JP5680080B2 - アンカーオリゴヌクレオチドおよびアダプターオリゴヌクレオチドを用いる核酸の正規化した定量化方法 - Google Patents
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Description
(i)試料中の核酸の総数量(total quantity)、または
(ii)試料中の特定のクラスの核酸の総数量
に対して正規化するための方法であって、
(a)定量化される核酸を含有する試料を供給するステップと、
(b)第1の核酸プローブの少なくとも末端領域が試料中の核酸の特異的な結合部位とハイブリダイズし、それによって二本鎖核酸が作出されることを可能にする条件下で、前記第1の核酸プローブを試料に加えるステップであって、前記第1の核酸プローブが、少なくとも1種のプライマー結合部位、プローブ結合部位、およびアンカーオリゴヌクレオチド結合部位を含むステップと、
c)アンカーオリゴヌクレオチドの5’配列が第1の核酸プローブとハイブリダイズしないように第1の核酸プローブのアンカーオリゴヌクレオチド結合部位とハイブリダイズことを可能にする条件下で、アンカーオリゴヌクレオチドを加えるステップと、
d)核酸の3’末端でその核酸を延長するステップであって、前記アンカーオリゴヌクレオチドが第1の核酸プローブとハイブリダイズし、そのアンカーオリゴヌクレオチドがさらなる延長のための鋳型として機能する領域に達するまで、前記第1の核酸プローブが鋳型として機能するステップと、
(e)試料中の核酸の総量(total amount)または試料中の特定のクラスの核酸の総量を、前記第1の核酸プローブおよびアンカーオリゴヌクレオチドから転写されたDNAの領域と実質的に相補的な第2のプローブを使用して定量化するステップと、
(f)定量化される核酸を、必要に応じて、その配列が定量化される核酸の限定された領域(defined region)と実質的に同一な第3のプローブを使用して定量化するステップと、
(g)定量化される核酸の数量と、試料中の核酸の総数量または試料中の特定のクラスの核酸の総数量との比を決定することによって、定量化される核酸の数量を正規化するステップと
を含む方法に関する。
本発明はまた、以下の項目を提供する。
(項目1)
試料中の定量化される核酸の数量を、
(i)上記試料中の核酸の総数量、または
(ii)上記試料中の特定のクラスの核酸の総数量
に対して正規化するための方法であって、
(a)定量化される核酸を含有する試料を供給するステップと、
(b)第1の核酸プローブの少なくとも末端領域が上記試料中の核酸の特異的な結合部位とハイブリダイズし、それによって二本鎖核酸が作出されることを可能にする条件下で、上記第1の核酸プローブを上記試料に加えるステップであって、上記第1の核酸プローブが、少なくとも1種のプライマー結合部位、プローブ結合部位、およびアンカーオリゴヌクレオチド結合部位を含むステップと、
(c)アンカーオリゴヌクレオチドの5’配列が上記第1の核酸プローブとハイブリダイズしないように上記第1の核酸プローブの上記アンカーオリゴヌクレオチド結合部位とハイブリダイズすることを可能にする条件下で、上記アンカーオリゴヌクレオチドを加えるステップと、
(d)上記核酸の3’末端で上記核酸を延長するステップであって、上記アンカーオリゴヌクレオチドが上記第1の核酸プローブとハイブリダイズし、上記アンカーオリゴヌクレオチドがさらなる延長のための鋳型として機能する領域に達するまで、上記第1の核酸プローブが鋳型として機能するステップと、
(e)上記試料中の核酸の総量または上記試料中の上記特定のクラスの核酸の総量を、上記第1の核酸プローブおよびアンカーオリゴヌクレオチドから転写されたDNAの領域と実質的に相補的な第2のプローブを使用して定量化するステップと、
(f)上記定量化される核酸を、必要に応じて、その配列が上記定量化される核酸の限定された領域と実質的に同一な第3のプローブを使用して定量化するステップと、
(g)上記定量化される核酸の数量と、上記試料中の核酸の総数量または上記試料中の上記特定のクラスの核酸の総数量との比を決定することによって、上記定量化される核酸の数量を正規化するステップと
を含む方法。
(項目2)
上記定量化される核酸がRNAであり、上記特定のクラスの核酸がRNAである、項目1に記載の方法。
(項目3)
上記定量化されるRNAが、mRNA、rRNA、tRNA、nRNA、siRNA、snRNA、snoRNA、scaRNA、マイクロRNA、dsRNA、リボザイム、リボスイッチおよびウイルスRNAからなる群から選択されるRNAであり、RNAの総数量が、RNAの総数量、mRNAの総数量、rRNAの総数量、tRNAの総数量、nRNAの総数量、siRNAの総数量、snRNAの総数量、snoRNAの総数量、scaRNAの総数量、マイクロRNAの総数量、dsRNAの総数量、リボザイムの総数量、リボスイッチの総数量、ウイルスRNAの総数量からなる群から選択される、項目2に記載の方法。
(項目4)
上記定量化されるRNAがmRNAであり、上記特定のクラスの核酸がmRNAである、項目3に記載の方法。
(項目5)
上記特異的な結合部位がポリA配列またはポリA尾部である、項目4に記載の方法。
(項目6)
上記定量化される核酸がDNAであり、上記特定のクラスの核酸がDNAである、項目1に記載の方法。
(項目7)
上記定量化されるDNAが、cDNA、dsDNA、ssDNA、プラスミドDNA、コスミドDNA、染色体DNA、ウイルスDNAおよびmtDNAからなる群から選択されるDNAであり、DNAの総数量が、DNAの総数量、cDNAの総数量、dsDNAの総数量、ssDNAの総数量、プラスミドDNAの総数量、コスミドDNAの総数量、染色体DNAの総数量、ウイルスDNAの総数量およびmtDNAの総数量からなる群から選択される、項目6に記載の方法。
(項目8)
上記定量化されるDNAがcDNAであり、上記特定のクラスの核酸がcDNAである、項目7に記載の方法。
(項目9)
上記特異的な結合部位がcDNAに特異的であるか、またはポリT配列もしくはポリT尾部である、項目8に記載の方法。
(項目10)
上記第1の核酸プローブがDNAまたはRNAである、項目1から9までのいずれか一項に記載の方法。
(項目11)
定量化が、定量的リアルタイムPCRを含む、項目1から10までのいずれか一項に記載の方法。
(項目12)
上記試料中のRNAまたは特定のクラスのRNAを逆転写することを可能にする条件下で、上記試料中のRNAを逆転写酵素と接触させるステップをさらに含む、項目2から5までのいずれか一項に記載の方法。
(項目13)
上記第1の核酸プローブが、上記ポリA配列またはポリA尾部の5’末端に位置するかまたは上記ポリA配列またはポリA尾部の5’末端の近接部に位置するように上記特異的な結合部位とハイブリダイズする、項目5または項目10から12までのいずれか一項に記載の方法。
(項目14)
定量化が、定量的リアルタイムPCRを含む、項目1から13までのいずれか一項に記載の方法。
(項目15)
ライゲーションステップの後で、上記試料中のRNAまたは特定のクラスのRNAを逆転写することを可能にする条件下で、上記試料中のRNAを逆転写酵素と接触させるステップをさらに含む、項目2から5までのいずれか一項に記載の方法。
(項目16)
上記定量化が、定量的リアルタイム逆転写PCRを含む、項目15に記載の方法。
(項目17)
逆転写と定量化が同じ反応容器内で実施される、項目15または16のいずれか一項に記載の方法。
(項目18)
上記第2の核酸プローブおよび第3の核酸プローブが、1種以上の蛍光色素で標識され、上記定量化ステップが、上記試料中の蛍光シグナルを検出することを含む、項目1から17までのいずれか一項に記載の方法。
(項目19)
遺伝子発現レベルを正規化するための、項目1から18までのいずれか一項に記載の方法。
(項目20)
さらに予め定量化された核酸を上記試料に加え、上記定量化ステップにおいて上記予め定量化された核酸の数量を決定する、項目1から19までのいずれか一項に記載の方法。
(項目21)
項目1から20までのいずれか一項に記載の方法を実施するためのキットであって、(a)上記試料中の核酸の限定された領域または特定のクラスの核酸と実質的に相補的なアダプターオリゴヌクレオチドであって、1種以上のプライマー結合部位および1つのプローブ結合部位を含むアダプターオリゴヌクレオチドと、
(b)上記アダプターオリゴヌクレオチドの上記プローブ結合部位と実質的に相補的なアンカーオリゴヌクレオチドであって、上記アダプターオリゴヌクレオチドに対する結合配列の5’側にタグ配列を含むアンカーオリゴヌクレオチド
を含むキット。
(項目22)
特異的な核酸の数量を参照核酸の数量に対して正規化するための、項目1から20までのいずれか一項に記載の方法または項目21に記載のキットの使用。
(項目23)
遺伝子発現解析のための、項目1から20までのいずれか一項に記載の方法または項目21に記載のキットの使用。
試料中の核酸の総数量、または
試料中の特定のクラスの核酸の総数量
に対して正規化するための方法であって、
定量化される核酸を含有する試料を供給するステップと、
第1の核酸プローブの少なくとも末端領域が試料中の核酸の特異的な結合部位とハイブリダイズし、それによって二本鎖核酸が作出されることを可能にする条件下で、前記第1の核酸プローブを試料に加えるステップであって、前記第1の核酸プローブが、少なくとも1種のプライマー結合部位、プローブ結合部位、およびアンカーオリゴヌクレオチド結合部位を含むステップと、
アンカーオリゴヌクレオチドの5’配列が第1の核酸プローブとハイブリダイズしないように第1の核酸プローブのアンカーオリゴヌクレオチド結合部位とハイブリダイズすることを可能にする条件下で、アンカーオリゴヌクレオチドを加えるステップと、
核酸の3’末端でその核酸を延長するステップであって、前記アンカーオリゴヌクレオチドが第1の核酸プローブとハイブリダイズし、そのアンカーオリゴヌクレオチドがさらなる延長のための鋳型として機能する領域に達するまで、前記第1の核酸プローブが鋳型として機能するステップと、
試料中の核酸の総量または試料中の特定のクラスの核酸の総量を、前記第1の核酸プローブおよびアンカーオリゴヌクレオチドから転写されたDNAの領域と実質的に相補的な第2のプローブを使用して定量化するステップと、
定量化される核酸を、必要に応じて、その配列が定量化される核酸の限定された領域と実質的に同一な第3のプローブを使用して定量化するステップと、
定量化される核酸の数量と、試料中の核酸の総数量または試料中の特定のクラスの核酸の総数量との比を決定することによって、定量化される核酸の数量を正規化するステップと
を含む方法を提供する。
− 試料中の核酸の限定された領域または特定のクラスの核酸と実質的に相補的なアダプターオリゴヌクレオチドであって、1種以上のプライマー結合部位および1つのプローブ結合部位を含むアダプターオリゴヌクレオチドと、
− 前記アダプターオリゴヌクレオチドの前記プローブ結合部位と実質的に相補的なアンカーオリゴヌクレオチドであって、アダプターオリゴヌクレオチドに対する結合配列の5’であるタグ配列を含むアンカーオリゴヌクレオチドと
を含むことができる。
− 第1の核酸プローブ(アダプターオリゴヌクレオチド)
− アンカーオリゴヌクレオチドのタグ配列および/または
− アンカーオリゴヌクレオチドのタグ配列またはタグ配列の一部と実質的に相補的な配列
と実質的に相補的なプライマーをさらに含んでよい。
アダプターオリゴヌクレオチドおよびアンカーオリゴヌクレオチドを使用したcDNAの生成および検出ならびにリアルタイムPCRでのcDNAの検出。
Claims (23)
- 試料中の定量化される核酸の数量を、
(i)前記試料中の核酸の総数量、または
(ii)DNA、cDNA、RNAまたはmRNAの総数量
に対して正規化するための方法であって、
(a)定量化される核酸を含有する試料を供給するステップと、
(b)第1の核酸プローブの少なくとも末端領域が前記試料中の核酸の特異的な結合部位とハイブリダイズし、それによって二本鎖核酸が作出されることを可能にする条件下で、前記第1の核酸プローブを前記試料に加えるステップであって、前記第1の核酸プローブが、少なくとも1種のプライマー結合部位、プローブ結合部位、およびアンカーオリゴヌクレオチド結合部位を含むステップと、
(c)アンカーオリゴヌクレオチドの5’配列が前記第1の核酸プローブとハイブリダイズしないように前記第1の核酸プローブの前記アンカーオリゴヌクレオチド結合部位とハイブリダイズすることを可能にする条件下で、前記アンカーオリゴヌクレオチドを加えるステップと、
(d)前記核酸の3’末端で前記核酸を延長するステップであって、前記アンカーオリゴヌクレオチドが前記第1の核酸プローブとハイブリダイズし、前記アンカーオリゴヌクレオチドがさらなる延長のための鋳型として機能する領域に達するまで、前記第1の核酸プローブが鋳型として機能するステップと、
(e)前記試料中の核酸の総量または前記試料中の前記特定のクラスの核酸の総量を、前記第1の核酸プローブおよびアンカーオリゴヌクレオチドから転写されたDNAの領域と実質的に相補的な第2のプローブを使用して定量化するステップと、
(f)前記定量化される核酸を、必要に応じて、その配列が前記定量化される核酸の限定された領域と実質的に同一な第3のプローブを使用して定量化するステップと、
(g)前記定量化される核酸の数量と、前記試料中の核酸の総数量または前記試料中の前記特定のクラスの核酸の総数量との比を決定することによって、前記定量化される核酸の数量を正規化するステップと
を含む方法。 - 前記定量化される核酸がRNAであり、前記試料中の定量化される核酸の数量がRNAまたはmRNAの総数量に対して正規化される、請求項1に記載の方法。
- 前記定量化されるRNAが、mRNA、rRNA、tRNA、nRNA、siRNA、snRNA、snoRNA、scaRNA、マイクロRNA、dsRNA、リボザイム、リボスイッチおよびウイルスRNAからなる群から選択されるRNAである、請求項2に記載の方法。
- 前記定量化されるRNAがmRNAであり、前記試料中の定量化されるRNAの数量がmRNAの総数量に対して正規化される、請求項3に記載の方法。
- 前記特異的な結合部位がポリA配列またはポリA尾部である、請求項4に記載の方法。
- 前記定量化される核酸がDNAであり、前記試料中の定量化されるDNAの数量がDNAまたはcDNAの総数量に対して正規化される、請求項1に記載の方法。
- 前記定量化されるDNAが、cDNA、dsDNA、ssDNA、プラスミドDNA、コスミドDNA、染色体DNA、ウイルスDNAおよびmtDNAからなる群から選択されるDNAである、請求項6に記載の方法。
- 前記定量化されるDNAがcDNAであり、前記試料中の定量化されるDNAの数量がcDNAの総数量に対して正規化される、請求項7に記載の方法。
- 前記特異的な結合部位がcDNAに特異的であるか、またはポリT配列もしくはポリT尾部である、請求項8に記載の方法。
- 前記第1の核酸プローブがDNAまたはRNAである、請求項1から9までのいずれか一項に記載の方法。
- 定量化が、定量的リアルタイムPCRを含む、請求項1から10までのいずれか一項に記載の方法。
- 前記試料中のRNAまたは特定のクラスのRNAを逆転写することを可能にする条件下で、前記試料中のRNAを逆転写酵素と接触させるステップをさらに含む、請求項2から5までのいずれか一項に記載の方法。
- 前記第1の核酸プローブが、前記ポリA配列またはポリA尾部の5’末端に位置するかまたは前記ポリA配列またはポリA尾部の5’末端の近接部に位置するように前記特異的な結合部位とハイブリダイズする、請求項5または請求項10から12までのいずれか一項に記載の方法。
- 定量化が、定量的リアルタイムPCRを含む、請求項1から13までのいずれか一項に記載の方法。
- ライゲーションステップと、前記ライゲーションステップの後に、前記試料中のRNAまたは特定のクラスのRNAを逆転写することを可能にする条件下で、前記試料中のRNAを逆転写酵素と接触させるステップとをさらに含む、請求項2から5までのいずれか一項に記載の方法。
- 前記定量化が、定量的リアルタイム逆転写PCRを含む、請求項15に記載の方法。
- 逆転写と定量化が同じ反応容器内で実施される、請求項15または16のいずれか一項に記載の方法。
- 前記第2の核酸プローブおよび第3の核酸プローブが、1種以上の蛍光色素で標識され、前記定量化ステップが、前記試料中の蛍光シグナルを検出することを含む、請求項1から17までのいずれか一項に記載の方法。
- 遺伝子発現レベルを正規化するための、請求項1から18までのいずれか一項に記載の方法。
- さらに予め定量化された核酸を前記試料に加え、前記定量化ステップにおいて前記予め定量化された核酸の数量を決定する、請求項1から19までのいずれか一項に記載の方法。
- 請求項1から20までのいずれか一項に記載の方法を実施するためのキットであって、(a)前記試料中の核酸の限定された領域または特定のクラスの核酸と実質的に相補的なアダプターオリゴヌクレオチドであって、1種以上のプライマー結合部位および1つのプローブ結合部位を含むアダプターオリゴヌクレオチドと、
(b)前記アダプターオリゴヌクレオチドの前記プローブ結合部位と実質的に相補的なアンカーオリゴヌクレオチドであって、前記アダプターオリゴヌクレオチドに対する結合配列の5’側にタグ配列を含むアンカーオリゴヌクレオチド
を含むキット。 - 特異的な核酸の数量を参照核酸の数量に対して正規化するための、請求項1から20までのいずれか一項に記載の方法または請求項21に記載のキットの使用。
- 遺伝子発現解析のための、請求項1から20までのいずれか一項に記載の方法または請求項21に記載のキットの使用。
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Family Cites Families (8)
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EP1056884B9 (en) | 1998-02-27 | 2002-07-24 | PamGene B.V. | Method for the non-specific amplification of nucleic acid |
US7244559B2 (en) * | 1999-09-16 | 2007-07-17 | 454 Life Sciences Corporation | Method of sequencing a nucleic acid |
EP1259643B1 (en) * | 2000-02-07 | 2008-10-15 | Illumina, Inc. | Nucleic acid detection methods using universal priming |
US7045319B2 (en) * | 2001-10-30 | 2006-05-16 | Ribomed Biotechnologies, Inc. | Molecular detection systems utilizing reiterative oligonucleotide synthesis |
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DE102006038113A1 (de) * | 2006-08-14 | 2008-02-21 | Qiagen Gmbh | Verfahren zur Synthese einer cDNA in einer Probe in einer enzymatischen Reaktion und gleichzeitigen Bereitstellung eines ersten Enzyms mit Polyadenylierungsaktivität und eines zweiten Enzyms mit reverser Transkriptaseaktivität |
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