JP5912972B2 - 液体クロマトグラフ、溶出時間導出装置、溶出時間導出用プログラム、溶出時間導出方法、混合比決定装置、混合比決定用プログラム、及び、混合比決定方法 - Google Patents
液体クロマトグラフ、溶出時間導出装置、溶出時間導出用プログラム、溶出時間導出方法、混合比決定装置、混合比決定用プログラム、及び、混合比決定方法 Download PDFInfo
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Description
本発明は、液体クロマトグラフ、溶出時間導出装置、溶出時間導出用プログラム、溶出時間導出方法、混合比決定装置、混合比決定用プログラム、及び、混合比決定方法に関する。
液体クロマトグラフィにおいては、固定相が充填されたカラムに、複数の成分を有する試料、及び、所定の混合比で混合された複数の溶媒からなる移動相に相当する溶離液が流される。このとき、溶離液とともにカラムに流入した試料は、カラムに充填された固定相に吸着しつつ溶離液の流下に伴って移動し、所定時間後にカラムから排出される。ここで、試料に含まれた各成分が排出されるのに要する時間は、溶離液との親和性及びカラムの固定相と各成分との相互作用などに依存し、成分ごとに異なる。つまり、溶離液との親和性が弱いもの及び固定相との相互作用が強いものは、カラム内に長く留まる。また、逆に、溶離液との親和性が強いもの及び固定相との相互作用が弱いものは、早く排出される。これによって、カラムを通過する試料が成分ごとに分離されて溶出する。
液体クロマトグラフィを行うに当たって、溶媒の混合比が与えられているときに試料中の各成分の溶出時間を事前に高精度に知ること、またこれとは逆に、所定の溶出時間で成分を溶出させるための複数の溶媒の混合比を事前に高精度に知ることが求められている。特許文献１は、当該溶出時間を、溶離液がカラムに流入し始めてから流出し始めるまでの時間ｔ0、試料がカラムに流入し始めた時刻からの経過時間である時刻ｔ、時刻ｔの関数である試料中の成分ｃの移動度Ｒｆ ｃ（ｔ／ｔ0）を用いて以下の式（１）によって導出する技術が開示されている。
特許文献１に記載された技術では、２つの溶媒の混合比が第１の混合比からこの第１の混合比よりも大きい第２の混合比まで時刻Ｔ０から時刻Ｔ１にかけて直線的に変化する場合、横軸を試料がカラムに流入し始めた時刻からの経過時間、縦軸を移動度Ｒｆ ｃ（ｔ／ｔ0）としたときに、移動度が傾斜直線で表されるとして溶出時間を導出している。ここで、長さＬ0のカラムに溶離液が流入し始めてからカラムから流出し始めるまでの時間をｔ0としたときに、時間ｔ0間における成分の移動距離がＬであるとすると、当該成分の移動度Ｒfは、Ｌ／Ｌ0と表すことができる。
本発明者は、特許文献１の技術にしたがって導出された試料内の各成分の溶出時間が、実測された溶出時間からわずかにずれることを知見した。したがって、より高精度に溶出時間を予測することが求められている。同様に、所定の溶出時間で試料に含まれる成分を溶出させるための２つの溶媒の混合比の変化率を事前に高精度に知ることも求められている。
本発明の目的は、液体クロマトグラフィにおいて試料に含まれる各成分の溶出時間をより高精度に導出できる液体クロマトグラフ、溶出時間導出装置、溶出時間導出用プログラム、及び、溶出時間導出方法を提供することである。
本発明の別の目的は、液体クロマトグラフィにおいて試料に含まれる成分を所定の溶出時間で溶出させるための２つの溶媒の混合比の変化率をより高精度に導出できる液体クロマトグラフ、混合比決定装置、混合比決定用プログラム、及び、混合比決定方法を提供することである。
本発明の液体クロマトグラフは、第１の混合比から前記第１の混合比よりも大きい第２の混合比まで時刻Ｔ０から時刻Ｔ１にかけて直線的に変化する２つの溶媒の混合比の変化率を記憶する混合比変化率記憶手段と、前記混合比変化率記憶手段が記憶した前記変化率に従って前記２つの溶媒の混合比が変化する溶離液を生成する混合手段と、複数の成分からなる試料及び前記混合手段が生成した前記溶離液が通過するカラムと、前記溶離液が前記カラムに流入し始めてから前記溶離液が前記カラムから流出し始めるまでの時間がｔ0で表される場合に、前記試料に含まれる成分ｃの移動度を、前記試料が前記カラムに流入し始めた時刻からの経過時間である時刻ｔの関数Ｒｆ ｃ（ｔ／ｔ0）として記憶する移動度記憶手段と、前記試料が前記カラムに流入し始めてから前記成分ｃが前記カラムから溶出するまでの溶出時間ｔｒ ｃを式（１）から導出する溶出時間導出手段とを備えており、前記移動度記憶手段に記憶された移動度Ｒｆ ｃ（ｔ／ｔ0）が式（２）で表されることを特徴とする液体クロマトグラフである。
（ａは混合比の変化率，ｂは初期移動度に関連した定数）
後述する実施形態においては、混合比記憶部２１ａに記憶されたデータの一部が混合比の変化率ａとして移動度記憶部２１ｃに記憶される。混合比と移動度とは比例関係にある。また、定数ｂは、初期移動度Ｒｆ０から導くことができ、ｂ＝ｌｎ（１−Ｒｆ０）である。ｂは薄層クロマトグラィ（ＴＬＣ）又はカラムを用いた液体クロマトグラフィを行うことによって実測できる。薄層クロマトグラフィを行うことによって得られた定数ｂと、カラムを用いた液体クロマトグラフィを行うことによって得られた定数ｂは、実質的に同じとなる。これは、特許文献１の段落００７３及び００８０に記載されているように、薄層クロマトグラフィと液体クロマトグラフィとの間には、ｔ0／ｔｒ ｃ＝Ｒｆ ｃという関係があるからである。
本発明の溶出時間導出装置は、２つの溶媒の混合比が直線的に変化するように混合比を変えつつ前記２つの溶媒を混合して溶離液を順次生成し、生成した前記溶離液及び複数の成分からなる試料をカラムに通過させて行う液体クロマトグラフィにおいて、前記試料が前記カラムに流入し始めてから前記試料に含まれる成分ｃが前記カラムから溶出するまでの溶出時間ｔｒ ｃを導出する溶出時間導出装置であって、第１の混合比から前記第１の混合比よりも大きい第２の混合比まで時刻Ｔ０から時刻Ｔ１にかけて直線的に変化する２つの溶媒の混合比の変化率を記憶する混合比変化率記憶手段と、前記溶離液が前記カラムに流入し始めてから前記溶離液が前記カラムから流出し始めるまでの時間がｔ0で表される場合に、前記試料に含まれる前記成分ｃの移動度を、前記試料が前記カラムに流入し始めた時刻からの経過時間である時刻ｔの関数Ｒｆ ｃ（ｔ／ｔ0）として記憶する移動度記憶手段と、前記成分ｃに係る溶出時間ｔｒ ｃを式（１）から導出する溶出時間導出手段とを備えており、前記移動度記憶手段に記憶された移動度Ｒｆ ｃ（ｔ／ｔ0）が式（２）で表されることを特徴とする溶出時間導出装置である。
（ａは混合比の変化率，ｂは初期移動度に関連した定数）
本発明の溶出時間導出方法は、第１の混合比から前記第１の混合比よりも大きい第２の混合比まで時刻Ｔ０から時刻Ｔ１にかけて直線的に変化するように２つの溶媒の混合比を変えつつ前記２つの溶媒を混合して溶離液を順次生成し、生成した前記溶離液及び複数の成分からなる試料をカラムに通過させて行う液体クロマトグラフィにおいて、前記試料が前記カラムに流入し始めてから前記試料に含まれる成分ｃが前記カラムから溶出するまでの溶出時間ｔｒ ｃを導出する溶出時間導出方法であって、前記溶離液が前記カラムに流入し始めてから前記溶離液が前記カラムから流出し始めるまでの時間をｔ0、前記試料に含まれる前記成分ｃの移動度を、前記試料が前記カラムに流入し始めた時刻からの経過時間である時刻ｔの関数Ｒｆ ｃ（ｔ／ｔ0）とした場合に、前記成分ｃに係る溶出時間ｔｒ ｃを式（１）から導出するステップを備えており、移動度Ｒｆ ｃ（ｔ／ｔ0）が式（２）で表されることを特徴とする溶出時間導出方法である。
（ａは混合比の変化率，ｂは初期移動度に関連した定数）
本発明者が確認したところによると、本発明によって、特許文献１に開示された技術よりもより高精度に溶出時間ｔｒ ｃを導出できることが分かった。これは、式（２）がカラム内において成分のバンドが存在している場所での混合比をより正確に反映しているからであると推察される。
別の観点において、本発明の液体クロマトグラフは、第１の混合比から前記第１の混合比よりも大きい第２の混合比まで時刻Ｔ０から時刻Ｔ１にかけて直線的に変化する混合比で２つの溶媒を混合して溶離液を順次生成する混合手段と、複数の成分からなる試料及び前記混合手段が生成した前記溶離液が通過するカラムと、前記複数の成分からなる前記試料が前記カラムに流入し始めてから前記試料に含まれる成分ｃが前記カラムから溶出するまでの溶出時間ｔr cを記憶する溶出時間記憶手段と、前記溶離液が前記カラムに流入し始めてから前記溶離液が前記カラムから流出し始めるまでの時間がｔ0で表される場合に、前記試料に含まれる前記成分ｃの移動度を、前記試料が前記カラムに流入し始めた時刻からの経過時間である時刻ｔの関数Ｒｆc（ｔ／ｔ0）として記憶する移動度記憶手段と、前記溶出時間記憶手段に記憶された前記成分ｃに係る溶出時間ｔr cに対して、式（１）を満たすように前記混合比の変化率ａ及び初期移動度に関連した定数ｂを導出し、前記成分ｃに係る移動度Ｒｆc（ｔ／ｔ0）を求める移動度決定手段とを備えており、前記移動度記憶手段に記憶された移動度Ｒｆc（ｔ／ｔ0）が式（２）で表されることを特徴とする液体クロマトグラフである。
（ａは混合比の変化率，ｂは初期移動度に関連した定数）
別の観点において、本発明の混合比決定装置は、第１の混合比から前記第１の混合比よりも大きい第２の混合比まで時刻Ｔ０から時刻Ｔ１にかけて直線的に変化するように２つの溶媒の混合比を変えつつ前記２つの溶媒を混合して溶離液を順次生成し、生成した前記溶離液及び複数の成分からなる試料をカラムに通過させて行う液体クロマトグラフィにおいて、前記試料が前記カラムに流入し始めてから前記試料に含まれる成分ｃが前記カラムから溶出するまでの溶出時間ｔｒ ｃに対する前記成分ｃに係る移動度Ｒｆ ｃ（ｔ／ｔ0）を求める移動度決定装置であって、前記成分ｃに係る溶出時間ｔｒ ｃを記憶する溶出時間記憶手段と、前記溶離液が前記カラムに流入し始めてから前記溶離液が前記カラムから流出し始めるまでの時間がｔ0で表される場合に、前記試料に含まれる成分ｃの移動度を、前記試料が前記カラムに流入し始めた時刻からの経過時間である時刻ｔの関数Ｒｆ ｃ（ｔ／ｔ0）として記憶する移動度記憶手段と、前記成分ｃに係る溶出時間ｔｒ ｃに対して、式（１）を満たすように前記混合比の変化率ａ及び初期移動度に関連した定数ｂを導出し、前記成分ｃに係る移動度Ｒｆ ｃ（ｔ／ｔ0）を求める移動度決定手段とを備えており、前記移動度記憶手段に記憶された移動度Ｒｆ ｃ（ｔ／ｔ0）が式（２）で表されることを特徴とする混合比決定装置である。
（ａは混合比の変化率，ｂは初期移動度に関連した定数）
別の観点において、本発明の混合比決定方法は、
第１の混合比から前記第１の混合比よりも大きい第２の混合比まで時刻Ｔ０から時刻Ｔ１にかけて直線的に変化するように２つの溶媒の混合比を変えつつ前記２つの溶媒を混合して溶離液を順次生成し、生成した前記溶離液及び複数の成分からなる試料をカラムに通過させて行う液体クロマトグラフィにおいて、前記試料が前記カラムに流入し始めてから前記試料に含まれる成分ｃが前記カラムから溶出するまでの溶出時間ｔｒ ｃに対する前記成分ｃに係る移動度Ｒｆ ｃ（ｔ／ｔ0）を求める移動度決定方法であって、前記溶離液が前記カラムに流入し始めてから前記溶離液が前記カラムから流出し始めるまでの時間をｔ0、前記試料に含まれる前記成分ｃの移動度を、前記試料が前記カラムに流入し始めた時刻からの経過時間である時刻ｔの関数Ｒｆ ｃ（ｔ／ｔ0）とした場合に、前記成分ｃの溶出時間ｔｒ ｃに対する前記混合比の変化率ａ及び初期移動度に関連した定数ｂを式（１）から導出することによって、前記成分ｃに係る移動度Ｒｆ ｃ（ｔ／ｔ0）を求めるステップを備えており、移動度Ｒｆ ｃ（ｔ／ｔ0）が式（２）で表されることを特徴とする混合比決定方法である。
（ａは混合比の変化率，ｂは初期移動度に関連した定数）
第１の混合比から前記第１の混合比よりも大きい第２の混合比まで時刻Ｔ０から時刻Ｔ１にかけて直線的に変化するように２つの溶媒の混合比を変えつつ前記２つの溶媒を混合して溶離液を順次生成し、生成した前記溶離液及び複数の成分からなる試料をカラムに通過させて行う液体クロマトグラフィにおいて、前記試料が前記カラムに流入し始めてから前記試料に含まれる成分ｃが前記カラムから溶出するまでの溶出時間ｔｒ ｃに対する前記成分ｃに係る移動度Ｒｆ ｃ（ｔ／ｔ0）を求める移動度決定方法であって、前記溶離液が前記カラムに流入し始めてから前記溶離液が前記カラムから流出し始めるまでの時間をｔ0、前記試料に含まれる前記成分ｃの移動度を、前記試料が前記カラムに流入し始めた時刻からの経過時間である時刻ｔの関数Ｒｆ ｃ（ｔ／ｔ0）とした場合に、前記成分ｃの溶出時間ｔｒ ｃに対する前記混合比の変化率ａ及び初期移動度に関連した定数ｂを式（１）から導出することによって、前記成分ｃに係る移動度Ｒｆ ｃ（ｔ／ｔ0）を求めるステップを備えており、移動度Ｒｆ ｃ（ｔ／ｔ0）が式（２）で表されることを特徴とする混合比決定方法である。
本発明者が確認したところによると、本発明によって、所望溶出時間に対する成分の移動度を特許文献１に開示された技術よりもより高精度に導出できることが分かった。これは、式（２）がカラム内において成分のバンドが存在している場所での混合比をより正確に反映しているからであると推察される。
本発明による上述の溶出時間導出用プログラム及び混合比決定用プログラムは、コンピュータを溶出時間導出装置及び混合比決定装置として機能させることが可能なプログラムである。本発明の溶出時間導出用プログラム及び混合比決定用プログラムは、ＣＤ−ＲＯＭ（Compact Disc Read Only Memory）ディスク、フレキシブルディスク（ＦＤ）、ＭＯ（Magneto Optical）ディスクなどのリムーバブル型記録媒体や、ハードディスクなどの固定型記録媒体のような記録媒体に記録して配布可能である他、有線又は無線の電気通信手段によってインターネットなどの通信ネットワークを介して配布可能である。ここで、コンピュータは、パーソナルコンピュータのような汎用型に限らず、溶出時間導出又は混合比決定のために特化した装置であってもよい。
本発明によると、試料に含まれる各成分の溶出時間を事前に高精度に知ること、つまり予測ができるため、複数の成分の分離の程度をユーザが例えば目視で容易に事前に把握することが可能となり、混合比の変化率を評価することができる。また、分離精製に用いられるカラムとして最適なサイズのものを選択することが可能になる。
また、本発明によると、所望溶出時間に対する成分に係る移動度を高精度に導出することができるので、成分の分離に十分な溶出時間が確保された、短い溶出時間での液体クロマトグラフィが可能となる。
［第１実施形態］
まず、好適な実施形態の一例である第１実施形態が提示される。図１は、第１実施形態に係る液体クロマトグラフ１１の概略構成図である。
まず、好適な実施形態の一例である第１実施形態が提示される。図１は、第１実施形態に係る液体クロマトグラフ１１の概略構成図である。
＜液体クロマトグラフの概略構成＞
液体クロマトグラフ１１は、溶媒Ａ及びＢをそれぞれ貯留した容器１２及び１３、電磁弁１４、ポンプＰ１、並びに、容器１５（以上、混合手段）を有している。容器１２及び１３が貯留した溶媒Ａ及びＢは、ポンプＰ１によって汲み上げられ、いったん容器１５に貯留される。このとき、汲み上げられる溶媒Ａ及びＢのそれぞれの量は、電磁弁１４によって調節されている。これによって、電磁弁１４によって調節された混合比で溶媒Ａ及びＢが混合され、容器１５において移動相となる溶離液１０が形成される。
液体クロマトグラフ１１は、溶媒Ａ及びＢをそれぞれ貯留した容器１２及び１３、電磁弁１４、ポンプＰ１、並びに、容器１５（以上、混合手段）を有している。容器１２及び１３が貯留した溶媒Ａ及びＢは、ポンプＰ１によって汲み上げられ、いったん容器１５に貯留される。このとき、汲み上げられる溶媒Ａ及びＢのそれぞれの量は、電磁弁１４によって調節されている。これによって、電磁弁１４によって調節された混合比で溶媒Ａ及びＢが混合され、容器１５において移動相となる溶離液１０が形成される。
溶離液として用いられる溶媒は２種類に限定されず、使用状態・目的に応じてその数が増やされる。一般に、溶媒Ａ及びＢには、非極性分子及び極性分子が用いられる。
液体クロマトグラフ１１は、さらに、ポンプＰ２、インジェクター１７、及び、カラム１８を有している。ポンプＰ２は、容器１５に貯留された溶離液１０を汲み上げて、インジェクター１７へと流し出す。インジェクター１７には、複数の成分を含んでいる試料が設置されている。インジェクター１７に設置された試料は、ポンプＰ２によって汲み上げられた溶離液とともに、カラム１８へと流し出される。
カラム１８には、固定相が充填されている。本実施形態においては、固定相にはシリカゲルが用いられている。移動相である溶離液１０とともにカラム１８に流入した試料は、カラム１８の固定相に吸着しつつ溶離液１０の流下に従って移動し、所定時間後にカラムから排出される。ここで、試料に含まれた各成分が排出されるのに要する時間は、溶離液との親和性やカラムの固定相と各成分との相互作用などに依存し、成分ごとに異なる。つまり、溶離液との親和性が弱いもの、及び、固定相との相互作用が強いものは、カラム内に長く留まる。また、逆に、溶離液との親和性が強いもの、及び、固定相との相互作用が弱いものは、早く排出される。これによって、カラムに設置された試料が成分ごとに分離されて溶出する。
なお、カラムは一本に限定されない。複数のカラムが並設されており、例えば、複数種類の液体クロマトグラフィが可能となるように、選択的に経路を選ぶことができるような構成とされていてもよい。
液体クロマトグラフ１１は、さらに、検知器１９及びフラクションコレクター２０を有している。検知器１９は、カラム１８から溶出される試料の各成分を検知する。フラクションコレクター２０は、検知器１９の検知結果に基づいて、試料に含まれる各成分をそれぞれ異なる試験管に収容する。
液体クロマトグラフ１１は、さらに、液体クロマトグラフ制御装置２１を有している。液体クロマトグラフ制御装置２１は電磁弁１４に電気的に接続されている。そして、液体クロマトグラフ制御装置２１は、後述のように、電磁弁１４を制御して、溶媒Ａ及びＢの混合比を調節する。また、液体クロマトグラフ制御装置２１は、図示されないポンプＰ１及びＰ２の駆動モータに電気的に接続されており、ポンプＰ１及びＰ２の駆動を制御する。
＜液体クロマトグラフィの概略＞
上記のような構成を有する液体クロマトグラフ１１によって、液体クロマトグラフィが以下のように行われる。
上記のような構成を有する液体クロマトグラフ１１によって、液体クロマトグラフィが以下のように行われる。
まず、容器１２及び１３に溶媒Ａ及びＢが貯留される。そして、インジェクター１７に試料が設置される。
次に、液体クロマトグラフ制御装置２１が、電磁弁１４を制御して混合比を調節しつつ、ポンプＰ１の駆動を制御して、ポンプＰ１に溶媒Ａ及びＢを汲み上げさせる。このとき、液体クロマトグラフ制御装置２１は、例えば、図２に示されるグラフ２５に従って混合比を調節する。汲み上げられた溶媒Ａ及びＢは、調節された混合比で混合され、溶離液１０として、いったん容器１５に貯留される。
グラフ２５は、溶媒Ａ及びＢの混合比の時間変化を表したものである。グラフ横軸は経過時間、縦軸は、溶媒Ａ及びＢ全体の質量に対する溶媒Ｂの質量の割合である。グラフ２５に示されるように、時間帯２８が、Ｇ（gradient）、Ｔ（top）、ＦＷ（forward wash）、ＥＱ（equilibration）（ＥＱのみ図示されず）の順に設定されている。
グラフ２５に示されるように、溶媒Ａ及びＢの混合比は、時間帯Ｇにおいて直線的に増加するように経時変化する。時間帯Ｔ及びＦＷでは混合比が一定である。
表２７は、時間帯２８の各時間帯ごとの溶媒Ａ及びＢにおける混合比の設定例を示している。表２７に示される設定例によると、溶媒Ａの質量：溶媒Ｂの質量が、時間帯Ｇの開始時では、８０：２０に、時間帯Ｔ、ＦＷ及びＥＱでは、７４：２６に、それぞれ設定されている。
次に、液体クロマトグラフ制御装置２１が、ポンプＰ２の駆動を制御して、ポンプＰ２に容器１５に貯留された溶離液１０を汲み上げさせる。汲み上げられた溶離液１０は、インジェクター１７に設置された試料とともに、カラム１８に流入する。カラム１８に流入した試料に含まれる各成分は、成分ごとに分離され、所定時間経過後にカラム１８から溶出する。
グラフ２６は、カラム１８から流出する試料の溶出曲線である。グラフ横軸は経過時間、縦軸は吸光度である。カラム１８から溶出した試料に含まれる各成分がピークに達するごとに、溶出曲線は突出した値を示す。グラフ２６は、このような突出値ＰＫ１及びＰＫ２を示している。
なお、液体クロマトグラフ制御装置２１が、図示されない表示装置を有しており、グラフ２５及び５２、並びに、表２７をその表示装置に表示させるようなものであってもよい。
なお、本明細書において、「試料中の成分がカラムから溶出する時」とは、カラム１８から溶出される試料中の成分の単位時間当たりの量が最大となる時にほぼ相当するものである。
＜液体クロマトグラフ制御装置＞
以下は、液体クロマトグラフ制御装置２１についての説明である。図３は、液体クロマトグラフ制御装置２１が有している各制御部の構成を示している。
以下は、液体クロマトグラフ制御装置２１についての説明である。図３は、液体クロマトグラフ制御装置２１が有している各制御部の構成を示している。
液体クロマトグラフ制御装置２１の機能は、汎用のコンピュータ及び所定のプログラムによって実現されている。このコンピュータには、ＣＰＵ、ＲＯＭ、ＲＡＭ、ハードディスク、ＦＤやＣＤの駆動装置などのハードウェアが収納されており、ハードディスクには、このコンピュータを液体クロマトグラフ制御装置として機能させるためのプログラム（このプログラムは、ＣＤ−ＲＯＭ、ＦＤ、ＭＯなどのリムーバブル型記録媒体に記録しておくことにより、任意のコンピュータにインストールすることが可能である）を含む各種のソフトウェアが記憶されている。そして、これらのハードウェア及びソフトウェアが組み合わされることによって、以下に説明する記憶部５１及び制御処理部５２が構築されている。
液体クロマトグラフ制御装置２１は、混合比記憶部２１ａ、溶出時間導出部２１ｂ、移動度記憶部２１ｃ、及び、混合制御部２１ｄを有している。
混合比記憶部２１ａは、溶離液１０を構成する溶媒の経時変化する混合比を示すデータ、つまり時間帯Ｇ、Ｔ及びＦＷにおける混合比を記憶する。この混合比を示すデータは、液体クロマトグラフ１１による液体クロマトグラフィに先立って入力されるものである。このデータには、図２のグラフ２５に示される時間帯Ｇにおける混合比の変化率（時間帯Ｇの開始時刻及びそのときの混合比と、終了時刻及びそのときの混合比との組み合わせであってもよい）が含まれる。時間帯Ｇにおける混合比はある混合比からこれより大きい混合比へと直線的に変化している。なお、混合比記憶部２１ａが複数種類の経時変化する混合比を示すデータを記憶しており、液体クロマトグラフィを実行する際に、その中から一種類のデータがクロマトグラフィの実行者に選ばれるようになっていてもよい。
溶出時間導出部２１ｂは、試料がカラム１８に流入し始めてから試料に含まれる各成分がカラム１８から溶出するまでの溶出時間ｔｒ ｃを式（１）から事前にそれぞれ導出（予測）する。溶出時間は、各成分の移動距離がカラムの全長Ｌに等しくなる時間である。本実施の形態において、試料がカラム１８に流入し始めるのは時間帯Ｇ内の時刻であって、各成分がカラム１８から溶出する時刻も時間帯Ｇ内の時刻であるとする。式（１）において、ｔは試料がカラム１８に流入し始めた時刻からの経過時間であり、ｔ0は溶離液がカラム１８に流入し始めてからカラム１８から流出し始めるまでの時間である。また、式（１）に記載されている移動度Ｒｆ ｃ（ｔ／ｔ0）は、移動度記憶部２１ｃに記憶されており、式（２）で表される。また、式（２）を式（１）に代入して積分を実行した結果は式（３）で表される。
式（２）において、ａは混合比の変化率を表しており、混合比記憶部２１ａに記憶されたデータの一部が混合比の変化率ａとして移動度記憶部２１ｃに記憶される。混合比と移動度とは比例関係にある。また、ｂは初期移動度Ｒｆ０によって決まる定数である。より詳細には、定数ｂは、初期移動度Ｒｆ０から導くことができ、ｂ＝ｌｎ（１−Ｒｆ０）である。ｂは薄層クロマトグラィ（ＴＬＣ）又はカラムを用いた液体クロマトグラフィを行うことによって実測できる。薄層クロマトグラフィを行うことによって得られた定数ｂと、カラムを用いた液体クロマトグラフィを行うことによって得られた定数ｂは、実質的に同じとなる。これは、特許文献１の段落００７３及び００８０に記載されているように、薄層クロマトグラフィと液体クロマトグラフィとの間には、ｔ0／ｔｒ ｃ＝Ｒｆ ｃという関係があるからである。
図４は、ｔ／ｔ0に対する移動度Ｒｆ ｃ（ｔ／ｔ0）の変化の様子を表したグラフである。一般に液体クロマトグラフィにおいては、ａを混合比の変化率、Ｒｆ０を初期移動度（定数）としたとき、移動度Ｒｆ ｃ（ｔ／ｔ0）は図４において破線で示された直線ａ（ｔ／ｔ0）＋Ｒｆ０となる。一方、式（２）で表される移動度Ｒｆ ｃ（ｔ／ｔ0）は、実線で示された曲線となって、直線よりもやや下方に位置する。式（２）において定数ｂは、ｔ＝０のときに成り立つ等式Ｒｆ０＝１−ｅｂから導くことができる。
上記式（１）及び（２）を用いて導出された溶出時間は、実測された導出時間とのずれが少ない高精度なものであることが確認された（後述の実施例参照）。これは、図４の破線がカラム１８の入口での混合比を示しているに過ぎないのに対して、式（２）で表される移動度曲線がカラム１８内において成分ｃのバンドが存在している場所での混合比をより正確に反映しているからであると推察される。
混合制御部２１ｄは電磁弁１４及びポンプＰ１と電気的に接続されている（図１参照）。混合制御部２１ｄは、混合比記憶部２１ａが記憶している経時変化する混合比に従って電磁弁１４及びポンプＰ１を制御する。これによって、混合比記憶部２１ａが記憶している経時変化する混合比に従って溶媒が混合され、溶離液１０が形成される。なお、混合比記憶部２１ａが記憶する混合比データは、溶出時間導出部２１ｂが溶出時間を導出した後に、ユーザによって書き換えられたものであってもよい。
＜液体クロマトグラフィの流れ＞
次に、液体クロマトグラフ１１によって行われる液体クロマトグラフィの流れについて、図５を参照して説明する。
次に、液体クロマトグラフ１１によって行われる液体クロマトグラフィの流れについて、図５を参照して説明する。
まず、ステップＳ１において、ユーザが時間帯Ｇにおける混合比の変化率を決定し、それを図示しない入力装置を用いて液体クロマトグラフ制御装置２１に入力する。入力された変化率は、混合比記憶部２１ａに記憶される。そして、ステップＳ２において、溶出時間導出部２１ｂが、上記式（１）及び（２）を用いて試料に含まれる各成分ｃの溶出時間を導出する。導出された各成分ｃの溶出時間を例えばグラフ（ピーク位置が描かれたもの）としてディスプレイに表示することによって、ユーザによる分離の程度の目視確認が容易になる。
ステップＳ３では、ステップＳ２で導出された各成分ｃの溶出時間に基づいて、液体クロマトグラフ制御装置２１が最適なカラム１８のサイズを選択し、それをディスプレイに表示する。ステップＳ２で導出された溶出時間が所望時間からかけ離れている場合には、さらにステップＳ３において、混合比記憶部２１ａに記憶された混合比の変化率を変更する。この場合、ステップＳ２を再度行ってもよい。そして、ステップＳ４では、混合制御部２１ｄが、混合比記憶部２１ａに記憶された混合比の変化率を用いて、液体クロマトグラフィを実行する。
本実施の形態によると、試料に含まれる各成分の溶出時間を事前に高精度に知ることができるため、複数の成分の分離の程度をユーザが例えば目視で容易に事前に把握することが可能となり、混合比の変化率を評価することができる。そのためには、混合比記憶部２１ａに記憶された混合比の変化率を変更して複数の混合比の変化率について各成分の溶出時間を導出することで、その結果をクロマトグラムに表示させることが好ましい。また、この結果を用いれば、分離精製に用いられるカラムとして最適なサイズのものを選択することが可能になる。
［第２実施形態］
以下は、本発明の好適な実施形態の他の例である第２実施形態についての説明である。第２実施形態は第１実施形態と同様の構成を多く含むため、以下の説明においては、第１実施形態と同様の構成については適宜省略される。
以下は、本発明の好適な実施形態の他の例である第２実施形態についての説明である。第２実施形態は第１実施形態と同様の構成を多く含むため、以下の説明においては、第１実施形態と同様の構成については適宜省略される。
第２実施形態の液体クロマトグラフは、第１実施形態とほぼ同様の構成を有している。しかし、図６に示すように、第２実施形態の液体クロマトグラフ制御装置１２１は、第１実施形態の液体クロマトグラフ制御装置２１と異なる構成を有している。
液体クロマトグラフ制御装置１２１は、溶出時間記憶部１２１ａ、移動度導出部１２１ｂ、移動度記憶部１２１ｃ及び混合制御部１２１ｄを有している。このうち、混合制御部１２１ｄは、第１実施形態と同様のものである。
溶出時間記憶部１２１ａは試料中の目的とする任意の一成分（変形例として各成分）の所望溶出時間を記憶する。この所望溶出時間は、ユーザによって入力されたものである。
移動度導出部１２１ｂは、試料が前記カラムに流入し始めてから目的とする一つの成分がカラム１８から溶出するまでの溶出時間ｔｒ ｃが与えられたときに、上記式（１）を満たすように混合比の変化率ａ及び初期移動度に関連した定数ｂ（当該成分ｃの初期移動度Ｒｆ０を示す）を導出する。その結果、移動度導出部１２１ｂは、前記成分ｃに係る移動度Ｒｆ ｃ（ｔ／ｔ0）を求めることになる。第１実施形態と同様に、式（１）に記載されている移動度Ｒｆ ｃ（ｔ／ｔ0）（ａ，ｂが未知数となっている）は、移動度記憶部１２１ｃに記憶されており、式（２）で表される。本実施の形態において、移動度導出部１２１ｂは、時間帯Ｇだけに試料がカラム内を移動するとして混合比の変化率ａ及び初期移動度に関連した定数ｂを導出し、これによって成分ｃに係る移動度Ｒｆ ｃ（ｔ／ｔ0）が求められる。移動度導出部１２１ｂが導出した成分ｃに係る移動度Ｒｆ ｃ（ｔ／ｔ0）は、当該成分ｃに特有の移動度として移動度記憶部１２１ｃに記憶される。
混合制御部１２１ｄは電磁弁１４及びポンプＰ１と電気的に接続されている（図１参照）。混合制御部１２１ｄは、移動度導出部１２１ｂが導出して移動度記憶部１２１ｃに記憶された移動度に従って電磁弁１４及びポンプＰ１を制御する。これによって、導出された移動度に従って溶媒が混合され、溶離液１０が形成される。なお、溶出時間記憶部１２１ａが記憶する溶出時間データは、移動度導出部１２１ｂが成分ｃの移動度を導出した後に、ユーザによって書き換えられたものであってもよい。
＜液体クロマトグラフィの流れ＞
次に、本実施の形態に係る液体クロマトグラフによって行われる液体クロマトグラフィの流れについて、図７を参照して説明する。
次に、本実施の形態に係る液体クロマトグラフによって行われる液体クロマトグラフィの流れについて、図７を参照して説明する。
まず、ステップＳ１１において、ユーザが目的とする一つの成分の溶出時間を決定し、それを図示しない入力装置を用いて液体クロマトグラフ制御装置１２１に入力する。入力された溶出時間は、溶出時間記憶部１２１ａに記憶される。そして、ステップＳ１２において、移動度導出部１２１ｂが、溶出時間記憶部１２１ａに記憶された目的とする一つの成分ｃの溶出時間に対する混合比の変化率ａ及び初期移動度に関連した定数ｂを上記式（１）及び（２）を用いて導出して、成分ｃに係る移動度Ｒｆ ｃ（ｔ／ｔ0）を得る。得られた成分ｃに係る移動度Ｒｆ ｃ（ｔ／ｔ0）は移動度記憶部１２１ｃに記憶される。
ステップＳ１３では、ステップＳ１２で導出された成分ｃに係る移動度Ｒｆ ｃ（ｔ／ｔ0）を用いて、混合制御部２１ｄが液体クロマトグラフィを実行する。
本実施の形態によると、所望溶出時間に対する成分ｃに係る移動度Ｒｆ ｃ（ｔ／ｔ0）を高精度に導出することができるので、成分の分離に十分な溶出時間が確保された、短い溶出時間での液体クロマトグラフィが可能となる。
上述した実施形態では固定相としてシリカゲルが充填されたカラムを用いた順相クロマトグラフィーを例に説明したが、本発明は、逆相クロマトグラフィーにも適用可能である。逆相クロマトグラフィーを行う場合、例えば、オクタデシルシリル(Octa Decyl Silyl) 基 （Ｃ１８Ｈ３７Ｓｉ) で表面が修飾された化学結合型多孔性球状シリカゲルが固定相として充填されたＣ１８カラムを用いてもよい。
また、上述した実施形態では図２のグラフ２５に描かれているように、クロマトグラフィーの開始時刻からグラジェントモードでの分離を始めているが、クロマトグラフィーの開始時刻から所定期間内においては溶媒Ａ及びＢの混合比を一定としたアイソクラテックモードでの分離を行い、アイソクラテックモードの終了時刻からグラジェントモードでの分離を始めるようにしてもよい。この場合、試料に含まれる所望の成分ｃのアイソクラテックモード期間におけるカラム内での移動を考慮して、本発明を適用することが可能である。具体的には、カラムへの溶離液及び成分ｃの流入位置が、カラム入口ではなく、そこからアイソクラテックモード期間の長さと（１−ｅｂ）との積で求められる距離だけ下方へと移動した位置であると見なして、つまり成分ｃのアイソクラテックモード期間におけるカラム内での移動分だけカラムが短くなっているものと見なして、本発明を適用すればよい。
さらに、上述した実施形態ではグラジェントモード期間内に成分ｃがカラムから溶出するようにしているが、グラジェントモード期間終了時刻から始まるアイソクラテックモード期間内に成分ｃがカラムから溶出するようにしてもよい。この場合、グラジェントモード終了時刻までのカラム内での成分ｃの移動距離を考慮して、本発明を適用することが可能である。具体的には、カラムからの成分ｃの流出位置が、カラム出口ではなく、そこからアイソクラテックモード期間開始時刻から成分ｃのカラムからの溶出時刻までの長さと（１−ｅ−ａ＋ｂ）との積で求められる距離だけ上方へと移動した位置であると見なして、つまり成分ｃのアイソクラテックモード期間におけるカラム内での移動分だけカラムが短くなっているものと見なして、本発明を適用すればよい。
また、クロマトグラフィーの開始時刻からアイソクラテックモードでの分離を行い、アイソクラテックモードの終了時刻からグラジェントモードでの分離を始め、グラジェントモードの期間終了時刻から始まるアイソクラテックモード期間内に成分ｃがカラムから溶出するようにしてもよい。
上述した第１実施形態に係るクロマトグラフを用いて、混合比の変化率ａと成分ｃとの組み合わせを変えて、溶出時間導出部２１ｂが導出した溶出時間の予測値と、実際にクロマトグラフを行って測定された溶出時間の実測値とを比較した。その結果について、図８に示すと共に、以下に説明する。なお、この実施例は、以下の条件を前提としている。
カラムサイズ：１５×３００ｍｍ
充填剤：シリカゲル
流速６ｍｌ／ｍｍ
試料：赤色色素（ズダンレッド）などを含む
カラムサイズ：１５×３００ｍｍ
充填剤：シリカゲル
流速６ｍｌ／ｍｍ
試料：赤色色素（ズダンレッド）などを含む
本実施例においてｔ0は８分である。したがって、図８の横軸に示す目盛の８倍の数値が実際の時間（分）となる。また、図８において、成分の溶出時間は、図８内の各曲線の値（∫Ｒfｄ（ｔ／ｔ0））が１となる時刻となる。本実施例では、溶出時間以外に溶出までの複数の時刻における値∫Ｒfｄ（ｔ／ｔ0）をも算出又は測定しており、それを各曲線状にプロットしてある。
（実施例１）
混合比の変化率ａ＝０．１で成分ｃ（赤色色素）に係る定数ｂ＝０．２２の場合について、溶出時間導出部２１ｂが導出した溶出時間の予測値は２５．６であった。一方、同じ条件で実際にクロマトグラフを行って測定された溶出時間の実測値は２５．５であった。
混合比の変化率ａ＝０．１で成分ｃ（赤色色素）に係る定数ｂ＝０．２２の場合について、溶出時間導出部２１ｂが導出した溶出時間の予測値は２５．６であった。一方、同じ条件で実際にクロマトグラフを行って測定された溶出時間の実測値は２５．５であった。
（実施例２）
混合比の変化率ａ＝０．０７５で成分ｃ（赤色色素）に係る定数ｂ＝０．２２の場合について、溶出時間導出部２１ｂが導出した溶出時間の予測値は２７．２であった。一方、同じ条件で実際にクロマトグラフを行って測定された溶出時間の実測値は２６．８であった。
混合比の変化率ａ＝０．０７５で成分ｃ（赤色色素）に係る定数ｂ＝０．２２の場合について、溶出時間導出部２１ｂが導出した溶出時間の予測値は２７．２であった。一方、同じ条件で実際にクロマトグラフを行って測定された溶出時間の実測値は２６．８であった。
（実施例３）
混合比の変化率ａ＝０．１で成分ｃ（赤色色素）に係る定数ｂ＝０．３６の場合について、溶出時間導出部２１ｂが導出した溶出時間の予測値は２０．８であった。一方、同じ条件で実際にクロマトグラフを行って測定された溶出時間の実測値は２１．２であった。
混合比の変化率ａ＝０．１で成分ｃ（赤色色素）に係る定数ｂ＝０．３６の場合について、溶出時間導出部２１ｂが導出した溶出時間の予測値は２０．８であった。一方、同じ条件で実際にクロマトグラフを行って測定された溶出時間の実測値は２１．２であった。
以上のように、溶出時間導出部２１ｂが導出した溶出時間の予測値が実測値に非常に近いことが確認された。
１０ 溶離液
１１ 液体クロマトグラフ
１８ カラム
２１、１２１ 液体クロマトグラフ制御装置
２１ａ 混合比記憶部
２１ｂ 溶出時間導出部
２１ｃ 移動度記憶部
２１ｄ 混合制御部
１２１ａ 溶出時間記憶部
１２１ｂ 移動度導出部
１２１ｃ 移動度記憶部
１２１ｄ 混合制御部
１１ 液体クロマトグラフ
１８ カラム
２１、１２１ 液体クロマトグラフ制御装置
２１ａ 混合比記憶部
２１ｂ 溶出時間導出部
２１ｃ 移動度記憶部
２１ｄ 混合制御部
１２１ａ 溶出時間記憶部
１２１ｂ 移動度導出部
１２１ｃ 移動度記憶部
１２１ｄ 混合制御部
Claims (8)
- 第１の混合比から前記第１の混合比よりも大きい第２の混合比まで時刻Ｔ０から時刻Ｔ１にかけて直線的に変化する２つの溶媒の混合比の変化率を記憶する混合比変化率記憶手段と、
前記混合比変化率記憶手段が記憶した前記変化率に従って前記２つの溶媒の混合比が変化する溶離液を生成する混合手段と、
複数の成分からなる試料及び前記混合手段が生成した前記溶離液が通過するカラムと、
前記溶離液が前記カラムに流入し始めてから前記溶離液が前記カラムから流出し始めるまでの時間がｔ0で表される場合に、前記試料に含まれる成分ｃの移動度を、前記試料が前記カラムに流入し始めた時刻からの経過時間である時刻ｔの関数Ｒｆ ｃ（ｔ／ｔ0）として記憶する移動度記憶手段と、
前記試料が前記カラムに流入し始めてから前記成分ｃが前記カラムから溶出するまでの溶出時間ｔｒ ｃを式（１）から導出する溶出時間導出手段とを備えており、
前記移動度記憶手段に記憶された移動度Ｒｆ ｃ（ｔ／ｔ0）が式（２）で表されることを特徴とする液体クロマトグラフ。
- 第１の混合比から前記第１の混合比よりも大きい第２の混合比まで時刻Ｔ０から時刻Ｔ１にかけて直線的に変化する混合比で２つの溶媒を混合して溶離液を順次生成する混合手段と、
複数の成分からなる試料及び前記混合手段が生成した前記溶離液が通過するカラムと、
前記複数の成分からなる前記試料が前記カラムに流入し始めてから前記試料に含まれる成分ｃが前記カラムから溶出するまでの溶出時間ｔr cを記憶する溶出時間記憶手段と、
前記溶離液が前記カラムに流入し始めてから前記溶離液が前記カラムから流出し始めるまでの時間がｔ0で表される場合に、前記試料に含まれる前記成分ｃの移動度を、前記試料が前記カラムに流入し始めた時刻からの経過時間である時刻ｔの関数Ｒｆc（ｔ／ｔ0）として記憶する移動度記憶手段と、
前記溶出時間記憶手段に記憶された前記成分ｃに係る溶出時間ｔr cに対して、式（１）を満たすように前記混合比の変化率ａ及び初期移動度に関連した定数ｂを導出し、前記成分ｃに係る移動度Ｒｆc（ｔ／ｔ0）を求める移動度決定手段とを備えており、
前記移動度記憶手段に記憶された移動度Ｒｆc（ｔ／ｔ0）が式（２）で表されることを特徴とする液体クロマトグラフ。
- ２つの溶媒の混合比が直線的に変化するように混合比を変えつつ前記２つの溶媒を混合して溶離液を順次生成し、生成した前記溶離液及び複数の成分からなる試料をカラムに通過させて行う液体クロマトグラフィにおいて、前記試料が前記カラムに流入し始めてから前記試料に含まれる成分ｃが前記カラムから溶出するまでの溶出時間ｔｒ ｃを導出する溶出時間導出装置であって、
第１の混合比から前記第１の混合比よりも大きい第２の混合比まで時刻Ｔ０から時刻Ｔ１にかけて直線的に変化する２つの溶媒の混合比の変化率を記憶する混合比変化率記憶手段と、
前記溶離液が前記カラムに流入し始めてから前記溶離液が前記カラムから流出し始めるまでの時間がｔ0で表される場合に、前記試料に含まれる前記成分ｃの移動度を、前記試料が前記カラムに流入し始めた時刻からの経過時間である時刻ｔの関数Ｒｆ ｃ（ｔ／ｔ0）として記憶する移動度記憶手段と、
前記成分ｃに係る溶出時間ｔｒ ｃを式（１）から導出する溶出時間導出手段とを備えており、
前記移動度記憶手段に記憶された移動度Ｒｆ ｃ（ｔ／ｔ0）が式（２）で表されることを特徴とする溶出時間導出装置。
- 第１の混合比から前記第１の混合比よりも大きい第２の混合比まで時刻Ｔ０から時刻Ｔ１にかけて直線的に変化するように２つの溶媒の混合比を変えつつ前記２つの溶媒を混合して溶離液を順次生成し、生成した前記溶離液及び複数の成分からなる試料をカラムに通過させて行う液体クロマトグラフィにおいて、前記試料が前記カラムに流入し始めてから前記試料に含まれる成分ｃが前記カラムから溶出するまでの溶出時間ｔｒ ｃに対する前記成分ｃに係る移動度Ｒｆ ｃ（ｔ／ｔ0）を求める混合比決定装置であって、
前記成分ｃに係る溶出時間ｔｒ ｃを記憶する溶出時間記憶手段と、
前記溶離液が前記カラムに流入し始めてから前記溶離液が前記カラムから流出し始めるまでの時間がｔ0で表される場合に、前記試料に含まれる成分ｃの移動度を、前記試料が前記カラムに流入し始めた時刻からの経過時間である時刻ｔの関数Ｒｆ ｃ（ｔ／ｔ0）として記憶する移動度記憶手段と、
前記成分ｃに係る溶出時間ｔｒ ｃに対して、式（１）を満たすように前記混合比の変化率ａ及び初期移動度に関連した定数ｂを導出し、前記成分ｃに係る移動度Ｒｆ ｃ（ｔ／ｔ0）を求める移動度決定手段とを備えており、
前記移動度記憶手段に記憶された移動度Ｒｆ ｃ（ｔ／ｔ0）が式（２）で表されることを特徴とする混合比決定装置。
- 第１の混合比から前記第１の混合比よりも大きい第２の混合比まで時刻Ｔ０から時刻Ｔ１にかけて直線的に変化するように２つの溶媒の混合比を変えつつ前記２つの溶媒を混合して溶離液を順次生成し、生成した前記溶離液及び複数の成分からなる試料をカラムに通過させて行う液体クロマトグラフィにおいて、前記試料が前記カラムに流入し始めてから前記試料に含まれる成分ｃが前記カラムから溶出するまでの溶出時間ｔｒ ｃを導出する溶出時間導出方法であって、
前記溶離液が前記カラムに流入し始めてから前記溶離液が前記カラムから流出し始めるまでの時間をｔ0、前記試料に含まれる前記成分ｃの移動度を、前記試料が前記カラムに流入し始めた時刻からの経過時間である時刻ｔの関数Ｒｆ ｃ（ｔ／ｔ0）とした場合に、前記成分ｃに係る溶出時間ｔｒ ｃを式（１）から導出するステップを備えており、
移動度Ｒｆ ｃ（ｔ／ｔ0）が式（２）で表されることを特徴とする溶出時間導出方法。
- 第１の混合比から前記第１の混合比よりも大きい第２の混合比まで時刻Ｔ０から時刻Ｔ１にかけて直線的に変化するように２つの溶媒の混合比を変えつつ前記２つの溶媒を混合して溶離液を順次生成し、生成した前記溶離液及び複数の成分からなる試料をカラムに通過させて行う液体クロマトグラフィにおいて、前記試料が前記カラムに流入し始めてから前記試料に含まれる成分ｃが前記カラムから溶出するまでの溶出時間ｔｒ ｃに対する前記成分ｃに係る移動度Ｒｆ ｃ（ｔ／ｔ0）を求める混合比決定方法であって、
前記溶離液が前記カラムに流入し始めてから前記溶離液が前記カラムから流出し始めるまでの時間をｔ0、前記試料に含まれる前記成分ｃの移動度を、前記試料が前記カラムに流入し始めた時刻からの経過時間である時刻ｔの関数Ｒｆ ｃ（ｔ／ｔ0）とした場合に、前記成分ｃの溶出時間ｔｒ ｃに対する前記混合比の変化率ａ及び初期移動度に関連した定数ｂを式（１）から導出することによって、前記成分ｃに係る移動度Ｒｆ ｃ（ｔ／ｔ0）を求めるステップを備えており、
移動度Ｒｆ ｃ（ｔ／ｔ0）が式（２）で表されることを特徴とする混合比決定方法。
- ２つの溶媒の混合比が直線的に変化するように混合比を変えつつ前記２つの溶媒を混合して溶離液を順次生成し、生成した前記溶離液及び複数の成分からなる試料をカラムに通過させて行う液体クロマトグラフィにおいて、前記試料が前記カラムに流入し始めてから前記試料に含まれる成分ｃが前記カラムから溶出するまでの溶出時間ｔｒ ｃを導出するためのプログラムであって、
第１の混合比から前記第１の混合比よりも大きい第２の混合比まで時刻Ｔ０から時刻Ｔ１にかけて直線的に変化する２つの溶媒の混合比の変化率を記憶する混合比変化率記憶手段、
前記溶離液が前記カラムに流入し始めてから前記溶離液が前記カラムから流出し始めるまでの時間がｔ0で表される場合に、前記試料に含まれる前記成分ｃの移動度を、前記試料が前記カラムに流入し始めた時刻からの経過時間である時刻ｔの関数Ｒｆ ｃ（ｔ／ｔ0）として記憶する移動度記憶手段、及び、
前記成分ｃに係る溶出時間ｔｒ ｃを式（１）から導出する溶出時間導出手段としてコンピュータを機能させ、
前記移動度記憶手段に記憶された移動度Ｒｆ ｃ（ｔ／ｔ0）が式（２）で表されることを特徴とする溶出時間導出用プログラム。
- 第１の混合比から前記第１の混合比よりも大きい第２の混合比まで時刻Ｔ０から時刻Ｔ１にかけて直線的に変化するように２つの溶媒の混合比を変えつつ前記２つの溶媒を混合して溶離液を順次生成し、生成した前記溶離液及び複数の成分からなる試料をカラムに通過させて行う液体クロマトグラフィにおいて、前記試料が前記カラムに流入し始めてから前記試料に含まれる成分ｃが前記カラムから溶出するまでの溶出時間ｔｒ ｃに対する前記成分ｃに係る移動度Ｒｆ ｃ（ｔ／ｔ0）を求めるためのプログラムであって、
前記成分ｃに係る溶出時間ｔｒ ｃを記憶する溶出時間記憶手段、
前記溶離液が前記カラムに流入し始めてから前記溶離液が前記カラムから流出し始めるまでの時間がｔ0で表される場合に、前記試料に含まれる成分ｃの移動度を、前記試料が前記カラムに流入し始めた時刻からの経過時間である時刻ｔの関数Ｒｆ ｃ（ｔ／ｔ0）として記憶する移動度記憶手段、及び、
前記成分ｃに係る溶出時間ｔｒ ｃに対して、式（１）を満たすように前記混合比の変化率ａ及び初期移動度に関連した定数ｂを導出し、前記成分ｃに係る移動度Ｒｆ ｃ（ｔ／ｔ0）を求める移動度決定手段としてコンピュータを機能させ、
前記移動度記憶手段に記憶された移動度Ｒｆ ｃ（ｔ／ｔ0）が式（２）で表されることを特徴とする混合比決定用プログラム。
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