JP6226887B2 - 多重デジタルpcr - Google Patents
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- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/16—Primer sets for multiplex assays
Description
a)装置を利用する工程であって、
(i)上記装置がキャビティを有するベース面と、
(ii)被覆デバイスと、を含み、ここで、
(iii)上記ベース面及び/又は上記被覆デバイス上の規定領域内で、反応成分が利用され、異なる反応成分を有する少なくとも2つの規定領域が存在する、工程と、
b)上記ベース面及び被覆デバイスを互いに対向して配置する工程と、
c)反応溶液を上記ベース面に添加する工程であって、該反応溶液が上記キャビティに入り込み、該反応溶液が上記標的分子を含有する、工程と、
d)増幅反応、検出反応及び/又は誘導体化反応を行う工程であって、上記反応溶液が上記反応成分と接触し、生成物分子が形成される、工程と、
e)少なくとも1つの標的分子及び/又は生成物分子を検出する工程であって、該標的分子及び/又は生成物分子の少なくとも2つの異なる部分が別個の規定領域で検出され、及び/又は少なくとも2つの異なる標的分子及び/又は生成物分子が別個の規定領域で検出される、工程と、
を含む、方法に関する。
該装置がキャビティを有するベース面と、
被覆デバイスと、を含み、
上記被覆デバイスが好ましくはマイクロアレイであり、
上記ベース面及び上記被覆デバイスが、反応空間が形成されるように互いに対向して配置され得る、
ことを特徴とする、装置に関する。
本発明によって達成される問題解決についての長い間未解決のままであった緊急の必要性の存在;
解決策の単純さが、特に複雑な教示に取って代わることにより進歩性(inventive activity)を示すこと;
改善、性能の向上、コストの削減、時間、材料、作業工程及びコストの節約;
信頼性の増大、誤差の排除、品質改善、維持管理からの解放、有効性の増大、収率の上昇。
2 被覆デバイス
3 被覆デバイス上の規定の領域(スポット)
4 キャビティ
5 生成物分子
6 サンプルの適用領域
7 障壁
8 可能な限り過剰なサンプル容量を保持するリザーバ
9 DNA標的分子
Claims (18)
- 少なくとも1つの標的分子及び/又は生成物分子を検出する方法であって、
a)以下の(i)〜(iii)を準備する工程、
(i)開口キャビティ、該キャビティの周縁部を形成する液体障壁、及び反応溶液を利用する領域を含むベース面、
(ii)被覆デバイス、
(iii)前記ベース面のキャビティの規定領域内反応成分、及び/又は前記被覆デバイス上の規定領域内反応成分、
ここで、少なくとも2つの規定領域が存在し、各規定領域は、互いに異なる第1及び第2反応成分を含み、
各規定領域内反応成分は前記被覆デバイスに結合している少なくとも1つのプライマーを含む、
b)少なくとも1つの標的分子を含有する反応溶液を、前記反応溶液を利用する領域上に添加する工程、
c)前記被覆デバイスを前記液体障壁内で前記ベース面上に載せることによって前記反応溶液を前記キャビティに分配する工程、
ここで、該反応溶液が前記キャビティに入り込み、各々のキャビティが前記被覆デバイスとともに閉鎖反応空間を形成する、
d)前記閉鎖反応空間内で、前記反応溶液が前記反応成分と接触し、増幅反応、検出反応及び/又は誘導体化反応が起こり、生成物分子が形成する工程、及び、
e)少なくとも1つの標的分子及び/又は生成物分子を検出する工程であって、該標的分子及び/又は生成物分子の少なくとも2つの異なる部分が別個の反応空間で検出され、及び/又は少なくとも2つの異なる標的分子及び/又は生成物分子が別個の反応空間で検出される、工程、
を含む、方法。 - 前記被覆デバイスがマイクロアレイであり、前記規定領域が前記マイクロアレイのスポットであることを特徴とする、請求項1に記載の方法。
- 前記規定領域が前記ベース面の前記キャビティに位置することを特徴とする、請求項1又は2に記載の方法。
- 前記反応成分がプライマー及び/又はプローブを含有することを特徴とする、請求項1〜3のいずれか一項に記載の方法。
- 前記被覆デバイスのスポットが前記ベース面の複数のキャビティを覆うことを特徴とする、請求項1〜4のいずれか一項に記載の方法。
- 前記反応成分又はその一部が前記ベース面及び/又は前記被覆面に固定化されていることを特徴とする、請求項1〜5のいずれか一項に記載の方法。
- 前記反応成分がマトリックス、又はゲル、又はアガロースゲル中で利用され、前記反応溶液を添加し及び/又は熱を供給した場合に前記反応成分が放出されることを特徴とする、請求項1〜6のいずれか一項に記載の方法。
- 前記増幅工程がデジタルPCR及び/又はデジタル固相PCRであることを特徴とする、請求項1〜7のいずれか一項に記載の方法。
- 前記反応溶液が核酸、タンパク質、天然物質、挿入顔料、酵素、添加剤、ウイルス、原核生物、真核生物、合成分子及び/又は生体分子の断片を含むことを特徴とする、請求項1〜8のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ベース面が2個〜1010個、又は102個〜108個、又は104個〜106個のキャビティを有し、及び/又は該キャビティの容量が1fL〜1mLであることを特徴とする、請求項1〜9のいずれか一項に記載の方法。
- 前記液体障壁が化学的及び/又は物理的な障壁であることを特徴とする、請求項1〜10のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ベース面が過剰な反応溶液を収容するリザーバを更に有することを特徴とする、請求項1〜11のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ベース面が非晶質、結晶性、準結晶性及び/又は繊維状の半導体材料からなることを特徴とする、請求項1〜12のいずれか一項に記載の方法。
- 前記被覆デバイスが非晶質、結晶性、準結晶性及び/又は繊維状の半導体材料、又はガラス若しくはポリマーからなることを特徴とする、請求項1〜13のいずれか一項に記載の方法。
- 前記生成物分子を続いて分析、シークエンシング及び/又は誘導体化することを特徴とする、請求項1〜14のいずれか一項に記載の方法。
- 請求項1〜15のいずれか一項に記載の方法を行う装置であって、
該装置がキャビティ、該キャビティの周縁部を形成する液体障壁、及び反応溶液を利用する領域を含むベース面と、
被覆デバイスと、を含み、
前記被覆デバイスがマイクロアレイであり、
前記被覆デバイスが該被覆デバイスに固定化された捕捉分子を含み、
前記ベース面及び前記被覆デバイスが、反応空間が形成されるように互いに対向して配置される、
ことを特徴とする、装置。 - 前記液体障壁が化学的及び/又は物理的な障壁であることを特徴とする、請求項16に記載の装置。
- 前記ベース面が過剰な反応溶液を収容するリザーバを更に有することを特徴とする、請求項16または17に記載の装置。
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