JP6028968B2

JP6028968B2 - 抗インフルエンザウイルス剤

Info

Publication number: JP6028968B2
Application number: JP2012178250A
Authority: JP
Inventors: 典生山本
Original assignee: Juntendo University
Current assignee: Juntendo University
Priority date: 2012-02-24
Filing date: 2012-08-10
Publication date: 2016-11-24
Anticipated expiration: 2032-08-10
Also published as: JP2013199464A

Description

本発明は、抗インフルエンザウイルス剤及びインフルエンザウイルス感染症の予防及び／又は治療剤に関する。

インフルエンザは、インフルエンザウイルス感染症の略称であり、風邪と異なり、比較的急速に出現する悪塞、発熱、頭痛、全身倦怠感、筋肉痛を特徴とし、咽頭痛、鼻汁、咳などの気道炎症状を伴う。合併症として肺炎、インフルエンザ脳症があり、死亡することもある。
予防方法としてはワクチンが用いられており、抗インフルエンザウイルス剤としてオセルタミビル、ザナミビル、ラニナミビル等が用いられている。

一方、サイクロスポリンＡ又はその誘導体は、環状ポリペプチド抗生物質の一種であり、免疫抑制剤として知られており、臓器移植による拒絶反応の抑制、自己免疫疾患の他、アトピー性皮膚炎にも有効であることが知られている。また、サイクロスポリンＡ及びその誘導体は、抗ＨＩＶ活性や抗ＨＣＶ活性を有することが知られている（特許文献１、非特許文献１、２）。

特表２００１−５０７０１６号公報

Watashi K, Hijikata M, Hosaka M, Yamaji M, Shimotohno K. Cyclosporin A suppresses replication of hepatitis C virus genome in cultured hepatocytes. Hepatology. 2003 Nov;38(5):1282-8. Karpas A, Lowdell M, Jacobson SK, Hill F. Inhibition of human immunodeficiency virus and growth of infected T cells by the immunosuppressive drugs cyclosporin A and FK 506. Proc Natl Acad Sci U S A. 1992 Sep 1;89(17):8351-5.

本発明は、新たな抗インフルエンザウイルス剤を提供することにある。

そこで本発明者は、新たな抗インフルエンザウイルス剤を見出すべく種々検討したところ、サイクロスポリンＡと同様に免疫抑制剤として広く用いられているＦＫ５０６は全く抗インフルエンザウイルス作用を示さないにもかかわらず、意外にもサイクロスポリンＡ及びその誘導体が強い抗インフルエンザウイルス作用を有し、インフルエンザウイルス感染症の予防及び／又は治療剤として有用であることを見出し、本発明を完成した。

すなわち、本発明はサイクロスポリンＡ又はその誘導体を有効成分とする抗インフルエンザウイルス剤を提供するものである。
また、本発明はサイクロスポリンＡ又はその誘導体を有効成分とするインフルエンザウイルス感染症の予防及び／又は治療剤を提供するものである。

本発明によれば、新たなインフルエンザウイルス感染症の予防及び／又は治療薬が提供できる。

サイクロスポリンＡ（ＣＳＡと記載）、ＰＳＣ−８３３（ＰＳＣと記載）及びＦＫ５０６を１０μＭ作用させたＡ５４９細胞中のインフルエンザウイルス量を示す図である。サイクロスポリンＡ（ＣＳＡと記載）、ＰＳＣ−８３３（ＰＳＣと記載）及びＦＫ５０６を１０μＭ作用させたＭＤＣＫ細胞中のインフルエンザウイルス量を示す図である。

本発明の抗インフルエンザウイルス剤、インフルエンザウイルス感染症予防及び／又は治療剤の有効成分は、サイクロスポリンＡ又はその誘導体である。サイクロスポリンＡは、Tolypocladium inflatumが産生する環状ポリペプチドであり、化学名（Ｅ）−１４，１７，２６，３２−テトラブチル−５−エチル−８−（１−ヒドロキシ−２−メチルヘキセ−４−ニル）−１，３，９，１２，１５，１８，２０，２３，２７−ノナメチル−１１，２９−ジプロピル−１，３，８，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０−ウンデカアザシクロトリコンタン−２，４，７，１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１−ウンデカオンである。

サイクロスポリンＡの誘導体としては、上記式（１）中の１１個のアミノ酸を、それぞれ他のアミノ酸や修飾アミノ酸に置換した環状ウンデカペプチドが挙げられる。より具体的には、式（１）中の１１個のアミノ酸をアラニン、システイン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トレオニン、トリプトファン、チロシン及びバリンから選ばれるアミノ酸、又はこれらの修飾アミノ酸に変換した化合物等が挙げられる。
具体例としては、ＮＩＭ−８１１（Ｎ−メチル−４−イソロイシンサイクロスポリン）、Ｄｅｂｉｏ−０２５（アリスポリビル（Alisporivir））、ＳＣＹ−６３５、ＰＳＣ−
８３３（バスポスダル）、サイクロスポリンＡ−ｄ１２、サイクロスポリンＡアセタート、サイクロスポリンＢ、サイクロスポリンＣ、サイクロスポリンＤ、サイクロスポリンＥ、サイクロスポリンＦ、サイクロスポリンＧ、サイクロスポリンＨ、サイクロスポリンＩ、サイクロスポリンＪ、サイクロスポリンＬ、サイクロスポリンＯ、サイクロスポリンＰ、サイクロスポリンＱ、サイクロスポリンＲ、サイクロスポリンＳ、サイクロスポリンＴ、サイクロスポリンＵ、サイクロスポリンＶ、サイクロスポリンＷ、サイクロスポリンＺ等が挙げられる。このうち、サイクロスポリンＡ（ＣＳＡ）、ＰＳＣ−８３３、ＮＩＭ−８１１、Ｄｅｂｉｏ−０２５、ＳＣＹ−６３５がさらに好ましい。

後記実施例に示すように、サイクロスポリンＡ又はその誘導体は、ヒト細胞に感染したインフルエンザウイルス量を低減させる作用を有し、優れた抗インフルエンザウイルス剤及びインフルエンザウイルス感染症予防治療剤として有用である。インフルエンザウイルスは、ＨＣＶやＨＩＶとは大きく相違するＲＮＡウイルスであり、サイクロスポリンＡ及びその誘導体が抗インフルエンザウイルス作用を示すことは全く意外であった。本発明の治療の対象となるインフルエンザウイルスには、Ａ型及びＢ型のいずれも含まれる。

本発明の抗インフルエンザウイルス剤には、サイクロスポリンＡ又はその誘導体以外に他の抗インフルエンザウイルス剤を配合してもよく、例えばオセルタミビル、ザナミビル、ペラミビル、ラニナミビル、アマンタジン、Ｔ−７０５等を配合してもよい。

本発明の抗インフルエンザウイルス剤は、経口または非経口的に投与することができる。経口的に投与する製剤としては、錠剤、カプセル剤、散剤、細粒剤、液剤、トローチ剤、ゼリー剤等を挙げることができる。また、非経口的に投与する製剤としては、注射剤、硬膏剤、酒精剤、エキス剤、座剤、懸濁剤、チンキ剤、軟膏剤、パップ剤、点鼻剤、吸入剤、リニメント剤、ローション剤、エアゾール剤等を挙げることができる。

これらの製剤は当業者に公知慣用の製剤方法により製造でき、またこのような種々の剤形の医薬製剤を調製するには、他の薬学的に許容される担体を所望に応じて添加することが可能である。担体としては、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、流動化剤、乳化剤、安定化剤等を挙げることができる。

本発明の抗インフルエンザウイルス剤の患者への投与量は、患者の性別、年齢、症状、投与方法、投与回数、投与時期等により異なるが、例えば、経口投与の場合、１日当たりサイクロスポリンＡ又はその誘導体を０．１〜１００ｍｇ投与することが好ましい。また、本発明の抗インフルエンザウイルス剤を点鼻剤として投与する場合、製剤中のサイクロスポリンＡ又はその誘導体の濃度を０．０１〜５．０ｗ／ｗ％、好ましくは０．０５〜３．０ｗ／ｗ％として製したものを、１日１〜３回程度点鼻するのが好ましい。本発明の抗インフルエンザウイルス剤を注射剤として投与する場合、製剤中のサイクロスポリンＡ又はその誘導体の濃度を０．０５〜５．０ｗ／ｗ％として製したものを、１日１回程度注射するのが好ましい。

以下に、実施例を示して本発明を説明するが、本発明はこれらにのみ限定されるべきものではない。

実施例１
まずＡ５４９細胞およびＭＤＣＫ細胞を２４ウェルプレートに細胞密度が１００％になるように用意した。
次に１０μＭのサイクロスポリンＡ、１０μＭのＦＫ５０６、１０μＭのＰＳＣ−８３３または最終濃度０．１％のエタノールを含む無血清培地（Ｏｐｔｉ−ＰＲＯＳＦＭ）を調製した。これを薬剤含有培地とする。
また、２μｇ／ｍＬのアセチルトリプシンと上記の薬剤を含む無血清培地を調製した。これをアセチルトリプシン・薬剤含有培地とする。
また、２０００ｐｆｕのインフルエンザウイルス（ＰＲ８株）、２μｇ／ｍＬのアセチルトリプシンと上記の薬剤を含む無血清培地を調製した。これをウイルス・アセチルトリプシン・薬剤含有培地とする。
次にＡ５４９細胞およびＭＤＣＫ細胞をＰＢＳで２回洗い、次に薬剤含有培地で３０分〜６０分、インキュベーションした。その後、培地をウイルス・アセチルトリプシン・薬剤含有培地に置換し、１時間インキュベーションした。Ａ５４９細胞およびＭＤＣＫ細胞を洗った後にアセチルトリプシン・薬剤含有培地でインキュベーションした。感染開始後２４時間の時点で細胞の培養液を回収し、ＲＮＡを抽出後、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ法にてインフルエンザウイルスの量を定量した。
結果を図１及び図２に示す。

実施例２
Ａ５４９細胞およびＭＤＣＫ細胞を２４ウェルプレートに細胞密度が１００％になるように用意した。
次に１０μＭ、５μＭ、２μＭ、１μＭ、０．５μＭ、０．２μＭ、０．１μＭのサイクロスポリンＡ、ＦＫ５０６、ＰＳＣ−８３３、または最終濃度０．１％のエタノールを含む無血清培地（Ｏｐｔｉ−ＰＲＯＳＦＭ）を調製した。これを薬剤含有培地とする。
また、２μｇ／ｍＬのアセチルトリプシンと上記の薬剤を含む無血清培地を調製した。これをアセチルトリプシン・薬剤含有培地とする。
また、２０００ｐｆｕのインフルエンザウイルス（ＰＲ８株）、２μｇ／ｍＬのアセチルトリプシンと上記の薬剤を含む無血清培地を調製した。これをウイルス・アセチルトリプシン・薬剤含有培地とする。
次にＡ５４９細胞およびＭＤＣＫ細胞をＰＢＳで２回洗い、次に薬剤含有培地で３０分〜６０分、インキュベーションした。その後、培地をウイルス・アセチルトリプシン・薬剤含有培地に置換し、１時間インキュベーションした。Ａ５４９細胞を洗った後にアセチルトリプシン・薬剤含有培地でインキュベーションした。感染開始後２４時間の時点で細胞の培養液を回収し、ＲＮＡを抽出後、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ法にてインフルエンザウイルスの量を定量した。各濃度の薬剤で処理した時のウイルス量とコントロールのウイルス量を比較し、５０％のウイルス増殖抑制が見られる濃度（ＩＣ₅₀μＭ）を計算した。また、同時に被検体のＡ５４９細胞及びＭＤＣＫ細胞に対する細胞毒性（ＣＣ₅₀）も検討したが、いずれの被検体も２０μＭで細胞毒性を示さなかった。
結果を表１に示す。

図１、図２及び表１より、ＦＫ５０６はほとんど抗インフルエンザウイルス作用を示さなかったが、サイクロスポリンＡ（ＣＳＡ）及びＰＳＣ−８３３（ＰＳＣ）は、強い抗インフルエンザウイルス作用を示した。

Claims

サイクロスポリンＡ又はその誘導体を有効成分とするインフルエンザウイルスの増殖抑制剤であって、前記誘導体が、ＮＩＭ−８１１、Ｄｅｂｉｏ−０２５、ＳＣＹ−６３５、ＰＳＣ−８３３、サイクロスポリンＡ−ｄ１２、サイクロスポリンＡアセタート、サイクロスポリンＢ、サイクロスポリンＣ、サイクロスポリンＤ、サイクロスポリンＥ、サイクロスポリンＦ、サイクロスポリンＧ、サイクロスポリンＨ、サイクロスポリンＩ、サイクロスポリンＪ、サイクロスポリンＬ、サイクロスポリンＯ、サイクロスポリンＰ、サイクロスポリンＱ、サイクロスポリンＲ、サイクロスポリンＳ、サイクロスポリンＴ、サイクロスポリンＵ、サイクロスポリンＶ、サイクロスポリンＷ又はサイクロスポリンＺである、前記増殖抑制剤。