JP6045914B2 - 抗体 - Google Patents
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Description
(a)配列番号:1、7、13若しくは19のアミノ酸配列、又はこれらと実質的に相同的な配列を含む重鎖CDR1ドメイン;
(b)配列番号:2、8、14若しくは20のアミノ酸配列、又はこれらと実質的に相同的な配列を含む重鎖CDR2ドメイン;及び
(c)配列番号:3、9、15若しくは21のアミノ酸配列、又はこれらと実質的に相同的な配列を含む重鎖CDR3ドメインからなる群から選択される抗体を提供する。
(a)配列番号:4、10、16、22若しくは88のアミノ酸配列、又はこれらと実質的に相同的な配列を含む軽鎖CDR1ドメイン;
(b)配列番号:5、11、17、23若しくは89のアミノ酸配列、又はこれらと実質的に相同的な配列を含む軽鎖CDR2ドメイン;及び
(c)配列番号:6、12、18、24若しくは90のアミノ酸配列、又はこれらと実質的に相同的な配列を含む軽鎖CDR3ドメインからなる群から選択される抗体をも提供する。
(a)配列番号:3のアミノ酸配列、又はこれと実質的に相同的な配列を含む重鎖CDR3、及び
(b)配列番号:6のアミノ酸配列、又はこれと実質的に相同的な配列を含む軽鎖CDR3の両方を含む。
(a)配列番号:9のアミノ酸配列、又はこれと実質的に相同的な配列を含む重鎖CDR3、及び
(b)配列番号:12のアミノ酸配列、又はこれと実質的に相同的な配列を含む軽鎖CDR3の両方を含む。
(a)配列番号:15のアミノ酸配列、又はこれと実質的に相同的な配列を含む重鎖CDR3、及び
(b)配列番号:18のアミノ酸配列、又はこれと実質的に相同的な配列を含む軽鎖CDR3の両方を含む。
(a)配列番号:21のアミノ酸配列、又はこれと実質的に相同的な配列を含む重鎖CDR3、及び
(b)配列番号:24のアミノ酸配列、又はこれと実質的に相同的な配列を含む軽鎖CDR3の両方を含む。
(a)配列番号:3のアミノ酸配列、又はこれと実質的に相同的な配列を含む重鎖CDR3、及び
(b)配列番号:90のアミノ酸配列、又はこれと実質的に相同的な配列を含む軽鎖CDR3の両方を含む。
(i)配列番号:1のアミノ酸配列を有する可変重(VH)CDR1、
(ii)配列番号:2のアミノ酸配列を有するVH CDR2、及び
(iii)配列番号:3のアミノ酸配列を有するVH CDR3を含む抗体を提供する。
(i)配列番号:4のアミノ酸配列を有するVL CDR1、
(ii)配列番号:5のアミノ酸配列を有するVL CDR2、及び
(iii)配列番号:6のアミノ酸配列を有するVL CDR3からなる群から選択される。好ましくは、前記軽鎖可変領域CDRsの2つ又は3つが、前記群から選択される。前記配列の1又はそれ以上に実質的に相同的な配列を含む抗体も、本実施形態において提供される。
(i)配列番号:7のアミノ酸配列を有する可変重(VH)CDR1、
(ii)配列番号:8のアミノ酸配列を有するVH CDR2、及び
(iii)配列番号:9のアミノ酸配列を有するVH CDR3を含む抗体を提供する。
(i)配列番号:10のアミノ酸配列を有するVL CDR1、
(ii)配列番号:11のアミノ酸配列を有するVL CDR2、及び
(iii)配列番号:12のアミノ酸配列を有するVL CDR3からなる群から選択される。好ましくは、前記軽鎖可変領域CDRsの2つ又は3つが、前記群から選択される。前記配列の1又はそれ以上に実質的に相同的な配列を含む抗体も、本実施形態において提供される。
(i)配列番号:13のアミノ酸配列を有する可変重(VH)CDR1、
(ii)配列番号:14のアミノ酸配列を有するVH CDR2、及び
(iii)配列番号:15のアミノ酸配列を有するVH CDR3を含む抗体を提供する。
(i)配列番号:16のアミノ酸配列を有するVL CDR1、
(ii)配列番号:17のアミノ酸配列を有するVL CDR2、及び
(iii)配列番号:18のアミノ酸配列を有するVL CDR3からなる群から選択される。好ましくは、前記軽鎖可変領域CDRsの2つ又は3つが、前記群から選択される。前記配列の1又はそれ以上に実質的に相同的な配列を含む抗体も、本実施形態において提供される。
(i)配列番号:19のアミノ酸配列を有する可変重(VH)CDR1、
(ii)配列番号:20のアミノ酸配列を有するVH CDR2、及び
(iii)配列番号:21のアミノ酸配列を有するVH CDR3を含む抗体を提供する。
(i)配列番号:22のアミノ酸配列を有するVL CDR1、
(ii)配列番号:23のアミノ酸配列を有するVL CDR2、及び
(iii)配列番号:24のアミノ酸配列を有するVL CDR3からなる群から選択される。好ましくは、前記軽鎖可変領域CDRsの2つ又は3つが、前記群から選択される。前記配列の1又はそれ以上に実質的に相同的な配列を含む抗体も、本実施形態において提供される。
(i)配列番号:1のアミノ酸配列を有する可変重(VH)CDR1、
(ii)配列番号:2のアミノ酸配列を有するVH CDR2、及び
(iii)配列番号:3のアミノ酸配列を有するVH CDR3を含む抗体を提供する。
(i)配列番号:88のアミノ酸配列を有するVL CDR1、
(ii)配列番号:89のアミノ酸配列を有するVL CDR2、及び
(iii)配列番号:90のアミノ酸配列を有するVL CDR3からなる群から選択される。好ましくは、前記軽鎖可変領域CDRsの2つ又は3つが、前記群から選択される。前記配列の1又はそれ以上に実質的に相同的な配列を含む抗体も、本実施形態において提供される。
C−9P21又は9N10配列をベースとする抗体が特に好ましい。
本発明の更なる実施形態においては、VH CDR1は、配列番号:126(S/G Y X3 M/I H/S)、又は配列番号:127(X1YX3MH)、又は配列番号:128(SYX3MH)を有するか、含む。
阻害%=(1−MFIbio-Ab1+Ab2「c」/MFIbio-Ab1)×100
が計算される。
(a)3つのCDRsを含む少なくとも1つの重鎖可変領域と、3つのCDRsを含む少なくとも1つの軽鎖可変領域とを含み、
前記軽鎖可変領域が、
(i)配列番号:4のアミノ酸配列を有する可変軽(VL)CDR1;
(ii)配列番号:5のアミノ酸配列を有するVL CDR2;及び/又は
(iii)配列番号:6のアミノ酸配列を有するVL CDR3を含み:及び/又は
前記重鎖可変領域が、
(iv)配列番号:1のアミノ酸配列を有する可変重(VH)CDR1;
(v)配列番号:2のアミノ酸配列を有するVH CDR2;及び/又は
(vi)配列番号:3のアミノ酸配列を有するVH CDR3;を含み、
又は(b)前記抗体はCXCR4と結合する抗体(a)と競合し得る抗体である。
(a)3つのCDRsを含む少なくとも1つの重鎖可変領域と、3つのCDRsを含む少なくとも1つの軽鎖可変領域とを含み、
前記軽鎖可変領域が、
(i)配列番号:10のアミノ酸配列を有する可変軽(VL)CDR1;
(ii)配列番号:11のアミノ酸配列を有するVL CDR2;及び/又は
(iii)配列番号:12のアミノ酸配列を有するVL CDR3を含み:及び/又は
前記重鎖可変領域が、
(iv)配列番号:7のアミノ酸配列を有する可変重(VH)CDR1;
(v)配列番号:8のアミノ酸配列を有するVH CDR2;及び/又は
(vi)配列番号:9のアミノ酸配列を有するVH CDR3;を含み、
又は(b)前記抗体はCXCR4と結合する抗体(a)と競合し得る抗体である。
(a)3つのCDRsを含む少なくとも1つの重鎖可変領域と、3つのCDRsを含む少なくとも1つの軽鎖可変領域とを含み、
前記軽鎖可変領域が、
(i)配列番号:16のアミノ酸配列を有する可変軽(VL)CDR1;
(ii)配列番号:17のアミノ酸配列を有するVL CDR2;及び/又は
(iii)配列番号:18のアミノ酸配列を有するVL CDR3を含み:及び/又は 前記重鎖可変領域が、
(iv)配列番号:13のアミノ酸配列を有する可変重(VH)CDR1;
(v)配列番号:14のアミノ酸配列を有するVH CDR2;及び/又は
(vi)配列番号:15のアミノ酸配列を有するVH CDR3;を含み、
又は(b)前記抗体はCXCR4と結合する抗体(a)と競合し得る抗体である。
(a)3つのCDRsを含む少なくとも1つの重鎖可変領域と、3つのCDRsを含む少なくとも1つの軽鎖可変領域とを含み、
前記軽鎖可変領域が、
(i)配列番号:22のアミノ酸配列を有する可変軽(VL)CDR1;
(ii)配列番号:23のアミノ酸配列を有するVL CDR2;及び/又は
(iii)配列番号:24のアミノ酸配列を有するVL CDR3を含み:及び/又は
前記重鎖可変領域が、
(iv)配列番号:19のアミノ酸配列を有する可変重(VH)CDR1;
(v)配列番号:20のアミノ酸配列を有するVH CDR2;及び/又は
(vi)配列番号:21のアミノ酸配列を有するVH CDR3;を含み、
又は(b)前記抗体はCXCR4と結合する抗体(a)と競合し得る抗体である。
(a)3つのCDRsを含む少なくとも1つの重鎖可変領域と、3つのCDRsを含む少なくとも1つの軽鎖可変領域とを含み、
前記軽鎖可変領域が、
(i)配列番号:88のアミノ酸配列を有する可変軽(VL)CDR1;
(ii)配列番号:89のアミノ酸配列を有するVL CDR2;及び/又は
(iii)配列番号:90のアミノ酸配列を有するVL CDR3を含み:及び/又は
前記重鎖可変領域が、
(iv)配列番号:1のアミノ酸配列を有する可変重(VH)CDR1;
(v)配列番号:2のアミノ酸配列を有するVH CDR2;及び/又は
(vi)配列番号:3のアミノ酸配列を有するVH CDR3;を含み、
又は(b)前記抗体はCXCR4と結合する抗体(a)と競合し得る抗体である。
(a)配列番号:69のVHドメイン及び配列番号:70のVLドメインを有するか;又は
(b)CXCR4と結合する抗体(a)と競合し得る抗体である。
(a)配列番号:71のVHドメイン及び配列番号:72のVLドメインを有するか;又は
(b)CXCR4と結合する抗体(a)と競合し得る抗体である。
(a)配列番号:73のVHドメイン及び配列番号:74のVLドメインを有するか;又は
(b)CXCR4と結合する抗体(a)と競合し得る抗体である。
(a)配列番号:75のVHドメイン及び配列番号:76のVLドメインを有するか;又は
(b)CXCR4と結合する抗体(a)と競合し得る抗体である。
(a)配列番号:69のVHドメイン及び配列番号:103のVLドメインを有するか;又は
(b)CXCR4と結合する抗体(a)と競合し得る抗体である。
(a)例えば、フローサイトメトリー又は免疫組織科学により評価し、細胞、例えば、CXCR4又はCXCR4を自然に発現する細胞でトランスフェクションした細胞の表面で発現するCXCR4と結合し;
(b)例えば、非還元条件下でウェスタンブロットにおいてCXCR4との結合により評価し、構造的に依存して(例えば、非線形)CXCR4エピトープと結合し;
(c)少なくともヒトのCXCR4と、更に好ましくはヒト及びサルのCXCR4、又はヒト及びマウスのCXCR4と、最も好ましくはヒト、サル及びマウスのCXCR4と結合し;
(d)本明細書の他の箇所でも議論したように、ヒト及びサルのCXCR4と、又はヒト及びマウスのCXCR4と同様の親和性で、例えば10nM以下、好ましくは5nM以下、更に好ましくは3nM以下又は2nM以下、例えば1nM以下のKdで結合する。
(e)CXCR4発現細胞の重大なアポトーシスを誘発しない;
(f)CXCR4のその1又はそれ以上のリガンドへの結合を遮断又は阻害し、例えば、CXCR4の少なくともSDF−1又はCXCR4についての他のリガンド、例えば、化合物AMD−3100への結合を遮断又は阻害し、好ましくはCXCR4のSDF−1及びAMD−3100の少なくとも両方への結合を阻害し;
(g)CXCR4受容体からの下流シグナル事象を遮断又は阻害し、例えば、SDF−1のようなCXCR4リガンドへのCXCR4が介在する細胞応答を阻害例えば、好ましくはSDF−1のようなCXCR4−1に対する応答においてカルシウムイオンの放出を阻害し、又はCXCR+4細胞の移動を誘発するリガンド(例えば、SDF−1)を遮断又は阻害する。
(h)本明細書の他の箇所に開示されているように、CXCR4+細胞のADCCを誘発し;
(i)インビボにおいて抗腫瘍効果を誘発し;
(j)腫瘍を有する動物に投与することにより腫瘍を局部にとどめ;
(k)CXCR4+細胞のCDCを誘発し;
(l)インビトロ又はインビボにおいて、抗ウィルス効果、特に抗HIV効果を誘発し;
(m)CXCR4受容体についてアゴニスト活性を阻害しない。
当業者により理解されるように、「抗体」という用語に包含される免疫学的結合剤は、抗体及びその抗原結合断片にまで拡大され、全抗体、二量体、三量体及び多量体抗体;二種特異性抗体;キメラ抗体、組換え型及び改変抗体、及びそれらの断片が含まれる。
(a)配列番号:1のアミノ酸配列又はそれと実質的に相同的な配列を有する可変重(VH)CDR1、
(b)配列番号:2のアミノ酸配列又はそれと実質的に相同的な配列を有するVH CDR2、及び
(c)配列番号:3のアミノ酸配列又はそれと実質的に相同的な配列を有するVH CDR3、又は
(d)配列番号:7のアミノ酸配列又はそれと実質的に相同的な配列を有する可変重(VH)CDR1、
(e)配列番号:8のアミノ酸配列又はそれと実質的に相同的な配列を有するVH CDR2、及び
(f)配列番号:9のアミノ酸配列又はそれと実質的に相同的な配列を有するVH CDR3、又は
(g)配列番号:13のアミノ酸配列又はそれと実質的に相同的な配列を有する可変重(VH)CDR1、
(h)配列番号:14のアミノ酸配列又はそれと実質的に相同的な配列を有するVH CDR2、及び
(i)配列番号:15のアミノ酸配列又はそれと実質的に相同的な配列を有するVH CDR3、又は
(j)配列番号:19のアミノ酸配列又はそれと実質的に相同的な配列を有する可変重(VH)CDR1、
(k)配列番号:20のアミノ酸配列又はそれと実質的に相同的な配列を有するVH CDR2、及び
(l)配列番号:21のアミノ酸配列又はそれと実質的に相同的な配列を有するVH CDR3を含む。
しかし、同等のストリンジェンシーは、他のバッファー、塩及び温度を用いて達成することもできることが理解される。ハイブリダイゼーション条件に関する他のガイダンスは、Current Protocols in Molecular Biology,John Wiley及びSons,N.Y.,1989,6.3.1−6.3.6:及びSambrookら、Molecular Cloning,a Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press,1989,Vol.3に見出される。
特定の好ましい実施形態においては、必要に応じて、4種全ての可変軽鎖(配列番号:52、53、54及び55)及び/又は可変重鎖(配列番号:47、48、49及び50)、配列番号:57(表3にも示す)のFR領域、又はそれと実質的に相同的なFR領域が、本発明の抗体において見い出される。
酵母及び真菌のトランスフェクションのためのプロトコールは当業者に周知である(Hinnenら、1978;Itoら、1983、及びCullenら、1987参照)。
ランダム突然変異誘発は、任意の適切な方法、例えば、エラープローンPCR、チェインシャッフリング又は大腸菌株の変異誘発により実施することができる。
したがって、本発明の1つ又はそれ以上のVHドメインを、任意の適切な起源由来の1個のVLドメイン又はVLドメインのレパートリーと組み合わせることができ、得られた新しい抗体について、CXCR4に対して特異的な抗体を特定するために試験を行う。これは好ましい。逆に言えば、本発明の1つ又はそれ以上のVLドメインを、任意の適切な起源由来の1個のVHドメイン又はVHドメインのレパートリーと組み合わせることができ、得られた新しい抗体について、CXCR4に対して特異的な抗体を特定するために試験を行う。
(i)CXCR4のそのリガンドへの結合の阻害、
(ii)CXCR4のリガンドに対するCXCR4介在的細胞性反応の阻害、特に、例えば、癌転移/器官侵襲、若しくは、炎症反応に関連する走化性、若しくは、移動の阻害、又は、細胞内カルシウムイオン濃度(細胞活性化)の上昇の阻害、
(iii)CXCR4+細胞の選択的除去、
(iv)骨髄間質において生産されるSDF−1とCXCR4受容体の相互作用により骨髄において不活化されたままの細胞であるCXCR4+造血幹細胞の活性化と移動の誘導、
(v)感染中にCXCR4を共受容体として使用するHIVのX4株によるCXCR4+細胞の感染の阻止のうちの1つ以上から利益を受けることができる健康状態の治療が提供される。
(a)動物、又は、患者が腫瘍量を実質的に低減させる第1治療を受けるようにさせること、及び、
(b)その後、任意選択的に第2治療薬と機能するように会合する、少なくとも本発明の第1抗CXCR4抗体、又は、その抗原結合断片を投与することを含む、腫瘍を有する動物、又は、患者を治療する方法を提供する。
(a)動物、又は、患者が炎症のようなCXCR4が介在する負荷を実質的に低減させる第1治療を受けるようにさせること、及び、
(b)その後、任意選択的に第2治療薬と機能するように会合する、少なくとも本発明の第1抗CXCR4抗体、又は、その抗原結合断片を投与することを含む、CXCR4介在性疾患を有する動物、又は、患者を治療する方法を提供する。
(a)動物から採取された試験サンプルを本発明の抗体、又は、その免疫複合体と接触させる工程を含む動物において疾病を診断する方法を提供する。
(a)動物から採取された試験サンプルを本発明の抗体、又は、その免疫複合体と接触させる工程、
(b)その試験サンプルにおいて抗体抗原複合体の存在、及び/又は、量、及び/又は、位置を測定する、又は、検出する工程、並びに、任意選択によるが、
(c)試験サンプルにおける抗体抗原複合体の存在、及び/又は、量を対照と比較する工程を含む動物において疾病を診断する方法を提供する。
(a)腫瘍を持つ動物、又は、患者に本発明の抗CXCR4抗体に機能するように結合する診断薬を含み、検出できるように標識された少なくとも本発明の第1抗CXCR4抗体の診断的な量を投与し、それによって腫瘍の検出可能な画像を形成すること、並びに、
(b)その後、同じ動物、又は、患者に少なくとも本発明の第1の裸の抗CXCR4抗体、又は、そのような抗体を用いる治療薬−抗体構成物の治療上最適化された量を投与し、それにより抗腫瘍作用を引き起こすことにより実行されることができる。
表1は、C−9P21抗体に関して本明細書に開示した配列のいくつかを示す。
表2は、B−1M22抗体に関して本明細書に開示した配列のいくつかを示す。
表3は、C−1I24抗体に関して本明細書に開示した配列のいくつかを示す。
表4は、D−1K21抗体に関して本明細書に開示した配列のいくつかを示す。
表5は、9N10抗体に関して本明細書に記載した配列のいくつかを示す。
表6は、IgG型C−9P21抗体に関して本明細書に開示した配列のいくつかを示す。下線は可変領域を示す。
表7は、IgG型B−1M22抗体に関して本明細書に開示した配列のいくつかを示す。下線は可変領域を示す。
表8は、IgG型C−1I24抗体に関して本明細書に開示した配列のいくつかを示す。下線は可変領域を示す。
表9は、IgG型D−1K21抗体に関して本明細書に開示した配列のいくつかを示す。下線は可変領域を示す。
表10は、IgG型9N10抗体に関して本明細書に開示した配列のいくつかを示す。下線は可変領域を示す。
表11は、本発明の抗体に関して本明細書に開示した他の配列を示す。
CXCR4に特異的に結合できる5種のヒト抗体を同定した。一本鎖抗体をc−myc及び6×Hisエピトープタグを有するpHOG21プラスミド(Kipriyanovら、1997)内にクローニングした。TG1細菌を形質転換し、scFvをIPTG誘導により発現させた。精製scFvの結合をEasyCyteで確認した。
CCRF−CEM(急性リンパ芽球性白血病、ATCC番号CCL−119)、HEK293T/17(ヒト腎臓、ATCC番号CRL−11268)、Ramos(バーキットリンパ腫、ATCC番号CRL−1596)、Jurkat6E−1(ヒトT細胞白血病、ATCC番号ECACC)及びDT40(ニワトリリンパ腫、ATCC番号CRL−2111)細胞株は、アメリカ合衆国培養細胞系統保存機関(the American Type Culture Collection(ATCC)、ロックビル、MD)から入手した。CCRF−CEM、Ramos、Jurkat及びDT40細胞はRPMI−1640培養培地中に維持し、HEK293T細胞はダルベッコ変性イーグル培地(DMEM)培養培地中に維持した。全ての細胞をウシ胎児血清とともに維持し、その濃度はDT40及びHEK293T細胞では10%、CCRF−CEM細胞、Jurkat及びRamosでは20%とした。全ての培地にペニシリン及びストレプトマイシンを添加した。
CCRF−CEM細胞は、週に3回分割し、3×105細胞/mLとして48時間、週末にかけては2×105細胞/mLとして生育させる。
4種の抗体、B−1M22、C−9P21、C−1I24及びD−1K21のscFvレベルでのCXCR4に対する特異性を、CXCR4トランスフェクト細胞への結合能により試験した。トランスフェクト細胞と対応する非トランスフェクト細胞との相違点は、CXCR4の発現のみである。
DT40及びHEK293T/17細胞は上述のように維持した。
形質転換したHEK細胞上のB−1M22を除く、4つのクローン全てが、トランスフェクションされた細胞株に特異的な結合性を示す(図6A及び6Bを参照されたい)(しかし、B−1M22抗体はDT40トランスフェクト細胞に特異的な結合を示す)。CXCR4は、以前から知られているように(Baribaudら、2001)、それを発現する細胞株に依存して多少異なる構造を取る傾向があることに留意すべきである。この事実が、異なる細胞株に異なる結果をもたらす原因のようである。これらの実験では、C−9P21クローンが概して最も優れた結合物であった。
Ramos及びCCRF−CEM細胞は上述のように維持した。
この実験では、用量依存的に3つのクローン全てが、細胞株を認識する(図6Cを参照されたい)。F7の両細胞への結合は、9N10及びC−9P21に比べて、わずかに高いようである。
4種の抗体、B−1M22、C−9P21、C−1I24及びD−1K21のscFvレベルでのCXCR4に対する特異性を、CXCR4に特異的に結合する2種の分子の存在下及び不存在下におけるCXCR4トランスフェクト細胞及びCXCR4を恒常的に発現するリンパ芽球様細胞への結合能により、試験した。2種の分子の1つはCXCR4の天然のリガンドであるSDF−1であり、もう一方は、CXCR4へのSDF−1αの結合を高い特異性で競合的に阻害するペプチドであるAMD3100である。
Jurkat及びRamos細胞は上述のように維持した。
B−1M22を除く、4種のクローンの3つは両細胞株に特異的結合性を示す。これら3種の結合クローンの全てが、その競合の程度は異なるが、SDF−1及びAMD3100の両者により阻害される(図7A(Jurkat細胞)及び図7B(Ramos細胞)を参照されたい)。これにより、これらのクローンは天然のリガンドが結合する部位とほぼ同じ部位に結合すること、及び生物学的効果を有する可能性が示唆される。B−1M22は、その結合レベルが低く、結合又は競合の状態を維持できないが、以下の実施例に示されるように、CCRF−CEM細胞上のCXCR4との結合においては本明細書に記載の最も優れた結合物の1つである(実施例4及び図8Aを参照されたい)。この場合も、CXCR4がそれを発現する細胞株に依存して多少異なる構造を取る傾向があると思われ、これにより、B−1M22に関して得られたデータが説明される。C−9P21及びC1I24が試験に用いた細胞種の全てに優れた結合性を示すことは、これらが複数の形態でCXCR4に結合できることを示唆していると認められ、これは非常に有利である。
CCRF−CEMは上述のように維持した。
C−9P21及び9N10の両クローンがCCRF−CEM細胞株に特異的な結合性を示す。両クローンはまた、SDF−1により阻害される(図7Cを参照されたい)。本実験において、F7は、最も強い絶対シグナルにより判断されるように、細胞への最大の結合を示すことに留意すべきである。
同定された抗CXCR4抗体の生物学的活性を比較するために、B−1M22、C−1I24、C−9P21及びD−1K21及び9N10を全長IgG1抗体型に変換した。対照として、F7抗体を生成した。F7抗体はCXCR4への結合により特徴付けされる(MedarexによるWO2008/060367参照)。F7抗体VH及びVL鎖の配列は、WO2008/060367の配列番号25及び配列番号29に規定されている。この抗体のIgG1型を作製するために、特許WO2008/060367(VH:配列番号25、VL:配列番号29)の記載に従って、最適のヌクレオチド配列をF7抗体のアミノ酸配列から演繹した。この配列を合成し、Norderhaugら(JIM、204:27−87、1997)に記載されているようにヒトIgG1/κにクローン化し、HEK293細胞に発現させ、続いてタンパク質Aにより精製した。これらIgGがCXCR4陽性細胞への結合能を保持していることを確認するために、全てのIgGをCXCR4を天然に発現するCCRF−CEM細胞上で評価した。
対応する可変ドメインをコードする遺伝子を、ヒト定常ドメインに対する遺伝子を有する哺乳類の発現ベクターpLNO内にクローン化した(Norderhaugら、前述)。
試験したクローンの全てが、CXCR4陽性細胞への結合能を保持した(図8A:C−1I24及びB−1M22、図8B:D−1K21及びC−9P21、9N10のデータは図示せず)。図8に示すEasyCyte曲線から、これらの実験では、本明細書に記載のクローンはCXCR4発現CCRF−CEM細胞への結合が、F7抗体よりも有意に優れていることも認められる(中央値が、PBS陰性対照の3.11に対して、48.11(F7)、179.03(D−1K21)、626.43(C−9P21)、910.58(C−1I24)及び1077.33(B−1H22))。
抗体候補のサル及びマウスのCXCR4との交差反応性をscFvレベルで試験した。
HEK293T/17細胞は上述のように維持した。
FACS結合分析(EasyCyte)は、マウス(遺伝子バンク受け入れ番号BC031665)又はサル(アカゲザル)のCXCR4(NCBI受託番号NP_001036110)をコードするプラスミドで一過性にトランスフェクトしたHEK−293細胞を用いて行った。2つの実験を行った。1つは、検出にα−cMyc及びPE標識ヤギ抗マウスIgG抗体を使用し、もう1つは、直接結合したRPE−c−Myc抗体を使用する。さらに、IgGレベルでの交差反応を分析した。後者では、抗体の結合はPE結合ヤギ抗ヒトIgG抗体で検出した。
D−1K21は、マウス及びサルCXCR4の両者に対して良好な交差反応性を示した。B−1M22、C−9P21及びC−1I24のscFv変異体もサル抗原に良好な交差反応性を示したが、マウスCXCR4に対しては、低(B−1M22)から中程度(C−1I24及びC−9P21)の反応性であった(図9参照)。9N10も試験したところ、C−9P21と同じ交差反応性パターンを示したが、結合の絶対値はわずかに高かった。
抗CXCR4抗体である、B−1M22、C−1I24、C−9P21及びD−1K21のscFv及びIgGレベルでのSDF−1αリガンド誘導Ca++流への影響力を試験した。9N10はIgGレベルのみについて試験した。実験は、天然のCXCR4+陽性細胞株CCRF−CEMを用いて行った。
CCRF−CEM細胞は上述のように維持した。
結果として、競合実験に使用する抗体の濃度を、IgGとして10μg/mL又は100μg/mLとし(ただし、9N10は1μg/mL又は10μg/mLとした)(データは表示せず)、scFvとして4μg/mLとした(図10参照)。
CCRF−CEM標的細胞を遠心分離で採取し、RPMI−1640培養培地で2回洗浄した。2.5×106個の細胞(IgG用)1mL又は2.5×107個の細胞(scFv用)10mLをFluo−4−AM(アセトキシメチルエステル:Invitrogen)、プルロニックF−127(Invitrogen)及びプロベネシドと最終濃度がそれぞれ1μM、0.02%、1mMとなるように混合した。全ての細胞を垂直回転ホイール(7rpm)上で37℃60分間インキュベートした。その後のステップは全て1mMのプロベネシド存在下に行った。細胞を10%ウシ胎児血清(FCS)を含むRPMI−11640で2回洗浄し、アッセイ緩衝液(145mMNaCl、4mMKC1、1mMNaH2PO4、0.8mMMgCl2、25mMHepes、22mMグルコース)で1回洗浄後、最終濃度4×106細胞/mLで再懸濁した。同量の細胞、抗体及びリガンド(SDF−1α)含有又は不含アッセイ緩衝液を混合した。最初の2つの成分(細胞と抗体)をリガンドであるSDF−1α(最終濃度:50ng/mL)の添加前に15分間、プレインキュベートした。抗体の最終濃度は、IgGでは10μg/mL又は100μg/mL、scFvでは4μg/mLとした。試料は直ちに515−545nmバンド通過フィルターを使用してFACSCantoII(BD Biosciences)上で分析した。曲線下の面積(AUC)をプリズムソフトウェア(GraphPad)を使用して積分して求め、SDF−1αのみによる最大刺激でのAUCに対する百分率としてプロットした。
scFvレベルで、C−9P21及びD−1K21変異体により強い拮抗作用が見られた。C−1I24もある程度の拮抗作用を示した。B−1M22では活性は認められなかった(図11A)。
結論として、これらの抗体は全て、CXCR4に結合するSDF−1αにより誘導されたCa++シグナリングに対して拮抗作用を示した。C−9P21及び9N10は最も顕著な効果を有していた。
100、20、4、0.8、0.16、0.032、0.064及び0.00128μg/mL濃度の滴定系列で抗体を使用して、上述と同様に実験を行った。
結果は、9N10によるカルシウム流の抑制は、IC50(nM)が3.85であり、C−9P21のIC50(nM)29に比較しておよそ8倍効果的であることを示す(図12A及び12B参照)。
scFvC−9P21によるリガンド誘導細胞移動の低減能をCXCR4+CCRF−CEM細胞株内で評価した。抗GFPscFvフラグメントを陰性対照として使用し、抗cMyc抗体を両scFvの架橋結合に使用してIgG型抗体の効果を模倣した。
CCRF−CEM細胞は上述のように維持した。
データは、抗CXCR4scFvC−9P21の存在下において、CCRF−CEM細胞のSDF−1誘導走化性が阻害されることを示している(図13参照)。これらの条件下、IC50値(細胞移動を50%阻害する抗体濃度)は2.9μg/mLと算出され、scFv濃度20μg/mLで100%阻害に達した。抗GFPscFvフラグメント(陰性対照)は、細胞移動を阻害しなかった(データは表示せず)。
標的細胞を死滅させることが好ましい作用様式である場合には、抗体が治療的に有用であるためのモデル機構の1つは、CXCR4発現標的細胞のADCCを仲介する能力である。これについてはT細胞リンパ腫から誘導され、CXCR4を恒常的に発現するCCRF−CEM細胞を使用して試験した。選択された抗体は、抗cMyc抗体と交差結合したscFvフラグメント及び全ヒトIgG1抗体として試験した。
CCRF−CEM細胞は上述のように維持した。
図14に示す結果は、試験した抗CXCR4抗体の全てが、ヒトPBMCの存在下、scFv及び全長IgGとしてADCCを誘導可能で、最大殺活性はほぼ100%であったことを示している。試験したscFv及びIgGは、その最大殺活性に従って次のように順位づけされる。すなわち、C−9P21>D−1K21(scFv);及びB−1M22>C−1I24〜C−9P21>D−1K21(IgG)(表Aも参照)。
本明細書に記載の抗CXCR4IgGが補体依存性細胞障害を仲介できるかどうかを試験するために、CDC試験を、バーキットB細胞リンパ腫に由来し、CXCR4を恒常的に発現するRamos細胞を使用して行った。
Ramos細胞は上述のように維持した。
図15A及び15Bに示す結果は、ヒト血清の存在下、C−1I24抗体はCDCを誘導することができることを示している。C−1I24のEC50値は0.7μg/mLであり、最大殺活性は100%であった。B−1M22変異体にもわずかにCDC活性が認められたが、非常に高濃度(100μg/mL)においてのみであった。陽性対照抗体としてF7を使用した。
抗CXCR4抗体のアポトーシス誘導活性をCXCR4+Ramos細胞株上で評価した。
Ramos細胞は上述のように培養した。
図16Aに示した結果(B−1M22、C−1I24、C−9P21及びD−1K21)は、B−1M22、C−1I24、C−9P21及びD−1K21抗体の存在下において、図16Aに0と記したバックグラウンドレベル(陰性対照レベル)以上にはアポトーシスを誘導しないことを示した。対照的に、F7IgG対照は、アッセイに使用された濃度全てにおいてアポトーシスを誘導した。図16Bに示した結果は、C−9P21及び9N10抗体は、有意なアポトーシスを誘導しないことを示している。
配列番号:85は配列番号:1と同一である。
配列番号:92は配列番号:26と同一である。
配列番号:86は配列番号:2と同一である。
配列番号:93は配列番号:27と同一である。
配列番号:87は配列番号:3と同一である。
配列番号:94は配列番号:28と同一である。
配列番号:99は配列番号:33と同一である。
配列番号:102は配列番号:69と同一である。
配列番号:104は配列番号:77と同一である。
以下の参考文献は、それらが、本明細書に記載された典型的な手順又は他の詳細な補足を提供する程度に、本明細書に参照により具体的に組み込まれる。
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Claims (60)
- CXCケモカイン受容体4(CXCR4)に結合し、CXCR4発現細胞の重大なアポトーシスを誘発しない分離抗体であって、
前記抗体が、3つのCDRsを含む少なくとも1つの重鎖可変領域と、3つのCDRsを含む少なくとも1つの軽鎖可変領域とを含み、
前記抗体が、
配列番号:1のアミノ酸配列からなる重鎖CDR1、配列番号:2のアミノ酸配列からなる重鎖CDR2、配列番号:3のアミノ酸配列からなる重鎖CDR3、配列番号:88のアミノ酸配列からなる軽鎖CDR1、配列番号:89のアミノ酸配列からなる軽鎖CDR2、及び配列番号:90のアミノ酸配列からなる軽鎖CDR3を含む抗体である;又は、
配列番号:1のアミノ酸配列からなる重鎖CDR1、配列番号:2のアミノ酸配列からなる重鎖CDR2、配列番号:3のアミノ酸配列からなる重鎖CDR3、配列番号:4のアミノ酸配列からなる軽鎖CDR1、配列番号:5のアミノ酸配列からなる軽鎖CDR2、及び配列番号:6のアミノ酸配列からなる軽鎖CDR3を含む抗体である;又は、
配列番号:7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1、配列番号:8のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2、配列番号:9のアミノ酸配列からなる重鎖CDR3、配列番号:10のアミノ酸配列からなる軽鎖CDR1、配列番号:11のアミノ酸配列からなる軽鎖CDR2、及び配列番号:12のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3を含む抗体である;又は、
配列番号:13のアミノ酸配列からなる重鎖CDR1、配列番号:14のアミノ酸配列からなる重鎖CDR2、配列番号:15のアミノ酸配列からなる重鎖CDR3、配列番号:16のアミノ酸配列からなる軽鎖CDR1、配列番号:17のアミノ酸配列からなる軽鎖CDR2、及び配列番号:18のアミノ酸配列からなる軽鎖CDR3を含む抗体である;又は、
配列番号:19のアミノ酸配列からなる重鎖CDR1、配列番号:20のアミノ酸配列からなる重鎖CDR2、配列番号:21のアミノ酸配列からなる重鎖CDR3、配列番号:22のアミノ酸配列からなる軽鎖CDR1、配列番号:23のアミノ酸配列からなる軽鎖CDR2、及び配列番号:24のアミノ酸配列からなる軽鎖CDR3を含む抗体である
、抗体。 - 0.4μg/mL以上の濃度で用いた場合に、前記抗体がCXCR4発現細胞の重大なアポトーシスを誘発しない、請求項1記載の抗体。
- 前記抗体が、CXCR4に対するリガンドの結合を阻害することができ、又はCXCR4発現細胞のリガンドが誘発する遊走を阻害することができ、又はCXCR4発現細胞内におけるリガンドが誘発するカルシウム流を阻害することができる、請求項1又は2記載の抗体。
- 前記抗体が、配列番号:69又はそれと少なくとも80%の配列同一性を有する配列の重鎖可変領域(VH)ドメイン、及び/又は配列番号:103又はそれと少なくとも80%の配列同一性を有する配列の軽鎖可変領域(VL)ドメインを有する、請求項1記載の抗体。
- 前記抗体が、配列番号:69又はそれと少なくとも80%の配列同一性を有する配列のVHドメイン、及び/又は配列番号:70又はそれと少なくとも80%の配列同一性を有する配列のVLドメインを有する、請求項1記載の抗体。
- 前記抗体が、配列番号:71又はそれと少なくとも80%の配列同一性を有する配列のVHドメイン、及び/又は配列番号:72又はそれと少なくとも80%の配列同一性を有する配列のVLドメインを有する、請求項1記載の抗体。
- 前記抗体が、配列番号:73又はそれと少なくとも80%の配列同一性を有する配列のVHドメイン、及び/又は配列番号:74又はそれと少なくとも80%の配列同一性を有する配列のVLドメインを有する、請求項1記載の抗体。
- 前記抗体が、配列番号:75又はそれと少なくとも80%の配列同一性を有する配列のVHドメイン、及び/又は配列番号:76又はそれと少なくとも80%の配列同一性を有する配列のVLドメインを有する、請求項1記載の抗体。
- 前記抗体が、
配列番号:69のアミノ酸配列からなるVHドメイン及び配列番号:103のアミノ酸配列からなるVLドメインを含む抗体である;又は、
配列番号:69のアミノ酸配列からなるVHドメイン及び配列番号:70のアミノ酸配列からなるVLドメインを含む抗体である;又は、
配列番号:71のアミノ酸配列からなるVHドメイン及び配列番号:72のアミノ酸配列からなるVLドメインを含む抗体である;又は、
配列番号:73のアミノ酸配列からなるVHドメイン及び配列番号:74のアミノ酸配列からなるVLドメインを含む抗体である;又は、
配列番号:75のアミノ酸配列からなるVHドメイン及び配列番号:76のアミノ酸配列からなるVLドメインを含む抗体である、
請求項1〜3のいずれか1項記載の抗体。 - 前記抗体がヒト抗体である、請求項1〜9のいずれか1項記載の抗体。
- 前記抗体が完全なヒト抗体である、請求項10記載の抗体。
- 前記抗体が、抗体の重鎖定常領域及び/又は抗体の軽鎖定常領域の全て又は一部を含む、請求項1〜11のいずれか1項記載の抗体。
- 前記抗体がIgG抗体である、請求項12記載の抗体。
- 前記抗体がIgG1抗体である、請求項13記載の抗体。
- 前記抗体が、配列番号:124のアミノ酸配列又はそれと少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む重鎖、及び/又は配列番号:125のアミノ酸配列又はそれと少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む軽鎖を含む、請求項12〜14のいずれか1項記載の抗体。
- 前記抗体が、配列番号:108のアミノ酸配列又はそれと少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む重鎖、及び/又は配列番号:109のアミノ酸配列又はそれと少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む軽鎖を含む、請求項12〜14のいずれか1項記載の抗体。
- 前記抗体が、配列番号:112のアミノ酸配列又はそれと少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む重鎖、及び/又は配列番号:113のアミノ酸配列又はそれと少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む軽鎖を含む、請求項12〜14のいずれか1項記載の抗体。
- 前記抗体が、配列番号:116のアミノ酸配列又はそれと少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む重鎖、及び/又は配列番号:117のアミノ酸配列又はそれと少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む軽鎖を含む、請求項12〜14のいずれか1項記載の抗体。
- 前記抗体が、配列番号:120のアミノ酸配列又はそれと少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む重鎖、及び/又は配列番号:121のアミノ酸配列又はそれと少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む軽鎖を含む、請求項12〜14のいずれか1項記載の抗体。
- 前記抗体が、
配列番号:124のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号:125のアミノ酸配列からなる軽鎖を含む抗体である;又は、
配列番号:108のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号:109のアミノ酸配列からなる軽鎖を含む抗体である;又は、
配列番号:112のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号:113のアミノ酸配列からなる軽鎖を含む抗体である;又は、
配列番号:116のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号:117のアミノ酸配列からなる軽鎖を含む抗体である;又は
配列番号:120のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号:121のアミノ酸配列からなる軽鎖を含む抗体である、
請求項12〜14のいずれか1項記載の抗体。 - 前記抗体が、抗体の抗原結合断片である、請求項1〜20のいずれか1項記載の抗体。
- 前記抗体の前記抗原結合断片が、Fab'、Fab、F(ab')2 、TandAbs二量体、Fv、scFv、dsFv、ds−scFv、直鎖状抗体、ミニボディ、ダイアボディ、二重特異性抗体断片、バイボディ、トリボディ、sc−ダイアボディ、カッパ(ラムダ)ボディ、BiTE、DVD−Ig、SIP、SMIP、またはDARTである、請求項21記載の抗体。
- 前記抗体が、少なくとも第2の診断薬又は治療薬と結合している、請求項1〜22のいずれか1項記載の抗体。
- 前記抗体が、少なくとも放射線治療薬、化学療法薬、抗血管新生薬、アポトーシス誘導薬、抗チューブリン薬、抗細胞又は細胞毒性薬、ステロイド、サイトカインアンタゴニスト、サイトカイン発現阻害剤、ケモカインアンタゴニスト、ケモカイン発現阻害剤、ATPアーゼ阻害剤、抗炎症薬、信号伝達経路阻害剤、抗癌剤、他の抗体、凝固剤又は抗ウィルス剤と結合している、請求項23記載の抗体。
- 前記抗ウィルス剤が、ヌクレオシド、ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤、非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤及びプロテアーゼ阻害剤からなる群から選択される、請求項24記載の抗体。
- 少なくとも第2の治療薬又は診断薬と結合した、請求項1〜25のいずれか1項記載の抗体を含む免疫複合体。
- 請求項1〜25のいずれか1項記載の少なくとも第1の抗体又は請求項26記載の免疫複合体を含む組成物。
- 前記組成物が、薬学的に許容される組成物である、請求項27記載の組成物。
- 前記組成物が、少なくとも第2の治療薬を更に含む、請求項27または28に記載の組成物。
- 前記第2の治療薬が、放射線治療薬、化学療法薬、抗血管新生薬、アポトーシス誘導薬、抗チューブリン薬、抗細胞又は細胞毒性薬、ステロイド、サイトカインアンタゴニスト、サイトカイン発現阻害剤、ケモカインアンタゴニスト、ケモカイン発現阻害剤、ATPアーゼ阻害剤、抗炎症薬、信号伝達経路阻害剤、抗癌剤、他の抗体、凝固剤又は抗ウィルス剤である、請求項29に記載の組成物。
- 前記第2の治療薬が、ヌクレオシド、ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤、非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤及びプロテアーゼ阻害剤からなる群から選択される、請求項30に記載の組成物。
- 請求項1〜25のいずれか1項記載の抗体をコードするヌクレオチド配列領域を含む核酸分子。
- 前記ヌクレオチド配列領域が、配列番号:34、配列番号:45、配列番号:56、配列番号:67、若しくは配列番号:100のヌクレオチド配列、又はそれらと少なくとも80%の配列同一性を有する配列からなる、請求項32記載の核酸分子。
- 請求項32又は33記載の核酸分子を含む発現ベクター。
- 請求項32若しくは33記載の核酸分子、又は請求項34記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
- 請求項32若しくは33記載の核酸分子、又は請求項34記載の発現ベクターを含むウィルス。
- 少なくとも第1の容器内に、
(a)請求項1〜25のいずれか1項記載の抗体;
(b)請求項26記載の免疫複合体;
(c)請求項27〜31のいずれか1項記載の組成物;
(d)請求項32又は33記載の核酸分子;
(e)請求項34記載の発現ベクター;
(f)請求項35記載の宿主細胞;又は
(g)請求項36記載のウィルス
を含むキット。 - (a)コードされた抗体を発現するのに効果的な条件下に、請求項34記載の発現ベクターを含む宿主細胞を培養すること;及び
(b)前記宿主細胞から、発現した抗体を得ること
を含む、抗体の製造方法。 - CXCR4を含む組成物を、請求項1〜25のいずれか1項記載の抗体又は請求項26記載の免疫複合体と接触させることを含む、CXCR4の結合方法。
- CXCR4を含むと思われる組成物を請求項1〜25のいずれか1項記載の抗体又は請求項26記載の免疫複合体と、前記CXCR4と前記抗体との複合体の形成を可能にするのに効果的な条件下で接触させ、そのようにして形成された前記複合体を検出することを含む、CXCR4の検出方法。
- 動物において、CXCR4の発現と関連する疾患の診断方法であって、
(a)前記動物から得られた試験試料を、請求項1〜25のいずれか1項記載の抗体又は請求項26記載の免疫複合体と接触させる工程;
(b)前記試験試料中の抗体−抗原複合体の存在及び/又は量及び/又は位置を測定又は検出する工程;及び
(c)前記試験試料中の抗体−抗原複合体の存在及び/又は量を、対照と比較する工程を含む、前記方法、
に使用するための請求項1〜25のいずれか1項記載の抗体又は請求項26記載の免疫複合体を含む診断用組成物。 - 前記試験試料を前記動物から分離し、インビトロで前記抗体又は免疫複合体と接触させる、請求項41記載の方法、
に使用するための請求項41記載の診断用組成物。 - 前記抗体又は免疫複合体を前記動物に投与し、それによって、インビボで前記試料と接触させる、請求項41記載の方法、
に使用するための請求項41記載の診断用組成物。 - CXCR4の発現と関連する前記疾患が、CXCR4により介在される疾患、CXCR4+細胞の異常な増殖により特徴づけられる疾患、又はCXCR4の過剰発現により特徴づけられる疾患である、請求項41〜43のいずれか1項記載の方法、
に使用するための請求項41〜43のいずれか1項記載の診断用組成物。 - 前記疾患が、癌、転移性癌、癌細胞による器官の浸潤、血管形成に関連する疾患、炎症若しくは免疫疾患、リウマチ様関節炎のような自己免疫疾患、HIV感染のようなウィルス感染、又は免疫系を復元するために骨髄から幹細胞を移動させるのが望ましい病状である、請求項41〜43のいずれか1項記載の方法、
に使用するための請求項41〜43のいずれか1項記載の診断用組成物。 - 前記試料中のCXCR4の量の増加が、前記疾患の特徴である、請求項41〜45のいずれか1項記載の方法、
に使用するための請求項41〜45のいずれか1項記載の診断用組成物。 - 動物における、CXCR4の発現又は活性と関連する疾患の治療方法であって、前記疾患を患っている動物に、請求項1〜25のいずれか1項記載の抗体又は請求項26記載の免疫複合体の治療的有効量を投与することを含む方法、
に使用するための請求項1〜25のいずれか1項記載の抗体又は請求項26記載の免疫複合体を含む治療用組成物。 - CXCR4の発現又は活性と関連する前記疾患が、CXCR4により介在される疾患、CXCR4+細胞の異常な増殖により特徴づけられる疾患、又はCXCR4の過剰発現により特徴づけられる疾患である、請求項47記載の方法、
に使用するための請求項47記載の治療用組成物。 - 前記疾患が、癌、転移性癌、癌細胞による器官の浸潤、血管形成に関連する疾患、炎症若しくは免疫疾患、リウマチ様関節炎のような自己免疫疾患、HIV感染のようなウィルス感染、又は免疫系を復元するために骨髄から幹細胞を移動させるのが望ましい病状である、請求項47又は48記載の方法、
に使用するための請求項47又は48記載の治療用組成物。 - 前記抗体又はその免疫複合体が、以下の1又はそれ以上を引き起こす、請求項47〜49のいずれか1項記載の方法、
(a)CXCR4の、少なくともSDF−1への結合の阻害;
(b)CXCR4リガンドに対するCXCR4介在性細胞応答の阻害、又はCXCR4発現細胞のリガンドが誘発する遊走の阻害;
(c)CXCR4+細胞のADCCの誘導;
(d)インビボにおける抗腫瘍効果の誘導;
(e)CXCR4+細胞のCDCの誘導;
(f)既存の癌により引き起こされる転移形成の阻害;
(g)癌細胞の新しい器官への浸潤の阻害;
(h)腫瘍間質へのCXCR4+細胞の誘引の阻害、及び/又は腫瘍に有利な微小環境を引き起こすための前記細胞の活性化の阻害;
(i)他の治療に有効な化合物を用いた治療のための腫瘍細胞の感作、
に使用するための請求項47〜49のいずれか1項記載の治療用組成物。 - CXCR4リガンドに対する前記CXCR4介在性細胞応答の前記阻害が、CXCR4リガンドに対するカルシウムイオンの流出の阻害である、請求項50記載の方法
に使用するための請求項50記載の治療用組成物。 - 第2の治療薬を前記動物に投与することを更に含む、請求項47〜51のいずれか1項記載の方法、
に使用するための請求項47〜51のいずれか1項記載の治療用組成物。 - 前記第2の治療薬が、放射線治療薬、化学療法薬、抗血管新生薬、アポトーシス誘導薬、抗チューブリン薬、抗細胞又は細胞毒性薬、ステロイド、サイトカインアンタゴニスト、サイトカイン発現阻害剤、ケモカインアンタゴニスト、ケモカイン発現阻害剤、ATPアーゼ阻害剤、抗炎症薬、信号伝達経路阻害剤、抗癌剤、他の抗体、凝固剤又は抗ウィルス剤である、請求項52記載の方法、
に使用するための請求項52記載の治療用組成物。 - 前記第2の治療薬が、ヌクレオシド、ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤、非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤及びプロテアーゼ阻害剤からなる群から選択される、請求項53記載の方法、
に使用するための請求項53記載の治療用組成物。 - 前記抗体が、前記抗体の少なくとも2つの抗原結合断片を含む、二価又は多価抗体である請求項41〜46のいずれか1項記載の方法に使用するための、請求項41〜46のいずれか1項記載の診断用組成物、又は
前記抗体が、前記抗体の少なくとも2つの抗原結合断片を含む、二価又は多価抗体である請求項47〜54のいずれか1項記載の方法に使用するための、請求項47〜54のいずれか1項記載の治療用組成物。 - 前記動物がヒトを対象としている請求項41〜46及び55のいずれか1項記載の方法に使用するための、請求項41〜46及び55のいずれか1項記載の診断用組成物、又は
前記動物がヒトを対象としている請求項47〜55のいずれか1項記載の方法に使用するための、請求項47〜55のいずれか1項記載の治療用組成物。 - 治療、画像処理又は診断に用いるための、請求項1〜25のいずれか1項記載の抗体、又は請求項26記載の免疫複合体。
- CXCR4の発現又は活性と関連する疾患の治療、画像処理又は診断に用いるための、請求項57記載の抗体又は免疫複合体。
- CXCR4の発現又は活性と関連する前記疾患が、CXCR4により介在される疾患、CXCR4+細胞の異常な増殖により特徴づけられる疾患、又はCXCR4の過剰発現により特徴づけられる疾患である、請求項58記載の抗体又は免疫複合体。
- 前記疾患が、癌、転移性癌、癌細胞による器官の浸潤、血管形成に関連する疾患、炎症若しくは免疫疾患、リウマチ様関節炎のような自己免疫疾患、HIV感染のようなウィルス感染、又は免疫系を復元するために骨髄から幹細胞を移動させるのが望ましい病状である、請求項58または59記載の抗体又は免疫複合体。
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