JP5662400B2 - 抗菌ヘマトキシリン液及び拡張抗菌ヘマトキシリン液 - Google Patents
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Description
それを立証するために、血液寒天培地使用して、緑膿菌と大腸菌(常在菌)に対する抗菌試験を実施した。また、食パンを使用して、カビと細菌に対する抗菌試験も合わせて実施した。この二つの方法により、推測の正しさを証明することができた。
カリウムミョウバンは水に溶けにくく、完全に溶解するまで30分近い時間を要し、ヘマトキシリン液の調製時間を長引かせる原因になっている。
抗菌ヘマトキシリン液はマイヤーヘマトキシリン液と同様に進行性染色液の性質をもち、細胞核の染色に要する時間が2〜3分長い。
本発明は、以上の問題点を解決するためになされたものである。
しかし、抗菌ヘマトキシリン液は細胞核以外の組織は染色されない進行性ヘマトキシリン液の性質を持っているので、カラッチヘマトキシリン液などの退行性ヘマトキシリン液に比べ、2〜3分染色時間が長くなる。この問題を解決するために、塩化アルミニウムに硫酸アルミニウムを加えた試薬を媒染剤として使用した。
最初に、5%塩化アルミニウム水溶液を1000ml調製する。これをF液調製工程とする。別に、5%硫酸アルミニウム水溶液を1000ml調製する。これをG液調製工程とする。1500mlの三角フラスコの中で、F液370mlとG液500mlを混合し、870mlの混合液を調製する。これをH液調製工程とする。H液にB液を加え、マグネチックスターラーの上で10分間攪拌し、混合する。これをI液調製工程とする。I液にヨウ素酸ナトリウム0.3g加え、30分間攪拌し、溶解する。これをJ液調製工程とする。J液にグリセリンを100ml加え、10分間攪拌し、混合する。これをK液調製工程とする。K液を4〜5日間熟成させてできるヘマトキシリン液は、染色時間を短縮しても、細胞核を強く染色できる拡張抗菌ヘマトキシリン液。
本発明により細菌やカビの発育を抑制し、抗菌作用もつ、保存性に優れたヘマトキシリン液を開発することができた。また、塩化アルミニウムは水に数秒で溶解し、液の調製時間を大幅に短縮することができた。
拡張抗菌ヘマトキシリン液の開発で、進行性の抗菌ヘマトキシリン液を退行性化することができ、染色時間を短縮しても、細胞核を強く染色することが可能になった。
(イ)大腸菌、緑膿菌を別々に、2枚の血液寒天培地に塗抹し、37℃のふ卵器で、一日培養し培地の全面に菌を発育させる。夫々の培地の2カ所に、5%塩化アルミニウム液と5%カリウムミョウバン液を別々に2滴滴下し、再度、37℃のふ卵器で、一日培養し夫々の媒染剤の抗菌作用の有無を確認した。
(ロ)賞味期限が過ぎた食パンを約2cm四角に切ったものを4個用意し、夫々のパンに3種類の媒染剤、5%塩化アルミニウム液、5%カリウムミョウバン液、5%硫酸アルミニウム液と対照に精製水を別々に、数滴滴下、37℃のふ卵器に3〜4日間放置、培養したあとに、カビや細菌の発育状態を観察した。
(ハ)抗菌ヘマトキシリン液(1000ml)の調製法は、1500ml三角フラスコの中で、870ml精製水に、塩化アルミニウム(AlCl3・6H2O)50gを数秒間、攪拌し溶解させる。これをA液調製工程とする。別に、100ml三角フラスコの中で、30mlエタノールに、ヘマトキシリン1.5gを1分間攪拌し、溶解させる。これをB液調製工程とする。B液とA液の混合液が入った1500ml三角フラスコをマグネチックスターラーの上に載せ、10分間攪拌し、混合する。これをC液調製工程とする。C液にヨウ素酸ナトリウム0.3gを加え、マグネチックスターラーの上で30分間攪拌し、溶解する。これをD液調製工程とする。D液にグリセリンを100ml加え、10分間攪拌し、混合する。これをE液調製工程とする。E液を4〜5日間熟成させて、抗菌ヘマトキシリン液が完成する。
(ニ)5%塩化アルミニウム水溶液を1000ml調製する。これをF液調製工程とする。別に、5%硫酸アルミニウム水溶液を1000ml調製する。これをG液調製工程とする。1500mlの三角フラスコの中で、F液370mlとG液500mlを混合し、870mlの混合液を調製する。これをH液調製工程とする。H液にB液を加え、マグネチックスターラーの上で10分間攪拌し、混合する。これをI液調製工程とする。I液にヨウ素酸ナトリウム0.3g加え、30分間攪拌し、溶解する。これをJ液調製工程とする。J液にグリセリンを100ml加え、10分間攪拌し、混合する。これをK液調製工程とする。K液を4〜5日間熟成させて、拡張抗菌ヘマトキシリン液が完成する。
本発明は以上のような構造である。
本発明をHE染色で使用する場合の染色手技は、組織切片を、脱パラ、脱キシロール、脱アルコール、水洗洗浄する。抗菌ヘマトキシリン液での細胞核の染色時間は7分間、分別の必要はなく、水洗による色だしは3分間行った。1%エオジン液での後染色は5分間行い、2〜3秒ほど、軽く水洗洗浄し、分別、脱水、透徹、封入し、組織切片の染色状態を顕微鏡で観察した。
5E液調製工程、6抗菌ヘマトキシリン液、7F液調製工程、8G液調製工程、
9H液調製工程、10I液調製工程、11J液調製工程、12K液調製工程、
13拡張抗菌ヘマトキシリン液
Claims (2)
- 抗菌ヘマトキシリン液(1000ml)の調製法は、1500ml三角フラスコの中で、870ml精製水に、塩化アルミニウム(AlCl3・6H2O)50gを数秒間攪拌、溶解させ、これをA液調製工程とし、別に、100ml三角フラスコの中で、30mlエタノールに、ヘマトキシリン5gを1分間攪拌、溶解させ、これをB液調製工程とし、A液にB液を加えた混合液が入った1500ml三角フラスコをマグネチックスターラーの上に載せ、10分間攪拌、混合し、これをC液調製工程とし、C液にヨウ素酸ナトリウム0.3gを加え、マグネチックスターラーの上で30分間攪拌、溶解し、これをD液調製工程とし、D液にグリセリンを100ml加え、10分間攪拌、混合し、これをE液調製工程とし、E液を室温で、4〜5日間熟成させて、完成させる抗菌ヘマトキシリン液の調製法。
- 1000mlの拡張抗菌ヘマトキシリン液の調製方法は、5%塩化アルミニウム水溶液を1000ml調製し、これをF液調製工程とし、別に、5%硫酸アルミニウム水溶液を1000ml調製し、これをG液調製工程とし、1500mlの三角フラスコの中で、F液370mlとG液500mlを混合、870mlの混合液を調製し、これをH液調製工程とし、H液に、別に、100ml三角フラスコの中で、30mlエタノールに、ヘマトキシリン5gを1分間攪拌、溶解させた液を加え、マグネチックスターラーの上で10分間攪拌、混合し、これをI液調製工程とし、I液にヨウ素酸ナトリウム0.3gを加え、30分間攪拌、溶解し、これをJ液調製工程とし、J液にグリセリンを100ml加え、10分間攪拌、混合し、これをK液調製工程とし、K液を4〜5日間熟成させて、完成する拡張抗菌ヘマトキシリン液の調製方法。
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