JP5800173B2 - カーボンナノチューブに対して結合能を有するペプチド、および当該ペプチドの利用 - Google Patents
カーボンナノチューブに対して結合能を有するペプチド、および当該ペプチドの利用 Download PDFInfo
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本発明のペプチドは、CNTに対して結合能を有するものである。より詳細には、本発明のペプチドは、SWCNTおよびMWCNTの両方に対して極めて高い結合能を有するものである。以下に、具体的な構成について説明する。
・WWRTPWTEPTPA (配列番号2)
・WWNPWTPQSTPS (配列番号3)
・WNPWNSWSNMRM (配列番号4)
・WNPWWRAPLTGA (配列番号5)
・WNPWAGWTMGHL (配列番号6)
・WWNRW (配列番号7)
・WWRTPW (配列番号8)
・WWNPW (配列番号9)
・WNPWNSW (配列番号10)
・WNPWW (配列番号11)
・WNPWAGW (配列番号12)
・WNRW (配列番号13)
・WRTPW (配列番号14)
・WNPW (配列番号15)
本発明のペプチドは、配列番号1〜15の何れか1つのアミノ酸配列からなるペプチドであってもよく、上述したアミノ酸配列W−X1−N/T−P/R−Wを含みかつCNTに対する結合能が維持されている限り、配列番号1〜12に示されたアミノ酸配列において1または数個のアミノ酸が置換、付加または欠失されたアミノ酸配列を含んでいてもよい。本明細書中において。アミノ酸の観点で使用される場合、「1または数個」は、当業者が試行錯誤することなくアミノ酸の置換、付加または欠失を行い得る程度の数が意図され、例えば、1〜30個の範囲内であり得、1〜15個が好ましく、1〜10個が好ましく、1〜7個がより好ましく、1〜5個がさらに好ましい、1〜3個がなおさらに好ましい。
本発明の組成物はCNTを標識するための組成物である。より詳細には、本発明の組成物は、SWCNTおよびMWCNTの両方を極めて効果的に標識することができる組成物である。以下に、具体的な構成について説明する。
本発明のCNTを標識する方法は、標識化合物と結合している本発明のペプチドを、CNTとともにインキュベートする工程を包含すればよく、本発明のペプチドを標識化合物と直接的または間接的に結合させる工程をさらに包含してもよい。すなわち、本発明のCNTを標識する方法は、本発明のペプチド、本発明の組成物、または本発明のキットを用いる方法といえる。
ペプチド提示ファージライブラリーとしては、12残基の直線状ランダムペプチドを提示するPh.D.−12TM Phage Library(New England Biolabs社)を用いた。当該ライブラリーは、2.7×109種類の異なるペプチド配列を含むライブラリーである。
実施例1で得られたファージクローンについて、MWCNTに対する結合能力を以下の実験によって評価した。
<A:ペプチドが結合されたN1タンパク質の調製>
今回新たに得られた12残基のペプチド:LPWWNRWPPVETが、N1ドメインのN末端に結合しているLPWWNRWPPVET-N1タンパク質(配列番号20)を作製した。なお、gIIIタンパク質(Accession number:V00604, Protein ID: CAA23862.1)は、N末端側からN1、N2、C1という順序で3つのドメインを有しており、今回新たに得られた12残基のペプチドは、当該gIIIタンパク質のN1ドメインのN末端に結合している。以下に、作製方法について説明する。
本実施例では、ビオチンとストレプトアビジンとの間の相互作用を用いて、蛍光標識されたストレプトアビジンと、ビオチンにて修飾されたLPWWNRWPPVET-N1タンパク質とを結合させた。ストレプトアビジンは4量体のタンパク質であるため、ストレプトアビジン1分子に対して4分子のLPWWNRWPPVET-N1タンパク質を提示した複合体を作製することが可能になる(図7参照)。つまり、当該複合体であれば、複合体とCNTとの結合力を増加させることができるので、CNTの検出感度を飛躍的に上昇させることができる。
5μLのLPW-Streptavidin-FITC(1.7μM)と、2μlのMWCNT(直径140nm、長さ7μm、 ATR社)懸濁液(1mg/ml 0.1%Tween−20)と、10μLの緩衝液(0.01M Tris-HCl(pH8.0)、0.5%Tween−20)とを混合した。
2μLのLPW-Streptavidin-Cy3(1.7μM)と、2μLのSWCNT(直径1−2nm、長さ5−30μm、ATR社)懸濁液(1mg/ml 0.1%Tween-20)と、10μLの緩衝液(0.01M Tris-HCl(pH8.0)、0.5%Tween−20)とを混合した。
Claims (9)
- 配列番号1〜6の何れか1つのアミノ酸配列からなり、かつカーボンナノチューブに対する結合能を有する、ペプチド。
- 請求項1に記載のペプチドをコードする、ポリヌクレオチド。
- 請求項1に記載のペプチドを含有している、カーボンナノチューブを標識するための組成物。
- 前記ペプチドが標識化合物と結合している、請求項3に記載の組成物。
- 前記カーボンナノチューブがマルチウオールカーボンナノチューブである、請求項3または4に記載の組成物。
- 請求項1に記載のペプチド、または請求項2に記載のポリヌクレオチド、および標識化合物を備えている、カーボンナノチューブを標識するためのキット。
- 前記カーボンナノチューブがマルチウオールカーボンナノチューブである、請求項6に記載のキット。
- 請求項1に記載のペプチド、請求項2に記載のポリヌクレオチド、請求項3〜5の何れか1項に記載の組成物、あるいは請求項6または7に記載のキットを用いる、カーボンナノチューブを標識する方法。
- 請求項4に記載の組成物をカーボンナノチューブとインキュベートする工程を包含する、請求項8に記載の方法。
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