IP Right Grant
- 2012-11-30 CN CN201911063727.3A patent/CN110724636A/zh active Pending
- 2012-11-30 DK DK12852680.3T patent/DK2785829T3/da active
- 2012-11-30 WO PCT/US2012/067417 patent/WO2013082509A1/en active Application Filing
- 2012-11-30 AU AU2012345676A patent/AU2012345676B2/en active Active
- 2012-11-30 IL IL299477A patent/IL299477A/en unknown
- 2012-11-30 US US13/691,258 patent/US10273459B2/en active Active
- 2012-11-30 CA CA2857295A patent/CA2857295C/en active Active
- 2012-11-30 IN IN4920CHN2014 patent/IN2014CN04920A/en unknown
- 2012-11-30 EP EP19203379.3A patent/EP3653698A1/en active Pending
- 2012-11-30 CA CA3118842A patent/CA3118842C/en active Active
- 2012-11-30 KR KR1020197031339A patent/KR20190124326A/ko active Application Filing
- 2012-11-30 KR KR1020227029866A patent/KR102631374B1/ko active IP Right Grant
- 2012-11-30 CN CN201280068799.7A patent/CN104080906A/zh active Pending
- 2012-11-30 KR KR1020147017723A patent/KR102039202B1/ko active Application Filing
- 2012-11-30 ES ES12852680T patent/ES2773863T3/es active Active
- 2012-11-30 BR BR122020005735-1A patent/BR122020005735B1/pt active IP Right Grant
-
2014
- 2014-05-29 ZA ZA2014/03945A patent/ZA201403945B/en unknown
- 2014-05-29 IL IL232869A patent/IL232869B/en unknown
-
2018
- 2018-05-28 ZA ZA2018/03502A patent/ZA201803502B/en unknown
- 2018-12-24 AU AU2018286561A patent/AU2018286561A1/en not_active Abandoned
-
2019
- 2019-04-29 US US16/398,117 patent/US10968435B2/en active Active
-
2021
- 2021-03-05 US US17/194,047 patent/US11732242B2/en active Active
- 2021-08-05 AU AU2021212081A patent/AU2021212081B2/en active Active
-
2022
- 2022-01-13 IL IL289822A patent/IL289822B2/en unknown
-
2023
- 2023-06-29 US US18/344,024 patent/US20240191203A1/en active Pending
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US11732242B2 (en) | Automated system for producing induced pluripotent stem cells or differentiated cells | |
US20220073884A1 (en) | Systems and methods for producing stem cells and differentiated cells | |
WO2016105578A1 (en) | Improved systems and methods for producing stem cells, differentiated cells, and genetically edited cells | |
JP2023139077A (ja) | マイクロ流体システムおよびその使用の方法 | |
EP3013941A1 (en) | Improved systems and methods for producing stem cells and differentiated cells | |
AU2024203546A1 (en) | Automated system for producing induced pluripotent stem cells or differentiated cells |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424 Effective date: 20150513 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20151023 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20160824 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20160906 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20161201 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20170525 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20170921 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20170929 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20171109 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20171205 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6257520 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |