JPWO2017065096A1 - ポリアクリルアミドゲル - Google Patents
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Abstract
Description
アクリルアミド系モノマーとしてのアクリルアミドと架橋剤とを表1に示した量で含み、さらにアクリルアミド誘導体と溶媒とを含む酸性側重合液及び塩基性側重合液を準備した。酸性側重合液の溶媒を水とし、塩基性側重合液の溶媒を水とグリセロールとした。アクリルアミド誘導体としては、シグマ−アルドリッチ社製の誘導体を、pH3〜10のゲルを製造するための量で使用した。酸性側重合液及び塩基性側重合液を酢酸/水酸化ナトリウム緩衝液を用いてpH7.0に調整した後、各重合液7.5mL当たり、100mgの過硫酸アンモニウムを水1.0mLに溶解した溶液を40μLと、N,N,N´,N´−テトラメチレンジアミン4μLと、を添加した。
250mMTris−HClpH8.8膨潤液を膨潤トレイに線状に広げ、表2に示したストリップ状の乾燥したIPGゲルと、上述した従来例のストリップ状の乾燥したIPGゲルと、をそれぞれ浸し、2時間以上静置して、IPGゲルを十分に膨潤させた後、膨潤後のIPGゲルを図1に示した測定容器の底部にシリコーングリースを用いて固定した。なお、膨潤は、各IPGゲルについて膨潤時間と膨潤後のIPGゲルの重量との関係を予め測定し、膨潤後のIPGゲルの重量がほぼ一定になる時間まで行った。次いで、ゲルのプラス極端部から約1cm離れた位置に0.5mm幅の切欠き部を形成し、この切欠き部に分子質量25kDaのマーカータンパク質を含むマーカータンパク質セット(バイオ−ラッド社製、Precision Plus Protein Dual Color Standard)と5%アガロース水溶液とを1:1に混合した液にBPB0.1μLを添加した液を導入して固化させ、試料部を形成した。
カイコ由来Sf9細胞を、8M尿素、4%CHAPS、30mMTis−HClpH8.8膨潤液に分散させ、可溶性画分の14.209μL(総タンパク質量50μg)あたり、400μMのIC5−OSu蛍光試薬(溶媒はジメチルスルホキシド、同仁化学研究所製)1μLと混合し、30分間氷上で静置して、タンパク質を蛍光色素Cy5で標識した。次いで、この液に10mMのL−リシンの溶液1μLを添加し、10分間氷上で静置して、標識反応を停止させた。得られた液のタンパク質量12μg分を分取し、膨潤バッファー(7M尿素、2Mチオ尿素、4%CHAPS、1.2%DeStreak Reagent(ジーイーヘルスケア社製)、0.5%IPG Buffer pH3−10NL)で、ゲル幅3.0mmのIPGゲルのためには総液量が125μL、その他のゲル幅のIPGゲルのためには総液量が80μL、になるように希釈し、サンプル液を得た。
Claims (2)
- 二次元電気泳動における一次元目の等電点電気泳動に用いられる、固定されたpH勾配を有し、ストリップ状の、乾燥したポリアクリルアミドゲルであって、
1.5mm以下の幅を有し、且つ、
前記ポリアクリルアミドを膨潤させて測定された、分子質量25kDaのマーカータンパク質の相対移動度が0.91以下である
ことを特徴とするポリアクリルアミドゲル。 - 前記ポリアクリルアミドゲルが、N,N´−ジアリルタルタルジアミドを架橋剤として用いて製造されたゲルである、請求項1に記載のポリアクリルアミドゲル。
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GERHARD BAUMANN ET AL.: "A Highly Crosslinked, Transparent Polyacrylamide Gel with Improved Mechanical Stability for Use in I", ANALYTICAL BIOCHEMISTRY, vol. Vol.70, JPN6016049814, 1976, pages 32 - 38 * |
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