JP6065236B2 - タンパク質trf2の調節物質である新規ペプチドおよびそれを含む組成物 - Google Patents
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Description
R1−(AA)n−X1−X2−X3−Lys−Lys−Gln−Lys−Trp−X4−(AA)p−R2 (I)
のペプチド化合物に関する。化粧品組成物中に含まれる前記ペプチド化合物は、老化の皮膚症状を予防および/または遅延および/または治療することを目的としている。
R1−(AA)n−X1−X2−X3−Lys−Lys−Gln−Lys−Trp−X4−(AA)p−R2 (I)
のペプチド化合物を開発した。
R1−(AA)n−X1−X2−X3−Lys−Lys−Gln−Lys−Trp−X4−(AA)p−R2 (I)
のペプチド化合物に関する。
R1−(AA)n−X1−X2−X3−Lys−Lys−Gln−Lys−Trp−X4−(AA)p−R2 (I)
のペプチド化合物に関し、
X1はアスパラギン、グリシン、トレオニン、アラニン、または非アミノ酸を表し、
ヒト線維芽細胞を特定の培地中で培養し、培養培地中に保持して1%または3%の濃度のペプチドSEQ ID no.2を毎日適用して長期処理する(17継代超)。ビメンチン免疫蛍光検出実験を培養継代6および17の細胞において行う。その後、細胞をPBSで洗浄し、3.7%のホルムアルデヒドで10分間固定し、0.2%トリトンX−100により10分間透過処理し(Fisher Chemical社)、かつ1%のBSA(Euromedex社)で15分間インキュベートする。その後、抗ビメンチン抗体(Tebu Santa Cruz社)を添加し、室温で2時間、1/200に希釈してインキュベートする。PBSで洗浄した後、標識Alexa Fluor(登録商標)488と結合したロバ抗マウスIgG抗体を1/1000に希釈して添加し、室温で1時間インキュベートする。最後に、切片をFluoromount G(Electron Microscopy Science社)に載せ、顕微鏡(Nikon Eclipse 80i、40倍拡大)で観察する。
ペプチドSEQ ID no.2で処理した老化線維芽細胞は、処理されてない老化線維芽細胞よりも少ないビメンチンを発現することに留意される。ビメンチンの増加および凝集は、老化現象を伴う細胞骨格における修飾に関連する。したがって、本発明によるペプチド化合物SEQ ID no.2を用いた処理により、線維芽細胞の老化によるビメンチンの増加および凝集を制限することが可能となったと結論付けることができる。
ヒトの皮膚生検をメチルグリオキサール(MGO)で処理することにより、インビトロで人為的に老化させる。このために、6mmのヒトの皮膚パンチ生検を特定の培養培地中で気液界面にてインキュベートする。その後、これらを5mMまたは10mMのMGO(Sigma社)で処理し、MGOは生検の表面および培養培地中に堆積する。その後、生検を以下の条件で処理する:
対照1条件、すなわちペプチドの添加なしでは、MGOは皮膚生検、より具体的にはその構造に著しい損傷をもたらしたことに留意される。より多くの損傷がMGOの10μMの量で観察されるので、引き起こされた損傷は用量依存的である。
ヒト線維芽細胞集団におけるTRF2の過剰発現に対する本発明によるペプチド化合物の効力を定量化するために、TRF2をコードする遺伝子をsiRNA技術を用いて「オフ状態」とした。
繊維芽細胞を60%集密するまで6ウェルプレート中で培養する。以下に記載の条件下で1%のペプチドSEQ ID no.2を追加することで培養培地を新しくする。その後、最終的に10nMのTRF2siRNAおよびトランスフェクション剤を含む前もって作成した100μLの混合物を、一度に一滴、かつ一度に1ウェルにゆっくりと添加する。細胞培養プレートを37℃で5%のCO2中で72時間インキュベートする。培養培地を2日ごとに新しくする。4つの条件を以下の通り確立した:
条件1と3との間では、ペプチドの添加により、対照に対してTRF2タンパク質の発現において17%の増加がもたらされたことに留意される。条件1と2との間では、TRF2タンパク質の発現に対するsiRNAの効果は、明確に示される:実質的に26%減少する。しかしながら、siRNAでトランスフェクトされた細胞への活性剤の添加により、TRF2発現を回復することが可能となり、かつsiRNAの存在による減少は対照条件に対して18%以下である。
Claims (17)
- 下記の式で表されるペプチド化合物であって:
(SEQ ID no.2)Lys−Lys−Gln−Lys−Trp−NH 2
(SEQ ID no.4)Ala−Met−Lys−Lys−Gln−Lys−Trp−NH 2 ;
式中、NH 2 はC末端アミノ酸のカルボキシル官能基の置換基であることを特徴とする、ペプチド化合物。 - 請求項1に記載のペプチド化合物であって、該ペプチド化合物は、水、グリセロール、エタノール、プロパンジオール、ブチレングリコール、ジプロピレングリコール、エトキシル化またはプロポキシル化ジグリコール、環状ポリオール、またはこれらの溶媒の任意の混合物から選択される1以上の生理学的に適した溶媒に可溶化することを特徴とする、ペプチド化合物。
- 活性成分として請求項1または2に記載の前記ペプチド化合物、および化粧品学的に許容される媒体を含む化粧品組成物。
- 請求項3に記載の組成物であって、該組成物は、クリーム、水中油型エマルション、または油中水型エマルション、または多重エマルション、溶液、懸濁液、マイクロエマルション、水性もしくは無水のゲル、血清もしくは小胞の分散体、パッチ、スプレー、軟膏、ポマード、ローション、コロイド、乳液、スティック、またはパウダーから選択される局所適用に適した形態であることを特徴とする、組成物。
- 請求項3または4に記載の組成物であって、前記ペプチド化合物は、0.1〜500ppmの間の濃度で前記組成物中に存在することを特徴とする、組成物。
- 請求項5に記載の組成物であって、前記ペプチド化合物は、1〜150ppmの間の濃度で前記組成物中に存在することを特徴とする、組成物。
- 請求項4〜6のうちいずれか一項に記載の組成物であって、該組成物はまた、植物ペプチド加水分解物、他のペプチド化合物、日焼け防止剤、抗フリーラジカル剤、または抗しわ剤から選択される少なくとも1つの他の活性成分を含むことを特徴とする、組成物。
- 請求項3〜7のうちいずれか一項に記載の組成物の美容的使用であって、人間を手術、治療又は診断する使用方法を除く、皮膚のアンチエイジングを目的とする美容的使用。
- テロメア結合タンパク質(TRF)の量を調節するため、および/または皮膚細胞における老化を遅延するための、請求項8に記載の美容的使用。
- 請求項9に記載の美容的使用であって、前記テロメア結合タンパク質は、TRF2および/またはPOT1で表されることを特徴とする、美容的使用。
- 損傷時の皮膚細胞におけるDNA二本鎖切断の発生を予防するための、請求項8に記載の美容的使用。
- 請求項8に記載の美容的使用であって、前記老化の皮膚症状は、しわ、深くて起伏のあるしわ、小じわ、ひび割れ、皮膚および皮下組織のたるみ、皮膚の弾力性の喪失および弛緩、張りおよび色合いの喪失、ならびに皮膚萎縮であることを特徴とする、美容的使用。
- 光老化における皮膚症状に対するアンチエイジングを目的とする請求項8に記載の美容的使用。
- 外部ストレスから皮膚を保護するための、請求項8に記載の美容的使用。
- 請求項14に記載の美容的使用であって、前記外部ストレスは紫外線または酸化的ストレスであることを特徴とする、美容的使用。
- 皮膚の老化症状を予防および処理するために、請求項1または2において定義したペプチド化合物の有効量を含む組成物を、朝晩に皮膚に適用することによって特徴付けられる、美容処理方法であって、人間を手術、治療又は診断する使用方法を除く美容処理方法。
- テロメラーゼの量および/または活性を変更することなくテロメア分解を制限するために、請求項1または2において定義したペプチド化合物の有効量を含む組成物を定期的に適用することによって特徴付けられる、美容処理方法であって、人間を手術、治療又は診断する使用方法を除く美容処理方法。
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