JP5672058B2 - スペクトルデータ解析装置、生体内物質検出システム及び生体内物質検出方法 - Google Patents
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Description
この知見に基づき、本発明は、生体組織に存在する物質に対応するラマンスペクトルのC−Hバンドのスペクトル強度とアミドIバンドのスペクトル強度との比率を算出し、該比率に基づいて前記物質中のアミロイドベータの有無を自動判定するスペクトルデータ解析装置を提供する。このスペクトルデータ解析装置において、前記比率は、前記ラマンスペクトルの波数1463cm−1におけるスペクトル強度と波数1658cm−1におけるスペクトル強度の比率とできる。このスペクトルデータ解析装置は、前記ラマンスペクトルをカーブフィッティングにより複数の波形成分に分解し、前記比率を算出するものとできる。
また、本発明は、生体組織に存在する物質に対応するラマンスペクトルのアミドIバンドをカーブフィッティングにより複数の波形成分に分解し、1635〜1700cm−1の波数域にピーク波数を有する波形成分のスペクトル強度と1635〜1655cm−1の波数域にピーク波数を有する波形成分のスペクトル強度との比率を算出し、該比率に基づいて前記物質中のアミロイドベータの有無を自動判定するスペクトルデータ解析装置をも提供する。
さらに、本発明は、生体組織に存在する物質に対応するラマンスペクトルを取得する測定装置と、これらのスペクトルデータ解析装置と、を含む生体内物質検出システムをも提供する。
これらの生体内物質検出装置によれば、前記比率に基づいて生体組織中に存在するアミロイドベータを非侵襲的に、かつ高精度に検出できる。
また、本発明は、生体組織に存在する物質に対応するラマンスペクトルのアミドIバンドをカーブフィッティングにより複数の波形成分に分解し、1635〜1700cm−1の波数域にピーク波数を有する波形成分のスペクトル強度と1635〜1655cm−1の波数域にピーク波数を有する波形成分のスペクトル強度との比率を算出し、該比率に基づいて前記物質中のアミロイドベータの有無を判定する生体内物質検出方法を提供する。
1.スペクトルデータ解析装置および生体内物質検出システム
(1)第一実施形態
(2)第二実施形態
2.生体内物質検出方法
(1)第一実施形態
本発明の第一実施形態に係る生体内物質検出システムは、生体組織に存在する物質に対応するラマンスペクトルを取得する測定装置と、取得されたラマンスペクトルのアミドIバンド(振動帯)をカーブフィッティングにより複数の波形成分に分解し、1635〜1700cm−1の波数域にピーク波数を有する波形成分のスペクトル強度と1635〜1655cm−1の波数域にピーク波数を有する波形成分のスペクトル強度との比率を算出し、該比率に基づいて前記物質中のアミロイドベータの有無を自動判定するスペクトルデータ解析装置とを含んで構成される。本実施形態に係るスペクトルデータ解析装置は、より具体的には、1635〜1700cm−1の波数域にピーク波数を有する波形成分のスペクトル強度に対する1635〜1655cm−1の波数域にピーク波数を有する波形成分のスペクトル強度の比率を算出し、算出された比率が所定値以上である場合に、前記物質にアミロイドベータが含まれるとの判定を出力する。
本発明の第二実施形態に係る生体内物質検出システムは、生体組織に存在する物質に対応するラマンスペクトルを取得する測定装置と、生体組織に存在する物質に対応するラマンスペクトルのC−Hバンドのスペクトル強度とアミドIバンドのスペクトル強度との比率を算出し、該比率に基づいて前記物質中のアミロイドベータの有無を自動判定するスペクトルデータ解析装置とを含んで構成される。本実施形態に係るスペクトルデータ解析装置は、より具体的には、前記ラマンスペクトルの波数1658cm−1におけるスペクトル強度に対する波数1463cm−1におけるスペクトル強度の比率を算出し、算出された比率が所定値未満である場合に、前記物質にアミロイドベータが含まれるとの判定を出力する。
本発明に係る生体内物質検出方法は、上記の生体内物質検出システムによって実行されるステップに対応する手順を含む。すなわち、生体内物質検出方法は、生体組織に存在する物質に対応するラマンスペクトルのC−Hバンドのスペクトル強度とアミドIバンドのスペクトル強度との比率を算出する手順、あるいはラマンスペクトルのアミドIバンドをカーブフィッティングにより複数の波形成分に分解し、1635〜1700cm−1の波数域にピーク波数を有する波形成分のスペクトル強度と1635〜1655cm−1の波数域にピーク波数を有する波形成分のスペクトル強度との比率を算出する手順と、該比率に基づいて前記物質中のアミロイドベータの有無を判定する手順とを含む。
1.ラマンスペクトルの取得
眼底に存在する物質に対応するラマンスペクトルを以下の方法に従って取得した。
(1)装置:顕微レーザーラマン分光装置(inVia、レニショー株式会社)。
(2)測定条件:レーザー波長532 nm、レーザー強度50 mW、スペクトル取得波数域1500〜1800 cm-1。
(3)測定サンプル:顕微鏡下で、ICR系マウス(8 週齢、雄)又はC57B6J系マウス(8 週齢、雄)の眼球内に極細ガラスピペットを挿入し、アミロイドベータ溶液を網膜直下に注入した。アミロイドベータ溶液には、ヒト1-40 Amyloide-beta peptide(ペプチド研究所)又はヒト1-42Amyloide-beta peptide(GL Lab)を、終濃度100μMでリン酸バッファー(pH 7.4)に溶解し、37℃で3日間以上振盪したものを用いた。アミロイドベータペプチドはアミロイドベータ溶液中に凝集体として分散している。2時間〜1日後、マウスを安楽殺して眼球を摘出し、測定サンプルとした。
取得されたラマンスペクトルのアミドI振動帯(1600−1700cm-1)を、カーブフィッティングにより複数の波形成分に分解した。カーブフィッティングは、市販のソフトウェアを用いて行った。
分解された波形成分を、そのピーク波数の波数域によって5つの波形成分(I)〜(V)に区分し、各波形成分のピーク波数におけるスペクトル強度を抽出した。
波数域(I):1635〜1645cm−1:波形成分(I)
波数域(II):1645〜1655cm−1:波形成分(II)
波数域(III):1655〜1667.5cm−1:波形成分(III)
波数域(IV):1667.5〜1677.5cm−1:波形成分(IV)
波数域(V):1677.5〜1700cm−1:波形成分(V)
1.ラマンスペクトルの取得
眼底に存在する物質に対応するラマンスペクトルを以下の方法に従って取得した。
(1)装置:顕微レーザーラマン分光装置(inVia、レニショー株式会社)。
(2)測定条件:レーザー波長785 nm、レーザー強度1 mW、スペクトル取得波数域1000〜2000 cm-1。
(3)測定サンプル:顕微鏡下で、ICR系マウス(8 週齢、雄)の眼球内に極細ガラスピペットを挿入し、アミロイドベータ溶液を網膜直下に注入した。アミロイドベータ溶液には、ヒト1-40 Amyloide-beta peptide(ペプチド研究所)又はヒト1-42 Amyloide-beta peptide(GL Lab)を、終濃度100μMでリン酸バッファー(pH 7.4)に溶解したものを用いた。アミロイドベータペプチドはアミロイドベータ溶液中に凝集することなく分散している。2時間〜1日後、マウスを安楽殺して眼球を摘出し、測定サンプルとした。
取得されたラマンスペクトルをカーブフィッティングにより複数の波形成分に分解し、C−Hバンド(波数1658cm−1)およびアミドIバンド(波数1463cm−1)のスペクトル強度と、その比率(1463cm−1/1658cm−1)を算出した。
得られた比率をイメージ化して得た画像と、該画像中の各領域内における1463cm−1/1658cm−1比の平均値を示すマトリックスを図7〜図10に示す。図7および図8は、アミロイドベータ溶液を注入した実験眼のラマン分光イメージング画像とマトリックスを示す。図9および図10は、アミロイドベータ溶液をしていない対照眼のラマン分光イメージング画像とマトリックスを示す。
大脳組織に存在する物質に対応するラマンスペクトルを以下の方法に従って取得した。
(1)装置:顕微レーザーラマン分光装置(inVia、レニショー株式会社)。水浸レンズ60倍(NA1.0)(OLYMPUS LUMPlanFIN 60xW)。
(2)測定条件:レーザー波長785 nm、レーザー強度3 mW、スペクトル取得波数域400〜1900 cm-1。
(3)測定サンプル:APPを過剰発現するトランスジェニックマウス("Correlative memory deficits, Abeta elevation, and amyloid plaques in transgenic mice." Science. 1996, 4, 274(5284), 99-102)から大脳を摘出し、液体窒素中で凍結した。正中線と平行に10μmの厚さで凍結切片を作成し、金蒸着基板に配した。
Claims (10)
- 生体組織に存在する物質に対応するラマンスペクトルのC−Hバンドのスペクトル強度とアミドIバンドのスペクトル強度との比率を算出し、
該比率に基づいて前記物質中のアミロイドベータの有無を自動判定するスペクトルデータ解析装置。 - 前記比率は、前記ラマンスペクトルの波数1463cm−1におけるスペクトル強度と波数1658cm−1におけるスペクトル強度の比率である、請求項1に記載のスペクトルデータ解析装置。
- 前記ラマンスペクトルをカーブフィッティングにより複数の波形成分に分解し、前記比率を算出する、請求項2に記載のスペクトルデータ解析装置。
- 生体組織に存在する物質に対応するラマンスペクトルのアミドIバンドをカーブフィッティングにより複数の波形成分に分解し、1635〜1700cm−1の波数域にピーク波数を有する波形成分のスペクトル強度と1635〜1655cm−1の波数域にピーク波数を有する波形成分のスペクトル強度との比率を算出し、
該比率に基づいて前記物質中のアミロイドベータの有無を自動判定するスペクトルデータ解析装置。 - 前記生体組織に存在する物質が網膜黄斑部に存在する物質である、請求項1〜4のいずれか1項に記載のスペクトルデータ解析装置。
- 生体組織に存在する物質に対応するラマンスペクトルを取得する測定装置と、請求項3または4に記載のスペクトルデータ解析装置と、を含む生体内物質検出システム。
- 前記生体組織に存在する物質が網膜黄斑部に存在する物質である、請求項6に記載の生体内物質検出システム。
- 生体組織に存在する物質に対応するラマンスペクトルのC−Hバンドのスペクトル強度とアミドIバンドのスペクトル強度との比率を算出し、
該比率に基づいて前記物質中のアミロイドベータの有無を判定する生体内物質検出方法。 - 生体組織に存在する物質に対応するラマンスペクトルのアミドIバンドをカーブフィッティングにより複数の波形成分に分解し、1635〜1700cm−1の波数域にピーク波数を有する波形成分のスペクトル強度と1635〜1655cm−1の波数域にピーク波数を有する波形成分のスペクトル強度との比率を算出し、
該比率に基づいて前記物質中のアミロイドベータの有無を判定する生体内物質検出方法。 - 前記生体組織に存在する物質が網膜黄斑部に存在する物質である、請求項8又は9に記載の生体内物質検出方法。
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