JP5996990B2 - 薬剤溶出型フィルム製剤及びその製造方法 - Google Patents

Description

本発明は、生体内の臓器や組織に貼り付けて薬剤を疾患部位に送達する生体貼付用の機能性フィルムに関し、特に生体適合性の高分子に生理活性物質を封入した生体適合性ナノ粒子が分散された薬剤溶出型フィルム製剤、及びその製造方法に関するものである。

近年、薬剤を含有する生体適合性のフィルムを生体内の臓器に直接貼り付ける治療方法が普及しつつある。例えば、特許文献１には、ポリ乳酸・グリコール酸共重合体で形成された薬物含有ナノ粒子を分散させた水溶性のポリビニルアルコール（ＰＶＡ）フィルム製剤が開示されている。また、特許文献２には、少なくとも１種の疎水性ポリマーを含む第一の層と、少なくとも１種の水溶性治療剤を含む第二の層とを備える、自己支持型多層フィルムが開示されている。

また、特許文献３には、エオシン化ゼラチン等の可視光架橋物質と、ハイドロゲンドナーと、抗腫瘍剤とを含む水溶液を面状に展延し、可視光を照射することにより光架橋・不溶化した抗がん剤徐放シートが開示されている。

特開２０１１−２４５２９３号公報 特開２０１２−８７１２２号公報 特開２００６−３３５６５７号公報

このようなフィルム製剤においては、疾患部位への薬物送達を行うドラッグ・デリバリー・システム（ＤＤＳ）機能を発揮するために、フィルム自体が吸水して溶解し、フィルム内のナノ粒子が外部に放出される必要がある。一方、フィルムはある程度長期間に亘って疾患部位に固定されている必要がある。

しかし、特許文献１のような水溶性のフィルムを臓器に貼り付けた場合、生体内の水分によってフィルムが短期間で溶解して貼付部位から剥がれ落ちてしまい、ＤＤＳ機能を長期間に亘って発揮できないという問題点があった。

一方、特許文献２に記載の自己支持型多層フィルムは、ポリグリコリドとε−カプロラクトンとのコポリマーのような疎水性ポリマーを基材としている。そのため、特許文献２のフィルム内にナノ粒子を分散させたとしても、ナノ粒子がフィルムから円滑に放出されず、十分なＤＤＳ機能を発揮できないおそれがあった。

また、特許文献３に記載の抗がん剤徐放シートは、基材としてエオシン等のキサンテン系色素で修飾されたゼラチンを使用する必要があるため、製造コスト面で不利となる。また、キサンテン系色素による修飾や可視光の照射の程度によってはゼラチンが過度に難溶化してゼラチンの生分解性が損なわれてしまい、薬剤の放出性、人体に対する安全性が低下するという問題点があった。

本発明は、上記問題点に鑑み、生理活性物質が封入された生体適合性ナノ粒子を細胞内へ効率良く到達させることができ、且つ、ある程度長期間に亘って疾患部位に固定可能な薬剤溶出型フィルム製剤を提供することを目的とする。

上記目的を達成するために本発明の第１の構成は、生体適合性の水溶性高分子で形成されたフィルムと、該フィルム内に分散され、生理活性物質が封入された生体適合性ナノ粒子と、を含む薬剤溶出型フィルム製剤であって、前記フィルムは、一方の面にポリカルボン酸層をカチオン性高分子の水溶液、若しくは２価以上の無機塩の水溶液で難水溶化処理して形成される第１層を有し、他方の面に前記ポリカルボン酸以外の水溶性高分子で形成される第２層を有する多層構成であり、前記生体適合性ナノ粒子が、前記第２層のみに分散されていることを特徴としている。

また本発明の第２の構成は、上記構成の薬剤溶出型フィルム製剤において、前記カチオン性高分子が、キトサンであることを特徴としている。

また本発明の第３の構成は、上記構成の薬剤溶出型フィルム製剤において、前記無機塩が、炭酸カルシウム、塩化カルシウムから選ばれた１種以上であることを特徴としている。

また本発明の第４の構成は、上記構成の薬剤溶出型フィルム製剤において、前記ポリカルボン酸が、アルギン酸であることを特徴としている。

また本発明の第５の構成は、上記構成の薬剤溶出型フィルム製剤において、前記生体適合性ナノ粒子が、乳酸・グリコール酸共重合体で形成されることを特徴としている。

また本発明の第６の構成は、上記構成の薬剤溶出型フィルム製剤において、前記生理活性物質が、抗がん剤、免疫抑制剤、抗炎症剤、鎮痛剤、血管拡張剤、癒着防止剤、核酸化合物、受容体チロシンキナーゼ阻害剤から選ばれた１種以上であることを特徴としている。

また本発明は、ポリビニルアルコールを溶解させた水溶液に、少なくとも生理活性物質の溶液と生体適合性高分子を有機溶媒に溶解させた溶液との混合液を加えて、前記生理活性物質が前記生体適合性高分子中に封入された生体適合性ナノ粒子を形成するナノ粒子形成工程と、生体適合性の水溶性高分子の水溶液に前記生体適合性ナノ粒子を分散させてシート状に展延することによりナノ粒子含有水溶性フィルムを形成し、該ナノ粒子含有水溶性フィルムの片面にポリカルボン酸の水溶液を塗布して多層構成のナノ粒子含有フィルムを形成するフィルム形成工程と、前記ナノ粒子含有フィルムの片面のポリカルボン酸層をカチオン性高分子の水溶液、若しくは２価以上の無機塩の水溶液で処理することにより、前記ナノ粒子含有フィルムの一方の面に難水溶性の第１層を形成する難水溶化工程と、一方の面に前記第１層が形成され、他方の面に前記生体適合性ナノ粒子が分散された水溶性の第２層が形成された前記ナノ粒子含有フィルムを乾燥させる乾燥工程と、を有することを特徴とする薬剤溶出型フィルム製剤の製造方法である。

本発明の第１の構成によれば、生理活性物質が封入された生体適合性ナノ粒子を生体適合性の水溶性高分子で形成されたフィルム内に分散させたフィルムの片面を難水溶化処理することにより、一方の面に難水溶性の第１層が形成され、他方の面に水溶性の第２層が形成された薬剤溶出型フィルム製剤としたので、第２層を生体組織に対向させてフィルムを貼り付けることで、生体内の水分によって第２層が徐々に溶解し、第２層から放出したナノ粒子が生体組織内へ取り込まれ、生体組織内でナノ粒子内部から生理活性物質が徐放される。また、難水溶性の第１層によってある程度長期間に亘りフィルム形状が保持されるため、ＤＤＳ機能を長期間に亘って発揮することができる。さらに、第１層側からのナノ粒子の放出が規制されるため、ナノ粒子を生体組織に面した第２層側から効率良く放出させることができる。このようにして、フィルムから放出されたナノ粒子の浸透方向を生体組織側に限定することができるため、副作用の低減にもつながる。また、フィルムを片面にポリカルボン酸層を有する多層構成とし、ポリカルボン酸層をカチオン性高分子の水溶液、若しくは２価以上の無機塩の水溶液で難水溶化処理することにより、難水溶性の第１層と水溶性の第２層とが形成された薬剤溶出型フィルム製剤を容易に且つ低コストで製造することができる。また、フィルム全体をカチオン性高分子の水溶液、若しくは無機塩の水溶液に浸漬しても、ポリカルボン酸層のみが難水溶化されて第１層を形成するため、第２層の層厚を一定に保持可能となる。従って、第２層からのナノ粒子の放出時間も確保でき、難水溶化処理法の選択範囲も広くなる。さらに、生体適合性ナノ粒子を、フィルムの第２層のみに分散させることにより、ナノ粒子の放出に寄与しない第１層にはナノ粒子が分散されず、ナノ粒子の放出に寄与する第２層のみにナノ粒子が分散された、フィルム内からのナノ粒子の放出効率の高い薬剤溶出型フィルム製剤となる。

また、本発明の第２の構成によれば、上記第１の構成の薬剤溶出型フィルム製剤において、カチオン性高分子として生分解性のキトサンを用いることにより、生体への悪影響がなく、安全性の高い薬剤溶出型フィルム製剤となる。

また、本発明の第３の構成によれば、上記第１の構成の薬剤溶出型フィルム製剤において、無機塩として炭酸カルシウム、塩化カルシウムから選ばれた１種以上を用いることにより、生体への悪影響がなく、安全性の高い薬剤溶出型フィルム製剤となる。

また、本発明の第４の構成によれば、上記第１乃至第３のいずれかの構成の薬剤溶出型フィルム製剤において、ポリカルボン酸としてアルギン酸を用いることにより、生分解性、生体に対する安全性の面で特に優れた薬剤溶出型フィルム製剤となる。

また、本発明の第５の構成によれば、上記第１乃至第４のいずれかの構成の薬剤溶出型フィルム製剤において、生体適合性ナノ粒子が、乳酸・グリコール酸共重合体で構成されることにより、生体への刺激・毒性が低く、且つ乳酸・グリコール酸共重合体の分解により生理活性物質の徐放が可能な薬剤溶出型フィルム製剤となる。

また、本発明の第６の構成によれば、上記第１乃至第５のいずれかの構成の薬剤溶出型フィルム製剤において、生理活性物質として、抗がん剤、免疫抑制剤、抗炎症剤、鎮痛剤、血管拡張剤、癒着防止剤、核酸化合物、受容体チロシンキナーゼ阻害剤から選ばれた１種以上を用いることにより、生体内の臓器や組織への貼り付けによって種々の疾病に有効な治療用ツールとなる薬剤溶出型フィルム製剤を提供可能となる。

また、本発明によれば、片面にポリカルボン酸層を有する多層構成のナノ粒子含有フィルムのポリカルボン酸層をカチオン性高分子の水溶液、若しくは２価以上の無機塩の水溶液で処理してナノ粒子含有フィルムの一方の面に難水溶性の第１層を形成し、他方の面に水溶性の第２層を形成した後、乾燥させることにより、生理活性物質を細胞内へ効率良く、且つ長期間に亘って送達可能であり、取り扱い性にも優れた薬剤溶出型フィルム製剤を簡便且つ低コストで製造することができる。

ポリカルボン酸の単層構成である本発明の薬剤溶出型フィルム製剤１を、生体内の疾患部位４に貼り付けた状態を模式的に示す断面図 片面にポリカルボン酸を有する多層構成である本発明の薬剤溶出型フィルム製剤１を、生体内の疾患部位４に貼り付けた状態を模式的に示す断面図 試験例１における、実施例１及び比較例１、３のＰＬＧＡナノ粒子含有アルギン酸フィルムを寒天培地に貼り付けた５分後の状態を示す写真 試験例１における、比較例２のＰＬＧＡナノ粒子含有ＰＶＡフィルムを寒天培地に貼り付けた５分後の状態を示す写真 試験例２における、実施例１、２及び比較例１のＰＬＧＡナノ粒子含有アルギン酸フィルムを寒天培地に貼り付けた直後の状態を示す写真 試験例２における、実施例１、２及び比較例１のＰＬＧＡナノ粒子含有アルギン酸フィルムを寒天培地に貼り付けた後、１時間経過した状態を示す写真 試験例２における、実施例１、２及び比較例１のＰＬＧＡナノ粒子含有アルギン酸フィルムを寒天培地に貼り付けた後、６時間経過した状態を示す写真 試験例２における、実施例１、２及び比較例１のＰＬＧＡナノ粒子含有アルギン酸フィルムを寒天培地に貼り付けた後、２４時間経過した状態を示す写真

以下、本発明の実施形態について図面を参照しながら詳細に説明する。本発明の薬剤溶出型フィルムの製造方法は、脂溶性、或いは親水性の生理活性物質を封入した生体適合性ナノ粒子を形成する工程と、ナノ粒子を分散させた水溶性高分子の水溶液をシート状に展延することによりナノ粒子含有フィルムを形成するフィルム形成工程と、ナノ粒子含有フィルムの片面を難水溶化処理する難水溶化工程と、難水溶化処理されたナノ粒子含有フィルムを乾燥させる乾燥工程とを含むものである。

ナノ粒子含有フィルムの片面を難水溶化処理することにより、水溶性高分子で形成された薬剤溶出型フィルムを生体内の臓器や組織に貼り付けたとき、ある程度の期間はフィルムの形状が保持される。また、難水溶化処理された面を外側にして薬剤溶出型フィルムを貼り付けることで、水溶性のフィルム内面側から疾患部位へのナノ粒子の放出は維持しつつ、難水溶性のフィルム外面側からのナノ粒子の放出を抑制することができる。その結果、フィルム内から徐放されるナノ粒子を長期間に亘って疾患部位へ効率良く送達することができる。以下、ナノ粒子内部への生理活性物質の封入工程からフィルムの乾燥工程までを順を追って説明する。

（ナノ粒子形成工程）
本発明に用いられる生体適合性ナノ粒子は、生理活性物質及び生体適合性高分子を１，０００ｎｍ未満の平均粒径を有するナノ単位の大きさの粒子（ナノスフェア）に加工することができる球形晶析法を用いて、ナノ粒子の内部に生理活性物質を封入することにより製造される。球形晶析法は高剪断力を発生しない粒子調製法であるため、特に、生理活性物質が外部応力に弱い核酸化合物等の場合にも好適に用いることができる。

球形晶析法は、化合物合成の最終プロセスにおける結晶の生成・成長プロセスを制御することで、球状の結晶粒子を設計し、その物性を直接制御して加工することができる方法である。この球形晶析法の一つに、エマルジョン溶媒拡散法（ＥＳＤ法）がある。

ＥＳＤ法は、次に示すような原理によって、ナノスフェアを製造する技術である。本法には、生理活性物質を封入する基剤ポリマーとなるＰＬＧＡ（乳酸・グリコール酸共重合体）等を溶解できる良溶媒と、これとは逆にＰＬＧＡを溶解しない貧溶媒の二種類の溶媒が用いられる。この良溶媒には、ＰＬＧＡを溶解し、且つ貧溶媒へ混和するアセトン等の有機溶媒を用いる。そして、貧溶媒には、通常、ポリビニルアルコール水溶液等を用いる。

操作手順としては、まず、良溶媒中にＰＬＧＡを溶解後、このＰＬＧＡが析出しないように、生理活性物質の溶解液を良溶媒中へ添加混合する。このＰＬＧＡと生理活性物質の混合液を、貧溶媒中に攪拌下、滴下すると、混合液中の良溶媒（有機溶媒）が貧溶媒中へ急速に拡散移行する。その結果、貧溶媒中で良溶媒の自己乳化が起き、サブミクロンサイズの良溶媒のエマルジョン滴が形成される。さらに、良溶媒と貧溶媒の相互拡散により、エマルジョン内から有機溶媒が貧溶媒へと継続的に拡散していくので、エマルジョン滴内のＰＬＧＡ並びに生理活性物質の溶解度が低下し、最終的に、生理活性物質を包含した球形結晶粒子のＰＬＧＡナノスフェアが生成する。

上記球形晶析法では、物理化学的な手法でナノ粒子を形成でき、しかも得られるナノ粒子が略球形であるため、均質なナノ粒子を、触媒や原料化合物の残留といった問題を考慮する必要がなく、容易に形成することができる。

なお、ナノ粒子内に封入される生理活性物質が、水溶液中で負の電荷を持つアニオン分子として存在するアニオン性薬物であるときは、貧溶媒にカチオン性高分子を添加すると、ナノ粒子内部への生理活性物質の封入率を高めることができる。通常、封入される生理活性物質が親水性（水溶性）の場合、良溶媒中に分散混合した生理活性物質が貧溶媒中に漏出、溶解してしまい、ナノ粒子を形成する高分子だけが沈積するため、生理活性物質がほとんど封入されないが、カチオン性高分子を貧溶媒中に添加した場合は、ナノ粒子表面に吸着したカチオン性高分子がエマルション滴表面に存在するアニオン性薬物と相互作用し、貧溶媒中へのアニオン性薬物の漏出を抑制できるものと考えられる。

さらに、貧溶媒中にカチオン性高分子を添加することにより、ナノ粒子表面を正に帯電させてアニオン性薬物をナノ粒子表面に静電気的に担持させることもできる。具体的には、形成されたナノ粒子の表面がカチオン性高分子により修飾（被覆）され、ナノ粒子表面のゼータ電位が正となる。その後、凍結乾燥によりナノ粒子を複合化する際に、アニオン性薬物をさらに添加することにより、水溶液中で負の電荷を持つアニオン分子となったアニオン性薬物が静電気的相互効果によりナノ粒子表面に所定量担持される。これにより、アニオン性薬物の、ナノ粒子内部及び表面への担持を合わせたトータルの封入率を高めることができる。

カチオン性高分子としては、キトサン及びキトサン誘導体、セルロースに複数のカチオン基を結合させたカチオン化セルロース、ポリエチレンイミン、ポリビニルアミン、ポリアリルアミン等のポリアミノ化合物、ポリオルニチン、ポリリジン等のポリアミノ酸、ポリビニルイミダゾール、ポリビニルピリジニウムクロリド、アルキルアミノメタクリレート４級塩重合物（ＤＡＭ）、アルキルアミノメタクリレート４級塩・アクリルアミド共重合物（ＤＡＡ）等が挙げられるが、特にキトサン或いはその誘導体が好適に用いられる。

キトサンは、エビやカニ、昆虫の外殻に含まれる、アミノ基を有する糖の１種であるグルコサミンが多数結合したカチオン性の天然高分子であり、乳化安定性、保形性、生分解性、生体適合性、抗菌性等の特徴を有するため、化粧品や食品、衣料品、医薬品等の原料として広く用いられている。このキトサンを貧溶媒中に添加することにより、生体への悪影響がなく、安全性の高いナノ粒子を製造することができる。

なお、カチオン性高分子の中でもカチオン性のより強いものを用いることにより、ゼータ電位がより大きな正の値となるため、後述するナノ粒子付着工程での電気的吸着力が増大するとともに、粒子間の反発力が強くなって懸濁液中での粒子の安定性も高くなる。例えば、元来カチオン性であるキトサンの一部を第４級化することで、さらにカチオン性を高めた塩化Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（トリメチルアンモニオ）プロピル］キトサン等のキトサン誘導体（カチオニックキトサン）を用いることが好ましい。

また、良溶媒中でのアニオン性薬物の親和性及び分散安定性を向上させるため、良溶媒中にＤＯＴＡＰ等のカチオン性脂質を添加し、アニオン性薬物と複合体を形成させても良い。但し、細胞内において放出されたカチオン性脂質により細胞障害性を示すおそれがあるため、添加量には注意が必要である。

上記球形晶析法で用いられる良溶媒および貧溶媒の種類は、ナノ粒子内に封入される生理活性物質の種類等に応じて決定されるものであり、特に限定されるものではないが、生体適合性ナノ粒子は、人体内へ留置される薬剤溶出型フィルムの材料として用いられるため、人体に対して安全性が高く、且つ環境負荷の少ないものを用いる必要がある。

このような貧溶媒としては、水、或いは界面活性剤を添加した水が挙げられるが、例えば界面活性剤としてポリビニルアルコールを添加したポリビニルアルコール水溶液が好適に用いられる。ポリビニルアルコール以外の界面活性剤としては、レシチン、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース等が挙げられる。

良溶媒としては、低沸点且つ難水溶性の有機溶媒であるハロゲン化アルカン類、アセトン、メタノール、エタノール、エチルアセテート、ジエチルエーテル、シクロヘキサン、ベンゼン、トルエン等が挙げられるが、例えば環境や人体に対する悪影響が少ないアセトン、若しくはアセトンとエタノールの混合液が好適に用いられる。

ポリビニルアルコール水溶液の濃度、或いはアセトンとエタノールの混合比や、結晶析出時の条件も特に限定されるものではなく、目的となる生理活性物質の種類や、球形造粒結晶の粒径（本発明の場合ナノオーダー）等に応じて適宜決定すればよいが、ポリビニルアルコール水溶液の濃度が高いほどナノ粒子表面へのポリビニルアルコールの付着が良好となり、乾燥後の水への再分散性が向上する反面、ポリビニルアルコール水溶液の濃度が所定以上になると、貧溶媒の粘度が上昇して良溶媒の拡散性に悪影響を与える。

そのため、ポリビニルアルコールの重合度やけん化度によっても異なるが、ナノ粒子形成後に有機溶媒を留去し、さらに凍結乾燥等により一旦粉末化する場合は、ポリビニルアルコール水溶液の濃度として０．１重量％以上１０重量％以下が好ましく、２％程度がより好ましい。なお、ナノ粒子形成後の懸濁液から有機溶媒を留去した後、遠心分離操作によってポリビニルアルコールを除去せずにそのままフィルム形成工程に用いる場合は０．５重量％以下とすることが好ましく、０．１重量％程度が特に好ましい。

本発明に用いられる生体適合性高分子は、生体への刺激・毒性が低く、生体適合性で、投与後分解して代謝される生体内分解性のものが望ましい。また、内包する生理活性物質を持続して徐々に放出する粒子であることが好ましい。このような素材としては、特に乳酸・グリコール酸共重合体（ＰＬＧＡ）を好適に用いることができる。

ＰＬＧＡの分子量は、５，０００〜２００，０００の範囲内であることが好ましく、１５，０００〜２５，０００の範囲内であることがより好ましい。ＰＬＧＡの乳酸とグリコール酸との組成比は１：９９〜９９：１であればよいが、乳酸１に対しグリコール酸０．３３３であることが好ましい。また、乳酸およびグリコール酸の含有量が２５重量％〜６５重量％の範囲内であるＰＬＧＡは、非晶質であり、且つアセトン等の有機溶媒に可溶であるから、好適に使用される。

生体内分解性の生体適合性高分子としては、ほかに、ポリグリコール酸（ＰＧＡ）、ポリ乳酸（ＰＬＡ）等が挙げられる。また、アミノ酸のような荷電基あるいは官能基化し得る基を有していてもよい。

なお、封入される生理活性物質が親水性（水溶性）の場合、ＰＬＧＡの表面をポリエチレングリコール（ＰＥＧ）で修飾したもの（以下、ＰＥＧ−ＰＬＧＡという）を用いると、親水性の生理活性物質とＰＬＧＡとの親和性が向上し、封入が容易になるため好ましい。

上記以外の生体適合性高分子としては、セルロースおよび他の多糖類、ならびにペプチドまたはタンパク質、あるいはそれらのコポリマーまたは混合物が挙げられる。

その後、得られたナノ粒子の懸濁液をそのまま、或いは必要に応じて良溶媒である有機溶媒を減圧留去し（溶媒留去工程）、遠心分離操作によって余剰のポリビニルアルコールを除去し、さらに必要に応じて凍結乾燥等によりナノ粒子を一旦粉末化させた後、再度水に分散させて次のナノ粒子付着工程に用いる。ナノ粒子を懸濁液のまま次工程に用いる場合は、凍結乾燥等を行う必要がなくなり、製造工程が簡略化できるとともに、貧溶媒中へのポリビニルアルコールの添加量も低減できるため好ましい。

なお、ナノ粒子を一旦粉末化する場合、結合剤（例えばトレハロース等）と共に再分散可能な凝集粒子に複合化して複合粒子としておけば、使用前まではナノ粒子が集まった、取り扱いやすい凝集粒子となっており、使用時に水分に触れることで結合剤が溶解して再分散可能なナノ粒子に復元できるため好ましい。

本発明に用いられる生体適合性ナノ粒子は、１，０００ｎｍ未満の平均粒子径を有するものであれば特に制限はないが、フィルムが貼り付けられる疾患部位に生理活性物質を導入するためナノ粒子を細胞内に取り込ませる必要がある。標的細胞内への浸透効果を高めるためには、平均粒子径を５００ｎｍ以下とすることが好ましく、１００ｎｍ以下がより好ましい。

生体適合性ナノ粒子に封入される生理活性物質としては、抗がん剤、免疫抑制剤、抗炎症剤、鎮痛剤、血管拡張剤、癒着防止剤、核酸化合物、受容体チロシンキナーゼ阻害剤等が挙げられるが、これらの物質に限定されるものではない。なお、上記生理活性物質のうち何れか１種のみを封入しても良いが、効能や作用機序の異なる成分を複数種封入しておけば、各成分の相乗効果により薬効の促進が期待できる。

ナノ粒子内部への生理活性物質の封入量は、ナノ粒子形成時に添加する生理活性物質の量やカチオン性高分子の種類及び添加量の調整、ナノ粒子を形成する生体適合性高分子の種類により調整可能である。

（フィルム形成工程）
次に、生理活性物質が封入された生体適合性ナノ粒子を含むナノ粒子含有フィルムを形成する方法について説明する。操作手順としては、先ず、生体適合性の水溶性高分子を水に溶解して水溶液を調製する。次に、水溶性高分子の水溶液中にナノ粒子を分散させた後、シート状に展延し、乾燥して固化させる。

ナノ粒子を分散させた水溶性高分子の水溶液をシート状に展延する方法としては、例えば水溶液を成形型に流し込んで固化させる方法や、刷毛やへら、バーコート等により水溶液を基板上に塗布して固化させる方法が挙げられる。また、水溶液の粘度が高い場合はスリット状のノズル口からシート状に押し出すようにして展延させることもできる。

生分解性の水溶性高分子としては、後述する難水溶化処理を容易に行うことのできるポリカルボン酸が好ましく、海藻（褐藻類）からの抽出により製造されるアルギン酸が生分解性、生体に対する安全性の面で特に好ましい。これらの水溶性高分子の種類や分子量等を適宜選択することにより、フィルム内に分散させたナノ粒子の放出速度を制御可能となる。アルギン酸の水溶液を用いてフィルムを形成する場合、アルギン酸の濃度は１〜１０重量％が好ましく、２〜５重量％がより好ましい。

或いは、片面にポリカルボン酸層を有する多層構成のナノ粒子含有フィルムとすることもできる。具体的には、フィルムの一方の面をポリカルボン酸層で形成し、他方の面をポリカルボン酸以外の生体適合性の水溶性高分子（例えば、ポリビニルアルコールや、ヒアルロン酸等の生体内に存在するムコ多糖類）で形成する。このような多層構成のフィルムを用いた場合、ポリカルボン酸層は難水溶化処理されるため、ナノ粒子の放出にはほとんど寄与しない。そこで、ポリカルボン酸層にはナノ粒子を分散させずに、ポリカルボン酸以外の水溶性高分子の層のみにナノ粒子を分散させておけば、フィルム内のナノ粒子を水溶性高分子層から効率良く放出させることができる。

（難水溶化工程）
次に、シート状に展延したナノ粒子含有フィルムの片面を難水溶化処理する。ここでは、フィルムを形成する水溶性高分子としてポリカルボン酸を用いた場合の難水溶化処理法として、カチオン性高分子の水溶液を用いる方法と、２価以上の無機塩の水溶液を用いる方法について説明する。

ポリカルボン酸のカルボキシル基は、水の存在下では水素イオン（Ｈ＋）が解離してカルボアニオンとなる。ポリカルボン酸で形成されたフィルムの一方の面（表面側）にカチオン性高分子の水溶液を塗布すると、ポリカルボン酸のカルボキシル基がカルボアニオンとなり、カチオン性高分子のカチオン基（−ＮＨ₃＋等）のＨ＋とイオン結合する。その結果、カルボキシル基がカチオン性高分子と結合することで疎水化され、ナノ粒子含有フィルムの表面に難水溶性の層（以下、第１層という）が形成される。一方、カチオン性高分子の水溶液を塗布しないナノ粒子含有フィルムの他方の面（裏面側）は水溶性の層（以下、第２層という）となっている。

カチオン性高分子としては、キトサン及びキトサン誘導体、セルロースに複数のカチオン基を結合させたカチオン化セルロース、ポリエチレンイミン、ポリビニルアミン、ポリアリルアミン等のポリアミノ化合物、ポリオルニチン、ポリリジン等のポリアミノ酸、ポリビニルイミダゾール、ポリビニルピリジニウムクロリド、アルキルアミノメタクリレート４級塩重合物（ＤＡＭ）、アルキルアミノメタクリレート４級塩・アクリルアミド共重合物（ＤＡＡ）等が挙げられるが、特に生体への悪影響が少なく安全性に優れたキトサン或いはその誘導体が好適に用いられる。

また、カルボン酸は、２価以上の金属イオンと反応して難水溶性の塩を形成することが知られている。ポリカルボン酸で形成されたフィルムの一方の面（表面側）に２価以上の無機塩の水溶液を塗布すると、ポリカルボン酸のカルボキシル基がカルボアニオンとなり、金属イオンと難水溶性の塩を形成することで、ナノ粒子含有フィルムの表面に難水溶性の第１層が形成される。一方、無機塩の水溶液を塗布しないナノ粒子含有フィルムの他方の面（裏面側）は水溶性の第２層となっている。

２価以上の無機塩としては、安価で入手が容易であり、生体への悪影響が少ない炭酸カルシウム（ＣａＣＯ₃）、塩化カルシウム（ＣａＣｌ₂）、炭酸マグネシウム（ＭｇＣＯ₃）、塩化マグネシウム（ＭｇＣｌ₂）等が用いられ、このうち、一般的にアルギン酸との結合性が良好なＣａ²⁺イオンを生成する炭酸カルシウム、塩化カルシウムが好適に用いられる。

ナノ粒子含有フィルムがポリカルボン酸の単層構成である場合は、２価以上の無機塩の水溶液を用いて難水溶化処理を行うと、カチオン性高分子の水溶液を用いて難水溶化処理を行う場合に比べてフィルムの内部まで難水溶化が進み易い。そのため、第１層の層厚が増加する一方、第２層の層厚が減少する傾向となり、第２層からのナノ粒子の放出量も減少するおそれがある。従って、カチオン性高分子の水溶液を用いて難水溶化処理を行う方が好ましい。

また、シート状に固化したナノ粒子含有フィルムの片面にカチオン性高分子の水溶液を塗布することにより難水溶化処理を行う方法の他、カチオン性高分子としてキトサンを用いる場合は、ポリカルボン酸とキトサンの接触界面では瞬時に膜形成されるため、ナノ粒子を分散させたポリカルボン酸の水溶液をシート状に展延し、乾燥する前の湿潤状態で片面をキトサン水溶液と反応させて難水溶化処理を行うこともできる。

一方、ナノ粒子含有フィルムが片面にポリカルボン酸層を有する多層構成である場合は、２価以上の無機塩の水溶液を用いて難水溶化処理を行ってもポリカルボン酸層のみが難水溶化されるため、第２層の層厚は確保される。また、一旦乾燥して固化させた多層構成のナノ粒子含有フィルムを、カチオン性高分子の水溶液、若しくは２価以上の無機塩の水溶液に浸漬して、ポリカルボン酸層のみを選択的に難水溶化することができるため、難水溶化処理が容易になるとともに、処理方法の選択範囲も広くなる。また、ポリカルボン酸層以外の水溶性高分子層の材質を選択することで、ナノ粒子の放出速度を制御することもできる。

次に、上記の方法により難水溶化処理されたナノ粒子含有フィルムを自然乾燥させる（乾燥工程）。そして、乾燥したナノ粒子含有フィルムを成形型や基板から剥がし、必要に応じて外装容器等に密封して薬剤溶出型フィルム製剤とする。

以上のようにして得られた、ポリカルボン酸の単層構成である薬剤溶出型フィルム製剤を、生体内の臓器や組織、粘膜、口腔内等の疾患部位に貼り付けた状態を図１に示す。また、片面にポリカルボン酸層を有する多層構成である薬剤溶出型フィルム製剤を、生体内の臓器や組織、粘膜、口腔内等の疾患部位に貼り付けた状態を図２に示す。

図１及び図２に示すように、薬剤溶出型フィルム製剤１は、難水溶性の第１層２と、水溶性の第２層３が形成されており、第２層３を生体組織（例えば臓器壁細胞）４の疾患部位に対向させて貼り付けられる。これにより、生体内の水分によって第２層３が徐々に溶解し、第２層３から放出したナノ粒子５が疾患部位内へと取り込まれる。そして、疾患部位内でナノ粒子５内部から生理活性物質が徐放される。

また、薬剤溶出型フィルム製剤１は、難水溶性の第１層２によってある程度長期間に亘りフィルム形状が保持される。そのため、薬剤溶出型フィルム製剤１が生体組織４から剥がれ落ち難くなり、長期間に亘ってナノ粒子５を生体組織４内へ送達することができる。さらに、第１層２側からのナノ粒子５の放出が抑制されるため、ナノ粒子５を生体組織４に対向する第２層３側から効率良く放出させることができる。

なお、第１層２は難水溶性ではあるが、生体内の水分により第２層３に比べて非常にゆっくりと溶解する。そのため、薬剤溶出型フィルム製剤１は生体組織４に貼り付けてから所定期間が経過した後には、完全に消失する。従って、生体への負荷の極めて少ない薬剤溶出型フィルム製剤１となる。

さらに、図２のような片面にポリカルボン酸層を有する多層構成である薬剤溶出型フィルム製剤１では、ポリカルボン酸層（第１層２）にはナノ粒子５を分散させずに、ポリカルボン酸以外の水溶性高分子の層（第２層３）のみにナノ粒子５を分散させておくことで、薬剤溶出型フィルム製剤１内の全てのナノ粒子５を、第２層３から生体組織４へ効率良く放出させることができる。

また、封入される生理活性物質の種類が異なる複数種のナノ粒子を作製し、それぞれのナノ粒子をフィルム内に分散させても良い。このとき、薬剤溶出型フィルム製剤１の貼り付け後短時間で溶出させたい生理活性物質はナノ粒子の表面に担持させ、所定時間経過後に溶出させたい生理活性物質はナノ粒子に内包させておけば、２種類以上の生理活性物質の目的に合わせてナノ粒子からの溶出時間を制御できる。また、２種類以上の生理活性物質を、生体適合性高分子の種類や分子量の異なるナノ粒子中に封入して溶出時間を制御しても良い。

さらに、ナノ粒子を分散させる水溶性高分子の水溶液中にも生理活性物質を添加することにより、ナノ粒子外部の水溶性高分子層から成るフィルム中に封入された生理活性物質を疾患部位に即効的に作用させるとともに、ナノ粒子内部に封入された生理活性物質を遅効的且つ持続的に作用させることができる。生理活性物質の種類及び封入量は、生理活性物質の作用機序や、要求される即効性、持続性の程度等により適宜設定することができる。

即ち、投与後長期間に亘る効果の持続性が要求される生理活性物質の場合はナノ粒子内部に封入すれば良く、投与直後より効果の発現が要求される生理活性物質の場合はナノ粒子外部のフィルム中に封入すれば良い。フィルム中に封入される生理活性物質としては、ナノ粒子内部に封入される生理活性物質として例示した種々の生理活性物質を用いることができる。

なお、水溶性の第２層に比べて非常にゆっくりと溶解する難水溶性の第１層中にもナノ粒子を分散させておくか、或いはナノ粒子と共に、またはナノ粒子に代えて生理活性物質を封入しておくことで、より長期間に亘ってナノ粒子または生理活性物質の徐放効果が期待できる薬剤溶出型フィルム製剤となる。

ところで、「フィルム」という名称は、一般に薄膜をいうものであり（理化学辞典、岩波書店）、厚さ１００〜数１００μｍで、巻き芯に巻き取られているロール状のものを指すことが多い。一方、「シート」という名称は、フィルムに比べて厚みが厚く（１〜数ｍｍ）、所定の形状（矩形状等）に切り取られたものを指すことが多く、両者は慣用的に区別されている。本明細書中でいう「フィルム製剤」は、上記の一般的な「フィルム」に限らず、厚みがやや厚いもの、所定の形状に切り取られたものを指す「シート」を含むものである。

その他、本発明は上述した各実施形態に限定されるものではなく、種々の変更が可能であり、異なる実施形態にそれぞれ開示された技術的手段を適宜組み合わせて得られる実施形態についても本発明の技術的範囲に含まれる。以下、蛍光標識物質であるフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）を封入したＰＬＧＡナノ粒子の調製及びそれを分散させた薬剤溶出型フィルム製剤の作製、並びに細胞内への薬物浸透効果について、参考例、実施例、比較例、及び試験例を用いて具体的に説明する。
［ＦＩＴＣ内包ＰＬＧＡナノ粒子の調製］

［参考例］
１重量％のポリビニルアルコール（ＰＶＡ ＥＧ０５、日本合成化学工業製）水溶液２００ｍＬを貧溶媒とした。また、乳酸・グリコール酸共重合体（和光純薬工業製ＰＬＧＡ７５２０）１ｇをアセトン・エタノール混合液（混合比２：１）１２０ｍＬに溶解させ、ここにＦＩＴＣ４０ｍｇを精製水１０ｍＬに溶解させた溶液を添加し、均一に混合し良溶媒とした。

貧溶媒を４０℃、４００ｒｐｍで攪拌下、一定速度（４ｍＬ／分）で良溶媒を滴下した。滴下終了後５分間攪拌したのち、減圧下２００ｒｐｍで攪拌しながら４時間で有機溶媒を留去した。その後、遠心分離操作によって過剰のポリビニルアルコールを除去し、約１日かけて凍結乾燥を行いＦＩＴＣ内包ＰＬＧＡナノ粒子の凍結乾燥粉末１．２ｇを得た。
［ＰＬＧＡナノ粒子含有フィルムの形成］

［実施例１］
アルギン酸ナトリウム（和光純薬工業社製）を水に溶解して２重量％のアルギン酸水溶液を調製した。このアルギン酸水溶液１０ｇに、参考例で調製したＦＩＴＣ封入ＰＬＧＡナノ粒子粉末を分散させたスラリー（２０重量％）１ｇを加えて均一に混合し、ＰＬＧＡナノ粒子含有アルギン酸水溶液とした。

このＰＬＧＡナノ粒子含有アルギン酸水溶液１．０ｍＬをポリプロピレンプレート上に１ｍｍ程度の厚さに展延し、湿潤状態のまま２重量％のキトサン（ＣＨＩＴＯＳＡＮ ＧＨ−４００ＥＦ、日油製）水溶液１．０ｍＬを重ねて展延した。その後、常温、常圧で一晩風乾させることにより、フィルムの片面に難水溶性の面が形成されたＰＬＧＡナノ粒子含有アルギン酸フィルムを作製した。

［実施例２］
２重量％のキトサン水溶液に代えて、１０重量％の塩化カルシウム（和光純薬工業社製）水溶液１．０ｍＬを塗布する以外は実施例１と同様の方法により、フィルムの片面に難水溶性の面が形成されたＰＬＧＡナノ粒子含有アルギン酸フィルムを作製した。

［実施例３］
ポリビニルアルコール（ＰＶＡ ＥＧ０５、日本合成化学工業製）を水に溶解して２重量％のポリビニルアルコール水溶液を調製した。このポリビニルアルコール水溶液４ｇに、参考例で調製したＦＩＴＣ封入ＰＬＧＡナノ粒子粉末を分散させたスラリー（５重量％）１ｇを加えて均一に混合し、ＰＬＧＡナノ粒子含有ポリビニルアルコール水溶液とした。このＰＬＧＡナノ粒子含有ポリビニルアルコール水溶液１．０ｍＬをポリプロピレンプレート上に１ｍｍ程度の厚さに展延し、常温、常圧で一晩風乾させることにより、ＰＬＧＡナノ粒子含有ＰＶＡフィルムを作製した。

上記で作製したＰＬＧＡナノ粒子含有ＰＶＡフィルムの片面に、２重量％のアルギン酸水溶液０．２ｍＬを塗布し、続いて２重量％のキトサン水溶液０．２ｍＬを塗布した。その後、常温、常圧で一晩風乾させることにより、フィルムの片面に難水溶性の面が形成されたＰＬＧＡナノ粒子含有ＰＶＡフィルムを作製した。

[比較例１]
アルギン酸ナトリウム（和光純薬工業社製）を水に溶解して２重量％のアルギン酸水溶液を調製した。このアルギン酸水溶液１０ｇに、参考例で調製したＦＩＴＣ封入ＰＬＧＡナノ粒子粉末を分散させたスラリー（２０重量％）１ｇを加えて均一に混合し、ＰＬＧＡナノ粒子含有アルギン酸水溶液とした。

このＰＬＧＡナノ粒子含有アルギン酸水溶液１．０ｍＬをポリプロピレンプレート上に１ｍｍ程度の厚さに展延し、そのまま常温、常圧で一晩風乾させて、難水溶性の面が形成されていないＰＬＧＡナノ粒子含有アルギン酸フィルムを作製した。

[比較例２]
ポリビニルアルコール（ＰＶＡ ＥＧ０５、日本合成化学工業製）を水に溶解して２重量％のポリビニルアルコール水溶液を調製した。このポリビニルアルコール水溶液４ｇに、参考例で調製したＦＩＴＣ封入ＰＬＧＡナノ粒子粉末を分散させたスラリー（５重量％）１ｇを加えて均一に混合し、ＰＬＧＡナノ粒子含有ポリビニルアルコール水溶液とした。このＰＬＧＡナノ粒子含有ポリビニルアルコール水溶液１．０ｍＬをポリプロピレンプレート上に１ｍｍ程度の厚さに展延し、常温、常圧で一晩風乾させることにより、難水溶性の面が形成されていないＰＬＧＡナノ粒子含有ＰＶＡフィルムを作製した。

[比較例３]
アルギン酸ナトリウム（和光純薬工業社製）を水に溶解して２重量％のアルギン酸水溶液を調製した。このアルギン酸水溶液１０ｇに、参考例で調製したＦＩＴＣ封入ＰＬＧＡナノ粒子を分散させたスラリー（２０重量％）１ｇを加えて均一に混合し、ＰＬＧＡナノ粒子含有アルギン酸水溶液とした。

このＰＬＧＡナノ粒子含有アルギン酸水溶液１．０ｍＬをポリプロピレンプレート上に１ｍｍ程度の厚さに展延し、そのまま常温、常圧で一晩風乾させてフィルムとした後、１０重量％の塩化カルシウム（和光純薬工業社製）水溶液中に浸漬し、再び常温、常圧で一晩風乾させて、フィルムの両面に難水溶性の面が形成されたＰＬＧＡナノ粒子含有アルギン酸フィルムを作製した。

［ＰＬＧＡナノ粒子含有フィルムの貼り付け性評価試験］
［試験例１］
実施例１および比較例１〜３で作製したＰＬＧＡナノ粒子含有フィルムを、それぞれ生体組織に見立てた寒天培地（生理食塩水に１．２重量％の寒天を添加して固化したもの）の表面に貼り付けた。なお、実施例１のＰＬＧＡナノ粒子含有アルギン酸フィルムは、難水溶化しなかった面を寒天培地に貼り付けた。そして、寒天培地に貼り付けられた各フィルムの溶解性を目視により観察した。結果を図３及び図４に示す。

図３に示すように、フィルムの片面のみに難水溶性の面が形成された実施例１のＰＬＧＡナノ粒子含有アルギン酸フィルム（図３の右側）では、寒天培地に貼り付けた後、５分後においてもフィルム形状が保持されていた。

これに対し、難水溶性の面が形成されていない比較例１のＰＬＧＡナノ粒子含有アルギン酸フィルム（図３の左側）では、寒天培地に貼り付けた後、培地表面の水分を吸収してフィルムが溶解し始め、５分後にはフィルムがほぼ溶解した。

また、フィルムの両面に難水溶性の面が形成された比較例３のＰＬＧＡナノ粒子含有アルギン酸フィルム（図３の中央）では、フィルムが寒天培地の水分を吸収しないために培地にうまく貼り付かず、５分後にはフィルム側面からの吸湿によってフィルム全体が収縮変形した。

また、難水溶性の面が形成されていない比較例２のＰＬＧＡナノ粒子含有ＰＶＡフィルムでは、寒天培地に貼り付けた後、培地表面の水分を吸収してフィルムが溶解し始め、３分程度まではフィルム形状を保持していたが、５分後には図４に示すようにフィルムがほぼ溶解し、２０分後には培地を傾斜させると液垂れする程度であった。

［ＰＬＧＡナノ粒子含有フィルムの薬物溶出性評価試験］
［試験例２］

実施例１、２および比較例１、２で作製したＰＬＧＡナノ粒子含有フィルムを、試験例１と同様の方法により寒天培地の表面に貼り付けた。貼り付け直後（０時間）、１時間後、６時間後、及び２４時間後におけるＦＩＴＣの溶出挙動を目視により観察した。結果を図５〜図８に示す。図５〜図８中、右から順に実施例１、比較例１、実施例２のＰＬＧＡナノ粒子含有フィルムを示している。また、実施例１、２、および比較例１、２のフィルムの組成を表１に示す。

※含有率不明
※※遠心分離処理粒子のため、粒子由来のＰＶＡは０％と仮定

図５〜図８に示すように、実施例１、２、及び比較例１のＰＬＧＡナノ粒子含有アルギン酸フィルムのいずれからも、ＦＩＴＣ含有ナノ粒子が寒天培地中へ徐々に放出され、６時間経過後には寒天培地全体にＦＩＴＣが広がっているのが確認された。特に、フィルムの片面のみに難水溶性の面が形成された実施例１、２のＰＬＧＡナノ粒子含有アルギン酸フィルムでは、２４時間経過後もフィルム形状が保持されていた。

また、図示しないが、難水溶性の面が形成されていない比較例２のＰＬＧＡナノ粒子含有ＰＶＡ酸フィルムからも、ＦＩＴＣ含有ナノ粒子が寒天培地中へ徐々に放出され、２４時間経過後には寒天培地全体にＦＩＴＣが広がっているのが確認された。

以上から、ＰＬＧＡナノ粒子含有アルギン酸フィルムの片面のみに難水溶性の面を形成し、難水溶化しなかった面を生体組織に貼り付けることにより、生体組織に対するフィルムの密着性が良好であり、且つ、貼り付け後長期間に亘ってフィルムの形状が保持されるため、ナノ粒子の生体組織への取り込み性が向上することが確認された。

なお、上記の試験例ではアルギン酸から成る単層構成のＰＬＧＡナノ粒子含有フィルムを用いて試験を行ったが、ＰＶＡフィルムの片面にアルギン酸水溶液を塗布してアルギン酸層を形成し、アルギン酸層にキトサン水溶液を塗布して難水溶性の面を形成した実施例３のＰＬＧＡナノ粒子含有フィルムを用いた場合についても同様の結果が得られるものと推認される。また、ここではナノ粒子内部に蛍光物質であるＦＩＴＣを封入し、細胞内への浸透効果について調査したが、ＦＩＴＣ以外の種々の生理活性物質を封入した場合についても同様に優れた浸透効果が期待できる。

本発明は、生体内の疾患部位に直接貼り付けて使用する薬剤溶出型フィルム製剤に利用可能である。本発明の利用により、生理活性物質を内包したナノ粒子を長期間に亘って疾患部位へ効率よく送達することができ、安全性が高く、安定性、徐放性にも優れた薬剤溶出型フィルム製剤を簡単な方法で提供することができる。

１ 薬剤溶出型フィルム製剤
２ 第１層
３ 第２層
４ 生体組織
５ ナノ粒子

Claims (7)

1. 生体適合性の水溶性高分子で形成されたフィルムと、
   該フィルム内に分散され、生理活性物質が封入された生体適合性ナノ粒子と、
   を含む薬剤溶出型フィルム製剤であって、
   前記フィルムは、一方の面にポリカルボン酸層をカチオン性高分子の水溶液、若しくは２価以上の無機塩の水溶液で難水溶化処理して形成される第１層を有し、他方の面に前記ポリカルボン酸以外の水溶性高分子で形成される第２層を有する多層構成であり、
   前記生体適合性ナノ粒子が、前記第２層のみに分散されていることを特徴とする薬剤溶出型フィルム製剤。
2. 前記カチオン性高分子が、キトサンであることを特徴とする請求項１に記載の薬剤溶出型フィルム製剤。
3. 前記無機塩が、炭酸カルシウム、塩化カルシウムから選ばれた１種以上であることを特徴とする請求項１に記載の薬剤溶出型フィルム製剤。
4. 前記ポリカルボン酸が、アルギン酸であることを特徴とする請求項１乃至請求項３のいずれかに記載の薬剤溶出型フィルム製剤。
5. 前記生体適合性ナノ粒子を形成する生体適合性高分子が、乳酸・グリコール酸共重合体であることを特徴とする請求項１乃至請求項４のいずれかに記載の薬剤溶出型フィルム製剤。
6. 前記生理活性物質が、抗がん剤、免疫抑制剤、抗炎症剤、鎮痛剤、血管拡張剤、癒着防止剤、核酸化合物、受容体チロシンキナーゼ阻害剤から選ばれた１種以上であることを特徴とする請求項１乃至請求項５のいずれかに記載の薬剤溶出型フィルム製剤。
7. ポリビニルアルコールを溶解させた水溶液に、少なくとも生理活性物質の溶液と生体適合性高分子を有機溶媒に溶解させた溶液との混合液を加えて、前記生理活性物質が前記生体適合性高分子中に封入された生体適合性ナノ粒子を形成するナノ粒子形成工程と、
   生体適合性の水溶性高分子の水溶液に前記生体適合性ナノ粒子を分散させてシート状に展延することによりナノ粒子含有水溶性フィルムを形成し、該ナノ粒子含有水溶性フィルムの片面にポリカルボン酸の水溶液を塗布して多層構成のナノ粒子含有フィルムを形成するフィルム形成工程と、
   前記ナノ粒子含有フィルムの片面のポリカルボン酸層をカチオン性高分子の水溶液、若しくは２価以上の無機塩の水溶液で処理することにより、前記ナノ粒子含有フィルムの一方の面に難水溶性の第１層を形成する難水溶化工程と、
   一方の面に前記第１層が形成され、他方の面に前記生体適合性ナノ粒子が分散された水溶性の第２層が形成された前記ナノ粒子含有フィルムを乾燥させる乾燥工程と、
   を有することを特徴とする薬剤溶出型フィルム製剤の製造方法。