JP5792165B2 - ヒストンマクロｈ２ａアイソフォームに基づいて癌再発のリスクを予測する診断のための判断材料を提供する方法 - Google Patents
ヒストンマクロｈ２ａアイソフォームに基づいて癌再発のリスクを予測する診断のための判断材料を提供する方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP5792165B2 JP5792165B2 JP2012518798A JP2012518798A JP5792165B2 JP 5792165 B2 JP5792165 B2 JP 5792165B2 JP 2012518798 A JP2012518798 A JP 2012518798A JP 2012518798 A JP2012518798 A JP 2012518798A JP 5792165 B2 JP5792165 B2 JP 5792165B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- macro
- cancer
- expression
- patient
- tumor
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 title claims description 121
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 title claims description 80
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 73
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 title claims description 19
- 239000000463 material Substances 0.000 title claims description 6
- 108010033040 Histones Proteins 0.000 title description 44
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 title description 17
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 title description 17
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 105
- 101000898914 Tetrahymena thermophila (strain SB210) Histone H2A.1 Proteins 0.000 claims description 78
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 36
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 32
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 31
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 22
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 22
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 15
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 14
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 14
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 12
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 claims description 11
- 101710195517 Histone H2AX Proteins 0.000 claims description 8
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 claims description 8
- 239000013068 control sample Substances 0.000 claims description 8
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 8
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 claims description 8
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 claims description 7
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 claims description 7
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 claims description 7
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 claims description 7
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 7
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 claims description 6
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 6
- 208000024770 Thyroid neoplasm Diseases 0.000 claims description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 6
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 claims description 6
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 claims description 6
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 claims description 6
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 claims description 6
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 claims description 6
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 5
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 claims description 5
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 claims description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 5
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 238000011532 immunohistochemical staining Methods 0.000 claims description 5
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 claims description 5
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 5
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 claims description 5
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 201000002510 thyroid cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 claims description 4
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 claims description 3
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 3
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 claims description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims 1
- 239000000439 tumor marker Substances 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 49
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 22
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 20
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 19
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 19
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 17
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 15
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 15
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 14
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 14
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 13
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 12
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 11
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 11
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 11
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 description 11
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 10
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 9
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 9
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 9
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 9
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 8
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 8
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 8
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 8
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 7
- 102000001008 Macro domains Human genes 0.000 description 7
- 108050007982 Macro domains Proteins 0.000 description 7
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 7
- 208000037841 lung tumor Diseases 0.000 description 7
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 7
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 7
- 208000003200 Adenoma Diseases 0.000 description 6
- 102000006947 Histones Human genes 0.000 description 6
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 6
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 6
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 6
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 6
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 6
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 6
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 6
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 6
- 102100034528 Core histone macro-H2A.1 Human genes 0.000 description 5
- 102100033636 Histone H3.2 Human genes 0.000 description 5
- 108010047956 Nucleosomes Proteins 0.000 description 5
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 5
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 5
- 108010034959 macroH2A histone Proteins 0.000 description 5
- 210000001623 nucleosome Anatomy 0.000 description 5
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 5
- 108010034791 Heterochromatin Proteins 0.000 description 4
- 102000017286 Histone H2A Human genes 0.000 description 4
- 108050005231 Histone H2A Proteins 0.000 description 4
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 4
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 4
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 4
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 4
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 4
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 4
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 4
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 4
- 210000004458 heterochromatin Anatomy 0.000 description 4
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 4
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 4
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 4
- 238000002493 microarray Methods 0.000 description 4
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 4
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 4
- 230000009758 senescence Effects 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- PWJFNRJRHXWEPT-UHFFFAOYSA-N ADP ribose Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(O)C(O)C(O)C=O)C(O)C1O PWJFNRJRHXWEPT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- SRNWOUGRCWSEMX-TYASJMOZSA-N ADP-D-ribose Chemical compound C([C@H]1O[C@H]([C@@H]([C@@H]1O)O)N1C=2N=CN=C(C=2N=C1)N)OP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O SRNWOUGRCWSEMX-TYASJMOZSA-N 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- 102000043276 Oncogene Human genes 0.000 description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 3
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 3
- 238000003491 array Methods 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 3
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 3
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 3
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 3
- 238000013115 immunohistochemical detection Methods 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 201000002037 lung adenoma Diseases 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 3
- 230000004222 uncontrolled growth Effects 0.000 description 3
- 206010001233 Adenoma benign Diseases 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 206010005949 Bone cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000018084 Bone neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710113436 GTPase KRas Proteins 0.000 description 2
- 102100031181 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100039869 Histone H2B type F-S Human genes 0.000 description 2
- 101001035372 Homo sapiens Histone H2B type F-S Proteins 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 2
- 238000001261 affinity purification Methods 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 238000012093 association test Methods 0.000 description 2
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 2
- YCIMNLLNPGFGHC-UHFFFAOYSA-N catechol Chemical compound OC1=CC=CC=C1O YCIMNLLNPGFGHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 2
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 2
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 238000002487 chromatin immunoprecipitation Methods 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 2
- 230000017858 demethylation Effects 0.000 description 2
- 238000010520 demethylation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 230000001973 epigenetic effect Effects 0.000 description 2
- 238000010195 expression analysis Methods 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N m-cresol Chemical compound CC1=CC=CC(O)=C1 RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 2
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 2
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N methylparaben Chemical compound COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 2
- 239000013610 patient sample Substances 0.000 description 2
- AQIXEPGDORPWBJ-UHFFFAOYSA-N pentan-3-ol Chemical compound CCC(O)CC AQIXEPGDORPWBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 2
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 2
- 238000002271 resection Methods 0.000 description 2
- GHMLBKRAJCXXBS-UHFFFAOYSA-N resorcinol Chemical compound OC1=CC=CC(O)=C1 GHMLBKRAJCXXBS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 2
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 2
- 238000013517 stratification Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- 101150084750 1 gene Proteins 0.000 description 1
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009010 Bradford assay Methods 0.000 description 1
- 108010077544 Chromatin Proteins 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 102100030670 Core histone macro-H2A.2 Human genes 0.000 description 1
- 101710185000 Core histone macro-H2A.2 Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 230000005778 DNA damage Effects 0.000 description 1
- 231100000277 DNA damage Toxicity 0.000 description 1
- 230000007067 DNA methylation Effects 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010061968 Gastric neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 206010019695 Hepatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 101001067929 Homo sapiens Core histone macro-H2A.1 Proteins 0.000 description 1
- 101001084697 Homo sapiens Core histone macro-H2A.2 Proteins 0.000 description 1
- 101000945496 Homo sapiens Proliferation marker protein Ki-67 Proteins 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 102000001291 MAP Kinase Kinase Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108060006687 MAP kinase kinase kinase Proteins 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 102000004232 Mitogen-Activated Protein Kinase Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108091005461 Nucleic proteins Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 102100035593 POU domain, class 2, transcription factor 1 Human genes 0.000 description 1
- 101710084414 POU domain, class 2, transcription factor 1 Proteins 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100034836 Proliferation marker protein Ki-67 Human genes 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 206010038111 Recurrent cancer Diseases 0.000 description 1
- 108091081062 Repeated sequence (DNA) Proteins 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- NKANXQFJJICGDU-QPLCGJKRSA-N Tamoxifen Chemical class C=1C=CC=CC=1C(/CC)=C(C=1C=CC(OCCN(C)C)=CC=1)/C1=CC=CC=C1 NKANXQFJJICGDU-QPLCGJKRSA-N 0.000 description 1
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 238000009098 adjuvant therapy Methods 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 229960000686 benzalkonium chloride Drugs 0.000 description 1
- UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M benzethonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC(C(C)(C)CC(C)(C)C)=CC=C1OCCOCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229960001950 benzethonium chloride Drugs 0.000 description 1
- CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N benzyl(dimethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C[NH+](C)CC1=CC=CC=C1 CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- HUTDDBSSHVOYJR-UHFFFAOYSA-H bis[(2-oxo-1,3,2$l^{5},4$l^{2}-dioxaphosphaplumbetan-2-yl)oxy]lead Chemical compound [Pb+2].[Pb+2].[Pb+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O HUTDDBSSHVOYJR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000032677 cell aging Effects 0.000 description 1
- 230000030570 cellular localization Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 210000003483 chromatin Anatomy 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- HPXRVTGHNJAIIH-UHFFFAOYSA-N cyclohexanol Chemical compound OC1CCCCC1 HPXRVTGHNJAIIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002074 deregulated effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008995 epigenetic change Effects 0.000 description 1
- 230000004049 epigenetic modification Effects 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940093915 gynecological organic acid Drugs 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006197 histone deacetylation Effects 0.000 description 1
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000003125 immunofluorescent labeling Methods 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 1
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 238000001325 log-rank test Methods 0.000 description 1
- 201000005296 lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000004880 lymph fluid Anatomy 0.000 description 1
- 238000010841 mRNA extraction Methods 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 235000010270 methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004292 methyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 229960002216 methylparaben Drugs 0.000 description 1
- 230000000394 mitotic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 208000025402 neoplasm of esophagus Diseases 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012758 nuclear staining Methods 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000001124 posttranscriptional effect Effects 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 239000000092 prognostic biomarker Substances 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 235000010232 propyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004405 propyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 229960003415 propylparaben Drugs 0.000 description 1
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 1
- 208000023958 prostate neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 108010014186 ras Proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000008943 replicative senescence Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 238000011255 standard chemotherapy Methods 0.000 description 1
- SFVFIFLLYFPGHH-UHFFFAOYSA-M stearalkonium chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 SFVFIFLLYFPGHH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 108091035539 telomere Proteins 0.000 description 1
- 210000003411 telomere Anatomy 0.000 description 1
- 102000055501 telomere Human genes 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 208000013076 thyroid tumor Diseases 0.000 description 1
- 230000004565 tumor cell growth Effects 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57407—Specifically defined cancers
- G01N33/57415—Specifically defined cancers of breast
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57407—Specifically defined cancers
- G01N33/57423—Specifically defined cancers of lung
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Oncology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
本発明は、哺乳類患者における癌再発のリスクを診断する方法であって、前記患者から取得される生体試料においてマクロＨ２Ａ１．１及び／又はマクロＨ２Ａ２の発現を検出することを含み、前記マクロＨ２Ａ１．１及び／又はマクロＨ２Ａ２の発現の低下又は減弱は、前記患者における癌再発のリスクの増大を示す、方法に関する。本発明は、更に、前記診断方法に基づいて、癌、特に乳癌及び／又は肺癌を治療する改善された方法に関する。
癌の中でも特に、肺癌は、新患に関して２番目に多い癌であり（米国ではすべての癌の１５％）（Jemal他、２００７）、世界中で癌死の主な原因である（米国では男性の３１％及び女性の２６％）。４／５の肺癌腫が非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）であり、ＮＳＣＬＣ患者の約１／３が、早期の疾患で診断される。これらの患者には、手術が最良の治療の選択肢であるが、高い確率の患者が再発し、大部分がその疾患で死亡する。同じ病期の癌である患者であっても異なる再発率を示すことが多く（Zhu他、２００６）、したがって、手術後に再発する可能性がより高い患者を特定することができる分子マーカーに関心が持たれている（D'Amico、２００８）。ＮＳＣＬＣの転移性再発のためのいくつかの潜在的なマーカーが検査されてきたが、それらのいずれも十分に有用であることが証明されていない（Zhu他、２００６）。
ヒストンは、多くの場合、別個の細胞タイプにおいて同様のレベルで存在すると推定される。ヘテロクロマチンヒストン変異体であるマクロＨ２Ａは、いくつかの分子及び細胞の構造的特徴では特異である。構造レベルにおいて、マクロＨ２Ａは、大型Ｃ末端伸長、マクロドメイン、およそ２５ｋＤａの球状モジュールを有し、マクロＨ２Ａ１．１の場合、特異性の高いＡＤＰリボースを結合する（Kustatscher他、２００５）。さらに、すべての脊椎動物で観察されるマクロＨ２Ａと、小分子を結合することができない、マクロＨ２Ａ１．２として知られるマクロＨ２Ａ１の第２のスプライス変異体とに対する２つの遺伝子がある。
マクロＨ２Ａは、老化として知られる永久増殖停止に関係している（Pehrson及びFried、１９９２、Zhang他、２００５）。この現象は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで初代細胞培養に対して述べられており（Hayflick、１９６５）、テロメア短縮、ＤＮＡ損傷の蓄積及び特定の癌遺伝子の過剰発現のようなストレスに応答する（Serrano他、１９９１）。
更に、癌遺伝子によって誘発される老化が、ｉｎ ｖｉｖｏで強力な抗腫瘍メカニズムとして現れたことに注目すると興味深い（Braig他、２００５、Chen他、２００５、Collado他、２００５、Michaloglou他、２００５）。
Holdenrieder他は（非特許文献１において）、化学療法を受けている２０人の患者からの血清試料及び放射線療法を受けている１６人の患者からの血清試料において、ヌクレオソーム及びヌクレオソームの濃度の動態を観察した。悪性腫瘍を有する患者の血清は、健康な人及び良性疾患の患者に比較して、著しく高いヌクレオソームの濃度を含んでいた。彼らは、血清中のヌクレオソームの濃度が、特に治療効力の初期の推定のために、抗腫瘍治療中、生物化学的応答をモニタリングする有用なツールであり得ることを提案している。
Kurdistaniは（非特許文献２において）、ヒストンの修飾の変化が、癌の発症及び進行に重要な役割を有する多くの遺伝子の脱調節発現に関連してきたことを記載している。これらの変化の効果は、これまで、プロモーターに特異的な観点から解釈され、遺伝子間のヒストン修飾のパターンの相違に焦点を当ててきた。さらに、癌組織は、特定のヒストン修飾の全体の量における細胞間の相違も表すことが示唆されている。この新規な細胞のエピジェネティックな不均一性は、癌患者の臨床転帰に関連し、予後の貴重なマーカーとしての役割を果たすことができる。
Barlesi他は（非特許文献３において）、エピジェネティックな修飾が癌の発症及び進行に寄与する可能性があるか否かを検査する研究を記載している。非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）患者の予後に影響を与える、複数のヒストンを含むエピジェネティックな変化が検査された。１３８人のＮＳＣＬＣ患者の切除された腫瘍試料における、ヒストン３リジン４の脱メチル（Ｈ３Ｋ４ｄｉＭｅ）、並びにヒストン２Ａリジン５のアセチル化（Ｈ２ＡＫ５Ａｃ）、ヒストン２Ｂリジン１２のアセチル化、ヒストン３リジン９のアセチル化（Ｈ３ＡＫ９Ａｃ）及びヒストン４リジン８のアセチル化を検査した。Ｉ期患者（第１の節より下位）によって確定されるグループは、劇的な生存期間の差異を示した（中央値、Ｈ３Ｋ９Ａｃ６８％の腺癌患者の場合１０か月、Ｈ３Ｋ４ｄｉＭｅ８５％の非腺癌患者の場合１４７か月）。開示されているデータは、ヒストン脱アセチル化阻害剤等、ヒストン修飾と相互作用する薬物による標準的な化学療法との組合せを用いるための論拠を提供すると考えられた。
Deligezer他は（非特許文献４において）、ＤＮＡメチル化及びヒストン修飾の変化が、発癌に関連してきたことを記載しており、ヒストンメチル化が、ヒストン修飾のモデルとして、血漿において検出可能であるか否かを調べた。したがって、クロマチン免疫沈降により、血漿においてモノメチル化Ｈ３Ｋ９（Ｈ３Ｋ９ｍｅｌ）が解析された。循環におけるヒストン修飾の癌に特異的な変化を証明するためには、さらなる検証が必要であった。
最後に、Seligson他は（非特許文献５において）、癌細胞が、個々の遺伝子において、かつ個々の細胞の単一核のレベルにおいて全体的に（globally）、ヒストン修飾パターンの変化を示すことを開示している。前立腺癌再発の高いリスクを予測するために、ヒストンＨ３リジン４脱メチル（Ｈ３Ｋ４ｍｅ２）及びＨ３Ｋ１８アセトン化（ａｃ）のより低い全体的／細胞レベルが開示されており、Ｈ３Ｋ４ｍｅ２及びＨ３Ｋ１８ａｃの両方の細胞レベルはまた、肺癌患者及び腎臓癌患者の臨床転帰も予測し、より低いレベルが、両癌グループにおいて大幅に下がった生存確率を予測することが示された。彼らはまた、Ｈ３Ｋ９ｍｅ２、すなわち遺伝子活性及び抑制の両方に関連する修飾のより低い細胞レベルが、前立腺癌又は腎臓癌のいずれかである個人に対しより不良の転帰の予後でもあることも示している。これらのヒストン修飾の予測能力は、増殖マーカーＫｉ−６７とは無関係であった。クロマチン免疫沈降実験により、より悪性の癌細胞株におけるヒストン修飾のより低い細胞レベルが、ゲノムにわたる遺伝子プロモーターではなく、ＤＮＡ繰返し要素における修飾のより低いレベルに相関することが示された。結果は、ヒストン修飾のより低い全体的レベルが、より悪性の癌の表現型を予測することを示唆し、種々の組織起源の腺癌の予後のエピジェネティックパターンにおける驚くべき共通性を明らかにした。
Holdenrieder S、Stieber P、Bodenmuller H、Busch M、Fertig G、Furst H、Schalhorn A、Schmeller N、Untch M、SeidelD著、Nucleosomes in serum of patients with benign andmalignant diseases. Int J Cancer 2001 Mar 20;95(2):114-20
Kurdistani SK著、Histone modifications as markers of cancer prognosis: a cellularview. Br J Cancer. 2007 Jul 2;97(1):1-5. Epub 2007 Jun 26
Barlesi F、Giaccone G、Gallegos-Ruiz MI、Loundou A、Span SW、Lefesvre P、Kruyt FA、Rodriguez JA著、Global histone modifications predict prognosis of resected nonsmall-cell lung cancer. J Clin Oncol. 2007 Oct 1;25(28):4358-64
Deligezer U、Akisik EE、Erten N、DalayN著、Sequence-specific histone methylation is detectableon circulating nucleosomes in plasma. Clin Chem. 2008 Jul;54(7):1125-31. Epub2008 May 16
Seligson DB、Horvath S、McBrian MA、Mah V、Yu H、Tze S、Wang Q、Chia D、GoodglickL、Kurdistani SK著、Global Levelsof Histone Modifications Predict Prognosis in Different Cancers. Am J Pathol.2009 Apr 6
肺癌は、癌死の主な原因である。最適な診断及び早期治療にも関らず、多くの患者が再発疾患で死亡する。癌、特に肺癌等の固形癌における腫瘍再発のリスクを予測するために十分有用なバイオマーカーはない。したがって、本発明の目的は、こうした再発癌のための新しい診断アッセイを、該アッセイを行うための適切な手段とともに提供することである。さらなる目的及び利点は、本発明の以下のより詳細な説明を読むことにより当業者には明らかとなろう。
本発明の好ましい第１の態様では、本発明は、哺乳類患者における癌再発のリスクを診断する方法であって、前記患者から取得される生体試料においてマクロＨ２Ａ１．１及び／又はマクロＨ２Ａ２の発現を検出することを含み、前記マクロＨ２Ａ１．１及び／又はマクロＨ２Ａ２の発現の低下又は減弱は、前記患者における肺癌再発のリスクの増大を示す、方法に関する。好ましくは、本発明による方法は、前記診断に基づく前記癌再発、更に好ましくは転移性再発の予測を更に含む。
本発明の好ましい第２の態様では、本発明は、上記のように哺乳類患者における癌再発のリスクを診断する方法であって、マクロＨ２Ａ１．１の発現に基づいて腫瘍における老化細胞、特に癌細胞の診断を更に含む、方法に関する。
本発明の好ましい第３の態様では、本発明は、マクロＨ２Ａ１．１又はマクロＨ２Ａ２に特異的な薬剤に対するスクリーニング方法であって、マクロＨ２Ａ１．１又はマクロＨ２Ａ２に潜在的に特異的な薬剤とマクロＨ２Ａ１．１又はマクロＨ２Ａを接触させること、及び前記薬剤が特にマクロＨ２Ａ１．１又はマクロＨ２Ａと結合するか否かを判断することを含む、方法に関する。
本発明の好ましい第４の態様では、本発明は、本発明による、マクロＨ２Ａ１．１又はマクロＨ２Ａ２に特異的な薬剤をスクリーニングする方法に従ってスクリーニングされた、診断薬及び／又は治療薬に関する。
本発明の好ましい第５の態様では、本発明は、マクロＨ２Ａ１．１若しくはマクロＨ２Ａ２に特異的な抗体、若しくはそのマクロＨ２Ａ１．１若しくはマクロＨ２Ａ２に特異的な断片を製造する方法であって、ａ）クロマトグラフィカラムに結合されたマクロＨ２Ａ１．１ドメイン若しくはマクロＨ２Ａ２ドメインを用いる、抗体を含む血清若しくは細胞培養上清のアフィニティ精製、又はｂ）マクロＨ２Ａ１．１ドメイン若しくはマクロＨ２Ａ２ドメインを用いてｓｃ−Ｆｖファージディスプレイライブラリをスクリーニングすることを含む、方法に関する。
本発明の好ましい第６の態様では、本発明は、本発明に記載の診断薬、及び／又は、本発明に記載のマクロＨ２Ａ１．１若しくはマクロＨ２Ａ２に特異的な抗体若しくはそのマクロＨ２Ａ１．１若しくはマクロＨ２Ａ２に特異的な断片を、任意選択的に上記のように本発明に記載の方法を行うための追加の補助剤とともに具備する診断キットに関する。
本発明の好ましい第７の態様では、本発明は、哺乳類患者の癌を治療する方法であって、上記のように本発明に記載の方法、並びに前記患者における癌再発のリスクが増大していると特定された患者の前記癌の再発、好ましくは転移性再発を治療及び／又は予防することを含む、方法に関する。
本発明の好ましい第７の態様では、本発明は、本発明に記載の方法によってスクリーニングされる薬剤、並びに／又は、本発明に記載のマクロＨ２Ａ１．１若しくはマクロＨ２Ａ２に特異的な抗体、若しくはそのマクロＨ２Ａ１．１若しくはマクロＨ２Ａ２に特異的な断片、又は癌の予防、治療及び／若しくは診断、特に癌再発、好ましくはその転移性再発の予防、治療及び／若しくは診断のための本発明に記載のキットの使用に関する。
本発明は、概して、ヒストンマクロＨ２Ａ１．１及びマクロＨ２Ａ２の発現が肺癌再発を予測するという発見に基づき、これらのヒストン変異体を、癌患者の改善されたリスク層別化のための新規な手段として同定する。マクロＨ２Ａアイソフォームは、老化している細胞、すなわち既知の抗腫瘍メカニズムにおいて、発現上昇及び高発現し、マクロＨ２Ａ１．１を、腫瘍における老化細胞に対する有用なバイオマーカーとして示唆する。マクロＨ２Ａ１．１は、予後が良好な腫瘍においてより高発現する。
さらに、本発明の関連において、マクロＨ２Ａ１．１発現の予後相関が、癌患者予後を評価するために一般に用いられている増殖マーカーＫｉ−６７よりも優れていることが分かった。本発明者らは、マクロＨ２Ａ１．１及びマクロＨ２Ａ２の発現と腫瘍増殖率との間に強い負の相関を観察する。低速で増殖する腫瘍は、マクロＨ２Ａ１．１及びマクロＨ２Ａ２の高発現を示す傾向があり、一方で臨床的により悪性であることが多い、増殖指数が高い腫瘍は、発現がより低下若しくは減弱しているか、又は更には発現がない。
したがって、本発明は、その第１の態様では、哺乳類患者における癌再発のリスクを診断する方法であって、前記患者から取得される生体試料においてマクロＨ２Ａ１．１及び／又はマクロＨ２Ａ２の発現を検出することを含み、前記マクロＨ２Ａ１．１及び／又はマクロＨ２Ａ２の発現の低下又は減弱は、前記患者における肺癌再発のリスクの増大を示す、方法に関する。好ましくは、発現解析の結果（複数の場合あり）を、適切な装置で表示することができる。本発明の文脈では、マクロＨ２Ａ１．１及び／又はマクロＨ２Ａ２の発現の「低下」又は「減弱」とは、再発前の同じ患者か若しくは再発のリスクがない異なる患者、又は健康な患者若しくは患者群からの試料と比較して、マクロＨ２Ａ１．１及び／又はマクロＨ２Ａ２の発現が減弱していることを意味するものとする。発現が低下又は減弱を確定する別の方策は、更に後述するように、好ましくはマクロＨ２Ａ１．１及び／又はマクロＨ２Ａ２に特異的な抗体を用いる組織学的スライドにおける染色の欠如である。更に別の方策は、発現マクロＨ２Ａ１．１及び／又はマクロＨ２Ａ２を、試料（複数の場合あり）のマクロＨ２Ａ１．２の発現と比較することであり、本発明による方法の好ましい実施の形態では、発現は、前記試料及び／又は対照試料におけるマクロＨ２Ａ１．２の発現に正規化される。この場合もまた、対照試料を、再発前の同じ患者か若しくは再発のリスクがない異なる患者、又は健康な患者若しくは患者群からの試料とすることができる。
本発明は、その好ましい実施の形態において、哺乳類患者における癌再発のリスクを診断する方法であって、前記患者から取得される生体試料においてマクロＨ２Ａ１．１及び／又はマクロＨ２Ａ２の発現を検出すること、及びマクロＨ２Ａ１．１及び／又はマクロＨ２Ａ２の前記発現を対照試料と比較することを含み、前記マクロＨ２Ａ１．１及び／又はマクロＨ２Ａ２の発現の低下又は減弱は、前記患者における肺癌再発のリスクの増大を示す、方法に関する。好ましくは、発現解析及び／又は比較の結果（複数の場合あり）を、診断コンピューター等の適切な装置で表示又は出力することができる。
本発明による方法のさらなる好ましい実施の形態では、マクロＨ２Ａ１．１又はマクロＨ２Ａ２の発現と無病生存期間との相関は、Ｐ＜０．０５、好ましくはＰ＜０．０１、より好ましくはＰ＜０．００６の重要性を有する。
本発明による方法のさらなる好ましい実施の形態は、Ｋｉ−６７等のさらなる癌マーカーの発現を検出することを更に含む。好ましくは、前記生体試料における前記マクロＨ２Ａ１．１及び／又はマクロＨ２Ａ２の発現が、Ｋｉ−６７の発現に逆相関する。
本発明による方法の更に別の好ましい態様は、本発明による前記診断に基づく前記癌再発の予測工程を更に含む。本明細書で用いる「再発」とは、好ましくは腫瘍組織の発現及び転移等、患者の無病生存期間後の癌（複数の場合あり）のパラメータの臨床症状を指す。予測（又は可能性）は、例えば患者又は患者群の臨床パラメータ、腫瘍のタイプ等のような、さらなるパラメータを含むことも可能である。予測の結果を、好ましくは、適切な装置で表示することができる。
本発明による方法を用いて、いかなるタイプの固形癌も診断することができる。したがって、前記癌が、固形癌、肺癌、乳癌、腎臓癌、肝臓癌、頭頸部癌、前立腺癌、膵臓癌、胃癌、結腸癌、甲状腺癌、食道癌及び脳癌の群から選択される、本発明による方法が好ましい。乳癌又は肺癌の診断方法がより好ましい。
本発明によるマーカーの発現の直接又は間接的検出が可能である限り、本発明による方法に対していかなる生体試料を用いることも可能である。したがって、生体試料は、肺腫瘍、乳腺腫瘍、腎臓腫瘍、肝臓腫瘍、頭頸部腫瘍、前立腺腫瘍、膵臓腫瘍、胃腫瘍、結腸腫瘍、甲状腺腫瘍、食道腫瘍及び脳腫瘍、全血、血清、血漿、尿、リンパ液、脳液、組織試料、並びに組織学的スライド等の調製された組織試料からの細胞群から選択することができる。前記試料が、手術中の患者から採取されるか又は血清試料である、本発明による方法が好ましい。
そして、本発明による方法の別の好ましい態様は、マクロＨ２Ａ１．１の発現に基づく、腫瘍における老化細胞、特に癌細胞の診断又はさらなる診断に関する。マクロＨ２Ａ１．１が、多数の老化細胞を有していることが知られている齧歯動物の肺腺腫に豊富であるが、老化を克服し制御されない増殖を示す肺癌では、発現低下しているか又は存在していないという発見もまた、これらの結論と一貫し、抗腫瘍メカニズムとしての老化の概念を強調する。したがって、本発明による方法のこの好ましい態様では、発現を用いて、マーカーのマクロＨ２Ａ１．１の発現に基づいて腫瘍における老化細胞、特に癌細胞の量又は比を概してモニタリングすることができる。老化細胞の量又は比は、患者の再発を示すものとして、化学療養又は放射線等の抗腫瘍治療の成功又は効果をモニタリングするため、又は、癌細胞の数が増大しているか否かを確認するために用いられる、腫瘍細胞の成長に対する指標である。他の老化マーカーを測定することもでき、前記マーカーを測定又は検出する方法は、当業者には既知であり、マーカーのマクロＨ２Ａ１．１及び／又はマクロＨ２Ａ２に対して本明細書に記載した通りである。
本発明による方法との関連で、マーカーの発現を測定するのを可能にする当業者に既知であるいかなる方法も使用することができる。方法の選択は、発現が核酸及び／又はタンパク質レベルで測定されるか否かと、解析される試料とによって決まる。前記発現を検出することが、特に、本明細書に記載するように、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、すなわち核酸増幅、特にｒｔＰＣＲ、マクロＨ２Ａ１．１に特異的な抗体若しくはマクロＨ２Ａ２に特異的な抗体を用いる、免疫組織化学染色（すなわちタンパク質レベル）、及び／又はｍＲＮＡ解析を含む、本発明による方法が好ましい。
そして、本発明の別の好ましい態様は、マクロＨ２Ａ１．１又はマクロＨ２Ａ２に特異的な薬剤に対するスクリーニング方法であって、マクロＨ２Ａ１．１又はマクロＨ２Ａ２に潜在的に特異的な薬剤とマクロＨ２Ａ１．１又はマクロＨ２Ａを接触させること、及び前記薬剤が特にマクロＨ２Ａ１．１又はマクロＨ２Ａと結合するか否かを判断することを含む、方法に関する。スクリーニングの特定の方法は本技術分野において既知であり、例えば、In vitro Methods in Pharmaceutical Research, Academic Press, 1997及び米国特許第５，０３０，０１５号において論じられている。潜在的にマクロＨ２Ａ１．１又はマクロＨ２Ａ２に特異的な前記薬剤が、化合物ライブラリ、ファージディスプレイライブラリ、特にｓｃ−Ｆｖファージディスプレイライブラリにおいて、又は抗体のライブラリに存在する、本発明によるスクリーニング方法が好ましい。
マクロＨ２Ａ１．１又はマクロＨ２Ａ２に潜在的に特異的な前記薬剤が診断薬及び／又は治療薬である、本発明によるスクリーニング方法が更に好ましい。すなわち、薬剤を、例えば哺乳類患者における癌再発のリスクを診断するか、若しくは老化細胞の量若しくは比をモニタリングする等、上述したような診断方法で用いることができるか、又は、例えば腫瘍細胞の老化を増大させるために用いることができる治療薬とすることができる。
そして、本発明の別の態様は、本発明による方法によってスクリーニングされる、診断薬及び／又は治療薬に関する。この薬剤を、本発明によれば、上述したようにスクリーニングし、かつ前記薬剤を医薬的に許容可能な担体、賦形剤及び／又は安定剤と共に処方する方法を含む、医薬組成物を製造する方法において、医薬組成物内に処方することができる。任意にラベルを有する、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体及び／若しくは組換え抗体、又はそれらの機能的断片から選択される、本発明によるマクロＨ２Ａ１．１又はマクロＨ２Ａ２に特異的な抗体である薬剤が好ましい。
許容可能な担体、賦形剤又は安定剤は、採用される投薬量及び濃度において受容者に対して非毒性であり、リン酸塩、クエン酸塩及び他の有機酸等の緩衝剤、アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤、防腐剤（オクタデシルジメチルベンジル塩化アンモニウム、塩化ヘキサメトニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、フェノールアルコール、ブチルアルコール若しくはベンジルアルコール、メチルパラベン若しくはプロピルパラベン等のアルキルパラベン、カテコール、レソルシノール、シクロヘキサノール、３−ペンタノール及びｍ−クレゾール等）、低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド、血清アルブミン、ゼラチン若しくは免疫グロブリン等のタンパク質、ポリビニルピロリドン等の親水性ポリマー、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン若しくはリジン等のアミノ酸、単糖類、二糖類及びグルコース、マンノース若しくはデキストリンを含む他の炭水化物、ＥＤＴＡ等のキレート剤、スクロース、マンニトール、トレハロース又はソルビトール等の糖類、ナトリウム等の造塩対イオン、金属複合物（例えば、Ｚｎ−タンパク質複合物）並びに／又はＴＷＥＥＮＴＭ、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳＴＭ若しくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の非イオン界面活性剤を含む。
そして、本発明の別の態様は、上記のように本発明による方法によってスクリーニングされる、診断薬及び／又は治療薬を含む上記のように製造される、医薬組成物又は医薬製剤に関する。
そして、本発明の別の態様は、マクロＨ２Ａ１．１若しくはマクロＨ２Ａ２に特異的な抗体、若しくはそのマクロＨ２Ａ１．１若しくはマクロＨ２Ａ２に特異的な断片を製造する方法であって、ａ）クロマトグラフィカラムに結合されたマクロＨ２Ａ１．１ドメイン若しくはマクロＨ２Ａ２ドメインを用いる、抗体を含む血清をアフィニティ精製する工程、又はｂ）マクロＨ２Ａ１．１ドメイン若しくはマクロＨ２Ａ２ドメインを用いてｓｃ−Ｆｖファージディスプレイライブラリをスクリーニングする工程を含む、方法に関する。これらの方法のそれぞれの詳細は、当業者には既知であり、本明細書に記載するように、例えば、ａ）の場合は、マクロＨ２Ａ１．１ドメイン又はマクロＨ２Ａ２ドメインに対して特異的な抗体を含むウサギ血清を使用し、又はｂ）の場合は組換えマクロＨ２Ａ１．１若しくはマクロＨ２Ａ２ドメインを使用する。
したがって、本発明の別の態様は、本発明による方法によって製造される、マクロＨ２Ａ１．１若しくはマクロＨ２Ａ２に特異的な抗体、又はｓｃ−Ｆｖ断片等、そのマクロＨ２Ａ１．１若しくはマクロＨ２Ａ２に特異的な断片に関する。好ましくは、本発明による前記マクロＨ２Ａ１．１又はマクロＨ２Ａ２に特異的な抗体は、任意にラベルを有する、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体及び／又は組換え抗体から選択される。本発明の文脈では、「マクロＨ２Ａ１．１又は（若しくは）マクロＨ２Ａ２に特異的な」とは、抗体が、マクロＨ２Ａ１．１又はマクロＨ２Ａ２のマクロドメインのエピトープと特異的に結合し、解析される試料内の他の抗原と交差反応性又は実質的な交差反応性を示さないことを意味するものとする。
そして、本発明の更に別の態様は、本発明に記載の診断薬、及び／又は、本発明に記載のマクロＨ２Ａ１．１若しくはマクロＨ２Ａ２に特異的な抗体、若しくはそのマクロＨ２Ａ１．１若しくはマクロＨ２Ａ２に特異的な断片を、任意選択的に本発明に記載の方法を行うための追加の補助剤とともに具備する診断キットに関する。本キットは、好ましくは、本発明による方法を実行するために必要な化学物質、染料、緩衝剤等を含む。本キットはまた、解析のためのＤＮＡ又はタンパク質のチップ又はマイクロアレイとともに、診断の結果を表示及び解釈するためにマニュアル及びソフトウェア及び機械も含むことができる。
そして、本発明の更に別の態様は、哺乳類患者の癌を治療する方法であって、本発明に記載の方法、並びに前記患者における癌再発のリスクが増大していると特定された患者の前記癌の再発を治療及び／又は予防することを含む、方法に関する。本明細書で用いる「治療（treatment）」は、治療的処置（therapeutic treatment）及び予防的（prophylactic又はpreventative）手段の両方を指し、目的は、標的となる病理学的状態又は疾患、特に癌再発を防止するか又は遅らせる（低下させる）ことである。治療を必要としている人には、すでに疾患がある人と、疾患がある傾向のある人又は疾患を予防すべき人とが含まれる。治療は、補助治療と治療未経験者の一次（first line）治療との両方を含むことができ、治療を、化学療法及び／又は放射線等の他の抗癌方策と組み合わせることができる。
前記治療が、その治療を必要としている前記患者に、好ましくは上記のような医薬組成物の形態である、上述したように本発明の方法によってスクリーニングされる薬剤を投与することを含む、本発明による哺乳類患者の癌を治療する方法が好ましい。好ましい薬剤は、上述したような小型化学分子若しくは抗体又はそれらの断片である。
本発明による哺乳類患者の癌を治療する方法であって、マクロＨ２Ａ１．１の発現に基づいて、前記治療に応じて腫瘍における老化細胞、特に癌細胞の量及び／又は比をモニタリングすることを更に含む、方法が更に好ましい。マクロＨ２Ａ１．１が、多数の老化細胞を有していることが知られている齧歯動物の肺腺腫に豊富であるが、老化を克服し制御されない増殖を示す肺癌では、発現低下しているか又は存在していないという発見もまた、これらの結論と一貫し、抗腫瘍メカニズムとしての老化の概念を強調する。したがって、本発明による方法のこの好ましい実施の形態では、発現を用いて、マーカーのマクロＨ２Ａ１．１の発現に基づいて腫瘍における老化細胞、特に癌細胞の量又は比を概してモニタリングすることができる。老化細胞の量又は比は、患者の再発を示すものとして、化学療養又は放射線等の抗腫瘍治療の成功又は効果をモニタリングするため、又は癌細胞の数が増大しているか否かを確認するために用いられる、腫瘍細胞の成長に対する指標である。他の老化マーカーを測定することもでき、前記マーカーを測定又は検出する方法は、当業者には既知であり、マーカーのマクロＨ２Ａ１．１及び／又はマクロＨ２Ａ２に対して本明細書に記載した通りである。
本発明によって治療される癌を、固形癌、肺癌、乳癌、腎臓癌、肝臓癌、頭頸部癌、前立腺癌、膵臓癌、胃癌、結腸癌、甲状腺癌、骨癌、食道癌及び脳癌から選択することができ、好ましくは乳癌及び／又は肺癌である。示す癌はまた、その転移形態も含む。
そして、本発明の更に別の態様は、本発明による方法によってスクリーニングされる薬剤、並びに／又は、本発明によるマクロＨ２Ａ１．１若しくはマクロＨ２Ａ２に特異的な抗体、若しくはそのマクロＨ２Ａ１．１若しくはマクロＨ２Ａ１に特異的な断片、又は、癌の予防、治療及び／若しくは診断のため、特に癌再発、特に乳癌及び／若しくは肺癌再発の予防、治療及び／若しくは診断のための、若しくは癌の予防、治療及び／若しくは診断のため、特に癌再発、特に乳癌及び／若しくは肺癌再発の予防、治療及び／若しくは診断のための薬物の製造のための、本発明によるキットの使用に関する。
前記癌は、固形癌、肺癌、乳癌、腎臓癌、肝臓癌、頭頸部癌、前立腺癌、膵臓癌、胃癌、結腸癌、甲状腺癌、骨癌、食道癌及び脳癌の群から選択され、好ましくは乳癌及び／又は肺癌である、本発明に記載の使用が好ましい。示す癌はまた、その転移形態も含む。
ヒストンは、別個の細胞タイプにおいて同様のレベルで存在するものと想定されることが多い。ヘテロクロマチンのヒストン変異体マクロＨ２Ａは、いくつかの分子及び細胞の構造的特徴では特異である。構造レベルにおいて、マクロＨ２Ａは、大型Ｃ末端伸長、マクロドメイン、およそ２５ｋＤａの球状モジュールを有し、マクロＨ２Ａ１．１の場合、特異性の高いＡＤＰリボースを結合する（Kustatscher他、２００５）。さらに、すべての脊椎動物で観察されるマクロＨ２Ａと、小分子を結合することができない、マクロＨ２Ａ１．２として知られるマクロＨ２Ａ１に対する第２のスプライス変異体とに対する２つの遺伝子がある。ここで、本発明者らは、すべてのマクロＨ２Ａアイソフォーム（マクロＨ２Ａ１．１、マクロＨ２Ａ１．２及びマクロＨ２Ａ２）に対してポリクローナル抗体及びモノクローナル抗体を開発し、これらの抗体を用いて、培養された細胞においてかつｉｎ ｖｉｖｏでマクロＨ２Ａヒストンの細胞局在化及び存在量を研究した。本発明者らは、マクロＨ２Ａが、複製老化した一次線維芽細胞において発現上昇することが分かった。さらに、ヒトの癌においてマクロＨ２Ａ１．１の発現とＫｉ−６７との間の強い負の相関がある。急速に細胞分裂する腫瘍（増殖マーカーＫｉ−６７の高発現によってマークされる）は、低レベルのマクロＨ２Ａ１．１を表し、分裂指数の低い腫瘍は、ヒストンが豊富である。両発見は、マクロＨ２Ａ１．１が、細胞の分化の程度に相関し、細胞周期から出た細胞をマークするということを論じている。
マクロＨ２Ａ１．１が、多数の老化細胞を有していることが知られている齧歯動物の肺腺腫に豊富であるが、老化を克服し制御されない増殖を示す肺癌では、発現低下しているか又は存在していないという発見もまた、これらの結論と一貫し、抗腫瘍メカニズムとしての老化の概念を強調する。有意に、本発明者らは、マクロＨ２Ａ１．１レベルが、肺癌における腫瘍再発のリスクに対して優れた予測因子であることが分かる。本発明者らが解析することができる明確な数の患者では、マクロＨ２Ａ１．１レベルは、一般的な増殖マーカーであるＫｉ−６７との相関に対して統計的に優れていることが分かった（マクロＨ２Ａ１．１の場合はＰ＝０．００５８、Ｋｉ−６７の場合はＰ＝０．０７９８３）。
乳癌組織アレイに対する現時点で利用可能な患者情報は、マクロＨ２Ａ１．１レベルと臨床転帰との相関を評価するには不十分である。肺腫瘍からのデータに基づいて、マクロＨ２Ａ１．１は、乳癌においても有用な予後バイオマーカーであるように見える。さらなる検査により、他の癌におけるその有用性が明らかになる。
細胞老化中のマクロＨ２Ａ１．１遺伝子産物の発現上昇及び発癌におけるその役割を確認するメカニズムは、未だ解明されていない。予備的証拠は、ｍＲＮＡレベルが老化中は変化しないことを示唆し、転写後プロセスはマクロＨ２Ａ１．１の発現上昇を考慮することができることを示唆する。
無病生存期間と共にマクロＨ２Ａ１．１発現を統計的に支持されて観察することにより、癌、特に肺癌患者における再発のリスクの改善された層別化の可能性が広がり、その観察を、より大きい患者集団で繰り返すべきである。将来の研究は、マクロＨ２Ａ１．１発現上昇がヒトの腫瘍における老化細胞の一般的な特徴であるか否かと、高いマクロＨ２Ａ１．１染色が、概して腫瘍細胞における細胞分化の程度を反映するか否かとについてさらなる洞察を提供するであろう。本発明の新たなツールは、ハイリスク型の癌、特に乳癌又は肺癌患者の特定を改善し、したがって、予後が厳しい癌において治療方策のより優れた標的化を可能にする。
ここで、本発明を、添付図面を参照して以下の実施例で、ただしそれに限定されずに、更に説明する。本発明の目的で、本明細書に列挙するすべての参照文献は、その全体が参照により本明細書に援用される。
図１
macro マクロ
in percent パーセント
Sample, Patient 試料、患者
protein expression level タンパク質発現レベル
図２
macro マクロ
in percent パーセント
Sample, Patient 試料、患者
Provability 確率
protein expression level タンパク質発現レベル
Disease-free survival time (in months) 無病生存期間（月）
図３
macro マクロ
Antibody 抗体
Overlay オーバーレイ
anti 抗
図４
Empty vector 空ベクター
Anti-macro 抗マクロ
図５
Histone ヒストン
Sample, Patient 試料、患者
図６
macro マクロ
Sample, Patient 試料、患者
in percent パーセント
Provability 確率
protein expression level タンパク質発現レベル
Disease-free survival time (in months) 無病生存期間（月）
図７
macro マクロ
Sample, Patient 試料、患者
macro マクロ
in percent パーセント
Sample, Patient 試料、患者
protein expression level タンパク質発現レベル
図２
macro マクロ
in percent パーセント
Sample, Patient 試料、患者
Provability 確率
protein expression level タンパク質発現レベル
Disease-free survival time (in months) 無病生存期間（月）
図３
macro マクロ
Antibody 抗体
Overlay オーバーレイ
anti 抗
図４
Empty vector 空ベクター
Anti-macro 抗マクロ
図５
Histone ヒストン
Sample, Patient 試料、患者
図６
macro マクロ
Sample, Patient 試料、患者
in percent パーセント
Provability 確率
protein expression level タンパク質発現レベル
Disease-free survival time (in months) 無病生存期間（月）
図７
macro マクロ
Sample, Patient 試料、患者
配列番号１から配列番号８は、以下の実施例で用いられるオリゴヌクレオチドの配列を示す。
物質及び方法
ヒストン及びｍＲＮＡ抽出、ウエスタンブロッティング並びにリアルタイムＰＣＲ
スイッチ可能なＭＥＫ１−ＥＲ融合タンパク質を発現するＩＴＭ細胞の生成について上述した。４０ＨＴあり又はなしでのインキュベーションの後、細胞を採取し分注した。１つの細胞アリコットを、０．４Ｍ ＨＣｌ内に再懸濁させ、４時間インキュベートしてヒストンタンパク質を抽出し、遠心分離して、水に透析した。ＲＮｅａｓｙ Ｍｉｎｉ Ｐｒｅｐキット（Qiagen）を用いてＲＮＡを抽出した。ＲＮＡｅａｓｙスピンカラムのフロースルーから、アセトンによりタンパク質を沈殿させた。タンパク質抽出物を、投入前にブラッドフォード（Bradford）アッセイにより正規化した。アイソフォーム特異的なマクロＨ２Ａ抗体とともに、Ｈ２Ａに対する市販の抗体（Abcam、ａｂ１５６５３、１：３０００）及びＨ３に対する市販の抗体（Abcam、ａｂ１７９１、１：３００００）を用いて、ウエスタンブロットを行った。Ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ ＩＩ逆転写酵素（Invitrogen）を用いて、第一鎖ｃＤＮＡ合成を行った。ｃＤＮＡを、以下のオリゴを用いてリアルタイムＰＣＲ（Applied Biosystems）によって連続的に解析した。
mH2A1.1 AAGTTGTACAGGCTGACATTGC（配列番号１）；
GTTCTTTTTCCGGAGTTCCA（配列番号２）、
mH2A1.2 CTTTGAGGTGGAGGCCATAA（配列番号３）；
CACAAACTCCTTGCCACCTT（配列番号４）、
mH2A2 GGACGTCCAAAAAGTCCAAA（配列番号５）；
GCTTCTGTCCCAGAACAAGG（配列番号６）、
and GAPDH TGGGTGTGAACCATGAGAAGTA（配列番号７）；
CCTTCCACGATACCAAAGTTGT（配列番号８）。
試料を、本発明者らが試験実行におけるこれらの実験に対して信頼性の高い対照として事前に同定したＧＡＰＤＨに正規化した。
ヒストン及びｍＲＮＡ抽出、ウエスタンブロッティング並びにリアルタイムＰＣＲ
スイッチ可能なＭＥＫ１−ＥＲ融合タンパク質を発現するＩＴＭ細胞の生成について上述した。４０ＨＴあり又はなしでのインキュベーションの後、細胞を採取し分注した。１つの細胞アリコットを、０．４Ｍ ＨＣｌ内に再懸濁させ、４時間インキュベートしてヒストンタンパク質を抽出し、遠心分離して、水に透析した。ＲＮｅａｓｙ Ｍｉｎｉ Ｐｒｅｐキット（Qiagen）を用いてＲＮＡを抽出した。ＲＮＡｅａｓｙスピンカラムのフロースルーから、アセトンによりタンパク質を沈殿させた。タンパク質抽出物を、投入前にブラッドフォード（Bradford）アッセイにより正規化した。アイソフォーム特異的なマクロＨ２Ａ抗体とともに、Ｈ２Ａに対する市販の抗体（Abcam、ａｂ１５６５３、１：３０００）及びＨ３に対する市販の抗体（Abcam、ａｂ１７９１、１：３００００）を用いて、ウエスタンブロットを行った。Ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ ＩＩ逆転写酵素（Invitrogen）を用いて、第一鎖ｃＤＮＡ合成を行った。ｃＤＮＡを、以下のオリゴを用いてリアルタイムＰＣＲ（Applied Biosystems）によって連続的に解析した。
mH2A1.1 AAGTTGTACAGGCTGACATTGC（配列番号１）；
GTTCTTTTTCCGGAGTTCCA（配列番号２）、
mH2A1.2 CTTTGAGGTGGAGGCCATAA（配列番号３）；
CACAAACTCCTTGCCACCTT（配列番号４）、
mH2A2 GGACGTCCAAAAAGTCCAAA（配列番号５）；
GCTTCTGTCCCAGAACAAGG（配列番号６）、
and GAPDH TGGGTGTGAACCATGAGAAGTA（配列番号７）；
CCTTCCACGATACCAAAGTTGT（配列番号８）。
試料を、本発明者らが試験実行におけるこれらの実験に対して信頼性の高い対照として事前に同定したＧＡＰＤＨに正規化した。
抗体の生成
マクロＨ２Ａ１．１（アミノ酸１９８〜２２６）及びマクロＨ２Ａ１．２（アミノ酸１９８〜２２８）を発現させ、ＧＳＴ融合タンパク質として精製した。マクロＨ２Ａ２（アミノ酸１６２〜３７２）のマクロドメインを、（Ｈｉｓ）６−タグ融合タンパク質として精製した。抗原をウサギ（Eurogentec）に注入した。製造業者の指示に従って、ＨｉＴｒａｐ Ｐｒｏｔｅｉｎ−Ｇ ＨＰカラム（GE Healthcare Life Sciences）を用いてウサギ血清から抗体を回収した。３つのマクロＨ２Ａアイソフォームの組換え（Ｈｉｓ）６−タグ付きマクロドメインを、ＨｉＴｒａｐ ＮＨＳ活性化ＨＰ（GE Healthcare）に結合した。これらのカラムを、後に、アイソフォームに特異的な抗体のアフィニティ精製に用いた。
マクロＨ２Ａ１．１（アミノ酸１９８〜２２６）及びマクロＨ２Ａ１．２（アミノ酸１９８〜２２８）を発現させ、ＧＳＴ融合タンパク質として精製した。マクロＨ２Ａ２（アミノ酸１６２〜３７２）のマクロドメインを、（Ｈｉｓ）６−タグ融合タンパク質として精製した。抗原をウサギ（Eurogentec）に注入した。製造業者の指示に従って、ＨｉＴｒａｐ Ｐｒｏｔｅｉｎ−Ｇ ＨＰカラム（GE Healthcare Life Sciences）を用いてウサギ血清から抗体を回収した。３つのマクロＨ２Ａアイソフォームの組換え（Ｈｉｓ）６−タグ付きマクロドメインを、ＨｉＴｒａｐ ＮＨＳ活性化ＨＰ（GE Healthcare）に結合した。これらのカラムを、後に、アイソフォームに特異的な抗体のアフィニティ精製に用いた。
乳癌組織マイクロアレイ
National Center of TumorDiseases（ＮＣＴ）、Heidelberg、Germanyによって、乳癌ＴＭＡが提供された。それらは、異なるブロックに分散された、各スライドに患者当り２つの試料で、２６０人の患者のホルマリン固定されかつパラフィン包理された試料を含んでいた。すべての乳癌患者は女性、中央年齢は５８歳（範囲、３０歳〜８８歳）であった。これらの患者に関する臨床データは、さらなる解析には不十分であった。
National Center of TumorDiseases（ＮＣＴ）、Heidelberg、Germanyによって、乳癌ＴＭＡが提供された。それらは、異なるブロックに分散された、各スライドに患者当り２つの試料で、２６０人の患者のホルマリン固定されかつパラフィン包理された試料を含んでいた。すべての乳癌患者は女性、中央年齢は５８歳（範囲、３０歳〜８８歳）であった。これらの患者に関する臨床データは、さらなる解析には不十分であった。
肺癌患者及び肺組織マイクロアレイ
Thoraxklinik Heidelberg、Germany及びＮＣＴによって肺癌ＴＭＡが提供された。スライドは、切除可能であることが分かり、かつ２００４年３月から１２月の間に手術を受けた、ＮＳＣＬＣの４１人の患者の試料を含んでいた（２３人が腺腫、１８人が扁平上皮癌）。
Thoraxklinik Heidelberg、Germany及びＮＣＴによって肺癌ＴＭＡが提供された。スライドは、切除可能であることが分かり、かつ２００４年３月から１２月の間に手術を受けた、ＮＳＣＬＣの４１人の患者の試料を含んでいた（２３人が腺腫、１８人が扁平上皮癌）。
手術中に収集されたこれらの患者の試料をホルマリン固定しパラフィン包理し、対照試料も含むＴＭＡを構成するために用いた。品質の理由で、２人の患者の試料は解析することができず、そのため、解析には３９人の患者の試料が含まれていた。研究対象集団の臨床的特徴について表１を参照されたい。人的資源の収集及び使用が、地域の倫理委員会によって承認された（ethical vote #270/2001、２００５年更新）。患者からはインフォームドコンセントを得た。
（表１）非小細胞肺癌研究対象集団の特徴
特徴 中央（範囲）／度数
性別（男／女） 31/8
診断時の年齢（歳） 64（43-80）
全身状態（0/1/2） 28/11/0
腫瘍細胞タイプ（AC/SCC) 22/17
手術のタイプ（LO-BI-PN) 26/2/11
切除状態（R0/R1/R2) 32/5/2
疾患の病期（手術後）(Ia/Ib/IIa/IIb/IIIa/IIIb/IV)
1/11/0/4/13/6/4
１年以内の腫瘍再発(y/n) 18/21
（AC:腺癌、SCC:扁平上皮癌、BI:二葉切除、LO:肺葉切除、PN:肺全摘出）
Ｒ２切除患者のうち、１人が再発（遠隔転移）、１人が再発なく生存、Ｒ１切除患者のうち、３人が再発（２人は局所転移、１人は遠隔転移）、２人は再発なく生存、Ｒ０切除患者のうち、１５人が再発、１７人が再発なく生存。
特徴 中央（範囲）／度数
性別（男／女） 31/8
診断時の年齢（歳） 64（43-80）
全身状態（0/1/2） 28/11/0
腫瘍細胞タイプ（AC/SCC) 22/17
手術のタイプ（LO-BI-PN) 26/2/11
切除状態（R0/R1/R2) 32/5/2
疾患の病期（手術後）(Ia/Ib/IIa/IIb/IIIa/IIIb/IV)
1/11/0/4/13/6/4
１年以内の腫瘍再発(y/n) 18/21
（AC:腺癌、SCC:扁平上皮癌、BI:二葉切除、LO:肺葉切除、PN:肺全摘出）
Ｒ２切除患者のうち、１人が再発（遠隔転移）、１人が再発なく生存、Ｒ１切除患者のうち、３人が再発（２人は局所転移、１人は遠隔転移）、２人は再発なく生存、Ｒ０切除患者のうち、１５人が再発、１７人が再発なく生存。
免疫組織化学
連続ＴＭＡスライドを用いて、マクロＨ２Ａ１．１、マクロＨ２Ａ１．２、マクロＨ２Ａ２、Ｋｉ−６７（Dako Cytomation、モノクローナルマウス抗ヒトＫｉ−６７、クローンＭＩＢ−１、１：１００）及びヒストンＨ３（Abcam；ａｂ１７９１；１：１０００希釈液）に対する免疫組織化学染色を行った。Ａｐｅｒｉｏ Ｓｃａｎｓｃｏｐｅ Ｓｙｓｔｅｍ及びＩｍａｇｅＳｃｏｐｅソフトウェアを用いてDepartment of Pathology（HeidelbergUniversity）でスライドをスキャンした。
連続ＴＭＡスライドを用いて、マクロＨ２Ａ１．１、マクロＨ２Ａ１．２、マクロＨ２Ａ２、Ｋｉ−６７（Dako Cytomation、モノクローナルマウス抗ヒトＫｉ−６７、クローンＭＩＢ−１、１：１００）及びヒストンＨ３（Abcam；ａｂ１７９１；１：１０００希釈液）に対する免疫組織化学染色を行った。Ａｐｅｒｉｏ Ｓｃａｎｓｃｏｐｅ Ｓｙｓｔｅｍ及びＩｍａｇｅＳｃｏｐｅソフトウェアを用いてDepartment of Pathology（HeidelbergUniversity）でスライドをスキャンした。
マクロＨ２Ａの発現レベルを、スコアリング：０〜１、ネガティブ／弱染色；１〜２、中染色；２〜３、強い核陽性を用いて、半定量的に評価した。増殖指数を、増殖マーカーＫｉ−６７に対する抗体を用いて確定し、コア内のすべての腫瘍細胞とのポジティブ染色された腫瘍の比較のパーセンテージとしてスコアリングした。すべてのスライドを盲目的に評価しかつスコアリングし、２回繰り返した。
マウス腫瘍におけるマクロＨ２Ａアイソフォームの解析のために、活性化された７か月〜９か月のＫ−Ｒａｓ Ｐ／Ｇ１２Ｖｇｅｏマウスからの肺（Guerra他、２００３）を解剖し、１０％緩衝ホルマリン（Sigma）に固定し、パラフィンで包理した。連続した３ｍｍ〜５ｍｍ厚さの切除部分を、ヘマトキシリン及びエオシンで染色し、マクロＨ２Ａ１．１抗体及びマクロＨ２Ａ１．２抗体（１：７５希釈液）を用いて免疫組織化学染色に対して処理した。肺病変の重症度分類を、専門家の病理医によってマウス肺癌に対して最新の形態学的に許容される基準に従って行った（Jacson他、２００５）。グレード１〜３新生物が腺腫（良性病変）と分類され、グレード４〜５が腺癌（悪性病変）として分類された。
統計的分析
Ｋｉ−６７とマクロＨ２Ａ１．１との関係を、アレイによって層別化された条件付き線形関連検定（conditional linear association test）を用いて評価した（Hothorn他、２００６）。無病生存期間の依存度を、同様にアレイで層別化された条件付きログ−ランク検定（long-rank test）によって確立した（Hothorn他、２００６)。
Ｋｉ−６７とマクロＨ２Ａ１．１との関係を、アレイによって層別化された条件付き線形関連検定（conditional linear association test）を用いて評価した（Hothorn他、２００６）。無病生存期間の依存度を、同様にアレイで層別化された条件付きログ−ランク検定（long-rank test）によって確立した（Hothorn他、２００６)。
２つのヒトマクロＨ２Ａ遺伝子に対して３つの遺伝子産物があり、すべてがＮ末端Ｈ２Ａ状フォールド及びＣ末端マクロドメインを含む。マクロＨ２Ａ１．１及びマクロＨ２Ａ１．２は、Ｈ２ＡＦＹ遺伝子産物の選択的スプライシング（alternative splicing）を通して生成され、マクロＨ２Ａ２は第２の遺伝子Ｈ２ＡＦＹ２によってコード化される。ｉｎ ｖｉｔｒｏで、他のアイソフォームではなくマクロＨ２Ａ１．１のマクロドメインがＡＤＰリボース及び関連するＮＡＤメタボライトを結合する（Kustatscher他、２００５）。本発明者らは、種々のマクロＨ２Ａアイソフォームを検出し識別するために特異的な抗体を生成した（図４）。
マクロＨ２Ａ１．１発現を、分化した非増殖性組織に制限することができることが示唆された（Pehrson他、１９９７）。マクロＨ２Ａ１．１タンパク質発現と細胞増殖とのあらゆる相関を解析するために、本発明者らは、２６０人の患者の乳癌試料を含む組織マイクロアレイ（ＴＭＡ）に対して免疫組織化学染色を行った（図１）。本発明者らは、コア内のすべての腫瘍細胞におけるマクロＨ２Ａ及び増殖マーカーＫｉ−６７の発現レベルを評価した。ヒストンＨ３染色は陽性対照としての役割を果たし、コア内のすべての細胞において強い核染色を示した（図５）。本発明者らは、アレイによって層別化された条件付き線形関連検定を用いてＫｉ−６７発現とマクロＨ２Ａ１．１発現との関係を評価した。本発明者らは、マクロＨ２Ａ１．１発現がＫｉ−６７レベルと非常に相関しており（Ｐ＜０．００１）、Ｋｉ−６７陽性癌細胞の増大によるマクロＨ２Ａ１．１の減少を示すことが分かる。マクロＨ２Ａ２に対して同様の関係が観察され（Ｐ＜０．００１）、マクロＨ２Ａ１．２はこれらの腫瘍において遍在的に発現する（図１）。後者は、一部には、マクロＨ２Ａ１．２に対する抗体のアフィニティが高いためである可能性があり、それにより、発現レベルの僅かな変化を比較することが困難になる可能性がある。しかしながら、明らかに、本発明者らがマクロＨ２Ａ１．２に対する非常に変化する発現レベルを認識し識別することができる組織がある（骨格筋等）。
これらのアッセイは、スプライス変異体マクロＨ２Ａ１．１の発現が、低い増殖指数を示している腫瘍に限定されることを確立している。
細胞増殖レベル及びマクロＨ２Ａ１．１レベルが、ヒト腫瘍のセットにおいて完全な臨床パラメータといかに相関するかを検査するために、本発明者らは、切除可能であることが分かりかつ手術を受けた３９人のＮＳＣＬＣ患者（２２人が腺癌、１７人が扁平上皮癌、表１）からの試料をスコアリングした。手術の１年以内に、腫瘍は１８人の患者で再発し、２１人の患者は再発がないままであった。本発明者らが乳癌及び他の癌アレイにおいて観察するものと同様に、肺腫瘍アレイの統計的分析により、マクロＨ２Ａ１．１発現が、Ｋｉ−６７レベルと強く相関しており（Ｐ＜０．００１）、Ｋｉ−６７陽性癌細胞の増大により低減することが明らかになる（図２ａ及び図２ｂ）。これは、マクロＨ２Ａ１．１が、細胞周期を出た細胞に対するマーカーであるという証拠を立証している。
この概念を更に検査するために、本発明者らは、Ｋ−ＲａｓＧ１２Ｖによって誘発される腫瘍老化のマウスモデルから免疫組織化学的部分を解析した（Guerra他、２００３）。染色により、対応する悪性腺癌と比較して（図３ａ）、前癌状態腺腫病変におけるより高いマクロＨ２Ａ１．１発現が明らかになり、そこでは、ホールマークは多数の老化細胞である（Braig他、２００５；Chen他、２００５；Collado他、２００５）。対照的に、スプライス変異体であるマクロＨ２Ａ１．２は、腺腫及び腺癌において同様のレベルで発現する。この発現パターンにより、マクロＨ２Ａ１．１が癌遺伝子によって誘発された老化マーカーとして定義される。
マクロＨ２Ａ１．１発現による無病生存期間の依存度があるか否かを特定するために、本発明者らは、アレイによって層別化される条件付きログ−ランク検定を行った（Hothorn他、２００６）。
興味深いことに、それにより、マクロＨ２Ａ１．１発現と無病生存期間との間の著しい相関が明らかになる（Ｐ＝０．００５８）。肺腫瘍試料においてマクロＨ２Ａ１．１レベルが低い患者は、核マクロＨ２Ａ１．１染色が強い患者よりも再発する可能性が高い（図２ｃ）。マクロＨ２Ａ２の発現に対して、同様であるがより弱い相関もまた観察される（Ｐ＝０．０４１４６；図６）。対照的に、遍在的に発現するマクロＨ２Ａ１．２（図７）は、腫瘍再発に対して予後相関を示さない。一般的な増殖マーカーＫｉ−６７の発現は、無病生存期間との著しい相関は示さない（Ｐ＝０．０７９８３）ことに留意されたい。したがって、本発明者らの免疫染色及び臨床データは、ヒストンマクロＨ２Ａ１．１を、肺癌再発の新規で優れた、かつ潜在的に有用なバイオマーカーとして同定する。
老化中のヘテロクロマチンヒストンマクロＨ２Ａを更に特徴付けるために、本発明者らは、一次線維芽細胞の免疫蛍光染色を行い、マクロＨ２Ａ１アイソフォームが複製老化中に発現上昇することを観察する。マクロＨ２Ａ１．１は、老化前細胞及び老化細胞においてより高いレベルで発現するとともに、老化細胞においてＳＡＨＦに局在化する。同様に、マクロＨ２Ａ１．２もまた、標準的なヒストンＨ２Ａ等の対照タンパク質とは対照的に発現上昇する。さらに、ＳＡＨＦにおいてマクロＨ２Ａの高濃度は、ＳＡＨＦクロマチンの凝縮した特質の単なる結果ではなく、それは、細胞マクロＨ２Ａ高濃度及びＳＡＨＦの取込みが、高濃度ＤＡＰＩのヘテロクロマチン構造の形成より低速な動態に従うためであり、このことは、以前の報告（Zhang他、２００５）を裏付ける。この発見は、ｈＴＥＲＴ及びＭＥＫ：ＥＲ（ITMcells；Collado他、２００５）を表すヒト正常二倍体線維芽細胞ＩＭＲ９０に対してウエスタンブロットによって支持される。このシステムにより、ＭＥＫキナーゼ、すなわちＲａｓによって誘発される老化の下流エフェクターのスイッチ可能な活性化が可能になる。結果は、老化細胞におけるマクロＨ２Ａ１．１及びマクロＨ２Ａ１．１ヒストンタンパク質の発現上昇を示す（図３ｃ）。対照的に、標準的なヒストンＨ２Ａは、老化の誘発時に緩やかに発現低下するように見える。
BraigM. Lee S, Loddenkemper C. Rudolph C, Peters AH, Schlegelberger B et al. (2005).Oncogene induced senescence as an initial barrier in lymphoma development.Nature 436: 660-665.
Chen Z, Trotman LC, Shaffer D, Lin HK, Dotan ZA,Niki M et al. (2005). Crucial role of p53-dependent cellular senescence insuppression of Pten-deficient tumorigenesis. Nature 436: 725-730.
Collado M, Gil J, Efeyan A;Guerra C, Schuhmacher AJ, Barradas M et al. (2005). Tumour biology: senescencein premalignant tumours. Nature 436: 642.
Collado M, Serrano M. (2006). The power and thepromise of oncogene-induced senescence markers. Nat Rev Cancer 6: 472-476.
D'Amico TA. (2008). Molecular biologic stagingof lung cancer. Ann Thorac Surg 85: S737-S742.
Guerra C, Mijimolle N,Dhawahir A, Dubus P, Barradas M, Serrano M at al. (2003). Tumorinduction by an endogenous K-ras oncogenes is highly dependent on cellularcontext. Cancer Cell 4: 111-120.
Hayflick L. (1965). The limited in vitrolifetime of human diploid cell strains. Exp Cell Res 37: 614-636.
Hothorn, T., Hornik, K., Van de Wiel, M.A. &Zeileis, A. A Lego system for conditional inference. American Statistician 60,257-263 (2006).
Jackson EL, Olive KP, Tuveson DA, Bronson R,Crowley D, Brown M at al. (2005). The differential effects of mutant p53alleles on advanced murine lung cancer. Cancer Res 65: 10280-10288.
Jemal A, Siegel R, Ward E, Murray T, Xu J, ThunMJ. (2007). Cancer statistics, 2007. CA Cancer J Clin 57: 4366.
Kustatscher G, Hothorn M. Pugieux C, ScheffiekK, Ladurner AG. (2005). Splicing regulates NAD metabolite binding to histonemacroH2A. Nat Struct Mol Biol 12: 624-625.
Michaloglou C, Vredeveld LC, Soengas MS,Denoyelle C, Kuilman T, van der Horst CM et al. (2005). BRAFE600-associatedsenescence-like cell cycle arrest of human naevi. Nature 436: 720-744.
Narita M, Nuner S, Heard E, Narita M, Lin AW,Hearn SA at al. (2003). Rb-mediated heterochromatin formation and silencing ofE2F target genes during cellular senescence. Cell 113: 703-716.
Pehrson JR. Costanzi C. Dharia C. (1997)Developmental and tissue expression patterns of histone macroH2A1 subtypes. JCell Biochem 65: 107-113.
Pehrson JR, Fried VA. (1992). MacroH2A, a corehistone containing a large nonhistone region. Science 257: 1398-1400.
Serrano M, Lin AW; McCurrach ME, Beach D, LoweSW. (1997). Oncogenic ras provokes premature cell senescence associated withaccumulation of p53 and p16INK4a. Cell 88: 593-602.
Zhang R; Poustovoitov MV, Ye X, Santos HA; ChenW; Daganzo SM at al. (2005). Formation of MacroH2A-containing senescenceassociated heterochromatin foci and senescence driven by ASF1a and HIRA. Dev.Cell 8: 19-30.
Zhu CQ, Shih W, Ling CH; Tsao MS. (2006).Immunohistochemical markers of prognosis in non-small cell lung cancer: areview and proposal for a multiphase approach to marker evaluation. J ClinPatho1 59: 790-800.
Chen Z, Trotman LC, Shaffer D, Lin HK, Dotan ZA,Niki M et al. (2005). Crucial role of p53-dependent cellular senescence insuppression of Pten-deficient tumorigenesis. Nature 436: 725-730.
Collado M, Gil J, Efeyan A;Guerra C, Schuhmacher AJ, Barradas M et al. (2005). Tumour biology: senescencein premalignant tumours. Nature 436: 642.
Collado M, Serrano M. (2006). The power and thepromise of oncogene-induced senescence markers. Nat Rev Cancer 6: 472-476.
D'Amico TA. (2008). Molecular biologic stagingof lung cancer. Ann Thorac Surg 85: S737-S742.
Guerra C, Mijimolle N,Dhawahir A, Dubus P, Barradas M, Serrano M at al. (2003). Tumorinduction by an endogenous K-ras oncogenes is highly dependent on cellularcontext. Cancer Cell 4: 111-120.
Hayflick L. (1965). The limited in vitrolifetime of human diploid cell strains. Exp Cell Res 37: 614-636.
Hothorn, T., Hornik, K., Van de Wiel, M.A. &Zeileis, A. A Lego system for conditional inference. American Statistician 60,257-263 (2006).
Jackson EL, Olive KP, Tuveson DA, Bronson R,Crowley D, Brown M at al. (2005). The differential effects of mutant p53alleles on advanced murine lung cancer. Cancer Res 65: 10280-10288.
Jemal A, Siegel R, Ward E, Murray T, Xu J, ThunMJ. (2007). Cancer statistics, 2007. CA Cancer J Clin 57: 4366.
Kustatscher G, Hothorn M. Pugieux C, ScheffiekK, Ladurner AG. (2005). Splicing regulates NAD metabolite binding to histonemacroH2A. Nat Struct Mol Biol 12: 624-625.
Michaloglou C, Vredeveld LC, Soengas MS,Denoyelle C, Kuilman T, van der Horst CM et al. (2005). BRAFE600-associatedsenescence-like cell cycle arrest of human naevi. Nature 436: 720-744.
Narita M, Nuner S, Heard E, Narita M, Lin AW,Hearn SA at al. (2003). Rb-mediated heterochromatin formation and silencing ofE2F target genes during cellular senescence. Cell 113: 703-716.
Pehrson JR. Costanzi C. Dharia C. (1997)Developmental and tissue expression patterns of histone macroH2A1 subtypes. JCell Biochem 65: 107-113.
Pehrson JR, Fried VA. (1992). MacroH2A, a corehistone containing a large nonhistone region. Science 257: 1398-1400.
Serrano M, Lin AW; McCurrach ME, Beach D, LoweSW. (1997). Oncogenic ras provokes premature cell senescence associated withaccumulation of p53 and p16INK4a. Cell 88: 593-602.
Zhang R; Poustovoitov MV, Ye X, Santos HA; ChenW; Daganzo SM at al. (2005). Formation of MacroH2A-containing senescenceassociated heterochromatin foci and senescence driven by ASF1a and HIRA. Dev.Cell 8: 19-30.
Zhu CQ, Shih W, Ling CH; Tsao MS. (2006).Immunohistochemical markers of prognosis in non-small cell lung cancer: areview and proposal for a multiphase approach to marker evaluation. J ClinPatho1 59: 790-800.
Claims (12)
- 哺乳類患者における増殖性又は悪性腫瘍の診断のための判断材料を提供する方法であって、前記患者から取得された全血、血清、血漿を含む生体試料においてマクロＨ２Ａ１．１及び／又はマクロＨ２Ａ２の発現を検出することを含み、前記患者における増殖性又は悪性腫瘍の指標は、腫瘍疾患のない健康な患者由来の対照試料における前記マクロＨ２Ａ１．１及び／又はマクロＨ２Ａ２の発現と比較した前記マクロＨ２Ａ１．１及び／又はマクロＨ２Ａ２の発現の低さ又は減少である、方法。
- 哺乳類患者における緩徐な増殖性、前悪性又は良性腫瘍の診断のための判断材料を提供する方法であって、前記患者から取得された全血、血清、血漿を含む生体試料においてマクロＨ２Ａ１．１及び／又はマクロＨ２Ａ２の発現を検出することを含み、前記患者における緩徐な増殖性、前悪性又は良性腫瘍の指標は、腫瘍疾患のない健康な患者由来の対照試料における前記マクロＨ２Ａ１．１及び／又はマクロＨ２Ａ２の発現と比較した前記マクロＨ２Ａ１．１及び／又はマクロＨ２Ａ２の発現の高さ又は増加である、方法。
- 哺乳類患者における老化癌細胞を含む老化細胞の診断のための判断材料を提供する方法であって、前記患者から取得された全血、血清、血漿を含む生体試料においてマクロＨ２Ａ１．１及び／又はマクロＨ２Ａ２の発現を検出することを含み、前記患者における老化細胞の指標は、腫瘍疾患のない健康な患者由来の対照試料における前記マクロＨ２Ａ１．１及び／又はマクロＨ２Ａ２の発現と比較した前記マクロＨ２Ａ１．１及び／又はマクロＨ２Ａ２の発現の高さ又は増加である、方法。
- 哺乳類患者における癌再発のリスクの診断のための判断材料を提供する方法であって、前記患者から取得された全血、血清、血漿を含む生体試料においてマクロＨ２Ａ１．１及び／又はマクロＨ２Ａ２の発現を検出することを含み、前記患者における癌再発のリスクの指標は、腫瘍疾患のない健康な患者由来の対照試料における前記マクロＨ２Ａ１．１及び／又はマクロＨ２Ａ２の発現と比較した前記マクロＨ２Ａ１．１及び／又はマクロＨ２Ａ２の発現の低さ又は減少である、方法。
- 試料及び／又は対照試料におけるマクロＨ２Ａ１．２の発現を正規化することをさらに含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
- 癌が、固形癌、肺癌、乳癌、腎臓癌、肝臓癌、頭頸部癌、前立腺癌、膵臓癌、胃癌、結腸癌、甲状腺癌、食道癌及び脳癌の群から選択される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
- さらなる癌マーカーであるＫｉ−６７の発現を検出することを更に含み、試料におけるマクロＨ２Ａ１．１及び／又はマクロＨ２Ａ２の発現が、Ｋｉ−６７の発現に逆相関する、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
- マクロＨ２Ａ１．１の発現に基づく、該腫瘍における老化細胞、又は癌細胞の検出を更に含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
- 発現を検出することが、ＰＣＲ若しくはｒｔＰＣＲ、マクロＨ２Ａ１．１に特異的な若しくはマクロＨ２Ａ２に特異的な抗体を用いる免疫組織化学染色、及び／又はｍＲＮＡ解析を含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
- マクロＨ２Ａ１．１若しくはマクロＨ２Ａ２に特異的な抗体、又はそのマクロＨ２Ａ１．１若しくはマクロＨ２Ａ２に特異的な抗体の断片を、追加の補助剤とともに具備する、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法を行うための診断キット。
- マクロＨ２Ａ１．１若しくはマクロＨ２Ａ２に特異的な抗体、又はそのマクロＨ２Ａ１．１若しくはマクロＨ２Ａ２に特異的な抗体の断片を有効成分として含む、癌の診断、又は癌再発の診断のための薬剤。
- 癌が、固形癌、肺癌、乳癌、腎臓癌、肝臓癌、頭頸部癌、前立腺癌、膵臓癌、胃癌、結腸癌、甲状腺癌、食道癌及び脳癌の群から選択される、請求項１１に記載の薬剤。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP09008679.4 | 2009-07-02 | ||
| EP09008679A EP2270510A1 (en) | 2009-07-02 | 2009-07-02 | Diagnostic method for predicting the risk of cancer recurrence based on Histone macroH2A isoforms |
| PCT/EP2010/004008 WO2011000573A1 (en) | 2009-07-02 | 2010-07-02 | Diagnostic method for predicting the risk of cancer recurrence based on histone macroh2a isoforms |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2012531612A JP2012531612A (ja) | 2012-12-10 |
| JP2012531612A5 JP2012531612A5 (ja) | 2013-08-08 |
| JP5792165B2 true JP5792165B2 (ja) | 2015-10-07 |
Family
ID=41100520
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2012518798A Expired - Fee Related JP5792165B2 (ja) | 2009-07-02 | 2010-07-02 | ヒストンマクロｈ２ａアイソフォームに基づいて癌再発のリスクを予測する診断のための判断材料を提供する方法 |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20120171225A1 (ja) |
| EP (2) | EP2270510A1 (ja) |
| JP (1) | JP5792165B2 (ja) |
| CN (1) | CN102472753B (ja) |
| AU (1) | AU2010268389B2 (ja) |
| BR (1) | BRPI1011925A2 (ja) |
| CA (1) | CA2766656A1 (ja) |
| ES (1) | ES2681687T3 (ja) |
| SG (1) | SG177398A1 (ja) |
| WO (1) | WO2011000573A1 (ja) |
| ZA (1) | ZA201109381B (ja) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB201115098D0 (en) | 2011-09-01 | 2011-10-19 | Belgian Volition Sa | Method for detecting nucleosomes containing histone variants |
| GB201604806D0 (en) * | 2016-03-22 | 2016-05-04 | Singapore Volition Pte Ltd | Method of identifying a cancer of unknown origin |
| EP3508855A1 (en) * | 2018-01-05 | 2019-07-10 | Allianz Pharmascience Ltd | Method for the selection of patients and kit |
| EP3546944A1 (en) * | 2018-03-30 | 2019-10-02 | Universite d'Aix-Marseille (AMU) | Diagnosis and treatment of a cancer based on the overexpression of the adamtsl5 gene |
| CN108957004B (zh) * | 2018-07-09 | 2021-10-19 | 东南大学 | 检测H3K9me2和H3K36me3表达量的试剂在制备胃癌预后评估试剂盒中的应用 |
| CN111896740A (zh) * | 2019-05-06 | 2020-11-06 | 山东大学 | 诊断或预测生育缺陷的方法和试剂盒 |
Family Cites Families (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB2197915B (en) | 1986-11-19 | 1990-11-14 | Rolls Royce Plc | Improvements in or relating to fluid bearings |
| US20020052308A1 (en) * | 1999-03-12 | 2002-05-02 | Rosen Craig A. | Nucleic acids, proteins and antibodies |
| US20030190640A1 (en) * | 2001-05-31 | 2003-10-09 | Mary Faris | Genes expressed in prostate cancer |
| US20030124579A1 (en) * | 2001-09-05 | 2003-07-03 | Eos Biotechnology, Inc. | Methods of diagnosis of ovarian cancer, compositions and methods of screening for modulators of ovarian cancer |
| JP4155464B2 (ja) * | 2002-01-31 | 2008-09-24 | 独立行政法人科学技術振興機構 | 抗ヒトｃｅｎｐ−ａペプチドモノクローナル抗体産生ハイブリドーマ細胞の作成、及びその利用法 |
| DK1388734T3 (da) * | 2002-08-01 | 2004-05-03 | Mtm Lab Ag | Metode til opløsningsbaseret diagnose |
| CN100480382C (zh) * | 2002-08-16 | 2009-04-22 | 抗癌公司 | 实时测量细胞反应 |
| US20050181375A1 (en) * | 2003-01-10 | 2005-08-18 | Natasha Aziz | Novel methods of diagnosis of metastatic cancer, compositions and methods of screening for modulators of metastatic cancer |
| CA2527109A1 (en) * | 2003-05-30 | 2004-12-09 | Nippon Shinyaku Co., Ltd. | Oligo double-stranded rna inhibiting the expression of bcl-2 and medicinal composition containing the same |
| US20070148648A1 (en) * | 2003-11-04 | 2007-06-28 | Martin Dugas | Method for distinguishing who classified aml subtypes |
| DE102004037860A1 (de) * | 2004-08-04 | 2006-03-16 | Friedrich-Alexander-Universität Erlangen-Nürnberg | Turmormarker zur Diagnose von Karzinomen und/oder davon abstammender Metastasen |
| US20070105181A1 (en) * | 2005-05-04 | 2007-05-10 | Invitrogen Corporation | Identification of cancer biomarkers and phosphorylated pdroteins |
| EP1907858A4 (en) * | 2005-06-13 | 2009-04-08 | Univ Michigan | COMPOSITIONS AND METHODS OF TREATMENT AND DIAGNOSIS OF CANCER |
| US9150628B2 (en) * | 2005-11-14 | 2015-10-06 | Centre National De La Recherche Scientifique (Cnrs) | PARP inhibitors |
| WO2008144345A2 (en) * | 2007-05-17 | 2008-11-27 | Bristol-Myers Squibb Company | Biomarkers and methods for determining sensitivity to insulin growth factor-1 receptor modulators |
| JP2008292424A (ja) * | 2007-05-28 | 2008-12-04 | Nippon Medical School | 腫瘍の検出方法 |
| AU2008294687A1 (en) * | 2007-09-07 | 2009-03-12 | Universite Libre De Bruxelles | Methods and tools for prognosis of cancer in ER- patients |
| WO2009146545A1 (en) * | 2008-06-05 | 2009-12-10 | University Health Network | Compositions and methods for classifying lung cancer and prognosing lung cancer survival |
-
2009
- 2009-07-02 EP EP09008679A patent/EP2270510A1/en not_active Withdrawn
-
2010
- 2010-07-02 AU AU2010268389A patent/AU2010268389B2/en not_active Ceased
- 2010-07-02 WO PCT/EP2010/004008 patent/WO2011000573A1/en active Application Filing
- 2010-07-02 SG SG2011096849A patent/SG177398A1/en unknown
- 2010-07-02 JP JP2012518798A patent/JP5792165B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2010-07-02 ES ES10730098.0T patent/ES2681687T3/es active Active
- 2010-07-02 CN CN201080029880.5A patent/CN102472753B/zh active Active
- 2010-07-02 BR BRPI1011925A patent/BRPI1011925A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2010-07-02 CA CA2766656A patent/CA2766656A1/en not_active Abandoned
- 2010-07-02 US US13/380,324 patent/US20120171225A1/en not_active Abandoned
- 2010-07-02 EP EP10730098.0A patent/EP2449383B1/en active Active
-
2011
- 2011-12-20 ZA ZA2011/09381A patent/ZA201109381B/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ES2681687T3 (es) | 2018-09-14 |
| SG177398A1 (en) | 2012-02-28 |
| US20120171225A1 (en) | 2012-07-05 |
| EP2270510A1 (en) | 2011-01-05 |
| JP2012531612A (ja) | 2012-12-10 |
| WO2011000573A1 (en) | 2011-01-06 |
| CN102472753B (zh) | 2015-02-11 |
| EP2449383B1 (en) | 2018-05-16 |
| CN102472753A (zh) | 2012-05-23 |
| BRPI1011925A2 (pt) | 2017-10-10 |
| AU2010268389A2 (en) | 2012-01-12 |
| AU2010268389A1 (en) | 2012-01-19 |
| CA2766656A1 (en) | 2011-01-06 |
| ZA201109381B (en) | 2012-08-29 |
| EP2449383A1 (en) | 2012-05-09 |
| AU2010268389B2 (en) | 2014-09-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP6912538B2 (ja) | 血中循環腫瘍細胞に関する方法およびアッセイ | |
| EP2728017B1 (en) | Lung cancer markers and uses thereof | |
| JP5792165B2 (ja) | ヒストンマクロｈ２ａアイソフォームに基づいて癌再発のリスクを予測する診断のための判断材料を提供する方法 | |
| AU2009216910A1 (en) | Small cell lung carcinoma biomarker panel | |
| JP2012524278A (ja) | がんの臨床診断および予後診断のためのヒストン修飾パターン | |
| Silinsky et al. | CD 133+ and CXCR4+ colon cancer cells as a marker for lymph node metastasis | |
| Hokka et al. | Psf3 is a prognostic biomarker in lung adenocarcinoma | |
| CN106662543B (zh) | 肺癌患者中的非侵入性基因突变检测 | |
| KR102561377B1 (ko) | 마커 분자를 기반으로 화학요법으로 치료되어야 하는 개체를 식별하는 방법 및 관련 용도 | |
| WO2007011372A2 (en) | Therapeutic and prognostic factor yy1 in human cancer | |
| Jing et al. | Evaluating the value of uPAR of serum and tissue on patients with cervical cancer | |
| AU2020214287A1 (en) | Novel biomarkers and diagnostic profiles for prostate cancer | |
| Rodriguez et al. | Gene overexpression in pancreatic adenocarcinoma: diagnostic and therapeutic implications | |
| EP2932273B1 (en) | Inhibitors of soluble adenylyl cyclase for use in the treatment of prostate cancer | |
| TW201226903A (en) | Methods and compositions for detection of lethal system and uses thereof | |
| KR101952649B1 (ko) | Lrp-1을 유효성분으로 포함하는 방사선 저항성 암 진단용 또는 방사선 치료 예후 예측용 바이오마커 조성물 | |
| JP7122016B2 (ja) | グリオーマの予後、遠隔部再発リスク及び浸潤を判定する方法及びキット並びにグリオーマを処置するための医薬組成物 | |
| JP6695586B2 (ja) | 膵癌の再発リスクの予測に用いるための診断薬及びキット、並びに予測方法 | |
| US8394580B2 (en) | Protein markers for the detection of thyroid cancer metastasis | |
| WO2010123124A1 (ja) | 固形がんの再発および予後因子、およびその臨床利用 | |
| ES2896056T3 (es) | PD-ECGF como biomarcador de cáncer | |
| US20170218373A1 (en) | Composition for diagnosis of liver metastasis of colorectal cancer and the use thereof | |
| JP2010216826A (ja) | 新規腫瘍マーカーを用いた乳癌の検査方法 | |
| KR20170096493A (ko) | Cd24를 이용한 루미날 a 및 삼중음성유방암 환자의 예후 예측 방법 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20130619 |
|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20130619 |
|
| A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20140110 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20140120 |
|
| A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20140407 |
|
| A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20140414 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20140501 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20141202 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20150216 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20150713 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20150805 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5792165 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |