JP6141272B2 - 電気泳動ゲルの電気泳動耐用期間を延長するための電気泳動バッファー - Google Patents
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Description
本出願は、2011年7月14日出願の米国特許仮出願第61/507,883号の優先権を主張するものであり、その内容は参照として本明細書に組み込まれる。
開示される発明は、全体としてゲル電気泳動に関するものである。より具体的には、開示される発明は、ゲル電気泳動の間の電気泳動ゲルの電気泳動耐用期間を延長するための、少なくとも一つの双性イオンおよび水を含む電解液に関するものである。
2−アミノ−2−メチル−1,3−プロパンジオール(AMPD)、N−(1,1−ジメチル−2−ヒドロキシエチル)−3−アミノ−2−ヒドロキシプロパンスルホン酸(AMPSO)、N−グリシルグリシン(Gly−Gly)、4−(2−ヒドロキシエチル)ピペラジン−1−プロパンスルホン酸(EPPSまたはHEPPS)、3−(シクロヘキシルアミノ)−1−プロパンスルホン酸(CAPS)、3−(シクロヘキシルアミノ)−2−ヒドロキシ−1−プロパンスルホン酸(CAPSO)、2−(シクロヘキシルアミノ)エタンスルホン酸(CHES)、N,N−ビス[2−ヒドロキシエチル]−2−アミノエタンスルホン酸(BES)、(2−[2−ヒドロキシ−1,1−ビス(ヒドロキシメチル)エチルアミノ]エタンスルホン酸)(TES)、N−トリス(ヒドロキシメチル)メチル−3−アミノプロパンスルホン酸(TAPS)、および3−N−モルホリノプロパンスルホン酸(POPSO)から選択され得る少なくとも一つの双性イオン、ならびに
水
を含む電解液が開示される。
本発明による電解液を調製して、例えばLaemmliバッファーシステム(トリス−グリシン−SDS)のような従来の配合を用いて作製されたポリアクリルアミドゲルとともに用いる。代表的な電解液は以下の通りである。
2010年6月4日に作製された熟成されたプレキャストゲル(IDGel(商標))が、2011年6月10日の使用まで4℃で維持された。本発明による電解液は、実施例1と同一(EPPSバッファー)であり、従来のTGS Laemmliバッファー(TGSバッファー)と比較される。電気泳動は、180Vで30分間(EPPSバッファー)または40分間(TGSバッファー)行われる。電気泳動のランの後、泳動の最前部がゲルの底に到着するまでの泳動速度、および、15KDaから175KDaの間の質量である10本のバンドを含むプレステインド分子量マーカーの分解を測定する。結果は、本発明によるEPPSバッファーにおいて分離されたIDGel(商標)が、良好に泳動しまた鮮明ではっきりと分離されたバンドを表示したことを示している。対照TGSバッファーにおいて泳動したIDGel(商標)は、明らかにより不鮮明なバンドを示した(図2のNo.20を参照)。ゲルマトリックスはまた、ゲルが伸びてゲルカセットから出て垂れ下がっているとき、電気泳動の間に歪んでいる(図2のNo.30を参照)。さらに、カセットのガラス板とゲルとの間に、過熱による気泡がはっきり見える(図2のNo.10を参照)。TGSバッファーにおいて測定された温度は、65℃である。
使用期限を4か月過ぎた、8%から16%のアクリルアミドの勾配を有するプレキャストゲル(Lonza提供のPAGEr(商標)Gold)は、使用まで4℃で維持される。本発明による電解液は、実施例1と同一(EPPSバッファー)であり、従来のTGS Laemmliバッファー(TGSバッファー)と比較される。電気泳動は、300Vで21分間(EPPSバッファー)または200Vで74分間(TGSバッファー)行われる。ここで、図3AおよびBを参照する。電気泳動のランの後、泳動の最前部がゲルの底に到着するまでの泳動速度、および、プレステインド分子量マーカーおよび他のタンパク質のサンプルの分解を比較する。結果は、本発明によるEPPSバッファーにおいて分離されたPAGEr(商標)Goldゲル(図3A)が、全体として良好に泳動しまた鮮明ではっきりと分離されたバンドを表示したことを示している。対照TGSバッファーにおいて泳動したPAGEr(商標)Goldゲルは、あきらかにより不鮮明なバンドを示した(図3Bを参照)。それぞれのゲルに掛けられる電圧が異なることから、対照TGSバッファーにおいて分離されたPAGEr(商標)Goldゲルは、その泳動を完了するのにより時間がかかることが予想される。しかしながら、本発明によるEPPSバッファーにおいて分離されたPAGEr(商標)Goldゲルは、同一の電圧が掛けられた場合に予想される速度よりも迅速にその泳動を完了し、また対照TGSバッファーにおいて分離されたPAGEr(商標)Goldゲルよりも優れた分解をもたらした。
ここで、図4を参照する。EPPSベースのバッファーを含み、使用まで4℃で13か月間保管されたプレキャストゲル(12%のアクリルアミド)は、実施例1と同一の本発明による電解液(EPPSバッファー)において分離される。電気泳動は、225Vで19分間行われた。ここで、図4を参照するが、電気泳動のランの後、泳動の最前部がゲルの底に到着するまでの泳動速度、および、プレステインド分子量マーカーおよび他のタンパク質のサンプルの分解を評価する。結果は、本発明によるEPPSバッファーにおいて分離された全てのゲルが、その年齢にもかかわらず、良好に泳動し鮮明ではっきりと分離されたバンドを表示したことを示している。
Claims (14)
- 使用期限が過ぎている電気泳動ゲルの電気泳動耐用期間を延長するための電気泳動ランニングバッファーとしての電解液の使用であって、電解液が
2−アミノ−2−メチル−1,3−プロパンジオール(AMPD)、N−(1,1−ジメチル−2−ヒドロキシエチル)−3−アミノ−2−ヒドロキシプロパンスルホン酸(AMPSO)、N−グリシルグリシン(Gly−Gly)、4−(2−ヒドロキシエチル)ピペラジン−1−プロパンスルホン酸(EPPSまたはHEPPS)、3−(シクロヘキシルアミノ)−1−プロパンスルホン酸(CAPS)、3−(シクロヘキシルアミノ)−2−ヒドロキシ−1−プロパンスルホン酸(CAPSO)、2−(シクロヘキシルアミノ)エタンスルホン酸(CHES)、N,N−ビス[2−ヒドロキシエチル]−2−アミノエタンスルホン酸(BES)、(2−[2−ヒドロキシ−1,1−ビス(ヒドロキシメチル)エチルアミノ]エタンスルホン酸)(TES)、N−トリス(ヒドロキシメチル)メチル−3−アミノプロパンスルホン酸(TAPS)、3−N−モルホリノプロパンスルホン酸(MOPS)およびピペラジン−N,N’−ビス[2−ヒドロキシプロパンスルホン]酸(POPSO)から選択される少なくとも一つの双性イオン、ならびに
水
を含む電解液である、
使用。 - 双性イオンが、4−(2−ヒドロキシエチル)ピペラジン−1−プロパンスルホン酸(EPPSまたはHEPPS)、N−グリシルグリシン(Gly−Gly)および3−(シクロヘキシルアミノ)−2−ヒドロキシ−1−プロパンスルホン酸(CAPSO)から選択される、請求項1に記載の使用。
- 電解液のpHが、8.0から11.0までである、請求項1または2に記載の使用。
- トリス(ヒドロキシメチル)アミノメタン(TRIS)をさらに含む、請求項3に記載の使用。
- ドデシル硫酸ナトリウム(SDS)をさらに含む、請求項1に記載の使用。
- エチレンジアミン四酢酸(EDTA)、エチレングリコール四酢酸(EGTA)、ニトリロ三酢酸三ナトリウム、ヒドロキシエチルエチレンジアミン酢酸三ナトリウム(HEDTA三ナトリウム)、ジエチレントリアミノ酢酸五ナトリウム、またはウラミル酢酸二ナトリウムという名称のキレート剤をさらに含む、請求項1から5のいずれか一つに記載の使用。
- トリス(ヒドロキシメチル)アミノメタン(TRIS)の濃度が、10mMから500mMまで、50mMから150mMまで、50mMから300mMまで、または150mMである、請求項4に記載の使用。
- 双性イオンの濃度が、1mMから500mMまで、10mMから500mMまで、25mMから75mMまで、50mMから100mMまで、50mMである、または100mMである、請求項1から7のいずれか一つに記載の使用。
- ドデシル硫酸ナトリウム(SDS)の濃度が、0.5%(質量/体積)以下、0.1%(質量/体積)以下、または0.1%(質量/体積)である、請求項6から8のいずれか一つに記載の使用。
- エチレンジアミン四酢酸(EDTA)の濃度が、0.5%(質量/体積)以下、0.05%(質量/体積)以下、または0.03%(質量/体積)である、請求項7から9のいずれか一つに記載の使用。
- 少なくとも一つのサンプルをその中に含む使用期限が過ぎている電気泳動ゲルと接触している請求項1から10のいずれか一つに記載の電解液に電圧をかける段階を含む、請求項1から10のいずれか一つに記載の使用。
- 2−アミノ−2−メチル−1,3−プロパンジオール(AMPD)、N−(1,1−ジメチル−2−ヒドロキシエチル)−3−アミノ−2−ヒドロキシプロパンスルホン酸(AMPSO)、N−グリシルグリシン(Gly−Gly)、4−(2−ヒドロキシエチル)ピペラジン−1−プロパンスルホン酸(EPPSまたはHEPPS)、3−(シクロヘキシルアミノ)−1−プロパンスルホン酸(CAPS)、3−(シクロヘキシルアミノ)−2−ヒドロキシ−1−プロパンスルホン酸(CAPSO)、2−(シクロヘキシルアミノ)エタンスルホン酸(CHES)、N,N−ビス[2−ヒドロキシエチル]−2−アミノエタンスルホン酸(BES)、(2−[2−ヒドロキシ−1,1−ビス(ヒドロキシメチル)エチルアミノ]エタンスルホン酸)(TES)、N−トリス(ヒドロキシメチル)メチル−3−アミノプロパンスルホン酸(TAPS)、3−N−モルホリノプロパンスルホン酸(MOPS)およびピペラジン−N,N’−ビス[2−ヒドロキシプロパンスルホン]酸(POPSO)から選択される少なくとも一つの双性イオンの使用であって、使用期限が過ぎている電気泳動ゲルの電気泳動耐用期間を延長するための電気泳動ランニングバッファーとしての使用。
- 前記双性イオンが、4−(2−ヒドロキシエチル)ピペラジン−1−プロパンスルホン酸(EPPSまたはHEPPS)、N−グリシルグリシン(Gly−Gly)および3−(シクロヘキシルアミノ)−2−ヒドロキシ−1−プロパンスルホン酸(CAPSO)から選択される、請求項12に記載の使用。
- 少なくとも一つのサンプルをその中に含む使用期限が過ぎている電気泳動ゲルと接触している電気泳動ランニングバッファーに電圧をかける段階をさらに含む、請求項12または13に記載の使用。
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