JP6035238B2 - プロテインキナーゼc阻害剤およびその使用 - Google Patents
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- C12N9/12—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
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- C12Y207/00—Transferases transferring phosphorus-containing groups (2.7)
- C12Y207/11—Protein-serine/threonine kinases (2.7.11)
- C12Y207/11013—Protein kinase C (2.7.11.13)
Description
本願は、米国特許法第119条(e)の下、2010年7月21日に出願された米国特許出願第61/366,464号の優先権を主張するものであり、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。
(式中、
R5は、ハロアルキル、アルコキシ、置換アルコキシ、シアノ、ハロゲン、アシル、アミノアシル、およびニトロから選択され;
Y1およびY2は、それぞれ独立して、水素、アルキル、およびアシルから選択され;
R1は、水素、アルキル、および置換アルキルから選択され;
RaおよびRbは、それぞれ独立して、水素およびアルキルから選択され;
RcおよびRdは、それぞれ独立して、水素およびアルキルから選択され;
R6aは、水素、アルキル、置換アルキル、シアノ、ハロゲン、アシル、アミノアシル、ニトロ、シクロアルキル、および置換シクロアルキルから選択され;
R6bは、水素、アルキル、置換アルキル、シアノ、ハロゲン、アシル、アミノアシル、ニトロ、シクロアルキル、および置換シクロアルキルから選択され;
R7bは、水素、アルキル、置換アルキル、シアノ、ハロゲン、アシル、アミノアシル、ニトロ、シクロアルキル、および置換シクロアルキルから選択され;
R8は、水素、C2〜10アルキル、置換アルキル、シアノ、ハロゲン、アシル、アミノアシル、ニトロ、シクロアルキル、および置換シクロアルキルから選択され;
R7xは、水素、アルキル、ハロアルキル、シクロアルキル、および置換シクロアルキルから選択され;
ここでR6a、R6b、R7b、およびR8の少なくとも1つは水素ではなく;
ここでR8がフルオロである場合、R7bは水素ではなく;
ここでR7bがシクロプロピルである場合、R6a、R6b、R8、およびR7xの少なくとも1つは水素ではなく、
ここでR8がシクロプロピルである場合、R6a、R6b、R7b、およびR7xの少なくとも1つは水素ではない)
またはその塩もしくは立体異性体により表わされる。
用語
以下の置換基および値は、様々な態様および実施形態の代表的例を提供することを意図する。これらの代表的値は、かかる態様を更に定義および例示することを意図したものであって、他の実施形態を除外したり、または本発明の範囲を限定したりするものではない。これに関連して、特定の値または置換基が好まれるとの表示は、特段の指示がないかぎり、他の値または置換基を本発明から除外するものではない。
組成物の態様の1つにおいて、本発明の実施形態は、式(I):
(式中、
R5は、ハロアルキル、アルコキシ、置換アルコキシ、シアノ、ハロゲン、アシル、アミノアシル、およびニトロから選択され;
Y1およびY2は、それぞれ独立して、水素、アルキル、およびアシルから選択され;
R1は、水素、アルキル、および置換アルキルから選択され;
RaおよびRbは、それぞれ独立して、水素およびアルキルから選択され;
RcおよびRdは、それぞれ独立して、水素およびアルキルから選択され;
R6aは、水素、アルキル、置換アルキル、シアノ、ハロゲン、アシル、アミノアシル、ニトロ、シクロアルキル、および置換シクロアルキルから選択され;
R6bは、水素、アルキル、置換アルキル、シアノ、ハロゲン、アシル、アミノアシル、ニトロ、シクロアルキル、および置換シクロアルキルから選択され;
R7bは、水素、アルキル、置換アルキル、シアノ、ハロゲン、アシル、アミノアシル、ニトロ、シクロアルキル、および置換シクロアルキルから選択され;
R8は、水素、C2〜10アルキル、置換アルキル、シアノ、ハロゲン、アシル、アミノアシル、ニトロ、シクロアルキル、および置換シクロアルキルから選択され;
R7xは、水素、アルキル、ハロアルキル、シクロアルキル、および置換シクロアルキルから選択され;
ここでR6a、R6b、R7b、およびR8の少なくとも1つは水素ではなく;
ここでR8がフルオロである場合、R7bは水素ではなく;
ここでR7bがシクロプロピルである場合、R6a、R6b、R8、およびR7xの少なくとも1つは水素ではなく;
ここでR8がシクロプロピルである場合、R6a、R6b、R7b、およびR7xの少なくとも1つは水素ではない)
で示される化合物、またはその塩もしくは立体異性体を提供する。
組成物の態様の1つにおいて、本発明の実施形態は、式(II):
(式中、
R5は、ハロアルキル、アルコキシ、置換アルコキシ、シアノ、ハロゲン、アシル、アミノアシル、およびニトロから選択され;
Y1およびY2は、それぞれ独立して、水素、アルキル、およびアシルから選択され;
R1は、水素、アルキル、および置換アルキルから選択され;
RaおよびRbは、それぞれ独立して、水素およびアルキルから選択され;
RcおよびRdは、それぞれ独立して、水素およびアルキルから選択され;
R6aは、水素、アルキル、置換アルキル、シアノ、ハロゲン、アシル、アミノアシル、ニトロ、シクロアルキル、および置換シクロアルキルから選択され;
R6bは、水素、アルキル、置換アルキル、シアノ、ハロゲン、アシル、アミノアシル、ニトロ、シクロアルキル、および置換シクロアルキルから選択され;
R7bは、水素、アルキル、置換アルキル、シアノ、ハロゲン、アシル、アミノアシル、ニトロ、シクロアルキル、および置換シクロアルキルから選択され;
R8は、水素、C2〜10アルキル、置換アルキル、シアノ、ハロゲン、アシル、アミノアシル、ニトロ、シクロアルキル、および置換シクロアルキルから選択され;
R7xは、水素、アルキル、ハロアルキル、シクロアルキル、および置換シクロアルキルから選択され;
ここでR6aおよびR6bの少なくとも一方は、水素ではない)
で示される化合物、またはその塩もしくは立体異性体を提供する。
組成物の態様の1つにおいて、本発明の実施形態は、式(III):
(式中、
R5は、ハロアルキル、アルコキシ、置換アルコキシ、シアノ、ハロゲン、アシル、アミノアシル、およびニトロから選択され;
Y1およびY2は、それぞれ独立して、水素、アルキル、およびアシルから選択され;
R1は、水素、アルキル、および置換アルキルから選択され;
RaおよびRbは、それぞれ独立して、水素およびアルキルから選択され;
RcおよびRdは、それぞれ独立して、水素およびアルキルから選択され;
R6aは、水素、アルキル、置換アルキル、シアノ、ハロゲン、アシル、アミノアシル、ニトロ、シクロアルキル、および置換シクロアルキルから選択され;
R6bは、水素、アルキル、置換アルキル、シアノ、ハロゲン、アシル、アミノアシル、ニトロ、シクロアルキル、および置換シクロアルキルから選択され;
R7bは、水素、アルキル、置換アルキル、シアノ、ハロゲン、アシル、アミノアシル、ニトロ、シクロアルキル、および置換シクロアルキルから選択され;
R8は、水素、C2〜10アルキル、置換アルキル、シアノ、ハロゲン、アシル、アミノアシル、ニトロ、シクロアルキル、および置換シクロアルキルから選択され;
R7xは、水素、アルキル、ハロアルキル、シクロアルキル、および置換シクロアルキルから選択され;
ここでR6a、R6b、R7b、およびR8の少なくとも1つは、ハロゲンであり;
ここでR6a、R6b、R7b、およびR8の少なくとも1つは、シクロアルキル、アルキル、またはC2〜10アルキルである)
で示される化合物、またはその塩もしくは立体異性体を提供する。
組成物の態様の1つにおいて、本発明の実施形態は、式(IV):
(式中、
R5は、ハロアルキル、アルコキシ、置換アルコキシ、シアノ、ハロゲン、アシル、アミノアシル、およびニトロから選択され;
Y1およびY2は、それぞれ独立して、水素、アルキル、およびアシルから選択され;
R1は、水素、アルキル、および置換アルキルから選択され;
RaおよびRbは、それぞれ独立して、水素およびアルキルから選択され;
RcおよびRdは、それぞれ独立して、水素およびアルキルから選択され;
R6aは、水素、アルキル、置換アルキル、シアノ、ハロゲン、アシル、アミノアシル、ニトロ、シクロアルキル、および置換シクロアルキルから選択され;
R6bは、水素、アルキル、置換アルキル、シアノ、ハロゲン、アシル、アミノアシル、ニトロ、シクロアルキル、および置換シクロアルキルから選択され;
R7bは、水素、アルキル、置換アルキル、シアノ、ハロゲン、アシル、アミノアシル、ニトロ、シクロアルキル、および置換シクロアルキルから選択され;
R8は、水素、C2〜10アルキル、置換アルキル、シアノ、ハロゲン、アシル、アミノアシル、ニトロ、シクロアルキル、および置換シクロアルキルから選択され;
R7xは、水素、アルキル、ハロアルキル、シクロアルキル、および置換シクロアルキルから選択され;
ここでR6a、R6b、R7b、およびR8の少なくとも1つは、C2〜10アルキルである)
で示される化合物、またはその塩もしくは立体異性体を提供する。
組成物の態様の1つにおいて、本発明の実施形態は、式(V):
(式中、
R5は、ハロアルキル、アルコキシ、置換アルコキシ、シアノ、ハロゲン、アシル、アミノアシル、およびニトロから選択され;
Y1およびY2は、それぞれ独立して、水素、アルキル、およびアシルから選択され;
R1は、水素、アルキル、および置換アルキルから選択され;
RaおよびRbは、それぞれ独立して、水素およびアルキルから選択され;
RcおよびRdは、それぞれ独立して、水素およびアルキルから選択され;
R6aは、水素、アルキル、置換アルキル、シアノ、ハロゲン、アシル、アミノアシル、ニトロ、シクロアルキル、および置換シクロアルキルから選択され;
R6bは、水素、アルキル、置換アルキル、シアノ、ハロゲン、アシル、アミノアシル、ニトロ、シクロアルキル、および置換シクロアルキルから選択され;
R7bは、水素、アルキル、置換アルキル、シアノ、ハロゲン、アシル、アミノアシル、ニトロ、シクロアルキル、および置換シクロアルキルから選択され;
R8は、水素、C2〜10アルキル、置換アルキル、シアノ、ハロゲン、アシル、アミノアシル、ニトロ、シクロアルキル、および置換シクロアルキルから選択され;
R7xは、ハロアルキルである)
で示される化合物、またはその塩もしくは立体異性体を提供する。
R6a、R6b、R7b、およびR8の少なくとも1つは、水素ではなく;
R8が、フルオロであれば、R7bは、水素ではなく;
R7bが、シクロプロピルであれば、R6a、R6b、R8、およびR7xの少なくとも1つは、水素ではなく;
R8が、シクロプロピルであれば、R6a、R6b、R7b、およびR7xの少なくとも1つは、水素ではない。
"
"
I−1: N2−(4−シクロプロピル−2−フルオロ−5−テトラゾル−1−イル−フェニル)−5−フルオロ−N4−(2,2,6,6−テトラメチル−ピペリジン−4−イル)−ピリミジン−2,4−ジアミン;
I−2: 2−(4−シクロプロピル−2−フルオロ−5−テトラゾル−1−イル−フェニルアミノ)−4−(2,2,6,6−テトラメチル−ピペリジン−4−イルアミノ)−ピリミジン−5−カルボニトリル;
I−3: 2−(4−シクロプロピル−2−フルオロ−5−テトラゾル−1−イル−フェニルアミノ)−4−(2,2,6,6−テトラメチル−ピペリジン−4−イルアミノ)−ピリミジン−5−カルボン酸アミド;
I−4: 2−(4−シクロプロピル−3−フルオロ−5−テトラゾル−1−イル−フェニルアミノ)−4−(2,2,6,6−テトラメチル−ピペリジン−4−イルアミノ)−ピリミジン−5−カルボニトリル;
I−5: N2−(4−シクロプロピル−3−フルオロ−5−テトラゾル−1−イル−フェニル)−5−フルオロ−N4−(2,2,6,6−テトラメチル−ピペリジン−4−イル)−ピリミジン−2,4−ジアミン;
I−6: 2−(3−シクロプロピル−4−フルオロ−5−テトラゾル−1−イル−フェニルアミノ)−4−(2,2,6,6−テトラメチル−ピペリジン−4−イルアミノ)−ピリミジン−5−カルボニトリル;
I−7: N2−(3−シクロプロピル−4−フルオロ−5−テトラゾル−1−イル−フェニル)−5−フルオロ−N4−(2,2,6,6−テトラメチル−ピペリジン−4−イル)−ピリミジン−2,4−ジアミン;
I−8: 2−(2−フルオロ−4−イソプロピル−5−テトラゾル−1−イル−フェニルアミノ)−4−(2,2,6,6−テトラメチル−ピペリジン−4−イルアミノ)−ピリミジン−5−カルボニトリル;
I−9: 5−フルオロ−N2−(4−イソプロピル−3−テトラゾル−1−イル−フェニル)−N4−(2,2,6,6−テトラメチル−ピペリジン−4−イル)−ピリミジン−2,4−ジアミン;
I−10: 2−(4−イソプロピル−3−テトラゾル−1−イル−フェニルアミノ)−4−(2,2,6,6−テトラメチル−ピペリジン−4−イルアミノ)−ピリミジン−5−カルボン酸アミド;
I−11: 2−(4−イソプロピル−3−テトラゾル−1−イル−フェニルアミノ)−4−(2,2,6,6−テトラメチル−ピペリジン−4−イルアミノ)−ピリミジン−5−カルボニトリル;
I−12: N2−(4−シクロプロピル−2−フルオロ−5−テトラゾル−1−イル−フェニル)−5−フルオロ−N4−(2,2,6,6−テトラメチル−ピペリジン−4−イル)−ピリミジン−2,4−ジアミン;
I−13: 5−フルオロ−N2−(2−フルオロ−5−テトラゾル−1−イル−フェニル)−N4−(2,2,6,6−テトラメチル−ピペリジン−4−イル)−ピリミジン−2,4−ジアミン;
I−14: 5−フルオロ−N2−(2−フルオロ−5−テトラゾル−1−イル−フェニル)−N4−(1,2,2,6,6−ペンタメチル−ピペリジン−4−イル)−ピリミジン−2,4−ジアミン;および
I−15: N2−[4−シクロプロピル−3−(5−トリフルオロメチル−テトラゾル−1−イル)−フェニル]−5−フルオロ−N4−(2,2,6,6−テトラメチル−ピペリジン−4−イル)−ピリミジン−2,4−ジアミン、
またはその溶媒和物、プロドラッグ、もしくは薬学的に許容し得る塩。
I−16: N2−(4−シクロプロピル−2−フルオロ−5−(5−イソプロピル−1H−テトラゾル−1−イル)フェニル)−5−フルオロ−N4−(2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−4−イル)ピリミジン−2,4−ジアミン;
I−17: N2−(4−シクロプロピル−5−(5−シクロプロピル−1H−テトラゾル−1−イル)−2−フルオロフェニル)−5−フルオロ−N4−(2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−4−イル)ピリミジン−2,4−ジアミン;
I−18: N2−(4−シクロプロピル−2−フルオロ−5−(5−メチル−1H−テトラゾル−1−イル)フェニル)−5−フルオロ−N4−(2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−4−イル)ピリミジン−2,4−ジアミン;
I−19: N2−(4−シクロプロピル−2−フルオロ−5−(5−(トリフルオロメチル)−1H−テトラゾル−1−イル)フェニル)−5−フルオロ−N4−(2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−4−イル)ピリミジン−2,4−ジアミン;
I−20: N2−(4−シクロプロピル−2−フルオロ−5−(5−(フルオロメチル)−1H−テトラゾル−1−イル)フェニル)−5−フルオロ−N4−(2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−4−イル)ピリミジン−2,4−ジアミン;および
I−21: trans−5−フルオロ−N2−(2−フルオロ−5−(1H−テトラゾル−1−イル)−4−(2−(トリフルオロメチル)シクロプロピル)フェニル)−N4−(2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−4−イル)ピリミジン−2,4−ジアミン、
またはその溶媒和物、プロドラッグ、もしくは薬学的に許容し得る塩。
I−1: N2−(4−シクロプロピル−2−フルオロ−5−テトラゾル−1−イル−フェニル)−5−フルオロ−N4−(2,2,6,6−テトラメチル−ピペリジン−4−イル)−ピリミジン−2,4−ジアミン;
I−2: 2−(4−シクロプロピル−2−フルオロ−5−テトラゾル−1−イル−フェニルアミノ)−4−(2,2,6,6−テトラメチル−ピペリジン−4−イルアミノ)−ピリミジン−5−カルボニトリル;
I−3: 2−(4−シクロプロピル−2−フルオロ−5−テトラゾル−1−イル−フェニルアミノ)−4−(2,2,6,6−テトラメチル−ピペリジン−4−イルアミノ)−ピリミジン−5−カルボン酸アミド;
I−4: 2−(4−シクロプロピル−3−フルオロ−5−テトラゾル−1−イル−フェニルアミノ)−4−(2,2,6,6−テトラメチル−ピペリジン−4−イルアミノ)−ピリミジン−5−カルボニトリル;
I−5: N2−(4−シクロプロピル−3−フルオロ−5−テトラゾル−1−イル−フェニル)−5−フルオロ−N4−(2,2,6,6−テトラメチル−ピペリジン−4−イル)−ピリミジン−2,4−ジアミン;
I−6: 2−(3−シクロプロピル−4−フルオロ−5−テトラゾル−1−イル−フェニルアミノ)−4−(2,2,6,6−テトラメチル−ピペリジン−4−イルアミノ)−ピリミジン−5−カルボニトリル;
I−7: N2−(3−シクロプロピル−4−フルオロ−5−テトラゾル−1−イル−フェニル)−5−フルオロ−N4−(2,2,6,6−テトラメチル−ピペリジン−4−イル)−ピリミジン−2,4−ジアミン;
I−8: 2−(2−フルオロ−4−イソプロピル−5−テトラゾル−1−イル−フェニルアミノ)−4−(2,2,6,6−テトラメチル−ピペリジン−4−イルアミノ)−ピリミジン−5−カルボニトリル;
I−9: 5−フルオロ−N2−(4−イソプロピル−3−テトラゾル−1−イル−フェニル)−N4−(2,2,6,6−テトラメチル−ピペリジン−4−イル)−ピリミジン−2,4−ジアミン;
I−10: 2−(4−イソプロピル−3−テトラゾル−1−イル−フェニルアミノ)−4−(2,2,6,6−テトラメチル−ピペリジン−4−イルアミノ)−ピリミジン−5−カルボン酸アミド;
I−11: 2−(4−イソプロピル−3−テトラゾル−1−イル−フェニルアミノ)−4−(2,2,6,6−テトラメチル−ピペリジン−4−イルアミノ)−ピリミジン−5−カルボニトリル;
I−12: N2−(4−シクロプロピル−2−フルオロ−5−テトラゾル−1−イル−フェニル)−5−フルオロ−N4−(2,2,6,6−テトラメチル−ピペリジン−4−イル)−ピリミジン−2,4−ジアミン;
I−13: 5−フルオロ−N2−(2−フルオロ−5−テトラゾル−1−イル−フェニル)−N4−(2,2,6,6−テトラメチル−ピペリジン−4−イル)−ピリミジン−2,4−ジアミン;
I−14: 5−フルオロ−N2−(2−フルオロ−5−テトラゾル−1−イル−フェニル)−N4−(1,2,2,6,6−ペンタメチル−ピペリジン−4−イル)−ピリミジン−2,4−ジアミン;
I−15: N2−[4−シクロプロピル−3−(5−トリフルオロメチル−テトラゾル−1−イル)−フェニル]−5−フルオロ−N4−(2,2,6,6−テトラメチル−ピペリジン−4−イル)−ピリミジン−2,4−ジアミン;
I−16: N2−(4−シクロプロピル−2−フルオロ−5−(5−イソプロピル−1H−テトラゾル−1−イル)フェニル)−5−フルオロ−N4−(2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−4−イル)ピリミジン−2,4−ジアミン;
I−17: N2−(4−シクロプロピル−5−(5−シクロプロピル−1H−テトラゾル−1−イル)−2−フルオロフェニル)−5−フルオロ−N4−(2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−4−イル)ピリミジン−2,4−ジアミン;および
I−18: N2−(4−シクロプロピル−2−フルオロ−5−(5−メチル−1H−テトラゾル−1−イル)フェニル)−5−フルオロ−N4−(2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−4−イル)ピリミジン−2,4−ジアミン;
I−19: N2−(4−シクロプロピル−2−フルオロ−5−(5−(トリフルオロメチル)−1H−テトラゾル−1−イル)フェニル)−5−フルオロ−N4−(2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−4−イル)ピリミジン−2,4−ジアミン;
I−20: N2−(4−シクロプロピル−2−フルオロ−5−(5−(フルオロメチル)−1H−テトラゾル−1−イル)フェニル)−5−フルオロ−N4−(2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−4−イル)ピリミジン−2,4−ジアミン;および
I−21: trans−5−フルオロ−N2−(2−フルオロ−5−(1H−テトラゾル−1−イル)−4−(2−(トリフルオロメチル)シクロプロピル)フェニル)−N4−(2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−4−イル)ピリミジン−2,4−ジアミン、
またはその溶媒和物、プロドラッグ、もしくは薬学的に許容し得る塩。
開示された化合物を合成するのに有用な、一般に知られる化学的合成スキームおよび条件を提供する多くの一般的参照を入手することは可能である(例えば、Smith and March, March's Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure, Fifth Edition, Wiley-Interscience, 2001;またはVogel, A Textbook of Practical Organic Chemistry, Including Qualitative Organic Analysis, Fourth Edition, New York: Longman, 1978を参照のこと)。
特定の実施形態において、該化合物は、以下のスキーム1に例示されるとおり置換または非置換のウラシルから合成することができる:
スキーム1
スキーム2
スキーム3
ウラシルA−1、A−7、およびA−11出発原料は、市販業者から購入、または有機化学の標準技術を用いて調製することができる。本明細書に開示されたスキームにおける出発原料として用いられ得る市販のウラシルは、例えば、ウラシル(Aldrich番号13,078−8;CAS Registry66−22−8);5−ブロモウラシル (Aldrich番号85,247−3;CAS Registry51−20−7);5−フルオロウラシル(Aldrich番号85,847−1;CAS Registry51−21−8);5−ヨードウラシル(Aldrich番号85,785−8;CAS Registry696−07−1);5−ニトロフラシル(Aldrich番号85,276−7;CAS Registry611−08−5);5−(トリフルオロメチル)−ウラシル(Aldrich番号22,327−1;CAS Registry54−20−6)が挙げられるが、これらに限定されない。追加の5−置換ウラシルは、General Intermediates of Canada, Inc.社(カリフォルニア州エドモントン)および/またはInterchim社(フランス、セデックス)から入手することができ、または標準技術を用いて調製することができる。多くの教科書が教示する適切な合成方法を以下に示す。
A−3およびA−5などのアミンは、市販業者から購入することができ、あるいは標準技術を用いて合成することができる。例えば適切なアミンを、標準的化学作用を利用してニトロ前駆体から合成することができる。例えば、Vogel, 1989, Practical Organic Chemistry, Addison Wesley Longman, Ltd. and John Wiley & Sons, Incを参照されたい。
スキーム1〜3におけるN−結合のテトラゾールを有する化合物A−5は、スキーム4に例示されたとおり調製したが、スキーム4に例示された手順に従って該化合物へ組み入れてもよい。
スキーム4
医薬組成物
表題化合物は、プロテインキナーゼC活性を阻害することが可能である。したがって表題化合物は、対象におけるPKC活性を媒介した疾患または障害を治療するのに有用である。したがって表題化合物は、対象におけるT細胞の活性化に関連する疾患または障害を治療するのに有用である。
プロテインキナーゼC
PKCは、セリン/トレオニンキナーゼとして機能する酵素のファミリーである。PKCのイソ酵素は、組織分布、酵素選択性、Ca2+の必要性、および調節において異なる。PKCは、細胞間シグナル伝達、遺伝子発現ならびに細胞の分化および増殖の制御において重要な役割を担う。
PKCθは、主に、リンパ組織および骨格筋において発現される。PKCθは、T細胞において選択的に発現され、成熟したT細胞の活性化の役割を担う。PKCθがT細胞受容体(TCR)を介したT細胞活性化に関与するが、TCRに依存した胸腺細胞の発生時には必須でないことが示されている。PKCθは、これがT細胞活性化の中核でTCRとともに局在化する、抗原特異性T細胞と抗原提示細胞(APC)との間の細胞接触の部位に移動するが、他のPKCアイソフォームはそうではない。PKCθは、FasLプロモーター−レポーター遺伝子を選択的に活性化し、内在性FasLのmRNAまたは細胞表面発現をアップレギュレートすることができるが、α、εまたはζイソ酵素はそうではない。その一方で、PKCθおよびεは、Fas誘導アポトーシスから細胞を防御することにより、T細胞の生存を促進することができ、この防御効果は、BCL−2ファミリーメンバーであるBADのp90Rskに依存したリン酸化を促進することにより媒介された。こうしてPKCθは、T細胞のアポトーシスにおいて二重の調節的役割を担うようである。
表題化合物は、治療が必要な対象において、PKC活性により媒介または悪化した疾患または障害を治療するのに有用である。また、該化合物は、対象において異常なまたはその他の望ましくないT細胞活性に関連する疾患または障害を治療するのに有用である。
以下は、該当する化合物の活性を特徴づけるのに有用となる例示的アッセイである。
1.プロテインキナーゼCアッセイ
PKC活性の阻害を、阻害剤の異なる濃度での蛍光偏光によりリン酸化ペプチドの生成をモニタリングすることにより測定した。反応は、20mMのHEPES(pH7.4)、5mMのMgCl2、0.2mMのCaCl2、1mMのDTT、0.02%のBrij−35、0.1mg/mLのホスファチジルセリン、0.02mg/mLのジオレイル−sn−グリセロールおよびATPおよびペプチド基質をそれぞれ5μMずつを含有する総容量20μLを、96ウェルプレートフォーマットで実施した。化合物を最初、DMSOで系列希釈し、その後、上記濃度のHEPES、MgCl2、CaCl2、DTT、およびBrij−35を含有する溶液に移して、2%DMSO中の5×化合物溶液を生成させ、その後、それを反応溶液に添加した。反応は、以下の表に記載される典型的濃度のPKCを添加することにより開始し、その後、室温で20分間インキュベートした。この時間の終了時に、クエンチ(EDTA)試薬と検出(ペプチドトレーサーおよび抗体)試薬との混合物を、Invitrogen P2748(カリフォルニア州カールズバッド)のプロテインキナーゼC蛍光偏光アッセイキット(Protein Kinase C Fluorescence polarization Assay Kit)のプロトコルを用いて添加した。30分間のインキュベーションの後、生成されたリン酸化ペプチドの量を、Tecan Polarian機器(スイス)を用いた蛍光偏光(Ex=485nm、Em=535nm)により測定した。
ヒト初代T細胞の単離および培養:ヒト初代T細胞を以下のとおり調製した。All Cells社製の新しいPBMC(カタログ番号PB002)を、10%FBSを含むRPMI(L−グルタミンを含むRPMI−1640、メディアテック社、バージニア州ハーダン、カタログ番号10−040−CM)に懸濁させてフラスコに播種し、37℃で2時間インキュベートして単球を接着させた。その後、非接着細胞を遠心分離して40U/mlのIL2を含有するRPMI培地に再懸濁させて、1μg/mlのαCD3および5μg/mlのαCD28(抗ヒトCD3、BD Pharmingen社のカタログ番号555336、抗ヒトCD28、ベックマン・コールター社カタログ番号IM1376)でプレコーティングされたフラスコに播種した。細胞を3〜4日間刺激し、その後、新しいフラスコに移して、10%FBSおよび40U/mLのIL−2を含むRPMI(L−グルタミンを含むRPMI−1640、メディアテック社、バージニア州ハーダン、カタログ番号10−040−CM)で保持した。
表題化合物を、以下の方法に従って異なるPKCアイソフォームへの活性に関して検査することができる。アッセイは、非結合表面を有する白色で透明底の384ウェルマイクロタイタープレートで実施した。反応混合物(25μl)は、20mMトリスHCl緩衝液(pH7.4)+0.1%BSA中に、AlaがSerに置換PKCαの偽基質配列を模倣している1.5μMトリデカペプチドアクセプター基質、10μM33のP−ATP、10mMのMg(NO3)2、0.2mMのCaCl2、タンパク質濃度が25〜400ng/ml(用いられたアイソタイプによる)で変動するPKG、最終脂質濃度0.5mMの脂質小胞(30モル%ホスファチジルセリン、5モル%DAGおよび65モル%ホスファチジルコリンを含有)を含有する。インキュベーションを、室温で60分間実施する。反応は、停止混合物(100mMのEDTA、200μMのATP、0.1%Triton X−100、Caなしのリン酸緩衝生理食塩水、Mg中のストレプトアビジンコーティングされたSPAビーズ0.375mg/ウェル)を添加することにより停止させる。室温での10分間のインキュベーションの後、懸濁液を300gで10分間遠沈させた。取り込まれた放射能を、Triluxカウンターで1分間測定する。IC50測定は、1〜1000μMの範囲内の濃度の阻害剤の系列希釈をインキュベートすることにより、日常的方法で実施する。IC50値を、XL Fit(登録商標)ソフトウエアに適合する曲線によりグラフから計算する。
ヒト組換えPKCαをオックスフォードバイオメディカルリサーチから得て、上記A.1項に記載されたアッセイ条件下で用いる。
ヒト組換えPKCβ1をオックスフォードバイオメディカルリサーチから得て、上記A.1項に記載されたアッセイ条件下で用いる。
ヒト組換えPKCδをオックスフォードバイオメディカルリサーチから得て、上記A.1項に記載されたアッセイ条件下で用いる。
ヒト組換えPKCεをオックスフォードバイオメディカルリサーチから得て、上記A.1項に記載されたアッセイ条件下で用いる。
ヒト組換えPKCηをPanVera社から得て、上記A.1項に記載されたアッセイ条件下で用いる。
ヒト組換えPKCθを、先に記載されたアッセイ条件下で用いる。
アッセイは、Baumann GらによりTransplant. Proc. 1992; 24:43-8に記載された、ルシフェラーゼ遺伝子によりβ−ガラクトシダーゼレポーター遺伝子が置換されている(de Wet J., et al., Mol. Cell. Biol. 1987, 7(2), 725-737)、ヒトインターロイキン−2プロモーター/レポーター遺伝子構築物で置換されているトランスフェクトされたジャーカット細胞で実施する。細胞を、以下のとおり固相結合抗体または酢酸ミリスチン酸ホルボール(PMA)およびCa++イオノフォアイオノマイシンにより刺激する。抗体媒介刺激については、Microlite TM1マイクロタイタープレート(ダイナテック社)は、ウェルあたり55μlのリン酸緩衝生理食塩水(PBS)中の3μg/mlヤギ抗マウスIgG抗体(ジャクソン社)で、室温で3時間コーティングする。PBS(ウェルあたり300μl)中の2%ウシ血清アルブミン(BSA)と室温で2時間インキュベートして抗体を除去した後、プレートをブロックする。ウェルあたり300μlのPBSで3回洗浄した後、50μlの2%BSA/PBS中の10ng/mlの抗T細胞受容体抗体(WT31、ベクトン・ディッキンソン社)および300ng/mlの抗CD28抗体(15E8)を刺激抗体として添加して、4℃で一晩インキュベートする。最後に、プレートをウェルあたり300μlのPBSで3回洗浄する。アッセイ培地(50μMの2−メルカプトエタノール、100単位/mlのペニシリンおよび100μg/mlのストレプトマイシンを含有するRPMI1640/ウシ胎仔血清(FCS))中で、被験化合物の3倍連続希釈物7個を2通り別個のプレートに調製し、トランスフェクトされたジャーカット細胞(クローンK22 290_H23)と混合し、5%CO2中、37℃で30分間インキュベートする。その後、細胞1×105個を含有するこの混合物100μlを、抗体被覆アッセイプレートに移す。同時に100μlを40ng/mlのPMAおよび2μMイオノマイシンと共にインキュベートする。5%CO2中、37℃での5.5時間のインキュベーションの後、ルシフェラーゼのレベルを生物発光測定により決定する。プレートを500gで10分間遠心分離し、上清をフリッキングにより除去する。25mMトリスリン酸塩(pH7.8)、2mMのDTT、2mMの1.2−ジアミノシクロヘキサン−N,N,N’,N’−四酢酸、10%(v/v)グリセロールおよび1%(v/v)Triton X−100を含有する溶解バッファーを添加する(ウェルあたり20μl)。プレートを、持続的に震盪しながら室温で10分間インキュベートする。20mMトリシン、1.07mMの(MgCO3)4Mg(OH)2・5H2O、2.67mMのMgSO4、0.1mMのEDTA、33.3mMのDTT、270μMのコエンザイムA、470μM ルシフェリン(Chemie Brunschwig AG社)、530μMのATP(pH7.8)を含むルシフェラーゼ反応緩衝液をウェルあたり50μl自動添加した後、ルシフェラーゼ活性を生物発光リーダー(Labsystem社、フィンランド、ヘルシンキ)で評価する。遅延時間は、0.5秒であり、全測定時間は、1または2秒である。低対照値は、抗T細胞受容体−またはPMA−刺激細胞からの光単位であり、高対照は、任意の検査試料を含まない抗T細胞受容体/抗CD28−またはPMA/イオノマイシン刺激細胞からのものである。低対照を、全ての値から減算する。被験化合物の存在下で得られた阻害は、高対照の%阻害として計算する。50% 阻害(IC50)を生じる被験化合物の濃度を、用量反応曲線から決定する。
CBAマウスから得た骨髄細胞(平底組織培養マイクロタイタープレートでウェルあたり細胞2.5×104個)を、10%のFCS、100U/mlのペニシリン、100μg/mlのストレプトマイシン(Gibco BRL社、スイス、バーゼル)、50tJMの2−メルカプトエタノール(Fluke社、スイス、ブックス)、増殖因子の供給源としてのWEHI−3ならしン培地(7.5%v/v)およびL929ならし培地(3%v/v)、ならびに系列希釈された化合物を含むRPMI培地100μl中でインキュベートする。被験化合物あたり、7回の3倍希釈を二重で実施する。4日のインキュベーションの後、1μCi?3H−チミジンを添加する。更なる5時間のインキュベーション時間の後、細胞を回収し、取り込まれた3H−チミジンを標準的手順に従って測定する。ならし培地を下記のとおりに調製する。WEHI−3細胞1(ATCC TIB68)およびL929細胞(ATCC CCL 1)を、RPMI培地中で、コンフルエンスになるまでそれぞれ4日間および1週間増殖させる。細胞を回収し、同じ培養フラスコ内で、WEHI−3細胞については1%FCSを含む培地C(Schreier and Tees 1981)中で、そしてL929細胞についてはRPMI培地中で再懸濁させ、2日間(WEHI−3)または1週間(L929)インキュベートする。上清を回収し、0.2μmでろ過し、分取して−80℃で貯蔵する。被験化合物を含まず、WEHI−3およびL929上清を含まない培養物を、低対照値として使用する。低対照値を全ての値から減算する。任意の試料を含まない高対照を100%増殖とする。試料による%阻害を計算し、50%阻害に必要となる濃度(IC50値)を決定する。
二方向MLRを、標準的手順に従って実施する(J. Immunol. Methods, 1973, 2, 279およびMeo T. et al., Immunological Methods, New York, Academic Press, 1979, 227-39)。簡潔に述べると、CBAおよびBALB/cマウス由来の脾臓細胞(平底組織培養マイクロタイタープレートで、ウェルあたり、各系統から細胞1.6×105個、合計3.2×105個)を、10%FCS、100U/mlのペニシリン、100μg/mlのストレプトマイシン(Gibco BRL社、スイス、バーゼル)、50μMの2−メルカプトエタノール(Fluka社、スイス、ブックス)および連続希釈化合物を含むRPMI培地中でインキュベートする。3倍希釈工程を被験化合物あた2部ずつ7回実施する。4日のインキュベーション後、1μCi3H−チミジンを添加する。更なる5時間のインキュベーション時間の後、細胞を回収し、取り込まれた3H−チミジンを標準的手順に従って測定する。MLRの背景値(低い対照値)は、BALB/c細胞のみの増殖である。低い対照値を全ての値から減算する。任意の試料を含まない高い対照値を100%増殖として採用する。試料による阻害度を計算し、50%阻害に必要となる濃度(IC50値)を決定する。
心臓移植モデル
使用した系統の組合せ:雄Lewis(RT1ハプロタイプ)およびBN(RT1ハプロタイプ)。吸入イソフルランを用いて動物を麻酔する。腹部下大静脈を通じてドナーラットをヘパリン化し、同時に大動脈を介して全採血し、開胸し、心臓を迅速に冷却する。大動脈を結紮し、最初の分岐の遠位で切断し、腕頭動脈を最初の分岐で切断する。左肺動脈を結紮切断し、切り離し、右側は切り離すが開口のままにする。全ての他の血管を切開して遊離させ、結紮し、切断し、ドナー心臓を摘出して氷冷生理食塩水中へ移す。
Wistar/Fラット由来の脾臓細胞(2×107)を、(Wistar/F×Fischer344)F1ハイブリッドラットの右後足蹠に皮下注射する。左足蹠は、未処置のままとする。動物を4日間(0日目〜3日目)連続して、被験化合物で治療する。膝窩リンパ節を7日目に取り出し、2つの対応するリンパ節の重量差を測定する。結果は、実験群のリンパ節重量差を、被験化合物で治療しなかった動物群の対応するリンパ節間の重量差と比較したリンパ節拡大の阻害(%で示す)として表す。特定の例において、被験化合物は、選択的PKC阻害剤である。例えば移植片対宿主病および関連の障害の治療に特に有用な開示化合物は、選択的PKCαおよびθ阻害剤である。
関節リウマチ(RA)は、慢性の関節炎症を特徴とし、究極的には不可逆的な軟骨破壊をきたす。IgG含有ICは、RA患者の滑膜組織に豊富に存在する。これらの複合体が疾患の病因学および病理学において担う役割については依然として討論されているが、ICはFcγRを介して造血細胞と連通している。
同系LOUラットを、0日目にネーティブII型コラーゲンで免疫化して、被験化合物の有効性を予防レジメンおよび治療レジメンにおいて評価する。予防プロトコルにおいて、媒体または様々な用量の被験化合物のいずれかを、免疫化の当日(0日目)に開始する強制経口投与により投与する。治療プロトコルにおいて、10日目の関節炎発症の臨床兆候の後、被験化合物での治療を開始し(例えば、強制経口投与で、1日4回、300mg/kg投与する)、28日目の殺処分まで継続する。両方のプロトコルにおいて、臨床スコアを毎日取得し、週2回体重を測定する。28日目に、放射線スコアを取得し、ELISAによりコラーゲンII抗体の血清レベルを測定する。
免疫化後10日目までに、ラットは臨床的CIAを発症し得、その診断は関節炎スコアの増加により下されるる。10日目以降に媒体単独で治療したラットの平均関節炎スコアは徐々に増加し、28日目までに平均臨床スコアは約6.75に達し得る。免疫化の当日(0日目)から被験化合物で治療した動物の平均臨床スコアは、媒体対照と比較して、10〜28日目に有意に減少し得る。疾患発症時に被験化合物で治療したラットでは、16日目頃に関節炎スコアが有意に低下し、この差は28日目の試験終了時まで観察し得る。
自己免疫疾患に対する被験化合物のインビボ有効性を、実験的自己免疫性脳脊髄炎(EAE)のマウスモデルにおいて実証することができる。
EAEは、CNS白質の免疫細胞浸潤により誘発されるCNSの自己免疫疾患である多発性硬化症(MS)の有用なモデルである。炎症およびそ後続ミエリン破壊は、進行性の麻痺を誘発する。ヒト疾患と同様にEAEは、ミエリンタンパク質、例えばミエリン塩基性タンパク質(MBP)、プロテオリピドタンパク脂質(PLP)、またはミエリンオリゴデンドロサイトタンパク質(MOG)に対して自己反応的であるT細胞の末梢活性化に関連する。活性化された神経抗原特異性T細胞は、血液脳関門を通過して、限局性単核細胞浸潤および脱髄を誘発する。EAEは、アジュバントと共にミエリン特異性タンパク質で免疫化することにより、感受性の高いマウス系統に導入され得る。これらの試験に用いられたSJLマウスモデルにおいて、後肢および尾の麻痺が免疫化後10日目に明らかとなり、疾患の重症度のピークは10日目〜14日目までにに観察され得、部分的な自然軽快と続く再発の周期が、35日目まで観察され得る。結果は、疾患の重症度を抑制し、免疫細胞からのFcγR媒介サイトカイン放出の結果となり得る疾患症状の再発を予防する、被験化合物の潜在能力を実証することができる。
EAEのSJLネズミモデルにおいて、各マウスにPLP/CFAを感作させる。(に、後側腹部の4部位に、0.05mlのホモジネート中200μgのCFAを含む150μgのPLP139−151を合計0.2mlのエマルジョンにして、EAEを導入)。抑制プロトコルにおいて、媒体または様々な用量の被験化合物のいずれかを、免疫化の当日(0日目)に開始する強制経口投与により投与する。治療プロトコルでは、疾患発症時に、開始時の平均臨床スコアが類似である動物同士が同じ群となるよう動物を分け、強制経口投与により、媒体または様々な投与回数の被験化合物を投与する。両方のプロトコルにおいて、毎日臨床スコアをモニタリングし、週2回体重を測定する。
PLP免疫化後10日までに、SJLマウスは臨床的EAEを発症し得、その診断は平均臨床スコアの増加により下される。麻痺スコアは、免疫化の当日(0日目)から媒体のみで治療された動物では徐々に増加し、14日目までに平均スコアが約5.1のピークに達し得る。疾患のピーク(例えば14日目)では、1日1回または1日2回治療した動物における平均臨床スコアは、有意に減少し得る。16日目までに、動物はSJLモデルの特徴である平均臨床重症度の部分的軽快を示し得る。被験化合物で1日2回治療した動物の低い臨床スコアは、動物が30日目に殺処分されるまで実験全体を通じて、有意であり続け得る。治療期間全体を通じて、これらの低いスコアは、有意に低い累積疾患指数(CDI)および有意に増加する累積体重指数(CWI)に反映される。
被験化合物はPKC活性を阻害できるため、かかる化合物は研究ツールとしても有用である。本開示はまた、生物学的システムもしくは試料を研究するためのまたはPKC活性を阻害し得る新規な化学化合物を発見するための研究ツールとして、表題化合物の使用方法を提供する。
2−クロロ−5−フルオロ−N4−(1,2,2,6,6−ペンタメチルピペリジン−4−イル)−4−ピリミジンアミン塩酸塩の合成
2−クロロ−5−フルオロ−N4−(2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−4−イル)−4−ピリミジンアミン塩酸塩の合成
5−カルボキシアミド−2,4−ジクロロピリミジンの合成
5−カルボキシアミド−2,4−ジクロロピリミジンの合成
5−カルボキシアミド−2−クロロ−N4−(1,2,2,6,6−ペンタメチルピペリジン−4−イル)−4−ピリミジンアミン塩酸塩の合成
5−カルボキシアミド−2−クロロ−N4−(1,2,2,6,6−ペンタメチルピペリジン−4−イル)−4−ピリミジンアミン遊離塩基の合成
5−シアノ−2−クロロ−N4−(2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−4−イル)−4−ピリミジンアミンの合成
5−シアノ−2クロロ−N4−(2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−4−イル)−4−ピリミジンアミンの合成
無水トリフルオロ酢酸(9.4mL;67.3mmol)を、窒素下、−78℃のTHF(40mL)中の5−カルボキシアミド−2−クロロ−N4−(2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−4−イル)−4−ピリミジンアミン(2.1g、6.7mmol)およびEt3N(11.3mL;80.8mmol)の撹拌溶液に30〜45分間かけて滴下した。完全に添加した後、混合物を−78℃で更に60分間撹拌し、その後、内部温度を−30℃未満で保持しながら、NaHCO3の飽和溶液(30mL)を滴下した。NaHCO3を完全に添加した後、EtOAc(150mL)およびH2O(100mL)を添加して、混合物を10分間撹拌した。更にH2O(200mL)を添加して、有機層と水層とに分配した。水層をEtOAc(150mL×4)で抽出した(実質的にすべての沈殿材料が溶解してしまうまで)。ひとまとめにした有機抽出物をブライン(1×50mL)で洗浄し、乾燥させて(Na2SO4)ろ過し、溶媒を真空除去して、粗固体をTFAAおよびEt3N残渣と共に残留させた。固体をEt2O(50mL)と共に研和してろ過し、生成物(2.1g)をTFA塩として生じさせた。
5−シアノ−2−クロロ−N4−(2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−4−イル)−4−ピリミジンアミンの遊離塩基の形成
5−シアノ−2−クロロ−N4−(2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−4−イル)−4−ピリミジンアミン(2.1g)のTFA生成物を、EtOAc(100mL)と0.2MのNaOH(50mL)とに分配した。有機層をブライン(50mL×1)で洗浄し、乾燥させて(Na2SO4)ろ過し、溶媒を真空除去して、生成物(1.35g、68%)を固体として残留させた。
5−シアノ−2−クロロ−N4−(1,2,2,6,6−ペンタメチルピペリジン−4−イル)−4−ピリミジンアミンの合成
無水トリフルオロ酢酸(9.35mL;67.3mmol、10当量)を、窒素下、−78℃のTHF(45mL)中の5−カルボキシアミド−2−クロロ−N4−(1,2,2,6,6−ペンタメチルピペリジン−4−イル)−4−ピリミジンアミン塩酸塩(2.19g、6.73mmol、1当量)およびEt3N(11.26mL;80.76mmol、12当量)の撹拌溶液に30〜45分間かけて滴下した。完全に添加した後、混合物を−78℃で更に60分間撹拌し、その後、内部温度を−30℃未満で保持しながら、NaHCO3の飽和溶液(30mL)を滴下した。NaHCO3を完全に添加した後、EtOAc(100mL)およびH2O(100mL)を添加して、混合物を10分間撹拌した。更にH2O(100mL)を添加して、有機層と水層とに分配した。水層をEtOAc(100mL×4)で抽出した(実質的にすべての沈殿材料が溶解してしまうまで)。ひとまとめにした有機抽出物をブライン(50mL×1)で洗浄し、乾燥させて(Na2SO4)ろ過し、溶媒を真空除去して、粗固体をTFAAおよびEt3N残渣と共に残留させた。粗固体を100mLのEtOAcに溶解し、1N水性NaOH(50mL)で分配した。酢酸エチル層を水性の50mlの1N NaOHで2回抽出した。ひとまとめにした有機抽出物をブライン(50mL×1)で洗浄し、乾燥させて(Na2SO4)ろ過し、溶媒を真空除去して、淡黄色固体(1.80g、収率87%)を生じさせた。
2−ブロモ−4−フルオロ−5−ニトロアニリンの合成
2−ブロモ−4−フルオロアニリン(47.5g、250mmol)を、内部温度を30℃未満で保持しながら、濃縮H2SO4溶液(300mL)に添加した。混合物を約30〜60分間熟成させ、その後、−20℃まで冷却した。内部温度を−15〜−20℃で保持しながら、90%HNO3(35g)を約60分間かけて滴下した。TLCで、微量の出発原料が示され、そのため90%HNO3(3g)のアリコットをさらに、−15〜−20℃で5分間かけて添加した。その後、低温混合物を氷水(約1Lの氷+500mLのH2O)およびEtOAc(1L)に注いだ。水層と有機層とに分配して、有機層を飽和NaHCO3(500mL×2)で洗浄して乾燥させ(Na2SO4)、ろ過して溶媒を真空除去して、暗色固体(35g、60%)を残留させた。
2−シクロプロピル−4−フルオロ−5−ニトロアニリンの合成
トルエン(120mL)およびH2O(40mL)中、2−ブロモ−4−フルオロ−5−ニトロアニリン(12g、51mmol)、シクロプロピルボロン酸MIDAエステル(Aldrich;20.1g、102mmol)、Pd(OAc)2(1.72g、7.7mmol)、Cy3P(4.3g、15.3mmol)、およびCs2CO3(98.8g、306mmol)の混合物を、N2で15分間脱気した。その後、混合物を100℃(オイルバスの温度)で一晩加熱した(反応混合物を加熱還流することもできる)。室温まで放冷した後、混合物をEtOAc(200mL)およびH2O(100mL)で希釈して、混合物をCeliteでろ過した。ろ過ケークをEtOAc(100mL×2)で洗浄して、ろ液を分配した。有機層を乾燥させて(Na2SO4)ろ過し、溶媒を真空除去して、粗残渣を残留させた。該残渣を、EtOAc/ヘキサン(1:4から3:7へ)を溶離液として用いたシリカゲルのカラムクロマトグラフィーにより精製して(残渣をシリカゲルにドライロード)、生成物(8.1g、81%)を暗色固体として生じさせた。
シクロプロピルトリフルオロホウ酸カリウムを用いた2−シクロプロピル−4−フルオロ−5−ニトロアニリンの合成
1)シクロプロピルトリフルオロホウ酸カリウムの2−ブロモ−4−フルオロ−5−ニトロアニリンに対する比が1:1〜1:5の範囲である;
2)Pd(OAc)2のモル%が0.1〜15の範囲である;
3)Cy3Pのモル%が0.2〜30の範囲である;
4)Cs2CO3のモル当量が2〜6の範囲である;
5)塩基としてのCs2CO3の代わりのK3PO4のまたはK3CO3の使用がモル当量で2〜6の範囲である;
6)500mgの2−ブロモ−4−フルオロ−5−ニトロアニリンの反応に対し、溶媒容量の範囲は7mlからである;
7)溶媒混合物がジオキサン/水である;
8)反応温度が60℃から還流までの範囲である;
9)反応時間が16時間から22時間の範囲である;
1−(2−シクロプロピル−4−フルオロ−5−ニトロフェニル)−1H−テトラゾールの合成
EtOAcを30〜60%の範囲で10%ずつ)を用いたシリカゲルのカラムクロマトグラフィーにより精製して、生成物(12.28g、89%)を微色固体として生じさせた。
4−シクロプロピル−2−フルオロ−5−(1H−テトラゾル−1−イル)ベンゼンアミンの合成
4−(2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−4−イルアミノ)−2−(4−シクロプロピル−2−フルオロ−5−(1H−テトラゾル−1−イル)フェニルアミノ)ピリジン−5−カルボニトリルの合成
5−フルオロ−N2−(2−フルオロ−5−(1H−テトラゾル−1−イル)フェニル)−N4−(2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−4−イル)ピリミジン−2,4−ジアミンの合成
5−フルオロ−N2−(2−フルオロ−5−(1H−テトラゾル−1−イル)フェニル)−N4−(1,2,2,6,6−ペンタメチルピペリジン−4−イル)ピリミジン−2,4−ジアミンの合成
IPA(3mL)中、2−クロロ−5−フルオロ−N−(1,2,2,6,6−ペンタメチルピペリジン−4−イル)ピリミジン−4−アミン塩酸塩(100mg、0.296mmol、1当量)、2−フルオロ−5−(1H−テトラゾル−1−イル)ベンゼンアミン(85mg、0.474mmol、1.6当量)およびTFA(100μL、1.19mmol、4当量)の混合物を、シェーカー内で100℃まで一晩加熱して融解物を得た。LCMSで、ピリミジン:生成物=5:95が示された。IPA(1mL)およびTFA(100μL、1.19mmol、4当量)を添加し、混合物をシェーカー内で100℃まで一晩加熱して融解物を得た。LCMSで、ピリミジン:生成物=2:98が示された。IPA(1mL)およびTFA(1000μL、11.9mmo、40当量)を添加し、混合物をシェーカー内で100℃まで更に5時間加熱して融解物を得た。LCMSで、生成物への完全な変換が示された。粗固体を2MのNH3/MeOH(1〜2mL)でクエンチして、DCM(3〜5mL)で希釈し、その後、シリカでパックし、DCMで充填されたカラムへロードした。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、2MのNH3/MeOHの1%増分を利用したDCM:2MのNH3/MeOH=100:0→97:3で溶出して所望の生成物(91mg、69%)を固体として提供した。
4−(2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−4−イルアミノ)−2−(4−シクロプロピル−2−フルオロ−5−(1H−テトラゾル−1−イル)フェニルアミノ)ピリミジン−5−カルボキサミドの合成
IPA(6mL)中、4−(2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−4−イルアミノ)−2−クロロピリミジン−5−カルボキサミド(178mg、0.570mmol、1当量)、4−シクロプロピル−2−フルオロ−5−(1H−テトラゾル−1−イル)ベンゼンアミン(150mg、0.684mmol、1.2当量)およびPTSA一水和物(230mg、1.20mmol、2.1当量)の混合物を、100℃まで一晩加熱して沈殿物を生じさせた。沈殿物を真空ろ過により回収して、IPAですすいだ。固体をEtOAc中に取り出し、その後、1N NaOHで約pH12〜14に調整した。水層および有機層に分配された。水層をEtOAc(150mL×2)で抽出した。ひとまとめにした有機物を1N NaOH(150mL×1)で洗浄し、乾燥させて(Na2SO4)、ろ過して濃縮し、所望の生成物(128mg、50%)を固体として生じさせた。
N2−(4−シクロプロピル−2−フルオロ−5−(1H−テトラゾル−1−イル)フェニル)−5−フルオロ−N4−(2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−4−イル)ピリミジン−2,4−ジアミン1.5ギ酸の合成
4,6−ジニトロ−2−フルオロフェノールの合成
0℃の無水DCM中の2−フルオロフェノール(10mL、12.1g、108mmol、1当量)に、90%HNO3(12.6mL、17.0g、270mmol、2.5当量)を滴下した。混合物を室温まで昇温させて2時間撹拌し、再度0℃まで冷却して、2N NaOH溶液(約80mL)でpH5までクエンチした。混合物を濃縮して水で希釈し、EtOAc(150mL×3)で抽出した。ひとまとめにした有機層をMgSO4で脱水し、ろ過して濃縮した。残渣をヘキサン中で研和して、生成物(18g、82%)を黄色固体として生じさせた。
2−ブロモ−1,5−ジニトロ−3−フルオロベンゼンの合成
DMF(24mL)およびトルエン(160mL)中の4,6−ジニトロ−2−フルオロフェノール(8g、39.60mmol、1当量)の溶液に、PBr3(5.6mL、59.40mmol、1.5当量)を室温で添加した。その後、反応混合物を110℃で1時間加熱した。室温まで放冷した後、上部の無色層を分液漏斗に注ぎ、ヘキサンで希釈した。有機層を水で洗浄して、MgSO4で脱水して、蒸発乾固し、生成物(10.3g、98%)を黄色固体として生じさせた。
2−ブロモ−3−フルオロ−5−ニトロアニリンおよび4−ブロモ−3−フルオロ−5−ニトロアニリンの合成
HOAc 3mL中の2−ブロモ−1,5−ジニトロ−3−フルオロベンゼン(100mg、0.38mmol、1当量)および粉末鉄(64mg、1.14mmol、3当量)の混合物を、室温で90分間撹拌した。反応混合物をEtOAc(20mL)および飽和NaHCO3(約pH7〜8)で希釈した。有機層を分離して、真空蒸発させた。粗残渣を、EtOAc/ヘキサン(1:4)を溶離液として用いたシリカゲルのクロマトグラフィーにより精製して、47mgの2−ブロモ−3−フルオロ−5−ニトロアニリン(52%)を生じさせた。
2−シクロプロピル−3−フルオロ−5−ニトロアニリンの合成
トルエン(70mL)およびH2O(14mL)中の2−ブロモ−3−フルオロ−5−ニトロアニリン(16g、6.81mmol、1当量)、シクロプロピルボロン酸MIDAエステル(Aldrich;4.0g、20.43mmol、3当量)、Pd(OAc)2(238mg、1.06mmol、0.15当量)、Cy3P(578mg、2.06mmol、0.3当量)およびCs2CO3(13.26g、40.8mmol、6当量)の混合物を、N2で5分間脱気した。その後、混合物を100℃(オイルバスの温度)で一晩加熱した。室温まで放冷した後、混合物をEtOAc(100mL)およびH2O(50mL)で希釈して、混合物をCeliteでろ過した。ろ過ケークをEtOAc(50mL×2)で洗浄して、ろ液を分配した。有機層を真空蒸発させて粗残渣を残留させ、EtOAc/ヘキサン(1:4)を溶離液として用いたシリカゲルのカラムクロマトグラフィーにより精製して、生成物(1.2g、90%)を暗黄色固体として生じさせた。
1−(2−シクロプロピル−3−フルオロ−5−ニトロフェニル)−1H−テトラゾールの合成
4−シクロプロピル−3−フルオロ−5−(1H−テトラゾル−1−イル)ベンゼンアミンの合成
丸底フラスコに、1−(2−シクロプロピル−3−フルオロ−5−ニトロフェニル)−1H−テトラゾール(288mg、1.16mmol)、EtOH(12mL)、および10%Pd/C(水中に50%、Degussa type E101;246mg、出発ニトロ化合物85重量%)を充填して、懸濁液を作成した。フラスコをゴム栓で密閉して脱気し、H2を充填されたバルーンからH2(×3)を詰め戻した。反応物を、H2を充填されたバルーンを用いて1時間撹拌した。LCMS分析で、シクロプロピル部分がイソプロピルに4%切断されたことが示された。反応混合物をCeliteのパッドでろ過して、CeliteのパッドをDCM/MeOHですすいだ(1:9、100mL)。ろ液を蒸発乾固した(シリカゲルをこの段階で添加して、粗生成物をシリカゲル上に直接吸収させた)。粗生成物をEtOAc/ヘキサン(EtOAcを50〜60%の範囲で10%ずつ)を用いたシリカゲルのカラムクロマトグラフィーにより精製して、生成物4−シクロプロピル−3−フルオロ−5−(1H−テトラゾル−1−イル)ベンゼンアミン(234mg、92%)を淡褐色固体として生じさせた。
4−(2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−4−イルアミノ)−2−(4−シクロプロピル−3−フルオロ−5−(1H−テトラゾル−1−イル)フェニルアミノ)ピリミジン−5−カルボニトリルの合成
IPA(2.5mL)中の4−(2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−4−イルアミノ)−2−クロロピリミジン−5−カルボニトリル(72mg、0.243mmol、1当量)、4−シクロプロピル−3−フルオロ−5−(1H−テトラゾル−1−イル)ベンゼンアミン(64mg、0.292mmol、1.2当量)、およびPTSA一水和物(37mg、0.195mmol、0.8当量)の混合物を、50℃まで4時間加熱した。周囲温度まで冷却した後、粗混合物を2MのNH3/MeOHでクエンチし、その後、濃縮乾固して、それを1回繰り返した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、DCM:2MのNH3/MeOH(2MのNH3/MeOHの1%増分を利用して100:0から96:4へ)で溶出して所望の生成物を提供し、IPA/ヘキサンで再結晶化させて表題化合物(61mg、53%)を固体として生じさせた。
(R941368)N2−(4−シクロプロピル−3−フルオロ−5−(1H−テトラゾル−1−イル)フェニル)−5−フルオロ−N4−(2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−4−イル)ピリミジン−2,4−ジアミンの合成
IPA(2mL)中の2−クロロ−5−フルオロ−N−(2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−4−イル)ピリミジン−4−アミン塩酸塩(72mg、0.190mmol、1当量)、4−シクロプロピル−3−フルオロ−5−(1H−テトラゾル−1−イル)ベンゼンアミン(50mg、0.228mmol、1.2当量)およびPTSA一水和物(30mg、0.152mmol、0.8当量)の混合物を、70℃まで3日間加熱した。LCMSで、切断されたテトラゾール生成物2〜4%が示された。周囲温度まで冷却した後、粗混合物を2MのNH3/MeOHでクエンチし、その後、濃縮乾固して、それを1回繰り返した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、DCM:2MのNH3/MeOH(2MのNH3/MeOHの1%増分を利用して100:0から96:4へ)で溶出して所望の生成物を提供し、IPA/ヘキサンで再結晶化させて表題化合物(58mg、65%)を固体として生じさせた。
1−ブロモ−2−フルオロ−3,5−ジニトロベンゼンの合成
3−ブロモ−2−フルオロ−5−ニトロベンゼンアミンの合成
室温(水浴を使用)の酢酸(200mL)中の1−ブロモ−2−フルオロ−3,5−ジニトロベンゼン(5.4g、20.38mmol、1当量)の溶液に、粉末鉄(5.70g、102mmol、5当量)を少しずつ添加した。混合物を30℃未満の温度で保持しながら、得られた溶液を3時間撹拌した。LCMSで、3種の生成物:3−ブロモ−2−フルオロ−5−ニトロベンゼンアミン−F3(86%)、3−ブロモ−4−フルオロ−5−ニトロベンゼンアミン−F2(5%)、および5−ブロモ−4−フルオロベンゼン−1,3−ジアミン−F1(9%)の形成が示された。[注:この実験が完了した後、位置異性体を同定するために、3−ブロモ−2−フルオロ5−ニトロベンゼンアミンをジアゾ化して脱アミノ化し(E.S. Adams and K. L. Rinehart. The Journal of Antibiotics 1994, 47 (12), 1456-1465参照)、3−ブロモ−4−フルオロニトロベンゼンを生じさせた。これを、市販業者業者から得られた信頼できる試料と比較した]。DCMを混合物に添加して、得られた混合物をCeliteのパッドでろ過して、CeliteのパッドをMeOHですすいだ。ろ液を蒸発乾固した。残渣を2MのNH3/MeOHでクエンチし、その後、濃縮乾固して、これを1回繰り返した(シリカゲルをこの段階で添加して、粗生成物をシリカゲル上に直接吸収させた)。粗生成物をDCMを用いたシリカゲルのカラムクロマトグラフィーにより精製して、所望の生成物3−ブロモ−2−フルオロ−5−ニトロベンゼンアミン(TCLではF1;1.87g、39%)を黄色固体として生じさせた。
3−シクロプロピル−2−フルオロ−5−ニトロアニリンの合成
トルエン/H2O(5:1;450mL:90mL)と、続くPd(OAc)2(0.420g、1.87mmol、0.20当量)の中の3−ブロモ−2−フルオロ−5−ニトロアニリン(2.20g、9.36mmol、1当量)、シクロプロピルボロン酸MIDAエステル(Aldrich;11.07g、56.17mmol、6当量)、Cy3P(1.05g、3.74mmol、0.4当量)、Cs2CO3(54.90g、168.50mmol、18当量)の混合物を、真空下の音波処理により10分間脱気して、N2を詰め戻した)。その後、混合物を100℃で一晩加熱した。室温まで放冷した後、混合物を濃縮乾固した。残渣をDCM中に取り出し、この段階でシリカゲルを添加して、残渣をシリカゲルに直接吸収させた。溶媒を真空除去した後、粗生成物をDCMを用いたシリカゲルのカラムクロマトグラフィーにより精製して、生成物3−シクロプロピル−2−フルオロ−5−ニトロアニリン(1.27g、69%)を黄色固体として生じさせた。
1−(3−シクロプロピル−2−フルオロ−5−ニトロフェニル)−1H−テトラゾールの合成
3−シクロプロピル−4−フルオロ−5−(1H−テトラゾル−1−イル)ベンゼンアミンの合成
4−(2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−4−イルアミノ)−2−(3−シクロプロピル−4−フルオロ−5−(1H−テトラゾル−1−イル)フェニルアミノ)ピリミジン−5−カルボニトリルの合成
IPA(4mL)中の4−(2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−4−イルアミノ)−2−クロロピリミジン−5−カルボニトリル(112mg、0.380mmol、1当量)、3−シクロプロピル−4−フルオロ−5−(1H−テトラゾル−1−イル)ベンゼンアミン(100mg、0.456mmol、1.2当量)、およびPTSA一水和物(58mg、0.304mmol、0.8当量)の混合物を、60℃まで5日間加熱した。周囲温度まで冷却した後、粗混合物を濃縮乾固した。残渣を氷冷水およびEtOAc中に取り出し、その後1N NaOHで約pH12〜14に調整した。水層および有機層に分配し、水層をEtOAc(150mL×1)で抽出した。ひとまとめにした有機抽出物を乾燥させて(Na2SO4)ろ過し、溶媒を真空除去した。粗生成物を、水およびアセトニトリル(TFA中で不安定な化合物)中の改質剤としての0.1%ギ酸を用いた逆相HPLCによる精製のために、分析部門に提出した。ギ酸塩としての生成物を氷冷水およびEtOAc中に取り出し、その後1N NaOHで約pH12〜14に調整した。水層および有機層に分配し、水層をEtOAc(150mL×2)で抽出した。ひとまとめにした有機抽出物を乾燥させて(Na2SO4)ろ過し、濃縮して、所望の化合物(63mg、35%)を固体として生じさせた。
N2−(3−シクロプロピル−4−フルオロ−5−(1H−テトラゾル−1−イル)フェニル)−5−フルオロ−N4−(2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−4−イル)ピリミジン−2,4−ジアミンの合成
IPA(8mL)中の2−クロロ−5−フルオロ−N−(2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−4−イル)ピリミジン−4−アミン塩酸塩(246mg、0.760mmol、1当量)、3−シクロプロピル−4−フルオロ−5−(1H−テトラゾル−1−イル)ベンゼンアミン(200mg、0.912mmol、1.2当量)、およびPTSA一水和物(116mg、0.608mmol、0.8当量)の混合物を、3日間70℃まで加熱した。LCMSで、切断されたテトラゾール生成物2〜4%が示された。周囲温度まで冷却した後、粗混合物を2MのNH3/MeOHでクエンチし、その後、濃縮乾固して、それを2回繰り返した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、2MのNH3/MeOHの1%増分を利用したDCM:2MのNH3/MeOH=100:0→96:4で溶出して所望の生成物を提供し、IPA/ヘキサンで再結晶化させて表題化合物(154mg、43%)を固体として生じさせた。
4−フルオロ−5−ニトロ−2−(プロパ−1−エン−2−イル)ベンゼンアミンの合成
2−フルオロ−4−イソプロピル−5−(1H−テトラゾル−1−イル)ベンゼンアミンの合成
注意:TMS−N3およびテトラゾール生成物は潜在的に爆発性である。この反応ではブラストシールドを用い、傷、ひびなどのないガラス製品を用いること。金属製スパチュラなどの金属との接触を避けること。カラムから得た残留溶媒により生成物のわずかな湿潤を保持すること。
Parr容器に、1−(2−イソプロペニル−4−フルオロ−5−ニトロフェニル)−1H−テトラゾール(0.100mg、4.0mmol)、EtOH(25mL)、AcOH(1mL)、および10%Pd/C(水中に50%、Degussa type E101;0.050g、出発ニトロ化合物50重量%)を充填して、懸濁液を作成した。容器を密閉して脱気し、H2(×3)を詰め戻した。その後、容器に60psiのH2を充填して、LCMS分析で完全な変換が示されるまで震盪させた。反応混合物をCeliteのパッドでろ過して、CeliteのパッドをDCM/MeOHですすいだ(1:9、50mL)。ろ液を蒸発乾固した。粗生成物をEtOAc/ヘキサン(EtOAcを25〜50%の範囲で5%ずつ)を用いたシリカゲルのカラムクロマトグラフィーにより精製して、生成物4−イソプロピル−2−フルオロ−5−(1H−テトラゾル−1−イル)ベンゼンアミン(0.075g、85%)を褐色固体として生じさせる。
4−(2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−4−イルアミノ)−2−(2−フルオロ−4−イソプロピル−2−フルオロ−5−(1H−テトラゾル−1−イル)フェニルアミノ)ピリジン−5−カルボニトリルの合成
IPA(5mL)中の2−クロロ−5−シアノ−N−(2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−4−イル)ピリミジン−4−アミン(0.05g、0.17mmol、1当量)、4−イソプロピル−2−フルオロ−5−(1H−テトラゾル−1−イル)ベンゼンアミン(0.045g、0.204mmol、1.2当量)、およびp−トルエンスルホン酸一水和物(0.025g、0.136mmol、0.8当量)の混合物を、80℃まで一晩加熱した。LCMSにより、所望の生成物に加えて、およそ10%の5−フルオロ−2−イソプロポキシ−N−(2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−4−イル)ピリミジン−4−アミン副生成物が示された。周囲温度まで冷却した後、粗混合物を2MのNH3/MeOHでクエンチし、その後、濃縮乾固して、それを1回繰り返した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、DCM:2MのNH3/MeOH(2MのNH3/MeOHの1%増分を利用して100:0から95:5へ)で溶出して所望の生成物を提供し、DCM/IPAで再結晶化させて表題化合物(45mg、55%)を固体として生じさせた。
2−シクロプロピル−5−ニトロベンゼンアミンの合成
1−(2−シクロプロピル−5−ニトロフェニル)−5−(トリフルオロメチル)−1H−テトラゾールの合成
25mLのCCl4中のCF3CO2H(0.98mL、12.65mmol、0.9当量)、PPh3(9.21g、35.13mmol、2.5当量)およびEt3N(1.96mL、14.05mmol、1.0当量)の混合物を、0℃で10分間撹拌した。2−シクロプロピル−5−ニトロベンゼンアミン(2.50g、14.05mmol、1.0当量)を、その後、反応混合物に添加して、混合物を12時間還流加熱した。溶媒を減圧除去し、残渣をn−ヘキサン:酢酸エチル(10:1)で溶出するカラムクロマトグラフィーにより精製して、半純粋形態の(Z)−N−(1−クロロ−2,2,2−トリフルオロエチリデン)−2−シクロプロピル−5−ニトロベンゼンアミン中間体を淡黄色固体として生じさせた。この化合物は、これ以上精製せずに次のステップに取り入れた。
15mLの無水アセトニトリル中のNaN3(0.56g、8.57mmol、2.5当量)および(Z)−N−(1−クロロ−2,2,2−トリフルオロエチリデン)−2−シクロプロピル−5−ニトロベンゼンアミン中間体(1.0g、3.43mmol、1.0当量)の混合物を、室温で16時間撹拌した。反応混合物を氷冷した水性Na2CO3溶液に注いで、酢酸エチルで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で脱水してろ過し、真空濃縮した。得られた粗混合物をn−ヘキサン:酢酸エチル(EtOAcを10〜50%の範囲で10%ずつ)で溶出するカラムクロマトグラフィーにより精製して、所望の生成物を全体的収率37%(1.55g)で生じさせた。
4−シクロプロピル−3−(5−(トリフルオロメチル)−1H−テトラゾール−1−イル)ベンゼンアミンの合成
EtOH/H2O(3:1)中のニトロ化合物(0.25g、0.836mmol、1.0当量)、Fe(0.140g、2.51mmol、3.0当量)およびNH4Cl(0.134g、2.51mmol、3.0当量)の混合物を、1時間還流した。反応混合物をCeliteパッドでろ過して、溶媒を減圧除去した。粗反応混合物をn−ヘキサン:酢酸エチル(EtOAcを10〜70%の範囲で10%ずつ)で溶出するカラムクロマトグラフィーにより精製して、必要な生成物を収率78%(0.18g)で生じさせた。
N2−(4−シクロプロピル−3−(5−(トリフルオロメチル)−1H−テトラゾール−1−イル)フェニル)−5−フルオロ−N4−(2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−4−イル)ピリミジン−2,4−ジアミンの合成
IPA(10mL)中の2−クロロ−5−フルオロ−N−(2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−4−イル)ピリミジン−4−アミン塩酸塩(0.210g、0.65mmol、1当量)、4−シクロプロピル−5−(1−トリフルオロメチル−テトラゾル−1−イル)ベンゼンアミン(0.245g、0.910mmol、1.4当量)、およびp−トルエンスルホン酸一水和物(0.099g、0.520mmol、0.8当量)の混合物を、100℃まで一晩加熱した。周囲温度まで冷却した後、粗混合物を2MのNH3/MeOHでクエンチし、その後、濃縮乾固して、それを1回繰り返した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、DCM:2MのNH3/MeOH(2MのNH3/MeOHの1%増分を利用して100:0から95:5へ)で溶出して所望の生成物を提供し、DCM/IPAで再結晶化させて表題化合物(0.18g、収率53%)を固体として生じさせた。
N2−(4−シクロプロピル−2−フルオロ−5−(1H−テトラゾール−1−イル)フェニル)−5−フルオロ−N4−(1,2,2,6,6−ペンタメチルピペリジン−4−イル)ピリミジン−2,4−ジアミンの合成
IPA(15mL)中の2−クロロ−5−フルオロ−N−(1,2,2,6,6−ペンタメチルピペリジン−4−イル)ピリミジン−4−アミン塩酸塩(0.196g、0.58mmol、1当量)、4−シクロプロピル−2−フルオロ−5−(1H−テトラゾル−1−イル)ベンゼンアミン(0.140g、0.64mmol、1.1当量)、およびp−トルエンスルホン酸一水和物(0.090g、0.47mmol、0.8当量)の混合物を、100℃まで一晩加熱した。周囲温度まで冷却した後、粗混合物を2MのNH3/MeOHでクエンチし、その後、濃縮乾固して、それを1回繰り返した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、DCM:2MのNH3/MeOH(2MのNH3/MeOHの1%増分を利用して100:0から95:5へ)で溶出して所望の生成物を提供し、DCM/ヘキサンで研和して表題化合物(0.100g、収率36%)を固体として生じさせた。
4−(1,2,2,6,6−ペンタメチルピペリジン−4−イルアミノ)−2−(4−シクロプロピル−2−フルオロ−5(1H−テトラゾール−1−イル)フェニルアミノ)ピリミジン−5−カルボニトリルの合成
IPA(25mL)中の2−クロロ−5−シアノ−N−(1,2,2,6,6−ペンタメチルピペリジン−4−イル)ピリミジン−4−アミン(0.205g、0.66mmol、1当量)、4−シクロプロピル−2−フルオロ−5−(1H−テトラゾル−1−イル)ベンゼンアミン(0.160g、0.730mmol、1.1当量)、およびp−トルエンスルホン酸一水和物(0.100g、0.530mmol、0.8当量)の混合物を、100℃まで一晩加熱した。周囲温度まで冷却した後、粗混合物を2MのNH3/MeOHでクエンチし、その後、濃縮乾固して、それを1回繰り返した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、DCM:2MのNH3/MeOH(2MのNH3/MeOHの2%増分を利用して100:0から95:5へ)で溶出して所望の生成物を提供し、DCM/ヘキサンで再結晶化させて表題化合物(0.170g、収率52%)を固体として生じさせた。
2−イソプロピル−5−ニトロアニリンの合成
70% HNO3(5.1mL、84.76mmol、1.2当量)を、0℃の濃硫酸70mL中の2−イソプロピルアニリン(10mL、9.55g、70.63mmol、1当量)の混合物に滴下した。反応混合物をこの温度で30分間撹拌し、その後、氷に注いだ。水性混合物をEtOAc(150mL×2)で抽出した。有機層をひとまとめにして、飽和NaHCO3で洗浄した。蒸発後に、残渣をEtOAc/ヘキサン(3/7)を用いたシリカゲルのカラムクロマトグラフィーにより精製して、生成物2g(16%)を暗赤色油状物として生じさせた。
1−(2−イソプロピル−5−ニトロフェニル)−1H−テトラゾールの合成
4−イソプロピル−3−(1H−テトラゾル−1−イル)ベンゼンアミンの合成
N2−(4−イソプロピル−3−(1H−テトラゾル−1−イル)フェニル)−5−フルオロ−N4−(2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−4−イル)ピリミジン−2,4−ジアミン(R952799)の合成
IPA(3mL)中の2−クロロ−5−フルオロ−N−(2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−4−イル)ピリミジン−4−アミン塩酸塩(160mg、0.495mmol、1当量)、4−イソプロピル−3−(1H−テトラゾル−1−イル)ベンゼンアミン(121mg、0.594mmol、1.2当量)、およびp−トルエンスルホン酸一水和物(75mg、0.396mmol、0.8当量)の混合物を、100℃まで3時間加熱した。周囲温度まで冷却した後、粗混合物を2MのNH3/MeOHでクエンチし、その後、濃縮乾固した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、DCM:2MのNH3/MeOH(95:5)で溶出して、所望の生成物(120mg、54%)を白色固体として生じさせた。
2−(4−イソプロピル−3−(1H−テトラゾル−1−イル)フェニルアミノ)−4−(2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−4−イルアミノ)ピリミジノ−5−カルボキシアミドの合成
IPA(3mL)中の2−クロロ−4−(2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−4−イルアミノ)ピリミジノ−5−カルボキシアミド(160mg、0.513mmol、1当量)、4−イソプロピル−3−(1H−テトラゾル−1−イル)ベンゼンアミン(125mg、0.616mmol、1.2当量)、およびp−トルエンスルホン酸一水和物(78mg、0.410mmol、0.8当量)の混合物を、100℃まで3時間加熱した。固体をろ過し、IPAで洗浄して、1N NaOHで音波処理した。得られた固体をろ過し、水で洗浄し乾燥させて、表題化合物(200mg、81%)を微白色固体として生じさせた。
2−(4−イソプロピル−3−(1H−テトラゾル−1−イル)フェニルアミノ)−4−(2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−4−イルアミノ)ピリミジノ−5−カルボニトリルの合成
IPA(2mL)中の4−(2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−4−イルアミノ)−2−クロロピリミジン−5−カルボニトリル(80mg、0.272mmol、1当量)、4−イソプロピル−3−(1H−テトラゾル−1−イル)ベンゼンアミン(66mg、0.326mmol、1.2当量)、およびp−トルエンスルホン酸一水和物(41mg、0.218mmol、0.8当量)の混合物を、80℃まで3時間加熱した。周囲温度まで冷却した後、粗混合物を2MのNH3/MeOHでクエンチし、その後、濃縮乾固した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、DCM:2MのNH3/MeOH(95:5)で溶出して、所望の生成物(87mg、70%)を白色固体として生じさせた。
N−(2−シクロプロピル−4−フルオロ−5−ニトロフェニル)イソブチルアミドの合成
室温のジクロロメタン(50mL)中の2−シクロプロピル−4−フルオロ−5−ニトロベンゼンアミン(国際公開第2011068898号に記載)(1.98g、10.09mmol、1当量)の溶液に、NaHCO3(7.65g、90.84mmol、9当量)を、続いて塩化2−メチルプロパノイル(6.34mL、60.56mmol、6当量)を添加した。反応混合物を一晩撹拌した。反応混合物を水に取り出し、層を分離させた。有機層を氷冷1N NaOHで2回、ブラインで1回洗浄し、Na2SO4で脱水して、濃縮乾固した。粗生成物をシリカゲルに吸収させて、フラッシュクロマトグラフィーにより精製し、EtOAcの10%増分を利用したヘキサン:EtOAc=100:0→50〜70%で溶出して、N−(2−シクロプロピル−4−フルオロ−5−ニトロフェニル)イソブチルアミド(2.04g、84%)を淡褐色固体として得た。
N−(2−シクロプロピル−4−フルオロ−5−ニトロフェニル)シクロプロパンカルボキサミドの合成
実施例51に記載された一般的手順に従った。N−(2−シクロプロピル−4−フルオロ−5−ニトロフェニル)シクロプロパンカルボキサミド(2.46g、92%)を、2−シクロプロピル−4−フルオロ−5−ニトロベンゼンアミン(国際公開第2011068898号に記載)および塩化シクロプロパンカルボキシルから得た。
N−(2−シクロプロピル−4−フルオロ−5−ニトロフェニル)アセトアミドの合成
実施例51に記載された一般的手順に従った。N−(2−シクロプロピル−4−フルオロ−5−ニトロフェニル)アセトアミド(2.04g、84%)を、2−シクロプロピル−4−フルオロ−5−ニトロベンゼンアミン(国際公開第2011068898号に記載)および塩化アセチルから得た。
1−(2−シクロプロピル−4−フルオロ−5−ニトロフェニル)−5−イソプロピル−1H−テトラゾールの合成
N−(2−シクロプロピル−4−フルオロ−5−ニトロフェニル)イソブチルアミド(1.90g、7.14mmol、1当量)を、アルゴン下でアセトニトリル(40mL)に溶解して、−5℃(外部温度)に冷却した。温度を−5℃で保持しながら、無水トリフルオロメタンスルホン酸(2.40mL、4.03g、14.27mmol、2当量)を緩やかに滴下して、1〜2分間撹拌した。その後、温度を−5℃で保持しながら、アジ化トリメチルシリル(3.75mL、28.54mmol、4当量)を緩やかに滴下した。TCL、LCMSで、反応が1分未満で完了することが示された。温度を−5℃で保持しながら、反応物を氷冷飽和NaHCO3で緩やかにクエンチして、EtOAcで希釈した。層を分離して、有機層をブラインで1回洗浄し、Na2SO4で脱水して、濃縮乾固した。粗生成物をシリカゲルに吸収させてフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、EtOAcの5%増分を利用してヘキサン:EtOAc=100:0→EtOAc25〜30%で溶出して、1−(2−シクロプロピル−4−フルオロ−5−ニトロフェニル)−5−イソプロピル−1H−テトラゾール(1.69g、78%)を黄色固体として得た。
5−シクロプロピル−1−(2−シクロプロピル−4−フルオロ−5−ニトロフェニル)−1H−テトラゾールの合成
実施例54に記載された一般的手順に従った。N−(2−シクロプロピル−4−フルオロ−5−ニトロフェニル)シクロプロパンカルボキサミドを−20℃で、1時間反応させ、5−シクロプロピル−1−(2−シクロプロピル−4−フルオロ−5−ニトロフェニル)−1H−テトラゾール(2.14g、89%)を得た。
1−(2−シクロプロピル−4−フルオロ−5−ニトロフェニル)−5−メチル−1H−テトラゾールの合成
実施例54に記載された一般的手順に従った。N−(2−シクロプロピル−4−フルオロ−5−ニトロフェニル)アセトアミドを−78℃〜室温で一晩中反応させ、1−(2−シクロプロピル−4−フルオロ−5−ニトロフェニル)−5−メチル−1H−テトラゾール(1.95g、92%)を得た。
4−シクロプロピル−2−フルオロ−5−(5−イソプロピル−1H−テトラゾル−1−イル)ベンゼンアミンの合成
Parr容器に1−(2−シクロプロピル−4−フルオロ−5−ニトロフェニル)−5−イソプロピル−1H−テトラゾール(1.69g、5.80mmol)、EtOH(60mL)、AcOH(900μL)、および10%Pd/C(水中に50%、Degussa type E101;340mg、出発ニトロ化合物20重量%)を充填して、懸濁液を作成した。容器を密閉して脱気し、H2(×3)を詰め戻した。その後、容器に30psiのH2を充填して、LCMS分析が変換を示すようになるまで震盪させた。この反応では、LCMS分析で2日目に変換が示された。反応混合物をCeliteのパッドでろ過して、CeliteのパッドをMeOHですすいだ。ろ液を蒸発乾固した。粗生成物をEtOAcとH2Oとで分配して、3N NaOHで約pH12〜14に調整した。水層と有機層に分配して、有機層を3N NaOHで1回洗浄した。水層をEtOAcで3回抽出した。ひとまとめにした有機抽出物を乾燥させて(Na2SO4)ろ過し、溶媒を真空除去して、4−シクロプロピル−2−フルオロ−5−(5−イソプロピル−1H−テトラゾル−1−イル)ベンゼンアミン(1.08g、71%)をオフホワイト色の固体として生じさせた。
4−シクロプロピル−5−(5−シクロプロピル−1H−テトラゾル−1−イル)−2−フルオロベンゼンアミンの合成
実施例57に記載された一般的手順に従った。5−シクロプロピル−1−(2−シクロプロピル−4−フルオロ−5−ニトロフェニル)−1H−テトラゾールを2時間反応させ、4−シクロプロピル−5−(5−シクロプロピル−1H−テトラゾル−1−イル)−2−フルオロベンゼンアミン(205mg、97%)を得た。
4−シクロプロピル−2−フルオロ−5−(5−メチル−1H−テトラゾル−1−イル)−2−ベンゼンアミンの合成
実施例57に記載された一般的手順に従った。1−(2−シクロプロピル−4−フルオロ−5−ニトロフェニル)−5−メチル−1H−テトラゾールを5時間反応させて、4−シクロプロピル−2−フルオロ−5−(5−メチル−1H−テトラゾル−1−イル)ベンゼンアミン(1.68g、97%)を得た。
N2−(4−シクロプロピル−2−フルオロ−5−(5−イソプロピル−1H−テトラゾル−1−イル)フェニル)−5−フルオロ−N4−(2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−4−イル)ピリミジン−2,4−ジアミンの合成
N2−(4−シクロプロピル−5−(5−シクロプロピル−1H−テトラゾル−1−イル)−2−フルオロフェニル)−5−フルオロ−N4−(2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−4−イル)ピリミジン−2,4−ジアミンの合成
N2−(4−シクロプロピル−2−フルオロ−5−(5−メチル−1H−テトラゾル−1−イル)フェニル)−5−フルオロ−N4−(2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−4−イル)ピリミジン−2,4−ジアミンの合成
N2−(4−シクロプロピル−2−フルオロ−5−(5−トリフルオロメチル)−1H−テトラゾル−1−イル)フェニル)−5−フルオロ−N4−(2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−4−イル)ピリミジン−2,4−ジアミンの合成
N2−(4−シクロプロピル−2−フルオロ−5−(5−トリフルオロメチル)−1H−テトラゾル−1−イル)フェニル)−5−フルオロ−N4−(2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−4−イル)ピリミジン−2,4−ジアミンの合成
実施例51に記載された一般的手順に従ったが、最後の還元ステップは実施例41の条件で実施した。
trans−2−(トリフルオロメチル)シクロプロピルボロン酸MIDAエステルの調製
水(10mL)中の亜硝酸ナトリウム(4.6g、66mmol)を、0℃の水(25mL)およびエーテル(45mL)中の2,2,2−トリフルオロエチルアミン塩酸塩(8.1g、60mmol)の撹拌溶液に一度に添加した。反応容器をテフロンストッパーで密閉し、混合物を0℃〜室温で撹拌し、室温でおよそ3時間撹拌した。その後、混合物を分液ロートで分配して、生成物を含有するエーテル層をこれ以上精製せずに次のステップで直接使用した。トリフルオロメチルジアゾメタン生成物の収率は、本明細書の引用文献(=3.32g)に基づいておよそ50%であると仮定した。
ステップ2:trans−2−(トリフルオロメチル)シクロプロピルボロン酸MIDAエステルの調製
Et2O(45mL)中のトリフルオロメチルジアゾメタン(3.32g、30mmol)の混合物を、室温のEt2O中のビニルボロン酸MIDAエステル(Sigma−Aldrich社、ミズーリ州セントルイス;1.65g、9.0mmol)およびPd(OAc)2(50mg)の撹拌された懸濁液に滴下した。10分間添加した後(トリフルオロメチルジアゾメタンの約1/4がこの段階で添加されている)、更なるPd(OAc)2(50mg)およびEt2O(100mL)を添加して、トリフルオロメチルジアゾメタンを更に20分間滴下した(この時間の後、およそ3/4が添加された)。EtOAc(50mL)およびPd(OAc)2(50mg)をこの時点で添加して、残りのトリフルオロメチルジアゾメタンを10分間かけて滴下した。トリフルオロメチルジアゾメタンの完全な添加の後、混合物をTLCにより分析して、完全に反応したことが示された。溶媒を真空除去し、残渣をシリカゲルにドライロードして、EtOAcを溶離液として用いたシリカゲルのカラムクロマトグラフィーにより精製して、生成物(1.45g、61%)を固体として生じさせた。試料をEtOAcから再結晶化させ、その後、1,2−ジクロロエタンから再度少量を再結晶化させて、x線結晶学による分析に適した結晶を生じさせた。示されたx線試験から、該材料がtrans−異性体であることが確認された。注:生成物はtrans異性体であるがラセミ体である。
trans−4−フルオロ−2−(2−トリフルオロメチル)シクロプロピル)−5−ニトロベンゼンアミンの調製
trans−(4−フルオロ−2−(2−トリフルオロメチル)シクロプロピル)−5−ニトロフェニル−1H−テトラゾールの調製
trans−(2−フルオロ−4−(2−トリフルオロメチル)シクロプロピル)−5−(1H−テトラゾル−1−イル)ベンゼンアミンの調製
trans−5−フルオロ−N2−(2−フルオロ−4−(2−トリフルオロメチル)シクロプロピル)−5−(1H−テトラゾル−1−イル)フェニル)−N4−(2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−4−イル)ピリミジン−2,4−ジアミンの調製
PKC−アルファ、PKC−ベータ、PKC−デルタ、PKC−イプシロンおよびPKC−シータ活性の阻害を、ELISAにより次のとおり決定した: NUNC MAXISORP(番号436110)プレートまたは Costar High Binding (番号3922)プレートを、1×PBS中0.01mg/mLのニュートラアビジン(Neutravidin)(Pierce社番号PI−31000)(100μL/ウェル)で、4℃で18〜24時間コーティングした。使用する準備が整ったら、プレートを1×PBSTで洗浄し、その後、1×PBST中2%のBSA(100μL/ウェル)で、室温で最低1時間ブロックした。反応は、60μL/ウェルの容量で実施した。開始する準備が整ったら、プレートを1×PBSTで洗浄して、2%BSAブロッキング溶液を除去した。その後、必要な緩衝液成分ならびに適切な濃度のATPおよびペプチド基質を含有する反応溶液を、各ウェルに添加した(表3参照)。その後、適切な濃度の被験化合物を添加した(添加される容量については、キナーゼのDMSO耐性が約0.2%であることに配慮すべきである)。その後、キナーゼの添加により、反応を開始させたが、そのおおよその最終濃度を表3に列挙している(これが、酵素活性のバッチ変動に応じて変動することに留意)。その後、反応を室温で20分間放置した後に、プレートを1×PBSTで洗浄した。
別法として、PKC活性の阻害を、異なる濃度の阻害薬での蛍光偏光でリン酸化ペプチドの生成をモニタリングすることにより測定する。反応を96ウェルプレートフォーマットで、20mMのヘペス(pH7.4)、5mMのMgCl2、0.2mMのCaCl2、1mMのDTT、0.02%のBrij−35、0.1mg/mLのホスファチジルセリン、0.02mg/mLのジオレオイル−sn−グリセロールおよびそれぞれ5μMのATPおよびペプチド基質を含有する全容量20μLで実施する。化合物を、最初にDMSO中で連続希釈し、その後上記の濃度のヘペス、MgCl2、CaCl2、DTTおよびBrij−35を含有する溶液に移して、5×化合物の2%DMSO溶液を得、その後これを反応溶液に添加する。表4に記載された典型的な濃度で、PKCを添加することにより反応を開始し、その後室温で20分間インキュベーションする。この時間の終了時に、Invitrogen社のP2748プロトコルを使用して、クエンチ(EDTA)試薬および検出(ペプチドトレーサーおよび抗体)試薬の組合せを添加する。30分間のインキュベーションの後に、Tecan Polarian装置を使用して、生じたリン酸化ペプチドの量を蛍光偏光(Ex=485nm、Em=535nm)により測定する。
ヒト初代T細胞の単離および培養:ヒト初代T細胞を次のとおり調製した。全血を健常な志願者から得て、PBSと1:1で混合し、フィコール・ハイパック(Ficoll Hypaque)(Amersham Pharmacia Biotech社、ニュージャージー州ピスカタウェイ、カタログ番号17−1440−03)に血液/PBS:ふぃこール比2:1で重層させて、4℃、1750rpmで30分間遠心分離した。血清:フィコールの界面の細胞を回収し、5倍容量のPBSで2回洗浄した。これらの新たに単離されたヒト末梢血単核細胞を、1μg/mLのαCD3および5μg/mLのαCD28(抗ヒトCD3、BD Pharmingen社、カタログ番号555336、抗ヒトCD28、ベックマン・コールター社、カタログ番号IM1376)でプレコーティングされたフラスコ内に40U/mLのIL2を含有するYssel培地中で培養した。細胞を3〜4日間刺激し、その後新たなフラスコに移し、10%FBSおよび40U/mLのIL−2を含むRPMI(L−グルタミンを含むRPMI−1640;メディアテック社、バージニア州ハーダンカタログ番号10−040−CM)中で保持した。その後、初代T細胞をPBSで2回洗浄して、IL−2を除去した。
pcDNA5/FRT/TO+hTRPV4a、ラットTRPV1−HAまたはrTRPA1−HAが安定的にトランスフェクトされているHEK−FLPTREX細胞を、10%テトラサイクリン不含ウシ胎仔血清、ハイグロマイシン(50μg/ml)およびブラストサイジン(10μg/ml)を含有するダルベッコ変法イーグル培地(DMEM)中で増殖させる。細胞をテトラサイクリン(0.1μg/ml、20h)で処理して、TRP発現を誘発する。ラットまたはマウスの胸髄および腰髄由来のDRGを、低温ハンクス液(HBSS)中で破砕し、1mg/mlのコラゲナーゼIA型および0.1mg/mlのDNAseIV型を含有するDMEM中、37℃で60の間インキュベートし、ペレット化させて、0.25%トリプシンと共に30分間インキュベートする。神経細胞をペレット化し、10%のウシ胎仔血清、10%のウマ血清、100U/mlのペニシリン、0.1mg/mlのストレプトマイシン、2mMのグルタミンを含有するDMEMで懸濁し、溶液が濁って均質になるまで穏やかに研和することにより分離し、PolyOnitine/ラミニンでコーティングされたカバーガラスに播種する。神経細胞を、実験前に3〜4日間培養する。
機械的疼痛を、0.173mNのvon Freyヘアを5回適用し、それに応答した後肢の逃避回数として定量する。応答をパーセント値として表し(例えば、5回のうち3回の逃避は60%として記録される)、機械的痛覚過敏は、基礎測定に比較した逃避のパーセント値の上昇と定義する。2)機械的疼痛は、「アップダウンパラダイム」を使用して定量され、足底中央表面に5秒間、または逃避応答が生じるまで適用されたvon Freyフィラメントに対する50%応答閾値を決定する。von Freyフィラメントは、強度1.65、2.44、2.83、3.22、3.61、3.84、4.08の範囲である。
Claims (14)
- 式(I):
(式中、
R5は、ハロアルキル、アルコキシ、置換アルコキシ、シアノ、ハロゲン、アシル、アミノカルボニル、およびニトロから選択され;
Y1およびY2は、それぞれ独立して、水素、アルキル、およびアシルから選択され;
R1は、水素、アルキル、および置換アルキルから選択され;
RaおよびRbは、それぞれ独立して、水素およびアルキルから選択され;
RcおよびRdは、それぞれ独立して、水素およびアルキルから選択され;
R6aは、水素、アルキル、置換アルキル、シアノ、ハロゲン、アシル、アミノカルボニル、ニトロ、シクロアルキル、および置換シクロアルキルから選択され;
R6bは、フルオロであり;
R7bは、水素、アルキル、置換アルキル、シアノ、ハロゲン、アシル、アミノカルボニル、ニトロ、シクロアルキル、および置換シクロアルキルから選択され;
R8は、水素、C2〜10アルキル、置換アルキル、シアノ、ハロゲン、アシル、アミノカルボニル、ニトロ、シクロアルキル、および置換シクロアルキルから選択され;
R7xは、水素、アルキル、ハロアルキル、シクロアルキル、および置換シクロアルキルから選択され;
ここでR8がフルオロである場合、R7bは水素ではない)
で示される化合物、またはその塩もしくは立体異性体。 - R6a、R 7b、およびR8の少なくとも1つは、シクロアルキル、アルキル、またはC2〜10アルキルである、請求項1記載の化合物。
- R6a、R 7b、およびR8の少なくとも1つはC2〜10アルキルである、請求項1記載の化合物。
- R7xはハロアルキルである、請求項1記載の化合物。
- R5が、シアノ、ハロゲン、アシル、またはアミノカルボニルである、請求項1〜4のいずれか一項に記載の化合物。
- Y1が水素であり、Y2が水素であり、RaおよびRbが両者ともアルキルであり、RcおよびRdが両者ともアルキルである、請求項1〜4のいずれか一項に記載の化合物。
- R6a、R 7b、およびR8の少なくとも1つが、C2〜10アルキル、ハロゲン、およびシクロアルキルから選択される、請求項1〜4のいずれか一項に記載の化合物。
- R7bが、水素、アルキル、ハロゲン、またはシクロアルキルである、請求項1〜4のいずれか一項に記載の化合物。
- R8が、水素、C2〜10アルキル、ハロゲン、シクロアルキル、または置換シクロアルキルである、請求項1〜4のいずれか一項に記載の化合物。
- 化合物が、
I−1: N2−(4−シクロプロピル−2−フルオロ−5−テトラゾル−1−イル−フェニル)−5−フルオロ−N4−(2,2,6,6−テトラメチル−ピペリジン−4−イル)−ピリミジン−2,4−ジアミン;
I−2: 2−(4−シクロプロピル−2−フルオロ−5−テトラゾル−1−イル−フェニルアミノ)−4−(2,2,6,6−テトラメチル−ピペリジン−4−イルアミノ)−ピリミジン−5−カルボニトリル;
I−3: 2−(4−シクロプロピル−2−フルオロ−5−テトラゾル−1−イル−フェニルアミノ)−4−(2,2,6,6−テトラメチル−ピペリジン−4−イルアミノ)−ピリミジン−5−カルボン酸アミド;
I−8: 2−(2−フルオロ−4−イソプロピル−5−テトラゾル−1−イル−フェニルアミノ)−4−(2,2,6,6−テトラメチル−ピペリジン−4−イルアミノ)−ピリミジン−5−カルボニトリル;
I−12: N2−(4−シクロプロピル−2−フルオロ−5−テトラゾル−1−イル−フェニル)−5−フルオロ−N4−(2,2,6,6−テトラメチル−ピペリジン−4−イル)−ピリミジン−2,4−ジアミン;
I−13: 5−フルオロ−N2−(2−フルオロ−5−テトラゾル−1−イル−フェニル)−N4−(2,2,6,6−テトラメチル−ピペリジン−4−イル)−ピリミジン−2,4−ジアミン;
I−14: 5−フルオロ−N2−(2−フルオロ−5−テトラゾル−1−イル−フェニル)−N4−(1,2,2,6,6−ペンタメチル−ピペリジン−4−イル)−ピリミジン−2,4−ジアミン;
I−16: N2−(4−シクロプロピル−2−フルオロ−5−(5−イソプロピル−1H−テトラゾル−1−イル)フェニル)−5−フルオロ−N4−(2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−4−イル)ピリミジン−2,4−ジアミン;
I−17: N2−(4−シクロプロピル−5−(5−シクロプロピル−1H−テトラゾル−1−イル)−2−フルオロフェニル)−5−フルオロ−N4−(2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−4−イル)ピリミジン−2,4−ジアミン;
I−18: N2−(4−シクロプロピル−2−フルオロ−5−(5−メチル−1H−テトラゾル−1−イル)フェニル)−5−フルオロ−N4−(2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−4−イル)ピリミジン−2,4−ジアミン;
I−19: N2−(4−シクロプロピル−2−フルオロ−5−(5−(トリフルオロメチル)−1H−テトラゾル−1−イル)フェニル)−5−フルオロ−N4−(2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−4−イル)ピリミジン−2,4−ジアミン;
I−20: N2−(4−シクロプロピル−2−フルオロ−5−(5−(フルオロメチル)−1H−テトラゾル−1−イル)フェニル)−5−フルオロ−N4−(2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−4−イル)ピリミジン−2,4−ジアミン;および
I−21: trans−5−フルオロ−N2−(2−フルオロ−5−(1H−テトラゾル−1−イル)−4−(2−(トリフルオロメチル)シクロプロピル)フェニル)−N4−(2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−4−イル)ピリミジン−2,4−ジアミン、
から選択される化合物、またはその溶媒和物、もしくは薬学的に許容し得る塩である、請求項1記載の化合物。 - 化合物が、式:
- 薬学的に許容し得る塩がギ酸塩である、請求項11に記載の化合物。
- 請求項1〜12のいずれか一項に記載の化合物および薬学的に許容し得る担体を含む医薬組成物。
- プロテインキナーゼC(PKC)活性を介して媒介または維持された疾患または障害を治療する方法における使用のための請求項1〜12のいずれか一項に記載の化合物。
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