JP5736562B2 - ウシ個体における子牛虚弱症候群を診断するためのマーカー及びそれを用いた検出方法 - Google Patents
ウシ個体における子牛虚弱症候群を診断するためのマーカー及びそれを用いた検出方法 Download PDFInfo
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Description
子牛虚弱症候群は、ウシのIARS遺伝子の機能を欠失させる変異(機能欠失型変異)に起因する疾患である。ゲノムDNA上に野生型IARS遺伝子が存在しない場合、そのウシ個体は、子牛虚弱症候群に罹患する(本明細書では、罹患個体とも呼ぶ)。一方、その個体が少なくとも1つの野生型IARS遺伝子を有すれば、そのウシ個体は、子牛虚弱症候群に罹患せず、子牛虚弱症候群を発症しないから、表現型は正常である(本明細書では、正常個体とも呼ぶ)。ただし、そのウシ個体が、野生型IARS遺伝子を有する場合であっても、機能欠失型変異を有するIARS遺伝子(本明細書では、変異型IARS遺伝子とも呼ぶ)を少なくとも1つ有していれば、そのウシ個体は、子牛虚弱症候群のキャリアとなり(本明細書では、キャリア個体とも呼ぶ)、変異型IARS遺伝子を1つも有さなければ、そのウシ個体は、子牛虚弱症候群に罹患せず、キャリアにもならない(本明細書では、健常個体とも呼ぶ)。
これらのマーカーを用いて、以下のように、ウシ個体が子牛虚弱症候群の罹患個体であること、子牛虚弱症候群のキャリア個体であること、または、健常個体であることを診断することができる。
子牛虚弱症候群に罹患したウシ個体、または、子牛虚弱症候群のキャリアであるウシ個体において、IARS遺伝子の塩基配列の一部、または、全部を決定し、得られた塩基配列を、野生型IARS遺伝子の塩基配列と比較し、IARS遺伝子に機能欠失型変異が存在するか否かを決定することにより、そのウシ個体の子牛虚弱症候群の原因がIARS遺伝子にあるかどうか、また、そのウシ個体の子牛虚弱症候群の原因がIARS遺伝子にある場合、どのような変異が原因になっているのかを調べることができる。
本発明のキットは、ウシ個体において、子牛虚弱症候群に罹患していること、または、子牛虚弱症候群のキャリアであることを診断するためのキットであって、IARS遺伝子の一部または全部を有する単離されたポリヌクレオチドにおいて、IARS遺伝子の機能欠失型変異を含む領域を増幅するためのプライマーペアを含む。
IARS-F:TTACCTTCTA TGATGGGCCT C(配列番号4)
IARS-R:TTAACATCCC TGCCCTATGA C(配列番号5)
プライマーF:GGCTTACCCACCAAGGTCTTC(配列番号6)
プライマーR:CACAGTCTTCGTATTCAAAGTCTTC(配列番号7)
蛍光標識プライマー:ATGAAGCTGCCAAGATGTTTGGCCTCC(配列番号8)
Claims (12)
- ウシisoleucyl-tRNA synthetase(IARS)遺伝子(配列番号2)の一部または全部を有する単離されたDNAであって、
IARScDNA(配列番号1)の306番目の塩基を含み、
前記塩基がCであることを特徴とするDNA。 - ウシ個体において、子牛虚弱症候群に罹患していること、または、子牛虚弱症候群のキャリアであることを診断するためのマーカーであって、
ウシisoleucyl-tRNA synthetase(IARS)遺伝子の一部または全部を有する単離されたポリヌクレオチドからなり、
前記ポリヌクレオチドは、前記IARS遺伝子のcDNA(配列番号1)の306番目の塩基がCである変異を含むことを特徴とするマーカー。 - ウシ個体において、子牛虚弱症候群に罹患していること、または、子牛虚弱症候群のキャリアであることを診断するためのマーカーであって、
機能欠失型isoleucyl-tRNA synthetase(IARS)タンパク質、あるいは、機能欠失型IARSタンパク質をコードするmRNAであることを特徴とするマーカーであって、
前記機能欠失型IARSタンパク質が、ウシIARSタンパク質(配列番号3)の79番目のアミノ酸がLeuである変異を有することを特徴とする、マーカー。 - ウシ個体において、子牛虚弱症候群に罹患していること、または、子牛虚弱症候群のキャリアであることを診断するためのキットであって、
isoleucyl-tRNA synthetase(IARS)遺伝子の一部または全部を有する単離されたポリヌクレオチドにおいて、前記IARS遺伝子のcDNA(配列番号1)の306番目の塩基がCである変異を含む領域を増幅するためのプライマーペアを含むことを特徴とするキット。 - 請求項4に記載のキットであって、
さらに制限酵素を含み、
前記制限酵素は、前記プライマーペアによって増幅された領域が前記遺伝子の機能欠失型変異を有するか否かに依存して、前記プライマーペアによって増幅された領域の切断様式が異なること特徴とするキット。 - 請求項5のキットであって、
前記制限酵素がHincIIであることを特徴とするキット。 - ウシ個体において、子牛虚弱症候群に罹患していること、または、子牛虚弱症候群のキャリアであることを診断するための診断方法であって、
isoleucyl-tRNA synthetase(IARS)遺伝子のジェノタイプを調べる工程と、
前記ウシ個体から単離されたゲノムDNAまたはmRNAにおいて、isoleucyl-tRNA synthetase(IARS)遺伝子が野生型であるか機能欠失型変異を有するかを調べる工程と、
を含む診断方法であって、
前記機能欠失型変異が、ウシIARScDNA(配列番号1)における306番目の塩基がCであることを特徴とする診断方法。 - 請求項7に記載の診断方法であって、
前記ゲノムDNAに野生型IARS遺伝子が存在しない場合、または、前記mRNAに野生型IARS遺伝子から転写されたmRNAが存在しない場合、前記ウシ個体が、子牛虚弱症候群の罹患個体であると診断し、
前記ゲノムDNAに野生型IARS遺伝子と機能欠失型変異を有するIARS遺伝子が存在する場合、または、前記mRNAに野生型IARS遺伝子から転写されたmRNAと機能欠失型変異を有するIARS遺伝子から転写されたmRNAが存在する場合、前記ウシ個体が子牛虚弱症候群のキャリア個体であると診断する診断方法。 - ウシ個体において、子牛虚弱症候群に罹患していることを診断するための診断方法であって、
前記ウシ個体における、野生型isoleucyl-tRNA synthetase(IARS)タンパク質をコードするmRNAの発現量、あるいは、野生型IARSタンパク質の発現量を測定する工程を含むことを特徴とする診断方法。 - 請求項9に記載の診断方法であって、
前記発現量が検出できない場合に、前記ウシ個体が子牛虚弱症候群に罹患していると診断することを特徴とする診断方法。 - 子牛虚弱症候群のキャリアであるウシ個体の同定方法であって、
子牛虚弱症候群を発症していないウシ個体から単離されたゲノムDNAまたはmRNAにおいて、isoleucyl-tRNA synthetase(IARS)遺伝子の機能欠失型変異を有するか否かを調べる工程と、
前記ゲノムDNAに野生型IARS遺伝子と機能欠失型変異を有するIARS遺伝子が存在するウシ個体、または、前記mRNAに野生型IARS遺伝子から転写されたmRNAと機能欠失型変異を有するIARS遺伝子から転写されたmRNAが存在するウシ個体を同定する工程とを含むことを特徴とする同定方法であって、
前記機能欠失型変異が、ウシIARScDNA(配列番号1)の306番目の塩基がCであることを特徴とする同定方法。 - 子牛虚弱症候群に罹患したウシ個体において、isoleucyl-tRNA synthetase(IARS)遺伝子が、前記子牛虚弱症候群の原因であるかどうかを決定する方法であって、
子牛虚弱症候群に罹患したウシ個体、または、子牛虚弱症候群のキャリアであるウシ個体において、IARS遺伝子の塩基配列の一部または全部を決定する工程と、
決定された前記塩基配列と、野生型IARS遺伝子(配列番号2)の塩基配列とを比較する工程と、
決定された前記塩基配列に機能欠失型変異が存在するか否かを決定する工程と、
を含むことを特徴とする方法であって、
前記機能欠失型変異が、ウシIARScDNA(配列番号1)の306番目の塩基がCであることを特徴とする方法。
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