JP5798322B2 - Tdp−43蛋白質症に関連した配列およびその使用法 - Google Patents
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Description
本発明は、米国国立衛生研究所の財政的援助P50−AG05681のもとに行われた。本発明について、合衆国政府が一定の権利を有する。
本発明のある態様には、単離核酸が含まれる。一般的には、当該核酸配列は配列番号:1の1077位のヌクレオチドを含む。具体的には、当該核酸配列は、1077位にGを有する野生型配列(表1の配列番号:3)とは対照的に、配列番号:1の1077位にAを含む。ある実施形態では、核酸は、配列番号:1の1077位のヌクレオチドを含む少なくとも5個の連続するヌクレオチドを含む。別の実施形態では、核酸は、配列番号:1の1077位のヌクレオチドを含む、少なくとも10個、少なくとも15個、少なくとも20個、少なくとも25個、少なくとも30個、少なくとも35個、少なくとも40個、少なくとも45個、少なくとも50個、少なくとも55個、少なくとも60個、少なくとも65個、少なくとも70個、少なくとも75個、少なくとも80個、少なくとも85個、少なくとも90個、少なくとも95個、または少なくとも100個の連続するヌクレオチドを含む。さらに別の実施形態では、核酸は配列番号:1の1077位のヌクレオチドを含む、少なくとも200個、少なくとも300個、少なくとも400個、少なくとも500個、少なくとも600個、少なくとも700個、少なくとも800個、少なくとも900個、または少なくとも1000個の連続するヌクレオチドを含む。さらなる実施形態では、核酸は配列番号:1の1077位のヌクレオチドを含む、少なくとも1000個、少なくとも2000個、少なくとも3000個、少なくとも4000個、または4000個を超える連続するヌクレオチドを含む。
本発明の別の態様には、単離ペプチドが含まれる。一般的には、当該ペプチドのアミノ酸配列は配列番号:2の315位のアミノ酸を含む。特に当該ペプチドの配列は、315位にアラニンを有する野生型配列(表1の配列番号:4)とは対照的に、配列番号:2の315位にトレオニンを含む。ある実施形態では、当該ペプチドは配列番号:2の315位のアミノ酸を含む少なくとも5個の連続するアミノ酸を含む。別の実施形態では、当該ペプチドは配列番号:2の315位のアミノ酸を含む、少なくとも10個、少なくとも15個、少なくとも20個、少なくとも25個、少なくとも30個、少なくとも35個、少なくとも40個、少なくとも45個、少なくとも50個、少なくとも55個、少なくとも60個、少なくとも65個、少なくとも70個、少なくとも75個、少なくとも80個、少なくとも90個または少なくとも100個の連続するアミノ酸を含む。さらに別の実施形態では、当該ペプチドは配列番号:2の315位のアミノ酸を含む、少なくとも200個、少なくとも300個、少なくとも400個または少なくとも500個の連続するアミノ酸を含む。
本発明のさらに別の態様には、TDP−43蛋白質症のリスクの決定法および診断法が含まれる。本明細書で使用されるTDP−43蛋白質症とは、TDP−43蛋白質の突然変異または機能不全を特徴の一部とする障害または疾患である。例示的な実施形態では、TDP−43蛋白質症は、配列番号:3の1077位のヌクレオチドのグアニンからアデニンへの置換により配列番号:1の核酸配列種となること、または配列番号:4の315位のアミノ酸のアラニンからトレオニンへの置換により配列番号:2のアミノ酸配列種となること、を特徴の一部とする疾患または障害である。TDP−43蛋白質症の例には、これらに限定されないが、前頭側頭型認知症とも称される孤発性前頭側頭葉変性症(FTLD)、家族性FTLD、孤発性MND、家族性MND、孤発性ALS、および家族性ALS、ならびにFTLD−MNDなど、これらのうち2つの運動性および認知表現型の組み合わせが含まれる。
本発明のさらなる態様は、少なくとも1つのアドレスを含むアレイである。いくつかの実施形態では、該アレイの少なくとも1つのアドレス上には、配列番号:1または1077位のヌクレオチドを含むその一部に特異的に結合し得るエピトープ結合剤が配置されている。他の実施形態では、該アレイの少なくとも1つのアドレス上には、配列番号:2または315位のアミノ酸を含むその一部に特異的に結合し得るエピトープ結合剤が配置されている。
遺伝子解析
標準手順によって全血、血清または脳組織から高分子量DNAを抽出した。遺伝子解析に先だって、REPLI−g(登録商標)Midi Kit(Qiagen Inc.,Valencia, CA,USA)を使用して血清DNAの全ゲノム増幅を行った。各家系における罹患者1例のDNAをTDP−43の配列決定に使用した。遺伝子特異的イントロンプライマーを用いてTDP−43遺伝子の全エクソンおよびイントロン−エクソン境界を増幅した。Big Dye Terminator Cycle Sequencing Ready Reaction Kit(Applied Biosystems,Wellesley,MA,USA)および標準プロトコルを用いて増幅断片の直接配列決定を実施した。ほとんどの断片において、配列決定に用いたプライマーは、PCR増幅に用いたものと同一であった。反応はABI3130で実行し、Sequencherソフトウェアv4.6(Gene Codes Corporation,Ann Arbor,Ml,USA)を用いて突然変異解析を実施した。順方向および逆方向の両方向からの配列読み込み時において変異体が観察された場合のみ、配列変異体の陽性シグナルが発せられた。可能な場合、疾患と配列変異体の分離について試験を行い、血縁でない民族的に適合した対照1,505例の組をスクリーニングした。
スクリーニング
常染色体優性の遺伝パターンを有し、SOD1遺伝子内に突然変異を有さないMND/ALSに罹患した8家系、家族性FTLD−MNDに罹患した5家系、およびFTLD−Uに罹患した25家系に対してTDP−43遺伝子の突然変異解析を実施した14。全家系が欧州系であった。孤発性MND症例は得られなかったが、孤発性FTLD−MND症例(n=6)および孤発性FTLD−U症例(n=28)をさらに調査した。
臨床的家系解析
発端者(図1Dの対象III−1)は、48歳時に右手の脱力および萎縮症を発症した。初回検査時では、脚力、精神状態、脳神経、感覚検査、反射運動、運動協調性および歩行は正常であり、上位運動ニューロン所見は認められなかった。運動および感覚神経伝導は正常であったが、筋電図(EMG)では、両腕遠近位での除神経が示され、両脚の線維束収縮電位および間欠的な高閾値運動単位電位も示された。脳および脊髄の核磁気共鳴画像(MRI)、および抗GM1抗体が陰性であるなどの血液検査も正常であり、SOD1遺伝子検査は正常であった。3年後、発端者の上肢脱力は進行したが精神状態、脳神経機能、脚力、および感覚は正常なままであった。
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Claims (8)
- 対象からのサンプル中の配列番号:3の核酸配列を含むヌクレオチド配列の1077位における核酸塩基を同定することを含み、1077位のヌクレオチドにGの代わりにAが存在することがTDP−43蛋白質症のリスクを示す、TDP−43蛋白質症のリスクを有する対象の同定法。
- 前記蛋白質症がMNDおよびFTDを含む群から選択される、請求項1に記載の方法。
- 前記FTDがFTLD−Uである、請求項2に記載の方法。
- 前記MNDがALSである、請求項2に記載の方法。
- 対象からのサンプル中の配列番号:2のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列の315位のアミノ酸が何であるかを決定することを含み、315位のアミノ酸にアラニンの代わりにトレオニンが存在することがTDP−43蛋白質症のリスクを示す、TDP−43蛋白質症のリスクを有する対象の同定法。
- 前記蛋白質症がMNDおよびFTDを含む群から選択される、請求項5に記載の方法。
- 前記FTDがFTLD−Uである、請求項6に記載の方法。
- 前記MNDがALSである、請求項6に記載の方法。
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