JP6073682B2 - 電位依存性カルシウムチャネル遺伝子解析による薬物感受性の評価方法 - Google Patents
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Description
本発明は、電位依存性カルシウムチャネル（ＶＤＣＣ）遺伝子解析により薬物感受性を評価する方法に関する。具体的には、ＶＤＣＣ遺伝子の遺伝子多型または当該遺伝子多型により構成されるハプロタイプと個体の薬物感受性および疾患脆弱性とを関連づける、薬物感受性および疾患脆弱性の評価方法等、より具体的には、上記遺伝子多型またはハプロタイプの解析結果に基づいて、個体における薬物感受性および疾患脆弱性の高低（または有無）の傾向を評価する方法等に関する。
疼痛は、医療現場で最も頻繁に見られる病態であり、疾患そのものよりもむしろ、疾患に伴う疼痛の方が患者にとって深刻である場合が多い。痛覚は、生体の警告システムであるという点で重要な役割を有するが、過度の痛みは適切に制御しないとＱＯＬ（Ｑｕａｌｉｔｙ ｏｆ Ｌｉｆｅ）を著しく低下させることになる。近年、ペインコントロールの重要性が認識され、疼痛治療を含む緩和医療が飛躍的に進歩しつつあり、各種鎮痛薬の使用機会および使用量は増加傾向にある。
電位依存性カルシウム（Ｃａ２＋）チャネル（ＶＤＣＣ）は、α１、α２、β、γ、δの５種のサブユニットから構成されていて（図１参照）、細胞内外の電位差により、細胞内にＣａ２＋を流入させる。これらのサブユニットのうち、主に、α１サブユニットを経て、細胞外から細胞内へ流入する。α１サブユニットの構造の違いから、チャネルの伝導率、イオン選択性、活性化・不活性化反応の時間、薬物に対する特異性が異なる。これまでに１０種類のα１サブユニットをコードする遺伝子が同定されており、そのうち、Ｃａｖ２カルシウムチャネルファミリー（いわゆるＣａｖ２．１、Ｃａｖ２．２、Ｃａｖ２．３）は神経細胞のシナプス前膜に存在し、神経伝達物質遊離の制御に関わることが知られている（非特許文献１；Ｔｅｄｆｏｒｄ ＨＷ．，Ｚａｍｐｏｎｉ ＧＷ，Ｄｉｒｅｃｔ Ｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃａｖ２ ｃａｌｃｉｕｍ ｃｈａｎｎｅｌｓ．，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｒｅｖ．，（２００６）５８：８３７−８６２．）。Ｃａｖ２．１、Ｃａｖ２．２およびＣａｖ２．３チャネルはそれぞれＣＡＣＮＡ１Ａ、ＣＡＣＮＡ１ＢおよびＣＡＣＮＡ１Ｅ遺伝子にコードされ、ヒトの第１９、第９、第１染色体に位置する。さらに、Ｃａｖ２カルシウムチャネルファミリーはＧタンパク質を介して、オピオイド受容体活性化により抑制される（非特許文献２；Ｓｏｌｄｏ ＢＬ，Ｍｏｉｓｅｓ ＨＣ，μ−ｏｐｉｏｉｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｉｎｈｉｂｉｔｓ Ｎ− ａｎｄ Ｐ−ｔｙｐｅ Ｃａ２＋ ｃｈａｎｎｅｌ ｃｕｒｒｅｎｔｓ ｉｎ ｍａｇｎｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｎｅｕｒｏｎｓ ｏｆ ｔｈｅ ｒａｔ ｓｕｐｒａｏｔｉｃ ｎｕｃｌｅｕｓ．，Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．，（１９９８）５１３：７８７−８０４．）。遺伝子欠損マウスを用いた研究により、これらのチャネルが痛み伝達およびオピオイド鎮痛において重要な役割を持つことが明らかになった。Ｃａｖ２．３欠損マウスにおいて、同じ量のモルヒネ投与により、野生型マウスに比べ、より強い鎮痛作用が認められた（非特許文献３；田邊 勉，Ｃａチャネルと痛み伝達，日薬理誌，（２００６）１２７：１５６−１６０．）。２００４年の年末に、米国の食品医薬品局（ＦＤＡ）は、モルヒネなどの他の治療法に不耐性または抵抗性を示すがん性疼痛の治療のために、Ｃａｖ２．２チャネルの阻害薬（Ｚｉｃｏｎｏｔｉｄｅ）髄腔内投与を承認した。
βサブユニットは、親水性の高いタンパク質で膜貫通部位を持たず、細胞質側からα１サブユニットと相互作用し、Ｃａ２＋電流量やチャネルの開閉動態の変化などに影響を与える。
α２−δサブユニットは、１ヶ所の膜貫通部位を持つδと、全体が細胞外にあり、糖鎖によって負に荷電しているα２とがＳ−Ｓ結合で結ばれた形で存在する。現在まで、少なくとも４種類の遺伝子にコードされているα２δ−１、α２δ−２、α２δ−３、α２δ−４が確認されている。糖尿病性神経障害性疼痛や帯状疱疹を伴う神経障害性疼痛の治療薬として使われでいるｐｒｅｇａｂａｌｉｎやｇａｂａｐｅｎｔｉｎは、α２δ−１サブユニットに結合することにより、シナプスにおける神経伝達物質の放出を制御して効果を発揮していると考えられている（非特許文献４；Ｆｉｅｌｄ ＭＪ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ α２δ−１ ｓｕｂｕｎｉｔ ｏｆ ｖｏｌｔａｇｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃａｌｃｉｕｍ ｃｈａｎｎｅｌｓ ａｓ ａ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｔａｒｇｅｔ ｆｏｒ ｐａｉｎ ｍｅｄｉａｔｉｎｇ ｔｈｅ ａｎａｌｇｅｓｉｃ ａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｐｒｅｇａｂａｌｉｎ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，（２００６）１０３：１７５３７−１７５４２．）。
電位依存性カルシウム（Ｃａ２＋）チャネル（ＶＤＣＣ）は、α１、α２、β、γ、δの５種のサブユニットから構成されていて（図１参照）、細胞内外の電位差により、細胞内にＣａ２＋を流入させる。これらのサブユニットのうち、主に、α１サブユニットを経て、細胞外から細胞内へ流入する。α１サブユニットの構造の違いから、チャネルの伝導率、イオン選択性、活性化・不活性化反応の時間、薬物に対する特異性が異なる。これまでに１０種類のα１サブユニットをコードする遺伝子が同定されており、そのうち、Ｃａｖ２カルシウムチャネルファミリー（いわゆるＣａｖ２．１、Ｃａｖ２．２、Ｃａｖ２．３）は神経細胞のシナプス前膜に存在し、神経伝達物質遊離の制御に関わることが知られている（非特許文献１；Ｔｅｄｆｏｒｄ ＨＷ．，Ｚａｍｐｏｎｉ ＧＷ，Ｄｉｒｅｃｔ Ｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃａｖ２ ｃａｌｃｉｕｍ ｃｈａｎｎｅｌｓ．，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｒｅｖ．，（２００６）５８：８３７−８６２．）。Ｃａｖ２．１、Ｃａｖ２．２およびＣａｖ２．３チャネルはそれぞれＣＡＣＮＡ１Ａ、ＣＡＣＮＡ１ＢおよびＣＡＣＮＡ１Ｅ遺伝子にコードされ、ヒトの第１９、第９、第１染色体に位置する。さらに、Ｃａｖ２カルシウムチャネルファミリーはＧタンパク質を介して、オピオイド受容体活性化により抑制される（非特許文献２；Ｓｏｌｄｏ ＢＬ，Ｍｏｉｓｅｓ ＨＣ，μ−ｏｐｉｏｉｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｉｎｈｉｂｉｔｓ Ｎ− ａｎｄ Ｐ−ｔｙｐｅ Ｃａ２＋ ｃｈａｎｎｅｌ ｃｕｒｒｅｎｔｓ ｉｎ ｍａｇｎｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｎｅｕｒｏｎｓ ｏｆ ｔｈｅ ｒａｔ ｓｕｐｒａｏｔｉｃ ｎｕｃｌｅｕｓ．，Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．，（１９９８）５１３：７８７−８０４．）。遺伝子欠損マウスを用いた研究により、これらのチャネルが痛み伝達およびオピオイド鎮痛において重要な役割を持つことが明らかになった。Ｃａｖ２．３欠損マウスにおいて、同じ量のモルヒネ投与により、野生型マウスに比べ、より強い鎮痛作用が認められた（非特許文献３；田邊 勉，Ｃａチャネルと痛み伝達，日薬理誌，（２００６）１２７：１５６−１６０．）。２００４年の年末に、米国の食品医薬品局（ＦＤＡ）は、モルヒネなどの他の治療法に不耐性または抵抗性を示すがん性疼痛の治療のために、Ｃａｖ２．２チャネルの阻害薬（Ｚｉｃｏｎｏｔｉｄｅ）髄腔内投与を承認した。
βサブユニットは、親水性の高いタンパク質で膜貫通部位を持たず、細胞質側からα１サブユニットと相互作用し、Ｃａ２＋電流量やチャネルの開閉動態の変化などに影響を与える。
α２−δサブユニットは、１ヶ所の膜貫通部位を持つδと、全体が細胞外にあり、糖鎖によって負に荷電しているα２とがＳ−Ｓ結合で結ばれた形で存在する。現在まで、少なくとも４種類の遺伝子にコードされているα２δ−１、α２δ−２、α２δ−３、α２δ−４が確認されている。糖尿病性神経障害性疼痛や帯状疱疹を伴う神経障害性疼痛の治療薬として使われでいるｐｒｅｇａｂａｌｉｎやｇａｂａｐｅｎｔｉｎは、α２δ−１サブユニットに結合することにより、シナプスにおける神経伝達物質の放出を制御して効果を発揮していると考えられている（非特許文献４；Ｆｉｅｌｄ ＭＪ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ α２δ−１ ｓｕｂｕｎｉｔ ｏｆ ｖｏｌｔａｇｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃａｌｃｉｕｍ ｃｈａｎｎｅｌｓ ａｓ ａ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｔａｒｇｅｔ ｆｏｒ ｐａｉｎ ｍｅｄｉａｔｉｎｇ ｔｈｅ ａｎａｌｇｅｓｉｃ ａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｐｒｅｇａｂａｌｉｎ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，（２００６）１０３：１７５３７−１７５４２．）。
本発明が解決しようとする課題は、薬物感受性または疾患脆弱性、具体的には鎮痛薬投与必要回数、総鎮痛薬量、疼痛感受性、薬物依存脆弱性、および喫煙行動等に関する薬物感受性または疾患脆弱性の個体差（個体ごとの傾向）を、電位依存性カルシウムチャネル遺伝子多型を用いて評価する（予測等する）方法を提供することにある。
本発明者は、電位依存性カルシウムチャネル（ＶＤＣＣ）遺伝子に注目し、従来知見および臨床データに基づいて、鋭意研究を行った。その結果、各電位依存性カルシウムチャネルサブユニット遺伝子多型と、鎮痛薬等の薬物感受性または疼痛感受性を含めた疾患脆弱性との相関関係を解析することにより、いくつかの有用な遺伝子多型を同定した。そして、同定したこれら遺伝子多型間の連鎖不平衡を見出し、さらに薬物感受性または疾患脆弱性との有意な相関を明らかにした。
詳しくは、電位依存性カルシウムチャネル遺伝子多型が異なることによって、鎮痛薬の投与必要量が変化すること及び疼痛感受性の閾値が変化することを明らかにし、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明は以下の通りである。
１．電位依存性カルシウムチャネル遺伝子の遺伝子多型、または該遺伝子多型により構成されるハプロタイプと、個体の薬物感受性とを関連づけることを特徴とする、薬物感受性の評価方法。
２．前記遺伝子多型または前記ハプロタイプの解析結果に基づいて、個体の薬物感受性の高低（または有無）の傾向を評価することを特徴とする、前項１に記載の方法。ここで、「評価する」とは、具体的には、「予め知る」または「予測する」ことを意味することがある。
３．以下の工程：
（１）健常者における連鎖不平衡解析およびハプロタイプ解析を行い、連鎖不平衡ブロック内の遺伝子多型を選択する工程、
（２）被験者における該遺伝子多型の遺伝子型と薬物感受性との間の関連を解析する工程、および
（３）被験者において薬物感受性と有意に関連した遺伝子多型を薬物感受性の評価に用いる工程
を含む、前項１または２に記載の方法。
４．電位依存性カルシウムチャネル遺伝子の遺伝子多型、または該遺伝子多型により構成されるハプロタイプと、個体の疾患脆弱性とを関連づけることを特徴とする、疾患脆弱性の評価方法。
５．前記遺伝子多型または前記ハプロタイプの解析結果に基づいて、個体の疾患脆弱性の高低（または有無）の傾向を評価することを特徴とする、前項４に記載の方法。ここで、「評価する」とは、具体的には、「予め知る」または「予測する」ことを意味することがある。
６．以下の工程：
（１）健常者における連鎖不平衡解析およびハプロタイプ解析を行い、連鎖不平衡ブロック内の遺伝子多型を選択する工程、
（２）被験者における該遺伝子多型の遺伝子型と疼痛感受性との間の関連を解析する工程、および
（３）被験者において疼痛感受性と有意に関連した遺伝子多型を疾患脆弱性の評価に用いる工程
を含む、前項４または５に記載の方法。
７．疾患脆弱性が、薬物感受性、疼痛感受性または薬物依存への脆弱性である、前項４〜６のいずれか１項に記載の方法。
８．遺伝子多型が、一塩基多型、挿入型多型、欠失型多型および塩基繰り返し多型からなる群から選択される少なくとも１つである、前項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
９．遺伝子多型が、ＣＡＣＮＡ１Ａ遺伝子のｒｓ２２９２０３５、ｒｓ２２９２０３６、ｒｓ２２９２０３７、ｒｓ１５０２０１７、ｒｓ１８６２２６０、ｒｓ４９２６２９３、ｒｓ１１２０５５９、ｒｓ１４２２２５８、ｒｓ５０２１３２８、ｒｓ５０２１３２７、ｒｓ１３４５６４９及びｒｓ１０４１９２１５、並びにＣＡＣＮＡ１Ｂ遺伝子のｒｓ７０２５５５７、ｒｓ６５５９２４３、ｒｓ１２３５０７３２、ｒｓ１０８６７０８４、ｒｓ４０７２５６３、ｒｓ７８５８２５５、ｒｓ４０７６７１２、ｒｓ２２９０５８２、ｒｓ１２０００２３３、ｒｓ２１６８５２５、ｒｓ３８１２５４１、ｒｓ１５３１１６６、ｒｓ７３５７７３３及びｒｓ１１１３７３７２、並びにＣＡＣＮＡ１Ｅ遺伝子のｒｓ１２４０５８６０、ｒｓ５５８９９４、ｒｓ１７４９４６８１、ｒｓ６８１２７１、ｒｓ４１２６６９０、ｒｓ５１７２０９、ｒｓ５８９０８２、ｒｓ１０９１０９４８、ｒｓ６２５２２６、ｒｓ４１４６６３４、ｒｓ２２２５８７５、ｒｓ６６８１０１７、ｒｓ１９３３０４９、ｒｓ１２０２４８４２、ｒｓ４６５２６６３、ｒｓ１１５８００５２、ｒｓ７５２４３０９、ｒｓ１０７９７７２４、ｒｓ１０７９７７２９、ｒｓ１０７９７７３０、ｒｓ１９９９８３８、ｒｓ７５１１７４８、ｒｓ１２１３５９５９、ｒｓ３８５６０９０、ｒｓ１０４９４５４０、ｒｓ１２１３８６３４、ｒｓ３８５６０９４、ｒｓ１２１３９６７７、ｒｓ２２８０８６６、ｒｓ３７６７００４、ｒｓ７０４３３２、ｒｓ７０４３３１、ｒｓ４６５２６７８、ｒｓ７０４３２９、ｒｓ４６５２６７９、ｒｓ６９７２６０、ｒｓ１９９９２３、ｒｓ１９９９３０、ｒｓ２２８０８６、ｒｓ４７３２００、ｒｓ６０１０５９、ｒｓ７０４３２６、ｒｓ３８４５４４６、ｒｓ３７５３７５２、ｒｓ２２８０８６９、ｒｓ６３８１３２、ｒｓ１２０４５４５８、ｒｓ７５１３６８５、ｒｓ６１０１００、ｒｓ４８０７５２、ｒｓ１２１３０８６８、ｒｓ１２８１１９４、ｒｓ１２１３６３９０、ｒｓ５８５３１５、ｒｓ１２０７１１９１、ｒｓ４８６００３、ｒｓ６９５０７２、ｒｓ１３３７５２７３、ｒｓ４４６５１５５、ｒｓ７５３３２９７、ｒｓ７５３５６６６、ｒｓ５９８７１４、ｒｓ６７７６１８及びｒｓ９２８６８４４から選ばれる少なくとも１つである、前項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
１０．ハプロタイプが以下の表１〜１６に示されるものから選ばれる少なくとも１つである、前項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
１１．前項１〜１０のいずれか１項に記載の方法により評価された結果を指標として、個体に投与する薬物の種類、量および／または投与回数を決定する方法。
１２．前項１〜１１のいずれか１項に記載の方法により評価された結果を指標として、個体に投与する薬物の副作用を予測する方法。
１３．薬物が、オピオイド受容体機能修飾薬、ニコチン受容体機能修飾薬および／または電位依存性カルシウムチャネル機能修飾薬である、前項１〜３、７、１１および１２のいずれか１項に記載の方法。
１４．オピオイド受容体機能修飾薬が、メタンフェタミン、メチレンジオキシメタンフェタミン、アンフェタミン、デキストロアンフェタミン、ドパミン、モルヒネ、ＤＡＭＧＯ、コデイン、メサドン、カルフェンタニル、フェンタニル、ヘロイン、コカイン、ナロキソン、ナルトレキソン、ナロルフィン、レバロルファン、ペンタゾシン、ペチジン、ブプレノルフィン、オキシコドン、ヒドロコドン、レボルファノール、エトルフィン、ジヒドロエトルフィン、ヒドロモルホン、オキシモルホン、トラマドール、ジクロフェナク、インドメタシン、エタノール、メタノール、ジエチルエーテル、プロパノール、ブタノール、フルピルチン、笑気、Ｆ３（１−クロロ−１，２，２トリフルオロサイクロブタン）、ハロセン、エストラジオール、ジチオトレイトール、チオリダジン、ピモザイド、フルオキセチン、パロキセチン、デシプラミン、イミプラミン、クロミプラミン、テトラミド、イソフルレン、ギンセノシド、イフェンプロディール、ブピバカイン、テルチアピン、クロザピン、ハロペリドール、ＳＣＨ２３３９０およびコカインからなる群から選択される少なくとも１つであり、
ニコチン受容体機能修飾薬が、カルバコール、ＡＢＴ−５９４、バレニクリン、スキサメトニウム、ヘキサメトニウム、パンクロニウム、ベクロニウム、ツボクラリン、トリメタファン、メカミラミン及びチャンピックスであり、
電位依存性カルシウムチャネル機能修飾薬が、ωアガトキシンＩＶＡ、ωアガトキシンＴＫ，アムロジピン、（±）−Ｂａｙ Ｋ ８６６４、（Ｒ）−（±）−Ｂａｙ Ｋ ８６６４、シナロング、ω−コノトクシン、ＧＶＩＡ、ω−コノトクシンＭＶＩＩＣ、ジルチアゼム、フェロジピン、フルナリジン、ＦＰＬ６４１７６、ガバペンチン、イスラジピン、ノルバスク、アダラート、アムロジン、コニール、ヘルベッサー、ペルジピン、カルスロット、ニバジール、レルカニジピン、ロペラミド、ミベフラジル、エトスクシミド、ネフィラセタム、ニグルジピン、ニモジピン、ニトレンジピン、ＮＮＣ５５−０３９６、ルテニウムレッド、ＳＮＸ４８２、ＳＲ３３８０−５、クトキシン、アミロライド、低濃度Ｎｉ２＋、エトスクシミド、ゾニサミト、ジヒドロビリジン、ベンゾチアゼピン、アルキルアミン、ニフェジピン、ジコノチド、ＳＮＸ−４８２、プレガバリン、ニカルジピン、シルニジピン、ベラパミル、バイミカード、エマベリン、ヒポカ、およびロメリジン（フルナリジン）からなる群から選択される少なくとも１つである、前項１３記載の方法。
１５．電位依存性カルシウムチャネルの遺伝子多型を含むＤＮＡ断片に特異的にハイブリダイズしうる、配列番号１〜９０のいずれか１つに示される塩基配列のうち第５１番目の塩基を含む少なくとも１０塩基長の塩基配列または該塩基配列に相補的な塩基配列からなるオリゴヌクレオチドを用いることを特徴とする、前項１〜１４のいずれか１項に記載の方法。
１６．前記オリゴヌクレオチドの長さが１０〜１５０塩基長である、前項１５に記載の方法。
１７．前記オリゴヌクレオチドが配列番号１〜９０のいずれか１つに示される塩基配列または該塩基配列に相補的な塩基配列からなる群から選択されるオリゴヌクレオチドである、前項１５または１６に記載の方法。
１８．電位依存性カルシウムチャネルの遺伝子多型を含むＤＮＡ断片に特異的にハイブリダイズしうる、配列番号１〜９０のいずれか１つに示される塩基配列のうち第５１番目の塩基を含む少なくとも１０塩基長の塩基配列または該塩基配列に相補的な塩基配列からなるオリゴヌクレオチド。
１９．前項１８に記載のオリゴヌクレオチドを含む、薬物感受性評価用キット。
２０．前項１８に記載のオリゴヌクレオチドを含む、疾患脆弱性評価用キット。
２１．電位依存性カルシウムチャネルの遺伝子多型、または当該遺伝子多型により構成されるハプロタイプを含む、個体の薬物感受性の高低（または有無）の傾向を評価するための遺伝子多型マーカー。ここで、「評価する」とは、具体的には、「予め知る」または「予測する」ことを意味することがある。
２２．電位依存性カルシウムチャネルの遺伝子多型、または当該遺伝子多型により構成されるハプロタイプを含む、個体の疾患脆弱性の高低（または有無）の傾向を評価するための遺伝子多型マーカー。ここで、「評価する」とは、具体的には、「予め知る」または「予測する」ことを意味することがある。
本発明者は、電位依存性カルシウムチャネル（ＶＤＣＣ）遺伝子に注目し、従来知見および臨床データに基づいて、鋭意研究を行った。その結果、各電位依存性カルシウムチャネルサブユニット遺伝子多型と、鎮痛薬等の薬物感受性または疼痛感受性を含めた疾患脆弱性との相関関係を解析することにより、いくつかの有用な遺伝子多型を同定した。そして、同定したこれら遺伝子多型間の連鎖不平衡を見出し、さらに薬物感受性または疾患脆弱性との有意な相関を明らかにした。
詳しくは、電位依存性カルシウムチャネル遺伝子多型が異なることによって、鎮痛薬の投与必要量が変化すること及び疼痛感受性の閾値が変化することを明らかにし、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明は以下の通りである。
１．電位依存性カルシウムチャネル遺伝子の遺伝子多型、または該遺伝子多型により構成されるハプロタイプと、個体の薬物感受性とを関連づけることを特徴とする、薬物感受性の評価方法。
２．前記遺伝子多型または前記ハプロタイプの解析結果に基づいて、個体の薬物感受性の高低（または有無）の傾向を評価することを特徴とする、前項１に記載の方法。ここで、「評価する」とは、具体的には、「予め知る」または「予測する」ことを意味することがある。
３．以下の工程：
（１）健常者における連鎖不平衡解析およびハプロタイプ解析を行い、連鎖不平衡ブロック内の遺伝子多型を選択する工程、
（２）被験者における該遺伝子多型の遺伝子型と薬物感受性との間の関連を解析する工程、および
（３）被験者において薬物感受性と有意に関連した遺伝子多型を薬物感受性の評価に用いる工程
を含む、前項１または２に記載の方法。
４．電位依存性カルシウムチャネル遺伝子の遺伝子多型、または該遺伝子多型により構成されるハプロタイプと、個体の疾患脆弱性とを関連づけることを特徴とする、疾患脆弱性の評価方法。
５．前記遺伝子多型または前記ハプロタイプの解析結果に基づいて、個体の疾患脆弱性の高低（または有無）の傾向を評価することを特徴とする、前項４に記載の方法。ここで、「評価する」とは、具体的には、「予め知る」または「予測する」ことを意味することがある。
６．以下の工程：
（１）健常者における連鎖不平衡解析およびハプロタイプ解析を行い、連鎖不平衡ブロック内の遺伝子多型を選択する工程、
（２）被験者における該遺伝子多型の遺伝子型と疼痛感受性との間の関連を解析する工程、および
（３）被験者において疼痛感受性と有意に関連した遺伝子多型を疾患脆弱性の評価に用いる工程
を含む、前項４または５に記載の方法。
７．疾患脆弱性が、薬物感受性、疼痛感受性または薬物依存への脆弱性である、前項４〜６のいずれか１項に記載の方法。
８．遺伝子多型が、一塩基多型、挿入型多型、欠失型多型および塩基繰り返し多型からなる群から選択される少なくとも１つである、前項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
９．遺伝子多型が、ＣＡＣＮＡ１Ａ遺伝子のｒｓ２２９２０３５、ｒｓ２２９２０３６、ｒｓ２２９２０３７、ｒｓ１５０２０１７、ｒｓ１８６２２６０、ｒｓ４９２６２９３、ｒｓ１１２０５５９、ｒｓ１４２２２５８、ｒｓ５０２１３２８、ｒｓ５０２１３２７、ｒｓ１３４５６４９及びｒｓ１０４１９２１５、並びにＣＡＣＮＡ１Ｂ遺伝子のｒｓ７０２５５５７、ｒｓ６５５９２４３、ｒｓ１２３５０７３２、ｒｓ１０８６７０８４、ｒｓ４０７２５６３、ｒｓ７８５８２５５、ｒｓ４０７６７１２、ｒｓ２２９０５８２、ｒｓ１２０００２３３、ｒｓ２１６８５２５、ｒｓ３８１２５４１、ｒｓ１５３１１６６、ｒｓ７３５７７３３及びｒｓ１１１３７３７２、並びにＣＡＣＮＡ１Ｅ遺伝子のｒｓ１２４０５８６０、ｒｓ５５８９９４、ｒｓ１７４９４６８１、ｒｓ６８１２７１、ｒｓ４１２６６９０、ｒｓ５１７２０９、ｒｓ５８９０８２、ｒｓ１０９１０９４８、ｒｓ６２５２２６、ｒｓ４１４６６３４、ｒｓ２２２５８７５、ｒｓ６６８１０１７、ｒｓ１９３３０４９、ｒｓ１２０２４８４２、ｒｓ４６５２６６３、ｒｓ１１５８００５２、ｒｓ７５２４３０９、ｒｓ１０７９７７２４、ｒｓ１０７９７７２９、ｒｓ１０７９７７３０、ｒｓ１９９９８３８、ｒｓ７５１１７４８、ｒｓ１２１３５９５９、ｒｓ３８５６０９０、ｒｓ１０４９４５４０、ｒｓ１２１３８６３４、ｒｓ３８５６０９４、ｒｓ１２１３９６７７、ｒｓ２２８０８６６、ｒｓ３７６７００４、ｒｓ７０４３３２、ｒｓ７０４３３１、ｒｓ４６５２６７８、ｒｓ７０４３２９、ｒｓ４６５２６７９、ｒｓ６９７２６０、ｒｓ１９９９２３、ｒｓ１９９９３０、ｒｓ２２８０８６、ｒｓ４７３２００、ｒｓ６０１０５９、ｒｓ７０４３２６、ｒｓ３８４５４４６、ｒｓ３７５３７５２、ｒｓ２２８０８６９、ｒｓ６３８１３２、ｒｓ１２０４５４５８、ｒｓ７５１３６８５、ｒｓ６１０１００、ｒｓ４８０７５２、ｒｓ１２１３０８６８、ｒｓ１２８１１９４、ｒｓ１２１３６３９０、ｒｓ５８５３１５、ｒｓ１２０７１１９１、ｒｓ４８６００３、ｒｓ６９５０７２、ｒｓ１３３７５２７３、ｒｓ４４６５１５５、ｒｓ７５３３２９７、ｒｓ７５３５６６６、ｒｓ５９８７１４、ｒｓ６７７６１８及びｒｓ９２８６８４４から選ばれる少なくとも１つである、前項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
１０．ハプロタイプが以下の表１〜１６に示されるものから選ばれる少なくとも１つである、前項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
１２．前項１〜１１のいずれか１項に記載の方法により評価された結果を指標として、個体に投与する薬物の副作用を予測する方法。
１３．薬物が、オピオイド受容体機能修飾薬、ニコチン受容体機能修飾薬および／または電位依存性カルシウムチャネル機能修飾薬である、前項１〜３、７、１１および１２のいずれか１項に記載の方法。
１４．オピオイド受容体機能修飾薬が、メタンフェタミン、メチレンジオキシメタンフェタミン、アンフェタミン、デキストロアンフェタミン、ドパミン、モルヒネ、ＤＡＭＧＯ、コデイン、メサドン、カルフェンタニル、フェンタニル、ヘロイン、コカイン、ナロキソン、ナルトレキソン、ナロルフィン、レバロルファン、ペンタゾシン、ペチジン、ブプレノルフィン、オキシコドン、ヒドロコドン、レボルファノール、エトルフィン、ジヒドロエトルフィン、ヒドロモルホン、オキシモルホン、トラマドール、ジクロフェナク、インドメタシン、エタノール、メタノール、ジエチルエーテル、プロパノール、ブタノール、フルピルチン、笑気、Ｆ３（１−クロロ−１，２，２トリフルオロサイクロブタン）、ハロセン、エストラジオール、ジチオトレイトール、チオリダジン、ピモザイド、フルオキセチン、パロキセチン、デシプラミン、イミプラミン、クロミプラミン、テトラミド、イソフルレン、ギンセノシド、イフェンプロディール、ブピバカイン、テルチアピン、クロザピン、ハロペリドール、ＳＣＨ２３３９０およびコカインからなる群から選択される少なくとも１つであり、
ニコチン受容体機能修飾薬が、カルバコール、ＡＢＴ−５９４、バレニクリン、スキサメトニウム、ヘキサメトニウム、パンクロニウム、ベクロニウム、ツボクラリン、トリメタファン、メカミラミン及びチャンピックスであり、
電位依存性カルシウムチャネル機能修飾薬が、ωアガトキシンＩＶＡ、ωアガトキシンＴＫ，アムロジピン、（±）−Ｂａｙ Ｋ ８６６４、（Ｒ）−（±）−Ｂａｙ Ｋ ８６６４、シナロング、ω−コノトクシン、ＧＶＩＡ、ω−コノトクシンＭＶＩＩＣ、ジルチアゼム、フェロジピン、フルナリジン、ＦＰＬ６４１７６、ガバペンチン、イスラジピン、ノルバスク、アダラート、アムロジン、コニール、ヘルベッサー、ペルジピン、カルスロット、ニバジール、レルカニジピン、ロペラミド、ミベフラジル、エトスクシミド、ネフィラセタム、ニグルジピン、ニモジピン、ニトレンジピン、ＮＮＣ５５−０３９６、ルテニウムレッド、ＳＮＸ４８２、ＳＲ３３８０−５、クトキシン、アミロライド、低濃度Ｎｉ２＋、エトスクシミド、ゾニサミト、ジヒドロビリジン、ベンゾチアゼピン、アルキルアミン、ニフェジピン、ジコノチド、ＳＮＸ−４８２、プレガバリン、ニカルジピン、シルニジピン、ベラパミル、バイミカード、エマベリン、ヒポカ、およびロメリジン（フルナリジン）からなる群から選択される少なくとも１つである、前項１３記載の方法。
１５．電位依存性カルシウムチャネルの遺伝子多型を含むＤＮＡ断片に特異的にハイブリダイズしうる、配列番号１〜９０のいずれか１つに示される塩基配列のうち第５１番目の塩基を含む少なくとも１０塩基長の塩基配列または該塩基配列に相補的な塩基配列からなるオリゴヌクレオチドを用いることを特徴とする、前項１〜１４のいずれか１項に記載の方法。
１６．前記オリゴヌクレオチドの長さが１０〜１５０塩基長である、前項１５に記載の方法。
１７．前記オリゴヌクレオチドが配列番号１〜９０のいずれか１つに示される塩基配列または該塩基配列に相補的な塩基配列からなる群から選択されるオリゴヌクレオチドである、前項１５または１６に記載の方法。
１８．電位依存性カルシウムチャネルの遺伝子多型を含むＤＮＡ断片に特異的にハイブリダイズしうる、配列番号１〜９０のいずれか１つに示される塩基配列のうち第５１番目の塩基を含む少なくとも１０塩基長の塩基配列または該塩基配列に相補的な塩基配列からなるオリゴヌクレオチド。
１９．前項１８に記載のオリゴヌクレオチドを含む、薬物感受性評価用キット。
２０．前項１８に記載のオリゴヌクレオチドを含む、疾患脆弱性評価用キット。
２１．電位依存性カルシウムチャネルの遺伝子多型、または当該遺伝子多型により構成されるハプロタイプを含む、個体の薬物感受性の高低（または有無）の傾向を評価するための遺伝子多型マーカー。ここで、「評価する」とは、具体的には、「予め知る」または「予測する」ことを意味することがある。
２２．電位依存性カルシウムチャネルの遺伝子多型、または当該遺伝子多型により構成されるハプロタイプを含む、個体の疾患脆弱性の高低（または有無）の傾向を評価するための遺伝子多型マーカー。ここで、「評価する」とは、具体的には、「予め知る」または「予測する」ことを意味することがある。
図１は、電位依存性カルシウムチャネルサブユニット構造を示す概略図である。
図２は、ＣＡＣＮＡ１Ａ遺伝子多型のスクリーニング範囲および同定された遺伝子多型を示す概略図である。図中、黒色部分は遺伝子の翻訳領域を表し、白色部分は非翻訳領域を表す。連鎖不平衡領域はＬＤ１−ＬＤ１７で示す。矢印は同定された各遺伝子多型の名称および相対的な位置を示す。
図３は、ＣＡＣＮＡ１Ｂ遺伝子多型のスクリーニング範囲および同定された遺伝子多型を示す概略図である。図中、黒色部分は遺伝子の翻訳領域を表し、白色部分は非翻訳領域を表す。連鎖不平衡領域はＬＤ１−ＬＤ１３で示す。矢印は同定された各遺伝子多型の名称および相対的な位置を示す。
図４は、ＣＡＣＮＡ１Ｅ遺伝子多型のスクリーニング範囲および同定された遺伝子多型を示す概略図である。図中、黒色部分は遺伝子の翻訳領域を表し、白色部分は非翻訳領域を表す。連鎖不平衡領域はＬＤ１−ＬＤ１２で示す。矢印は同定された各遺伝子多型の名称および相対的な位置を示す。
図５は、ＣＡＣＮＡ１Ａサブタイプ遺伝子に関して同定された薬物感受性と関連がある遺伝子多型及びそれらの間の連鎖不平衡を示す図である。図中、赤色（濃色）の四角形は連鎖の強いＳＮＰ同士を表す。また、図の各ＳＮＰから左下また右下方向に連なる四角形の交わった四角形においては、ＳＮＰとＳＮＰとの連鎖不平衡の指標であるＤ’の計算値のパーセンテージを記している。例えば、ｒｓ２２９２０３５とｒｓ２２９２０３６との間のＤ’計算値は０．９７である。ｒｓ１８６２２２６０とｒｓ１１２０５５９との間のＤ’計算値は０．９３である。
図６は、図５と同様、ＣＡＣＮＡ１Ａサブタイプ遺伝子に関して同定された薬物感受性と関連がある遺伝子多型及びそれらの間の連鎖不平衡を示す図である。図中の説明も図５の説明と同様である。
図７は、ＣＡＣＮＡ１Ｂサブタイプ遺伝子に関して同定された薬物感受性と関連がある遺伝子多型及びそれらの間の連鎖不平衡を示す図である。図中、赤色（濃色）の四角形は連鎖の強いＳＮＰ同士を表す。また、図の各ＳＮＰから左下また右下方向に連なる四角形の交わった四角形においては、ＳＮＰとＳＮＰとの連鎖不平衡の指標であるＤ’の計算値のパーセンテージを記している。例えば、ｒｓ１０８６７０８４とｒｓ７８５８２５５との間のＤ’計算値は０．９８である。ｒｓ２１６８５２５とｒｓ３８１２５４１との間のＤ’計算値は０．８９である。
図８は、図７と同様、ＣＡＣＮＡ１Ｂサブタイプ遺伝子に関して同定された薬物感受性と関連がある遺伝子多型及びそれらの間の連鎖不平衡を示す図である。図中の説明も図７の説明と同様である。
図９は、ＣＡＣＮＡ１Ｅサブタイプ遺伝子に関して同定された薬物感受性と関連がある遺伝子多型及びそれらの間の連鎖不平衡を示す図である。図中、赤色（濃色）の四角形は連鎖の強いＳＮＰ同士を表す。また、図の各ＳＮＰから左下また右下方向に連なる四角形の交わった四角形においては、ＳＮＰとＳＮＰとの連鎖不平衡の指標であるＤ’の計算値のパーセンテージを記している。例えば、ｒｓ５５８９９４とｒｓ６８１２７１との間のＤ’計算値は０．８７である。ｒｓ１０７９７７３０とｒｓ７５１１７４８との間のＤ’計算値は０．９７である。ｒｓ３７６７００４とｒｓ４６５２６７９との間のＤ’計算値は０．９５である。ｒｓ６１０１００とｒｓ１２１３６３９０との間のＤ’計算値は０．９８である。
図１０は、図９と同様、ＣＡＣＮＡ１Ｅサブタイプ遺伝子に関して同定された薬物感受性と関連がある遺伝子多型及びそれらの間の連鎖不平衡を示す図である。図中の説明も図９の説明と同様である。
図１１は、図９と同様、ＣＡＣＮＡ１Ｅサブタイプ遺伝子に関して同定された薬物感受性と関連がある遺伝子多型及びそれらの間の連鎖不平衡を示す図である。図中の説明も図９の説明と同様である。
図１２は、図９と同様、ＣＡＣＮＡ１Ｅサブタイプ遺伝子に関して同定された薬物感受性と関連がある遺伝子多型及びそれらの間の連鎖不平衡を示す図である。図中の説明も図９の説明と同様である。
図１３は、外科手術において鎮痛薬を投与された患者全体における、術後２４時間のフェンタニル投与必要量（μｇ／ｋｇ）に対するＣＡＣＮＡ１Ｅサブタイプ遺伝子多型（ｒｓ３８４５４４６）の効果を示すグラフである。グラフ中の各ボックスは、上の横線が７５パーセンテージの値、真ん中の横線が中央値、下の横線が２５パーセンテージの値を示す。
図１４は、外科手術において鎮痛薬を投与された患者全体における、術前の手指氷水浸漬による疼痛感知潜時（疼痛感受性）の測定結果（秒）に対するＣＡＣＮＡ１Ｅサブタイプ遺伝子多型（ｒｓ４１４６６３４）の効果を示すグラフである。グラフ中の各ボックスは、上の横線が７５パーセンテージの値、真ん中の横線が中央値、下の横線が２５パーセンテージの値を示す。
図１５は、外科手術において鎮痛薬を投与された患者全体における、術前のフェンタニル投与前後の手指氷水浸漬による疼痛感知潜時閾値差（鎮痛薬感受性閾値差）の測定結果（秒）に対するＣＡＣＮＡ１Ｅサブタイプ遺伝子多型（ｒｓ５５８９９４）の効果を示すグラフである。グラフ中の各ボックスは、上の横線が７５パーセンテージの値、真ん中の横線が中央値、下の横線が２５パーセンテージの値を示す。
図１６は、喫煙者全体において、喫煙期間（年）に対するＣＡＣＮＡ１Ｅサブタイプ遺伝子多型（ｒｓ３８４５４４６）の効果を示すグラフである。グラフ中の各ボックスは、上の横線が７５パーセンテージの値、真ん中の横線が中央値、下の横線が２５パーセンテージの値を示す。
図２は、ＣＡＣＮＡ１Ａ遺伝子多型のスクリーニング範囲および同定された遺伝子多型を示す概略図である。図中、黒色部分は遺伝子の翻訳領域を表し、白色部分は非翻訳領域を表す。連鎖不平衡領域はＬＤ１−ＬＤ１７で示す。矢印は同定された各遺伝子多型の名称および相対的な位置を示す。
図３は、ＣＡＣＮＡ１Ｂ遺伝子多型のスクリーニング範囲および同定された遺伝子多型を示す概略図である。図中、黒色部分は遺伝子の翻訳領域を表し、白色部分は非翻訳領域を表す。連鎖不平衡領域はＬＤ１−ＬＤ１３で示す。矢印は同定された各遺伝子多型の名称および相対的な位置を示す。
図４は、ＣＡＣＮＡ１Ｅ遺伝子多型のスクリーニング範囲および同定された遺伝子多型を示す概略図である。図中、黒色部分は遺伝子の翻訳領域を表し、白色部分は非翻訳領域を表す。連鎖不平衡領域はＬＤ１−ＬＤ１２で示す。矢印は同定された各遺伝子多型の名称および相対的な位置を示す。
図５は、ＣＡＣＮＡ１Ａサブタイプ遺伝子に関して同定された薬物感受性と関連がある遺伝子多型及びそれらの間の連鎖不平衡を示す図である。図中、赤色（濃色）の四角形は連鎖の強いＳＮＰ同士を表す。また、図の各ＳＮＰから左下また右下方向に連なる四角形の交わった四角形においては、ＳＮＰとＳＮＰとの連鎖不平衡の指標であるＤ’の計算値のパーセンテージを記している。例えば、ｒｓ２２９２０３５とｒｓ２２９２０３６との間のＤ’計算値は０．９７である。ｒｓ１８６２２２６０とｒｓ１１２０５５９との間のＤ’計算値は０．９３である。
図６は、図５と同様、ＣＡＣＮＡ１Ａサブタイプ遺伝子に関して同定された薬物感受性と関連がある遺伝子多型及びそれらの間の連鎖不平衡を示す図である。図中の説明も図５の説明と同様である。
図７は、ＣＡＣＮＡ１Ｂサブタイプ遺伝子に関して同定された薬物感受性と関連がある遺伝子多型及びそれらの間の連鎖不平衡を示す図である。図中、赤色（濃色）の四角形は連鎖の強いＳＮＰ同士を表す。また、図の各ＳＮＰから左下また右下方向に連なる四角形の交わった四角形においては、ＳＮＰとＳＮＰとの連鎖不平衡の指標であるＤ’の計算値のパーセンテージを記している。例えば、ｒｓ１０８６７０８４とｒｓ７８５８２５５との間のＤ’計算値は０．９８である。ｒｓ２１６８５２５とｒｓ３８１２５４１との間のＤ’計算値は０．８９である。
図８は、図７と同様、ＣＡＣＮＡ１Ｂサブタイプ遺伝子に関して同定された薬物感受性と関連がある遺伝子多型及びそれらの間の連鎖不平衡を示す図である。図中の説明も図７の説明と同様である。
図９は、ＣＡＣＮＡ１Ｅサブタイプ遺伝子に関して同定された薬物感受性と関連がある遺伝子多型及びそれらの間の連鎖不平衡を示す図である。図中、赤色（濃色）の四角形は連鎖の強いＳＮＰ同士を表す。また、図の各ＳＮＰから左下また右下方向に連なる四角形の交わった四角形においては、ＳＮＰとＳＮＰとの連鎖不平衡の指標であるＤ’の計算値のパーセンテージを記している。例えば、ｒｓ５５８９９４とｒｓ６８１２７１との間のＤ’計算値は０．８７である。ｒｓ１０７９７７３０とｒｓ７５１１７４８との間のＤ’計算値は０．９７である。ｒｓ３７６７００４とｒｓ４６５２６７９との間のＤ’計算値は０．９５である。ｒｓ６１０１００とｒｓ１２１３６３９０との間のＤ’計算値は０．９８である。
図１０は、図９と同様、ＣＡＣＮＡ１Ｅサブタイプ遺伝子に関して同定された薬物感受性と関連がある遺伝子多型及びそれらの間の連鎖不平衡を示す図である。図中の説明も図９の説明と同様である。
図１１は、図９と同様、ＣＡＣＮＡ１Ｅサブタイプ遺伝子に関して同定された薬物感受性と関連がある遺伝子多型及びそれらの間の連鎖不平衡を示す図である。図中の説明も図９の説明と同様である。
図１２は、図９と同様、ＣＡＣＮＡ１Ｅサブタイプ遺伝子に関して同定された薬物感受性と関連がある遺伝子多型及びそれらの間の連鎖不平衡を示す図である。図中の説明も図９の説明と同様である。
図１３は、外科手術において鎮痛薬を投与された患者全体における、術後２４時間のフェンタニル投与必要量（μｇ／ｋｇ）に対するＣＡＣＮＡ１Ｅサブタイプ遺伝子多型（ｒｓ３８４５４４６）の効果を示すグラフである。グラフ中の各ボックスは、上の横線が７５パーセンテージの値、真ん中の横線が中央値、下の横線が２５パーセンテージの値を示す。
図１４は、外科手術において鎮痛薬を投与された患者全体における、術前の手指氷水浸漬による疼痛感知潜時（疼痛感受性）の測定結果（秒）に対するＣＡＣＮＡ１Ｅサブタイプ遺伝子多型（ｒｓ４１４６６３４）の効果を示すグラフである。グラフ中の各ボックスは、上の横線が７５パーセンテージの値、真ん中の横線が中央値、下の横線が２５パーセンテージの値を示す。
図１５は、外科手術において鎮痛薬を投与された患者全体における、術前のフェンタニル投与前後の手指氷水浸漬による疼痛感知潜時閾値差（鎮痛薬感受性閾値差）の測定結果（秒）に対するＣＡＣＮＡ１Ｅサブタイプ遺伝子多型（ｒｓ５５８９９４）の効果を示すグラフである。グラフ中の各ボックスは、上の横線が７５パーセンテージの値、真ん中の横線が中央値、下の横線が２５パーセンテージの値を示す。
図１６は、喫煙者全体において、喫煙期間（年）に対するＣＡＣＮＡ１Ｅサブタイプ遺伝子多型（ｒｓ３８４５４４６）の効果を示すグラフである。グラフ中の各ボックスは、上の横線が７５パーセンテージの値、真ん中の横線が中央値、下の横線が２５パーセンテージの値を示す。
以下、本発明を詳細に説明する。本発明の範囲はこれらの説明に拘束されることはなく、以下の例示以外についても、本発明の趣旨を損なわない範囲で適宜変更し実施し得る。なお、本明細書は、本願優先権主張の基礎となる特願２０１０−２７０６３０号明細書（２０１０年１２月３日出願）の全体を包含する。また、本明細書において引用された全ての刊行物、例えば先行技術文献、及び公開公報、特許公報その他の特許文献は、参照として本明細書に組み込まれる。
１．本発明の概要
（１）電位依存性カルシウムチャネル
電位依存性カルシウムチャネル（Ｃａｌｃｉｕｍ ｃｈａｎｎｅｌ，ｖｏｌｔａｇｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ；ＶＤＣＣ）とは、細胞内外の電位差により、細胞内にＣａ２＋を流入させるチャネルである。電位依存性カルシウムチャネルはα１、α２、β、γ、δの各サブユニットからなるヘテロオリゴマー構成されていて、神経系において、多様な生理機能の調節・制御に重要な役割を果たしていることが知られている。
α１サブユニットのうち、Ｃａｖ２カルシウムチャネルファミリー（いわゆるＣａｖ２．１、Ｃａｖ２．２、Ｃａｖ２．３）は神経細胞のシナプス前膜に存在し、神経伝達物質遊離の制御にかかわる。Ｃａｖ２．１、Ｃａｖ２．２およびＣａｖ２．３チャネルはそれぞれＣＡＣＮＡ１Ａ、ＣＡＣＮＡ１ＢおよびＣＡＣＮＡ１Ｅ遺伝子にコードされ、ヒトの第１９、第９、第１染色体に位置する。さらに、Ｃａｖ２カルシウムチャネルファミリーはＧタンパク質を介して、オピオイド受容体活性化により抑制される。遺伝子欠損マウスを用いた研究により、これらのチャネルが痛み伝達およびオピオイド鎮痛において重要な役割を持つことが明らかになった。Ｃａｖ２．３欠損マウスにおいて、同じ量のモルヒネ投与により、野生型マウスに比べ、より強い鎮痛作用が認められた。２００４年の年末に、米国の食品医薬品局（ＦＤＡ）は、モルヒネなどの他の治療法に不耐性または抵抗性を示すがん性疼痛の治療のために、Ｃａｖ２．２チャネルの阻害薬（Ｚｉｃｏｎｏｔｉｄｅ）髄腔内投与を承認した。
α２−δサブユニットは、１ヶ所の膜貫通部位を持つδと、全体が細胞外にあり、糖鎖によって負に荷電しているα２とがＳ−Ｓ結合で結ばれた形で存在する。現在まで、少なくとも４種類の遺伝子にコードされているα２δ−１、α２δ−２、α２δ−３、α２δ−４が確認されている。米国ＦＤＡでは、糖尿病性神経因性疼痛や帯状疱疹を伴う神経障害性疼痛の治療薬として使われているｐｒｅｇａｂａｌｉｎやｇａｂａｐｅｎｔｉｎは、α２δ−１サブユニットに結合することにより、シナプスにおける神経伝達物質の放出を制御して効果を発揮していると考えられている。
（２）遺伝子多型
本発明者は、健常者について、電位依存性カルシウムチャネルのＣａｖ２カルシウムチャネルファミリーに関して遺伝子多型（ＳＮＰ等）を同定し、連鎖不平衡解析を行い、連鎖不平衡の強いブロック（ハプロタイプブロック）を同定した（図２〜図４参照）。
ここで、連鎖平衡とは２つの遺伝子多型間の染色体上の関係が独立な場合をいい、連鎖不平衡とは遺伝子多型と遺伝子多型が連鎖しているためにメンデルの独立の法則による平衡状態から逸脱している場合をいう。また、ハプロタイプとは、一組の対立遺伝子のうちの一方（片方の親に由来する遺伝子）において、相互に近隣する遺伝子や遺伝子多型などの遺伝的構成を意味する。
ゲノム上近接する遺伝子多型等はハプロタイプブロックで遺伝する。言い換えれば、ハプロタイプは、このハプロタイプブロック内の、同一遺伝子の並び方の組み合わせであるとも言える。
電位依存性カルシウムチャネル遺伝子において、いくつかの遺伝子多型が、ある表現型に関連して出現する場合は、個々の遺伝子多型を全てタイピングしなくても、ハプロタイプを構成するいくつかの遺伝子多型を解析することによって、患者の遺伝子型と表現型との関連を明らかにすることができる。
本発明者は、ＣＡＣＮＡ１Ａ遺伝子に関しては、フランキング領域を含めた全領域における１１６個のＳＮＰｓに関する合計１２１症例を対象とした連鎖不平衡解析により、１７個の連鎖不平衡ブロックを同定し（図２及び表１７参照）、それを代表するＴａｇ ＳＮＰｓを４５個選出し、それらのＴａｇ ＳＮＰｓを対象として関連解析を行った。
ＣＡＣＮＡ１Ｂ遺伝子に関しては、フランキング領域を含めた全領域における１０１個のＳＮＰｓに関する合計１２１症例を対象とした連鎖不平衡解析により、１３個の連鎖不平衡ブロックを同定し（図３及び表１８参照）、それを代表するＴａｇ ＳＮＰｓを４１個選出し、それらのＴａｇ ＳＮＰｓを対象として関連解析を行った。
ＣＡＣＮＡ１Ｅ遺伝子に関しては、フランキング領域を含めた全領域における１３７個のＳＮＰｓに関する合計１２１症例を対象とした連鎖不平衡解析により、１２個の連鎖不平衡ブロックを同定し（図４及び表１９参照）、それを代表するＴａｇ ＳＮＰｓを４２個選出し、それらのＴａｇ ＳＮＰｓを対象として関連解析を行った。
電位依存性カルシウムチャネル遺伝子の遺伝子多型またはハプロタイプを解析することによって、鎮痛薬投与必要回数、総鎮痛薬量、薬物依存脆弱性、および喫煙行動等の薬物感受性または疼痛感受性を含めた疾患脆弱性についての個人差を容易に評価することができる。薬物感受性または疾患脆弱性について評価した結果は、個体に投与する薬物の投与回数、投与量および種類などの決定、並びに副作用の予測において重要な情報となる。よって、本発明は、電位依存性カルシウムチャネル遺伝子多型、または当該遺伝子多型により構成されるハプロタイプの解析結果に基づいて、個体（個人）の薬物感受性または疾患脆弱性の高低（または有無）（詳しくは、当該感受性または脆弱性の遺伝的要因の高低（または有無））の傾向を評価する方法を提供するものである。また本発明は、電位依存性カルシウムチャネル遺伝子多型、または当該遺伝子多型により構成されるハプロタイプを含む、個体（個人）の薬物感受性または疾患脆弱性の高低（または有無）（詳しくは、当該感受性または脆弱性の遺伝的要因の高低（または有無））の傾向を評価するための、遺伝子多型マーカーを提供するものである。ここで、「評価する」とは、具体的には、「予め知る」または「予測する」ことを意味することがある。
特に、モルヒネやニコチン依存薬物などは、使用方法によっては社会的に大きな問題を生じるため、各個人に適切な投薬量を投薬前に予め知ることは重要である。そのため、本発明は、テーラーメイド疼痛治療や薬物依存治療において極めて有用であると言える。
２．電位依存性カルシウムチャネル遺伝子多型
本発明のヒト電位依存性カルシウムチャネル遺伝子多型としては、主に一塩基多型（ｓｉｎｇｌｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ、以下ＳＮＰとも称する）を含むが、限定はされず、挿入型多型、欠失型多型、および塩基繰り返し多型をも含みうる。
一塩基多型［ＳＮＰ（ＳＮＰｓ）］とは、遺伝子の特定の１塩基が他の塩基に置換することによる遺伝子多型を意味する。挿入／欠失型多型とは、１以上の塩基が欠失／挿入することによる遺伝子多型を意味する。
また、塩基繰り返し多型とは塩基配列の繰り返し数の異なることにより生じる遺伝子多型を意味する。塩基繰り返し多型は繰り返す塩基数の違いにより、マイクロサテライト多型（塩基数：２塩基〜４塩基程度）とＶＮＴＲ（ｖａｒｉａｂｌｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｔａｎｄｅｍ ｒｅｐｅａｔ）多型（繰り返し塩基：数塩基〜数十塩基）に分けられ、その繰り返し数が個々人によって異なる。
本発明によって明らかにされた電位依存性カルシウムチャネル遺伝子多型及び連鎖不平衡ブロックの情報（日本人健常者のゲノム上で見られたＣＡＣＮＡ１Ａサブタイプ遺伝子、ＣＡＣＮＡ１Ｂサブタイプ遺伝子およびＣＡＣＮＡ１Ｅサブタイプ遺伝子におけるＳＮＰ）を、下記表１７〜１９に示す。
表１７〜１９において、ＣＡＣＮＡ１Ａ、ＣＡＣＮＡ１Ｂ及びＣＡＣＮＡ１Ｅ遺伝子が電位依存性カルシウムチャネル体遺伝子のサブタイプであるＣＡＣＮＡ１Ａ、ＣＡＣＮＡ１Ｂ及びＣＡＣＮＡ１Ｅ遺伝子を表す。
「ＬＤ番号」は、各遺伝子多型連鎖の不平衡（ＬＤ）ブロックを表す。
「遺伝子多型名」は、ゲノム上の位置におけるＳＮＰの名称であり、ｄｂＳＮＰデータベース（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｐｒｏｊｅｃｔｓ／ＳＮＰ／からアクセス可能）に登録されたものである（本明細書において同様）。基本的に、４桁以上の数字の前に「ｒｓ」のＩＤが付与され、どのＳＮＰであるかが識別されている。
「メジャーアレル」および「マイナーアレル」は、それぞれ日本人健常者のゲノム上での多数派および少数派となるアレルを表す。
本発明において遺伝子多型情報を得る方法は、例えば、以下の通りである。
（１）ヒトから採取した血液検体から、フェノール法等を用いてゲノムＤＮＡを精製する。
その際、ＧＦＸ Ｇｅｎｏｍｉｃ Ｂｌｏｏｄ ＤＮＡ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（ＧＥ ヘルスケア バイオサイエンス株式会社製）等の市販のゲノムＤＮＡ抽出キットや装置を用いてもよい。
（２）次に、得られたゲノムＤＮＡを鋳型として、ＰＣＲ法によりゲノムＤＮＡをいくつかに分けて増幅し、シークエンス用の鋳型ＤＮＡとする。本発明は、遺伝子多型を対象とするため、ＰＣＲ法に用いる酵素はなるべくＦｉｄｅｌｉｔｙ（忠実度）の高いものを用いることが望ましい。
（３）カルシウムチャネル遺伝子の各遺伝子多型周辺の領域を、ＧｅｎＢａｎｋに公開されている配列情報に基づいて設計したプライマーを用いて約５００〜１０００ｂｐずつＰＣＲにより増幅を行う。
（４）これらのＰＣＲ断片の全領域の塩基配列を、ＧｅｎＢａｎｋに公開されている配列情報に基づいて設計したプライマーを用いて約５００〜７００ｂｐずつシークエンス法により解読し、目的の遺伝子多型情報を得ることができる。
本発明において遺伝子多型情報を得る別の方法は、以下の通りである。
（１）ヒトから採取した血液検体から、フェノール法等を用いてゲノムＤＮＡを精製する。その際、ＧＦＸ Ｇｅｎｏｍｉｃ Ｂｌｏｏｄ ＤＮＡ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（ＧＥ ヘルスケア バイオサイエンス株式会社製）等の市販のゲノムＤＮＡ抽出キットや装置を用いてもよい。
（２）次に、得られたゲノムＤＮＡをＴＥ ｂｕｆｆｅｒ（１０ｍＭ ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，１ｍＭ ＥＤＴＡ，ｐＨ８．０）に溶解し、１００ｎｇ／μｌに調整する。
（３）イルミナ社製、ｉＳｃａｎシステム（Ｉｌｌｕｍｉｎａ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を利用したＩｎｆｉｎｉｕｍ ａｓｓａｙ ＩＩ法などにより、メーカー側のプロトコルに従い全ゲノムジェノタイピングを行う。
（４）ＢｅａｄＳｔｕｄｉｏ Ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ ｍｏｄｕｌｅ ｖ３．３．７（Ｉｌｌｕｍｉｎａ）などを用いて全ゲノムジェノタイピングデータ解析を行い、各サンプルの遺伝子多型データの品質評価（Ｑｕａｌｉｔｙ ｃｏｎｔｒｏｌ）を行う。
（５）これらの全ゲノムジェノタイピングデータより、目的の遺伝子名のアノテーション情報を手掛かりにしてその遺伝子領域およびフランキング領域に含まれる遺伝子多型を選定し、ＢｅａｄＳｔｕｄｉｏ Ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ ｍｏｄｕｌｅ ｖ３．３．７（Ｉｌｌｕｍｉｎａ）などの出力機能を用いてそれらの遺伝子多型情報を全て抽出する。
本発明は、電位依存性カルシウムチャネル遺伝子の遺伝子多型を含むＤＮＡ断片に特異的にハイブリダイズしうる、ＣＡＣＮＡ１Ａ遺伝子多型（ｒｓ２２９２０３５、ｒｓ２２９２０３６、ｒｓ２２９２０３７、ｒｓ１５０２０１７、ｒｓ１８６２２６０、ｒｓ４９２６２９３、ｒｓ１１２０５５９、ｒｓ１４２２２５８、ｒｓ５０２１３２８、ｒｓ５０２１３２７、ｒｓ１３４５６４９及びｒｓ１０４１９２１５）、並びにＣＡＣＮＡ１Ｂ遺伝子多型（ｒｓ７０２５５５７、ｒｓ６５５９２４３、ｒｓ１２３５０７３２、ｒｓ１０８６７０８４、ｒｓ４０７２５６３、ｒｓ７８５８２５５、ｒｓ４０７６７１２、ｒｓ２２９０５８２、ｒｓ１２０００２３３、ｒｓ２１６８５２５、ｒｓ３８１２５４１、ｒｓ１５３１１６６、ｒｓ７３５７７３３及びｒｓ１１１３７３７２、並びにＣＡＣＮＡ１Ｅ遺伝子多型（ｒｓ１２４０５８６０、ｒｓ５５８９９４、ｒｓ１７４９４６８１、ｒｓ６８１２７１、ｒｓ４１２６６９０、ｒｓ５１７２０９、ｒｓ５８９０８２、ｒｓ１０９１０９４８、ｒｓ６２５２２６、ｒｓ４１４６６３４、ｒｓ２２２５８７５、ｒｓ６６８１０１７、ｒｓ１９３３０４９、ｒｓ１２０２４８４２、ｒｓ４６５２６６３、ｒｓ１１５８００５２、ｒｓ７５２４３０９、ｒｓ１０７９７７２４、ｒｓ１０７９７７２９、ｒｓ１０７９７７３０、ｒｓ１９９９８３８、ｒｓ７５１１７４８、ｒｓ１２１３５９５９、ｒｓ３８５６０９０、ｒｓ１０４９４５４０、ｒｓ１２１３８６３４、ｒｓ３８５６０９４、ｒｓ１２１３９６７７、ｒｓ２２８０８６６、ｒｓ３７６７００４、ｒｓ７０４３３２、ｒｓ７０４３３１、ｒｓ４６５２６７８、ｒｓ７０４３２９、ｒｓ４６５２６７９、ｒｓ６９７２６０、ｒｓ１９９９２３、ｒｓ１９９９３０、ｒｓ２２８０８６、ｒｓ４７３２００、ｒｓ６０１０５９、ｒｓ７０４３２６、ｒｓ３８４５４４６、ｒｓ３７５３７５２、ｒｓ２２８０８６９、ｒｓ６３８１３２、ｒｓ１２０４５４５８、ｒｓ７５１３６８５、ｒｓ６１０１００、ｒｓ４８０７５２、ｒｓ１２１３０８６８、ｒｓ１２８１１９４、ｒｓ１２１３６３９０、ｒｓ５８５３１５、ｒｓ１２０７１１９１、ｒｓ４８６００３、ｒｓ６９５０７２、ｒｓ１３３７５２７３、ｒｓ４４６５１５５、ｒｓ７５３３２９７、ｒｓ７５３５６６６、ｒｓ５９８７１４、ｒｓ６７７６１８及びｒｓ９２８６８４４）のいずれか１つを含むオリゴヌクレオチドを提供する。当該遺伝子多型部位は、配列番号１〜９０のいずれか１つに示される塩基配列の第５１番目の塩基である。
本発明のオリゴヌクレオチドの塩基は、少なくとも１０塩基、好ましくは１０〜１５０塩基、より好ましくは１０〜４５塩基、さらに好ましくは１４〜２５塩基を有することが好ましい。
本発明のオリゴヌクレオチドとしては、例えば上記のカルシウムチャネル遺伝子の遺伝子多型を含有する、配列番号１〜９０のいずれか１つに示される塩基配列または該塩基配列に相補的な塩基配列から選択されるオリゴヌクレオチドが挙げられる（表２０Ａ〜表２０Ｃ参照）。
表２０Ａ〜表２０Ｃ（配列番号１〜９０）には１０１塩基が表示されており、その５１番目に遺伝子多型部位を表示してある。例えば、「Ａ／Ｇ」と表示したものは「Ａ」と「Ｇ」の遺伝子多型であることを意味し、「Ｃ／Ｔ」は「Ｃ」と「Ｔ」の遺伝子多型であることを意味する。
３．ハプロタイプ解析
本発明においては、上記遺伝子多型のうちＳＮＰを用いてハプロタイプを構築することができる。ハプロタイプ解析の対象となるＳＮＰは、その遺伝子多型頻度が０．５％以上のものであればよく、好ましくは１％、より好ましくは５％以上のものを選択することができる。また、ハプロタイプ解析の対象となるＳＮＰは、全部であってもその一部であってもよい。
ハプロタイプ解析は、種々のコンピュータープログラムで解析することが可能であり、例えば、
Ｈａｐｌｏｖｉｅｗ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｒｏａｄｉｎｓｔｉｔｕｔｅ．ｏｒｇ／ｈａｐｌｏｖｉｅｗ／ｈａｐｌｏｖｉｅｗのウェブサイトから入手可能（以下同様）；Ｂａｒｒｅｔｔ ＪＣ，Ｆｒｙ Ｂ，Ｍａｌｌｅｒ Ｊ，Ｄａｌｙ ＭＪ．Ｈａｐｌｏｖｉｅｗ： ａｎａｌｙｓｉｓ ａｎｄｖｉｓｕａｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ＬＤ ａｎｄ ｈａｐｌｏｔｙｐｅ ｍａｐｓ．Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ．２００５Ｊａｎ １５［ＰｕｂＭｅｄ ＩＤ：１５２９７３００］Ｗｈｉｔｅｈｅａｄ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ ０２１４２，ＵＳＡ．）を用いることができる。
ハプロタイプ解析の例として、ＣＡＣＮＡ１Ａ遺伝子多型である１１６箇所のＳＮＰｓ、ＣＡＣＮＡ１Ｂ遺伝子多型である１０１箇所のＳＮＰｓ、ＣＡＣＮＡ１Ｅ遺伝子多型である１３７箇所のＳＮＰｓに関して、Ｈａｐｌｏｖｉｅｗを用いてハプロタイプを推定した。推定したハプロタイプをそれぞれ表２１〜表３６に示す。
さらに、集団における各個人の電位依存性カルシウムチャネル（ＶＤＣＣ）遺伝子についての遺伝子型情報から、該集団におけるハプロタイプ頻度を算出し、当該ハプロタイプ頻度をもとにして連鎖不平衡解析を行うことができる。連鎖不平衡の尺度を示す値であるＤ´値およびｒ２値は、以下の定義に基づき算出することができる。
定義：
ＳＮＰ ＡとＳＮＰ Ｂとがあり、それぞれのアレルをＡ、ａとＢ、ｂとする。ＳＮＰ ＡとＳＮＰ Ｂとが作る４つのハプロタイプをＡＢ、Ａｂ、ａＢ、ａｂとし、それぞれのハプロタイプ頻度をＰＡＢ、ＰＡｂ、ＰａＢ、Ｐａｂとすると、
Ｄ＝ＰＡＢ×Ｐａｂ−ＰＡｂ×ＰａＢ（Ｄ＞０のとき）
Ｄ´＝（ＰＡＢ×Ｐａｂ−ＰＡｂ×ＰａＢ）／Ｍｉｎｉｍｕｍ（（（ＰＡＢ＋ＰａＢ）×（ＰａＢ＋Ｐａｂ）），（（ＰＡＢ＋ＰＡｂ）×（ＰＡｂ＋Ｐａｂ）））（Ｄ＜０のとき）
Ｄ´＝（ＰＡＢ×Ｐａｂ−ＰＡｂ×ＰａＢ）／Ｍｉｎｉｍｕｍ（（（ＰＡＢ＋ＰａＢ）×（ＰＡＢ＋ＰＡｂ）），（（ＰａＢ＋Ｐａｂ）×（ＰＡｂ＋Ｐａｂ）））
ｒ２＝（ＰＡＢ×Ｐａｂ−ＰＡｂ×ＰａＢ）２／［（ＰＡＢ＋ＰＡｂ）（ＰＡＢ＋ＰａＢ）（ＰａＢ＋Ｐａｂ）（ＰＡｂ＋Ｐａｂ）］［但し、Ｍｉｎｉｍｕｍ（（（ＰＡＢ＋ＰａＢ）×（ＰａＢ＋Ｐａｂ）），（（ＰＡＢ＋ＰＡｂ）×（ＰＡｂ＋Ｐａｂ）））は、（ＰＡＢ＋ＰａＢ）×（ＰａＢ＋Ｐａｂ）と（ＰＡＢ＋ＰＡｂ）×（ＰＡｂ＋Ｐａｂ）との内、値の小さい方をとることを意味する。］
さらに、連鎖不平衡解析を行った結果からハプロタイプブロックを推定することができる。ハプロタイプブロックは、ハプロタイプ解析の結果から、例えば、Ｈａｐｌｏｖｉｅｗを用いて連鎖ブロックを推定することができる。
推定されたハプロタイプブロック中の特定のＳＮＰを調べると、間接的に同一ブロック内で連鎖しているＳＮＰの情報を知ることができる。つまり、カルシウムチャネル遺伝子の遺伝子多型を調べる際に、すべてのＳＮＰを解析する必要はなく、特定のいくつかのＳＮＰについてのみタイピングを行えばよい。
４．電位依存性カルシウムチャネル遺伝子多型と薬物感受性または疾患脆弱性との相関
電位依存性カルシウムチャネル遺伝子に遺伝子多型が生じると、電位依存性カルシウムチャネルの機能や発現量が変化する場合があると考えられる。従って、電位依存性カルシウムチャネルに関するさまざまな表現型とは相関関係にある場合がある。
ここで、表現型とは、薬物の感受性に関する表現型（薬物感受性）と、疾患の発症に関する表現型（疾患脆弱性）とを挙げることができる。薬物感受性としては、薬物の有効性、薬物の副作用、薬物の有効持続期間等が挙げられる。また、疾患脆弱性としては、疼痛感受性、薬物依存への脆弱性等が挙げられる。
前記薬物としては、限定はされないが、オピオイド受容体機能修飾薬、ニコチン受容体機能修飾薬および電位依存性カルシウムチャネル機能修飾薬等が好ましく挙げられ、例えば、オピオイド受容体、ニコチン受容体またはカルシウムチャネルに直接的または間接的に作用する各種薬物が挙げられる。オピオイド受容体に直接的または間接的に作用する各種薬物としては、具体的には、メタンフェタミン等の覚醒剤、ドパミン受容体作動薬、ドパミン受容体拮抗薬、μ、κ、δオピオイド受容体作動薬、μ、κ、δオピオイド受容体拮抗薬等を挙げることができる。ニコチン受容体直接的または間接的に作用する各種薬物としては、具体的には、ニコチン受容体の作動薬及び拮抗薬等を挙げることができる。カルシウムチャネルに直接的または間接的に作用する各種薬物としては、具体的には、カルシウムチャネル各サブユニットの作動薬及び拮抗薬等を挙げることができる。
オピオイド受容体機能修飾薬としては、例えば、モルヒネ、ＤＡＭＧＯ、コデイン、メサドン、カルフェンタニル、フェンタニル、ヘロイン、コカイン、ナロキソン、ナルトレキソン、ナロルフィン、レバロルファン、ペンタゾシン、ペチジン、ブプレノルフィン、オキシコドン、ヒドロコドン、レボルファノール、エトルフィン、ジヒドロエトルフィン、ヒドロモルホン、オキシモルホン、トラマドール、ジクロフェナク、インドメタシン、フルルビプロフェンアキセチル、マーカイン、エタノール、メタノール、ジエチルエーテル、プロパノール、ブタノール、フルピルチン、笑気、Ｆ３（１−クロロ−１，２，２トリフルオロサイクロブタン）、ハロセン、エストラジオール、ジチオトレイトール、チオリダジン、ピモザイド、フルオキセチン、パロキセチン、デシプラミン、イミプラミン、クロミプラミン、テトラミド、イソフルレン、ギンセノシド、イフェンプロディール、ブピバカイン、テルチアピン、クロザピン、ハロペリドール、ＳＣＨ２３３９０およびコカイン等が挙げられ、特にモルヒネ、ペンタゾシン、ペチジン、ブプレノルフィン、ジクロフェナク、インドメタシン、フルルビプロフェンアキセチル、マーカインが好ましく、モルヒネ、フェンタニルおよびペンタゾシンがより好ましい。
ニコチン受容体機能修飾薬としては、例えば、カルバコール、ＡＢＴ−５９４、バレニクリン、スキサメトニウム、ヘキサメトニウム、パンクロニウム、ベクロニウム、ツボクラリン、トリメタファン、メカミラミン及びチャンピックスがより好ましい。
電位依存性カルシウムチャネル機能修飾薬としては、例えば、ωアガトキシンＩＶＡ、ωアガトキシンＴＫ、アムロジピン、（±）−Ｂａｙ Ｋ ８６６４、（Ｒ）−（±）−Ｂａｙ Ｋ ８６６４、シナロング、ω−コノトクシン、ＧＶＩＡ、ω−コノトクシンＭＶＩＩＣ、ジルチアゼム、フェロジピン、フルナリジン、ＦＰＬ６４１７６、ガバペンチン、イスラジピン、ノルバスク、アダラート、アムロジン、コニール、ヘルベッサー、ペルジピン、カルスロット、ニバジール、レルカニジピン、ロペラミド、ミベフラジル、エトスクシミド、ネフィラセタム、ニグルジピン、ニモジピン、ニトレンジピン、ＮＮＣ５５−０３９６、ルテニウムレッド、ＳＮＸ４８２、ＳＲ３３８０−５、クトキシン、アミロライド、低濃度Ｎｉ２＋、エトスクシミド、ゾニサミト、ジヒドロビリジン、ベンゾチアゼピン、アルキルアミン、ニフェジピン、ジコノチド、ＳＮＸ−４８２、プレガバリン、ニカルジピン、シルニジピン、ベラパミル、バイミカード、エマベリン、ヒポカ、およびロメリジン（フルナリジン）がより好ましい。
カルシウムシャネル遺伝子多型と表現型との相関は、例えば、以下の（１）〜（３）のように調べることができる。
（１）健常者における連鎖不平衡解析およびハプロタイプ解析の結果、推定された連鎖不平衡ブロック内の遺伝子多型を選択する。例えば、代表的な遺伝子多型であるＴａｇ ＳＮＰを表現型との相関解析用のカルシウムチャネル遺伝子多型として選択する。
（２）次に、被験者（患者）における該遺伝子多型についての遺伝子多型頻度を解析する。遺伝子多型と疾患脆弱性との相関を調べる場合、被験者と健常者の遺伝子多型頻度との比較を行う。比較においてはχ２検定などの統計手法を用いることが有効である。
ここで、さらに、表現型の違いにより被験者を分類し、分類毎に健常者と被験者の遺伝子多型頻度や遺伝子型を比較してもよい。ニコチン依存に関する表現型は、例えば、タバコをすい始めてからタバコをやめるまでの喫煙期間で分類できる。
（３）被験者において薬物感受性と有意に関連した遺伝子多型があれば、該遺伝子多型を薬物感受性の遺伝的要因（遺伝的素因）の評価に用いることができる。また、健常者と被験者との間で遺伝子多型頻度に有意差のある遺伝子多型があれば、該遺伝子多型を疾患脆弱性の遺伝的要因（遺伝的素因）の評価に用いることができる。
ただし、遺伝子多型の傾向は、人種や出身地等に影響されることが示唆されているため、関連する遺伝子多型（例えばＳＮＰ）を見出すのに用いた母集団と同様な遺伝子多型を示す集団おいて、当該遺伝子多型を用いる上記評価を行うことが望ましい。
カルシウムチャネル遺伝子多型と表現型との相関の具体例を以下の（１）〜（３）に示す。
（１）術後２４時間内フェンタニル投与量の測定結果との相関において、ＣＡＣＮＡ１Ｅ遺伝子多型のｒｓ３８４５４４６、ｒｓ３７５３７５２、ｒｓ２２８０８６９、ｒｓ４７３２００、ｒｓ７０４３２６、ｒｓ６１０１００、ｒｓ５８５３１５、ｒｓ９２８６８４４多型とフェンタニル投与量との間に有意な関連を認め（表３７参照）、ｒｓ３８４５４４６多型のＧアレルの保有者は術後のフェンタニル感受性亢進の予測に有意に役立つことがわかった。同様に、ｒｓ３７５３７５２多型のＴアレル保有者、ｒｓ２２８０８６９多型のＣアレル保有者、ｒｓ４７３２００多型のＴアレル保有者、ｒｓ７０４３２６多型のＣアレルの保有者、ｒｓ６１０１００多型Ｃ／Ｃの患者、ｒｓ５８５３１５多型Ｔ／Ｔの患者、ｒｓ９２８６８４４多型Ｇ／Ｇの患者は術後のフェンタニル感受性亢進の予測に有意に役立つことがわかった。
（２）術前の手指氷水浸漬による疼痛感知潜時の測定結果との相関において、ＣＡＣＮＡ１Ｅ遺伝子多型のｒｓ１２４０５８６０、ｒｓ４１４６６３４、ｒｓ３７６７００４多型と疼痛感知潜時との間に有意な関連を認め（表３８参照）、ｒｓ１２４０５８６０多型Ｇ／Ｇの患者、ｒｓ４１４６６３４多型Ｇ／Ｇの患者、ｒｓ３７６７００４多型のＧアレル保有者は疼痛感受性亢進の予測に有意に役立つことがわかった。
（３）術前のフェンタニル投与前後の手指氷水浸漬による疼痛感知潜時閾値差の測定結果との相関において、ＣＡＣＮＡ１Ｅ遺伝子多型のｒｓ５５８９９４、ｒｓ６８１２７１、ｒｓ５１７２０９、ｒｓ１０７９７７２９、ｒｓ３８５６０９４、ｒｓ１２１３９６７７の遺伝子多型と疼痛感知潜時閾値差との間に有意な関連を認め（表３９参照）、ｒｓ５５８９９４多型Ａ／Ａの患者、ｒｓ６８１２７１多型Ｔ／Ｔの患者、ｒｓ５１７２０９多型Ｃ／Ｃの患者、ｒｓ１０７９７７２９多型Ａ／Ａの患者、ｒｓ３８５６０９４多型Ａ／Ａの患者、ｒｓ１２１３９６７７多型Ｔ／Ｔの患者は疼痛感知潜時閾値差が大きく、従ってフェンタニルの鎮痛効果が亢進していた。ＣＡＣＮＡ１Ａ遺伝子多型のｒｓ１５０２０１７、ｒｓ１８６２２６０、ｒｓ４９２６２９３、ｒｓ１４２２２５８多型と疼痛感知潜時閾値差との間に有意な関連を認め（表３９参照）、ｒｓ１５０２０１７多型Ｇ／Ｇの患者、ｒｓ１８６２２６０多型Ｔアレルの保有者、ｒｓ４９２６２９３多型Ｃ／Ｃの患者、ｒｓ１４２２２５８多型Ｔ／Ｔの患者は疼痛感知潜時閾値差が大きく、従ってフェンタニルの鎮痛効果が亢進していた。ＣＡＣＮＡ１Ｂ遺伝子多型の、ｒｓ１０８６７０８４、ｒｓ２２９０５８２、ｒｓ３８１２５４１、ｒｓ７３５７７３３、ｒｓ７０２５５５７、ｒｓ６５５９２４３、ｒｓ７８５８２５５多型と疼痛感知潜時閾値差との間に有意な関連を認め（表３９参照）、ｒｓ１０８６７０８４多型Ｔアレルの保有者、ｒｓ２２９０５８２多型Ｇ／Ｇの患者、ｒｓ３８１２５４１多型Ａ／Ａの患者、ｒｓ７３５７７３３多型Ｇアレルの保有者、ｒｓ７０２５５５７多型Ｔ／Ｔの患者、ｒｓ６５５９２４３多型Ｔアレルの保有者、ｒｓ７８５８２５５多型Ｔアレルの保有者は疼痛感知潜時閾値差が大きく、従ってフェンタニルの鎮痛効果が亢進していた。
５．解析結果の利用
上記三つのように解析されたカルシウムチャネル遺伝子多型と表現型との相関は、オピオイド受容体およびカルシウムチャネルに関する様々な薬物および疼痛の感受性を予測する方法、オピオイド受容体およびカルシウムチャネルに関する疾患の治療または予防法を選択する方法、または治療用の薬物の適正投与量を決定する方法、副作用を予測する方法などの指標として利用することができる。
また、本発明の遺伝子多型または方法を用いて、人種の違いによる薬物感受性または疾患脆弱性を評価することが可能である。対象者は特に限定されるものではなく、日本人、欧米人などが挙げられるが、本発明においては日本人または日本人と同様の遺伝子多型傾向を有する者であることが好ましい。
６．遺伝子多型の検出
被験対象者からのゲノム試料は、血液、唾液、皮膚等から抽出することができるが、ゲノム試料を採取できるものであれば、これに限定されるものではない。ゲノムＤＮＡの抽出および精製法は周知である。例えば、ヒトから採取した血液、唾液、皮膚等の検体から、フェノール法等を用いてゲノムＤＮＡを精製する。その際、ＧＦＸ Ｇｅｎｏｍｉｃ Ｂｌｏｏｄ ＤＮＡ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（ＧＥ ヘルスケア バイオサイエンス株式会社製）等の市販のゲノムＤＮＡ抽出キットや装置を用いてもよい。検出するＳＮＰがエクソン中にある場合は、ゲノムＤＮＡの代わりにｍＲＮＡやｔｏｔａｌ ＲＮＡを抽出してもよい。
ゲノム試料中のカルシウムチャネル遺伝子多型の検出には、上記した本発明のオリゴヌクレオチドをプローブとして用いることができる。以下、遺伝子多型検出法の一例を示す。
（１）ＰＣＲ法による遺伝子多型の検出
ＰＣＲにより被験サンプルを増幅するには、忠実度の高いＤＮＡポリメラーゼ、例えば、ＫＯＤ Ｄａｓｈポリメラーゼ（ＴＯＹＯＢＯ社製）を用いることが好ましい。用いるプライマーは、被験サンプル中の対象ＳＮＰを増幅できるように適宜設計し合成することができる。上流および下流側のプライマーの間の任意の位置に遺伝子多型またはその相補鎖が含まれるのが好ましい。増幅反応終了後は、増幅産物の検出を行い、シークエンス法などにより遺伝子多型の有無を判定する。
（２）塩基配列決定法による遺伝子多型の検出
ジデオキシ法に基づく塩基配列決定法により本発明の遺伝子多型を検出することもできる。塩基配列決定に用いるシークエンサーには、市販のＡＢＩシリーズ（アプライドバイオシステムズ（ライフテクノロジーズ））を用いることができる。
（３）ＤＮＡマイクロアレイによる遺伝子多型の検出
ＤＮＡマイクロアレイは、支持体上にオリゴヌクレオチドプローブが固定されたものであり、ＤＮＡチップ、Ｇｅｎｅチップ、マイクロチップ、ビーズアレイなどを含む。まず、被験サンプルのポリヌクレオチドを単離し、ＰＣＲにより増幅し、蛍光レポーター基により標識する。続いて、標識化ＤＮＡ／ｍＲＮＡ、ｔｏｔａｌ ＲＮＡをアレイと共にインキュベートする。
次に前記アレイをスキャナーに差し込み、ハイブリダイゼーションパターンを検出する。ハイブリダイゼーションのデータは、プローブアレイに結合した（すなわち標的配列に取り込まれた）蛍光レポーター基からの発光として採集する。標的配列と完全に一致したプローブは、標的配列と一致していない部分を有するものよりも強いシグナルを生じる。
アレイ上の各プローブの配列および位置は分かっているため、相補性によって、プローブアレイと反応させた標的ポリヌクレオチドの配列を決定することができる。
（４）ＴａｑＭａｎ ＰＣＲ法による遺伝子多型の検出
ＴａｑＭａｎ ＰＣＲ法は、蛍光標識したアレル特異的オリゴヌクレオチド（ＴａｑＭａｎプローブとも言う）とＴａｑ ＤＮＡポリメラーゼによるＰＣＲとを利用する方法である。アレル特異的オリゴヌクレオチドとは、遺伝子多型部位を含むオリゴヌクレオチドである。ＴａｑＭａｎ ＰＣＲ法で用いるアレル特異的オリゴヌクレオチドは、前記遺伝子多型情報に基づいて設計することができる。
（５）インベーダー法による遺伝子多型の検出
インベーダー法は、アレル特異的オリゴヌクレオチドと鋳型とをハイブリダイゼーションすることにより遺伝子多型を検出する方法である。インベーダー法を行うためのキットは市販されており（例えばＮａｎｏ Ｉｎｖａｄｅｒ（Ｒ）Ａｒｒａｙ（ビー・エム・エル社製））、この方法により容易に遺伝子多型を検出することが可能である。
７．キット
本発明は、薬物・疼痛感受性または疾患脆弱性を評価するためのキットを提供する。本発明の遺伝子多型検出用キットは、本発明を実施するために必要な１種以上の成分を含む。
例えば、本発明のキットは、酵素を保存若しくは供給するためのもの、および／または遺伝子多型検出を実施するために必要な反応成分を含むことが好ましい。当該成分としては、限定されるものではないが、例えば、本発明のオリゴヌクレオチド、酵素緩衝液、ｄＮＴＰ、コントロール用試薬（例えば、組織サンプル、ポジティブおよびネガティブコントロール用標的オリゴヌクレオチドなど）、標識用および／または検出用試薬、固相支持体、説明書などが挙げられる。また本発明のキットは、必要な成分のうちの一部のみを含む部分的キットであってもよく、その場合には、ユーザーが他の成分を用意することができる。
本発明のキットは、上記オリゴヌクレオチドを支持体に固定したマイクロアレイとして提供することもできる。マイクロアレイは、支持体上に本発明のオリゴヌクレオチドが固定されたものであり、ＤＮＡチップ、Ｇｅｎｅチップ、マイクロチップ、ビーズアレイなどを含む。
本発明のキットは、本発明において見出されたオリゴヌクレオチド、すなわち、電位依存性カルシウムチャネル遺伝子多型を含み、当該遺伝子多型を含むＤＮＡ断片に特異的にハイブリダイズしうるオリゴヌクレオチド、好ましくは、配列番号１〜９０のいずれか１つに示される塩基配列のうち第５１番目の塩基を含む少なくとも１０塩基長（例えば１０〜１５０塩基長）の塩基配列または該塩基配列に相補的な塩基配列からなるオリゴヌクレオチド、より好ましくは配列番号１〜９０のいずれか１つに示される塩基配列または該塩基配列に相補的な塩基配列からなる群から選択されるオリゴヌクレオチドを含むことができる。当該オリゴヌクレオチドを用いた電位依存性カルシウムチャネルの遺伝子多型の検出は、例えばハイブリダイゼーション（ＤＮＡマイクロアレイを利用した方法等）により行うことができる。
本発明のキットにより遺伝子多型を判定する場合、例えば、薬物を患者等に使用する前（例えば手術前、癌性疼痛時等）に採血してカルシウムチャネル遺伝子を含むＤＮＡを単離し、該遺伝子をキット中のオリゴヌクレオチドと反応させて遺伝子型を判定する。
判定した遺伝子型および遺伝子多型から薬物の種類または用量などの投与計画を作成することができる。その結果、個人に合った薬物効果を得ることができ、オーダーメイド医療に有用となる。例えばモルヒネを使用する場合は、個人に合った鎮痛効果を得、また副作用を最低限に抑えることができる。
以下に、実施例を挙げて本発明をより具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
１．本発明の概要
（１）電位依存性カルシウムチャネル
電位依存性カルシウムチャネル（Ｃａｌｃｉｕｍ ｃｈａｎｎｅｌ，ｖｏｌｔａｇｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ；ＶＤＣＣ）とは、細胞内外の電位差により、細胞内にＣａ２＋を流入させるチャネルである。電位依存性カルシウムチャネルはα１、α２、β、γ、δの各サブユニットからなるヘテロオリゴマー構成されていて、神経系において、多様な生理機能の調節・制御に重要な役割を果たしていることが知られている。
α１サブユニットのうち、Ｃａｖ２カルシウムチャネルファミリー（いわゆるＣａｖ２．１、Ｃａｖ２．２、Ｃａｖ２．３）は神経細胞のシナプス前膜に存在し、神経伝達物質遊離の制御にかかわる。Ｃａｖ２．１、Ｃａｖ２．２およびＣａｖ２．３チャネルはそれぞれＣＡＣＮＡ１Ａ、ＣＡＣＮＡ１ＢおよびＣＡＣＮＡ１Ｅ遺伝子にコードされ、ヒトの第１９、第９、第１染色体に位置する。さらに、Ｃａｖ２カルシウムチャネルファミリーはＧタンパク質を介して、オピオイド受容体活性化により抑制される。遺伝子欠損マウスを用いた研究により、これらのチャネルが痛み伝達およびオピオイド鎮痛において重要な役割を持つことが明らかになった。Ｃａｖ２．３欠損マウスにおいて、同じ量のモルヒネ投与により、野生型マウスに比べ、より強い鎮痛作用が認められた。２００４年の年末に、米国の食品医薬品局（ＦＤＡ）は、モルヒネなどの他の治療法に不耐性または抵抗性を示すがん性疼痛の治療のために、Ｃａｖ２．２チャネルの阻害薬（Ｚｉｃｏｎｏｔｉｄｅ）髄腔内投与を承認した。
α２−δサブユニットは、１ヶ所の膜貫通部位を持つδと、全体が細胞外にあり、糖鎖によって負に荷電しているα２とがＳ−Ｓ結合で結ばれた形で存在する。現在まで、少なくとも４種類の遺伝子にコードされているα２δ−１、α２δ−２、α２δ−３、α２δ−４が確認されている。米国ＦＤＡでは、糖尿病性神経因性疼痛や帯状疱疹を伴う神経障害性疼痛の治療薬として使われているｐｒｅｇａｂａｌｉｎやｇａｂａｐｅｎｔｉｎは、α２δ−１サブユニットに結合することにより、シナプスにおける神経伝達物質の放出を制御して効果を発揮していると考えられている。
（２）遺伝子多型
本発明者は、健常者について、電位依存性カルシウムチャネルのＣａｖ２カルシウムチャネルファミリーに関して遺伝子多型（ＳＮＰ等）を同定し、連鎖不平衡解析を行い、連鎖不平衡の強いブロック（ハプロタイプブロック）を同定した（図２〜図４参照）。
ここで、連鎖平衡とは２つの遺伝子多型間の染色体上の関係が独立な場合をいい、連鎖不平衡とは遺伝子多型と遺伝子多型が連鎖しているためにメンデルの独立の法則による平衡状態から逸脱している場合をいう。また、ハプロタイプとは、一組の対立遺伝子のうちの一方（片方の親に由来する遺伝子）において、相互に近隣する遺伝子や遺伝子多型などの遺伝的構成を意味する。
ゲノム上近接する遺伝子多型等はハプロタイプブロックで遺伝する。言い換えれば、ハプロタイプは、このハプロタイプブロック内の、同一遺伝子の並び方の組み合わせであるとも言える。
電位依存性カルシウムチャネル遺伝子において、いくつかの遺伝子多型が、ある表現型に関連して出現する場合は、個々の遺伝子多型を全てタイピングしなくても、ハプロタイプを構成するいくつかの遺伝子多型を解析することによって、患者の遺伝子型と表現型との関連を明らかにすることができる。
本発明者は、ＣＡＣＮＡ１Ａ遺伝子に関しては、フランキング領域を含めた全領域における１１６個のＳＮＰｓに関する合計１２１症例を対象とした連鎖不平衡解析により、１７個の連鎖不平衡ブロックを同定し（図２及び表１７参照）、それを代表するＴａｇ ＳＮＰｓを４５個選出し、それらのＴａｇ ＳＮＰｓを対象として関連解析を行った。
ＣＡＣＮＡ１Ｂ遺伝子に関しては、フランキング領域を含めた全領域における１０１個のＳＮＰｓに関する合計１２１症例を対象とした連鎖不平衡解析により、１３個の連鎖不平衡ブロックを同定し（図３及び表１８参照）、それを代表するＴａｇ ＳＮＰｓを４１個選出し、それらのＴａｇ ＳＮＰｓを対象として関連解析を行った。
ＣＡＣＮＡ１Ｅ遺伝子に関しては、フランキング領域を含めた全領域における１３７個のＳＮＰｓに関する合計１２１症例を対象とした連鎖不平衡解析により、１２個の連鎖不平衡ブロックを同定し（図４及び表１９参照）、それを代表するＴａｇ ＳＮＰｓを４２個選出し、それらのＴａｇ ＳＮＰｓを対象として関連解析を行った。
電位依存性カルシウムチャネル遺伝子の遺伝子多型またはハプロタイプを解析することによって、鎮痛薬投与必要回数、総鎮痛薬量、薬物依存脆弱性、および喫煙行動等の薬物感受性または疼痛感受性を含めた疾患脆弱性についての個人差を容易に評価することができる。薬物感受性または疾患脆弱性について評価した結果は、個体に投与する薬物の投与回数、投与量および種類などの決定、並びに副作用の予測において重要な情報となる。よって、本発明は、電位依存性カルシウムチャネル遺伝子多型、または当該遺伝子多型により構成されるハプロタイプの解析結果に基づいて、個体（個人）の薬物感受性または疾患脆弱性の高低（または有無）（詳しくは、当該感受性または脆弱性の遺伝的要因の高低（または有無））の傾向を評価する方法を提供するものである。また本発明は、電位依存性カルシウムチャネル遺伝子多型、または当該遺伝子多型により構成されるハプロタイプを含む、個体（個人）の薬物感受性または疾患脆弱性の高低（または有無）（詳しくは、当該感受性または脆弱性の遺伝的要因の高低（または有無））の傾向を評価するための、遺伝子多型マーカーを提供するものである。ここで、「評価する」とは、具体的には、「予め知る」または「予測する」ことを意味することがある。
特に、モルヒネやニコチン依存薬物などは、使用方法によっては社会的に大きな問題を生じるため、各個人に適切な投薬量を投薬前に予め知ることは重要である。そのため、本発明は、テーラーメイド疼痛治療や薬物依存治療において極めて有用であると言える。
２．電位依存性カルシウムチャネル遺伝子多型
本発明のヒト電位依存性カルシウムチャネル遺伝子多型としては、主に一塩基多型（ｓｉｎｇｌｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ、以下ＳＮＰとも称する）を含むが、限定はされず、挿入型多型、欠失型多型、および塩基繰り返し多型をも含みうる。
一塩基多型［ＳＮＰ（ＳＮＰｓ）］とは、遺伝子の特定の１塩基が他の塩基に置換することによる遺伝子多型を意味する。挿入／欠失型多型とは、１以上の塩基が欠失／挿入することによる遺伝子多型を意味する。
また、塩基繰り返し多型とは塩基配列の繰り返し数の異なることにより生じる遺伝子多型を意味する。塩基繰り返し多型は繰り返す塩基数の違いにより、マイクロサテライト多型（塩基数：２塩基〜４塩基程度）とＶＮＴＲ（ｖａｒｉａｂｌｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｔａｎｄｅｍ ｒｅｐｅａｔ）多型（繰り返し塩基：数塩基〜数十塩基）に分けられ、その繰り返し数が個々人によって異なる。
本発明によって明らかにされた電位依存性カルシウムチャネル遺伝子多型及び連鎖不平衡ブロックの情報（日本人健常者のゲノム上で見られたＣＡＣＮＡ１Ａサブタイプ遺伝子、ＣＡＣＮＡ１Ｂサブタイプ遺伝子およびＣＡＣＮＡ１Ｅサブタイプ遺伝子におけるＳＮＰ）を、下記表１７〜１９に示す。
「ＬＤ番号」は、各遺伝子多型連鎖の不平衡（ＬＤ）ブロックを表す。
「遺伝子多型名」は、ゲノム上の位置におけるＳＮＰの名称であり、ｄｂＳＮＰデータベース（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｐｒｏｊｅｃｔｓ／ＳＮＰ／からアクセス可能）に登録されたものである（本明細書において同様）。基本的に、４桁以上の数字の前に「ｒｓ」のＩＤが付与され、どのＳＮＰであるかが識別されている。
「メジャーアレル」および「マイナーアレル」は、それぞれ日本人健常者のゲノム上での多数派および少数派となるアレルを表す。
本発明において遺伝子多型情報を得る方法は、例えば、以下の通りである。
（１）ヒトから採取した血液検体から、フェノール法等を用いてゲノムＤＮＡを精製する。
その際、ＧＦＸ Ｇｅｎｏｍｉｃ Ｂｌｏｏｄ ＤＮＡ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（ＧＥ ヘルスケア バイオサイエンス株式会社製）等の市販のゲノムＤＮＡ抽出キットや装置を用いてもよい。
（２）次に、得られたゲノムＤＮＡを鋳型として、ＰＣＲ法によりゲノムＤＮＡをいくつかに分けて増幅し、シークエンス用の鋳型ＤＮＡとする。本発明は、遺伝子多型を対象とするため、ＰＣＲ法に用いる酵素はなるべくＦｉｄｅｌｉｔｙ（忠実度）の高いものを用いることが望ましい。
（３）カルシウムチャネル遺伝子の各遺伝子多型周辺の領域を、ＧｅｎＢａｎｋに公開されている配列情報に基づいて設計したプライマーを用いて約５００〜１０００ｂｐずつＰＣＲにより増幅を行う。
（４）これらのＰＣＲ断片の全領域の塩基配列を、ＧｅｎＢａｎｋに公開されている配列情報に基づいて設計したプライマーを用いて約５００〜７００ｂｐずつシークエンス法により解読し、目的の遺伝子多型情報を得ることができる。
本発明において遺伝子多型情報を得る別の方法は、以下の通りである。
（１）ヒトから採取した血液検体から、フェノール法等を用いてゲノムＤＮＡを精製する。その際、ＧＦＸ Ｇｅｎｏｍｉｃ Ｂｌｏｏｄ ＤＮＡ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（ＧＥ ヘルスケア バイオサイエンス株式会社製）等の市販のゲノムＤＮＡ抽出キットや装置を用いてもよい。
（２）次に、得られたゲノムＤＮＡをＴＥ ｂｕｆｆｅｒ（１０ｍＭ ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，１ｍＭ ＥＤＴＡ，ｐＨ８．０）に溶解し、１００ｎｇ／μｌに調整する。
（３）イルミナ社製、ｉＳｃａｎシステム（Ｉｌｌｕｍｉｎａ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を利用したＩｎｆｉｎｉｕｍ ａｓｓａｙ ＩＩ法などにより、メーカー側のプロトコルに従い全ゲノムジェノタイピングを行う。
（４）ＢｅａｄＳｔｕｄｉｏ Ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ ｍｏｄｕｌｅ ｖ３．３．７（Ｉｌｌｕｍｉｎａ）などを用いて全ゲノムジェノタイピングデータ解析を行い、各サンプルの遺伝子多型データの品質評価（Ｑｕａｌｉｔｙ ｃｏｎｔｒｏｌ）を行う。
（５）これらの全ゲノムジェノタイピングデータより、目的の遺伝子名のアノテーション情報を手掛かりにしてその遺伝子領域およびフランキング領域に含まれる遺伝子多型を選定し、ＢｅａｄＳｔｕｄｉｏ Ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ ｍｏｄｕｌｅ ｖ３．３．７（Ｉｌｌｕｍｉｎａ）などの出力機能を用いてそれらの遺伝子多型情報を全て抽出する。
本発明は、電位依存性カルシウムチャネル遺伝子の遺伝子多型を含むＤＮＡ断片に特異的にハイブリダイズしうる、ＣＡＣＮＡ１Ａ遺伝子多型（ｒｓ２２９２０３５、ｒｓ２２９２０３６、ｒｓ２２９２０３７、ｒｓ１５０２０１７、ｒｓ１８６２２６０、ｒｓ４９２６２９３、ｒｓ１１２０５５９、ｒｓ１４２２２５８、ｒｓ５０２１３２８、ｒｓ５０２１３２７、ｒｓ１３４５６４９及びｒｓ１０４１９２１５）、並びにＣＡＣＮＡ１Ｂ遺伝子多型（ｒｓ７０２５５５７、ｒｓ６５５９２４３、ｒｓ１２３５０７３２、ｒｓ１０８６７０８４、ｒｓ４０７２５６３、ｒｓ７８５８２５５、ｒｓ４０７６７１２、ｒｓ２２９０５８２、ｒｓ１２０００２３３、ｒｓ２１６８５２５、ｒｓ３８１２５４１、ｒｓ１５３１１６６、ｒｓ７３５７７３３及びｒｓ１１１３７３７２、並びにＣＡＣＮＡ１Ｅ遺伝子多型（ｒｓ１２４０５８６０、ｒｓ５５８９９４、ｒｓ１７４９４６８１、ｒｓ６８１２７１、ｒｓ４１２６６９０、ｒｓ５１７２０９、ｒｓ５８９０８２、ｒｓ１０９１０９４８、ｒｓ６２５２２６、ｒｓ４１４６６３４、ｒｓ２２２５８７５、ｒｓ６６８１０１７、ｒｓ１９３３０４９、ｒｓ１２０２４８４２、ｒｓ４６５２６６３、ｒｓ１１５８００５２、ｒｓ７５２４３０９、ｒｓ１０７９７７２４、ｒｓ１０７９７７２９、ｒｓ１０７９７７３０、ｒｓ１９９９８３８、ｒｓ７５１１７４８、ｒｓ１２１３５９５９、ｒｓ３８５６０９０、ｒｓ１０４９４５４０、ｒｓ１２１３８６３４、ｒｓ３８５６０９４、ｒｓ１２１３９６７７、ｒｓ２２８０８６６、ｒｓ３７６７００４、ｒｓ７０４３３２、ｒｓ７０４３３１、ｒｓ４６５２６７８、ｒｓ７０４３２９、ｒｓ４６５２６７９、ｒｓ６９７２６０、ｒｓ１９９９２３、ｒｓ１９９９３０、ｒｓ２２８０８６、ｒｓ４７３２００、ｒｓ６０１０５９、ｒｓ７０４３２６、ｒｓ３８４５４４６、ｒｓ３７５３７５２、ｒｓ２２８０８６９、ｒｓ６３８１３２、ｒｓ１２０４５４５８、ｒｓ７５１３６８５、ｒｓ６１０１００、ｒｓ４８０７５２、ｒｓ１２１３０８６８、ｒｓ１２８１１９４、ｒｓ１２１３６３９０、ｒｓ５８５３１５、ｒｓ１２０７１１９１、ｒｓ４８６００３、ｒｓ６９５０７２、ｒｓ１３３７５２７３、ｒｓ４４６５１５５、ｒｓ７５３３２９７、ｒｓ７５３５６６６、ｒｓ５９８７１４、ｒｓ６７７６１８及びｒｓ９２８６８４４）のいずれか１つを含むオリゴヌクレオチドを提供する。当該遺伝子多型部位は、配列番号１〜９０のいずれか１つに示される塩基配列の第５１番目の塩基である。
本発明のオリゴヌクレオチドの塩基は、少なくとも１０塩基、好ましくは１０〜１５０塩基、より好ましくは１０〜４５塩基、さらに好ましくは１４〜２５塩基を有することが好ましい。
本発明のオリゴヌクレオチドとしては、例えば上記のカルシウムチャネル遺伝子の遺伝子多型を含有する、配列番号１〜９０のいずれか１つに示される塩基配列または該塩基配列に相補的な塩基配列から選択されるオリゴヌクレオチドが挙げられる（表２０Ａ〜表２０Ｃ参照）。
３．ハプロタイプ解析
本発明においては、上記遺伝子多型のうちＳＮＰを用いてハプロタイプを構築することができる。ハプロタイプ解析の対象となるＳＮＰは、その遺伝子多型頻度が０．５％以上のものであればよく、好ましくは１％、より好ましくは５％以上のものを選択することができる。また、ハプロタイプ解析の対象となるＳＮＰは、全部であってもその一部であってもよい。
ハプロタイプ解析は、種々のコンピュータープログラムで解析することが可能であり、例えば、
Ｈａｐｌｏｖｉｅｗ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｒｏａｄｉｎｓｔｉｔｕｔｅ．ｏｒｇ／ｈａｐｌｏｖｉｅｗ／ｈａｐｌｏｖｉｅｗのウェブサイトから入手可能（以下同様）；Ｂａｒｒｅｔｔ ＪＣ，Ｆｒｙ Ｂ，Ｍａｌｌｅｒ Ｊ，Ｄａｌｙ ＭＪ．Ｈａｐｌｏｖｉｅｗ： ａｎａｌｙｓｉｓ ａｎｄｖｉｓｕａｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ＬＤ ａｎｄ ｈａｐｌｏｔｙｐｅ ｍａｐｓ．Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ．２００５Ｊａｎ １５［ＰｕｂＭｅｄ ＩＤ：１５２９７３００］Ｗｈｉｔｅｈｅａｄ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ ０２１４２，ＵＳＡ．）を用いることができる。
ハプロタイプ解析の例として、ＣＡＣＮＡ１Ａ遺伝子多型である１１６箇所のＳＮＰｓ、ＣＡＣＮＡ１Ｂ遺伝子多型である１０１箇所のＳＮＰｓ、ＣＡＣＮＡ１Ｅ遺伝子多型である１３７箇所のＳＮＰｓに関して、Ｈａｐｌｏｖｉｅｗを用いてハプロタイプを推定した。推定したハプロタイプをそれぞれ表２１〜表３６に示す。
定義：
ＳＮＰ ＡとＳＮＰ Ｂとがあり、それぞれのアレルをＡ、ａとＢ、ｂとする。ＳＮＰ ＡとＳＮＰ Ｂとが作る４つのハプロタイプをＡＢ、Ａｂ、ａＢ、ａｂとし、それぞれのハプロタイプ頻度をＰＡＢ、ＰＡｂ、ＰａＢ、Ｐａｂとすると、
Ｄ＝ＰＡＢ×Ｐａｂ−ＰＡｂ×ＰａＢ（Ｄ＞０のとき）
Ｄ´＝（ＰＡＢ×Ｐａｂ−ＰＡｂ×ＰａＢ）／Ｍｉｎｉｍｕｍ（（（ＰＡＢ＋ＰａＢ）×（ＰａＢ＋Ｐａｂ）），（（ＰＡＢ＋ＰＡｂ）×（ＰＡｂ＋Ｐａｂ）））（Ｄ＜０のとき）
Ｄ´＝（ＰＡＢ×Ｐａｂ−ＰＡｂ×ＰａＢ）／Ｍｉｎｉｍｕｍ（（（ＰＡＢ＋ＰａＢ）×（ＰＡＢ＋ＰＡｂ）），（（ＰａＢ＋Ｐａｂ）×（ＰＡｂ＋Ｐａｂ）））
ｒ２＝（ＰＡＢ×Ｐａｂ−ＰＡｂ×ＰａＢ）２／［（ＰＡＢ＋ＰＡｂ）（ＰＡＢ＋ＰａＢ）（ＰａＢ＋Ｐａｂ）（ＰＡｂ＋Ｐａｂ）］［但し、Ｍｉｎｉｍｕｍ（（（ＰＡＢ＋ＰａＢ）×（ＰａＢ＋Ｐａｂ）），（（ＰＡＢ＋ＰＡｂ）×（ＰＡｂ＋Ｐａｂ）））は、（ＰＡＢ＋ＰａＢ）×（ＰａＢ＋Ｐａｂ）と（ＰＡＢ＋ＰＡｂ）×（ＰＡｂ＋Ｐａｂ）との内、値の小さい方をとることを意味する。］
さらに、連鎖不平衡解析を行った結果からハプロタイプブロックを推定することができる。ハプロタイプブロックは、ハプロタイプ解析の結果から、例えば、Ｈａｐｌｏｖｉｅｗを用いて連鎖ブロックを推定することができる。
推定されたハプロタイプブロック中の特定のＳＮＰを調べると、間接的に同一ブロック内で連鎖しているＳＮＰの情報を知ることができる。つまり、カルシウムチャネル遺伝子の遺伝子多型を調べる際に、すべてのＳＮＰを解析する必要はなく、特定のいくつかのＳＮＰについてのみタイピングを行えばよい。
４．電位依存性カルシウムチャネル遺伝子多型と薬物感受性または疾患脆弱性との相関
電位依存性カルシウムチャネル遺伝子に遺伝子多型が生じると、電位依存性カルシウムチャネルの機能や発現量が変化する場合があると考えられる。従って、電位依存性カルシウムチャネルに関するさまざまな表現型とは相関関係にある場合がある。
ここで、表現型とは、薬物の感受性に関する表現型（薬物感受性）と、疾患の発症に関する表現型（疾患脆弱性）とを挙げることができる。薬物感受性としては、薬物の有効性、薬物の副作用、薬物の有効持続期間等が挙げられる。また、疾患脆弱性としては、疼痛感受性、薬物依存への脆弱性等が挙げられる。
前記薬物としては、限定はされないが、オピオイド受容体機能修飾薬、ニコチン受容体機能修飾薬および電位依存性カルシウムチャネル機能修飾薬等が好ましく挙げられ、例えば、オピオイド受容体、ニコチン受容体またはカルシウムチャネルに直接的または間接的に作用する各種薬物が挙げられる。オピオイド受容体に直接的または間接的に作用する各種薬物としては、具体的には、メタンフェタミン等の覚醒剤、ドパミン受容体作動薬、ドパミン受容体拮抗薬、μ、κ、δオピオイド受容体作動薬、μ、κ、δオピオイド受容体拮抗薬等を挙げることができる。ニコチン受容体直接的または間接的に作用する各種薬物としては、具体的には、ニコチン受容体の作動薬及び拮抗薬等を挙げることができる。カルシウムチャネルに直接的または間接的に作用する各種薬物としては、具体的には、カルシウムチャネル各サブユニットの作動薬及び拮抗薬等を挙げることができる。
オピオイド受容体機能修飾薬としては、例えば、モルヒネ、ＤＡＭＧＯ、コデイン、メサドン、カルフェンタニル、フェンタニル、ヘロイン、コカイン、ナロキソン、ナルトレキソン、ナロルフィン、レバロルファン、ペンタゾシン、ペチジン、ブプレノルフィン、オキシコドン、ヒドロコドン、レボルファノール、エトルフィン、ジヒドロエトルフィン、ヒドロモルホン、オキシモルホン、トラマドール、ジクロフェナク、インドメタシン、フルルビプロフェンアキセチル、マーカイン、エタノール、メタノール、ジエチルエーテル、プロパノール、ブタノール、フルピルチン、笑気、Ｆ３（１−クロロ−１，２，２トリフルオロサイクロブタン）、ハロセン、エストラジオール、ジチオトレイトール、チオリダジン、ピモザイド、フルオキセチン、パロキセチン、デシプラミン、イミプラミン、クロミプラミン、テトラミド、イソフルレン、ギンセノシド、イフェンプロディール、ブピバカイン、テルチアピン、クロザピン、ハロペリドール、ＳＣＨ２３３９０およびコカイン等が挙げられ、特にモルヒネ、ペンタゾシン、ペチジン、ブプレノルフィン、ジクロフェナク、インドメタシン、フルルビプロフェンアキセチル、マーカインが好ましく、モルヒネ、フェンタニルおよびペンタゾシンがより好ましい。
ニコチン受容体機能修飾薬としては、例えば、カルバコール、ＡＢＴ−５９４、バレニクリン、スキサメトニウム、ヘキサメトニウム、パンクロニウム、ベクロニウム、ツボクラリン、トリメタファン、メカミラミン及びチャンピックスがより好ましい。
電位依存性カルシウムチャネル機能修飾薬としては、例えば、ωアガトキシンＩＶＡ、ωアガトキシンＴＫ、アムロジピン、（±）−Ｂａｙ Ｋ ８６６４、（Ｒ）−（±）−Ｂａｙ Ｋ ８６６４、シナロング、ω−コノトクシン、ＧＶＩＡ、ω−コノトクシンＭＶＩＩＣ、ジルチアゼム、フェロジピン、フルナリジン、ＦＰＬ６４１７６、ガバペンチン、イスラジピン、ノルバスク、アダラート、アムロジン、コニール、ヘルベッサー、ペルジピン、カルスロット、ニバジール、レルカニジピン、ロペラミド、ミベフラジル、エトスクシミド、ネフィラセタム、ニグルジピン、ニモジピン、ニトレンジピン、ＮＮＣ５５−０３９６、ルテニウムレッド、ＳＮＸ４８２、ＳＲ３３８０−５、クトキシン、アミロライド、低濃度Ｎｉ２＋、エトスクシミド、ゾニサミト、ジヒドロビリジン、ベンゾチアゼピン、アルキルアミン、ニフェジピン、ジコノチド、ＳＮＸ−４８２、プレガバリン、ニカルジピン、シルニジピン、ベラパミル、バイミカード、エマベリン、ヒポカ、およびロメリジン（フルナリジン）がより好ましい。
カルシウムシャネル遺伝子多型と表現型との相関は、例えば、以下の（１）〜（３）のように調べることができる。
（１）健常者における連鎖不平衡解析およびハプロタイプ解析の結果、推定された連鎖不平衡ブロック内の遺伝子多型を選択する。例えば、代表的な遺伝子多型であるＴａｇ ＳＮＰを表現型との相関解析用のカルシウムチャネル遺伝子多型として選択する。
（２）次に、被験者（患者）における該遺伝子多型についての遺伝子多型頻度を解析する。遺伝子多型と疾患脆弱性との相関を調べる場合、被験者と健常者の遺伝子多型頻度との比較を行う。比較においてはχ２検定などの統計手法を用いることが有効である。
ここで、さらに、表現型の違いにより被験者を分類し、分類毎に健常者と被験者の遺伝子多型頻度や遺伝子型を比較してもよい。ニコチン依存に関する表現型は、例えば、タバコをすい始めてからタバコをやめるまでの喫煙期間で分類できる。
（３）被験者において薬物感受性と有意に関連した遺伝子多型があれば、該遺伝子多型を薬物感受性の遺伝的要因（遺伝的素因）の評価に用いることができる。また、健常者と被験者との間で遺伝子多型頻度に有意差のある遺伝子多型があれば、該遺伝子多型を疾患脆弱性の遺伝的要因（遺伝的素因）の評価に用いることができる。
ただし、遺伝子多型の傾向は、人種や出身地等に影響されることが示唆されているため、関連する遺伝子多型（例えばＳＮＰ）を見出すのに用いた母集団と同様な遺伝子多型を示す集団おいて、当該遺伝子多型を用いる上記評価を行うことが望ましい。
カルシウムチャネル遺伝子多型と表現型との相関の具体例を以下の（１）〜（３）に示す。
（１）術後２４時間内フェンタニル投与量の測定結果との相関において、ＣＡＣＮＡ１Ｅ遺伝子多型のｒｓ３８４５４４６、ｒｓ３７５３７５２、ｒｓ２２８０８６９、ｒｓ４７３２００、ｒｓ７０４３２６、ｒｓ６１０１００、ｒｓ５８５３１５、ｒｓ９２８６８４４多型とフェンタニル投与量との間に有意な関連を認め（表３７参照）、ｒｓ３８４５４４６多型のＧアレルの保有者は術後のフェンタニル感受性亢進の予測に有意に役立つことがわかった。同様に、ｒｓ３７５３７５２多型のＴアレル保有者、ｒｓ２２８０８６９多型のＣアレル保有者、ｒｓ４７３２００多型のＴアレル保有者、ｒｓ７０４３２６多型のＣアレルの保有者、ｒｓ６１０１００多型Ｃ／Ｃの患者、ｒｓ５８５３１５多型Ｔ／Ｔの患者、ｒｓ９２８６８４４多型Ｇ／Ｇの患者は術後のフェンタニル感受性亢進の予測に有意に役立つことがわかった。
上記三つのように解析されたカルシウムチャネル遺伝子多型と表現型との相関は、オピオイド受容体およびカルシウムチャネルに関する様々な薬物および疼痛の感受性を予測する方法、オピオイド受容体およびカルシウムチャネルに関する疾患の治療または予防法を選択する方法、または治療用の薬物の適正投与量を決定する方法、副作用を予測する方法などの指標として利用することができる。
また、本発明の遺伝子多型または方法を用いて、人種の違いによる薬物感受性または疾患脆弱性を評価することが可能である。対象者は特に限定されるものではなく、日本人、欧米人などが挙げられるが、本発明においては日本人または日本人と同様の遺伝子多型傾向を有する者であることが好ましい。
６．遺伝子多型の検出
被験対象者からのゲノム試料は、血液、唾液、皮膚等から抽出することができるが、ゲノム試料を採取できるものであれば、これに限定されるものではない。ゲノムＤＮＡの抽出および精製法は周知である。例えば、ヒトから採取した血液、唾液、皮膚等の検体から、フェノール法等を用いてゲノムＤＮＡを精製する。その際、ＧＦＸ Ｇｅｎｏｍｉｃ Ｂｌｏｏｄ ＤＮＡ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（ＧＥ ヘルスケア バイオサイエンス株式会社製）等の市販のゲノムＤＮＡ抽出キットや装置を用いてもよい。検出するＳＮＰがエクソン中にある場合は、ゲノムＤＮＡの代わりにｍＲＮＡやｔｏｔａｌ ＲＮＡを抽出してもよい。
ゲノム試料中のカルシウムチャネル遺伝子多型の検出には、上記した本発明のオリゴヌクレオチドをプローブとして用いることができる。以下、遺伝子多型検出法の一例を示す。
（１）ＰＣＲ法による遺伝子多型の検出
ＰＣＲにより被験サンプルを増幅するには、忠実度の高いＤＮＡポリメラーゼ、例えば、ＫＯＤ Ｄａｓｈポリメラーゼ（ＴＯＹＯＢＯ社製）を用いることが好ましい。用いるプライマーは、被験サンプル中の対象ＳＮＰを増幅できるように適宜設計し合成することができる。上流および下流側のプライマーの間の任意の位置に遺伝子多型またはその相補鎖が含まれるのが好ましい。増幅反応終了後は、増幅産物の検出を行い、シークエンス法などにより遺伝子多型の有無を判定する。
（２）塩基配列決定法による遺伝子多型の検出
ジデオキシ法に基づく塩基配列決定法により本発明の遺伝子多型を検出することもできる。塩基配列決定に用いるシークエンサーには、市販のＡＢＩシリーズ（アプライドバイオシステムズ（ライフテクノロジーズ））を用いることができる。
（３）ＤＮＡマイクロアレイによる遺伝子多型の検出
ＤＮＡマイクロアレイは、支持体上にオリゴヌクレオチドプローブが固定されたものであり、ＤＮＡチップ、Ｇｅｎｅチップ、マイクロチップ、ビーズアレイなどを含む。まず、被験サンプルのポリヌクレオチドを単離し、ＰＣＲにより増幅し、蛍光レポーター基により標識する。続いて、標識化ＤＮＡ／ｍＲＮＡ、ｔｏｔａｌ ＲＮＡをアレイと共にインキュベートする。
次に前記アレイをスキャナーに差し込み、ハイブリダイゼーションパターンを検出する。ハイブリダイゼーションのデータは、プローブアレイに結合した（すなわち標的配列に取り込まれた）蛍光レポーター基からの発光として採集する。標的配列と完全に一致したプローブは、標的配列と一致していない部分を有するものよりも強いシグナルを生じる。
アレイ上の各プローブの配列および位置は分かっているため、相補性によって、プローブアレイと反応させた標的ポリヌクレオチドの配列を決定することができる。
（４）ＴａｑＭａｎ ＰＣＲ法による遺伝子多型の検出
ＴａｑＭａｎ ＰＣＲ法は、蛍光標識したアレル特異的オリゴヌクレオチド（ＴａｑＭａｎプローブとも言う）とＴａｑ ＤＮＡポリメラーゼによるＰＣＲとを利用する方法である。アレル特異的オリゴヌクレオチドとは、遺伝子多型部位を含むオリゴヌクレオチドである。ＴａｑＭａｎ ＰＣＲ法で用いるアレル特異的オリゴヌクレオチドは、前記遺伝子多型情報に基づいて設計することができる。
（５）インベーダー法による遺伝子多型の検出
インベーダー法は、アレル特異的オリゴヌクレオチドと鋳型とをハイブリダイゼーションすることにより遺伝子多型を検出する方法である。インベーダー法を行うためのキットは市販されており（例えばＮａｎｏ Ｉｎｖａｄｅｒ（Ｒ）Ａｒｒａｙ（ビー・エム・エル社製））、この方法により容易に遺伝子多型を検出することが可能である。
７．キット
本発明は、薬物・疼痛感受性または疾患脆弱性を評価するためのキットを提供する。本発明の遺伝子多型検出用キットは、本発明を実施するために必要な１種以上の成分を含む。
例えば、本発明のキットは、酵素を保存若しくは供給するためのもの、および／または遺伝子多型検出を実施するために必要な反応成分を含むことが好ましい。当該成分としては、限定されるものではないが、例えば、本発明のオリゴヌクレオチド、酵素緩衝液、ｄＮＴＰ、コントロール用試薬（例えば、組織サンプル、ポジティブおよびネガティブコントロール用標的オリゴヌクレオチドなど）、標識用および／または検出用試薬、固相支持体、説明書などが挙げられる。また本発明のキットは、必要な成分のうちの一部のみを含む部分的キットであってもよく、その場合には、ユーザーが他の成分を用意することができる。
本発明のキットは、上記オリゴヌクレオチドを支持体に固定したマイクロアレイとして提供することもできる。マイクロアレイは、支持体上に本発明のオリゴヌクレオチドが固定されたものであり、ＤＮＡチップ、Ｇｅｎｅチップ、マイクロチップ、ビーズアレイなどを含む。
本発明のキットは、本発明において見出されたオリゴヌクレオチド、すなわち、電位依存性カルシウムチャネル遺伝子多型を含み、当該遺伝子多型を含むＤＮＡ断片に特異的にハイブリダイズしうるオリゴヌクレオチド、好ましくは、配列番号１〜９０のいずれか１つに示される塩基配列のうち第５１番目の塩基を含む少なくとも１０塩基長（例えば１０〜１５０塩基長）の塩基配列または該塩基配列に相補的な塩基配列からなるオリゴヌクレオチド、より好ましくは配列番号１〜９０のいずれか１つに示される塩基配列または該塩基配列に相補的な塩基配列からなる群から選択されるオリゴヌクレオチドを含むことができる。当該オリゴヌクレオチドを用いた電位依存性カルシウムチャネルの遺伝子多型の検出は、例えばハイブリダイゼーション（ＤＮＡマイクロアレイを利用した方法等）により行うことができる。
本発明のキットにより遺伝子多型を判定する場合、例えば、薬物を患者等に使用する前（例えば手術前、癌性疼痛時等）に採血してカルシウムチャネル遺伝子を含むＤＮＡを単離し、該遺伝子をキット中のオリゴヌクレオチドと反応させて遺伝子型を判定する。
判定した遺伝子型および遺伝子多型から薬物の種類または用量などの投与計画を作成することができる。その結果、個人に合った薬物効果を得ることができ、オーダーメイド医療に有用となる。例えばモルヒネを使用する場合は、個人に合った鎮痛効果を得、また副作用を最低限に抑えることができる。
以下に、実施例を挙げて本発明をより具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
＜ＳＮＰ解析およびハプロタイプ構築＞
（ＳＮＰ解析）
ヒト（日本人健常者：１２１名）の血液から常法によりゲノムＤＮＡを抽出し、カルシウムチャネルの多数のサブタイプのうち脳で発現する３つのサブユニット（ＣＡＣＮＡ１Ａ、ＣＡＣＮＡ１Ｂ、ＣＡＣＮＡ１Ｅ）について遺伝子多型を同定した。
具体的には、当該遺伝子多型の同定は、配列番号１〜９０に示される塩基配列からなる各オリゴヌクレオチドをプローブとして用いた下記（１）〜（５）の手順によるハイブリダイゼーションにより行った。
（１）ヒトから採取した血液検体から、フェノール法等を用いてゲノムＤＮＡを精製する。その際、ＧＦＸ Ｇｅｎｏｍｉｃ Ｂｌｏｏｄ ＤＮＡ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（ＧＥ ヘルスケア バイオサイエンス株式会社製）等の市販のゲノムＤＮＡ抽出キットや装置を用いてもよい。
（２）次に、得られたゲノムＤＮＡをＴＥ ｂｕｆｆｅｒ（１０ｍＭ ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，１ｍＭ ＥＤＴＡ，ｐＨ８．０）に溶解し、１００ｎｇ／μｌに調整する。
（３）イルミナ社製、ｉＳｃａｎシステム（Ｉｌｌｕｍｉｎａ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を利用したＩｎｆｉｎｉｕｍ ａｓｓａｙ ＩＩ法により、メーカー側のプロトコルに従って全ゲノムジェノタイピングを行う。具体的には、配列番号１〜９０に示される塩基配列からなる各オリゴヌクレオチドを結合したビーズチップに、増幅したゲノムＤＮＡをハイブリダイゼーションし、一塩基伸長法により遺伝子多型を検出する。
（４）ＢｅａｄＳｔｕｄｉｏ Ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ ｍｏｄｕｌｅ ｖ３．３．７（Ｉｌｌｕｍｉｎａ）などを用いて全ゲノムジェノタイピングデータ解析を行い、各サンプルの遺伝子多型データの品質評価（Ｑｕａｌｉｔｙ ｃｏｎｔｒｏｌ）を行う。
（５）これらの全ゲノムジェノタイピングデータより、目的の遺伝子名のアノテーション情報を手掛かりにしてその遺伝子領域およびフランキング領域に含まれる遺伝子多型を選定し、ＢｅａｄＳｔｕｄｉｏ Ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ ｍｏｄｕｌｅ ｖ３．３．７（Ｉｌｌｕｍｉｎａ）などの出力機能を用いてそれらの遺伝子多型情報を全て抽出する。
ＣＡＣＮＡ１Ａサブタイプ遺伝子に関しては、全エクソン領域、５´および３´フランキング領域およびイントロンの一部を解析範囲とした。ＣＡＣＮＡ１Ａサブユニット遺伝子は、４７個のエクソンより構成され、フランキング領域を含めた全領域における１１６個のＳＮＰｓを同定した。連鎖不平衡解析により、１７個の連鎖不平衡ブロックを見出した（図２および前記表１７参照）。これらの多型のうち、ＣＡＣＮＡ１Ａ遺伝子のｒｓ２２９２０３５、ｒｓ２２９２０３６、ｒｓ２２９２０３７、ｒｓ１５０２０１７、ｒｓ１８６２２６０、ｒｓ４９２６２９３、ｒｓ１１２０５５９、ｒｓ１４２２２５８、ｒｓ５０２１３２８、ｒｓ５０２１３２７、ｒｓ１３４５６４９及びｒｓ１０４１９２１５が薬物感受性と有意な関連があることが見出された。
また、同様に、ＣＡＣＮＡ１Ｂサブタイプ遺伝子に関しても、全エクソン領域、５´および３´フランキング領域およびイントロンの一部を解析範囲とした。ＣＡＣＮＡ１Ｂサブユニット遺伝子は４７個のエクソンより構成され、フランキング領域を含めた全領域における１０１個のＳＮＰｓを同定した。連鎖不平衡解析により、１３個の連鎖不平衡ブロックを見出した（図３および前記表１８参照）。そのうち、ＣＡＣＮＡ１Ｂ遺伝子のｒｓ７０２５５５７、ｒｓ６５５９２４３、ｒｓ１２３５０７３２、ｒｓ１０８６７０８４、ｒｓ４０７２５６３、ｒｓ７８５８２５５、ｒｓ４０７６７１２、ｒｓ２２９０５８２、ｒｓ１２０００２３３、ｒｓ２１６８５２５、ｒｓ３８１２５４１、ｒｓ１５３１１６６、ｒｓ７３５７７３３及びｒｓ１１１３７３７２が薬物感受性と有意な関連があることが見出された。
また、同様に、ＣＡＣＮＡ１Ｅサブタイプ遺伝子に関しても、全エクソン領域、５´および３´フランキング領域およびイントロンの一部を解析範囲とした。ＣＡＣＮＡ１Ｅサブユニット遺伝子は４７個のエクソンより構成され、フランキング領域を含めた全領域における１３７個のＳＮＰｓを同定した。連鎖不平衡解析により、１２個の連鎖不平衡ブロックを見出した（図４および前記表１９参照）。そのうち、ＣＡＣＮＡ１Ｅ遺伝子のｒｓ１２４０５８６０、ｒｓ５５８９９４、ｒｓ１７４９４６８１、ｒｓ６８１２７１、ｒｓ４１２６６９０、ｒｓ５１７２０９、ｒｓ５８９０８２、ｒｓ１０９１０９４８、ｒｓ６２５２２６、ｒｓ４１４６６３４、ｒｓ２２２５８７５、ｒｓ６６８１０１７、ｒｓ１９３３０４９、ｒｓ１２０２４８４２、ｒｓ４６５２６６３、ｒｓ１１５８００５２、ｒｓ７５２４３０９、ｒｓ１０７９７７２４、ｒｓ１０７９７７２９、ｒｓ１０７９７７３０、ｒｓ１９９９８３８、ｒｓ７５１１７４８、ｒｓ１２１３５９５９、ｒｓ３８５６０９０、ｒｓ１０４９４５４０、ｒｓ１２１３８６３４、ｒｓ３８５６０９４、ｒｓ１２１３９６７７、ｒｓ２２８０８６６、ｒｓ３７６７００４、ｒｓ７０４３３２、ｒｓ７０４３３１、ｒｓ４６５２６７８、ｒｓ７０４３２９、ｒｓ４６５２６７９、ｒｓ６９７２６０、ｒｓ１９９９２３、ｒｓ１９９９３０、ｒｓ２２８０８６、ｒｓ４７３２００、ｒｓ６０１０５９、ｒｓ７０４３２６、ｒｓ３８４５４４６、ｒｓ３７５３７５２、ｒｓ２２８０８６９、ｒｓ６３８１３２、ｒｓ１２０４５４５８、ｒｓ７５１３６８５、ｒｓ６１０１００、ｒｓ４８０７５２、ｒｓ１２１３０８６８、ｒｓ１２８１１９４、ｒｓ１２１３６３９０、ｒｓ５８５３１５、ｒｓ１２０７１１９１、ｒｓ４８６００３、ｒｓ６９５０７２、ｒｓ１３３７５２７３、ｒｓ４４６５１５５、ｒｓ７５３３２９７、ｒｓ７５３５６６６、ｒｓ５９８７１４、ｒｓ６７７６１８及びｒｓ９２８６８４４が薬物感受性と有意な関連があることが見出された。
（ハプロタイプ構築）
ハプロタイプ解析の例として、日本人健常者のカルシウムチャネル遺伝子多型のうち、薬物感受性と有意な関連があるＣＡＣＮＡ１Ａ遺伝子の１２箇所のＳＮＰ、ＣＡＣＮＡ１Ｂ遺伝子の１４箇所のＳＮＰ、およびＣＡＣＮＡ１Ｅ遺伝子の６４箇所のＳＮＰに関して、Ｈａｐｌｏｖｉｅｗを用いてハプロタイプを推定した。推定したハプロタイプを表４０〜表５５に示す。
表４０〜表４２に示すように、ＣＡＣＮＡ１Ａ遺伝子多型において、薬物感受性と有意な関連がある多型は、三つの連鎖不平衡ブロックを確認した。少なくとも１０ハプロタイプが推定された。
表４３〜表４６に示すように、ＣＡＣＮＡ１Ｂ遺伝子多型において、薬物感受性と有意な関連がある多型は、四つの連鎖不平衡ブロックを確認した。少なくとも１５ハプロタイプが推定された。
表４７〜表５５に示すように、ＣＡＣＮＡ１Ｅ遺伝子多型において、薬物感受性と有意な関連がある多型は、９個連鎖不平衡ブロックを確認した。少なくとも４３ハプロタイプが推定された。
表４０〜表５５に示すハプロタイプ解析のハプロタイプ頻度の解析とともに、連鎖不平衡解析を行った。その結果を図５〜図１２に示す。図５および図６に、薬物感受性と有意な関連があるＣＡＣＮＡ１Ａ遺伝子多型間の連鎖不平衡を示す。また、図７および図８に、薬物感受性と有意な関連があるＣＡＣＮＡ１Ｂ遺伝子多型間の連鎖不平衡を示す。さらに、図９〜図１２に、薬物感受性と有意な関連があるＣＡＣＮＡ１Ｅ遺伝子多型間の連鎖不平衡を示す。
連鎖不平衡解析を行った結果（図５〜図１２）からＨａｐｌｏｖｉｅｗを用いて連鎖不平衡ブロックを推定した。
図５〜図１２において、ＳＮＰとＳＮＰとの連鎖不平衡の指標であるＤ´値を計算し、その値の小数点以下２桁の値を図の各ＳＮＰから左下または右下方向に連なる四角形の交わった四角形に記している。なお、値の無い四角形はＤ´値が１であることを示す。
図５〜図１２において、多くの遺伝子多型の組み合わせにおいて、完全連鎖不平衡（Ｄ´＝１）が確認された。
推定された連鎖不平衡ブロック中の特定のＳＮＰを調べると、間接的に同一ブロック内で連鎖しているＳＮＰの情報を知ることができる。つまり、同じ連鎖不平衡ブロック中のすべてのＳＮＰを解析する必要はなく、特定のいくつかのＳＮＰについてのみタイピングを行えばよい。
（ＳＮＰ解析）
ヒト（日本人健常者：１２１名）の血液から常法によりゲノムＤＮＡを抽出し、カルシウムチャネルの多数のサブタイプのうち脳で発現する３つのサブユニット（ＣＡＣＮＡ１Ａ、ＣＡＣＮＡ１Ｂ、ＣＡＣＮＡ１Ｅ）について遺伝子多型を同定した。
具体的には、当該遺伝子多型の同定は、配列番号１〜９０に示される塩基配列からなる各オリゴヌクレオチドをプローブとして用いた下記（１）〜（５）の手順によるハイブリダイゼーションにより行った。
（１）ヒトから採取した血液検体から、フェノール法等を用いてゲノムＤＮＡを精製する。その際、ＧＦＸ Ｇｅｎｏｍｉｃ Ｂｌｏｏｄ ＤＮＡ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（ＧＥ ヘルスケア バイオサイエンス株式会社製）等の市販のゲノムＤＮＡ抽出キットや装置を用いてもよい。
（２）次に、得られたゲノムＤＮＡをＴＥ ｂｕｆｆｅｒ（１０ｍＭ ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，１ｍＭ ＥＤＴＡ，ｐＨ８．０）に溶解し、１００ｎｇ／μｌに調整する。
（３）イルミナ社製、ｉＳｃａｎシステム（Ｉｌｌｕｍｉｎａ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を利用したＩｎｆｉｎｉｕｍ ａｓｓａｙ ＩＩ法により、メーカー側のプロトコルに従って全ゲノムジェノタイピングを行う。具体的には、配列番号１〜９０に示される塩基配列からなる各オリゴヌクレオチドを結合したビーズチップに、増幅したゲノムＤＮＡをハイブリダイゼーションし、一塩基伸長法により遺伝子多型を検出する。
（４）ＢｅａｄＳｔｕｄｉｏ Ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ ｍｏｄｕｌｅ ｖ３．３．７（Ｉｌｌｕｍｉｎａ）などを用いて全ゲノムジェノタイピングデータ解析を行い、各サンプルの遺伝子多型データの品質評価（Ｑｕａｌｉｔｙ ｃｏｎｔｒｏｌ）を行う。
（５）これらの全ゲノムジェノタイピングデータより、目的の遺伝子名のアノテーション情報を手掛かりにしてその遺伝子領域およびフランキング領域に含まれる遺伝子多型を選定し、ＢｅａｄＳｔｕｄｉｏ Ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ ｍｏｄｕｌｅ ｖ３．３．７（Ｉｌｌｕｍｉｎａ）などの出力機能を用いてそれらの遺伝子多型情報を全て抽出する。
ＣＡＣＮＡ１Ａサブタイプ遺伝子に関しては、全エクソン領域、５´および３´フランキング領域およびイントロンの一部を解析範囲とした。ＣＡＣＮＡ１Ａサブユニット遺伝子は、４７個のエクソンより構成され、フランキング領域を含めた全領域における１１６個のＳＮＰｓを同定した。連鎖不平衡解析により、１７個の連鎖不平衡ブロックを見出した（図２および前記表１７参照）。これらの多型のうち、ＣＡＣＮＡ１Ａ遺伝子のｒｓ２２９２０３５、ｒｓ２２９２０３６、ｒｓ２２９２０３７、ｒｓ１５０２０１７、ｒｓ１８６２２６０、ｒｓ４９２６２９３、ｒｓ１１２０５５９、ｒｓ１４２２２５８、ｒｓ５０２１３２８、ｒｓ５０２１３２７、ｒｓ１３４５６４９及びｒｓ１０４１９２１５が薬物感受性と有意な関連があることが見出された。
また、同様に、ＣＡＣＮＡ１Ｂサブタイプ遺伝子に関しても、全エクソン領域、５´および３´フランキング領域およびイントロンの一部を解析範囲とした。ＣＡＣＮＡ１Ｂサブユニット遺伝子は４７個のエクソンより構成され、フランキング領域を含めた全領域における１０１個のＳＮＰｓを同定した。連鎖不平衡解析により、１３個の連鎖不平衡ブロックを見出した（図３および前記表１８参照）。そのうち、ＣＡＣＮＡ１Ｂ遺伝子のｒｓ７０２５５５７、ｒｓ６５５９２４３、ｒｓ１２３５０７３２、ｒｓ１０８６７０８４、ｒｓ４０７２５６３、ｒｓ７８５８２５５、ｒｓ４０７６７１２、ｒｓ２２９０５８２、ｒｓ１２０００２３３、ｒｓ２１６８５２５、ｒｓ３８１２５４１、ｒｓ１５３１１６６、ｒｓ７３５７７３３及びｒｓ１１１３７３７２が薬物感受性と有意な関連があることが見出された。
また、同様に、ＣＡＣＮＡ１Ｅサブタイプ遺伝子に関しても、全エクソン領域、５´および３´フランキング領域およびイントロンの一部を解析範囲とした。ＣＡＣＮＡ１Ｅサブユニット遺伝子は４７個のエクソンより構成され、フランキング領域を含めた全領域における１３７個のＳＮＰｓを同定した。連鎖不平衡解析により、１２個の連鎖不平衡ブロックを見出した（図４および前記表１９参照）。そのうち、ＣＡＣＮＡ１Ｅ遺伝子のｒｓ１２４０５８６０、ｒｓ５５８９９４、ｒｓ１７４９４６８１、ｒｓ６８１２７１、ｒｓ４１２６６９０、ｒｓ５１７２０９、ｒｓ５８９０８２、ｒｓ１０９１０９４８、ｒｓ６２５２２６、ｒｓ４１４６６３４、ｒｓ２２２５８７５、ｒｓ６６８１０１７、ｒｓ１９３３０４９、ｒｓ１２０２４８４２、ｒｓ４６５２６６３、ｒｓ１１５８００５２、ｒｓ７５２４３０９、ｒｓ１０７９７７２４、ｒｓ１０７９７７２９、ｒｓ１０７９７７３０、ｒｓ１９９９８３８、ｒｓ７５１１７４８、ｒｓ１２１３５９５９、ｒｓ３８５６０９０、ｒｓ１０４９４５４０、ｒｓ１２１３８６３４、ｒｓ３８５６０９４、ｒｓ１２１３９６７７、ｒｓ２２８０８６６、ｒｓ３７６７００４、ｒｓ７０４３３２、ｒｓ７０４３３１、ｒｓ４６５２６７８、ｒｓ７０４３２９、ｒｓ４６５２６７９、ｒｓ６９７２６０、ｒｓ１９９９２３、ｒｓ１９９９３０、ｒｓ２２８０８６、ｒｓ４７３２００、ｒｓ６０１０５９、ｒｓ７０４３２６、ｒｓ３８４５４４６、ｒｓ３７５３７５２、ｒｓ２２８０８６９、ｒｓ６３８１３２、ｒｓ１２０４５４５８、ｒｓ７５１３６８５、ｒｓ６１０１００、ｒｓ４８０７５２、ｒｓ１２１３０８６８、ｒｓ１２８１１９４、ｒｓ１２１３６３９０、ｒｓ５８５３１５、ｒｓ１２０７１１９１、ｒｓ４８６００３、ｒｓ６９５０７２、ｒｓ１３３７５２７３、ｒｓ４４６５１５５、ｒｓ７５３３２９７、ｒｓ７５３５６６６、ｒｓ５９８７１４、ｒｓ６７７６１８及びｒｓ９２８６８４４が薬物感受性と有意な関連があることが見出された。
（ハプロタイプ構築）
ハプロタイプ解析の例として、日本人健常者のカルシウムチャネル遺伝子多型のうち、薬物感受性と有意な関連があるＣＡＣＮＡ１Ａ遺伝子の１２箇所のＳＮＰ、ＣＡＣＮＡ１Ｂ遺伝子の１４箇所のＳＮＰ、およびＣＡＣＮＡ１Ｅ遺伝子の６４箇所のＳＮＰに関して、Ｈａｐｌｏｖｉｅｗを用いてハプロタイプを推定した。推定したハプロタイプを表４０〜表５５に示す。
表４３〜表４６に示すように、ＣＡＣＮＡ１Ｂ遺伝子多型において、薬物感受性と有意な関連がある多型は、四つの連鎖不平衡ブロックを確認した。少なくとも１５ハプロタイプが推定された。
表４７〜表５５に示すように、ＣＡＣＮＡ１Ｅ遺伝子多型において、薬物感受性と有意な関連がある多型は、９個連鎖不平衡ブロックを確認した。少なくとも４３ハプロタイプが推定された。
表４０〜表５５に示すハプロタイプ解析のハプロタイプ頻度の解析とともに、連鎖不平衡解析を行った。その結果を図５〜図１２に示す。図５および図６に、薬物感受性と有意な関連があるＣＡＣＮＡ１Ａ遺伝子多型間の連鎖不平衡を示す。また、図７および図８に、薬物感受性と有意な関連があるＣＡＣＮＡ１Ｂ遺伝子多型間の連鎖不平衡を示す。さらに、図９〜図１２に、薬物感受性と有意な関連があるＣＡＣＮＡ１Ｅ遺伝子多型間の連鎖不平衡を示す。
連鎖不平衡解析を行った結果（図５〜図１２）からＨａｐｌｏｖｉｅｗを用いて連鎖不平衡ブロックを推定した。
図５〜図１２において、ＳＮＰとＳＮＰとの連鎖不平衡の指標であるＤ´値を計算し、その値の小数点以下２桁の値を図の各ＳＮＰから左下または右下方向に連なる四角形の交わった四角形に記している。なお、値の無い四角形はＤ´値が１であることを示す。
図５〜図１２において、多くの遺伝子多型の組み合わせにおいて、完全連鎖不平衡（Ｄ´＝１）が確認された。
推定された連鎖不平衡ブロック中の特定のＳＮＰを調べると、間接的に同一ブロック内で連鎖しているＳＮＰの情報を知ることができる。つまり、同じ連鎖不平衡ブロック中のすべてのＳＮＰを解析する必要はなく、特定のいくつかのＳＮＰについてのみタイピングを行えばよい。
＜カルシウムチャネル遺伝子多型と、術後２４時間鎮痛薬投与必要量との相関＞
カルシウムチャネル遺伝子多型と、鎮痛薬投与必要量との相関を調べた。外科手術を受けた１２１名の患者の血液よりゲノムＤＮＡを抽出し、カルシウムチャネル遺伝子の遺伝子多型を判定した。そして、これら遺伝子多型の判定結果と、術後の鎮痛薬投与必要量との相関を解析した。
なお、鎮痛薬としては、主にＰＣＡ（Ｐａｔｉｅｎｔ−ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ａｎａｌｇｅｓｉａ）ポンプにより静脈内投与されるフェンタニルを用いた。
その結果、下記表５６に示すように、ＣＡＣＮＡ１Ｅ遺伝子多型については、ｒｓ３８４５４４６、ｒｓ３７５３７５２、ｒｓ２２８０８６９、ｒｓ４７３２００、ｒｓ７０４３２６、ｒｓ６１０１００、ｒｓ５８５３１５、ｒｓ９２８６８４４多型とフェンタニル投与量との間に有意な関連が認められ、ｒｓ３８４５４４６多型のＧアレルの保有者は術後のフェンタニル感受性亢進の予測に有意に役立つことがわかった。同様に、ｒｓ３７５３７５２多型のＴアレル保有者、ｒｓ２２８０８６９多型のＣアレル保有者、ｒｓ４７３２００多型のＴアレル保有者、ｒｓ７０４３２６多型のＣアレルの保有者、ｒｓ６１０１００多型Ｃ／Ｃの患者、ｒｓ５８５３１５多型Ｔ／Ｔの患者、ｒｓ９２８６８４４多型Ｇ／Ｇの患者は術後のフェンタニル感受性亢進の予測に有意に役立つことがわかった。したがって、ＣＡＣＮＡ１Ｅ遺伝子のｒｓ３８４５４４６、ｒｓ３７５３７５２、ｒｓ２２８０８６９、ｒｓ４７３２００、ｒｓ７０４３２６、ｒｓ６１０１００、ｒｓ５８５３１５、ｒｓ９２８６８４４多型を解析することにより、鎮痛薬への感受性を予測することができる。
例として、ｒｓ３８４５４４６について臨床的な有用性を示す（表５６及び図１３参考）。手術後２４時間のフェンタニル投与必要量の中央値２．２６（μｇ）の値を基準としてそれより小さい値および大きい値の患者群をそれぞれ鎮痛薬高感受性群および鎮痛薬低感受性群と定義し、ＣＡＣＮＡ１Ｅ遺伝子のｒｓ３８４５４４６多型により層別化したところ、この多型においてＡ／Ａの患者群では、３２．７％および６７．３％の患者がそれぞれ鎮痛薬高感受性群および鎮痛薬低感受性群と判定されたのに対し、Ｇアレルの保有群では、６０．６％および４０．４％の患者がそれぞれ鎮痛薬高感受性群および鎮痛薬低感受性群と判定された。
カルシウムチャネル遺伝子多型と、鎮痛薬投与必要量との相関を調べた。外科手術を受けた１２１名の患者の血液よりゲノムＤＮＡを抽出し、カルシウムチャネル遺伝子の遺伝子多型を判定した。そして、これら遺伝子多型の判定結果と、術後の鎮痛薬投与必要量との相関を解析した。
なお、鎮痛薬としては、主にＰＣＡ（Ｐａｔｉｅｎｔ−ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ａｎａｌｇｅｓｉａ）ポンプにより静脈内投与されるフェンタニルを用いた。
その結果、下記表５６に示すように、ＣＡＣＮＡ１Ｅ遺伝子多型については、ｒｓ３８４５４４６、ｒｓ３７５３７５２、ｒｓ２２８０８６９、ｒｓ４７３２００、ｒｓ７０４３２６、ｒｓ６１０１００、ｒｓ５８５３１５、ｒｓ９２８６８４４多型とフェンタニル投与量との間に有意な関連が認められ、ｒｓ３８４５４４６多型のＧアレルの保有者は術後のフェンタニル感受性亢進の予測に有意に役立つことがわかった。同様に、ｒｓ３７５３７５２多型のＴアレル保有者、ｒｓ２２８０８６９多型のＣアレル保有者、ｒｓ４７３２００多型のＴアレル保有者、ｒｓ７０４３２６多型のＣアレルの保有者、ｒｓ６１０１００多型Ｃ／Ｃの患者、ｒｓ５８５３１５多型Ｔ／Ｔの患者、ｒｓ９２８６８４４多型Ｇ／Ｇの患者は術後のフェンタニル感受性亢進の予測に有意に役立つことがわかった。したがって、ＣＡＣＮＡ１Ｅ遺伝子のｒｓ３８４５４４６、ｒｓ３７５３７５２、ｒｓ２２８０８６９、ｒｓ４７３２００、ｒｓ７０４３２６、ｒｓ６１０１００、ｒｓ５８５３１５、ｒｓ９２８６８４４多型を解析することにより、鎮痛薬への感受性を予測することができる。
例として、ｒｓ３８４５４４６について臨床的な有用性を示す（表５６及び図１３参考）。手術後２４時間のフェンタニル投与必要量の中央値２．２６（μｇ）の値を基準としてそれより小さい値および大きい値の患者群をそれぞれ鎮痛薬高感受性群および鎮痛薬低感受性群と定義し、ＣＡＣＮＡ１Ｅ遺伝子のｒｓ３８４５４４６多型により層別化したところ、この多型においてＡ／Ａの患者群では、３２．７％および６７．３％の患者がそれぞれ鎮痛薬高感受性群および鎮痛薬低感受性群と判定されたのに対し、Ｇアレルの保有群では、６０．６％および４０．４％の患者がそれぞれ鎮痛薬高感受性群および鎮痛薬低感受性群と判定された。
＜カルシウムチャネル遺伝子多型と、疼痛感受性との相関＞
カルシウムチャネル遺伝子多型と、疼痛感受性との相関を調べた。外科手術を受けた１２１名の患者の血液よりゲノムＤＮＡを抽出し、カルシウムチャネル遺伝子多型を判定した。そして、これら遺伝子多型の判定結果と、術前の手指氷水浸漬による疼痛感知潜時の測定との相関を解析した。
その結果、下記表５７に示すように、ＣＡＣＮＡ１Ｅ遺伝子多型のｒｓ１２４０５８６０、ｒｓ４１４６６３４、ｒｓ３７６７００４多型と疼痛感知潜時との間に有意な関連が認められ、ｒｓ１２４０５８６０多型Ｇ／Ｇの患者、ｒｓ４１４６６３４多型Ｇ／Ｇの患者、ｒｓ３７６７００４多型のＧアレル保有者は疼痛感受性亢進の予測に有意に役立つことがわかった。したがって、ＣＡＣＮＡ１Ｅ遺伝子多型のｒｓ１２４０５８６０、ｒｓ４１４６６３４、ｒｓ３７６７００４を解析することにより、疼痛への感受性を予測することができる。
例として、ＣＡＣＮＡ１Ｅ遺伝子多型ｒｓ４１４６６３４について臨床的な有用性を示す（表５７及び図１４参考）。術前の手指氷水浸漬による疼痛感知潜時の測定結果の中央値１４（秒）の値を基準としてそれより小さい値および大きい値の患者群をそれぞれ疼痛高感受性群および疼痛低感受性群と定義し、ＣＡＣＮＡ１Ｅ遺伝子のｒｓ４１４６６３４多型により層別化したところ、この多型においてＡアレルの保有群では４２．３％および５７．７％の患者がそれぞれ疼痛高感受性群および疼痛低感受性群と判定されたのに対し、Ｇ／Ｇの患者群では、６６．７％および３３．３％の患者がそれぞれ疼痛高感受性群および疼痛低感受性群と判定された。
カルシウムチャネル遺伝子多型と、疼痛感受性との相関を調べた。外科手術を受けた１２１名の患者の血液よりゲノムＤＮＡを抽出し、カルシウムチャネル遺伝子多型を判定した。そして、これら遺伝子多型の判定結果と、術前の手指氷水浸漬による疼痛感知潜時の測定との相関を解析した。
その結果、下記表５７に示すように、ＣＡＣＮＡ１Ｅ遺伝子多型のｒｓ１２４０５８６０、ｒｓ４１４６６３４、ｒｓ３７６７００４多型と疼痛感知潜時との間に有意な関連が認められ、ｒｓ１２４０５８６０多型Ｇ／Ｇの患者、ｒｓ４１４６６３４多型Ｇ／Ｇの患者、ｒｓ３７６７００４多型のＧアレル保有者は疼痛感受性亢進の予測に有意に役立つことがわかった。したがって、ＣＡＣＮＡ１Ｅ遺伝子多型のｒｓ１２４０５８６０、ｒｓ４１４６６３４、ｒｓ３７６７００４を解析することにより、疼痛への感受性を予測することができる。
例として、ＣＡＣＮＡ１Ｅ遺伝子多型ｒｓ４１４６６３４について臨床的な有用性を示す（表５７及び図１４参考）。術前の手指氷水浸漬による疼痛感知潜時の測定結果の中央値１４（秒）の値を基準としてそれより小さい値および大きい値の患者群をそれぞれ疼痛高感受性群および疼痛低感受性群と定義し、ＣＡＣＮＡ１Ｅ遺伝子のｒｓ４１４６６３４多型により層別化したところ、この多型においてＡアレルの保有群では４２．３％および５７．７％の患者がそれぞれ疼痛高感受性群および疼痛低感受性群と判定されたのに対し、Ｇ／Ｇの患者群では、６６．７％および３３．３％の患者がそれぞれ疼痛高感受性群および疼痛低感受性群と判定された。
＜カルシウムチャネル遺伝子多型と、鎮痛薬感受性との相関＞
カルシウムチャネル遺伝子多型と、鎮痛薬感受性との相関を調べた。外科手術を受けた１２１名の患者の血液よりゲノムＤＮＡを抽出し、カルシウムチャネル遺伝子多型を判定した。そして、これら遺伝子多型の判定結果と、術前のフェンタニル投与前後の手指氷水浸漬による疼痛感知潜時閾値差の測定との相関を解析した。
その結果、下記表５８示すように、術前のフェンタニル投与前後の手指氷水浸漬による疼痛感知潜時閾値差の測定結果との関連を解析した結果、ＣＡＣＮＡ１Ｅ遺伝子のｒｓ５５８９９４、ｒｓ６８１２７１、ｒｓ５１７２０９、ｒｓ１０７９７７２９、ｒｓ３８５６０９４、ｒｓ１２１３９６７７の遺伝子多型と疼痛感知潜時閾値差との間に有意な関連が認められ、ｒｓ５５８９９４多型Ａ／Ａの患者、ｒｓ６８１２７１多型Ｔ／Ｔの患者、ｒｓ５１７２０９多型Ｃ／Ｃの患者、ｒｓ１０７９７７２９多型Ａ／Ａの患者、ｒｓ３８５６０９４多型Ａ／Ａの患者、ｒｓ１２１３９６７７多型Ｔ／Ｔの患者は疼痛感知潜時閾値差が大きく、フェンタニルの鎮痛効果が亢進していた。したがって、ＣＡＣＮＡ１Ｅ遺伝子のｒｓ５５８９９４、ｒｓ６８１２７１、ｒｓ５１７２０９、ｒｓ１０７９７７２９、ｒｓ３８５６０９４、ｒｓ１２１３９６７７を解析することにより、鎮痛薬に対する感受性をより容易に予測することができる。
同様に、ＣＡＣＮＡ１Ａ遺伝子多型と術前のフェンタニル投与前後の手指氷水浸漬による疼痛感知潜時閾値差の測定結果との関連を解析した結果、ｒｓ１５０２０１７、ｒｓ１８６２２６０、ｒｓ４９２６２９３、ｒｓ１４２２２５８多型と疼痛感知潜時閾値差との間に有意な関連が認められ（表５８参照）、ｒｓ１５０２０１７多型Ｇ／Ｇの患者、ｒｓ１８６２２６０多型Ｔアレルの保有者、ｒｓ４９２６２９３多型Ｃ／Ｃの患者、ｒｓ１４２２２５８多型Ｔ／Ｔの患者は疼痛感知潜時閾値差が大きく、フェンタニルの鎮痛効果が亢進していた。したがって、ＣＡＣＮＡ１Ａ遺伝子ｒｓ１５０２０１７、ｒｓ１８６２２６０、ｒｓ４９２６２９３、ｒｓ１４２２２５８多型を解析することにより、鎮痛薬に対する感受性をより容易に予測することができる。
ＣＡＣＮＡ１Ｂ遺伝子多型と術前のフェンタニル投与前後の手指氷水浸漬による疼痛感知潜時閾値差の測定結果との関連を解析した結果、ｒｓ１０８６７０８４、ｒｓ２２９０５８２、ｒｓ３８１２５４１、ｒｓ７３５７７３３、ｒｓ７０２５５５７、ｒｓ６５５９２４３、ｒｓ７８５８２５５多型と疼痛感知潜時閾値差との間に有意な関連が認められ（表５８参照）、ｒｓ１０８６７０８４多型Ｔアレルの保有者、ｒｓ２２９０５８２多型Ｇ／Ｇの患者、ｒｓ３８１２５４１多型Ａ／Ａの患者、ｒｓ７３５７７３３多型Ｇアレルの保有者、ｒｓ７０２５５５７多型Ｔ／Ｔの患者、ｒｓ６５５９２４３多型Ｔアレルの保有者、ｒｓ７８５８２５５多型Ｔアレルの保有者は疼痛感知潜時閾値差が大きく、フェンタニルの鎮痛効果が亢進していた。したがって、ＣＡＣＮＡ１Ｂ遺伝子ｒｓ１０８６７０８４、ｒｓ２２９０５８２、ｒｓ３８１２５４１、ｒｓ７３５７７３３、ｒｓ７０２５５５７、ｒｓ６５５９２４３、ｒｓ７８５８２５５多型を解析することにより、鎮痛薬に対する感受性をより容易に予測することができる。
なお、例として、ＣＡＣＮＡ１Ｅ遺伝子多型ｒｓ５５８９９４について臨床的な有用性を示す（表５８及び図１５参考）。下顎形成外科手術前のフェンタニル投与前後の手指氷水浸漬による疼痛感知潜時域値差の測定結果の中央値１３（秒）の値を基準としてそれより大きい値および小さい値の患者群をそれぞれ鎮痛薬高感受性群および鎮痛薬低感受性群と定義し、ＣＡＣＮＡ１Ｅ遺伝子のｒｓ５５８９９４多型により層別化したところ、この多型においてＧアレルの保有群では、４７．７％および５２．３％の患者がそれぞれ鎮痛薬高感受性群および鎮痛薬低感受性群と判定されたのに対し、Ａ／Ａの患者群では、８５．７％および１４．３％の患者がそれぞれ鎮痛薬高感受性群および鎮痛薬低感受性群と判定された。
カルシウムチャネル遺伝子多型と、鎮痛薬感受性との相関を調べた。外科手術を受けた１２１名の患者の血液よりゲノムＤＮＡを抽出し、カルシウムチャネル遺伝子多型を判定した。そして、これら遺伝子多型の判定結果と、術前のフェンタニル投与前後の手指氷水浸漬による疼痛感知潜時閾値差の測定との相関を解析した。
その結果、下記表５８示すように、術前のフェンタニル投与前後の手指氷水浸漬による疼痛感知潜時閾値差の測定結果との関連を解析した結果、ＣＡＣＮＡ１Ｅ遺伝子のｒｓ５５８９９４、ｒｓ６８１２７１、ｒｓ５１７２０９、ｒｓ１０７９７７２９、ｒｓ３８５６０９４、ｒｓ１２１３９６７７の遺伝子多型と疼痛感知潜時閾値差との間に有意な関連が認められ、ｒｓ５５８９９４多型Ａ／Ａの患者、ｒｓ６８１２７１多型Ｔ／Ｔの患者、ｒｓ５１７２０９多型Ｃ／Ｃの患者、ｒｓ１０７９７７２９多型Ａ／Ａの患者、ｒｓ３８５６０９４多型Ａ／Ａの患者、ｒｓ１２１３９６７７多型Ｔ／Ｔの患者は疼痛感知潜時閾値差が大きく、フェンタニルの鎮痛効果が亢進していた。したがって、ＣＡＣＮＡ１Ｅ遺伝子のｒｓ５５８９９４、ｒｓ６８１２７１、ｒｓ５１７２０９、ｒｓ１０７９７７２９、ｒｓ３８５６０９４、ｒｓ１２１３９６７７を解析することにより、鎮痛薬に対する感受性をより容易に予測することができる。
同様に、ＣＡＣＮＡ１Ａ遺伝子多型と術前のフェンタニル投与前後の手指氷水浸漬による疼痛感知潜時閾値差の測定結果との関連を解析した結果、ｒｓ１５０２０１７、ｒｓ１８６２２６０、ｒｓ４９２６２９３、ｒｓ１４２２２５８多型と疼痛感知潜時閾値差との間に有意な関連が認められ（表５８参照）、ｒｓ１５０２０１７多型Ｇ／Ｇの患者、ｒｓ１８６２２６０多型Ｔアレルの保有者、ｒｓ４９２６２９３多型Ｃ／Ｃの患者、ｒｓ１４２２２５８多型Ｔ／Ｔの患者は疼痛感知潜時閾値差が大きく、フェンタニルの鎮痛効果が亢進していた。したがって、ＣＡＣＮＡ１Ａ遺伝子ｒｓ１５０２０１７、ｒｓ１８６２２６０、ｒｓ４９２６２９３、ｒｓ１４２２２５８多型を解析することにより、鎮痛薬に対する感受性をより容易に予測することができる。
ＣＡＣＮＡ１Ｂ遺伝子多型と術前のフェンタニル投与前後の手指氷水浸漬による疼痛感知潜時閾値差の測定結果との関連を解析した結果、ｒｓ１０８６７０８４、ｒｓ２２９０５８２、ｒｓ３８１２５４１、ｒｓ７３５７７３３、ｒｓ７０２５５５７、ｒｓ６５５９２４３、ｒｓ７８５８２５５多型と疼痛感知潜時閾値差との間に有意な関連が認められ（表５８参照）、ｒｓ１０８６７０８４多型Ｔアレルの保有者、ｒｓ２２９０５８２多型Ｇ／Ｇの患者、ｒｓ３８１２５４１多型Ａ／Ａの患者、ｒｓ７３５７７３３多型Ｇアレルの保有者、ｒｓ７０２５５５７多型Ｔ／Ｔの患者、ｒｓ６５５９２４３多型Ｔアレルの保有者、ｒｓ７８５８２５５多型Ｔアレルの保有者は疼痛感知潜時閾値差が大きく、フェンタニルの鎮痛効果が亢進していた。したがって、ＣＡＣＮＡ１Ｂ遺伝子ｒｓ１０８６７０８４、ｒｓ２２９０５８２、ｒｓ３８１２５４１、ｒｓ７３５７７３３、ｒｓ７０２５５５７、ｒｓ６５５９２４３、ｒｓ７８５８２５５多型を解析することにより、鎮痛薬に対する感受性をより容易に予測することができる。
なお、例として、ＣＡＣＮＡ１Ｅ遺伝子多型ｒｓ５５８９９４について臨床的な有用性を示す（表５８及び図１５参考）。下顎形成外科手術前のフェンタニル投与前後の手指氷水浸漬による疼痛感知潜時域値差の測定結果の中央値１３（秒）の値を基準としてそれより大きい値および小さい値の患者群をそれぞれ鎮痛薬高感受性群および鎮痛薬低感受性群と定義し、ＣＡＣＮＡ１Ｅ遺伝子のｒｓ５５８９９４多型により層別化したところ、この多型においてＧアレルの保有群では、４７．７％および５２．３％の患者がそれぞれ鎮痛薬高感受性群および鎮痛薬低感受性群と判定されたのに対し、Ａ／Ａの患者群では、８５．７％および１４．３％の患者がそれぞれ鎮痛薬高感受性群および鎮痛薬低感受性群と判定された。
＜カルシウムチャネル（ＣＡＣＮＡ１Ｅ）遺伝子多型（ｒｓ３８４５４４６）と、喫煙期間との相関＞
カルシウムチャネル遺伝子多型と、喫煙期間との相関を調べた。喫煙者３９０名の血液よりゲノムＤＮＡを抽出し、カルシウムチャネルサブタイプＣＡＣＮＡ１Ｅ遺伝子の１つの遺伝子多型（ｒｓ３８４５４４６）を判定した。そして、これら遺伝子多型の判定結果と、喫煙者の喫煙期間の測定との相関を解析した。
その結果、図１６に示すように、喫煙者の喫煙期間の測定結果との相関において、ＣＡＣＮＡ１Ｅ遺伝子多型（ｒｓ３８４５４４６）でマイナーアレル（Ｇ）を持たない喫煙者群は、当該アレルＧを持つ喫煙者群と比較して、喫煙期間が統計学的に有意に長かった。したがって、ＣＡＣＮＡ１Ｅ遺伝子多型（ｒｓ３８４５４４６）を解析することにより、タバコに対する感受性をより容易に予測することができる。
なお、喫煙者において、喫煙期間の測定結果に関して、ＣＡＣＮＡ１Ｅ遺伝子のｒｓ３８４５４４６多型により層別化したところ、この多型においてＧ／Ｇの患者群では、結果の中央値３９（年）の値を基準としてそれより大きい値および小さい値の患者群をそれぞれタバコ高感受性群およびタバコ低感受性群と定義し、ＣＡＣＮＡ１Ｅ遺伝子のｒｓ５５８９９４多型により層別化したところ、この多型においてＧアレルの保有群では、４５．７％および５４．２％の患者がそれぞれタバコ高感受性群およびタバコ低感受性群と判定されたのに対し、Ａ／Ａの患者群では、５６％および４３．９％の患者がそれぞれタバコ高感受性群およびタバコ低感受性群と判定された。
カルシウムチャネル遺伝子多型と、喫煙期間との相関を調べた。喫煙者３９０名の血液よりゲノムＤＮＡを抽出し、カルシウムチャネルサブタイプＣＡＣＮＡ１Ｅ遺伝子の１つの遺伝子多型（ｒｓ３８４５４４６）を判定した。そして、これら遺伝子多型の判定結果と、喫煙者の喫煙期間の測定との相関を解析した。
その結果、図１６に示すように、喫煙者の喫煙期間の測定結果との相関において、ＣＡＣＮＡ１Ｅ遺伝子多型（ｒｓ３８４５４４６）でマイナーアレル（Ｇ）を持たない喫煙者群は、当該アレルＧを持つ喫煙者群と比較して、喫煙期間が統計学的に有意に長かった。したがって、ＣＡＣＮＡ１Ｅ遺伝子多型（ｒｓ３８４５４４６）を解析することにより、タバコに対する感受性をより容易に予測することができる。
なお、喫煙者において、喫煙期間の測定結果に関して、ＣＡＣＮＡ１Ｅ遺伝子のｒｓ３８４５４４６多型により層別化したところ、この多型においてＧ／Ｇの患者群では、結果の中央値３９（年）の値を基準としてそれより大きい値および小さい値の患者群をそれぞれタバコ高感受性群およびタバコ低感受性群と定義し、ＣＡＣＮＡ１Ｅ遺伝子のｒｓ５５８９９４多型により層別化したところ、この多型においてＧアレルの保有群では、４５．７％および５４．２％の患者がそれぞれタバコ高感受性群およびタバコ低感受性群と判定されたのに対し、Ａ／Ａの患者群では、５６％および４３．９％の患者がそれぞれタバコ高感受性群およびタバコ低感受性群と判定された。
本発明により、薬物感受性または疾患脆弱性に関する個人差を評価することができる電位依存性カルシウムチャネル遺伝子多型、および当該遺伝子多型を用いた薬物感受性または疾患脆弱性の評価方法等を提供することができる。この評価方法により、モルヒネ等の麻薬性薬物に関する処方適正量および処方適正スケジュールなどを容易に知ることが可能となり、テーラーメイド疼痛治療および薬物依存治療などに極めて有用である。
［配列表］
［配列表］
Claims (14)
- 電位依存性カルシウムチャネル遺伝子の遺伝子多型、または該遺伝子多型により構成されるハプロタイプと、個体の薬物感受性とを関連づけることを特徴とする、薬物感受性の評価方法であって、
該遺伝子多型が、CACNA1Eサブタイプ遺伝子のrs3845446、rs3753752、rs2280869、rs473200、rs704326、rs610100、rs585315、rs9286844、rs12405860、rs4146634、rs3767004、rs558994、rs681271、rs517209、rs10797729、rs3856094およびrs12139677、CACNA1Aサブタイプ遺伝子のrs1502017、rs1862260、rs4926293およびrs1422258、並びに、CACNA1Bサブタイプ遺伝子のrs10867084、rs2290582、rs3812541、rs7357733、rs7025557、rs6559243およびrs7858255からなる群より選ばれる少なくとも１つであり、
該薬物が、オピオイド受容体機能修飾薬および／またはニコチン受容体機能修飾薬である、前記評価方法。 - 前記遺伝子多型または前記ハプロタイプの解析結果に基づいて、個体の薬物感受性の高低の傾向を評価することを特徴とする、請求項１に記載の方法。
- 以下の工程：
（１）健常者における連鎖不平衡解析およびハプロタイプ解析を行い、連鎖不平衡ブロック内の遺伝子多型を選択する工程、
（２）被験者における該遺伝子多型の遺伝子型と薬物感受性との間の関連を解析する工程、および
（３）被験者において薬物感受性と有意に関連した遺伝子多型を薬物感受性の評価に用いる工程を含む、請求項１または２に記載の方法。 - 電位依存性カルシウムチャネル遺伝子の遺伝子多型、または該遺伝子多型により構成されるハプロタイプと、個体の疾患脆弱性とを関連づけることを特徴とする、疾患脆弱性の評価方法であって、
該遺伝子多型が、CACNA1Eサブタイプ遺伝子のrs3845446、rs3753752、rs2280869、rs473200、rs704326、rs610100、rs585315、rs9286844、rs12405860、rs4146634、rs3767004、rs558994、rs681271、rs517209、rs10797729、rs3856094およびrs12139677、CACNA1Aサブタイプ遺伝子のrs1502017、rs1862260、rs4926293およびrs1422258、並びに、CACNA1Bサブタイプ遺伝子のrs10867084、rs2290582、rs3812541、rs7357733、rs7025557、rs6559243およびrs7858255からなる群より選ばれる少なくとも１つであり、
該疾患脆弱性が、疼痛感受性または薬物依存への脆弱性である、前記評価方法。 - 前記遺伝子多型または前記ハプロタイプの解析結果に基づいて、個体の疾患脆弱性の高低の傾向を評価することを特徴とする、請求項４に記載の方法。
- 以下の工程：
（１）健常者における連鎖不平衡解析およびハプロタイプ解析を行い、連鎖不平衡ブロック内の遺伝子多型を選択する工程、
（２）被験者における該遺伝子多型の遺伝子型と疼痛感受性との間の関連を解析する工程、および
（３）被験者において疼痛感受性と有意に関連した遺伝子多型を疾患脆弱性の評価に用いる工程を含む、請求項４または５に記載の方法。 - 遺伝子多型が、一塩基多型、挿入型多型、欠失型多型および塩基繰り返し多型からなる群から選択される少なくとも１つである、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
- 請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法により評価された結果を指標として、個体に投与する薬物の副作用を予測する方法。
- オピオイド受容体機能修飾薬が、メタンフェタミン、メチレンジオキシメタンフェタミン、アンフェタミン、デキストロアンフェタミン、ドパミン、モルヒネ、DAMGO、コデイン、メサドン、カルフェンタニル、フェンタニル、ヘロイン、コカイン、ナロキソン、ナルトレキソン、ナロルフィン、レバロルファン、ペンタゾシン、ペチジン、ブプレノルフィン、オキシコドン、ヒドロコドン、レボルファノール、エトルフィン、ジヒドロエトルフィン、ヒドロモルホン、オキシモルホン、トラマドール、ジクロフェナク、インドメタシン、エタノール、メタノール、ジエチルエーテル、プロパノール、ブタノール、フルピルチン、笑気、F3（1-クロロ-1，2，2トリフルオロサイクロブタン）、ハロセン、エストラジオール、ジチオトレイトール、チオリダジン、ピモザイド、フルオキセチン、パロキセチン、デシプラミン、イミプラミン、クロミプラミン、テトラミド、イソフルレン、ギンセノシド、イフェンプロディール、ブピバカイン、テルチアピン、クロザピン、ハロペリドールおよびSCH23390からなる群から選択される少なくとも１つであり、
ニコチン受容体機能修飾薬が、カルバコール、ABT-594、バレニクリン、スキサメトニウム、ヘキサメトニウム、パンクロニウム、ベクロニウム、ツボクラリン、トリメタファン、メカミラミン及びチャンピックスからなる群から選択される少なくとも１つである、請求項１記載の方法。 - 前記遺伝子多型を含むDNA断片に特異的にハイブリダイズしうる、配列番号４〜６、８、１３、１４、１６、１８、２０、２３、２５、２７、２８、３０、３２、３６、４５、５３、５４、５６、６６、６８〜７１、７５、８０および９０のいずれか１つに示される塩基配列のうち第51番目の塩基を含む少なくとも14塩基長の塩基配列または該塩基配列に相補的な塩基配列からなるオリゴヌクレオチドを用いることを特徴とする、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
- 前記オリゴヌクレオチドの長さが14〜150塩基長である、請求項１０に記載の方法。
- 前記オリゴヌクレオチドが配列番号４〜６、８、１３、１４、１６、１８、２０、２３、２５、２７、２８、３０、３２、３６、４５、５３、５４、５６、６６、６８〜７１、７５、８０および９０のいずれか１つに示される塩基配列または該塩基配列に相補的な塩基配列からなる群から選択されるオリゴヌクレオチドである、請求項１０または１１に記載の方法。
- 配列番号４〜６、８、１３、１４、１６、１８、２０、２３、２５、２７、２８、３０、３２、３６、４５、５３、５４、５６、６６、６８〜７１、７５、８０および９０のいずれか１つに示される塩基配列のうち第51番目の塩基を含む少なくとも14塩基長の塩基配列または該塩基配列に相補的な塩基配列からなるオリゴヌクレオチドを含む、薬物感受性評価用キットであって、
該薬物が、オピオイド受容体機能修飾薬および／またはニコチン受容体機能修飾薬である、
前記キット。 - 配列番号４〜６、８、１３、１４、１６、１８、２０、２３、２５、２７、２８、３０、３２、３６、４５、５３、５４、５６、６６、６８〜７１、７５、８０および９０のいずれか１つに示される塩基配列のうち第51番目の塩基を含む少なくとも14塩基長の塩基配列または該塩基配列に相補的な塩基配列からなるオリゴヌクレオチドを含む、疾患脆弱性評価用キットであって、
該疾患脆弱性が、疼痛感受性または薬物依存への脆弱性である、
前記キット。
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| JPN6012011822; 西澤大輔 他: '遺伝子多型と疼痛感受性，オピオイド感受性-基礎および臨床のデータから-' 麻酔 Ｖｏｌ． ５８, 2009, ｐ． １０９３-１１０１ * |
| JPN6012011824; ＢＡＳＢＡＵＭ， Ａ． Ｉ．， ｅｔ ａｌ．: 'Ｃｅｌｌｕｌａｒ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ Ｐａｉｎ' Ｃｅｌｌ Ｖｏｌ． １３９， Ｎｏ． ２, 2009, ｐ． ２６７-２８４ * |
| JPN6012011825; ＣＡＳＡＭＡＳＳＩＭＡ， Ｆ． ｅｔ ａｌ．: 'Ｌ-ｔｙｐｅ Ｃａｌｃｉｕｍ Ｃｈａｎｎｅｌｓ ａｎｄ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ： Ａ Ｂｒｉｅｆ Ｒｅｖｉｅｗ' Ａｍ． Ｊ． Ｍｅｄ． Ｇｅｎｅｔ． Ｐａｒｔ Ｂ Ｖｏｌ． １５３Ｂ, 20100930, ｐ． １３７３-１３９０ * |
| JPN6012011827; 国重敦子、外１名: '服薬指導実践塾 第３５回 プレガバリン（前編）' 調剤と情報 Ｖｏｌ．１６， Ｎｏ．１２, 201011, ｐ． １５６７-１５７７ * |
| JPN6012011828; ＲＯＢＥＲＴＳ， Ｒｏｂｅｒｔ: 'Ｐｅｒｓｏｎａｌｉｚｅｄ ｍｅｄｉｃｉｎｅ： ａ ｒｅａｌｉｔｙ ｗｉｔｈｉｎ ｔｈｉｓ ｄｅｃａｄｅ' Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｖｏｌ． １， Ｎｏ． １, 2008, ｐ． １１-１６ * |
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