JP6145605B2 - 窒化ケイ素膜チップの活性化法 - Google Patents
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Description
すなわち、
(1)
窒化ケイ素膜チップをアルカリ液に接触させることで、ターゲットと反応するリガンドを固定化するバインダーと前記窒化ケイ素膜との結合頻度を高めたことを特徴とする窒化ケイ素膜チップの活性化法の構成とした。
(2)
前記接触が、温度10〜40℃の範囲で、かつ1〜10分間の反応であることを特徴とする(1)に記載の窒化ケイ素膜チップの活性化法の構成とした。
(3)
前記アルカリ液が、2〜5mol/Lの範囲の水酸化ナトリウム又は水酸化カリウム水溶液であることを特徴とする(1)又は(2)に記載の窒化ケイ素膜チップの活性化法の構成とした。
(4)
(1)〜(3)の何れかに記載の窒化ケイ素膜チップの活性化法で活性化されたチップに、前記バインダーを介して、前記リガンドを結合させたことを特徴とする窒化ケイ素膜センサーチップの構成とした。
(5)
前記バインダーが、有機ケイ素化合物を含むことを特徴とする(4)に記載の窒化ケイ素膜センサーチップの構成とした。
(6)
前記バインダーが、金ナノ粒子を含むことを特徴とする(4)又は(5)に記載の窒化ケイ素膜センサーチップの構成とした。
(7)
前記バインダーが、金ナノ粒子であり、前記金ナノ粒子をダイレクトに前記チップに固定化し、前記金ナノ粒子に前記リガンドを結合させたことを特徴とする(4)に記載の窒化ケイ素膜センサーチップの構成とした。
(8)
前記金ナノ粒子の前記チップへの固定化が、前記アルカリ処理後、5分以内に、金ナノ粒子コロイドを前記活性化窒化ケイ素膜チップに載せ、室温で、4時間以上接触させ、金ナノ粒子を固定化することを特徴とする(7)に記載の窒化ケイ素膜センサーチップの構成とした。
未修飾の窒化ケイ素膜チップ2は、フルイドウェアテクノロジーズ株式会社製、光学薄膜(SiN膜)センサチップ(形式SiN−Sensor、未処理(SiNのみ、導入なし)、2サンプル用、外形寸法18mm×26mm)を使用した。
アルカリ処理は、先ず未修飾の窒化ケイ素膜チップ2を、2M〜3.5M水酸化カリウムであるアルカリ液に、2分〜5分浸した。その後、そのチップを蒸留水で十分に洗浄し、窒素気流でブローさせた。その結果、窒化ケイ素膜チップ2の表面が活性化されて、活性化窒化ケイ素膜チップ2aとなる。その後、直ちに、工程(a)のアミノシラン処理を行った。アルカリ液は、前記水酸化カリウム液と同濃度の水酸化ナトリウム液を用いてもよい。
[工程(a)アミノシラン処理]
実施例1では、アミノシラン処理は、アルカリ処理により活性化させた活性化窒化ケイ素膜チップ2a(比較例1ではアルカリ処理をしない窒化ケイ素膜チップ2)に、アミノシラン(シランカップリング剤)を反応させるもので、10%の3−アミノプロピルトリメトキシシラン(APTMS)−エタノール(EtOH)溶液に、室温下、2分間浸漬して行った。
リポ酸導入反応は、アミノシラン基3のアミノ基(NH2)に、N−ヒドロキシコハク酸イミドで活性化したリポ酸(NHS−lipoic acid)を結合させる反応である。そのために、100mgのNHS−lipoic acidを20mLの脱水N,N−ジメチルホルムアミド(DMF)に溶解した溶液に、前述のアミノシラン処理したチップ(b)を室温下、2日間、窒素雰囲気下で反応(浸漬)させた。その結果、(d)に示す構造の化合物が活性化窒化ケイ素膜チップ2a上に形成される。すなわち、リポ酸基4を表面に有する図1下段のチップ(d)が作製される。
金ナノ粒子導入反応は、リポ酸のジスルフィド基(−S−S−)に金ナノ粒子5(20nm、Sigma−Aldrich社製 G1625)を固定化させる反応である。そのために、前記チップ(d)上に金ナノ粒子(GNP)コロイド溶液を滴下し、乾燥しないように、室温下、回転数45−50rpmで3時間振とうさせた。
アミノシラン処理、および、それに続く一連の操作後の図1下段実施例1のチップ(f)の「濡れ性」について試験し、図1上段比較例1の窒化ケイ素膜チップ(f)と比較した。
糖鎖導入反応は、金ナノ粒子5にリシンやリシン擬剤のリガンド6である糖鎖6a(ここでは、リシン擬剤やリシン結合性のラクトース誘導体(特許文献1))を結合させる反応である。そのために、66μMのラクトース誘導体−メタノール溶液に、金ナノ粒子固定化チップ(f)を浸し、マイクロウェーブを照射した(東京理化器械製、MWO−1000、45℃、300W、1時間)。
先ず、未処理の窒化ケイ素膜チップ2を、実施例1と同様の方法で、アルカリ処理する。これにより、活性化窒化ケイ素膜チップ2aが得られる。
アルカリ処理後、直ちに、活性化窒化ケイ素膜チップ2aに金ナノ粒子5(GNP)を接触させる。具体的には、アルカリ処理後、5分以内に活性化窒化ケイ素膜チップ2aに金ナノ粒子5(田中貴金属製、Auコロイド溶液−SC、粒径20nm)を直接載せ、図1の工程(e)と同様にして、4−6時間程度、室温下で固定化させる。その後、水で洗浄し、窒素ガスでチップ表面の水を除去すると、金ナノ粒子5が固定化された窒化ケイ素膜チップ(i)が得られる。
次に、金ナノ粒子5を固定化したチップ(i)に、図4の工程(j)を適用して、実施例1と同じく糖鎖6aであるラクトース糖誘導体をリシンのリガンド6として金ナノ粒子に固定化した。なお、工程(j)では、実施例1とは異なり、マイクロウェーブを照射することなく、自己集積化単分子膜法(self−assembled monolayer、SAM)によって、糖鎖を固定化した。具体的には、40℃にて、100μMラクトース糖誘導体−メタノール(MeOH)溶液中に、金ナノ粒子5を固定化した活性化窒化ケイ素膜チップ2aを14時間浸漬して、糖鎖を金ナノ粒子5に固定化した。
1a 窒化ケイ素膜センサーチップ
2 窒化ケイ素膜チップ
2a 活性化窒化ケイ素膜チップ
3 アミノシラン基
3a ガラス質
3b アミノ基
4 リポ酸基
5 金ナノ粒子
6 リガンド
6a 糖鎖
7 バインダー
10 窒化ケイ素膜センサーチップ(アルカリ未処理)
Claims (8)
- 窒化ケイ素膜チップを、2〜5mol/Lの範囲の水酸化ナトリウム又は水酸化カリウム水溶液であるアルカリ液に、温度10〜40℃の範囲で1〜10分間接触させることで、ターゲットと反応するリガンドを固定化するためのバインダーと前記窒化ケイ素膜との結合頻度を高めたことを特徴とする窒化ケイ素膜チップの活性化法。
- 前記アルカリ液によって処理された窒化ケイ素膜チップを酸洗浄なしで直ちに前記バインダーと反応させることを特徴とする請求項1に記載の窒化ケイ素膜チップの活性化法。
- 前記アルカリ液が、2〜3.5mol/Lの範囲の水酸化ナトリウム又は水酸化カリウム水溶液であることを特徴とする請求項1又は請求項2に記載の窒化ケイ素膜チップの活性化法。
- 請求項1〜請求項3の何れか1項に記載の窒化ケイ素膜チップの活性化法で活性化されたチップに、前記バインダーを介して、前記リガンドを結合させたことを特徴とする窒化ケイ素膜センサーチップの製造方法。
- 前記バインダーが、有機ケイ素化合物を含むことを特徴とする請求項4に記載の窒化ケイ素膜センサーチップの製造方法。
- 前記バインダーが、金ナノ粒子を含むことを特徴とする請求項4又は請求項5に記載の窒化ケイ素膜センサーチップの製造方法。
- 前記バインダーが、金ナノ粒子であり、前記金ナノ粒子をダイレクトに前記チップに固定化し、前記金ナノ粒子に前記リガンドを結合させたことを特徴とする請求項4に記載の窒化ケイ素膜センサーチップの製造方法。
- 前記金ナノ粒子の前記チップへの固定化が、前記アルカリ処理後、5分以内に、金ナノ粒子コロイドを前記活性化窒化ケイ素膜チップに載せ、室温で、4時間以上接触させ、金ナノ粒子を固定化することを特徴とする請求項7に記載の窒化ケイ素膜センサーチップの製造方法。
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