JP6135761B2 - スシルプシンaおよびスシルプシンbを含む組成物並びにその抗肥満可能性 - Google Patents
スシルプシンaおよびスシルプシンbを含む組成物並びにその抗肥満可能性 Download PDFInfo
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Description
新疆(Xinjiang)ワイン用ブドウ由来のヒドロキシスチルベンダイマーとしてのスシルプシンAは、以前に、Kong Q等によって、J Sci Food Agric. 2010 Apr 15; 90(5):823‐8において報告されている。スシルプシンAは、そのアミロイド‐ベータ‐ペプチド凝集抑制活性(Riviere C等(2010年))、一重項酸素消去(singlet oxygen quenching)およびDNA保護活性(Kong Q等(2010年))およびベータ‐セクレターゼ抑制活性(Jeon SY等(2007年))について注目されている。
本発明のもう1つの目的は、スシルプシンAおよびスシルプシンBを含む組成物を使用して哺乳類細胞中の脂肪生成を抑制する方法を開示することである。
本発明のさらなる目的は、A) スシルプシンAおよびスシルプシンBと、B) ピセアタンノール並びにそのダイマーのスシルプシンAおよびスシルプシンBとを含む組成物をハマスゲの根茎の生物活性指針分別により取得する方法を開示することである。
本発明は、上記の目的を満たし、さらに、関連する利点を提供する。
本発明は、スシルプシンAおよびスシルプシンBを含む組成物並びにその抗脂肪生成/抗肥満可能性を開示する。また、本発明は、スシルプシンAおよびスシルプシンBを含む組成物を使用して哺乳類における肥満を処置する方法も開示する。さらに、本発明は、A) スシルプシンAおよびスシルプシンBと、B) ピセアタンノール並びにそのダイマーのスシルプシンAおよびスシルプシンBとを含む組成物をハマスゲの根茎の生物活性指針分別により取得する方法も開示する。本発明の他の特徴および利点は、本発明の本質を例として示す添付画像と併せた以下のより詳細な説明から明らかとなるであろう。
最も好ましい実施態様においては、本発明は、それぞれSTR#1およびSTR#2によって示されるスシルプシンAおよびスシルプシンBを含むことを特徴とする抗脂肪生成/抗肥満組成物に関する。
もう1つの最も好ましい実施態様においては、本発明は、哺乳類細胞内の脂肪生成を抑制する方法に関し、該方法は、脂肪生成性哺乳類細胞を、それぞれSTR#1およびSTR#2によって示されるスシルプシンAおよびスシルプシンBを含む組成物と接触させる処置を含む。
もう1つの最も好ましい実施態様においては、本発明は、STR#1およびSTR#2によって示されるスシルプシンAおよびスシルプシンBを含む組成物の、哺乳類細胞内での脂肪生成の抑制のための使用に関する。
1. ハマスゲの根茎を乾燥させ、該根茎を粉砕して粗粉末を調製する工程;
2. 工程1の粉末を3容量のヘキサンで抽出し、次いで、加熱して3時間還流処理し、濾過してヘキサン可溶性画分および廃物質を得る工程;
3. 工程2の廃物質を3容量のメタノールで抽出し、次いで、加熱して3時間還流処理し、濾過してメタノール可溶性活性画分および廃物質を得る工程;
4. 工程3のメタノール可溶性活性画分を水性メタノール中で可溶化し、クロロホルム(CHCl3)、酢酸エチル(EtOAc)およびメタノールで連続分別して、それぞれ、クロロホルム層、酢酸エチル層および水性メタノール層を得る工程;
5. 前記クロロホルム層、酢酸エチル層および水性メタノール層をさらなる生物活性指針分別に供する工程であって、ここで、生物活性パラメーターは前記クロロホルム層、酢酸エチル層および水性メタノール層の3T3-L1マウス脂肪細胞(哺乳類脂肪細胞)内での脂肪生成を抑制する能力である;
6. クロロホルム層、酢酸エチル層および水性メタノール層が示す脂肪生成抑制におけるIC50 (μg/ml)値(それぞれ、0、9.39および66.42)を算出する工程;
7. カラム分画を使用して、前記酢酸エチル層を分別して前記生物活性(脂肪生成抑制)バイオマーカーを同定する工程;該分別工程は、各画分をメタノール:クロロホルムの極性の上昇によって溶出させて前記酢酸エチル層(画分)のサブ画分を得る工程を含む;
8. 工程7のサブ画分を生物活性(抗脂肪生成)分析に供する工程;
9. 工程8の最も生物活性のサブ画分を同定し、これらの画分をLC-MS分析に供して前記生物活性成分スシルプシンAおよびスシルプシンBを同定する工程;
10. 工程7のサブ画分を分取HPLCに供して精製ダイマーを得、この精製ダイマーを高分解能質量分析(HRMS)、液体クロマトグラフィー・質量分析(LC-MS/MS)および核磁気共鳴分析(NMR)に供してスシルプシン生物活性成分の質量および構造を確認する工程:
ハマスゲの根茎の生物活性指針分別(図1)
方法
ハマスゲの乾燥させた根茎を粉砕して粗粉末を調製した。粉砕した粉末を3容量のヘキサンで抽出し、次いで、加熱して3時間還流処理し、濾過してヘキサン可溶性画分と廃物質を得た。廃物質を、さらに、3容量のメタノールで抽出し、次いで、加熱して3時間還流処理し、濾過してメタノール可溶性活性画分と廃物質を得た。メタノール可溶性活性画分を水性メタノール中で可溶化し、クロロホルム(CHCl3)、酢酸エチル(EtOAc)およびメタノールで連続分別して、それぞれ、クロロホルム層、酢酸エチル層および水性メタノール層を得た。上記クロロホルム層、酢酸エチル層および水性メタノール層を、生物活性パラメーターが上記クロロホルム層、酢酸エチル層および水性メタノール層の3T3‐L1マウス脂肪細胞(哺乳類脂肪細胞)内での脂肪生成を抑制する能力であるさらなる生物活性指針分別に供した。脂肪生成抑制の度合を試験するためにSalazar Olivo等(1995年)、Wu Z等(1998年)、Fu M等(2005年)から適応化した場合のオイルレッドO (Oil Red O)染色法の工程は、以下の実施例1Aにおいて説明する。結果は、下記の表Aに示している。
脂肪細胞の最終分化は、大細胞質性小胞内に大量の脂質の蓄積を伴う。脂肪細胞分化を細胞培養において測定する一般的なアッセイ法は、染料オイルレッド‐O (ORO)による。OROは、脂質可溶性鮮赤色染料であり、脂肪細胞分化の信頼し得る指標である。
オイルレッドO (ソルベントレッド27、スダンレッド5B、C.I. 26125、C26H24N4O)は、凍結切片上の中性トリグリセリドおよび脂質並びにパラフィン切片上のある種のリポタンパク質の染色において使用するリソクロム(脂溶性染料)ジアゾ染料である。この染料は、518 (359)nmにおいて最大吸収を有する赤色粉末の外観を有する。オイルレッドOは、スダン染色において使用する染料の1つである。同様な染料としては、スダンIII、スダンIVおよびスダンブラックBがある。染色は、アルコール固定により脂質を除去したときに、新鮮サンプル上で機能しなければならない。オイルレッドOは、はるかに深い赤色をもたらし、従って、染色を観察するのがはるかに容易であることは、スダンIIIおよびスダンIVと大きく置換わっている。オイルレッドOは、油溶性染料である。油溶性染料は、通常の水性アルコール染料溶媒中におけるよりも組織/細胞中のリポイド物質中においてより高い染料溶解性を示す。従って、油溶性染料は、細胞を深く染色する。
%抑制 = C−T/T * 100
上記式中、Cは、分化/未分化細胞におけるオイルレッドOの吸光度であり;
Tは、サンプル、即ち、処理分化/未分化細胞におけるオイルレッドOの吸光度である。
APCI 陽性モード;電源電圧:4.50kV;毛管温度:225度;毛管電圧:43.00V。
データ解釈:
スシルプシンAの質量は、470.13であると報告されている。上記プロトコールを使用しての陽性イオン化モードにおいて18.77分にて観察された質量[M+H]は471.08である。スシルプシンBの質量は、486であると報告されている。陽性イオン化モードにおいて17.94分にて観察された質量[M+H]は487.05である。
CYPRO‐AF (活性酢酸エチル画分)およびCYPRO‐D1 (ピセアタンノールダイマースシルプシンAおよびスシルプシンBに自然濃縮した酢酸エチルサブ画分)抽出物のマウスにおける抗肥満作用についての有効性評価
試験目的:
本試験の目的は、CYPRO‐AFおよびCYPRO‐D1抽出物のC57マウスにおける抗肥満作用についての有効性を評価することであった。
動物の群分けは、体重ランダム化および層別化法によって順化の最終日に実施した。動物の群分けは、使用する動物の体重変動が各群の平均体重の±20%を越えないように実施した。
試験品目Cypro‐AFおよびCypro‐D1を蒸留水に溶解し、種々の投与量を調合した。新たに調合した試験品目を、強制飼養(gavage)により経口経路で投与した。動物当りの投与量容量は、試験期間全体に亘って、全ての動物に対して10ml/kg体重に維持した。下記の表は、試験調合物の詳細を示している。
G1対照群動物は、10kcal%の脂肪を含有する標準の対照給餌飼料D12450Bを給餌し、G2〜G6群動物は、肥満誘発中および主試験中は、60kcal%の脂肪を含有する高脂肪給餌飼料D12492を給餌した。
主試験は、肥満誘発後に開始した。Cypro‐AFの3投与量とCypro‐D1の1投与量を、動物に、28日目から27日間連続して毎日投与した。主試験において続けた飼料の給餌は、肥満の誘発において実施した。G1対照およびG2高脂肪給餌対照群動物は蒸留水を投与され、一方、他の群の動物は、試験期間の28日目から54日目まで試験品目を受けた。投与容量は、個々の動物の週間体重に応じて維持した。試験の合計期間は61日間であった(7日間の順化期間+27日間の肥満誘発+27日間の主試験)。
以下の観察を、試験期間中に実施した。
飼料摂取量
個々の動物の飼料摂取量を記録した。週平均飼料摂取量を算出し、記録した。
体重
個々の動物の体重を、1日目の受入日およびその後の試験期間中1週間(±1日)毎に記録した。
臨床観察
全ての動物を、試験期間中、1日2回臨床観察した。
試験期間の終了時に、血液サンプルを、各動物から、血液学用にはエチレンジアミンテトラ酢酸カリウム(K2‐EDTA)抗凝固剤を含むチューブ内に、臨床化学用には抗凝固剤なしで採取した。抗凝固剤を含まないチューブに採取した血液サンプルは、3000rpmで10分間遠心分離して血清を得た。血液サンプルは、後眼窩叢穿刺(retro‐orbital plexus puncture)法により、軽微なエーテル麻酔下に微細毛管チューブの助けによって無痛的に採取した。以下の血液学および臨床化学パラメーターを分析した。
試験期間の終了時の後、55日目に、全ての動物を、ガス室において過剰の二酸化炭素に暴露することによって安楽死させ、下記の外的および内的全体解剖に供した。
全体解剖
動物を外的および内的全体病理学検査に供した。
全ての動物からの以下の臓器を、必要に応じて何らかの付着組織を取除き、乾燥を避けるためにできるだけ早く湿ったまま秤量した:脳、胸腺、肝臓、副腎、腎臓(対臓器)、脾臓、心臓、卵巣/睾丸(対臓器)。
全ての動物からの以下の脂肪沈着物を集め、秤量した。
1. 副睾丸脂肪
2. 褐色脂肪
3. 卵巣脂肪
本試験から得られた原データをコンピュータ統計処理に供した。データのコンピュータプリントアウト(付属書の形の)を、元の原データによって検証した。検証後、データを、体重、血液学および臨床化学パラメーター、臓器重量についてのデータに対するダネット事後検定による一元ANOVA(分散分析)に、GraphPad Prismバージョン5.01、GraphPadソフトウェアを使用して供した。全ての分析および比較を、下記で説明しているような報告全体に亘って、a) G1をG3、G4、G5およびG6と比較した場合およびb) G2をG3、G4、G5およびG6と比較した場合の上付き文字による表示によって示した95%信頼レベル(P < 0.05)において評価している:*は、どのような場合も当てはまる統計的有意性(P < 0.05)である。
以下に示すような、G1群{対照群(10kcal%の脂肪を含む)}対G3群{CYPRO‐AF 50mg/kg+高脂肪飼料(60kcal%の脂肪を含む)}、G4群{CYPRO‐AF 100mg/kg+高脂肪飼料(60kcal%の脂肪を含む)}、G5群{CYPRO‐AF 200mg/kg+高脂肪飼料(60kcal%の脂肪を含む)}およびG6群{CYPRO‐D1 10mg/kg+高脂肪飼料(60kcal%の脂肪を含む)}:
平均赤血球ヘモグロビン濃度(MCHC)
雄動物において、G1群{対照群(10kcal%の脂肪を含む)}と比較したG4群{CYPRO‐AF 100mg/kg+高脂肪飼料(60kcal%の脂肪を含む)}の平均MCHC値において統計的に有意な上昇があった。これらの変化は、投与量依存性応答がないので、偶然とみなし得る。
雌動物において、G1群{対照群(10kcal%の脂肪を含む)}と比較したG3群{CYPRO‐AF 50mg/kg+高脂肪飼料(60kcal%の脂肪を含む)}の平均MCVおよびMCH値において統計的に有意な上昇があった。これらの変化は、投与量依存性応答がないので、偶然とみなし得る。
雌動物において、G2群{高脂肪飼料対照群(60kcal%の脂肪を含む)}と比較したG5群{CYPRO‐AF 200mg/kg+高脂肪飼料(60kcal%の脂肪を含む)}の平均MCHおよびMCHC値において統計的に有意な上昇があった。この変化は、投与量依存性応答がないので、偶然とみなし得る。
総タンパク質
雌動物においては、G1群{対照群(10kcal%の脂肪を含む)}と比較したG3群{CYPRO‐AF 50mg/kg+高脂肪飼料(60kcal%の脂肪を含む)}およびG4群{CYPRO‐AF 100mg/kg+高脂肪飼料(60kcal%の脂肪を含む)}の平均総タンパク質値において統計的に有意の低下があった。これらの変化は、飼料の脂肪含有量の差に基づくものとみなした。
雌動物においては、G1群{対照群(10kcal%の脂肪を含む)}と比較したG3群{CYPRO‐AF 50mg/kg+高脂肪飼料(60kcal%の脂肪を含む)}、G4群{CYPRO‐AF 100mg/kg+高脂肪飼料(60kcal%の脂肪を含む)}、G5群{CYPRO‐AF 200mg/kg+高脂肪飼料(60kcal%の脂肪を含む)}およびG6群{CYPRO‐D1 10mg/kg+高脂肪飼料(60kcal%の脂肪を含む)}の平均トリグリセリド値において統計的に有意の低下があった。これらの変化は、飼料の脂肪含有量の差に基づくものとみなした。
雄動物においては、G1群{対照群(10kcal%の脂肪を含む)}と比較したG3群{CYPRO‐AF 50mg/kg+高脂肪飼料(60kcal%の脂肪を含む)}およびG6群{CYPRO‐D1 10mg/kg+高脂肪飼料(60kcal%の脂肪を含む)}の平均総コレステロール値において統計的に有意の上昇があった。これらの変化は、飼料の脂肪含有量の差に基づくものとみなした。
雌動物においては、G1群{対照群(10kcal%の脂肪を含む)}と比較したG5群{CYPRO‐AF 200mg/kg+高脂肪飼料(60kcal%の脂肪を含む)}の平均総コレステロール値において統計的に有意の上昇があった。これらの変化は、飼料の脂肪含有量の差に基づくものとみなした。
雄動物においては、G1群{対照群(10kcal%の脂肪を含む)}と比較したG5群{CYPRO‐AF 200mg/kg+高脂肪飼料(60kcal%の脂肪を含む)}の平均高密度脂質値において統計的に有意の低下があった。これらの変化は、飼料の脂肪含有量の差に基づくものとみなした。
雄動物においては、G1群{対照群(10kcal%の脂肪を含む)}と比較したG3群{CYPRO‐AF 50mg/kg+高脂肪飼料(60kcal%の脂肪を含む)}、G4群{CYPRO‐AF 100mg/kg+高脂肪飼料(60kcal%の脂肪を含む)}およびG6群{CYPRO‐D1 10mg/kg+高脂肪飼料(60kcal%の脂肪を含む)}の平均低密度脂質値において統計的に有意の上昇があった。これらの変化は、飼料の脂肪含有量の差に基づくものとみなした。
雌動物においては、G1群{対照群(10kcal%の脂肪を含む)}と比較したG5群{CYPRO‐AF 200mg/kg+高脂肪飼料(60kcal%の脂肪を含む)}の平均超低密度脂質値において統計的に有意の上昇があった。この変化は、飼料の脂肪含有量の差に基づくものとみなした。
トリグリセリド
雄動物においては、G2群高脂肪飼料対照(60kcal%の脂肪を含む)と比較したG3群{CYPRO‐AF 50mg/kg+高脂肪飼料(60kcal%の脂肪を含む)}、G4群{CYPRO‐AF 100mg/kg+高脂肪飼料(60kcal%の脂肪を含む)}、G5群{CYPRO‐AF 200mg/kg+高脂肪飼料(60kcal%の脂肪を含む)}およびG6群{CYPRO‐D1 10mg/kg+高脂肪飼料(60kcal%の脂肪を含む)}の平均トリグリセリド値において低下があった。平均トリグリセリド値変化におけるこの低下は、試験品目の作用に基づき得ていた。
雄動物において、G2群高脂肪飼料対照(60kcal%の脂肪を含む)と比較したG3群{CYPRO‐AF 50mg/kg+高脂肪飼料(60kcal%の脂肪を含む)}、G4群{CYPRO‐AF 100mg/kg+高脂肪飼料(60kcal%の脂肪を含む)}およびG5群{CYPRO‐AF 200mg/kg+高脂肪飼料(60kcal%の脂肪を含む)}の平均総コレステロール値において低下があった。平均総コレステロール値変化におけるこの低下は、試験品目の作用に基づき得ていた。
雄動物においては、G2群高脂肪飼料対照(60kcal%の脂肪を含む)と比較したG3群{CYPRO‐AF 50mg/kg+高脂肪飼料(60kcal%の脂肪を含む)}、G4群{CYPRO‐AF 100mg/kg+高脂肪飼料(60kcal%の脂肪を含む)}、G5群{CYPRO‐AF 200mg/kg+高脂肪飼料(60kcal%の脂肪を含む)}およびG6群{CYPRO‐D1 10mg/kg+高脂肪飼料(60kcal%の脂肪を含む)}の平均高密度脂質値において統計的に有意の低下があった。
平均高密度脂質値変化における統計的に有意な低下は、試験品目の作用に基づき得ていた。
雄動物においては、G2群高脂肪飼料対照(60kcal%の脂肪を含む)と比較したG5群{CYPRO‐AF 200mg/kg+高脂肪飼料(60kcal%の脂肪を含む)}の平均低密度脂質値において低下があった。平均低密度脂質値変化におけるこの低下は、試験品目の作用に基づき得ていた。
雄動物においては、G2群高脂肪飼料対照(60kcal%の脂肪を含む)と比較したG3群{CYPRO‐AF 50mg/kg+高脂肪飼料(60kcal%の脂肪を含む)}、G4群{CYPRO‐AF 100mg/kg+高脂肪飼料(60kcal%の脂肪を含む)}、G5群{CYPRO‐AF 200mg/kg+高脂肪飼料(60kcal%の脂肪を含む)}およびG6群{CYPRO‐D1 10mg/kg+高脂肪飼料(60kcal%の脂肪を含む)}の平均超低密度脂質値において低下があった。平均超低密度脂質値変化におけるこの低下は、試験品目の作用に基づき得ていた。
本発明は、さらに、以下の態様であり得る。
〔1〕それぞれ下記のSTR#1およびSTR#2によって示されるスシルプシンAおよびスシルプシンBを含むことを特徴とする抗脂肪生成/抗肥満組成物:
〔2〕脂肪生成性哺乳類細胞を、それぞれ下記のSTR#1およびSTR#2によって示されるスシルプシンAおよびスシルプシンBを含む組成物と接触させる処置を含むことを特徴とする、哺乳類細胞内の脂肪生成の抑制方法:
〔3〕哺乳類の脂肪生成に起因する肥満の治療的抑制方法であって、それぞれ下記のSTR#1およびSTR#2によって示されるスシルプシンAおよびスシルプシンBを含む組成物を、前記治療的抑制を必要とする哺乳類に食事補給する処置を含むことを特徴とする前記治療的抑制方法:
〔4〕下記のSTR#1およびSTR#2によって示されるスシルプシンAおよびスシルプシンBを含む組成物の、哺乳類細胞内での脂肪生成の抑制のための使用:
〔5〕下記の工程を含むことを特徴とする、ハマスゲの根茎を生物活性指針分別して、A) 下記のSTR#1およびSTR#2によって示されるスシルプシンAおよびスシルプシンBと、B) ピセアタンノール並びにそのダイマーのそれぞれ下記のSTR#1およびSTR#2によって示されるスシルプシンAおよびスシルプシンBとを含む抗脂肪生成/抗肥満組成物を取得する方法:
1. ハマスゲの根茎を乾燥させ、該根茎を粉砕して粗粉末を調製する工程;
2. 工程1の粉末を3容量のヘキサンで抽出し、次いで、加熱して3時間還流処理し、濾過してヘキサン可溶性画分および廃物質を得る工程;
3. 工程2の廃物質を3容量のメタノールで抽出し、次いで、加熱して3時間還流処理し、濾過してメタノール可溶性活性画分および廃物質を得る工程;
4. 工程3のメタノール可溶性活性画分を水性メタノール中で可溶化し、クロロホルム(CHCl 3 )、酢酸エチル(EtOAc)およびメタノールで連続分別して、それぞれ、クロロホルム層、酢酸エチル層および水性メタノール層を得る工程;
5. 前記クロロホルム層、酢酸エチル層および水性メタノール層をさらなる生物活性指針分別に供する工程であって、生物活性パラメーターが前記クロロホルム層、酢酸エチル層および水性メタノール層の3T3-L1マウス脂肪細胞(哺乳類脂肪細胞)内での脂肪生成を抑制する能力である工程;
6. クロロホルム層、酢酸エチル層および水性メタノール層が示す脂肪生成抑制におけるIC 50 (μg/ml)値(それぞれ、0、9.39および66.42)を算出する工程;
7. カラム分画を使用して、前記酢酸エチル層を分別して前記生物活性(脂肪生成抑制)バイオマーカーを同定する工程;該分別工程は、各画分をメタノール:クロロホルムの極性の上昇によって溶出させて前記酢酸エチル層(画分)のサブ画分を得る工程を含む;
8. 工程7の各サブ画分を生物活性(抗脂肪生成)分析に供する工程;
9. 工程8の最も生物活性のサブ画分を同定し、これらの画分をLC-MS分析に供して前記生物活性成分スシルプシンAおよびスシルプシンBを同定する工程;
10. 工程7の各サブ画分を分取HPLCに供して精製ダイマーを得、この精製ダイマーを高分解能質量分析(HRMS)、液体クロマトグラフィー・質量分析(LC-MS/MS)および核磁気共鳴分析(NMR)に供して各スシルプシン生物活性成分の分子量および構造を確認する工程:
Claims (8)
- ハマスゲの根茎の酢酸エチル画分を含有する、哺乳類細胞中の脂肪生成の抑制に使用するための及び/又は哺乳類の脂肪生成に起因する肥満の治療的抑制に使用するための組成物であって、前記酢酸エチル画分が、それぞれ下記のSTR#1およびSTR#2によって示されるスシルプシンAおよびスシルプシンBを含み、
1. ハマスゲの根茎を乾燥させ、該根茎を粉砕して粗粉末を調製する工程;
2. 工程1の粉末を3容量のヘキサンで抽出し、次いで、加熱して3時間還流処理し、濾過してヘキサン可溶性画分および廃物質を得る工程;
3. 工程2の廃物質を3容量のメタノールで抽出し、次いで、加熱して3時間還流処理し、濾過してメタノール可溶性活性画分および廃物質を得る工程;及び
4. 工程3のメタノール可溶性活性画分を水性メタノール中で可溶化し、クロロホルム(CHCl 3 )、酢酸エチル(EtOAc)およびメタノールで連続分別して、酢酸エチル層として前記酢酸エチル画分を得る工程
を含む方法によって得られる、組成物。 - 脂肪生成性非ヒト哺乳類細胞を、それぞれ下記のSTR#1およびSTR#2によって示されるスシルプシンAおよびスシルプシンBを含むハマスゲの根茎の酢酸エチル画分を含有する組成物と接触させる処置を含む、非ヒト哺乳類細胞内の脂肪生成の抑制方法であって、
1. ハマスゲの根茎を乾燥させ、該根茎を粉砕して粗粉末を調製する工程;
2. 工程1の粉末を3容量のヘキサンで抽出し、次いで、加熱して3時間還流処理し、濾過してヘキサン可溶性画分および廃物質を得る工程;
3. 工程2の廃物質を3容量のメタノールで抽出し、次いで、加熱して3時間還流処理し、濾過してメタノール可溶性活性画分および廃物質を得る工程;及び
4. 工程3のメタノール可溶性活性画分を水性メタノール中で可溶化し、クロロホルム(CHCl 3 )、酢酸エチル(EtOAc)およびメタノールで連続分別して、酢酸エチル層として前記酢酸エチル画分を得る工程
を含む方法によって得られる、方法。 - 非ヒト哺乳類の脂肪生成に起因する肥満の治療的抑制方法であって、それぞれ下記のSTR#1およびSTR#2によって示されるスシルプシンAおよびスシルプシンBを含むハマスゲの根茎の酢酸エチル画分を含有する組成物を、前記治療的抑制を必要とする非ヒト哺乳類に食事補給する処置を含み、
1. ハマスゲの根茎を乾燥させ、該根茎を粉砕して粗粉末を調製する工程;
2. 工程1の粉末を3容量のヘキサンで抽出し、次いで、加熱して3時間還流処理し、濾過してヘキサン可溶性画分および廃物質を得る工程;
3. 工程2の廃物質を3容量のメタノールで抽出し、次いで、加熱して3時間還流処理し、濾過してメタノール可溶性活性画分および廃物質を得る工程;及び
4. 工程3のメタノール可溶性活性画分を水性メタノール中で可溶化し、クロロホルム(CHCl 3 )、酢酸エチル(EtOAc)およびメタノールで連続分別して、酢酸エチル層として前記酢酸エチル画分を得る工程
を含む方法によって得られる、方法。 - 哺乳類細胞内での脂肪生成の抑制のための薬剤を調製するための、それぞれ下記のSTR#1およびSTR#2によって示されるスシルプシンAおよびスシルプシンBを含むハマスゲの根茎の酢酸エチル画分を含有する組成物の使用であって、
1. ハマスゲの根茎を乾燥させ、該根茎を粉砕して粗粉末を調製する工程;
2. 工程1の粉末を3容量のヘキサンで抽出し、次いで、加熱して3時間還流処理し、濾過してヘキサン可溶性画分および廃物質を得る工程;
3. 工程2の廃物質を3容量のメタノールで抽出し、次いで、加熱して3時間還流処理し、濾過してメタノール可溶性活性画分および廃物質を得る工程;及び
4. 工程3のメタノール可溶性活性画分を水性メタノール中で可溶化し、クロロホルム(CHCl 3 )、酢酸エチル(EtOAc)およびメタノールで連続分別して、酢酸エチル層として前記酢酸エチル画分を得る工程
を含む方法によって得られる、使用。 - 下記の工程を含むことを特徴とする、ハマスゲの根茎を生物活性指針分別して、哺乳類細胞中の脂肪生成の抑制に使用するための及び/又は哺乳類の脂肪生成に起因する肥満の治療的抑制に使用するための組成物であって、(A) それぞれ下記のSTR#1およびSTR#2によって示されるスシルプシンAおよびスシルプシンBを含む組成物と、(B) ピセアタンノール並びにそのダイマーのそれぞれ下記のSTR#1およびSTR#2によって示されるスシルプシンAおよびスシルプシンBを含む組成物とを取得する方法:
1. ハマスゲの根茎を乾燥させ、該根茎を粉砕して粗粉末を調製する工程;
2. 工程1の粉末を3容量のヘキサンで抽出し、次いで、加熱して3時間還流処理し、濾過してヘキサン可溶性画分および廃物質を得る工程;
3. 工程2の廃物質を3容量のメタノールで抽出し、次いで、加熱して3時間還流処理し、濾過してメタノール可溶性活性画分および廃物質を得る工程;
4. 工程3のメタノール可溶性活性画分を水性メタノール中で可溶化し、クロロホルム(CHCl3)、酢酸エチル(EtOAc)およびメタノールで連続分別して、それぞれ、クロロホルム層、酢酸エチル層および水性メタノール層を得る工程;及び
5. カラム分画を使用して、前記酢酸エチル層を分画する工程であって、各画分をメタノール:クロロホルムの極性の上昇によって溶出させて、前記酢酸エチル層(画分)のサブ画分として前記組成物(A)及び(B)を得ることを含む、工程:
- ハマスゲの根茎の酢酸エチル画分を含有する、哺乳類細胞中の脂肪生成の抑制に使用するための医薬組成物であって、前記酢酸エチル画分が、以下の工程、
1. ハマスゲの根茎を乾燥させ、該根茎を粉砕して粗粉末を調製する工程;
2. 工程1の粉末を3容量のヘキサンで抽出し、次いで、加熱して3時間還流処理し、濾過してヘキサン可溶性画分および廃物質を得る工程;
3. 工程2の廃物質を3容量のメタノールで抽出し、次いで、加熱して3時間還流処理し、濾過してメタノール可溶性活性画分および廃物質を得る工程;及び
4. 工程3のメタノール可溶性活性画分を水性メタノール中で可溶化し、クロロホルム(CHCl 3 )、酢酸エチル(EtOAc)およびメタノールで連続分別して、酢酸エチル層として前記酢酸エチル画分を得る工程
を含む方法によって得られる、医薬組成物。 - ハマスゲの根茎の酢酸エチル画分を含有する、哺乳類の脂肪生成に起因する肥満の治療的抑制に使用するための医薬組成物であって、前記酢酸エチル画分が、以下の工程、
1. ハマスゲの根茎を乾燥させ、該根茎を粉砕して粗粉末を調製する工程;
2. 工程1の粉末を3容量のヘキサンで抽出し、次いで、加熱して3時間還流処理し、濾過してヘキサン可溶性画分および廃物質を得る工程;
3. 工程2の廃物質を3容量のメタノールで抽出し、次いで、加熱して3時間還流処理し、濾過してメタノール可溶性活性画分および廃物質を得る工程;及び
4. 工程3のメタノール可溶性活性画分を水性メタノール中で可溶化し、クロロホルム(CHCl 3 )、酢酸エチル(EtOAc)およびメタノールで連続分別して、酢酸エチル層として前記酢酸エチル画分を得る工程
を含む方法によって得られる、医薬組成物。 - ハマスゲの根茎の酢酸エチル画分の調製方法であって、以下の工程、
1. ハマスゲの根茎を乾燥させ、該根茎を粉砕して粗粉末を調製する工程;
2. 工程1の粉末を3容量のヘキサンで抽出し、次いで、加熱して3時間還流処理し、濾過してヘキサン可溶性画分および廃物質を得る工程;
3. 工程2の廃物質を3容量のメタノールで抽出し、次いで、加熱して3時間還流処理し、濾過してメタノール可溶性活性画分および廃物質を得る工程;及び
4. 工程3のメタノール可溶性活性画分を水性メタノール中で可溶化し、クロロホルム(CHCl 3 )、酢酸エチル(EtOAc)およびメタノールで連続分別して、酢酸エチル層として前記酢酸エチル画分を得る工程
を含む、方法。
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