JP5466145B2 - 抗増殖性を有する２，６，９−置換プリン誘導体 - Google Patents

抗増殖性を有する２，６，９−置換プリン誘導体 Download PDF

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Description

本発明は、新規な２，６，９−置換プリン誘導体及びその生物学的用途に関する。特に、本発明は、増殖性疾患、例えばがん、白血病、乾癬などの治療に有用な、抗増殖性を有するプリン誘導体に関する。
哺乳動物の細胞周期の開始、進行、及び完了は、細胞増殖に極めて重要な、様々なサイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ、cyclin-dependent kinase）複合体によって調節される。これらの複合体は、少なくとも触媒的（ＣＤＫ自体）サブユニット及び調節（サイクリン）サブユニットを含む。いくつかの細胞周期調節に、より重要な複合体には、サイクリンＡ（ｃｄｃ２としても知られるＣＤＫ１、及びＣＤＫ２）、サイクリンＢ１〜Ｂ３（ＣＤＫ１）、サイクリンＤ１〜Ｄ３（ＣＤＫ２、ＣＤＫ４、ＣＤＫ５、ＣＤＫ６）、及びサイクリンＥ（ＣＤＫ２）が含まれる。これらの複合体のそれぞれは、細胞周期の特定の段階に関与する。しかし、ＣＤＫファミリーのすべてのメンバーが、細胞周期制御だけに関与するわけではない。例えば、ＣＤＫ７、８、及び９は、転写調節に関係し、一方、ＣＤＫ５は、ニューロン及び分泌の細胞機能において役割を果たす。
ＣＤＫの活性は、他のタンパク質との一過性の会合及びそれらのタンパク質の細胞内局在の変化によって、翻訳後に調節される。腫瘍発生は、遺伝子変化並びにＣＤＫ及びその調節因子の調節解除に密接に関連しており、ＣＤＫの阻害剤が有用な抗がん治療剤となり得ることを示している。実際、初期の結果は、形質転換細胞及び正常細胞は、例えば、サイクリンＡ／ＣＤＫ２についてのその必要量が異なり、従来の細胞毒性薬及び細胞増殖抑制薬に見られる一般的な宿主毒性がない、新規な抗腫瘍薬を開発することが可能となり得ることを示す。細胞周期関連ＣＤＫの阻害は、例えば、腫瘍学の用途において明らかに関連しているが、これは、ＲＮＡポリメラーゼ調節ＣＤＫの阻害には当てはまらない可能性がある。一方、ＣＤＫ９／サイクリンＴ機能の阻害は、ＨＩＶ複製の防止と最近関連付けられたので、新規なＣＤＫ生物学の発見により、ＣＤＫ阻害剤についての新しい治療指標が開発され続けている（Sausville, E.A. Trends Molec. Med. 2002, 8,S32-S37）。
ＣＤＫの機能は、例えば、網膜芽細胞腫タンパク質、ラミン、ヒストンＨ１、及び紡錘体の成分を含めた、ある特定のタンパク質をリン酸化し、したがってかかるタンパク質を活性化又は不活性化することである。ＣＤＫによって媒介される触媒的ステップは、ＡＴＰから巨大分子の酵素基質へのリン酸転移反応を伴う。いくつかの化合物群（例えば、Fischer, P.M. Curr. Opin. Drug Discovery Dev. 2001, 4, 623-634に概説されている）は、ＣＤＫ特異的ＡＴＰアンタゴニズムによって抗増殖性を有することが見出された。
国際公開第９８／０５３３５号パンフレット（CV Therapeutics Inc）には、細胞周期キナーゼの選択的阻害剤である２，６，９−三置換プリン誘導体が開示されている。そのような化合物は、自己免疫疾患、例えば、関節リウマチ、狼瘡、Ｉ型糖尿病、多発性硬化症などの治療；がん、再狭窄などの心血管疾患、宿主対移植片疾患、痛風、多発性嚢胞腎及びその病因が異常細胞増殖を伴う、他の増殖性疾患の治療において有用である。
国際公開第９９／０７７０５号パンフレット（The Regents of the University of California）には、とりわけ、プロテインキナーゼ、Ｇ−タンパク質及びポリメラーゼを阻害するプリン類似体が開示されている。より具体的にはこの発明は、細胞増殖性疾患及び神経変性疾患を治療するためにそのようなプリン類似体を使用する方法に関する。
国際公開第９７／２０８４２号パンフレット（ＣＮＲＳ）にも、がん、乾癬、及び神経変性疾患を治療するのに有用な抗増殖性を示すプリン誘導体が開示されている。さらなるプリン誘導体が、国際公開第０３／００２５６５号パンフレット、同第０４／０１６６１３号パンフレット及び同第０４／０１６６１２号パンフレットに開示されている。
国際公開第９８／０５３３５号パンフレット 国際公開第９９／０７７０５号パンフレット 国際公開第９７／２０８４２号パンフレット 国際公開第０３／００２５６５号パンフレット 国際公開第０４／０１６６１３号パンフレット 国際公開第０４／０１６６１２号パンフレット
Sausville, E.A. Trends Molec. Med. 2002, 8,S32-S37 Fischer, P.M. Curr. Opin. Drug Discovery Dev. 2001, 4, 623-634
本発明は、新規な２，６，９−置換プリン誘導体、特に抗増殖性を有するものを提供しようとするものである。
本発明の第１の態様は、式Ｉの化合物、又は薬学的に許容されるその塩に関する

（Ｉ）
［式中、
Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立に、Ｈ、アルキル又はハロアルキルであり、
Ｒ３及びＲ４は、それぞれ独立に、Ｈ、アルキル、ハロアルキル又はアリールであり、
Ｒ５は、アルキル又はシクロアルキル又はシクロアルキル−アルキルであり、そのそれぞれは、必要に応じて１又は複数のＯＨ基で置換されていてもよく、
Ｒ６は、シクロプロピルアミノ、シクロプロピルメチルアミノ、シクロブチルアミノ、シクロブチルメチルアミノ並びに
（式中、Ｘ、Ｙ及びＺの１つはＮであり、その残りはＣＲ９である）から選択され、
Ｒ７、Ｒ８及び各Ｒ９は、独立に、Ｈ、アルキル又はハロアルキルであり、Ｒ７、Ｒ８及び各Ｒ９の少なくとも１つは、Ｈ以外である］。
本発明の第２の態様は、式IIの化合物、又は薬学的に許容されるその塩に関する

（II）
［式中、
Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ３’及びＲ４’の少なくとも１つはハロアルキルであり、その残りは、それぞれ独立に、Ｈ、アルキル又はハロアルキルであり、
Ｒ５’は、アルキル又はシクロアルキル又はシクロアルキル−アルキルであり、そのそれぞれは、必要に応じて１又は複数のＯＨ基で置換されていてもよく、
Ｒ６’は、シクロプロピルアミノ、シクロプロピルメチルアミノ、シクロブチルアミノ、シクロブチルメチルアミノ並びに
（式中、Ｘ’、Ｙ’及びＺ’は、それぞれ独立に、ＣＲ９’であり、又はＸ’、Ｙ’及びＺ’の１つはＮであり、その残りはＣＲ９’である）から選択され、
Ｒ７’、Ｒ８’及び各Ｒ９’は、独立に、Ｈ、ハロ、アルキル又はハロアルキルである］。
本発明の第３の態様は、本発明の化合物及び薬学的に許容されるその担体、希釈剤又は賦形剤を含む医薬組成物に関する。
本発明の第４の態様は、１又は複数の以下の障害を治療するための薬物の調製における、本発明の化合物の使用に関する：
増殖性疾患、
ウイルス性疾患、
脳卒中、
脱毛症、
ＣＮＳ障害、
神経変性疾患、及び
糖尿病。
本発明の第５の態様は、抗有糸分裂剤としての本発明の化合物の使用に関する。
本発明の第６の態様は、プロテインキナーゼを阻害するための、本発明の化合物の使用に関する。
本発明の第７の態様は、増殖性疾患の治療方法であって、治療有効量の本発明の化合物を哺乳動物に投与するステップを含む方法に関する。
本発明の第８の態様は、１又は複数のＣＤＫ酵素の活性に影響する、さらなる候補化合物を同定するためのアッセイにおける、本発明の化合物の使用に関する。
上述したように、本発明の第１の態様は、先に定義した式（Ｉ）の化合物に関する。
本明細書で使用される場合、用語「アルキル」には、飽和した直鎖状及び分岐状のアルキル基の両方が含まれる。好ましくは、アルキル基は、Ｃ１−２０アルキル基であり、より好ましくは、Ｃ１−１５、さらにより好ましくは、Ｃ１−１２アルキル基、さらにより好ましくは、Ｃ１−６アルキル基、より好ましくは、Ｃ１−３アルキル基である。特に好適なアルキル基としては、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、及びヘキシルが挙げられる。
本明細書で使用される場合、用語「シクロアルキル」は、環式アルキル基を指す。シクロアルキル基は、Ｃ３−１２シクロアルキル基であることが好ましい。
本明細書で使用される場合、用語「シクロアルキル−アルキル」は、シクロアルキル官能性及びアルキル官能性の両方を有する基を指す。
Ｒ１及びＲ２の一方はＨであり、他方はアルキルであることが好ましい。
Ｒ１及びＲ２の一方はＨであり、他方は、メチル、エチル又はイソプロピルであることがより好ましい。
好適な一実施形態では、Ｒ１はエチルであり、Ｒ２はＨである。
本発明の好適な一実施形態では、Ｒ３及びＲ４は、それぞれ独立に、Ｈ、アルキル、ハロアルキル又はアリールであり、Ｒ３及びＲ４の少なくとも１つは、Ｈ以外である。
本発明の好適な一実施形態では、Ｒ３及びＲ４の一方はＨであり、他方は、アルキル又はハロアルキルである。
より好適な実施形態では、Ｒ３はＨであり、Ｒ４はアルキル又はハロアルキルである。
Ｒ３はＨであり、Ｒ４はメチルであることがより好ましい。
本発明の好適な一実施形態では、Ｒ６は
である。
本発明の好適な一実施形態では、ＹはＮである。この実施形態については、ＸはＣＨであり、ＺはＣ−アルキルであり、Ｒ７はＨであり、Ｒ８はアルキルであることが好ましい。この実施形態については、ＸはＣＨであり、ＺはＣ−Ｍｅであり、Ｒ７はＨであり、Ｒ８はＭｅであることがより好ましい。代替の好適な実施形態では、ＸはＣＨであり、ＺはＣ−Ｍｅであり、Ｒ７及びＲ８はともにＨである。さらに別の代替の好適な実施形態では、ＸはＣＨであり、ＺはＣ−ＣＦ３であり、Ｒ７及びＲ８はともにＨである。
本発明の好適な一実施形態では、ＸはＮである。この実施形態については、ＹはＣ−Ｍｅであり、ＺはＣＨであり、Ｒ７及びＲ８はともにＨであることが好ましい。さらに別の代替の好適な実施形態では、Ｙ及びＺはＣＨであり、Ｒ７はＨであり、Ｒ８はＭｅである。
本発明の好適な一実施形態では、ＺはＮである。この実施形態については、ＸはＣＨであり、ＹはＣ−Ｍｅであり、Ｒ７はＭｅであり、Ｒ８はＨであることが好ましい。
本発明の別の好適な実施形態では、Ｒ６は、シクロプロピルアミノ、シクロプロピルメチルアミノ、シクロブチルアミノ又はシクロブチルメチルアミノである。
本発明の別の好適な実施形態では、Ｒ５はイソプロピルである。
非常に好適な一実施形態では、本発明の化合物は、以下から選択される：
本発明の別の態様は、式IIの化合物、又は薬学的に許容されるその塩に関する：

（II）
（式中、
Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ３’、及びＲ４’の少なくとも１つはハロアルキルであり、その残りは、それぞれ独立に、Ｈ、アルキル又はハロアルキルであり、
Ｒ５’は、アルキル又はシクロアルキル又はシクロアルキル−アルキルであり、そのそれぞれは、１又は複数のＯＨ基で置換されていてもよく、
Ｒ６’は、シクロプロピルアミノ、シクロプロピルメチルアミノ、シクロブチルアミノ、シクロブチルメチルアミノ並びに
（式中、Ｘ’、Ｙ’及びＺ’は、それぞれ独立に、ＣＲ９’であり、又はＸ’、Ｙ’及びＺ’の１つはＮであり、その残りはＣＲ９’である）から選択され、
Ｒ７’、Ｒ８’及び各Ｒ９’は、独立に、Ｈ、ハロ、アルキル又はハロアルキルである）。
本発明のこの態様については、Ｒ５’はイソプロピルであることが好ましい。
本発明のこの態様については、Ｒ６’は
であることが好ましい。
好適な一実施形態では、Ｙ’はＮであり、Ｘ’及びＺ’はＣＨであり、Ｒ７’及びＲ８’はともにＨである。
本発明の別の好適な実施形態では、Ｒ１’及びＲ２’の一方はＨであり、他方はアルキルであり、又はＲ１’及びＲ２’はともにＨである。
本発明の好適な一実施形態では、Ｒ３’及びＲ４’の一方はＨであり、他方はＣＦ３である。
特に好適な一実施形態では、本発明の化合物は、以下から選択される：
本発明のさらなる態様は、以下から選択される化合物に関する：
特に好適な一実施形態では、本発明の化合物は、以下から選択される：
本発明の特に好適な一実施形態では、化合物は、［１］、［３］、［４］、［６］、［７］、［８］、［９］、［１０］及び［１１］から選択される。化合物は、［１］、［３］、［４］、［６］及び［１１］から選択されることがより好ましく、化合物は、［１］又は［１１］であることがさらにより好ましい。
好ましくは、本発明の化合物は、セリシクリブと比較して、少なくとも３倍の効力の増大、より好ましくは、少なくとも４倍又は５倍の効力の増大、さらになおより好ましくは、少なくとも８倍又は１０倍の効力の増大を示す。
本発明の特に好適な一実施形態では、化合物は、（２Ｒ，３Ｓ−３−（６−（（４，６−ジメチルピリジン−３−イルメチルアミノ）−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−２−イルアミノ）ペンタン−２−オール［１］、又は薬学的に許容されるその塩若しくはエステルである。
有利には、化合物［１］は、当技術分野で既知の構造的に関連した化合物と比較して、様々な異なる細胞株における細胞毒性研究において、驚くほど高い効力を示す。これらの研究のさらなる詳細を添付の実施例において示す（特に、表８を参照されたい）。
さらに、実験は当技術分野で既知の構造的に関連した化合物と反対に、化合物［１］は、ＣＹＰ３Ａ４を著しく阻害しないことが示された。これらの研究もやはり、添付の実施例においてより詳細に説明する（特に、表５を参照されたい）。実際に、化合物［１］は、その細胞ＩＣ５０の約６０倍である、２０μＭを超える濃度まで、ＣＹＰ３Ａ４を阻害しないように思われる。化合物［１］による阻害では、ＣＹＰ３Ａ４阻害についてのＩＣ５０値は、その細胞ＩＣ５０を著しく上回るので（表８を参照されたい）、このことは、細胞毒性濃度では、ＣＹＰ３Ａ４活性に対してまったく影響がないはずであることを示す。ＣＹＰ３Ａ４は、多数の薬物の代謝に関与するので、このことは重要である。ＣＹＰ３Ａ４が１つの薬剤によって阻害される場合、これは、ＣＹＰ３Ａ４基質の代謝の低減により、予期しない毒性につながり、それによって、これらの作用剤のレベルの明らかな増大をもたらす場合がある。
同様に、さらなる実験により、化合物［１］は、その構造的に関連した類似体と反対に、試験された６つのＣＹＰアイソフォームに対する基質ではないことが示された（特に、表６を参照されたい）。この差は、上記に論じたＣＹＰ阻害において観察された差とよく対応する。ＣＹＰ阻害に導く共通の機構は、化合物がそのＣＹＰに対する基質でもある場合である。
したがって化合物［１］は、ＣＹＰ３Ａ４の基質でも、阻害剤でもなく、これは、構造的に関連した類似体と比較して、重要で、予期しない有利な性質を付与する。
医薬組成物
本発明の第２の態様は、薬学的に許容される希釈剤、賦形剤若しくは担体、又はこれらの混合物と混合した本発明の化合物を含む医薬組成物に関する。本発明の化合物（その薬学的に許容される塩、エステル及び薬学的に許容される溶媒和物を含めて）は、特にヒトの治療のために、単独で投与することができるが、これらは一般に、医薬担体、賦形剤又は希釈剤と混合して投与される。この医薬組成物は、ヒト用医薬及び獣医薬として、ヒト又は動物に使用することができる。
様々な異なる形態の医薬組成物に対するそのような適当な賦形剤の例は、Handbook of Pharmaceutical Excipients, 2nd Edition, (1994), Edited by A Wade and PJ Wellerに見い出すことができる。
治療で使用するのに許容される担体又は希釈剤は、薬学の分野で公知であり、例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co. （A. R. Gennaro edit. 1985）に記載されている。
適当な担体の例として、ラクトース、デンプン、グルコース、メチルセルロース、ステアリン酸マグネシウム、マンニトール、ソルビトールなどが挙げられる。適当な希釈剤の例として、エタノール、グリセロール、及び水が挙げられる。
医薬担体、賦形剤又は希釈剤の選択は、意図した投与経路及び標準的な薬務に関して選択することができる。医薬組成物は、担体、賦形剤若しくは希釈剤として、又はこれらに加えて、任意の適当な結合剤（複数可）、滑剤（複数可）、懸濁剤（複数可）、コーティング剤（複数可）、可溶化剤（複数可）を含むことができる。
適当な結合剤の例として、デンプン、ゼラチン、例えばグルコース、無水ラクトース、易流動性ラクトース、β−ラクトース、トウモロコシ甘味料等の天然の糖、例えばアカシア、トラガカント又はアルギン酸ナトリウム等の天然及び合成ガム、カルボキシメチルセルロース及びポリエチレングリコールが挙げられる。
適当な滑剤の例として、オレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウムなどが挙げられる。
保存剤、安定剤、染料、さらに香味剤も、医薬組成物中に提供することができる。保存剤の例として、安息香酸ナトリウム、ソルビン酸及びｐ−ヒドロキシ安息香酸のエステルが挙げられる。酸化防止剤及び懸濁剤も使用することができる。
塩／エステル
本発明の化合物は、塩又はエステル、特に、薬学的に許容される塩又はエステルとして存在することができる。
本発明の化合物の薬学的に許容される塩には、その酸付加塩又は塩基塩が含まれる。適当な医薬用塩の概説は、Berge et al, J Pharm Sci, 66, 1-19 (1977)に見い出すことができる。塩は、例えば、鉱酸などの強無機酸、例えば、硫酸、リン酸又はハロゲン化水素酸；強有機カルボン酸、例えば、酢酸などの、非置換であるか、置換されている（例えば、ハロゲンによって）、１〜４個の炭素原子のアルカンカルボン酸など；飽和又は不飽和ジカルボン酸、例えば、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、フタル酸若しくはテトラフタル酸；ヒドロキシカルボン酸、例えば、アスコルビン酸、グリコール酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸若しくはクエン酸；アミノ酸、例えば、アスパラギン酸若しくはグルタミン酸；安息香酸；又は有機スルホン酸、例えば、メタン−若しくはｐ−トルエンスルホン酸などの、非置換であるか、置換されている（例えば、ハロゲンによって）、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル−若しくはアリールスルホン酸などを用いて形成される。エステルは、エステル化される官能基に応じて、有機酸又はアルコール／水酸化物を使用して形成される。有機酸として、例えば、酢酸などの、非置換であるか、置換されている（例えば、ハロゲンによって）、１〜１２個の炭素原子のアルカンカルボン酸などのカルボン酸；飽和又は不飽和ジカルボン酸、例えば、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、フタル酸若しくはテトラフタル酸；ヒドロキシカルボン酸、例えば、アスコルビン酸、グリコール酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸若しくはクエン酸；アミノ酸、例えば、アスパラギン酸若しくはグルタミン酸；安息香酸；又は有機スルホン酸、例えば、メタン−若しくはｐ−トルエンスルホン酸などの、非置換であるか、置換されている（例えば、ハロゲンによって）、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル−若しくはアリールスルホン酸などが挙げられる。適当な水酸化物として、無機水酸化物、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、水酸化アルミニウムなどが挙げられる。アルコールには、非置換であっても、例えば、ハロゲンによって置換されていてもよい、１〜１２個の炭素原子のアルカンアルコールが含まれる。
鏡像異性体／互変異性体
先に論じた本発明のすべての態様では、本発明は、適切な場合、本発明の化合物のすべての鏡像異性体及び互変異性体を含む。当業者は、化合物は、光学的性質（１又は複数の不斉炭素原子）又は互変異性特性を有することを認識する。対応する鏡像異性体及び／又は互変異性体は、当技術分野で既知の方法によって単離／調製することができる。
立体異性体及び幾何異性体
いくつかの本発明の化合物は、立体異性体及び／又は幾何異性体として存在することができ、例えば、これらは、１又は複数の非対称中心及び／又は幾何的中心を有することができ、したがって、２つ以上の立体異性体及び／又は幾何的形態で存在することができる。本発明は、こうした阻害剤のすべての個々の立体異性体及び幾何異性体、並びにこれらの混合物の使用を意図する。特許請求の範囲で使用される用語は、これらの形態を包含し、但し、前記形態は、適切な機能活性（必ずしも同じ程度ではない）を保持する。
本発明は、作用剤のすべての適当な同位体変形体（isotopic variation）、又は薬学的に許容されるその塩も含む。本発明の作用剤の同位体変形体、又は薬学的に許容されるその塩は、少なくとも１つの原子が、同じ原子番号を有するが、自然に通常見出される原子質量と異なる原子質量を有する原子によって置換されているものと定義される。作用剤及び薬学的に許容されるその塩の中に組み込むことができる同位体の例として、水素、炭素、窒素、酸素、リン、硫黄、フッ素及び塩素の同位体、例えば、それぞれ、２Ｈ、３Ｈ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１７Ｏ、１８Ｏ、３１Ｐ、３２Ｐ、３５Ｓ、１８Ｆ及び３６Ｃｌなどが挙げられる。作用剤及び薬学的に許容されるその塩のある特定の同位体変形体、例えば、３Ｈ又は１４Ｃなどの放射性同位体が組み込まれているものは、薬剤及び／又は基質組織分布研究において有用である。同位体である、トリチウム化した、即ち、３Ｈ、及び炭素−１４、即ち、１４Ｃは、調製及び検出しやすいことから特に好適である。さらに、重水素、即ち、２Ｈなどの同位元素との置換は、より大きな代謝的安定性、例えば、インビボ半減期の増大、又は投与必要量の低減から生じる、ある特定の治療上の利点を提供することができ、状況によっては好適となり得る。本発明の作用剤の同位体変形体、及び本発明の薬学的に許容されるその塩は、一般に、適当な試薬の適切な同位体変形体を使用して、従来の手順によって調製することができる。
溶媒和物
本発明は、本発明の化合物の溶媒和物形態も含む。特許請求の範囲において使用される用語は、これらの形態を包含する。
多形
本発明は、さらに、様々な結晶形態、多形形態及び無水形態又は水和形態における本発明の化合物に関する。化合物は、そのような化合物の合成的調製において使用される溶媒からの精製及び又は単離の方法をわずかに変更することによって、任意のそのような形態で単離することができることが、医薬品産業においてよく確立されている。
プロドラッグ
本発明は、プロドラッグ形態での本発明の化合物をさらに含む。そのようなプロドラッグは、一般に、１又は複数の適切な基が、ヒト又は哺乳動物の対象に投与されると、修飾が逆に戻ることができるように修飾された、本発明の化合物である。そのような逆戻りは、そのような対象中に自然に存在する酵素によって通常実施されるが、そのようなプロドラッグと一緒に第２の作用剤を投与することによって、逆戻りをインビボで実施することが可能である。そのような修飾の例には、エステル（例えば、任意の上述したもの）が含まれ、逆戻りは、エステラーゼなどによって実施することができる。他のそのような系は、当業者に公知である。
投与
本発明の医薬組成物は、経口、直腸、膣、非経口、筋肉内、腹腔内、動脈内、クモ膜下、気管支内、皮下、皮内、静脈内、経鼻、頬側又は舌下の投与経路に適合させることができる。
経口投与については、圧縮錠剤、ピル、錠剤、ゲルウレ（gellule）、ドロップ、及びカプセルが特に使用される。好ましくは、これらの組成物は、１用量当たり、１〜２５０ｍｇ、より好ましくは１０〜１００ｍｇの活性成分を含有する。
他の投与形態は、溶液又はエマルジョンを含み、これは、静脈内、動脈内、クモ膜下、皮下、皮内、腹腔内又は筋肉内に注射することができ、滅菌した、又は滅菌可能な溶液から調製される。本発明の医薬組成物は、坐剤、ペッサリー、懸濁液、エマルジョン、ローション剤、軟膏、クリーム、ゲル、スプレー、溶液又は粉剤の形態とすることもできる。
経皮投与の代替の手段は、皮膚パッチの使用によるものである。例えば、活性成分は、ポリエチレングリコール又は液体パラフィンの水性エマルジョンからなるクリーム中に組み込むことができる。活性成分は、必要とされる場合のある安定剤及び保存剤と一緒に、白色ワックス又は白色軟パラフィン基剤からなる軟膏中に、１〜１０重量％の濃度で組み込むこともできる。
注射用形態は、１用量当たり、１０〜１０００ｍｇ、好ましくは１０〜２５０ｍｇの活性成分を含むことができる。
組成物は、単位剤形、即ち、単位用量又は単位用量の複数ユニット若しくはサブユニットを含む別個の部分の形態で製剤化することができる。
投与量
当業者は、本組成物の１つの適切な用量を容易に決定することによって、過度の実験を行うことなく、対象に投与することができる。一般に、医師は、個々の患者にとって最適となる実際の投与量を決定し、これは、使用される特定の化合物活性、その化合物の代謝的安定性及び作用の長さ、年齢、体重、全体的な健康、性別、飲食物、投与の様式及び時間、排泄率、薬剤の組合せ、特定の状態の重症度、並びに個々の受けている治療を含めた、様々な要因に依存する。本明細書に開示される投与量は、平均ケースの例示的なものである。個々の場合によって、より多い又はより少ない投与量範囲が適することももちろんあり得るが、そのようなものも本発明の目的の範囲内である。
必要に応じて、作用剤は、０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは体重１ｋｇ当たり０．１〜１ｍｇ等、体重１ｋｇ当たり０．０１〜３０ｍｇの用量で投与することができる。
例示的な実施形態では、単回又は複数回による、１０〜１５０ｍｇ／日の用量が、悪性腫瘍の治療のために患者に投与される。
治療用途
本発明の化合物は、抗増殖活性を有することが見出されており、したがって、例えば、がん、白血病等の増殖性疾患、又は例えば、乾癬及び再狭窄等の制御されない細胞増殖に関連する他の疾患の治療に使用されると考えられる。
本明細書に定義されるように、本発明の目的の範囲内の抗増殖性効果は、例えば、Ａ５４９、ＨｅＬａ、ＨＴ−２９、ＭＣＦ７、Ｓａｏｓ−２、ＣＣＲＦ−ＣＥＭ、Ｈ４６０、ＨＬ−６０及びＫ−５６２のいずれかの細胞株を用いたインビトロ全細胞アッセイにおいて細胞増殖を阻害する能力によって、又は適切なアッセイにおいてキナーゼ阻害を示すことによって、実証することができる。これらのアッセイは、その実行方法を含めて、添付の実施例においてより詳細に説明する。そのようなアッセイを使用して、化合物が、本発明の脈絡において抗増殖性であるかどうかを判定することができる。
したがって、本発明の好適な一実施形態は、増殖性疾患を治療するための薬物の調製における、１又は複数の本発明の化合物の使用に関する。
本明細書で使用される場合、「薬物の調製」という句は、薬物として本発明の化合物を直接使用することとともに、さらなる治療剤のためのスクリーニングプログラム、又はそのような薬物の製造の任意の段階において本発明の化合物を使用することを含む。
用語「増殖性障害」は、本明細書では広い意味で使用されており、細胞周期の制御を必要とする任意の疾患、例えば、再狭窄及び心筋症などの心血管疾患、糸球体腎炎及び関節リウマチなどの自己免疫疾患、乾癬などの皮膚疾患、マラリアなどの抗炎症、抗真菌、駆虫性の疾患、気腫及び脱毛症を含む。これらの疾患では、本発明の化合物は、必要とされる場合、所望の細胞内でアポトーシスを誘発し、又は静止を維持することができる。増殖性障害は、がん又は白血病であることが好ましい。
別の好適な実施形態では、増殖性疾患は乾癬である。
本発明の化合物は、細胞周期における任意の段階又は時期、例えば、核膜の形成、細胞周期（Ｇ０）の静止期からの脱出、Ｇ１進行、染色体脱凝縮、核膜破壊、ＳＴＡＲＴ、ＤＮＡ複製の開始、ＤＮＡ複製の進行、ＤＮＡ複製の終止、中心体複製、Ｇ２進行、有糸分裂又は減数分裂機能の活性化、染色体凝縮、中心体分離、微小管核形成、紡錐体形成及び機能、微小管モータータンパク質との相互作用、染色分体分離（separation）及び分離（segregation）、有糸分裂機能の不活性化、収縮環の形成、並びに細胞質分裂機能等のいずれかを阻害することができる。特に、本発明の化合物は、ある特定の遺伝子機能、例えば、クロマチン結合、複製複合体の形成、複製ライセンシング、リン酸化又は他の二次修飾の活性、タンパク質分解、微小管結合、アクチン結合、セプチン結合、微小管形成中心核形成活性及び細胞周期シグナル伝達経路の成分への結合などに影響することができる。
本発明のさらなる態様は、増殖性疾患の治療方法であって、治療有効量の本発明の化合物を哺乳動物に投与するステップを含む方法に関する。
この態様の好適な実施形態では、増殖性疾患は、がん又は白血病である。
この態様のさらにより好適な実施形態では、化合物は、少なくとも１つのＣＤＫ酵素を阻害するのに十分な量で投与される。
本発明の化合物は、ＣＤＫ１、ＣＤＫ２、ＣＤＫ３、ＣＤＫ４、ＣＤＫ６、ＣＤＫ７、ＣＤＫ８及び／又はＣＤＫ９の少なくとも１つを阻害するのに十分な量で投与されることが好ましい。
本発明の化合物は、ＣＤＫ２及び／又はＣＤＫ４の少なくとも１つを阻害するのに十分な量で投与されることがより好ましい。
ＣＤＫ酵素はＣＤＫ２であることが、さらにより好ましい。
この態様の好適な一実施形態では、化合物は経口投与される。
本発明の別の態様は、抗有糸分裂剤としての本発明の化合物の使用に関する。
本発明のさらに別の態様は、神経変性疾患を治療するための本発明の化合物の使用に関する。
神経変性疾患は、ニューロンアポトーシスであることが好ましい。
本発明の別の態様は、抗ウイルス剤としての本発明の化合物の使用に関する。
したがって、本発明の別の態様は、ウイルス性疾患、例えば、ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ、human cytomegalovirus）、単純ヘルペスウイルス１型（ＨＳＶ−１、herpes simplex virus type 1）、ヒト免疫不全ウイルス１型（ＨＩＶ−１、human immunodeficiency virus type 1）、及び水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ、varicella zoster virus）を治療するための薬物の調製における本発明の化合物の使用に関する。
本発明のより好適な実施形態では、本発明の化合物は、ウイルス複製に関与する宿主細胞ＣＤＫ、即ち、ＣＤＫ２、ＣＤＫ７、ＣＤＫ８、及びＣＤＫ９の１又は複数を阻害するのに十分な量で投与される［Wang D, De la Fuente C, Deng L, Wang L, Zilberman I, Eadie C, Healey M, Stein D, Denny T, Harrison LE, Meijer L, Kashanchi F. Inhibition of human immunodeficiency virus type 1 transcription by chemical cyclin-dependent kinase inhibitors. J. Virol. 2001; 75: 7266-7279］。
本明細書で定義される場合、本発明の目的の範囲内の抗ウイルス効果は、ＣＤＫ２、ＣＤＫ７、ＣＤＫ８又はＣＤＫ９を阻害する能力によって実証することができる。
特に好適な実施形態では、本発明は、ＣＤＫ依存性又は感受性であるウイルス性疾患の治療における、１又は複数の本発明の化合物の使用に関する。ＣＤＫ依存性障害は、１又は複数のＣＤＫ酵素の正常より高いレベルの活性に関連する。そのような障害は、ＣＤＫ２、ＣＤＫ７、ＣＤＫ８及び／又はＣＤＫ９の異常レベルの活性に関連することが好ましい。ＣＤＫ感受性障害は、ＣＤＫレベル異常が主原因ではなく、かかる異常が、主要な代謝的異常の下流にある障害である。そのようなシナリオでは、ＣＤＫ２、ＣＤＫ７、ＣＤＫ８及び／又はＣＤＫ９は、感受性の代謝経路の一部であるということができ、したがって、ＣＤＫ阻害剤は、そのような障害を治療することにおいて活性となり得る。
本発明の化合物は、様々な眼疾患の治療のための薬物の調製においても有用である。眼疾患は、緑内障、滲出性加齢黄斑変性症（ＡＭＤ、age-related macular degeneration）又は増殖性糖尿病性網膜症（ＰＤＲ、proliferative diabetic retinopathy）であることが好ましい。
緑内障と呼ばれる疾患状態は、視神経の不可逆的損傷による視覚機能の永久喪失を特徴とする。いくつかの形態学的又は機能的に異なる種類の緑内障は、一般に、眼圧（ＩＯＰ、intraocular pressure）の上昇を特徴とし、これは、疾患の病的過程に原因として関係すると考えられている。高眼圧症は、眼圧は上昇しているが、視覚機能の明らかな喪失はまったく起こっていない状態である。そのような患者は、緑内障に関連する視力喪失を最終的に発生する、高いリスクにあると考えられている。ＧＳＫ−３阻害剤は、緑内障などの眼疾患の治療に有用である。Ｗｎｔシグナル伝達経路の成分である、フリズルド関連タンパク質（ＦＲＰ、frizzled related protein）は、いくつかの緑内障の小柱網細胞株において差次的に発現され、正常なシグナル伝達カスケードを混乱させ、流出抵抗の増大及びＩＯＰ上昇の発生を引き起こす場合があることが示されている。Hellberg M.Rらは（米国特許出願公開第２００４０１８６１５９号）、ＧＳＫ−３とＷｎｔシグナル伝達経路の成分との相互作用を通じて、薬剤によるＧＳＫ−３の阻害は、ＦＲＰのレベルの上昇によって生じる、Ｗｎｔシグナル伝達経路のＦＲＰ媒介アンタゴニズムを回避し、緑内障を有する個体におけるＦＲＰ産生の増大から生じる流出抵抗の増大に対抗することができることを示した。
ＣＴＧＦは、分泌型サイトカインであり、これは、主にコラーゲンＩ及びフィブロネクチンの沈着の増大を介して、細胞外基質（ＥＣＭ、extracellular matrix）産生を増大させることが知られている。ＣＴＧＦの過剰発現は、ＥＣＭ成分の過剰蓄積がある、スクレロデルナ（scleroderna）、線維増殖性疾患、瘢痕などの状態における、主な原因となる要因として以前に関係づけられた。小柱網（ＴＭ、trabecular meshwork）の領域における細胞外基質物質の過剰蓄積も、多くの型の緑内障の特徴である。そのような増大は、房水流出に対する抵抗を増大させ、したがって眼圧を上昇させると考えられている。Fleenor D Lらは（米国特許出願公開第２００５０２３４０７５号）、ＧＳＫ−３阻害剤及びＣＤＫ阻害剤は、ヒトＴＭ細胞において、基本的及びＴＧＦβ２誘導性ＣＴＧＦ発現の両方を阻害することができることを示した。したがって、本発明の化合物は、緑内障の治療に有用である。
本発明の化合物は、ＡＭＤ及びＰＤＲの治療においても有用である。滲出性加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）及び増殖性糖尿病性網膜症（ＰＤＲ）は、先進国における後天盲の主な原因であり、眼の後区の病的な血管新生を特徴とする。滲出性ＡＭＤ及びＰＤＲの誘因はともに依然として知られていないが、様々な血管新生促進性成長因子の生成が一般的な刺激であると思われる。可溶性成長因子、例えば、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ、vascular endothelial growth factor）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ、platelet-derived growth factor）、塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ、basic fibroblast growth factor又はＦＧＦ−２）、インスリン様成長因子１（ＩＧＦ−１、insulin-like growth factor 1）、アンジオポエチンなどが、病的な眼の血管新生を有する患者から除去された組織及び体液中に見出された。これらの成長因子及びオーロラキナーゼなどの他の細胞内酵素の活性の阻害又は遮断は、抗血管新生効果を有することが示された。したがって、本発明の化合物は、血管新生を特徴とする眼疾患を治療するのに有用である。
本発明の別の態様は、糖尿病を治療するための薬物の調製における、本発明の化合物、又は薬学的に許容されるその塩の使用に関する。
特に好ましい実施形態では、糖尿病はII型糖尿病である。
ＧＳＫ３は、グリコーゲン合成酵素（ＧＳ、glycogen synthase）をリン酸化する、いくつかのプロテインキナーゼの１つである。骨格筋内のインスリンによるグリコーゲン合成の刺激は、ＧＳの脱リン酸化及び活性化から生じる。したがって、ＧＳに対するＧＳＫ３の作用により、ＧＳが非活性化され、したがって筋肉内でのグルコースのグリコーゲンへの変換が抑制される。
II型糖尿病（非インスリン依存性糖尿病）は、多因子性疾患である。高血糖は、インスリンの分泌障害に加えて、肝臓、筋肉、及び他の組織におけるインスリン抵抗性によるものである。骨格筋は、インスリン刺激性グルコース取込みのための主な部位であり、そこでグルコースは、循環から取り出され、又はグリコーゲンに変換される。筋肉のグリコーゲンの沈着は、グルコース恒常性における主な決定要因であり、II型糖尿病患者は、筋肉のグリコーゲンの貯蔵が不完全である。ＧＳＫ３活性の増大は、II型糖尿病において重要であるという証拠がある［Chen, Y.H.; Hansen, L.; Chen, M.X.; Bjorbaek, C.; Vestergaard, H.; Hansen, T.; Cohen, P.T.; Pedersen, O. Diabetes, 1994, 43, 1234］。さらに、ＧＳＫ３は、II型糖尿病患者の筋細胞中で過剰発現され、骨格筋ＧＳＫ３活性とインスリン作用の間に逆相関関係が存在することが実証された［Nikoulina, S.E.; Ciaraldi, T.P.; Mudaliar, S.; Mohideen, P.; Carter, L.; Henry, R.R. Diabetes, 2000, 49, 263］。
したがって、ＧＳＫ３阻害は、糖尿病、特にII型、及び糖尿病性ニューロパチーの治療において治療上重要である。
ＧＳＫ３は、ＧＳ以外の多くの基質をリン酸化することが知られており、したがって、複数の生化学的経路の制御に関与することは注目すべきである。例えば、ＧＳＫは、中枢及び末梢神経系において高度に発現される。
したがって、本発明の別の態様は、ＣＮＳ障害、例えば、神経変性疾患を治療するための薬物の調製における、本発明の化合物、又は薬学的に許容されるその塩の使用に関する。
ＣＮＳ障害は、アルツハイマー病であることが好ましい。
Ｔａｕは、アルツハイマー病の病因と関係づけられたＧＳＫ−３基質である。健康な神経細胞中では、Ｔａｕは、チューブリンとコアセンブルして微小管になる。しかし、アルツハイマー病では、ｔａｕは、フィラメントの大きなもつれを形成し、これにより、神経細胞中の微小管構造が混乱し、それによって、栄養分の輸送並びにニューロンのメッセージの伝達が損われる。
理論に束縛されることを望むわけではないが、ＧＳＫ３阻害剤は、アルツハイマー病並びにいくつかの他の神経変性疾患、例えば、進行性核上麻痺、大脳皮質基底核変性症及びピック病などの一様な特徴である、微小管結合タンパク質ｔａｕの異常な過剰リン酸化を防止及び／又は逆転することができる場合があると考えられる。ｔａｕ遺伝子における突然変異により、前頭側頭認知症の遺伝型が生じるが、これは、神経変性過程に対するｔａｕタンパク質機能障害の関連性をさらに強調するものである［Goedert, M. Curr. Opin. Gen. Dev., 2001, 11, 343］。
本発明の別の態様は、双極性障害を治療するための薬物の調製における、本発明の化合物、又は薬学的に許容されるその塩の使用に関する。
本発明のさらに別の態様は、脳卒中を治療するための薬物の調製における、本発明の化合物、又は薬学的に許容されるその塩の使用に関する。
ニューロンアポトーシスの低減は、頭部外傷、発作、てんかん、及び運動ニューロン疾患の状況における重要な治療目的である［Mattson, M.P. Nat. Rev. Mol. Cell. Biol., 2000, 1, 120］。したがって、神経細胞中のアポトーシス促進因子としてのＧＳＫ３は、このプロテインキナーゼをこれらの疾患を治療するための阻害薬の設計にとって魅力的な治療標的にする。
本発明のさらに別の態様は、脱毛症を治療するための薬物の調製における、本発明の化合物、又は薬学的に許容されるその塩の使用に関する。
発毛は、Ｗｎｔシグナル伝達経路、特に、Ｗｎｔ−３によって制御される。皮膚の組織培養モデル系では、β−カテニンの非分解性突然変異体（non-degradable mutant）の発現により、より大きな増殖能を有する、推定幹細胞集団が劇的に増大する。［Zhu, A.J.; Watt, F.M. Development, 1999, 126, 2285］。この幹細胞集団は、より高いレベルの非カドヘリン結合β−カテニンを発現し［DasGupta, R.; Fuchs, E. Development, 1999, 126, 4557］、これは、その高い増殖能に寄与し得る。さらに、皮膚中で、切断されたβ−カテニンを過剰発現するトランスジェニックマウスは、胚形成の間にのみ通常確立される、新規な毛嚢形態形成を起こす。したがって、ＧＳＫ３阻害剤の異所性の適用は、禿頭症の治療及び化学療法誘発性脱毛症後の発毛回復において、治療上有用となり得る。
本発明のさらなる態様は、ＧＳＫ３依存性疾患の治療方法であって、その必要のある対象に、ＧＳＫ３を阻害するのに十分な量で、上記に定義したような、本発明による化合物、又は薬学的に許容されるその塩を投与するステップを含む方法に関する。
本発明の化合物、又は薬学的に許容されるその塩は、ＧＳＫ３βを阻害するのに十分な量で投与されることが好ましい。
本発明の一実施形態では、本発明の化合物は、少なくとも１つのＰＬＫ酵素を阻害するのに十分な量で投与される。
ｐｏｌｏ様キナーゼ（ＰＬＫ、polo-like kinase）は、セリン／トレオニンプロテインキナーゼのファミリーを構成する。有糸分裂期のキイロショウジョウバエ（Drosophila melanogaster）の、ｐｏｌｏ遺伝子座変異体は、紡錐体異常を示すので［Sunkel et al., J. Cell Sci., 1988, 89, 25］、ｐｏｌｏは、有糸分裂キナーゼをコードすることが判明した［Llamazares et al., Genes Dev., 1991, 5, 2153］。ヒトでは、３つの密接に関係したＰＬＫが存在する［Glover et al., Genes Dev., 1998, 12, 3777］。これらは、高度に相同性のアミノ−末端の触媒キナーゼドメインを含み、そのカルボキシル末端は、２つ又は３つの保存領域、即ちｐｏｌｏボックスを含む。ｐｏｌｏボックスの機能の理解は、不完全なままであるが、これらは、ＰＬＫの細胞内コンパートメントへの標的化［Lee et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1998, 95, 9301; Leung et al., Nat. Struct. Biol., 2002, 9, 719］、他のタンパク質との相互作用の媒介［Kauselmann et al., EMBO J., 1999, 18, 5528］に関係づけられ、又は自己調節ドメインの一部を構成することができる［Nigg, Curr. Opin. Cell Biol., 1998, 10, 776］。さらに、ｐｏｌｏボックス依存性ＰＬＫ１活性は、適切な中期／後期移行及び細胞質分裂に必要である［Yuan et al., Cancer Res., 2002, 62, 4186; Seong et al., J. Biol. Chem., 2002, 277, 32282］。
研究により、ヒトＰＬＫは、有糸分裂のいくつかの基本的な側面を調節することが示された［Lane et al., J. Cell. Biol., 1996, 135, 1701; Cogswell et al., Cell Growth Differ., 2000, 11, 615］。特に、ＰＬＫ１活性は、後期Ｇ２／初期分裂前期における中心体の機能的成熟及び引き続く二極性紡錐体の確立に必要であると考えられている。低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ、small interfering RNA）技法による細胞ＰＬＫ１の欠乏により、このタンパク質は、複数の有糸分裂過程及び細胞質分裂の完了に必要であることも確認された［Liu et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2002, 99, 8672］。
本発明のより好適な実施形態では、本発明の化合物は、ＰＬＫ１を阻害するのに十分な量で投与される。
３つのヒトＰＬＫのうちで、ＰＬＫ１が最もよく特徴づけられている。これは、有糸分裂の開始［Toyoshima-Morimoto et al., Nature, 2001, 410, 215; Roshak et al., Cell. Signalling, 2000, 12, 405］、ＤＮＡ損傷チェックポイントの活性化［Smits et al., Nat. Cell Biol., 2000, 2, 672; van Vugt et al., J. Biol. Chem., 2001, 276, 41656］、後期促進複合体の制御［Sumara et al., Mol. Cell, 2002, 9, 515; Golan et al., J. Biol. Chem., 2002, 277, 15552；Kotani et al., Mol. Cell, 1998, 1, 371］、プロテアソームのリン酸化［Feng et al., Cell Growth Differ., 2001, 12, 29］、及び中心体の複製及び成熟［Dai et al., Oncogene, 2002, 21, 6195］を含めた、いくつかの細胞分裂周期作用を調節する。
具体的には、有糸分裂の開始には、Ｍ期促進因子（ＭＰＦ、M-phase promoting factor）の活性化、サイクリン依存性キナーゼＣＤＫ１（cyclin dependent kinase 1）とＢ型サイクリンとの複合体［Nurse, Nature, 1990, 344, 503］が必要である。この複合体は、細胞周期のＳ期からＧ２期の間に蓄積し、ＷＥＥ１、ＭＩＫ１、及びＭＹＴ１キナーゼによるＭＰＦ複合体の阻害的リン酸化を促進する。Ｇ２期の最後に二重特異性ホスファターゼＣＤＣ２５Ｃによる脱リン酸化に対応して、ＭＰＦの活性化が誘発される［Nigg, Nat. Rev. Mol. Cell Biol., 2001, 2, 21］。間期では、サイクリンＢは、細胞質に局在化し［Hagting et al., EMBO J., 1998, 17, 4127］、次いでこれは、分裂前期の間にリン酸化され、この事象により核転座が生じる［Hagting et al., Curr. Biol., 1999, 9, 680；Yang et al., J. Biol. Chem., 2001, 276, 3604］。分裂前期の間の活性ＭＰＦの核内蓄積は、Ｍ期事象を開始するのに重要であると考えられている［Takizawa et al., Curr. Opin. Cell Biol., 2000, 12, 658］。しかし、核内ＭＰＦは、ＣＤＣ２５Ｃによって無効にされない限り、ＷＥＥ１によって不活性な状態で維持される。ホスファターゼＣＤＣ２５Ｃ自体は、間期の間、細胞質に局在化し、前期において核内に蓄積する［Seki et al., Mol. Biol. Cell, 1992, 3, 1373; Heald et al., Cell, 1993, 74, 463; Dalal et al., Mol. Cell. Biol., 1999, 19, 4465］。サイクリンＢ［Toyoshima-Morimoto et al., Nature, 2001, 410, 215］及びＣＤＣ２５Ｃ［Toyoshima-Morimoto et al., EMBO Rep., 2002, 3, 341］の核移行はともに、ＰＬＫ１によるリン酸化によって促進される［Roshak et al., Cell. Signalling, 2000, 12, 405］。このキナーゼは、Ｍ期開始の重要な調節因子である。
特に好適な一実施形態では、本発明の化合物は、ＰＬＫ１のＡＴＰ−拮抗的阻害剤である。
この場合、ＡＴＰアンタゴニズムは、阻害剤化合物の、ＡＴＰ結合を損なうか、無効にする様式で、酵素の活性部位で可逆的又は不可逆的に結合することによって、ＰＬＫ触媒活性、即ち、ＡＴＰから巨大分子のＰＬＫ基質へのリン酸転移を減少させ、又は防止する能力を指す。
別の好適な実施形態では、本発明の化合物は、ＰＬＫ２及び／又はＰＬＫ３を阻害するのに十分な量で投与される。
哺乳動物ＰＬＫ２（ＳＮＫとしても知られる）並びにＰＬＫ３（ＰＲＫ及びＦＮＫとしても知られる）は、前初期遺伝子産物であることが最初に示された。ＰＬＫ３キナーゼ活性は、後期ＳからＧ２期の間にピークに達すると思われる。これは、ＤＮＡ損傷チェックポイントの活性化及び厳しい酸化的ストレスの間にも活性化される。ＰＬＫ３は、細胞中の微小管動態及び中心体機能の調節において重要な役割を果たし、調節が解除されたＰＬＫ３発現により、細胞周期停止及びアポトーシスが生じる［Wang et al., Mol. Cell. Biol., 2002, 22, 3450］。ＰＬＫ２は、３つのＰＬＫのうちで最もよく理解されていない相同体である。ＰＬＫ２とＰＬＫ３はともに、さらなる重要な有糸分裂後の機能を有する場合がある［Kauselmann et al., EMBO J., 1999, 18, 5528］。
本発明の別の態様は、プロテインキナーゼを阻害するための本発明の化合物の使用に関する。
この態様の好適な実施形態では、プロテインキナーゼはサイクリン依存性キナーゼである。プロテインキナーゼは、ＣＤＫ１、ＣＤＫ２、ＣＤＫ３、ＣＤＫ４、ＣＤＫ６、ＣＤＫ７、ＣＤＫ８又はＣＤＫ９であることが好ましく、ＣＤＫ２であることがより好ましい。
本発明のさらなる態様は、プロテインキナーゼの阻害方法であって、前記プロテインキナーゼを本発明の化合物と接触させるステップを含む方法に関する。
この態様の好適な実施形態では、プロテインキナーゼはサイクリン依存性キナーゼであり、ＣＤＫ２であることがさらにより好ましい。
アッセイ
本発明の別の態様は、サイクリン依存性キナーゼ、オーロラキナーゼ、ＧＳＫ及び／又はＰＬＫ酵素の１又は複数の活性に影響する、さらなる候補化合物を同定するためのアッセイにおける、先に定義した化合物の使用に関する。
このアッセイは、サイクリン依存性キナーゼ、オーロラキナーゼ、ＧＳＫ及び／又はＰＬＫ酵素の１又は複数を阻害することができる候補化合物を同定することができることが好ましい。
このアッセイは、競合的結合アッセイであることがより好ましい。
候補化合物は、本発明の化合物の従来のＳＡＲ改変によって生成されることが好ましい。
本明細書で使用される場合、用語「従来のＳＡＲ改変」は、化学的な誘導体化によって所与の化合物を変更するための、標準的な当技術分野で既知の方法を指す。
したがって、一態様では、同定された化合物は、他の化合物の開発のためのモデル（例えば、テンプレート）として作用することができる。そのような試験において使用される化合物は、溶液中で遊離していても、固体支持体に付着していても、細胞表面上にあっても、細胞内に位置していてもよい。化合物と試験される作用剤との結合複合体の活性又は形成の消滅を測定することができる。
本発明のアッセイは、スクリーニング（screen）とすることができ、それによっていくつかの作用剤が試験される。一態様では、本発明のアッセイ方法は、ハイスループットスクリーニングである。
本発明は、競合的薬剤スクリーニングアッセイの使用も意図しており、このアッセイでは、化合物を特異的に結合することができる中和抗体が、化合物に結合することにおいて試験化合物と競合する。
スクリーニングについての別の技法は、物質への適当な結合親和性を有する作用剤のハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ、high throughput screening）を提供し、国際公開第８４／０３５６４号パンフレットに詳細に記載されている方法に基づく。
本発明のアッセイ法は、試験化合物の小規模及び大規模スクリーニングの両方、並びに定量的アッセイに適すると予期される。
競合的結合アッセイは、前記ＣＤＫ酵素の既知の基質の存在下で、本発明の化合物をサイクリン依存性キナーゼ、オーロラキナーゼ、ＧＳＫ又はＰＬＫ酵素と接触させるステップと、前記キナーゼと前記既知の基質との相互作用の任意の変化を検出するステップとを含むことが好ましい。
本発明のさらなる態様は、リガンドの、サイクリン依存性キナーゼ、オーロラキナーゼ、ＧＳＫ又はＰＬＫ酵素への結合の検出方法であって、
（ｉ）前記キナーゼの既知の基質の存在下で、リガンドをサイクリン依存性キナーゼ、オーロラキナーゼ、ＧＳＫ又はＰＬＫ酵素と接触させるステップと；
（ii）前記キナーゼと前記既知の基質との相互作用の任意の変化を検出するステップと；
を含み、前記リガンドが本発明の化合物である方法を提供する。
本発明の一態様は、
（ａ）先に説明したアッセイ法を実施するステップと、
（ｂ）リガンド結合ドメインに結合することができる、１又は複数のリガンドを同定するステップと、
（ｃ）一量の前記１又は複数のリガンドを調製するステップと
を含む方法に関する。
本発明の別の態様は、
（ａ）先に説明したアッセイ法を実施するステップと、
（ｂ）リガンド結合ドメインに結合することができる、１又は複数のリガンドを同定するステップと、
（ｃ）前記１又は複数のリガンドを含む医薬組成物を調製するステップと
を含む方法を提供する。
本発明の別の態様は、
（ａ）先に説明したアッセイ法を実施するステップと、
（ｂ）リガンド結合ドメインに結合することができる、１又は複数のリガンドを同定するステップと、
（ｃ）リガンド結合ドメインに結合することができる、前記１又は複数のリガンドを修飾するステップと、
（ｄ）先に説明したアッセイ法を実施するステップと、
（ｅ）必要に応じて、前記１又は複数のリガンドを含む医薬組成物を調製するステップと
を含む方法を提供する。
本発明は、先に説明した方法によって同定されるリガンドにも関する。
本発明のさらに別の態様は、先に説明した方法によって同定されるリガンドを含む医薬組成物に関する。
本発明の別の態様は、増殖性疾患の治療に使用するための医薬組成物の調製における、先に説明した方法によって同定されるリガンドの使用に関する。
上記方法は、１又は複数のＣＤＫ酵素の阻害剤として有用なリガンドのスクリーニングに使用することができる。
本発明を以下の実施例によって、且つ以下の図面を参照してさらに説明する。
本発明の化合物によるＭｃｌ−１の下方制御を示す図である。Ｈ４６０細胞を様々な濃度の化合物で２４時間処理し、ウェスタンブロッティングによって、Ｍｃｌ−１のレベルの変化を分析した。 Ｈ４６０細胞中のＭｃｌ−１レベルに対する、いくつかの追加の化合物の効果を示す図である。細胞を様々な濃度の各薬剤で処理し、５時間後に分析した。［実施例］
概要
化学物質及び溶媒は、市販供給源から購入し、別段の記載のない限り、受け取った状態で使用した。ＴＨＦ及びＥｔ２Ｏは、Ｎ２下でナトリウム−ベンゾフェノンを用いて、還流下で加熱することによって乾燥し、蒸留によって収集した。トルエンは、Ｎ２下のナトリウム上で、還流下で加熱することによって乾燥した。ＣＨ２Ｃｌ２は、Ｎ２下のＣａＨ２上で、還流下で加熱することによって乾燥した。使用したマイクロ波発振器は、ＣＥＭ社製「Discover」モデルであり、環状の単一モード空洞デザインを有しており、これによりマイクロ波照射を試料管に集中させた。ＴＬＣ（thin-layer chromatography、薄層クロマトグラフィー）は、シリカゲルＧ６０（０．２５ｃｍ）でコーティングしたガラスプレートを使用して実施した。展開したプレートは、空気で乾燥し、ＵＶランプ（２５４／３６５ｎｍ）下で分析した。別段の記載のない限り、無水ＭｇＳＯ４を有機溶液の標準的な乾燥剤として使用した。フラッシュカラムクロマトグラフィーは、Fluorochem社製シリカゲル（３５〜７０μｍ）を使用して実施した。融点（ｍｐ、melting point）は、Electrothermal 9100キャピラリー融点装置を用いて求め、修正していない。略語（ｄｅｃ）は分解点を表す。すべての場合において、１Ｈ−ＮＭＲスペクトルは、重水素化溶媒をロックとして、及び残留溶媒を内部基準として使用して、Broker Avance 300（３００．１ＭＨｚ）又はVarian Gemini 2000（３００ＭＨｚ）分光計で記録した。ＰＥＮＤＡＮＴシーケンス（sequence）を使用する１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルは、Bruker Avance 300（７５．５ＭＨｚ）分光計で記録した。すべての他の１３Ｃ−スペクトルは、合成パルス１Ｈデカップリングを使用して、Varian Gemini 2000（７５．５ＭＨｚ）分光計で記録した。カップリング定数（Ｊ）は、最も近い０．１Ｈｚまで引用する。以下の略語を使用する：ｓ、一重線；ｄ、二重線；ｔ、三重線；ｑ、四重線；ｑｕ、五重線（quintuplet）；ｍ、多重線及びｂｒ、幅広線。微量元素分析は、Mrs S Williamson、School of Chemistry、Purdie Building、University of St. Andrews、UKによって実施された。得られた結果は計算値の０．４％以内であった。エレクトロスプレー質量スペクトル（ＥＳＩ、Electrospray mass spectra）は、Waters 2975 HPLCに連結したMicromass社製ＬＣＴ質量分析計で記録した。分析用ＲＰ−ＨＰＬＣは、Dionex P580ポンプに連結したDionex ASI-100自動試料注入器を使用して実施した。２５℃の温度に維持したPhenomenex社製カラム（１５０×４．６０ｍｍ、Synergi ４μ hydro-RP ８０Å）を分析目的で使用した。ＨＰＬＣユニットは、Chromeleonソフトウェアを使用して制御した。１ｍＬ／分の流速で、Ｈ２Ｏ／ＭｅＣＮ系（０．１％のＣＦ３ＣＯＯＨを含む）を使用して線形勾配溶出を実施した。純度は、クロマトグラム（λ＝２５４ｎｍ）の積分によって評価した。
合成
（２Ｒ，３Ｓ）−３−アミノ−ペンタン−２−オールは、アミンに使用した保護基が異なる２つの経路の一方又は他方によって調製した。
トリチルを保護基として使用した経路１
（Ｓ）−２−（トリチルアミノ）ブタン−１−オール
室温で、アルゴン雰囲気下で、（Ｓ）−（＋）−２−アミノブタン−１−オール（１０ｇ、１１２．１８ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（ＤＣＭ、２５０ｍｌ）中の攪拌した溶液に、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ、diisopropylethylamine、１９．４ｍｌ、１１２．１８ｍｍｏｌ）、その後に塩化トリチル（３１．２ｇ、１１２．１８ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物をこの温度で４８時間攪拌し、そのとき、ＴＬＣ（ヘキサン：エーテル：ＭｅＯＨ；５５：４０：５）により、反応が完了していたことが示された。溶媒を真空で蒸発し、残留物を酢酸エチル中に溶解させた。有機溶液を水で洗浄し（２回）、硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を除去することによって、（Ｓ）−２−（トリチル−アミノ）−ブタン−１−オールを薄黄色油状物として得た；収量：３３ｇ（８９％）。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，２５０ＭＨｚ）：δ０．７２（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，−ＮＨＣＨ（ＣＨ２ ＣＨ ３ ）ＣＨ２ＯＨ）、１．１５〜１．１０（ｍ，２Ｈ，−ＮＨＣＨ（ＣＨ ２ ＣＨ３）ＣＨ２ＯＨ）、２．０５（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＮＨ）、２．２４（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＯＨ）、２．６２〜２．５４（ｍ，１Ｈ，−ＮＨＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）ＣＨ２ＯＨ）、３．１７〜３．０８（１Ｈ ｍ，−ＮＨＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）ＣＨＨＯＨ）、３．３５〜３．２９（１Ｈ，ｍ，ＮＨＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）ＣＨＨＯＨ）、７．３７〜７．２（１２Ｈ，ｍ，，ＡｒＨ）、７．６５〜７．５８（３Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）；δＣ（２５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）１４６．８６（Ｃ）、１２９．４３（６×ＣＨ）、１２７．９０（６×ＣＨ）、１２６．４８（３×ＣＨ）、７１．２７（Ｃ）、６２．７２（ＣＨ２）、４８．９１（ＣＨ）、２４．５５（ＣＨ２）、１０．４７（ＣＨ３）
（Ｓ）−２−（トリチルアミノ）ブチルアルデヒド
−７８℃で、アルゴン雰囲気下で、乾燥ジメチルスルホキシド（２．４ｍｌ、２．８当量、３３．８２ｍｍｏｌ）の乾燥ジクロロメタン（３０ｍｌ）中の攪拌した溶液に、塩化オキサリル（ＤＣＭ中の２Ｍ溶液、８．４５ｍｌ、１．４０当量、１６．９ｍｍｏｌ）を液滴で添加した。この反応混合物を−７８℃で１時間攪拌し、その後、（Ｓ）−２−（トリチル−アミノ）−ブタン−１−オール（４ｇ、１当量、１２．０７ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（３０ｍｌ）中の溶液を攪拌しながら液滴で添加した。この反応混合物をこの温度で２時間攪拌し、その後、トリエチルアミン（ＴＥＡ、triethylamine、８．４ｍｌ、５当量、６０．２７ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（３０ｍｌ）中の溶液を添加し、この溶液を１時間にわたって室温に加温させた。この反応混合物をＤＣＭ（１００ｍｌ）でさらに希釈し、水（２５０ｍｌ）で洗浄した。この水相をＤＣＭ（３×５０ｍｌ）で抽出し、合わせた有機相をブライン（５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、真空で蒸発させた。残留物をフラッシュシリカクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン１：４）によって精製することによって、（Ｓ）−２−（トリチル−アミノ）−ブチルアルデヒドを薄黄色油状物として得た；収量：３．６４ｇ（９１％）。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，２５０ＭＨｚ）：δ０．９５（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，−ＮＨＣＨ（ＣＨ２ ＣＨ ３ ）ＣＨＯ）、１．７２〜１．５２［２Ｈ，ｍ，ＮＨＣＨ（ＣＨ ２ ＣＨ３）ＣＨＯ］、２．７６（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，−ＮＨ）、３．４１〜３．３６［１Ｈ，ｍ，ＮＨＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）ＣＨＯ］、７．３５〜７．１７（１２Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）、７．６７〜７．５１（３Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）、９．０５（１Ｈ，ｓ，ＮＨＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）ＣＨＯ）。δＣ（２５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）２０２．９５（ＣＯ）、１４６．２３（Ｃ）、１２９．２３（６×ＣＨ）、１２７．９６（６×ＣＨ）、１２６．８５（３×ＣＨ）、７１．１３（Ｃ）、６２．６２（ＣＨ）、２４．７８（ＣＨ２）、１０．４８（ＣＨ３）
（２Ｒ，３Ｓ）−３−（トリチルアミノ）ペンタン−２−オール
−７８℃で、アルゴン雰囲気下で、ＣｕＢｒ．ＳＭｅ２（３ｇ、１４．６ｍｍｏｌ）の、無水エーテル（１００ｍｌ）中の攪拌した懸濁液に、メチルリチウム（エーテル中、１．６Ｍ、１６．５ｍｌ、４．０当量、２６．５ｍｍｏｌ）を液滴で添加し、この溶液を１時間にわたって室温に加温させた。この混合物を−７８℃に再冷却し、（Ｓ）−２−（トリチル−アミノ）−ブチルアルデヒド（２．２ｇ、６．６２ｍｍｏｌ）のエーテル（２５ｍｌ）中の溶液を攪拌しながら液滴で添加した。この反応混合物をこの温度で２時間攪拌し、次いで１時間にわたって室温に加温させた。ＮＨ４Ｃｌ（５０ｍｌ）の飽和水溶液を添加し、２層を分離した。有機相をブライン（５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、真空で蒸発させた。残留物をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、ヘキサン：酢酸エチル（８０：２０）で溶出することによって、（２Ｒ，３Ｓ）−３−（トリチルアミノ−ペンタン−２−オールを薄黄色油状物として得た；収量：１．５ｇ（６６％）。（７５％ｄｅ ２Ｒ，３Ｓ：２５％ｄｅ ２Ｓ，３Ｓ）。１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ，２５０ＭＨｚ）：δ０．０．４７＋０．５５（２×ｔ，Ｊ＝７．５０＋７．２６Ｈｚ−ＮＨＣＨ（ＣＨ２ ＣＨ ３ ）ＣＨ（ＣＨ３）ＯＨ）、０．９９〜１．１２（ｍ，５Ｈ，−ＮＨＣＨ（ＣＨ ２ ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ ３ ）ＯＨ）、２．０１（１Ｈ，ｍ，，−ＮＨＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）ＯＨ）、３．２２〜３．４３（ｍ，１Ｈ，−ＮＨＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）ＯＨ）、４．４１［１Ｈ，ｄ，，Ｊ＝３．３，ＮＨＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）ＯＨ］、７．１４〜７．５６（１５Ｈ，ｍ，，ＡｒＨ）。δＣ（２５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）１４６．８８（Ｃ）、１２８．９７（６×ＣＨ）、１２７．８３（６×ＣＨ）、１２６．４３（３×ＣＨ）、７１．０３（Ｃ）、６８．１３（ＣＨ）、５８．７７（ＣＨ）、２３．０９（ＣＨ２）、１７．８８（ＣＨ３）、１０．４７（ＣＨ３）
（２Ｒ，３Ｓ）−３−アミノ−ペンタン−２−オール
室温で、アルゴン雰囲気下で、（２Ｒ，３Ｓ）−３−（トリチル−アミノ）−ペンタン−２−オール（１．６４ｇ、４．７５ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２０ｍｌ）中の攪拌した溶液に、トリフルオロ酢酸（１０ｍｌ）を液滴で添加し、この溶液をこの温度で１時間攪拌した。溶媒を真空で蒸発させ、残留物を攪拌しながらヘキサン（１５０ｍｌ）を用いてエーテル（１５ｍｌ）から沈殿させることによって黄色油状物を得た。溶媒を油状物からデカントし、この油状物をヘキサン（３０ｍｌ）で洗浄し、真空で乾燥することによって、（２Ｒ，３Ｓ）−３−アミノ−ペンタン−２−オールを薄黄色油状物として得た；収量：０．３０ｇ（９８％）。（７５％ｄｅ ２Ｒ，３Ｓ：２５％ｄｅ ２Ｓ，３Ｓ）。１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ，２５０ＭＨｚ）：δ０．９１３＋０．９２３（２×ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．５０＋７．５０Ｈｚ，ＮＨ２ＣＨ（ＣＨ２ ＣＨ ３ ）ＣＨ（ＣＨ３）ＯＨ）、１．１１＋１．１８（３Ｈ，２×ｄ，Ｊ＝６．４８＋６．４８Ｈｚ，ＮＨ２ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ ３ ）ＯＨ）、１．４１〜１．６５（２Ｈ，ｍ，ＮＨ２ＣＨ（ＣＨ ２ ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）ＯＨ）、２．７６＋２．９３［２×１Ｈ，ｍ，ＮＨ２ ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）ＯＨ］、３．６１〜３．６９＋３．８０〜３．９０［２×１Ｈ，ｍ，ＮＨ２ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）ＯＨ］、７．７３（２Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＮＨ ２ ）。
ジベンジル化（dibenzylation）によってアミンを保護した経路２
（Ｓ）−２−（ジベンジルアミノ）ブタン−１−オール
（Ｓ）−（＋）−２−アミノブタン−１−オール（５ｇ、５６．１８ｍｍｏｌ）の乾燥アセトニトリル（１００ｍｌ）中の攪拌した溶液に、乾燥粉末化した炭酸カリウム（３１ｇ、２２４．７２ｍｍｏｌ）、その後に臭化ベンジル（１９ｇ、１１１．１１ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を室温で２４時間攪拌した。溶媒を真空下で除去し、残留物を酢酸エチル（１００ｍｌ）及び水（１００ｍｌ）中に溶解させた。有機相を水で再び洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮することによって、純粋な生成物をわずかに黄色の油状物として得た（１４．５ｇ、９７．３％）。δＨ（２５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）０．９８（３Ｈ，ｔ，Ｊ ７．５，ＣＨＣＨ２ＣＨ ３ ）、１．３８〜１．２（１Ｈ，ｍ，ＣＨＣＨＨＣＨ３）、１．９４〜１．７８（１Ｈ，ｍ，ＣＨＨＣＨ３）、２．８３〜２．７１（１Ｈ，ｍ，ＣＨＣＨＨＣＨ３）、３．２２（１Ｈ，ｓ，ｂ，ＯＨ）、３．６５〜３．４（２Ｈ，ｍ，ＣＨ ２ ＯＨ）、３．４７（２Ｈ，ｄ，Ｊ １７．５，２×ＣＨＨＰｈ）、３．９４（２Ｈ，ｄ，Ｊ １７．５，２×ＣＨＨＰｈ）、７．４６〜７．２６（１０Ｈ，ｍ，２×Ｃ６Ｈ５）；δＣ（２５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）１３９．４２（２×Ｃ）、１２９．１（２×ＣＨ）、１２８．５２（２×ＣＨ）、１２７．２５（２×ＣＨ）、６１．９７（ＣＨ）、６０．６７（ＣＨ２）、５３．２３（ＣＨ２）、１７．９２（ＣＨ２）、１１．８３（ＣＨ３）；ｍ／ｚ ２７０．２（Ｍ＋Ｈ）
（Ｓ）−２−（ジベンジルアミノ）ブタナール
塩化オキサリルのジクロロメタン（３．１８ｍｌ、６．３６ｍｍｏｌ）中の２Ｍの溶液を−７８．０℃に冷却し、乾燥窒素下で、乾燥ジクロロメタン（２０ｍｌ）を用いて希釈した。ジメチルスルホキシド（１ｇ、１２．７２ｍｍｏｌ）の無水ジクロロメタン溶液を冷却された攪拌した溶液に液滴で添加した。添加を完了した後、反応物をさらに１時間攪拌した。（Ｓ）−２−（ジベンジルアミノ）ブタン−１−オール（１．４３ｇ，５．３ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液を５分にわたって添加した。１０分後に、ジイソプロピルエチルアミン（２．７３ｇ、２１．２ｍｍｏｌ）を添加した。この反応物を室温に加温させ、攪拌しながら１時間放置した。これを０℃に冷却し、酢酸エチル／水（５０ｍｌ：５０ｍｌ）を添加した。有機層を水（５０ｍｌ）、ブライン（５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濃縮した。生成物をフラッシュシリカカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン １：４）により精製することによって、純粋な生成物（１．２８ｇ、９０．５％）を得た。δＨ（２５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）０．８８（３Ｈ，ｔ，Ｊ ７．５，ＣＨＣＨ２ＣＨ ３ ）、１．７７〜１．５４（２Ｈ，ｍ，ＣＨ ２ ＣＨ３）、２．９９（１Ｈ，ｔ，Ｊ ７．５，ＣＨＣＨ２ＣＨ３）、３．７４〜３．５７（４Ｈ，ｍ，２×ＣＨ ２ Ｐｈ）、７．３１〜７．１１（１０Ｈ，ｍ，２×Ｃ６Ｈ５）９．６４（１Ｈ，ｓ，ＣＨＯ）；δＣ（２５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）２０３．９（ＣＯ）、１３９．３３（２×Ｃ）、１２８．９９（４×ＣＨ）、１２８．４５（４×ＣＨ）、１２７．３（２×ＣＨ）、６８．４６（ＣＨ）、５４．８５（ＣＨ２）、１７．４４（ＣＨ２）、１１．８３（ＣＨ３）；ｍ／ｚ ２６８．２（Ｍ＋Ｈ）
（２Ｒ，３Ｓ）−３−（ジベンジルアミノ）ペンタン−２−オール
−７８℃で、アルゴン雰囲気下で、ＣｕＢｒ．ＳＭｅ２（１．５４ｇ、７．５ｍｍｏｌ）の無水エーテル中の攪拌した懸濁液に、メチルリチウム（エーテル中１．６Ｍ、９．４ｍｌ、１５ｍｍｏｌ）を液滴で添加した。添加が完了した後、反応物を室温に加温させた。この反応物を−７８℃に再冷却し、（Ｓ）−２−（ジベンジルアミノ）ブタナール（１ｇ、３．７５ｍｍｏｌ）のエーテル（２０ｍｌ）中の溶液を液滴で添加した。添加後、攪拌を２時間継続した。次いで反応をＮＨ４Ｃｌ（１０ｍｌ）の飽和水溶液でクエンチした。反応混合物をエーテル（２×３０ｍｌ）で抽出し、合わせた有機相をブライン（２０ｍｌ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、真空で蒸発させた。残留物をフラッシュシリカゲル勾配カラムクロマトグラフィーによって精製し、ヘキサン：酢酸エチル（１００：０→８０：２０）で溶出することによって、生成物を薄黄色油状物（０．９５ｇ、８９％）として、唯一の異性体として得た。δＨ（２５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）１．０５（３Ｈ，ｔ，Ｊ ７．５，ＣＨＣＨ２ＣＨ ３ ）、１．２５［３Ｈ，ｄ，Ｊ ７．５，ＣＨ（ＣＨ ３ ）ＯＨ］、１．６〜１．４９（１Ｈ，ｍ，ＣＨＨＣＨ３）、１．８８〜１．７３（１Ｈ，ｍ，ＣＨＨＣＨ３）、２．４１（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＯＨ）、２．６６〜２．５９（１Ｈ，ｍ，ＣＨＣＨ２ＣＨ３）、３．８５〜３．６５（４Ｈ，ｍ，２×ＣＨ ２ Ｐｈ）、４．０５〜３．９（１Ｈ，ｍ，ＣＨＯＨ）、７．４１〜７．２５（１０Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）δＣ（２５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）１４０．０５（２×Ｃ）、１２８．９８（４×ＣＨ）、１２８．３７（４×ＣＨ）、１２７．３（２×ＣＨ）、６６．８１（ＣＨ）、６３．６５（ＣＨ）、５５．４１（ＣＨ２）、２０．６３（ＣＨ３）１８．４４（ＣＨ２）、１２．５（ＣＨ３）
２−クロロ−４，６−ジメチルニコチノニトリル
４，６−ジメチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−カルボニトリル（５ｇ、３４ｍｍｏｌ）をオキシ塩化リン（２０ｍｌ）に添加した。反応物を還流しながら２時間攪拌し、その後完了したと見られた。揮発分を除去し、残留物をガソリンでトリチュレートした。得られた固体を濾別（filter off）し、ヘキサンで洗浄し、乾燥することによって、純粋な白色固体（５．１ｇ、９０％）を得た。δＨ（２５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）２．５５（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３）、２．５７（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３）、７．０９（１Ｈ，ｓ，ＡｒＨ）；δＣ（２５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）１６２．６４（Ｃ）、１５４．３９（Ｃ）、１５２．２６（Ｃ）、１２３．２２（ＣＨ）、１１４．２８（Ｃ）、１０８．３１（Ｃ）、２４．５（ＣＨ３）、２０．５４（ＣＨ３）。；ｍ／ｚ １８９（Ｍ＋Ｎａ）
４，６−ジメチルピリジン−３−イルメチルカルバミン酸ｔ−ブチルエステル
２−クロロ−４，６−ジメチル−ニコチノニトリル（５ｇ、３０．１ｍｍｏｌ）を１０％の酢酸／エタノール（３０ｍｌ）中に溶解させた。１０％の木炭上パラジウム触媒（０．５ｇ）を添加し、反応物を水素雰囲気下で、６０℃で２４時間攪拌した。この混合物をセライトの詰め物を通して濾過した。揮発分を除去し、粗残留物をジクロロメタン（３０ｍｌ）中に溶解させた。次いで攪拌した溶液に、トリエチルアミン（５ｍｌ）、その後にジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート（６．５ｇ、３０ｍｍｏｌ）を添加した。３時間後に、溶媒を除去し、残留物を酢酸エチル中に溶解させた。これを水（５０ｍｌ）、飽和ビカーボネート（５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥し、蒸発させた。粗生成物をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン １：２）により精製することによって、１．４ｇの純粋な表題化合物を得た（２０％の収率）。δＨ（２５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）１．４３（９Ｈ，ｓ，３×ＣＨ３）２．１９（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３）、２．３８（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３）、４．１９（２Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＡｒＣＨ ２ ＮＨ）、６．８４（１Ｈ，ｓ，ＡｒＨ）、８．１５（１Ｈ，ｓ，ＡｒＨ）；δＣ（２５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）１５７．４１（ＣＯ）、１５５．６３（Ｃ）、１４８．９３（ＣＨ）、１４５．９１（Ｃ）、１２９．５１（Ｃ）、１２４．７６（ＣＨ）、７９．４４（Ｃ）、４６．１２（ＣＨ２）、２８．３２（３×ＣＨ３）、２３．７４（ＣＨ３）、１８．９７（ＣＨ３）；ｍ／ｚ ２３７．２（Ｍ＋Ｈ）
（４，６−ジメチルピリジン−３−イルメチル）−（２−フルオロ−９Ｈ−プリン−６−イル）−アミン
０℃で、アルゴン雰囲気下で、６−クロロ−２−フルオロプリン（０．８３ｇ、４．９ｍｍｏｌ）のｎ−ＢｕＯＨ（５０ｍｌ）中の攪拌した溶液に、ＤＩＥＡ（２．５ｍｌ、１４．７ｍｍｏｌ）、その後に（４，６−ジメチルピリジン−３−イル）メタンアミン（１ｇ、７．３５ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物をこの温度で１時間攪拌し、次いで室温に戻し、４時間攪拌したが、依然として完了していないと見られたので、反応物を１００℃に加熱し、その温度で２時間放置した。溶媒を真空で蒸発させ、残留物をシリカゲル上で勾配フラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ（１００：０→９０：１０）で溶出することによって、生成物を白色固体として得た；収量：０．８６ｇ（６５％）。δＨ（２５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）２．３５（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３）、２．３９（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３）、４．６１（２Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＮＨＣＨ ２ ）、７．０７（１Ｈ，ｓ，ＡｒＨ）、８．１３（１Ｈ，ｓ，ＡｒＨ）、８．３３（１Ｈ，ｓ，ＡｒＨ）、８．６９（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＮＨ）；δＣ（２５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）１６１．２（Ｃ）、１５８．５７（Ｃ）、１５６．０８（Ｃ）、１５０（Ｃ）、１４８．０８（ＣＨ）、１４８．１４（ＣＨ）、１４７．９（ＣＨ）、１４５．９３（Ｃ）、１２９．９２（Ｃ）、１２９．７６（Ｃ）、１２４．３７（ＣＨ）、４１．７（ＣＨ２）、２３．１７（ＣＨ３）、１８．１４（ＣＨ３）；ｍ／ｚ ２７３．２（Ｍ＋Ｈ）
（４，６−ジメチルピリジン−３−イルメチル）−（２−フルオロ−９−イソプロピル ９Ｈ−プリン−６−イル）−アミン
室温で、アルゴン雰囲気下で、（４，６−ジメチル−ピリジン−３−イルメチル）−（２−フルオロ−９Ｈ−プリン−６−イル）−アミン（０．６ｇ、１．９ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍｌ）中の攪拌した溶液に、Ｋ２ＣＯ３（粉末化、無水、１．７７ｇ、５当量、１３ｍｍｏｌ）、その後に２−ブロモプロパン（１．８ｍｌ、１０当量、１９ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を室温で２４時間攪拌し、そのとき、ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ；９０：１０）により、反応が完了していたことが示された。溶媒を真空で蒸発させ、残留物を水（５０ｍｌ）と酢酸エチル（５０ｍｌ）の間で分配し、水相を分離し、さらなるＥｔＯＡｃ（２×５０ｍｌ）で抽出した。まとめた有機相をブライン（５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、真空で蒸発させ、残留物をシリカゲル上で勾配カラムクロマトグラフィーによって精製し、ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ（１００：０→９５：５）で溶出することによって、生成物を黄色膜として得た（０．４ｇ、５９％）。δＨ（２５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）１．５２［６Ｈ，ｄ，Ｊ ７．５ ＣＨ（ＣＨ ３ ） ２ ］２．２７（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３）、２．４５（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３）、４．７３〜４．６２（３Ｈ，ｍ，ＮＨＣＨ ２ 及びＣＨ［ＣＨ３］２）、６．９１（１Ｈ，ｓ，ＡｒＨ）、７．１２（１Ｈ，ＮＨ）、７．４７（１Ｈ，ｓ，ＡｒＨ）、８．３２（１Ｈ，ｓ，ＡｒＨ）；δＣ（２５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）１６０．７７（Ｃ）、１５７．８９（Ｃ）、１５７．４３（Ｃ）、１５６．１２（Ｃ）、１５５．７９（Ｃ）、１４９．１４（ＣＨ）、１３７．７（ＣＨ）、１２８．７（Ｃ）、１２９．７６（Ｃ）、１２４．８３（ＣＨ）、４７．２（ＣＨ）、４０．１４（ＣＨ２）、２３．９（ＣＨ３）、２２．４７（２×ＣＨ３）、１８．５４（ＣＨ３）；ｍ／ｚ ３１５．３（Ｍ＋Ｈ）
（２Ｒ，３Ｓ−３−（６−（（４，６−ジメチルピリジン−３−イルメチルアミノ）−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−２−イルアミノ）ペンタン−２−オール［１］
室温で、アルゴン雰囲気下で、（４，６−ジメチル−ピリジン−３−イルメチル）−（２−フルオロ−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イル）−アミン（３００ｍｇ、０．８４ｍｍｏｌ）の、ｎ−ＢｕＯＨ／ＤＭＳＯ（５ｍｌ、４：１）中の攪拌した溶液に、ＤＩＥＡ（１．７ｍｌ、１０当量、８．４ｍｍｏｌ）、その後に（２Ｒ，３Ｓ）−３−アミノ−ペンタン−２−オール（０．５ｇ、４．８ｍｍｏｌ）を添加した。フラスコに冷却管を装着し、反応混合物を１４０℃で予熱した油浴中に置き、この温度で７２時間攪拌した。この反応混合物を室温に冷却させ、溶媒を真空で蒸発させた。残留物を酢酸エチル（５０ｍｌ）と水（５０ｍｌ）の間で分配し、水相をさらなるＥｔＯＡｃ（２×２５ｍｌ）で抽出し、合わせた有機相をブライン（５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、真空で蒸発させた。残留物をシリカゲル上でフラッシュ勾配カラムクロマトグラフィーによって精製し、ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ（１００：０→９５：５）で溶出することによって、５５ｍｇの純粋な表題化合物（１２％）を得た。δＨ（２５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）０．９５（３Ｈ，ｔ，Ｊ ７．５，ＣＨＣＨ２ＣＨ３）、１．０６（３Ｈ，ｄ，Ｊ ７．５，ＣＨＣＨ３ＯＨ）１．４８［６Ｈ，ｄ，Ｊ ７．５ ＣＨ（ＣＨ ３ ） ２ ］、２．２４（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３）、２．４（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３）、３．９２〜３．８２（２Ｈ，ｍ，ＮＨＣＨ２）、４．６７〜４．４５（３Ｈ，ｍ，ＣＨＥｔＣＨＭｅＯＨ）、６．１５（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＮＨ）、６．８７（１Ｈ，ｓ，ＡｒＨ）、７．３７（１Ｈ，ＡｒＨ）、８．３１（１Ｈ，ｓ，ＡｒＨ）；δＣ（２５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）１６０．１１（Ｃ）、１５７．６８（Ｃ）、１５４．５７（Ｃ）、１４９．４２（ＣＨ）、１４６．３８（Ｃ）、１３４．５４（ＣＨ）、１２９．２４（Ｃ）、１２４．８４（ＣＨ）、７１．５２（ＣＨ）、５９．６５（ＣＨ）、４６．４７（ＣＨ）、４０．３３（ＣＨ２）、２４．９４（ＣＨ２）、２３．８９（ＣＨ３）、２３．５２（２×ＣＨ３）、１７．３７（ＣＨ３）、１２．５７（ＣＨ３）；ｍ／ｚ ３９８．３（Ｍ＋Ｈ）
２−フルオロ−Ｎ−（（６−メチルピリジン−３−イル）メチル）−９Ｈ−プリン−６−アミン
０℃で、アルゴン雰囲気下で、６−クロロ−２−フルオロプリン（０．４ｇ、２．３ｍｍｏｌ）の、ｎ−ＢｕＯＨ（５０ｍｌ）中の攪拌した溶液に、ＤＩＥＡ（２．５ｍｌ、１４．７ｍｍｏｌ）、その後に（６−メチルピリジン−３−イル）メタンアミン（０．３６ｇ、２．９５ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物をこの温度で１時間攪拌し、次いで室温に戻し、４時間攪拌したが、依然として完了していないと見られたので、反応物を１００℃に加熱し、その温度で８時間放置した。溶媒を真空で蒸発させ、残留物をシリカゲル上で勾配カラムクロマトグラフィーによって精製し、ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ（１００：０→９０：１０）で溶出することによって、生成物を白色固体として得た；収量：０．３８ｇ（６５％）。δＨ ＣＤＣｌ３，２５０ＭＨｚ）２．４４（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３）、３．６６〜３．５７（２Ｈ，ｍ，ＮＨＣＨ ２ ）、４．６３（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＮＨ）、７．２５（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．５，ＡｒＨ）、７．７１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ ２．５，７．５，ＡｒＨ）、８．１４（１Ｈ，ｓ，ＡｒＨ）、８．４９（１Ｈ，ｓ，ＡｒＨ）、９．０７（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＮＨ）；δＣ（ＣＤＣｌ３，２５０ＭＨｚ）１５９．１２（Ｃ）、１５８．６２（Ｃ）、１５７．６１（Ｃ）、１５５．５６（Ｃ）、１４７．４４（ＣＨ）、１４６．９９（ＣＨ）、１３６．３２（Ｃ）、１２３．０５（２×ＣＨ）、１１９．４２（Ｃ）、４１．６４（ＣＨ２）、１８．４７（ＣＨ３）；ｍ／ｚ ２５９．２（Ｍ＋Ｈ）
２−フルオロ−９−イソプロピル−Ｎ−（（６−メチルピリジン−３−イル）メチル）−９Ｈ−プリン−６−アミン
室温で、アルゴン雰囲気下で、２−フルオロ−Ｎ−（６−メチルピリジン−３−イル）メチル−９Ｈ−プリン−６−アミン（０．３ｇ、１．１７ｍｍｏｌ）の、ジメチルホルムアミド（１０ｍｌ）中の攪拌した溶液に、粉末化した無水Ｋ２ＣＯ３（０．８ｇ、５当量、５．８５ｍｍｏｌ）、その後に２−ブロモプロパン（１．１５ｍｌ、１１．７ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を室温で２４時間攪拌し、そのとき、ＤＣＭ：エーテル：ＭｅＯＨ（５５：４０：５）により、反応が完了していたことが示された。溶媒を真空で蒸発させ、残留物をＥｔＯＡｃ（１００ｍｌ）と水（１００ｍｌ）の間で分配した。水相をさらなるＥｔＯＡｃ（２×５０ｍｌ）で抽出し、合わせた有機相をブライン（５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、真空で蒸発させた。残留物をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ（９８：２）で抽出することによって、表題化合物をわずかに黄色の膜として得た（１９５ｍｇ、５５％）。δＨ（ＣＤＣｌ３，２５０ＭＨｚ）１．５２（６Ｈ，ｄ，Ｊ ７．５，ＣＨ［ＣＨ３］２）、２．５（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３）、４．７６〜４．６（３Ｈ，ｍ，ＮＨＣＨ ２ 及びＣＨＭｅ２）、７．０６（１Ｈ，ｄ，Ｊ ２．５，ＡｒＨ）、７．３５（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＮＨ）、７．５６（２Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＡｒＨ）、８．４７（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＡｒＨ）、；δＣ（ＣＤＣｌ３，２５０ＭＨｚ）１５７．６（Ｃ）、１５６．３２（Ｃ）、１５６（Ｃ）、１４８．４７（ＣＨ）、１３７．７２（ＣＨ）、１３６．０８（ＣＨ）、１３０．８３（Ｃ）、１２３．１１（ＣＨ）、１１８．２（Ｃ）、４７．３８（ＣＨ）、４３．２（ＣＨ２）、２３．９９（ＣＨ３）、２２．５（２×ＣＨ３）；ｍ／ｚ ３０１．２（Ｍ＋Ｈ）
２Ｒ，３Ｓ−３−（９−イソプロピル−６−（（６−メチルピリジン−３−イル）メチルアミノ）−９Ｈ−プリン−２−イルアミノ）ペンタン−２−オール［２］
室温で、アルゴン雰囲気下で、２−フルオロ−９−イソプロピル−Ｎ−（６−メチルピリジン−３−イルメチル）−９−Ｈ−プリン−６−アミン（１８０ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ）の、ｎ−ＢｕＯＨ／ＤＭＳＯ（５ｍｌ、４：１）中の攪拌した溶液に、ＤＩＥＡ（１ｍｌ、１０当量、５．６ｍｍｏｌ）、その後に（２Ｒ，３Ｓ）−３−アミノ−ペンタン−２−オール（０．３４ｇ、６ｍｍｏｌ）を添加した。フラスコに冷却管を装着し、反応混合物を１４０℃で予熱した油浴中に置き、この温度で７２時間攪拌した。反応混合物を室温に冷却させ、溶媒を真空で蒸発させた。残留物をＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）と水（５０ｍｌ）の間で分配し、水相をさらなるＥｔＯＡｃ（２×２５ｍｌ）で抽出し、合わせた有機相をブライン（５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、真空で蒸発させた。残留物をシリカゲル上で勾配フラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ（１００：０→９５：５）で溶出することによって、表題化合物をわずかな黄色の油状物として得た（４０ｍｇ、１９％）。δＨ（ＣＤＣｌ３，２５０ＭＨｚ）０．９５（３Ｈ，ｔ，Ｊ ７．５，ＣＨＣＨ２ＣＨ ３ ）、１．１４（３Ｈ，ｄ，Ｊ ５，ＣＨＣＨ ３ ＯＨ）、１５４（６Ｈ，ｄ，Ｊ ７．５，ＣＨ［ＣＨ ３ ］２）、１．６２〜１．４３（２Ｈ，ｍ，ＣＨＣＨ２ＣＨ３）、２．４４（３Ｈ，ｓ，ＡｒＣＨ３）、３．９３（１Ｈ，ｍ，ＣＨＭｅ２）、４．７７〜４．５８（１Ｈ，ｍ，ＣＨＣＨ３ＯＨ）、４．８〜４．６（２Ｈ，ｍ，ＮＨＣＨ ２ Ａｒ）、５．８（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＮＨ）、６．８２（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＮＨ）、７．０９（１Ｈ，ｄ，Ｊ １０，ＡｒＨ）、７．３１〜７．２３（２Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）、８．４９（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，，ＡｒＨ）；δＣ（ＣＤＣｌ３，２５０ＭＨｚ）１５７．７１（Ｃ）、１５６．２８（Ｃ）、１５５．９５（Ｃ）、１４８．５８（ＣＨ）、１３７．７３（ＣＨ）、１２９．０１（Ｃ）、１２８．５２（Ｃ）、１２８．４２（ＣＨ）、１２３１．１４（ＣＨ）、６８．８４（ＣＨ）、５０．４５（ＣＨ２）、４７．２５（ＣＨ）、２３．２７（ＣＨ３）、２２．５３（２×ＣＨ３）、２０．９（ＣＨ２）、１９．４６（ＣＨ３）、１０．４５（ＣＨ３）；ｍ／ｚ ３８４．３（Ｍ＋Ｈ）
（３−クロロベンジル）−（２−フルオロ−９Ｈ−プリン−６−イル）アミン
アルゴン雰囲気下で、６−クロロ−２−フルオロプリン（１ｇ、１当量、５．９ｍｍｏｌ）の、ｎ−ＢｕＯＨ（５０ｍｌ）中の攪拌した溶液に、ＤＩＥＡ（２．６ｍｌ、２．５当量、１４．７５ｍｍｏｌ）、その後に３−クロロ−ベンジルアミン（１．２５ｇ、１．５当量、８．８５ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を１００℃で３時間加熱し、その後に反応が完了した。溶媒を真空で蒸発させ、残留物をシリカゲル上で勾配カラムクロマトグラフィーによって精製し、ＤＣＭ：エーテル：ＭｅＯＨ（５５：４５：０→５５：４３：２）で溶出することによって、表題化合物を白色固体として得た；収量：１．１５ｇ（７０％）。δＨ（２５０ＭＨｚ，ｄ６−ＤＭＳＯ）４．７８〜４．６（２Ｈ，ｍ，ＮＨＣＨ ２ Ａｒ）、７．４１〜７．２８（４Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）、７．５７（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＡｒＨ）、８．１５（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＮＨ）、８．８８（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＮＨ）；δＣ（２５０ＭＨｚ，ｄ６−ＤＭＳＯ）１４２．３（Ｃ）、１３３．０２（Ｃ）、１３２．９２（Ｃ）、１３０．２５（ＣＨ）、１３０．１７（Ｃ）、１２７．８２（ＣＨ）、１２７．２７（ＣＨ）、１２７．０３（ＣＨ）、１２６．７６（Ｃ）、１２５．９２（ＣＨ）、１１６．４（Ｃ）、１１５（Ｃ）、４２．６７（ＣＨ２）；ｍ／ｚ ２７８（Ｍ＋Ｈ）
（３−クロロベンジル）−（２−フルオロ−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イル）アミン
室温で、アルゴン雰囲気下で、（３−クロロ−ベンジル）−（２−フルオロ−９Ｈ−プリン−６−イル）−アミン（０．６ｇ、２．１６ｍｍｏｌ）の、ジメチルホルムアミド（１０ｍｌ）中の攪拌した溶液に、粉末化した無水炭酸カリウム（１．４７ｇ、５当量、１０．８ｍｍｏｌ）、その後に２−ブロモプロパン（２．２ｍｌ、１０当量、２１．６ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で２４時間攪拌し、そのとき、ＤＣＭ：エーテル：ＭｅＯＨ（５５：４０：５）により、反応が完了していたことが示された。溶媒を真空で蒸発させ、残留物を酢酸エチル（５０ｍｌ）と水（５０ｍｌ）の間で分配した。水相をさらなる酢酸エチル（２×５０ｍｌ）で抽出し、合わせた有機相をブライン（５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、真空で蒸発させた。残留物をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、ＣＨＣｌ３で溶出することによって、表題化合物をわずかに黄色のゴムとして得た；収量：０．４５ｇ（６５％）。δＨ（２５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）１．５７（６Ｈ，ｄ，Ｊ ７．５，ＣＨ［ＣＨ３］２）、４．８１〜４．６３（３Ｈ，ｍ，ＮＨＣＨ ２ Ａｒ及びＣＨＭｅ２）、５．９８（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＮＨ）、７．２９〜７．１９（３Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）、７．３４（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＡｒＨ）、７．４２（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．５，ＡｒＨ）、７．５１（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＮＨ）；δＣ（２５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）１６１．９３（Ｃ）、１５６．３７（Ｃ）、１５６．０５（Ｃ）、１４１．３３（Ｃ）、１４０．４２（Ｃ）、１３７．７５（ＣＨ）、１３４．４９（Ｃ）、１２９．９２（ＣＨ）、１２７．６９（ＣＨ）、１２５．８１（ＣＨ）、１２５．６４（ＣＨ）、４７．４３（ＣＨ）、４３．８２（ＣＨ２）、２２．５６（２×ＣＨ３）；ｍ／ｚ ３２０．３（Ｍ＋Ｈ）
２Ｒ，３Ｓ−３−（６−（３−クロロベンジルアミノ）−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−２−イルアミノ）ペンタン−２−オール［３］
室温で、アルゴン雰囲気下で、（３−クロロ−ベンジル）−（２−フルオロ−９−イソプルピル（isoprpyl）−９Ｈ−プリン−６−イル）−アミン（０．３ｇ、０．９３ｍｍｏｌ）の、ｎ−ＢｕＯＨ／ＤＭＳＯ（５ｍｌ、４：１）中の攪拌した溶液に、ＤＩＥＡ（０．６ｍｌ、１０当量、１０ｍｍｏｌ）、その後に（２Ｒ，３Ｓ）−３−アミノペンタン−２−オール（０．５ｇ、４．８ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１４０℃で予熱した油浴中に置き、この温度で７２時間攪拌し、そのとき、ＴＬＣクロロホルム：メタノール（９５：５）により、反応が完了していたことが示された。この反応混合物を室温に冷却させ、溶媒を真空で蒸発させた。残留物をジクロロメタン（１００ｍｌ）と水（１００ｍｌ）の間で分配し、水相をさらなるジクロロメタン（３×５０ｍｌ）で抽出し、合わせた有機相をブライン（５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、真空で蒸発させた。残留物をシリカゲル上で勾配フラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、ＤＣＭ：エーテル：ＭｅＯＨ（６０：４０：０→６０：４０：２）で溶出することによって、表題生成物を無色の膜として得た；収量：９０ｍｇ（２２．５％）。δＨ（２５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）０．９７（３Ｈ，ｔ，Ｊ ７．５，ＣＨＣＨ２ＣＨ ３ ）、１．０８（３Ｈ，ｄ，Ｊ ７．５，ＣＨＣＨ ３ ＯＨ）、１．４５（６Ｈ，ｄ，Ｊ ７．５，ＣＨ［ＣＨ ３ ］２）、１．６〜１．３５（２Ｈ，ｍ，ＣＨＣＨ ２ ＣＨ３）、３．９３〜３．８（２Ｈ，ｍ，ＣＨＥｔ及びＮＨ）、４．５５〜４．４５［１Ｈ，ｍ，ＣＨ（ＣＨ３）ＯＨ］、４．７４〜４．６４（３Ｈ，ｍ，ＮＨＣＨ ２ Ａｒ及びＣＨＭｅ２）、５．５（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＯＨ）、６．５３（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＮＨ）、７．１９〜７．１３（３Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）、７．２２（１Ｈ，ｓ，ＡｒＨ）、７．３２（１Ｈ，ｓ，ＡｒＨ）；δＣ（２５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）１７５．０６（Ｃ）、１６０．１７（Ｃ）、１５４．７５（Ｃ）、１４１．２２（Ｃ）、１３４．５７（ＣＨ）、１３４．２９（Ｃ）、１２９．７３（ＣＨ）、１２７．７５（ＣＨ）、１２７．３０（ＣＨ）、１２５．７（ＣＨ）、１１４．５６（Ｃ）、７１．５３（ＣＨ）、５９．５８（ＣＨ）、４６．４４（ＣＨ）、４３．７８（ＣＨ２）、２３．９６（２×ＣＨ３）、１８．６５（ＣＨ３）、１８．３２（ＣＨ３）、１２．５６（ＣＨ３）；ｍ／ｚ ４０３．２（Ｍ＋Ｈ）
３−フルオロベンジル−２−フルオロ−９Ｈ−プリン−６−イル）アミン
アルゴン雰囲気下で、６−クロロ−２−フルオロプリン（１ｇ、５．９ｍｍｏｌ）の、ｎ−ＢｕＯＨ（３０ｍＬ）中の攪拌した溶液に、ＤＩＥＡ（２．６ｍＬ、２．５当量、１４．７５ｍｍｏｌ）、その後に３−フルオロ−ベンジルアミン（１．１ｇ、１．５当量、８．８５ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を１００℃で３時間加熱し、その後に反応が完了した。溶媒を真空で蒸発させ、残留物をシリカゲル上で勾配フラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、ＤＣＭ：エーテル：ＭｅＯＨ（５５：４５：０→５５：４３：２）で溶出し、表題化合物を白色固体として得た；収量：１．１ｇ（７１．７％）。δＨ（２５０ＭＨｚ，ｄ６−ＤＭＳＯ）４．７９〜４．６６（２Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＮＨＣＨ ２ Ａｒ）、７．４１〜７．２８（４Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）、７．５７（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＡｒＨ）、８．１５（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＮＨ）、８．８７（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＮＨ）；δＣ（２５０ＭＨｚ，ｄ６−ＤＭＳＯ）１４２．５（Ｃ）、１３３．０２（Ｃ）、１３２．９２（Ｃ）、１３０．２４（ＣＨ）、１３０．１７（Ｃ）、１２８．４１（ＣＨ）、１２７．７５（Ｃ）、１２７．０４（ＣＨ）、１２６．７６（ＣＨ）、１２５．９２（ＣＨ）、１１６．２（Ｃ）、１１５（Ｃ）、４２．６８（ＣＨ２）；ｍ／ｚ ２６２．１（Ｍ＋Ｈ）
３−フルオロベンジル−（２−フルオロ−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イル）アミン
室温で、アルゴン雰囲気下で、（３−フルオロ−ベンジル）−（２−フルオロ−９Ｈ−プリン−６−イル）−アミン（０．６ｇ、２．２４ｍｍｏｌ）の、ジメチルホルムアミド（１０ｍｌ）中の攪拌した溶液に、粉末化した無水炭酸カリウム（１．５２ｇ、５当量、１１．２ｍｍｏｌ）、その後に２−ブロモプロパン（２．３ｍｌ、１０当量、２２．４ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を室温で２４時間攪拌し、そのとき、ＤＣＭ：エーテル：ＭｅＯＨ（５５：４０：５）により、反応が完了していたことが示された。溶媒を真空で蒸発させ、残留物を酢酸エチル（１００ｍｌ）と水（１００ｍｌ）の間で分配した。水相をさらなる酢酸エチル（２×５０ｍｌ）で抽出し、合わせた有機相をブライン（５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、真空で蒸発させた。残留物をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、クロロホルムで溶出することによって、表題化合物をわずかに黄色のゴムとして得た；収量：０．３７ｇ（５４％）。δＨ（２５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）１．５５（６Ｈ，ｄ，Ｊ ７．５，ＣＨ［ＣＨ３］２）、４．８５〜４．６５（３Ｈ，ｍ，ＮＨＣＨ ２ Ａｒ及びＣＨＭｅ２）、５．９６（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＮＨ）、７．３１〜６．９４（４Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）、７．５９（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＡｒＨ）；δＣ（２５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）１６４．９３（Ｃ）、１６１．０１（Ｃ）、１５６．０４（Ｃ）、１３９．７７（Ｃ）、１３７．７６（ＣＨ）、１３０．１３（ＣＨ）、１２９．９２（Ｃ）、１２３．１９（ＣＨ）、１１４．５９（ＣＨ）、１１４．２６（ＣＨ）、４７．２２（ＣＨ）、４３．９３（ＣＨ２）、２２．５６（２×ＣＨ３）；ｍ／ｚ ３０４．２（Ｍ＋Ｈ）
２Ｒ，３Ｓ−３−［６−（３−フルオロベンジルアミノ）−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−２−イルアミノ］−ペンタン−２−オール［４］
室温で、アルゴン雰囲気下で、（３−フルオロ−ベンジル）−（２−フルオロ−９−イソプルピル−９Ｈ−プリン−６−イル）−アミン（０．３ｇ、０．９９ｍｍｏｌ）の、ｎ−ＢｕＯＨ／ＤＭＳＯ（５ｍｌ、４：１）中の攪拌した溶液に、ＤＩＥＡ（０．６ｍｌ、１０当量、１０ｍｍｏｌ）、その後に（２Ｒ，３Ｓ）−３−アミノペンタン−２−オール（０．５ｇ、４．８ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を１４０℃で予熱した油浴中に置き、この温度で７２時間攪拌し、そのとき、ＴＬＣクロロホルム：メタノール（９５：５）により、反応が完了していたことが示された。反応混合物を室温に冷却させ、溶媒を真空で蒸発させた。残留物をジクロロメタン（１００ｍＬ）と水（２００ｍＬ）の間で分配し、水相をさらなるジクロロメタン（３×５０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機相をブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、真空で蒸発させた。残留物をシリカゲル上で勾配フラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、ＤＣＭ：エーテル：ＭｅＯＨ（６０：４０：０→６０：４０：２）で溶出することによって、表題生成物を無色の膜として得た；収量：８０ｍｇ（２０％）。δＨ（２５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）１．０５（３Ｈ，ｔ，Ｊ ７．５，ＣＨＣＨ２ＣＨ ３ ）、１．１５（３Ｈ，ｄ，Ｊ ７．５，ＣＨＣＨ ３ ＯＨ）、１．５５（６Ｈ，ｄ，Ｊ ７．５，ＣＨ［ＣＨ ３ ］２）、１．６５〜１．４（２Ｈ，ｍ，ＣＨＣＨ ２ ＣＨ３）、４〜３．９１（２Ｈ，ｍ，ＣＨＥｔ及びＣＨＭｅ２）、４．６６〜４．５５（１Ｈ，ｍ，ＣＨＭｅＯＨ）、４．８（２Ｈ，ｄ，Ｊ ５，ＮＨＣＨ ２ Ａｒ）、６．４１（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＮＨ）、７．３３〜６．９２（４Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）、７．４６（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＡｒＨ）；δＣ（２５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）１６５．２（Ｃ）、１６４．９２（Ｃ）、１６０．１８（Ｃ）、１５４．７７（Ｃ）、１４１．６７（Ｃ）、１４１．５６（Ｃ）、１３４．５９（ＣＨ）、１３０．０８（ＣＨ）、１２３．１４（ＣＨ）、１１４．７１（ＣＨ）、１１３．９５（ＣＨ）、７１．６１（ＣＨ）、５９．６５（ＣＨ）、４６．４８（ＣＨ）、４３．９４（ＣＨ２）、２５．０２（ＣＨ２）、２２．５２（２×ＣＨ３）、１７．２４（ＣＨ３）、１０．５９（ＣＨ３）；ｍ／ｚ ３８７．３（Ｍ＋Ｈ）
（９−シクロプロピルメチル−２−フルオロ−９Ｈ−プリン−６−イル）ピリジン−３−イルメチル−アミン
室温で、アルゴン雰囲気下で、２−フルオロ−６−［（ピリジン−３−イルメチル）−アミノ］プリン（１ｇ、４．１０ｍｍｏｌ）の、ＤＭＦ（１２ｍｌ）中の攪拌した溶液に、Ｋ２ＣＯ３（粉末、無水、２．８４ｇ、５当量、２０．５２ｍｍｏｌ）、その後に（ブロモメチル）シクロプロパン（５．５３ｇ、１０当量、４１ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を室温で２４時間攪拌し、そのとき、ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ；９０：１０）により、反応が完了していたことが示された。溶媒を真空で蒸発させ、残留物を水（５０ｍｌ）とＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）の間で分配し、水相を分離し、さらなるＥｔＯＡｃ（２×５０ｍｌ）で抽出した。まとめた有機相をブライン（５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、真空で蒸発させ、残留物をシリカゲル上で勾配フラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ（１００：０→９５：５）で溶出することによって、生成物を無色のゴムとして得た；収量：０．８ｇ（６８％）δＨ（２５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）０．２４〜０．１５（２Ｈ，ｍ，ＣＨＨ及びＣｐのＣＨＨ）、０．４８〜０．３８（２Ｈ，ｍ，ＣＨＨ及びＣｐのＣＨＨ）、１．１１〜０．９５（１Ｈ，ｍ，ＣｐのＣＨ）、２．５６（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＮＨ）、３．６９（２Ｈ，ｄ，Ｊ ７．５，ＮＣＨ ２ Ｃｐ）、４．５８（２Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＮＨＣＨ ２ Ａｒ）、７．０４〜６．９６（１Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）、７．５１〜７．４５（２Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）、８．２６〜８．２４（１Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）、８．３７（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＡｒＨ）；δＣ（２５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）１５６．３２（Ｃ）、１５６．０１（Ｃ）、１４９．２９（ＣＨ）、１４８．９７（ＣＨ）、１３９．８５（ＣＨ）、１３９．８（Ｃ）、１３５．５４（ＣＨ）、１３３．８１（Ｃ）、１２３．５１（ＣＨ）、１１７．８６（Ｃ）、４８．５２（ＣＨ２）、４２．０９（ＣＨ２）、１１．０６（ＣＨ３）、５．２８（２×ＣＨ２）；ｍ／ｚ ２９９．２（Ｍ＋Ｈ）
２Ｒ，３Ｓ−３−（９−（シクロプロピルメチル）−６−（ピリジン−３−イルメチルアミノ）−９Ｈ−プリン−２−イルアミノ）ペンタン−２−オール［５］
室温で、アルゴン雰囲気下で、（９−シクロプロイルメチル（cycloproylmethyl）−２−フルオロ−９Ｈ−プリン−６−イル）−ピリジン−３−イルメチル−アミン（３００ｍｇ、１ｍｍｏｌ）の、ｎ−ＢｕＯＨ／ＤＭＳＯ（５ｍｌ、４：１）中の攪拌した溶液に、ＤＩＥＡ（１．９ｍＬ、１０当量、１０．５ｍｍｏｌ）、その後に（２Ｒ，３Ｓ）−３−アミノ−ペンタン−２−オール（５００ｍｇ、４．８当量、４．８ｍｍｏｌ）を添加した。フラスコに冷却管を装着し、反応混合物を１４０℃で予熱した油浴中に置き、この温度で７２時間攪拌した。この反応混合物を室温に冷却させ、溶媒を真空で蒸発させた。残留物を酢酸エチル（５０ｍｌ）と水（５０ｍｌ）の間で分配し、水相をさらなる酢酸エチル（２×２５ｍｌ）で抽出し、合わせた有機相をブライン（５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、真空で蒸発させた。残留物をシリカゲル上でフラッシュ勾配カラムクロマトグラフィーによって精製し、ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ（１００：０→９５：５）で溶出することによって、生成物を無色の膜として得た。収量（８５ｍｇ、２２％）。δＨ（２５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）０．４５〜０．３５（２Ｈ，ｍ，ＣＨＨ及びＣｐのＣＨＨ）、０．７〜０．６（２Ｈ，ｍ，ＣＨＨ及びＣｐのＣＨＨ）、１．０２（３Ｈ，ｔ，Ｊ ７．５，ＣＨＣＨ２ＣＨ ３ ）、１．１６（３Ｈ，ｄ，Ｊ ７．５，ＣＨＣＨ ３ ＯＨ）、１．３５〜１．２（１Ｈ，ｍ，ＣＨＣＨＨＣＨ３）、１．６８〜１．３８（２Ｈ，ｍ，ＣＨＣＨＨＣＨ３及びＣｐのＣＨ）、３．９〜３．８（２Ｈ，ｍ，ＣＨＯＨ及びＣＨＥｔ）、４．０５（２Ｈ，ｄ，Ｊ ７．５，ＮＣＨ ２ Ｃｐ）、４．７６（２Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＮＨＣＨ ２ Ａｒ）、４．８７（１Ｈ，ｄ，Ｊ ５，ＯＨ）、５．７７（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＮＨ）、６．６７（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＮＨ）、７．２２〜７．１７（１Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）、７．５３（１Ｈ，ｓ，ＡｒＨ）、７．６５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ ２．５，７．５，ＡｒＨ）、８．５（１Ｈ，ｄ，Ｊ ５，ＡｒＨ）、８．６１（１Ｈ，ｓ，ＡｒＨ）１．１１〜０．９５（１Ｈ，ｍ，ＣｐのＣＨ）、２．５６（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＮＨ）、３．６９（２Ｈ，ｄ，Ｊ ７．５，ＮＣＨ ２ Ｃｐ）、４．５８（２Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＮＨＣＨ ２ Ａｒ）、７．０４〜６．９６（１Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）、７．５１〜７．４５（２Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）、８．２６〜８．２４（１Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）、８．３７（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＡｒＨ）；δＣ（２５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）１６０．３（Ｃ）、１５４．７１（Ｃ）、１５１．０５（Ｃ）、１５１．０５（Ｃ）、１４９．２８（ＣＨ）、１４８．６４（ＣＨ）、１３６．８５（ＣＨ）、１３５．３０（ＣＨ）、１３４．５６（Ｃ）、１２９．２（Ｃ）、１２３．３７（ＣＨ）、１２２．１（Ｃ）、１１４．２１（Ｃ）、７７．２７（ＣＨ）、５９．５（ＣＨ）、４８．０２（ＣＨ２）、４１．９９（ＣＨ２）、２４．８４（ＣＨ２）、１７．４（ＣＨ３）、１１．５３（ＣＨ３）、１１．０１（ＣＨ３）、４．２（ＣＨ２）；ｍ／ｚ ３８２．３（Ｍ＋Ｈ）
６−クロロ−２−フルオロ−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン
２−フルオロ，６−クロロ−プリン（２ｇ、１１．７ｍｍｏｌ）と粉末化した炭酸カリウム（４ｇ、２８ｍｍｏｌ）との混合物を３０ｍｌのＤＭＦ中で勢いよく攪拌した。イソプロピルヨージド（６ｍｌ、６０ｍｍｏｌ）を２時間にわたって非常にゆっくりと添加した。この反応物をさらに５時間攪拌した。ＤＭＦを除去し、未精製物を酢酸エチル中に溶解させ、水（５０ｍｌ）、ブライン（５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濃縮した。未精製物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中、３０％の酢酸エチル）により精製することによって、純粋な生成物を白色固体として得た（１．１ｇ、４４％）。δＨ（ＣＤ３ＯＤ，２５０ＭＨｚ）１．６５［６Ｈ，ｄ，Ｊ ７．５，ＣＨ（ＣＨ ３ ） ２ ］、４．９２［１Ｈ，ｍ，ＣＨ（ＣＨ３）２］、８．６６（１Ｈ，ｓ，ＡｒＨ）；δＣ（ＣＤ３ＯＤ，２５０ＭＨｚ）１５４．７（Ｃ）、１５３．８８（Ｃ）、１５２．２（Ｃ）、１４７．６５（ＣＨ）、１３２．４４（Ｃ）、５０．６６（ＣＨ）、２２．７２（２×ＣＨ３）；ｍ／ｚ ２１５．２（Ｍ＋Ｈ）
Ｎ−シクロプロピル−２−フルオロ−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−アミン
６−クロロ−２−フルオロ−９−イソプルピル−９Ｈ−プリン（０．３ｇ、１．４ｍｍｏｌ）、ジイソプルピルエチルアミン（０．２ｇ、１．５５ｍｍｏｌ）及びシクロプロピルアミン（０．２ｇ、２．６６ｍｍｏｌ）をエタノール（３０ｍｌ）中で、室温で６時間一緒に攪拌した。揮発分を除去し、残留物を酢酸エチル中に溶解させ、水（５０ｍｌ）、ブライン（５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濃縮した。未精製物をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン ３：２）により精製することによって純粋な生成物を得た（２３２ｍｇ、７０．５％）。δＨ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）０．６３〜０．５５（２Ｈ，ｍ，ＣＨＨＣｐのＣＨＨ）、０．８５〜０．７８（２Ｈ，ｍ，ＣＨＨＣｐのＣＨＨ）、１．５４（６Ｈ，ｄ，Ｊ ７．５，ＣＨ［ＣＨ ３ ］２）、２．９７（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＣｐのＣＨ）、４．７３〜４．６２（１Ｈ，ｍ，ＣＨＭｅ２）、６．７２（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＮＨ）７．７（１Ｈ，ｓ，ＡｒＨ）；δＣ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）１５９．２９（Ｃ）、１５７．６３（Ｃ）、１５６．８（Ｃ）、１５６．６４（Ｃ）、１３７．６９（ＣＨ）、４７．３５（ＣＨ）、２２．６（２×ＣＨ３）、２１．０６（ＣＨ）、７．２８（２×ＣＨ２）；ｍ／ｚ ２３６．２（Ｍ＋Ｈ）
２Ｒ，３Ｓ−３−（６−シクロプロピルアミノ）−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−２−イルアミノ）ペンタン−２−オール［６］
室温で、アルゴン雰囲気下で、Ｎ−シクロプロピル−２−フルオロ−９−イソプルピル−９Ｈ−プリン−６−アミン（２３２ｍｇ、０．９９ｍｍｏｌ）の、Ｎ−メチルピロリジノン（１０ｍｌ）中の攪拌した溶液に、ＤＩＥＡ（０．２ｍＬ、１０．９６当量、１．１４ｍｍｏｌ）、その後に（２Ｒ，３Ｓ）−３−アミノペンタン−２−オール（５４０ｍｇ、５当量、５．２５ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を１４０℃で予熱した油浴中に置き、この温度で２４時間攪拌した。この反応混合物を室温に冷却させ、過剰の水を添加すると、生成物が油状で析出した。酢酸エチルを添加し、有機層を水（３×５０ｍｌ）で慎重に洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、真空で蒸発させた。残留物をシリカゲル上でフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、酢酸エチルで溶出することによって、表題生成物を淡褐色固体として得た（４６ｍｇ、１５％）。δＨ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）０．５８〜０．４９（２Ｈ，ｍ，ＣＨＨＣｐのＣＨＨ）、０．８３〜０．８１（２Ｈ，ｍ，ＣＨＨＣｐのＣＨＨ）、１．０３（３Ｈ，ｔ，Ｊ ７．５，ＣＨＣＨ２ＣＨ ３ ）、１．１３（３Ｈ，ｄ，Ｊ ７．５，ＣＨＣＨ ３ ＯＨ）、１．５５（６Ｈ，ｄ，Ｊ ７．５，ＣＨ［ＣＨ ３ ］２）、１．５７〜１．４５（２Ｈ，ｍ，ＣＨＣＨ ２ ＣＨ３）、２．９１（１Ｈ，ｓ，ｂ，ＣｐのＣＨ）、３．９５（２Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＣＨＭｅ２及びＣＨＥｔ）、４．６〜４．５７（１Ｈ，ｍ，ＣＨＭｅＯＨ）、４．８４（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＮＨ）、６．２５（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＮＨ）、７．４９（１Ｈ，ｓ，ＡｒＨ）；δＣ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）１６０．１６（Ｃ）、１５５．９１（Ｃ）、１５０．２４（Ｃ）、１３４．５７（ＣＨ）、１１４．６３（Ｃ）、７１．５７（ＣＨ）、５９．８８（ＣＨ）、４６．２７（ＣＨ）、２５．１５（ＣＨ２）、２２．５９（ＣＨ３）、１７．２２（ＣＨ３）、１１．６１（ＣＨ３）、７．３４（ＣＨ２）。４７．３５（ＣＨ）、２２．６（２×ＣＨ３）、２１．０６（ＣＨ）、７．２８（２×ＣＨ２）；ｍ／ｚ ３１９．３（Ｍ＋Ｈ）
Ｎ−（シクロプロピルメチル）−２−フルオロ−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−アミン
６−クロロ−２−フルオロ−９−イソプルピル−９Ｈ−プリン（０．３ｇ、１．４ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（０．２ｇ、１．５５ｍｍｏｌ）及びシクロプロピルメチルアミン（０．２４ｇ、２．７ｍｍｏｌ）をエタノール（３０ｍｌ）中で、室温で６時間一緒に攪拌した。揮発分を除去し、残留物を酢酸エチル中に溶解させ、水（５０ｍｌ）、ブライン（５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濃縮した。未精製物をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン ３：２）により精製することによって、純粋な生成物（２９０ｍｇ、８３％）を無色のゴムとして得た。δＨ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）０．２９〜０．２７（２Ｈ，ｍ，ＣＨＨＣｐのＣＨＨ）、０．５６〜０．５４（２Ｈ，ｍ，ＣＨＨＣｐのＣＨＨ）、１．１３（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＣｐのＣＨ）、１．５８（６Ｈ，ｄ，Ｊ ７．５，ＣＨ［ＣＨ ３ ］２）、３．４４（２Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＮＨＣＨ ２ Ｃｐ）２．９７（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＣｐのＣＨ）、４．７４〜４．７２（１Ｈ，ｍ，ＣＨＭｅ２）、６．２２（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＮＨ）、７．７６（１Ｈ，ｓ，ＡｒＨ）；δＣ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）１６０．０９（Ｃ）、１５６．１４（Ｃ）、１４７．４（Ｃ）、１３７．３８（ＣＨ）、１１８．２６（Ｃ）、４７．１４（ＣＨ）、４５．７８（ＣＨ２）、２２．４６（２×ＣＨ３）、１０．０６（ＣＨ）、３．５（２×ＣＨ２）
２Ｒ，３Ｓ−３−（６−（シクロプロピルメチルアミノ）−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−２−イルアミノ）ペンタン−２−オール［７］
室温で、アルゴン雰囲気下で、Ｎ−（シクロプロピルメチル）−２−フルオロ−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−アミン（２９０ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）の、Ｎ−メチルピロリジノン（１０ｍｌ）中の攪拌した溶液に、ＤＩＥＡ（１．４２ｇ、１１．１ｍｍｏｌ）、その後に（２Ｒ，３Ｓ）−３−アミノペンタン−２−オール（５６６ｍｇ、５当量、５．５ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を１４０℃で予熱した油浴中に置き、この温度で２４時間攪拌した。この反応混合物を室温に冷却させ、過剰の水を添加すると、生成物が油状で析出した。酢酸エチルを添加し、有機層を水（４回、５０ｍｌ）で慎重に洗浄した。有機相をブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、真空で蒸発させた。残留物をシリカゲル上でフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、酢酸エチルで溶出することによって、表題生成物を淡褐色固体として得た（１２０ｍｇ、３１％）。δＨ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）０．２２〜０．１９（２Ｈ，ｍ，ＣＨＨＣｐのＣＨＨ）、０．３６〜０．３４（２Ｈ，ｍ，ＣＨＨＣｐのＣＨＨ）、０．８（３Ｈ，ｔ，Ｊ ７．５，ＣＨＣＨ２ＣＨ ３ ）、０．８９（３Ｈ，ｄ，Ｊ ７．５，ＣＨＣＨ ３ ＯＨ）１．１３（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＣｐのＣＨ）、１．３３（６Ｈ，ｄ，Ｊ ７．５，ＣＨ［ＣＨ ３ ］２）、３．２４（２Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＮＨＣＨ ２ Ｃｐ）、３．７（２Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＣＨＥｔ及びＣＨＭｅ２）、６．５２（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＮＨ）、７．２６（１Ｈ，ｓ，ＡｒＨ）；δＣ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）１６０．２（Ｃ）、１５４．８９（Ｃ）、１３４．３５（ＣＨ）、７１．７２（ＣＨ）、５９．７６（ＣＨ）、４６．２３８（ＣＨ）、２５．２３（ＣＨ２）、２２．５９（ＣＨ３）、１７．１５（ＣＨ３）、１１．６１（ＣＨ３）、３．４８（２×ＣＨ２）；ｍ／ｚ ３３３．３（Ｍ＋Ｈ）
Ｎ−シクロブチル−２−フルオロ−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−アミン
６−クロロ−２−フルオロ−９−イソプルピル−９Ｈ−プリン（０．３ｇ、１．４ｍｍｏｌ）、ジイソプルピルエチルアミン（０．２ｇ、１．５５ｍｍｏｌ）及びシクロブチルアミン（０．２ｇ、２．８ｍｍｏｌ）をエタノール（３０ｍｌ）中で、室温で６時間一緒に攪拌した。揮発分を除去し、残留物を酢酸エチル中に溶解させ、水（５０ｍｌ）、ブライン（５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濃縮した。未精製物をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン ３：２）により精製することによって、純粋な生成物を得た（２３７ｍｇ、６８％）。δＨ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）１．５６（６Ｈ，ｄ，Ｊ ７．５，ＣＨ［ＣＨ ３ ］２）、１．７６〜１．７４（２Ｈ，ｍ，シクロブチルのＣＨ２）、１．９８〜１．９４（２Ｈ，ｍ，シクロブチルのＣＨ２）、２．４５（２Ｈ，ｓ，ｂｒ，シクロブチルのＣＨ２））４．７２〜４．７（２Ｈ，ｍ，シクロブチルのＣＨ及びＣＨＭｅ２）、６．３５（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＮＨ）、７．７５（１Ｈ，ｓ，ＡｒＨ）；δＣ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）１６０．０８（Ｃ）、１５８．４３（Ｃ）、１５５．３４（Ｃ）、１５５．１８（Ｃ）、１５０．０９（Ｃ）、１３７．４４（ＣＨ）、４７．２６（ＣＨ）、３１．５６（２×ＣＨ２）、２２．３８（２×ＣＨ３）、１５．０９（ＣＨ２）；ｍ／ｚ ２５０．２（Ｍ＋Ｈ）
２Ｒ，３Ｓ−３−（６−（シクロブチルアミノ）−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−２−イルアミノ）ペンタン−２−オール［８］
室温で、アルゴン雰囲気下で、Ｎ−シクロブチル−２−フルオロ−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−アミン（２３７ｍｇ、０．９５ｍｍｏｌ）の、Ｎ−メチルピロリジノン（１０ｍｌ）中の攪拌した溶液に、ＤＩＥＡ（１．２８ｇ、１０ｍｍｏｌ）、その後に（２Ｒ，３Ｓ）−３−アミノペンタン−２−オール（５６６ｍｇ、５当量、５．５ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を１４０℃で予熱した油浴中に置き、この温度で２４時間攪拌した。この反応混合物を室温に冷却させ、過剰の水を添加すると、生成物が油状で析出した。酢酸エチルを添加し、有機層を水（４×５０ｍｌ）で慎重に洗浄した。有機相をブライン（５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、真空で蒸発させた。残留物をシリカゲル上でフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、酢酸エチルで溶出することによって、表題生成物を淡褐色固体として得た（１２０ｍｇ、３１％）。δＨ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）、０．９７（３Ｈ，ｔ，Ｊ ７．５，ＣＨＣＨ２ＣＨ ３ ）、１．０７（３Ｈ，ｄ，Ｊ ７．５，ＣＨＣＨ ３ ＯＨ）、１．４７（６Ｈ，ｄ，Ｊ ７．５，ＣＨ［ＣＨ ３ ］２）、１．５３〜１．４２（２Ｈ，ｍ，ＣＨＣＨ ２ ＣＨ３）、１．７１〜１．６８（２Ｈ，ｍ，シクロブチルのＣＨ２）、１．８９〜１．８７（２Ｈ，ｍ，シクロブチルのＣＨ２）、２．３９〜２．３７（２Ｈ，ｍ，シクロブチルのＣＨ２）、３．８９（１Ｈ，ｄ，Ｊ ５，ＮＨシクロブチル））、４．５３〜４．５（３Ｈ，ｍ，ＣＨＭｅ２及びＣＨＥｔ及びシクロブチルのＣＨ）、５．６２（１Ｈ，ｍ，ＣＨＭｅＯＨ）、６．１５（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＮＨ）、７．４３（１Ｈ，ｓ，ＡｒＨ）；δＣ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）１６１．１６（Ｃ）、１５４．７６（Ｃ）、１５２．２（Ｃ）、１３４．４３（ＣＨ）、１１４．６７（Ｃ）、７１．７（ＣＨ）、５９．７４（ＣＨ）、４６．３６（ＣＨ）、３１．６８（ＣＨ２）、２５．２５（２×ＣＨ２）、２２．５９（ＣＨ３）、１７．１１（ＣＨ３）、１５．０４（ＣＨ２）、１１．６１（ＣＨ３）；ｍ／ｚ ３３３．３（Ｍ＋Ｈ）
（２−フルオロ−９Ｈ−プリン−６−イル）−ピリジン−４−イルメチルアミン
０℃で、アルゴン雰囲気下で、６−クロロ−２−フルオロプリン（１ｇ、５．８ｍｍｏｌ）の、ｎ−ＢｕＯＨ（５０ｍＬ）中の攪拌した溶液に、ジイソプロピルエチルアミン（３ｍｌ、１７．４ｍｍｏｌ）、その後に４−（アミノメチル）ピリジン（０．９ｍｌ、１．５当量、８．７ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物をこの温度で１時間攪拌し、次いで室温に戻させ、４時間攪拌し、そのとき、ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ；９０：１０）により、反応が完了していたことが示された。溶媒を真空で蒸発させ、残留物をシリカゲル上で勾配フラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ（１００：０→９０：１０）で溶出することによって、生成物を白色固体として得た；収量：０．８５ｇ（６０％）。融点２００〜２０２℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ，２５０ＭＨｚ）：δ４．６７（２Ｈ，ｄ，Ｊ ５，−ＨＮＣＨ ２ −Ｐｙｒ）、７．３４〜７．２８（２Ｈ，ｍ，Ｐｙｒ−Ｈ）、８．４８〜８．４２（２Ｈ，ｍ，Ｐｙｒ−Ｈ）、８．５４（１Ｈ，ｓ，−Ｎ＝ＣＨ−ＮＨ−）、８．８４（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，−ＨＮＣＨ２−Ｐｙｒ）、１３．１３（１Ｈ，ｓ，ｂ，−Ｎ＝ＣＨ−ＮＨ−）；ｍ／ｚ ２４５（［Ｍ＋Ｈ］＋
（２−フルオロ−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イル）ピリジン−４−イルメチルアミン
室温で、アルゴン雰囲気下で、（２−フルオロ−９Ｈ−プリン−６−イル）−ピリジン−４−イルメチル−アミン（０．６ｇ、２．４６ｍｍｏｌ）の、ＤＭＦ（１０ｍＬ）中の攪拌した溶液に、Ｋ２ＣＯ３（粉末、無水、１．７ｇ、５当量、１２．３ｍｍｏｌ）、その後に２−ブロモプロパン（２．３ｍｌ、１０当量、２４．６ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を室温で２４時間攪拌し、そのとき、ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ；９０：１０）により、反応が完了していたことが示された。溶媒を真空で蒸発させ、残留物を水（２００ｍｌ）とＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）の間で分配した。水相を分離し、さらなるＥｔＯＡｃ（２×５０ｍＬ）で抽出した。まとめた有機相をブライン（５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、真空で蒸発させ、残留物をシリカゲル上で勾配カラムクロマトグラフィーによって精製し、クロロホルム：メタノール（１００：０→９５：５）で溶出することによって、生成物を白色固体として得た；収量：０．４０ｇ（５７％）。融点１７０〜１７３℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ，２５０ＭＨｚ）：δ１．４９（６Ｈ，ｄ，Ｊ ７．５，−ＣＨ（ＣＨ ３ ）２）、４．６３（３Ｈ，ｍ，−ＣＨ（ＣＨ３）２＋−ＨＮＣＨ ２ −Ｐｙｒ）、７．３０，８．４７（４Ｈ，２×ｍ，，Ｐｙｒ−Ｈ）、８．２８（ｓ，１Ｈ，−Ｎ＝ＣＨ−Ｎ−）、８．９７（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，−ＨＮＣＨ２−Ｐｙｒ）。ｍ／ｚ：２８７（［Ｍ＋Ｈ］。
２Ｒ，３Ｓ−３−（９−イソプロピル−６−（ピリジン−４−イルメチルアミノ）−９Ｈ−プリン−２−イルアミノ）ペンタン−２−オール［９］
室温で、アルゴン雰囲気下で、（２−フルオロ−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イル）−ピリジン−４−イルメチル−アミン（３００ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ）の、ｎ−ＢｕＯＨ／ＤＭＳＯ（５ｍｌ、４：１）中の攪拌した溶液に、ＤＩＥＡ（２ｍｌ、１０当量、１０．５ｍｍｏｌ）、その後に（２Ｒ，３Ｓ）−３−アミノ−ペンタン−２−オール（６００ｍｇ、５．５当量、５．８ｍｍｏｌ）を添加した。フラスコに冷却管を装着し、この反応混合物を１４０℃で予熱した油浴中に置き、この温度で７２時間攪拌した。反応混合物を室温に冷却させ、溶媒を真空で蒸発させた。残留物をＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）と水（５０ｍｌ）の間で分配し、水相をさらなるＥｔＯＡｃ（２×２５ｍｌ）で抽出し、合わせた有機相をブライン（５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、真空で蒸発させた。残留物をシリカゲル上で勾配フラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ（１００：０→９５：５）で溶出することによって、生成物を無色の膜として得た。収量（２２５ｍｇ、５８％）。δＨ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）０．９２（３Ｈ，ｔ，Ｊ ７．５，ＣＨＣＨ２ＣＨ ３ ）、１．０５（３Ｈ，ｄ，Ｊ ７．５，ＣＨＣＨ ３ ＯＨ）、１．４（６Ｈ，ｄ，Ｊ ７．５，ＣＨ［ＣＨ３］２）、１．４７〜１．３６（２Ｈ，ｍ，ＣＨＣＨ ２ ＣＨ３）、３．８８〜３．８５（２Ｈ，ｍ，ＣＨＥｔ及びＮＨ）、４．５３〜４．５（１Ｈ，ｍ，ＣＨＣＨ３ＯＨ）、４．７２（２Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＮＨＣＨ ２ Ａｒ）、６．５（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＮＨ）、７．２（２Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＡｒＨ）、７．４５〜７．４２（１Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）、８．４６〜８．４３（２Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）；δＣ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）１５４．６６（Ｃ）、１４９．８６（２×ＣＨ）、１４９．６９（Ｃ）、１４８．２６（Ｃ）、１３４．８４（ＣＨ）、１２２．２２（２×ＣＨ）、７１．５１（ＣＨ）、５９．５７（ＣＨ）、４６．５８（ＣＨ）、４３．４５（ＣＨ２）、２４．９（ＣＨ２）、２２．５９（２×ＣＨ３）、１７．２７（ＣＨ３）、１１．５３（ＣＨ３）；ｍ／ｚ ３７０．２（Ｍ＋Ｈ）
２，６−ジメチルイソニコチノニトリル
攪拌した量の２，６−ルチジン−１−オキシド（１２．３ｇ、１００ｍｍｏｌ）に、反応混合物の温度が、添加の間中８０℃に維持されるような速度で、硫酸ジメチル（１２．６ｇ、１００ｍｍｏｌ）を徐々に添加した。添加が完了したとき（約１時間）、溶液をその温度でさらに２時間攪拌した。冷却すると塩が結晶化したので、無水アセトンから再結晶させ、白色角柱を得た。融点９６〜９７℃。収量１８ｇ（７３％）。窒素下で、この１−メトキシ−２，６−ジメチルピリジニウムメチルサルフェート（１１．６５ｇ、５０ｍｍｏｌ）の、水（５０ｍｌ）中に溶解した溶液に、５０ｍｌの水に溶解したシアン化カリウム（１０ｇ、１５０ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。この溶液を室温で２日間放置し、そのときに白色長針状晶として溶液から分離していたニトリルを濾過によって取り出し、２．８ｇの純粋な生成物を得た（４２％）。δＨ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）２．４４（６Ｈ，ｓ，２×ＣＨ３）、４．２（２Ｈ，ｄ，Ｊ ５，ＮＨＣＨ ２ ）、６．７８（２Ｈ，ｓ，ＡｒＨ）；δＣ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）１５７．８３（２×Ｃ）、、１２２．７１（Ｃ）、１１８．２（２×ＣＨ）、２４．２８（２×ＣＨ３）
ｔ−ブチル（２，６−ジメチルピリジン−４−イル）メチルカルバメート
２，６−ジメチルイソニコチノニトリル（２ｇ、１５．１５ｍｍｏｌ）を１０％酢酸／エタノール（３０ｍｌ）中に溶解させた。１０％の木炭上パラジウム触媒（０．５ｇ）を添加し、この反応物を水素雰囲気下で、６０℃で２４時間攪拌した。この混合物をセライトの詰め物を通して濾過し、揮発分を除去し、粗残留物をジクロロメタン（３０ｍｌ）中に溶解させた。次いで、攪拌した溶液に、トリエチルアミン（５ｍｌ）、その後にジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート（３．３ｇ、１５．１５ｍｍｏｌ）を添加した。３時間後に、溶媒を除去し、残留物を酢酸エチル中に溶解させた。これを水（５０ｍｌ）、飽和したビカーボネート（５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥し、蒸発させた。粗生成物をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン１：２）により精製することによって、０．６ｇの純粋な表題化合物を得た（１７．２４％の収率）。δＨ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）１．４２（９Ｈ，ｓ，３×ＣＨ３）、２．４４（６Ｈ，ｓ，２×ＣＨ３）、４．２（２Ｈ，ｄ，Ｊ ５，ＮＨＣＨ ２ ）、５．２５（１Ｈ，ｓ，ｂ，ＮＨ）、６．８１（２Ｈ，ｓ，ＡｒＨ）；δＣ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）１５７．８３（Ｃ）、１５６．０１（ＣＯ）、１４８．７１（Ｃ）、１１８．５８（２×ＣＨ）、７９．７７（Ｃ）、４３．４１（ＣＨ２）、２８．３４（３×ＣＨ３）、２４．２８（２×ＣＨ３）；ｍ／ｚ ２３７．２（Ｍ＋Ｈ）
Ｎ−（（２，６−ジメチルピリジン−４−イル）メチル）−２−フルオロ−９Ｈ−プリン−６−アミン
０℃で、アルゴン雰囲気下で、６−クロロ−２−フルオロプリン（０．４ｇ、２．９ｍｍｏｌ）の、ｎ−ＢｕＯＨ（５０ｍｌ）中の攪拌した溶液に、ＤＩＥＡ（２．５ｍｌ、１４．７ｍｍｏｌ）、その後に（２，６−ジメチルピリジン−４−イル）メタンアミン（０．５４ｇ，４ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物をこの温度で１時間攪拌し、次いで室温に戻し、４時間攪拌したが、依然として完了していないと見られたので、反応物を１００℃に加熱し、その温度で８時間放置した。溶媒を真空で蒸発させ、残留物をシリカゲル上で勾配フラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ（１００：０→９０：１０）で溶出することによって、生成物を白色固体として得た；収量：０．５ｇ（６３％）。δＨ ＣＤＣｌ３，２５０ＭＨｚ）２．４８（６Ｈ，ｓ，２×ＣＨ３）、３．６５〜３．５４（２Ｈ，ｍ，ＮＨＣＨ ２ ）、４．６１（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＮＨ）、７．３２（２Ｈ，ｓ，ＡｒＨ）、７．８４（１Ｈ，ｓ，ＡｒＨ）、）、９．０５（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＮＨ）；δＣ（ＣＤＣｌ３，２５０ＭＨｚ）１５９．２（Ｃ）、１５６．６２（Ｃ）、１５６．６１（Ｃ）、１５５．４６（Ｃ）、１４６．９２（ＣＨ）、１３６．３（Ｃ）、１２２．０５（２×ＣＨ）、１１９．４８（Ｃ）、４１．６（ＣＨ２）、１８．０６（２×ＣＨ３）
Ｎ−（（２，６−ジメチルピリジン−４−イル）メチル）−２−フルオロ−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−アミン
室温で、アルゴン雰囲気下で、２−フルオロ−Ｎ−（２，６−メチルピリジン−４−イル）メチル−９Ｈ−プリン−６−アミン（０．４ｇ、１．４８ｍｍｏｌ）の、ジメチルホルムアミド（１０ｍｌ）中の攪拌した溶液に、粉末化した無水Ｋ２ＣＯ３（１ｇ、５当量、７．４ｍｍｏｌ）、その後に２−ブロモプロパン（１．２ｍｌ、１２．２ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を室温で２４時間攪拌し、そのとき、ＤＣＭ：エーテル：ＭｅＯＨ（５５：４０：５）により、反応が完了していたことが示された。溶媒を真空で蒸発させ、残留物をＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）と水（５０ｍｌ）の間で分配した。水相をさらなるＥｔＯＡｃ（２×５０ｍｌ）で抽出し、合わせた有機相をブライン（５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、真空で蒸発させた。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ（９８：２）で溶出することによって、表題化合物を無色の膜として得た（２５０ｍｇ、５４％）。δＨ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）１．４６（６Ｈ，ｄ，Ｊ ７．５，ＣＨ［ＣＨ３］２）、２．３８（３Ｈ，ｓ，ＡｒＣＨ ３ ）、２．３９（３Ｈ，ｓ，ＡｒＣＨ ３ ）、４．７３〜４．６（３Ｈ，ｍ，ＮＨＣＨ ２ 及びＣＨＭｅ２）、６．８５（２Ｈ，ｓ，ＡｒＨ）、７．３５（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＮＨ）、７．５（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＡｒＨ）；δＣ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）１５７．８（Ｃ）、１５８．６（Ｃ）、１５４．３２（Ｃ）、１５１（Ｃ）、１４８．４２（ＣＨ）、１２２．２（２×ＣＨ）、１２１．０８（Ｃ）、４７．５２（ＣＨ）、４３．６（ＣＨ２）、２３．６８（２×ＣＨ３）、２２．３（２×ＣＨ３）；ｍ／ｚ ３１５．２（Ｍ＋Ｈ）
２Ｒ，３Ｓ−３−（９−イソプロピル−６−（２，６−ジメチルピリジン−４−イルメチルアミノ）−９Ｈ−プリン−２−イルアミノ）ペンタン−２−オール［１０］
室温で、アルゴン雰囲気下で、２−フルオロ−９−イソプロピル−Ｎ−（２，６−ジメチルピリジン−４−イルメチル）−９−Ｈ−プリン−６−アミン（２５０ｍｇ、０．８ｍｍｏｌ）の、ｎ−ＢｕＯＨ／ＤＭＳＯ（５ｍｌ、４：１）中の攪拌した溶液に、ＤＩＥＡ（１．４ｍｌ、１０当量、８ｍｍｏｌ）、その後に（２Ｒ，３Ｓ）−３−アミノ−ペンタン−２−オール（０．３５ｇ、３．４ｍｍｏｌ）を添加した。フラスコに冷却管を装着し、反応混合物を１４０℃で予熱した油浴中に置き、この温度で７２時間攪拌した。この反応混合物を室温に冷却させ、溶媒を真空で蒸発させた。残留物をＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）と水（５０ｍｌ）の間で分配し、水相をさらなるＥｔＯＡｃ（２×２５ｍｌ）で抽出し、合わせた有機相をブライン（５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、真空で蒸発させた。残留物をシリカゲル上で勾配フラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ（１００：０→９５：５）で溶出することによって、表題化合物を無色油状物として得た（５６ｍｇ、１８％）。δＨ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）０．９５（３Ｈ，ｔ，Ｊ ７．５，ＣＨＣＨ２ＣＨ ３ ）、１．０５（３Ｈ，ｄ，Ｊ ５，ＣＨＣＨ ３ ＯＨ）、１．４３（６Ｈ，ｄ，Ｊ １０，ＣＨ［ＣＨ ３ ］２）、１．５５〜１．４（２Ｈ，ｍ，ＣＨＣＨ ２ ＣＨ３）、２．４３（３Ｈ，ｓ，ＡｒＣＨ３）、２．４４（３Ｈ，ｓ，ＡｒＣＨ３）、３．９〜３．８（２Ｈ，ｍ，ＣＨＥｔ及びＣＨＭｅ２）、４．５７〜４．４６（１Ｈ，ｍ，ＣＨＣＨ３ＯＨ）、４．６３〜４．５８（２Ｈ，ｍ，ＮＨＣＨ ２ Ａｒ）、６．２８（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＮＨ）、６．８（２Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＡｒＨ）、７．４５（１Ｈ，ｓ，ＡｒＨ）；δＣ（ＣＤＣｌ３，２５０ＭＨｚ）１６０．０８（Ｃ）、１５７．７６（Ｃ）、１５５．３６（Ｃ）、１４８．９７（Ｃ）、１３５．３６（Ｃ）、１３４．７５（ＣＨ）、１１８．９５（２×ＣＨ）、７１．５２（ＣＨ）、５９．５９（ＣＨ）、４６．６５（ＣＨ）、４４．９２（ＣＨ２）、２４．９１（ＣＨ２）、２４．０１（２×ＣＨ３）、２２．５（２×ＣＨ３）、１７．２７（ＣＨ３）、１１．５１（ＣＨ３）；ｍ／ｚ ３９８．３（Ｍ＋Ｈ）
２−フルオロ−Ｎ−（（６−トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル）メチル）−９Ｈ−プリン−６−アミン
０℃で、アルゴン雰囲気下で、６−クロロ−２−フルオロプリン（３４４ｍｇ、２ｍｍｏｌ）及び［６−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル］メタンアミン（０．４ｇ、２．２７ｍｍｏｌ）の、ｎ−ＢｕＯＨ（５０ｍｌ）中の攪拌した溶液に、ＤＩＥＡ（２．５ｍｌ、１４．７ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物をこの温度で１時間攪拌し、次いで室温に戻し、４時間攪拌したが、依然として完了していないと見られたので、反応物を１００℃に加熱し、その温度で５時間放置した。溶媒を真空で蒸発させ、残留物をシリカゲル上で勾配カラムクロマトグラフィーによって精製し、ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ（１００：０→９０：１０）で溶出することによって、生成物を白色固体として得た；収量：０．４６ｇ（７５％）。δＨ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）３．６２〜３．５７（２Ｈ，ｍ，ＮＨＣＨ ２ ）、４．６９（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＮＨ）、７．２〜７．１（２Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＡｒＨ及びＮＨ）、７．６９（１Ｈ，ｄ，Ｊ，７．５，ＡｒＨ）、８．２７（１Ｈ，ｓ，ＡｒＨ）、８．７１（１Ｈ，ｓ，ＡｒＨ）；δＣ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）１５８．６９（Ｃ）、１５８．１８（Ｃ）、１５７．６７（Ｃ）、１５４．５６（Ｃ）、１４７．４８（ＣＨ）、１４６．９９（ＣＨ）、１４４．３２（Ｃ）、１３３．８７（ＣＨ）、１２１．６７（ＣＨ）、１１８．８８（Ｃ）、４３．４８（ＣＨ２）。；ｍ／ｚ ３１３．１（Ｍ＋Ｈ）
２−フルオロ−９−イソプロピル−Ｎ−（（６−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル）メチル）−９Ｈ−プリン−６−アミン
室温で、アルゴン雰囲気下で、２−フルオロ−Ｎ−［（６−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル）メチル−９Ｈ−プリン−６−アミン（０．４ｇ、１．２７ｍｍｏｌ）の、ジメチルホルムアミド（１０ｍｌ）中の攪拌した溶液に、粉末化した無水Ｋ２ＣＯ３（０．８６ｇ、５当量、６．５４ｍｍｏｌ）、その後に２−ブロモプロパン（１ｍｌ、１０．３ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を室温で２４時間攪拌し、そのとき、ＤＣＭ：エーテル：ＭｅＯＨ（５５：４０：５）により、反応が完了していたことが示された。溶媒を真空で蒸発させ、残留物をＥｔＯＡｃ（１００ｍｌ）と水（１００ｍｌ）の間で分配した。水相をさらなるＥｔＯＡｃ（２×５０ｍｌ）で抽出し、合わせた有機相をブライン（５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、真空で蒸発させた。残留物をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ（９８：２）で溶出することによって、表題化合物を無色の膜として得た（３５０ｍｇ、７７％）。δＨ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）１．５（６Ｈ，ｄ，Ｊ ７．５，ＣＨ［ＣＨ３］２）、４．７〜４．６（３Ｈ，ｍ，ＮＨＣＨ ２ 及びＣＨＭｅ２）、７．１６（１Ｈ，ｄ，Ｊ ２．５，ＡｒＨ）、７．２５（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＮＨ）、７．６６（２Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＡｒＨ）、８．６７（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＡｒＨ）、；δＣ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）１５８．８（Ｃ）、１５６．７２（Ｃ）、１５６．３（Ｃ）、１４７．４２（ＣＨ）、１３７．９２（ＣＨ）、１３８．０８（ＣＨ）、１３１．７３（Ｃ）、１２３．３１（ＣＨ）、１１９．２５（Ｃ）、４８．３８（ＣＨ）、４４．１（ＣＨ２）、２２．７２（２×ＣＨ３）；ｍ／ｚ ３５５．１（Ｍ＋Ｈ）
２Ｒ，３Ｓ−３−（９−イソプロピル−６−（（６−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル）メチルアミノ）−９Ｈ−プリン−２イルアミノ）ペンタン−２−オール［１１］
室温で、アルゴン雰囲気下で、２−フルオロ−９−イソプロピル−Ｎ−（６−（トリフルオロメチルピリジン−３−イルメチル）−９−Ｈ−プリン−６−アミン（２００ｍｇ、０．５６ｍｍｏｌ）の、ｎ−ＢｕＯＨ／ＤＭＳＯ（５ｍｌ、４：１）中の攪拌した溶液に、ＤＩＥＡ（１．４ｍｌ、１０当量、８ｍｍｏｌ）、その後に（２Ｒ，３Ｓ）−３−アミノ−ペンタン−２−オール（０．２５ｇ、２．４ｍｍｏｌ）を添加した。フラスコに冷却管を装着し、反応混合物を１４０℃で予熱した油浴中に置き、この温度で７２時間攪拌した。この反応混合物を室温に冷却させ、溶媒を真空で蒸発させた。残留物をＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）と水（５０ｍｌ）の間で分配し、水相をさらなるＥｔＯＡｃ（２×２５ｍｌ）で抽出し、合わせた有機相をブライン（５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、真空で蒸発させた。残留物をシリカゲル上で勾配フラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ（１００：０→９５：５）で溶出することによって、表題化合物を無色油状物として得た。（３０ｍｇ、１２％）。δＨ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）０．８５（３Ｈ，ｔ，Ｊ ７．５，ＣＨＣＨ２ＣＨ ３ ）、１．１２（３Ｈ，ｄ，Ｊ ５，ＣＨＣＨ ３ ＯＨ）、１．５２（６Ｈ，ｄ，Ｊ ７．５，ＣＨ［ＣＨ ３ ］２）、１．６１〜１．４１（２Ｈ，ｍ，ＣＨＣＨ ２ ＣＨ３）、３．８２（１Ｈ，ｍ，ＣＨＭｅ２）、４．７５〜４．５７（１Ｈ，ｍ，ＣＨＣＨ３ＯＨ）、４．８２〜４．６４（２Ｈ，ｍ，ＮＨＣＨ ２ Ａｒ）、５．８（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＮＨ）、６．８５（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＮＨ）、７（１Ｈ，ｄ，Ｊ １０，ＡｒＨ）、７．３１〜７．２３（２Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）、８．４５（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，，ＡｒＨ）；δＣ（ＣＤＣｌ３，２５０ＭＨｚ）１５８．６１（Ｃ）、１５７．３５（Ｃ）、１５６．９７（Ｃ）、１４７．６２（ＣＨ）、１３７．４３（ＣＨ）、１２９．２２（Ｃ）、１２８．７２（Ｃ）、１２８．９２（ＣＨ）、１２３１．１４（ＣＨ）、１１８．３２（Ｃ）、６９．６４（ＣＨ）、６０．９１（ＣＨ２）、５７．６８（ＣＨ）、２３．５５（ＣＨ２）、２２．５３（２×ＣＨ３）、１２．１２（ＣＨ３）；ｍ／ｚ ４３８．３（Ｍ＋Ｈ）
２−フルオロ−Ｎ−（（６−メチルピリジン−２−イル）メチル）−９Ｈ−プリン−６−アミン
０℃で、アルゴン雰囲気下で、６−クロロ−２−フルオロプリン（０．４ｇ、２．３ｍｍｏｌ）の、ｎ−ＢｕＯＨ（５０ｍｌ）中の攪拌した溶液に、ＤＩＥＡ（２．５ｍｌ、１４．７ｍｍｏｌ）、その後に（６−メチルピリジン−２−イル）メタンアミン（０．３６ｇ、２．９５ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物をこの温度で１時間攪拌し、次いで室温に戻し、４時間攪拌したが、依然として完了していないと見られたので、反応物を１００℃に加熱し、その温度で８時間放置した。溶媒を真空で蒸発させ、残留物をシリカゲル上で勾配フラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ（１００：０→９０：１０）で溶出することによって、生成物を白色固体として得た；収量：０．３５ｇ（６０％）。δＨ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）２．４４（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３）、４．８３〜４．５４（３Ｈ，ｍ，ＮＨ及びＮＨＣＨ２）、７．１〜７．０５（２Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）、７．６１〜７．５５（１Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）、８．１３〜８．０９（１Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）、８．６１（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＮＨ）；δＣ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）１５９．４１（Ｃ）、１５８．７８（Ｃ）、１５８．５３（Ｃ）、１５７．１９（Ｃ）、１５５．３８（Ｃ）、１４７．６９（ＣＨ）、１３７．０３（Ｃ）、１３６．９３（ＣＨ）、１２１．３４（ＣＨ）、１１７．７６（ＣＨ）、１１７．３１（Ｃ）、４６．４７（ＣＨ２）、２３．９（ＣＨ３）；ｍ／ｚ ２５９．２（Ｍ＋Ｈ）
２−フルオロ−９−イソプロピル−Ｎ−（（６−メチルピリジン−２−イル）メチル）−９Ｈ−プリン−６−アミン
室温で、アルゴン雰囲気下で、２−フルオロ−Ｎ−（６−メチルピリジン−２−イル）メチル−９Ｈ−プリン−６−アミン（０．３ｇ、１．１７ｍｍｏｌ）の、ジメチルホルムアミド（１０ｍｌ）中の攪拌した溶液に、粉末化した無水Ｋ２ＣＯ３（０．８ｇ、５当量、５．８５ｍｍｏｌ）、その後に２−ブロモプロパン（１．１５ｍｌ、１１．７ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を室温で２４時間攪拌し、そのとき、ＤＣＭ：エーテル：ＭｅＯＨ（５５：４０：５）により、反応が完了していたことが示された。溶媒を真空で蒸発させ、残留物をＥｔＯＡｃ（１００ｍｌ）と水（１００ｍｌ）の間で分配した。水相をさらなるＥｔＯＡｃ（２×５０ｍｌ）で抽出し、合わせた有機相をブライン（５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、真空で蒸発させた。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ（９８：２）で溶出することによって、表題化合物をわずかに黄色の膜として得た（１８０ｍｇ、５１％）。δＨ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）１．６（６Ｈ，ｄ，Ｊ ７．５，ＣＨ［ＣＨ３］２）、２．５４（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３）、４．８６〜４．７３（３Ｈ，ｍ，ＮＨＣＨ ２ 及びＣＨＭｅ２）、７．０６（１Ｈ，ｄ，Ｊ １０，ＡｒＨ）、７．１４（１Ｈ，ｄ，Ｊ １０，ＡｒＨ）、７．５３（１Ｈ，ｔ，Ｊ １０，ＡｒＨ）、７．８（１Ｈ，ｓ，ＡｒＨ）；δＣ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）１５８．４２（Ｃ）、１５８．０４（Ｃ）、１５６．１６（Ｃ）、１５６（Ｃ）、１５５．４９（Ｃ）、１５０．１２（Ｃ）、１３７．６７（ＣＨ）、１３６．９３（ＣＨ）、１２１．８９（ＣＨ）、１１８．１（Ｃ）、１１８．５３（ＣＨ）、４７．１５（ＣＨ）、４５．５２（ＣＨ２）、２４．３８（ＣＨ３）、２２．５８（２×ＣＨ３）；ｍ／ｚ ３０１．２（Ｍ＋Ｈ）；１９Ｆ ＮＭＲ δ−５０．２２
２Ｒ，３Ｓ−３−（９−イソプロピル−６−（（６−メチルピリジン−２−イル）メチルアミノ）−９Ｈ−プリン−２−イルアミノ）ペンタン−２−オール［１２］
室温で、アルゴン雰囲気下で、２−フルオロ−９−イソプロピル−Ｎ−（６−メチルピリジン−２−イルメチル）−９−Ｈ−プリン−６−アミン（１８０ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ）の、ｎ−ＢｕＯＨ／ＤＭＳＯ（５ｍＬ、４：１）中の攪拌した溶液に、ＤＩＥＡ（１ｍｌ、１０当量、５．６ｍｍｏｌ）、その後に（２Ｒ，３Ｓ）−３−アミノ−ペンタン−２−オール（０．３４ｇ、６ｍｍｏｌ）を添加した。フラスコに冷却管を装着し、反応混合物を１４０℃で予熱した油浴中に置き、この温度で７２時間攪拌した。この反応混合物を室温に冷却させ、溶媒を真空で蒸発させた。残留物をＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）と水（５０ｍｌ）の間で分配し、水相をさらなるＥｔＯＡｃ（２×２５ｍｌ）で抽出し、合わせた有機相をブライン（５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、真空で蒸発させた。残留物をシリカゲル上で勾配フラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ（１００：０→９５：５）で溶出することによって、表題化合物をわずかな黄色の油状物として得た（２８ｍｇ、１３％）。δＨ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）１．０５（３Ｈ，ｔ，Ｊ ７．５，ＣＨＣＨ２ＣＨ ３ ）、１．１３（３Ｈ，ｄ，Ｊ ５，ＣＨＣＨ ３ ＯＨ）、１．４３（６Ｈ，ｄ，Ｊ ７．５，ＣＨ［ＣＨ ３ ］２）、１．６〜１．４（２Ｈ，ｍ，ＣＨＣＨ２ＣＨ３）、１．７５（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＮＨ）、２．３２（３Ｈ，ｓ，ＡｒＣＨ３）、３．９５（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＣＨＭｅ２）、４．５７〜４．５３（１Ｈ，ｍ，ＣＨＣＨ３ＯＨ）、４．８〜４．６（２Ｈ，ｍ，ＮＨＣＨ ２ Ａｒ）、５．８（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＮＨ）、６．８２（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＮＨ）、６．９５（１Ｈ，ｄ，Ｊ ５，ＡｒＨ）、７．０５（１Ｈ，ｄ，Ｊ ５，ＡｒＨ）、７．４５〜７．４（２Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）；δＣ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）１６０．１７（Ｃ）、１５７．９（Ｃ）、１５６．７２（Ｃ）、１５４．８（Ｃ）、１５０．１２（Ｃ）、１３６．８（ＣＨ）、１３４．５５（ＣＨ）、１２１．６４（ＣＨ）、１１８．５８（ＣＨ）、１１４．８７（Ｃ）、７１．５９（ＣＨ）、５９．６６（ＣＨ）、４６．４１（ＣＨ）、４４．７９（ＣＨ２）、２４．１２（ＣＨ２）、２３．４１（ＣＨ３）、２１．５９（ＣＨ３）、１６．１８（ＣＨ３）、１０．６（ＣＨ３）；ｍ／ｚ ３８４．３（Ｍ＋Ｈ）
２−フルオロ−Ｎ−（（３−メチルピリジン−２−イル）メチル）−９Ｈ−プリン−６−アミン
０℃で、アルゴン雰囲気下で、６−クロロ−２−フルオロプリン（０．４ｇ，２．３ｍｍｏｌ）の、ｎ−ＢｕＯＨ（５０ｍｌ）中の攪拌した溶液に、ＤＩＥＡ（２．５ｍｌ、１４．７ｍｍｏｌ）、その後に（３−メチルピリジン−２−イル）メタンアミン（０．３６ｇ、２．９５ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物をこの温度で１時間攪拌し、次いで室温に戻し、４時間攪拌したが、依然として完了していないと見られたので、反応物を１００℃に加熱し、その温度で８時間放置した。溶媒を真空で蒸発させ、残留物をシリカゲル上で勾配カラムクロマトグラフィーによって精製し、ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ（１００：０→９０：１０）で溶出することによって、生成物を白色固体として得た；収量：０．３ｇ（５１％）。δＨ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）２．３５（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３）、４．７１（３Ｈ，ｍ，ＮＨ及びＮＨＣＨ２）、７．２４（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＡｒＨ）、７．６３（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＡｒＨ）、８．２８（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＡｒＨ）、８．３８（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＡｒＨ）；δＣ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）１６１．０３（Ｃ）、１５８．４９（Ｃ）、１５４．７７（Ｃ）、１５２．１６（Ｃ）、１４４．８６（ＣＨ）、１３７．５３（ＣＨ）、１３７．１４（ＣＨ）、１３０．６７（Ｃ）、１２１．５８（ＣＨ）、１１８．７３（Ｃ）、４２．８７（ＣＨ２）、１８．１６（ＣＨ３）；ｍ／ｚ ２５９．３（Ｍ＋Ｈ）
２−フルオロ−９−イソプロピル−Ｎ−（（３−メチルピリジン−２−イル）メチル）−９Ｈ−プリン−６−アミン
室温で、アルゴン雰囲気下で、２−フルオロ−Ｎ−（３−メチルピリジン−２−イル）メチル−９Ｈ−プリン−６−アミン（０．３ｇ、１．１７ｍｍｏｌ）の、ジメチルホルムアミド（１０ｍｌ）中の攪拌した溶液に、粉末化した無水Ｋ２ＣＯ３（０．８ｇ、５当量、５．８５ｍｍｏｌ）、その後に２−ブロモプロパン（１．１５ｍｌ、１１．７ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を室温で２４時間攪拌し、そのとき、ＤＣＭ：エーテル：ＭｅＯＨ（５５：４０：５）により、反応が完了していたことが示された。溶媒を真空で蒸発させ、残留物をＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）と水（５０ｍｌ）の間で分配した。水相をさらなるＥｔＯＡｃ（２×５０ｍｌ）で抽出し、合わせた有機相をブライン（５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、真空で蒸発させた。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ（９８：２）で溶出することによって、表題化合物をわずかに黄色の膜として得た（１７０ｍｇ、４８％）。δＨ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）１．５１（６Ｈ，ｄ，Ｊ ７．５，ＣＨ［ＣＨ３］２）、２．２８（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３）、４．６８〜４．６５（３Ｈ，ｍ，ＮＨＣＨ ２ 及びＣＨＭｅ２）、７．０８〜７．０５（１Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）、７．４（１Ｈ，ｄ，Ｊ ５，ＡｒＨ）、７．７２（１Ｈ，ｓ，ＡｒＨ）、７．９３（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＮＨ）、８．３４（１Ｈ，ｄ，Ｊ ５，ＡｒＨ）；δＣ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）１６０．０９（Ｃ）、１５８．４３（Ｃ）、１５５．９７（Ｃ）、１５４．０６（Ｃ）、１４５．８５（ＣＨ）、１３７．７３（ＣＨ）、１３７．５４（ＣＨ）、１３０．６７（Ｃ）、１２２．２８（ＣＨ）、１１８．７３（Ｃ）、４７．２８（ＣＨ）、４２．８７（ＣＨ２）、２２．４３（２×ＣＨ３）、１７．６６（ＣＨ３）；１９Ｆ ＮＭＲ δ−５０．２０；ｍ／ｚ ３０１．２（Ｍ＋Ｈ）
２Ｒ，３Ｓ−３−（９−イソプロピル−６−（（３−メチルピリジン−２−イル）メチルアミノ）−９Ｈ−プリン−２−イルアミノ）ペンタン−２−オール［１３］
室温で、アルゴン雰囲気下で、２−フルオロ−９−イソプロピル−Ｎ−（３−メチルピリジン−２−イルメチル）−９−Ｈ−プリン−６−アミン（１７０ｍｇ、０．５６ｍｍｏｌ）の、ｎ−ＢｕＯＨ／ＤＭＳＯ（５ｍｌ、４：１）中の攪拌した溶液に、ＤＩＥＡ（１ｍｌ、１０当量、５．６ｍｍｏｌ）、その後に（２Ｒ，３Ｓ）−３−アミノ−ペンタン−２−オール（０．３４ｇ、６ｍｍｏｌ）を添加した。フラスコに冷却管を装着し、反応混合物を１４０℃で予熱した油浴中に置き、この温度で７２時間攪拌した。この反応混合物を室温に冷却させ、溶媒を真空で蒸発させた。残留物をＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）と水（５０ｍｌ）の間で分配し、水相をさらなるＥｔＯＡｃ（２×２５ｍｌ）で抽出し、合わせた有機相をブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、真空で蒸発させた。残留物をシリカゲル上で勾配フラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ（１００：０→９５：５）で溶出することによって、表題化合物をわずかな黄色の油状物として得た（２８ｍｇ、１３％）。δＨ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）１（３Ｈ，ｔ，Ｊ ７．５，ＣＨＣＨ２ＣＨ ３ ）、１．１（３Ｈ，ｄ，Ｊ ５，ＣＨＣＨ ３ ＯＨ）、１．４４（６Ｈ，ｄ，Ｊ ７．５，ＣＨ［ＣＨ ３ ］２）、１．６〜１．４（２Ｈ，ｍ，ＣＨＣＨ２ＣＨ３）、１．７５（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＮＨ）、２．３（３Ｈ，ｓ，ＡｒＣＨ３）、３．９２（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＣＨＭｅ２）、４．５６〜４．５２（１Ｈ，ｍ，ＣＨＣＨ３ＯＨ）、４．７（２Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＮＨＣＨ２Ａｒ）、６．１（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＮＨ）、７．０６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ ２．５，５，ＡｒＨ）、７．４１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ ２．５，５，ＡｒＨ）、７．４７（１Ｈ，ｓ，ＡｒＨ）、８．３７（１Ｈ，ｄ，Ｊ ５，ＡｒＨ）；δＣ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）１６０．２１（Ｃ）、１５４．６８（Ｃ）、１５３．６５（Ｃ）、１４６．０７（ＣＨ）、１３７．５３（ＣＨ）、１３４．５３（ＣＨ）、１３０．５９（Ｃ）、１２２．３１（Ｃ）、１２２．１３（ＣＨ）、１１５．１４（Ｃ）、７１．７３（ＣＨ）、５９．９３（ＣＨ）、４６．４３（ＣＨ）、４３．１１（ＣＨ２）、２５．３３（ＣＨ２）、２２．６３（ＣＨ３）、１７．６１（ＣＨ３）、１７．２５（ＣＨ３）、１１．６７（ＣＨ３）；ｍ／ｚ ３８４．３（Ｍ＋Ｈ）
（Ｒ）−１−（９−イソプロピル−６−（ピリジン−３−イルメチルアミノ）−９Ｈ−プリン−２−イルアミノ）プロパン−２−オール［１４］
室温で、アルゴン雰囲気下で、２−フルオロ−９−イソプロピル−６−［（ピリジン−３−イルメチル）−アミノ］プリン（３００ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ）の、ｎ−ＢｕＯＨ／ＤＭＳＯ（５ｍｌ、４：１）中の攪拌した溶液に、ＤＩＥＡ（２ｍｌ、１０当量、１０．５ｍｍｏｌ）、その後に（Ｒ）−１−アミノプロパン−２−オール（３９５ｍｇ、５．２５ｍｍｏｌ）を添加した。フラスコに冷却管を装着し、反応混合物を１４０℃で予熱した油浴中に置き、この温度で７２時間攪拌した。この反応混合物を室温に冷却させ、溶媒を真空で蒸発させた。残留物を酢酸エチル（５０ｍＬ）と水（５０ｍＬ）の間で分配し、水相をさらなる酢酸エチル（２×２５ｍＬ）で抽出し、合わせた有機相をブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、真空で蒸発させた。残留物をシリカゲル上で勾配フラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ（１００：０→９５：５）で溶出することによって、純粋な生成物を無色油状物として得た（３８ｍｇ、１０．６％）。δＨ（２５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）１．１５（３Ｈ，ｄ，Ｊ ７．５，ＣＨＣＨ ３ ＯＨ）、１．４５（６Ｈ，ｄ，Ｊ ７．５，ＣＨ［ＣＨ ３ ］２）、３．３〜３．２（１Ｈ，ｍ，ＮＨＣＨＨＣＨＭｅＯＨ））、３．４５〜３．３６（１Ｈ，ｍ，ＮＨＣＨＨＣＨＭｅＯＨ）、３．９６〜３．９（１Ｈ，ｍ，ＣＨＭｅ２）、４．５８〜４．４７（１Ｈ，ｍ，ＣＨＭｅＯＨ）、４．６９（２Ｈ，ｄ，Ｊ ５，ＮＨＣＨ ２ Ａｒ）、５．２３（１Ｈ，ｔ，Ｊ ５，ＮＨＣＨ２ＣＨＭｅＯＨ）、６．３２（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＮＨＣＨ２Ａｒ）、７．１６〜７．１１（１Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）、７．４（１Ｈ，ｓ，ＡｒＨ）、７．６（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．５，ＡｒＨ）、８．４（１Ｈ．ｄ，Ｊ ２．５，ＡｒＨ）、８．５５（１Ｈ，ｓ，ＡｒＨ）；δＣ（２５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）１６０．０７（Ｃ）、１５４．９５（Ｃ）、１５４．７（Ｃ）、１５１．１（Ｃ）、１４９．２７（ＣＨ）、１４８．５４（ＣＨ）、１３５．３（ＣＨ）、１３４．７３（ＣＨ）、１２３．３９（ＣＨ）、１１４．６１（Ｃ）、６８．８３（ＣＨ）、５０．０９（ＣＨ２）、４６．４９（ＣＨ）、４１．９５（ＣＨ２）、２２．４９（２×ＣＨ３）、２０．８５（ＣＨ３）。；ｍ／ｚ ３４２．２（Ｍ＋Ｈ）
１，１，１−トリフルオロ−３−（９−イソプロピル−６−（ピリジン−３−イルメチルアミノ）−９Ｈ−プリン−２−イルアミノ）プロパン−２−オール［１５］
室温で、アルゴン雰囲気下で、（２−フルオロ−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イル）−ピリジン−３−イルメチル−アミン（３００ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ）の、ｎ−ＢｕＯＨ／ＤＭＳＯ（５ｍｌ、４：１）中の攪拌した溶液に、ＤＩＥＡ（１．４ｍｌ、１０当量、８ｍｍｏｌ）、その後に３−アミノ−１，１，１−トリフルオロプロパン−２−オール（１ｇ、７．８ｍｍｏｌ）［アンモニアと２−（トリフルオロメチル）オキシランを反応させて調製した］を添加した。フラスコに冷却管を装着し、反応混合物を１４０℃で予熱した油浴中に置き、この温度で７２時間攪拌した。この反応混合物を室温に冷却させ、溶媒を真空で蒸発させた。残留物をＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）と水（５０ｍｌ）の間で分配し、水相をさらなるＥｔＯＡｃ（２×２５ｍｌ）で抽出し、合わせた有機相をブライン（５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、真空で蒸発させた。残留物をシリカゲル上で勾配フラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ（１００：０→９５：５）で溶出することによって、表題化合物を無色油状物として得た（６２ｍｇ、１５％）。δＨ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）１．５３（６Ｈ，ｄ，Ｊ ７．５，ＣＨ［ＣＨ ３ ］２）、３．６４〜３．６（１Ｈ，ｍ，ＮＨＣＨＨＣＯＨ［ＣＦ３］［ＣＨ３）、３．７６〜３．７３（１Ｈ，ｍ，ＮＨＣＨＨＣＯＨ［ＣＦ３］［ＣＨ３）、４．１８〜４．１６（１Ｈ，ｍ，ＣＨＭｅ２）、４．６２〜４．５６（１Ｈ，ｍ，ＣＨＯＨＣＦ３）、４．７２（３Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＮＨＣＨ ２ Ａｒ及びＮＨＣＨ２Ａｒ）、７．２２〜７．２（１Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）、７．５２（１Ｈ，ｓ，ＡｒＨ）、７．６６（１Ｈ，ｄ，Ｊ １０，ＡｒＨ）、８．４７（１Ｈ，ｄ，Ｊ ５，ＡｒＨ）、８．５８（１Ｈ，ｓ，ＡｒＨ）；δＣ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）１５９．７７（Ｃ）、１５４．６８（Ｃ）、１４９．０４（ＣＨ）、１４８．４５（ＣＨ）、１３５．４４（ＣＨ）、１３５．０３（ＣＨ）、１３４．４４（Ｃ）、１２５．９１（Ｃ）、１２３．４９（ＣＨ）、１１４．７８（Ｃ）、７１．５７（ＣＨ）、４６．７６（ＣＨ）、４２．９４（ＣＨ２）、３２．２（ＣＨ２）、２２．４７（２×ＣＨ３）１９ＦＮＭＲ δ−７８．４８；ｍ／ｚ ３９６．２（Ｍ＋Ｈ）
１，１，１−トリフルオロ−３−ニトロペンタン−２−オール
１−ニトロプロパン（３．２５ｇ、３６．６ｍｍｏｌ）、トリフルオロアセトアルデヒドエチルヘミアセタール（５．８５ｇ、３６．６ｍｍｏｌ、９０％の純度）及び粉末化したＫ２ＣＯ３（０．３４ｇ、２．５ｍｍｏｌ）を混合し、６０℃で３時間、次いで室温で３日間攪拌した。ブライン（１０ｍｌ）及び１ＮのＨＣｌ（１０ｍｌ）水溶液を添加し、下の有機層を分離した。水層をエーテル（２×３０ｍｌ）で抽出し、合わせた有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、真空下で濃縮した。残留物をシリカゲル上でフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、ＣＨ２Ｃｌ２：ヘキサン（５０：５０）、ＣＨ２Ｃｌ２：ヘキサン（７５：２５）、ＣＨ２Ｃｌ２（１００％）及びＭｅＯＨ：ＣＨ２Ｃｌ２（５：９５）で勾配溶出することによって、生成物をワックス状白色固体として得た（４．４ｇ、６４％）。δＨ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）１．０４〜１．００（３Ｈ，ｍ，ＣＨＣＨ２ＣＨ ３ ）、２．１６〜１．９９（２Ｈ，ｍ，ＣＨＣＨ ２ ＣＨ３）、４．３７（１Ｈ，ｓ，ｂ，ＯＨ）、４．７１〜４．５９（２Ｈ，ｍ，２×ＣＨ）；δＣ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）ｄｑ（１２６．７９，１２６．７０；１２４．５５，１２４．４６；１２２．３０，１２２．２１；１２０．０６，１１９．９６，ＣＦ３）、２つのピーク（８８．３４，８７．６０ ＣＨ ＮＯ２）、８つのピーク（７１．１３，７０．８７，７０．８１，７０．６２，７０．５６，７０．３６，７０．３０，７０．０５ ＣＨＯＨ）、２つのピーク（２３．５７及び２１．９８ ＣＨ２）、２つのピーク（９．７７及び９．６６ ＣＨ３）；７１．５（ＣＨ）、５４．０３（ＣＨ）、２５．５（ＣＨ２）、１１．０５（ＣＨ３）。１９Ｆ ＮＭＲ δ−７６．２及び−７７．５
３−アミノ−１，１，１−トリフルオロペンタン−２−オール
１，１，１−トリフルオロ−３−ニトロペンタン−２−オール（３ｇ、１６ｍｍｏｌ）をメタノール（４０ｍｌ）中に溶解させた。ラネーニッケル触媒を添加し、反応物を水素雰囲気下で２４時間、勢いよく攪拌した。触媒を濾過し、濾液を真空で濃縮することによって、比較的純粋なアミンを得た（２．３５ｇ、９４％）。δＨ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）１．０５（３Ｈ，ｔ，Ｊ ５，ＣＨＣＨ２ＣＨ ３ ）、１．５５〜１．４５（１Ｈ，ｍ，ＣＨＣＨＨＣＨ３）、１．８〜１．７（１Ｈ，ｍ，ＣＨＣＨＨＣＨ３）、２．９５〜２．９（１Ｈ，ｍ，ＣＨＥｔ）、３．９５〜３．８５（１Ｈ，ｍ，ＣＨＯＨＣＦ３）；δＣ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）１２４．５（Ｃ）、７１．５（ＣＨ）、５４．０３（ＣＨ）、２５．５（ＣＨ２）、１１．０５（ＣＨ３）
１，１，１−トリフルオロ−３−（９−イソプロピル−６−（ピリジン−３−イルメチルアミノ）−９Ｈ−プリン−２−イルアミノ）ペンタン−２−オール［１６］
室温で、アルゴン雰囲気下で、（２−フルオロ−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イル）−ピリジン−３−イルメチル−アミン（３００ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ）の、ｎ−ＢｕＯＨ／ＤＭＳＯ（５ｍＬ、４：１）中の攪拌した溶液に、ＤＩＥＡ（１．４ｍｌ、１０当量、８ｍｍｏｌ）、その後に３−アミノ−１，１，１−トリフルオロペンタン−２−オール（１ｇ、６．４ｍｍｏｌ）を添加した。フラスコに冷却管を装着し、反応混合物を１４０℃で予熱した油浴中に置き、この温度で７２時間攪拌した。反応混合物を室温に冷却させ、溶媒を真空で蒸発させた。残留物をＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）と水（５０ｍｌ）の間で分配し、水相をさらなるＥｔＯＡｃ（２×２５ｍｌ）で抽出し、合わせた有機相をブライン（５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、真空で蒸発させた。残留物をシリカゲル上で勾配フラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ（１００：０→９５：５）で溶出することによって、表題化合物を無色の膜として得た（４２ｍｇ、９．４％）。δＨ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）１．０４（３Ｈ，ｔ，Ｊ ７．５，ＣＨＣＨ２ＣＨ ３ ）１．５６（６Ｈ，ｄ，Ｊ ７．５，ＣＨ［ＣＨ ３ ］２）、１．８〜１．７３（２Ｈ，ｍ，ＣＨＣＨ ２ ＣＨ３）、４．１３〜４．０７（１Ｈ，ｍ，ＣＨＭｅ２）、４．２２〜４．２（１Ｈ，ｍ，ＣＨＥｔ）４．５７〜４．５５（１Ｈ，ｍ，ＣＨＯＨＣＦ３）、４．７１（２Ｈ，ｓ，ｂ，ＮＨＣＨ ２ Ａｒ）、５．０８（１Ｈ，ｓ，ｂ，ＮＨ）、７．２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ ５，１０ ＡｒＨ）、７．５１（１Ｈ，ｓ，ＡｒＨ）、７．６４（１Ｈ，ｄ，Ｊ １０，ＡｒＨ）、８．４６（１Ｈ，ｄ，Ｊ ５，ＡｒＨ）、８．５５（１Ｈ，ｓ，ＡｒＨ）；δＣ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）１５９．２８（Ｃ）、１５４．７２（Ｃ）、１４９．０７（ＣＨ）、１４８．４７（ＣＨ）、１３５．４４（ＣＨ）、１３４．８３（Ｃ）、１３４．４８（ＣＨ）、１２４．１２（Ｃ）、１２３．４４（ＣＨ）、１１４．６２（Ｃ）、７３．１（ＣＨ）、５５．８８（ＣＨ）、４６．７０（ＣＨ）、４１．７８（ＣＨ２）、２３．６８（ＣＨ２）２２．３６（２×ＣＨ３）、１１．５５（ＣＨ３）；１９ＦＮＭＲ δ−７４．８３；ｍ／ｚ ４２４．２（Ｍ＋Ｈ）
１，１，１−トリフルオロ−３−（９−イソプロピル−６−（（６−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル）メチルアミノ）−９Ｈ−２−イルアミノ）ペンタン−２−オール［１７］
室温で、アルゴン雰囲気下で、２−フルオロ−９−イソプロピル−Ｎ−（６−（トリフルオロメチルピリジン−３−イルメチル）−９−Ｈ−プリン−６−アミン（２００ｍｇ、０．５６ｍｍｏｌ）の、ｎ−ＢｕＯＨ／ＤＭＳＯ（５ｍｌ、４：１）中の攪拌した溶液に、ＤＩＥＡ（１．４ｍｌ、１０当量、８ｍｍｏｌ）、その後に３−アミノ−１，１，１−トリフルオロペンタン−２−オール（０．３７７ｇ、２．４ｍｍｏｌ）を添加した。フラスコに冷却管を装着し、反応混合物を１４０℃で予熱した油浴中に置き、この温度で７２時間攪拌した。その後、反応は、３０％しか進まなかった。さらに４日間にわたって、さらなるアミノアルコールを添加することによって、変換を完了させた。この反応混合物を室温に冷却させ、溶媒を真空で蒸発させた。残留物をＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）と水（５０ｍｌ）の間で分配し、水相をさらなるＥｔＯＡｃ（２×２５ｍｌ）で抽出し、合わせた有機相をブライン（５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、真空で蒸発させた。残留物をシリカゲル上で勾配フラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ（１００：０→９５：５）で溶出することによって、表題化合物を褐色粉末として得た（３０ｍｇ、１１％）。δＨ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）０．９５（３Ｈ，ｔ，Ｊ ７．５，ＣＨＣＨ２ＣＨ ３ ）、１．５６（６Ｈ，ｄ，Ｊ ７．５，ＣＨ［ＣＨ ３ ］２）、１．７２１〜１．６１（２Ｈ，ｍ，ＣＨＣＨ ２ ＣＨ３）、３．２２〜３．０５（１Ｈ，ｍ ＣＨＥｔ）、３．８８（１Ｈ，ｍ，ＣＨＭｅ２）、４．７５〜４．５７（１Ｈ，ｍ，ＣＨＣＦ３ＯＨ）、４．９２〜４．７６（２Ｈ，ｍ，ＮＨＣＨ ２ Ａｒ）、５．３（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＮＨ）、６．８３（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＮＨ）、７．５５（１Ｈ，ｄ，Ｊ １０，ＡｒＨ）、７．６１〜７．５３（２Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）、８．８５（１Ｈ，ｓ，，ＡｒＨ）；δＣ（ＣＤＣｌ３，２５０ＭＨｚ）１５７．６７（Ｃ）、１５６．６５（Ｃ）、１５６．９（Ｃ）、１４６．６２（ＣＨ）、１３９．５５（ＣＨ）、１２８．２２（Ｃ）、１２６．８４（Ｃ）、１２５．９７（ＣＨ）、１２３．１４（ＣＨ）、１２０．３２（Ｃ）、７１．１２（ＣＨ）、６１．５６（ＣＨ２）、５６．４３（ＣＨ）、２５．７４（ＣＨ２）、２２．４２（２×ＣＨ３）、１１．５６（ＣＨ３）；１９Ｆ ＮＭＲ δ−６７．８７、−７４．３０ ＥＳＭＳ ４９２（Ｍ＋１）
１，１，１，３，３，３−ヘキサフルオロ−２−（（９−イソプロピル−６−（ピリジン−３−イルメチルアミノ）−９Ｈ−プリン−２−イルアミノ）メチル）プロパン−２−オール［１８］
室温で、アルゴン雰囲気下で、２−フルオロ−９−イソプロピル−６−［（ピリジン−３−イルメチル）−アミノ］プリン（５０ｍｇ、０．１７５ｍｍｏｌ）の、ｎ−ＢｕＯＨ／ＤＭＳＯ（２．５ｍｌ、４：１）中の攪拌した溶液に、ジイソプロピルエチルアミン（１３５ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ）、その後に２−（アミノメチル）−１，１，１，３，３，３−ヘキサフルオロプロパン−２−オール（３０％の水酸化アンモニウムと２，２−ビス［トリフルオロメチル］オキシランを反応させて調製した）を添加した。この反応混合物を１４０℃で予熱した油浴中に置き、この温度で３日間攪拌した。この反応の後にＬＣＭＳを行ったところ、反応は３０％しか進んでいなかった。さらに新規に調製した２−（アミノメチル）−１，１，１，３，３，３−ヘキサフルオロプロパン−２−オールを添加し、反応を継続させた。この添加をさらに３日間連続して行うことによって、変換を完了させた。溶媒を除去した後、残留物をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製することによって、表題化合物を淡褐色粉末として得た（１９ｍｇ、２３％）。δＨ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）１．５７（６Ｈ，ｄ，Ｊ ７．５，ＣＨ［ＣＨ ３ ］２）、３．４８〜３．４４（１Ｈ，ｍ，ＮＨＣＨＨＣＯＨ［ＣＦ３］２、３．８６〜３．８１（１Ｈ，ｍ，ＮＨＣＨＨＣＯＨ［ＣＦ３］２、４．６２〜４．５５５（１Ｈ，ｍ，ＣＨＭｅ２）、４．７８〜４．７４（２Ｈ，ｍ，ＮＨＣＨ ２ ＡｒＨ）、５．３５（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＯＨ）、６．３６（１Ｈ，ｓ，ｂｒ，ＮＨ）、７．２７〜７．２２（２Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）、７．７〜７．６７（１Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）、８．５（１Ｈ，ｄ，Ｊ ５，ＡｒＨ）、８．６６（１Ｈ，ｓ，ＡｒＨ）；δＣ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）１５９．９９（Ｃ）、１５４．６３（Ｃ）、１４９．５３（Ｃ）、１４９．０５（Ｃ）、１４８．６（ＣＨ）、１３７．７９（Ｃ）、１３５．４１（Ｃ）、１３５．３８（ＣＨ）、１３５（ＣＨ）、１２３．４４（ＣＨ）、７５．０３（Ｃ）、４７．６２（ＣＨ２）、４６．８４（ＣＨ）、４２．０５（ＣＨ２）、２２．１（２×ＣＨ３）；ｍ／ｚ ４６４．２（Ｍ＋Ｈ）
キナーゼアッセイ
合計２１の化合物をインビトロ組換えキナーゼアッセイにおいて、及び腫瘍細胞に対して評価し、セリシクリブと比較した。これらのｃｄｋ阻害剤のうちの大多数は、セリシクリブより強力であることが判明した。
化合物のインビトロでのキナーゼ効力を評価するために、これらをＣＤＫ２及びＣＤＫ９に対してスクリーニングした。キナーゼアッセイは、Cyclacel. Ltd、Dundee、UKで作製された、組換えＣＤＫ／サイクリンを使用して、９６ウェルプレート中で実施した。ＣＤＫ２及びＣＤＫ９アッセイは、２５μｌの全体積で、アッセイ緩衝液（２５ｍＭのｂ−グリセロホスフェート、２０ｍＭのＭＯＰＳ、５ｍＭのＥＧＴＡ、１ｍＭのＤＴＴ及び１ｍＭのＮａＶＯ３、ｐＨ７．４）中で実施し、この中に、適切な基質（ＣＤＫ２／サイクリンＥ及びＣＤＫ２／サイクリンＡに対して精製ヒストンＨ１、ＣＤＫ９／サイクリンＴ１に対してビオチニル−Ａｈｘ−（ＹＳＰＴＳＰＳ）４）を含む、２〜４μｇの活性酵素を添加した。反応は、Ｍｇ／ＡＴＰ混合物（１５ｍＭのＭｇＣｌ２＋１ウェル当たり３０〜５０ｋＢｑの［−３２Ｐ］−ＡＴＰを含む、１００μＭのＡＴＰ）を添加することによって開始し、必要に応じて、３０℃で、混合物を１５分間（ＣＤＫ２／サイクリンＥ）、３０分間（ＣＤＫ２／サイクリンＡ）又は４５分間（ＣＤＫ９／サイクリンＴ１）インキュベートした。ＣＤＫ２の反応は、２５μｌの７５ｍＭのリン酸を添加することによって停止し、その後にＰ８１濾板（Whatman Polyfiltronics、Kent、UK）を通して濾過した。ＣＤＫ９については、ＣＤＫ２アッセイのように、反応は、２５μｌの７５ｍＭのリン酸を添加することによって停止し、次いで各ウェルに５μｌの１０ｍｇ／ｍｌのアビジンを添加し、さらに２分間インキュベートし、その後に濾過した。７５ｍＭのオルトリン酸で３回洗浄した後、プレートを乾燥し、シンチラントを添加し、組み込まれた放射能をシンチレーションカウンター（TopCount、Packard Instruments社製、Pangbourne、Berks、UK）で測定した。キナーゼアッセイのための化合物は、ＤＭＳＯ中の１０ｍＭの原料として作製し、希釈してアッセイ緩衝液中の１０％のＤＭＳＯにした。曲線−フィッティングソフトウェア（XLfit ４．００版、ID Business Solutions Ltd、Guildford、Surrey、UK）を使用してデータを分析することによって、ＩＣ５０（キナーゼ活性を５０％阻害する、化合物の濃度）を求めた。２つの点の平均は、表２と４に見ることができる。結果は、化合物の多くが、親化合物のセリシクリブより強力な、ＣＤＫ２及びＣＤＫ９の阻害剤であることを示す。
アラマーブルー細胞毒性アッセイを使用した、Ｈ４６０ ＮＳＣＬＣ腫瘍細胞株におけるＩＣ５０の決定
化合物の細胞効力を求めるために、各化合物の細胞毒性をＨ４６０非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ、non-small cell lung cancer）細胞株に対して求めた。標準的な細胞毒性法を以下の通り実施した。Ｈ４６０細胞を９６ウェルプレート中の１０％のＦＣＳを含むＲＰＭＩ培地中に、その倍加時間にとって適切な量で播種し（１ウェル当たり３０００細胞）、３７℃、５％のＣＯ２で一晩インキュベートした。培地を取り出し、漸増濃度の適切な化合物を含む１００μｌの新鮮な培地を添加し、細胞を３７℃、５％のＣＯ２で７２時間インキュベートした。アラマーブルー（Roche社製、Lewes、United Kingdom）の１０％原料を培地中に調製し、１００μｌを細胞に添加し、これを２時間インキュベートした。吸光度は、５４４〜５９５ｎｍで、Wallac Victor 2 1420マルチラベルカウンターで測定した。３つの独立した実験の平均を表３に示す。
２つの化合物は、ＩＣ５０値が１μＭ未満である（化合物［１］及び化合物［１１］。
本発明の化合物とセリシクリブの作用機序の比較
セリシクリブは、転写に対するその作用を介してアポトーシスを誘発することが以前に示されている。したがって、セリシクリブは、転写の開始及び伸長に必要とされる、ＲＮＡポリメラーゼIIのリン酸化に関与する、ＣＤＫ７及びＣＤＫ９を阻害する。転写が阻害される結果として、Ｍｃｌ−１などの短い半減期を有するいくつかのタンパク質のレベルは減少し、それによってアポトーシスを誘発する。
これらの化合物も、セリシクリブと同様にＭｃｌ−１を下方制御したことを確認するために、１０ｃｍ２のプレート中の、１０％のＦＣＳを含む１０ｍｌのＲＰＭＩ培地中に、Ｈ４６０細胞を５×１０５個の細胞で播種し、３７℃、５％のＣＯ２で一晩インキュベートした。次いで、１ｍｌの１１倍濃縮した化合物を細胞に添加し、これを５又は２４時間インキュベートした。培地を取り出し、接着細胞を５ｍｌのＰＢＳで洗浄した。１００μｌの溶解緩衝液（５０ｍＭのＨＥＰＥＳ ｐＨ７、２０ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＤＴＴ）、プロテアーゼ阻害剤カクテル（１：１０００）、及びホスファターゼ阻害剤（１０ｍＭのピロリン酸ナトリウム、１０ｍＭのフッ化ナトリウム及び１ｍＭのオルトバナジン酸ナトリウム）を添加することによって、プレート上で細胞を溶解させた。溶解産物を液体窒素で即座に凍結させ、−７０℃で貯蔵した。凍結した溶解産物を解凍し、氷上で、２×１０秒バーストで超音波処理した。各溶解産物のタンパク質濃度は、製造者の指示書通りに、ＢＣＡタンパク質判定キット（Pierce社製）を使用して求めた。溶解産物（３０μｇ）を１０％のβ−メルカプトエタノールを含む１×ゲル添加緩衝液と混合し、変性電気泳動条件（Invitrogen、Glasgow、United Kingdom）を使用して、４〜１２％ビス−トリスポリアクリルアミドゲル中で分離した。タンパク質は、湿式電気泳動転写を使用して、ニトロセルロース膜（Schleicher & Schuell社製、Dassel、Germany）に移した。膜をPonceau Sで染色することによって、添加量が等しいことを確認した後、０．０５％のTween 20を含むＰＢＳ中の５％の脱脂乳（ＰＢＳＴＭ）で２時間遮断した。一次抗体（Ｍｃｌ−１に対するウサギポリクローナル抗体、Santa Cruz社製）とともに、４℃で一晩膜をインキュベートし、ＰＢＳＴＭで１：１０００に希釈した。膜を２×５分、その後に２×１０分、ＰＢＳ及び０．０５％のTween 20（ＰＢＳＴ）中で洗浄し、西洋わさびペルオキシダーゼ−結合二次抗体を含むＰＢＳＴＭ中で１時間インキュベートした。膜を以前と同様に洗浄した後、高感度化学発光溶液（Amersham社製）とともにインキュベートし、Ｘ線フィルム（Amersham社製）に暴露した。
予想通りに、セリシクリブは、非常にわずかな変化しか示さないが、これは、この実験で使用した最高濃度は、この化合物のＩＣ５０値に近いためである。化合物［１］は、Ｍｃｌ−１レベルを低下させる能力においてセリシクリブより優れていると思われ、１．５μＭで、２４時間で、著しい効果が観察された。これは、その効力の増大と一致している。
第２の実験では、追加の化合物の、Ｍｃｌ−１レベルに対する効果を調査した。この場合、Ｈ４６０細胞を０．５、１．５、４．５及び１３．５μＭで５時間処理し、この時点で細胞を回収し、ウェスタンブロッティング分析を行った。結果を図２に示す。
結果は、化合物［１］は、Ｍｃｌ−１のレベルを下方制御することにおいて、この群の中で最も有効な化合物であると思われ、セリシクリブよりも優れた効力を有することを示す。しかし、すべてのこれらの化合物は、そのＩＣ５０値の約２〜３倍に等しい濃度で、Ｍｃｌ−１を減少させることは明らかである。
チトクロムＰ４５０阻害（５つのアイソフォームのＩＣ５０の決定）
目的
ＣＹＰ特異的基質の代謝の分析によって、化合物［１］が、５つのＣＹＰアイソフォームの活性を阻害するかどうかを識別すること。以下に示す従来技術化合物である［Ａ１］、［Ａ２］及び［Ａ３］を使用して、比較研究を実施した。

［Ａ１］ ［Ａ２］ ［Ａ３］
実験手順
化合物［Ａ１］、［Ａ２］及び［Ａ３］は、国際公開第２００４／０１６６１２号パンフレット（Cyclacel Limited）に示されている方法に従って合成した。
ＣＹＰＩＡ阻害
６つの濃度の試験化合物（ＤＭＳＯ中０．０５、０．２５、０．５、２．５、５、２５μＭ；最終ＤＭＳＯ濃度＝０．３５％）をプローブ基質エトキシレゾルフィン（０．５μＭ）の存在下で、ヒト肝ミクロソーム（０．２５ｍｇ／ｍＬ）及びＮＡＤＰＨ（１ｍＭ）とともに、３７℃で５分間インキュベートした。選択的ＣＹＰ１Ａ阻害剤であるα−ナフトフラボンを陽性対照として試験化合物と一緒にスクリーニングした。
ＣＹＰ２Ｃ９阻害
６つの濃度の試験化合物（ＤＭＳＯ中０．０５、０．２５、０．５、２．５、５、２５μＭ；最終ＤＭＳＯ濃度＝０．２５％）をプローブ基質トルブタミド（１２０μＭ）の存在下で、ヒト肝ミクロソーム（１ｍｇ／ｍＬ）及びＮＡＤＰＨ（１ｍＭ）とともに、３７℃で６０分間インキュベートした。選択的ＣＹＰ２Ｃ９阻害剤であるスルファフェナゾールを陽性対照として試験化合物と一緒にスクリーニングした。
ＣＹＰ２Ｃ１９阻害
６つの濃度の試験化合物（ＤＭＳＯ中０．０５、０．２５、０．５、２．５、５、２５μＭ；最終ＤＭＳＯ濃度＝０．２５％）をプローブ基質メフェニトイン（２５μＭ）の存在下で、ヒト肝ミクロソーム（０．５ｍｇ／ｍＬ）及びＮＡＤＰＨ（１ｍＭ）とともに、３７℃で６０分間インキュベートした。選択的ＣＹＰ２Ｃ１９阻害剤であるトラニルシプロミンを陽性対照として試験化合物と一緒にスクリーニングした。
ＣＹＰ２Ｄ６阻害
６つの濃度の試験化合物（ＤＭＳＯ中０．０５、０．２５、０．５、２．５、５、２５μＭ；最終ＤＭＳＯ濃度＝０．２５％）をプローブ基質デキストロメトルファン（５μＭ）の存在下で、ヒト肝ミクロソーム（０．５ｍｇ／ｍＬ）及びＮＡＤＰＨ（１ｍＭ）とともに、３７℃で３０分間インキュベートした。選択的ＣＹＰ２Ｄ６阻害剤であるキニジンを陽性対照として試験化合物と一緒にスクリーニングした。
ＣＹＰ３Ａ４阻害
６つの濃度の試験化合物（ＤＭＳＯ中０．０５、０．２５、０．５、２．５、５、２５μＭ；最終ＤＭＳＯ濃度＝０．２６％）をプローブ基質ミダゾラム（２．５μＭ）の存在下で、ヒト肝ミクロソーム（０．２５ｍｇ／ｍＬ）及びＮＡＤＰＨ（１ｍＭ）とともに、３７℃で５分間インキュベートした。選択的ＣＹＰ３Ａ４阻害剤であるケトコナゾールを陽性対照として試験化合物と一緒にスクリーニングした。
ＣＹＰ１Ａのインキュベーションについては、反応は、メタノールを添加することによって停止し、代謝産物であるレゾルフィンの形成は、蛍光（励起波長＝５３５ｎｍ、発光波長＝５９５ｎｍ）によってモニターした。ＣＹＰ２Ｃ９、ＣＹＰ２Ｃ１９、ＣＹＰ２Ｄ６、及びＣＹＰ３Ａ４のインキュベーションについては、反応は、内部標準物質を含むメタノールを添加することによって停止した。次いで試料を遠心分離機にかけ、上澄を合わせ、一般的なＬＣ−ＭＳ／ＭＳ条件を使用して、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳによって、４−ヒドロキシトルブタミド、４−ヒドロキシメフェニトイン、デキストロルファン、及び１−ヒドロキシミダゾラムと内部標準物質を同時に分析した。脱イオン水中のギ酸（最終濃度＝０．１％）を最終試料に添加した後、分析した。媒体対照と比較した、代謝産物の形成の減少を使用することによって、ＩＣ５０値（５０％阻害を生じる試験化合物濃度）を計算した。
結果
５つのＣＹＰアイソフォームに対する各化合物についてのＩＣ５０（μＭ）を表５に示す。
データは、３つの化合物は、ＣＹＰ３Ａ４の著しい阻害剤であるが、化合物［１］は、そのような阻害剤ではないことを示す。化合物［１］のＩＣ５０値は、その細胞のＩＣ５０より著しく高いので（表７を参照されたい）、これは、細胞毒性濃度では、ＣＹＰ３Ａ４活性に対してまったく効果がないはずであることを示す。ＣＹＰ３Ａ４は多数の薬物の代謝に関与するので、これは重要である。ＣＹＰ３Ａ４が１つの薬剤によって阻害される場合、ＣＹＰ３Ａ４基質の代謝が低減するため、予期しない毒性に至る場合があり、それによってこれらの作用剤のレベルの明らかな増大が生じる。
チトクロムＰ４５０基質の同定
目的
主要なチトクロムＰ４５０アイソフォームのうちのどれが４つの試験化合物の代謝に関与するかを識別すること。
実験手順
ヒトＮＡＤＰＨチトクロムＰ４５０還元酵素と同時発現した、ｃＤＮＡ発現ヒトＣＹＰ４５０酵素調製物（Bactosomes（商標））は、Cypex Ltdによって供給された。Bactosomes（商標）（最終のＰ４５０濃度ＣＹＰ１Ａ２ １００ｐｍｏｌ／ｍＬ、ＣＹＰ２Ｃ８ ５０ｐｍｏｌ／ｍＬ、ＣＹＰ２Ｃ９ ２５ｐｍｏｌ／ｍＬ、ＣＹＰ２Ｃ１９ １００ｐｍｏｌ／ｍＬ、ＣＹＰ２Ｄ６ ５０ｐｍｏｌ／ｍＬ及びＣＹＰ３Ａ４ ２５ｐｍｏｌ／ｍＬ）、ｐＨ７．４の０．１Ｍのリン酸緩衝液並びに試験化合物（最終基質濃度＝５μＭ；最終ＤＭＳＯ濃度＝０．２５％）を３７℃でプレインキュベートした後、ＮＡＤＰＨ（最終濃度＝１ｍＭ）を添加することによって反応を開始した。インキュベーションはまた、対照のバクトソーム（bactosome）（Ｐ４５０酵素がまったく存在しない）を使用しても実施することによって、任意の非酵素的分解を明らかにした。最終インキュベーション体積は２５μＬであった。各ＣＹＰ４５０アイソフォームによって特異的に代謝されることが知られている化合物を対照化合物として使用した。
各化合物は、０、５、１５、３０及び４５分間、各ＣＹＰアイソフォームとともに単独でインキュベートした。反応は、適切な時点で、内部標準物質を含む、５０μＬのメタノールを添加することによって停止した。インキュベーションプレートを２５００ｒｐｍで、４℃で２０分間遠心分離機にかけることによって、タンパク質を沈殿させた。タンパク質が沈殿した後、試料の上澄を最大４つの化合物のカセット中で合わせ、一般的なＬＣ−ＭＳ／ＭＳ条件を使用して分析した。
データ分析
ピーク面積比の自然対数（対照のバクトソームを用いて、インキュベーション中の任意の損失を補正した）を時間に対してプロットし、線の傾きを求めた。
消失速度定数（ｋ）＝（−傾き）
結果
６つのＣＹＰのそれぞれの存在下での、各化合物についての半減期（分）を表６に示す。
データは、このBactosomes（商標）系では、化合物［１］は、試験した６つのＣＹＰアイソフォームに対する基質ではないことを示す。他の３つの化合物と大きな差があるが、これは、これらはすべてＣＹＰ３Ａ４の基質であり、２つはＣＹＰ１Ａ２の基質でもあるためである。この差は、表４で論じたＣＹＰ阻害の差とよく一致する。ＣＹＰ阻害に導く共通の機構は、化合物がそのＣＹＰに対する基質でもある場合である。データから分かるように、化合物［１］は、ＣＹＰ３Ａ４の基質でも阻害剤でもないが、他の３つの化合物は、ＣＹＰ３Ａ４の基質でもあり、阻害剤でもある。
キナーゼアッセイ
化合物のインビトロでのキナーゼ効力を評価するために、これらをＣＤＫ２及びＣＤＫ９に対してスクリーニングした。キナーゼアッセイは、Cyclacel. Ltd、Dundee、UKで作製された、組換えＣＤＫ／サイクリンを使用して、９６ウェルプレート中で実施した。ＣＤＫ２及びＣＤＫ９アッセイは、２５μｌの全体積で、アッセイ緩衝液（２５ｍＭのｂ−グリセロホスフェート、２０ｍＭのＭＯＰＳ、５ｍＭのＥＧＴＡ、１ｍＭのＤＴＴ及び１ｍＭのＮａＶＯ３、ｐＨ７．４）中で実施し、この中に、適切な基質（ＣＤＫ２／サイクリンＥ及びＣＤＫ２／サイクリンＡに対して精製ヒストンＨ１、ＣＤＫ９／サイクリンＴ１に対してビオチニル−Ａｈｘ−（ＹＳＰＴＳＰＳ）４）を含む、２〜４μｇの活性酵素を添加した。反応は、Ｍｇ／ＡＴＰ混合物（１５ｍＭのＭｇＣｌ２＋１ウェル当たり３０〜５０ｋＢｑの［−３２Ｐ］−ＡＴＰを含む、１００μＭのＡＴＰ）を添加することによって開始し、必要に応じて、３０℃で、混合物を１５分間（ＣＤＫ２／サイクリンＥ）、３０分間（ＣＤＫ２／サイクリンＡ）又は４５分間（ＣＤＫ９／サイクリンＴ１）インキュベートした。ＣＤＫ２の反応は、２５μｌの７５ｍＭのリン酸を添加することによって停止し、その後にＰ８１濾板（Whatman Polyfiltronics、Kent、UK）を通して濾過した。ＣＤＫ９については、ＣＤＫ２アッセイのように、反応は、２５μｌの７５ｍＭのリン酸を添加することによって停止し、次いで各ウェルに５μｌの１０ｍｇ／ｍｌのアビジンを添加し、さらに２分間インキュベートし、その後に濾過した。７５ｍＭのオルトリン酸で３回洗浄した後、プレートを乾燥し、シンチラントを添加し、組み込まれた放射能をシンチレーションカウンター（TopCount、Packard Instruments、Pangbourne、Berks、UK）で測定した。キナーゼアッセイのための化合物は、ＤＭＳＯ中の１０ｍＭの原料として作製し、アッセイ緩衝液中の１０％のＤＭＳＯに希釈した。曲線−フィッティングソフトウェア（XLfit ４．００版、ID Business Solutions Ltd、Guildford、Surrey、UK）を使用してデータを分析することによって、ＩＣ５０（キナーゼ活性を５０％阻害する、化合物の濃度）を求めた。２つの点の平均は、表６と８に見ることができる。
結果
表７中の結果は、従来技術の化合物［Ａ３］及び化合物［１］は、最も強力なキナーゼ阻害剤であることを示す。
アラマーブルー細胞毒性アッセイを使用する、腫瘍細胞株におけるＩＣ５０の決定
化合物の細胞効力を判定するために、各化合物の細胞毒性を様々な細胞株に対して求めた。標準的な細胞毒性法を以下の通り実施した。細胞を９６ウェルプレート中の１０％のＦＣＳを含む、ＲＰＭＩ又はＤＭＥＭ培地中に、その倍加時間にとって適切な量で播種し（１ウェル当たり２〜５０００細胞）、３７℃、５％のＣＯ２で一晩インキュベートした。培地を取り出し、漸増濃度の適切な化合物を含む１００μｌの新鮮な培地を添加し、細胞を３７℃、５％のＣＯ２で７２時間インキュベートした。アラマーブルー（Roche社製、Lewes、United Kingdom）の１０％原料を培地中に調製し、１００μｌを細胞に添加し、これを２時間インキュベートした。吸光度は、５４４〜５９５ｎｍで、Wallac Victor 2 1420マルチラベルカウンターで測定した。
結果
２１の細胞株に対する、細胞の細胞毒性分析結果を表８に示す。化合物［１］は、従来技術の化合物［Ａ１］、［Ａ２］又は［Ａ３］よりも、著しくより強力である。
本発明の範囲及び精神から逸脱することなく、本発明の様々な改変及び変形が、当業者にとって明らかになる。本発明を具体的な好適な実施形態に関連して説明してきたが、特許請求した本発明は、そのような具体的な実施形態に不当に制限されるべきでないことが理解されるべきである。実際に、当業者に明白である、本発明を実施するために説明した様式の様々な改変は、本発明によって包含されることが意図されている。





Claims (45)

  1. 式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容されるその塩
    （Ｉ）
    ［式中、
    Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立に、Ｈ、アルキル又はハロアルキルであり、
    Ｒ３及びＲ４は、それぞれ独立に、Ｈ、アルキル、ハロアルキル又はアリールであり、
    Ｒ５は、アルキル又はシクロアルキル又はシクロアルキル−アルキルであり、そのそれぞれは、必要に応じて１又は複数のＯＨ基で置換されていてもよく、
    Ｒ６は、
    （式中、Ｘ、Ｙ及びＺの１つはＮであり、その残りはＣＲ９である）であり、
    Ｒ７、Ｒ８及び各Ｒ９は、独立に、Ｈ、アルキル又はハロアルキルであり、Ｒ７、Ｒ８及び各Ｒ９の少なくとも１つは、Ｈ以外である］。
  2. Ｒ１及びＲ２の一方がＨであり、他方がアルキルである、請求項１に記載の化合物。
  3. Ｒ１及びＲ２の一方がＨであり、他方がメチル、エチル又はイソプロピルである、請求項１又は２に記載の化合物。
  4. Ｒ１がエチルであり、Ｒ２がＨである、請求項１〜３のいずれかに記載の化合物。
  5. Ｒ３及びＲ４が、それぞれ独立に、Ｈ、アルキル、ハロアルキル又はアリールであり、Ｒ３及びＲ４の少なくとも１つがＨ以外である、請求項１〜４のいずれかに記載の化合物。
  6. Ｒ３及びＲ４の一方がＨであり、他方がアルキル又はハロアルキルである、請求項１〜５のいずれかに記載の化合物。
  7. Ｒ３がＨであり、Ｒ４がアルキル又はハロアルキルである、請求項１〜６のいずれかに記載の化合物。
  8. Ｒ３がＨであり、Ｒ４がメチルである、請求項１〜７のいずれかに記載の化合物。
  9. ＹがＮである、請求項１〜８のいずれかに記載の化合物。
  10. ＸがＣＨであり、ＺがＣ−Ｍｅであり、Ｒ７がＨであり、Ｒ８がＭｅである、請求項９に記載の化合物。
  11. ＸがＣＨであり、ＺがＣ−Ｍｅであり、Ｒ７及びＲ８がともにＨである、請求項９に記載の化合物。
  12. ＸがＣＨであり、ＺがＣ−ＣＦ３であり、Ｒ７及びＲ８がともにＨである、請求項９に記載の化合物。
  13. ＸがＮである、請求項１〜８のいずれかに記載の化合物。
  14. ＹがＣ−Ｍｅであり、ＺがＣＨであり、Ｒ７及びＲ８がともにＨである、請求項１３に記載の化合物。
  15. Ｙ及びＺがＣＨであり、Ｒ７がＨであり、Ｒ８がＭｅである、請求項１３に記載の化合物。
  16. ＺがＮである、請求項１〜８のいずれかに記載の化合物。
  17. ＸがＣＨであり、ＹがＣ−Ｍｅであり、Ｒ７がＭｅであり、Ｒ８がＨである、請求項１６に記載の化合物。
  18. Ｒ５がイソプロピルである、請求項１〜１７のいずれかに記載の化合物。
  19. 以下のものから選択される、請求項１〜１８のいずれかに記載の化合物。
  20. 式IIの化合物、又は薬学的に許容されるその塩
    （II）
    ［式中、
    Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ３’及びＲ４’の少なくとも１つはハロアルキルであり、その残りは、それぞれ独立に、Ｈ、アルキル又はハロアルキルであり、
    Ｒ５’は、アルキル又はシクロアルキル又はシクロアルキル−アルキルであり、そのそれぞれは、必要に応じて１又は複数のＯＨ基で置換されていてもよく、
    Ｒ６’は、
    （式中、Ｘ’、Ｙ’及びＺ’の１つはＮであり、その残りはＣＲ９’である）であり、
    Ｒ７’、Ｒ８’及び各Ｒ９’は、独立に、Ｈ、ハロ、アルキル又はハロアルキルである］。
  21. Ｒ５’がイソプロピルである、請求項２０に記載の化合物。
  22. Ｙ’がＮであり、Ｘ’及びＺ’がＣＨであり、Ｒ７’及びＲ８’がともにＨである、請求項２０又は２１に記載の化合物。
  23. Ｒ１’及びＲ２’の一方がＨであり、他方がアルキルであり、又はＲ１’及びＲ２’がともにＨである、請求項２０〜２２のいずれかに記載の化合物。
  24. Ｒ３’及びＲ４’の一方がＨであり、他方がＣＦ３である、請求項２０〜２３のいずれかに記載の化合物。
  25. 以下のものから選択される化合物。
  26. 以下のものから選択される化合物。
  27. 化合物（２Ｒ，３Ｓ−３−（６−（（４，６−ジメチルピリジン−３−イルメチルアミノ）−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−２−イルアミノ）ペンタン−２−オール、又は薬学的に許容されるその塩若しくはエステル。
  28. 薬学的に許容される希釈剤、賦形剤若しくは担体、又はこれらの混合物と混合されている、請求項１〜２７のいずれかに記載の化合物を含む医薬組成物。
  29. 増殖性疾患を治療するための薬物の調製における、請求項１〜２７のいずれかに記載の化合物の使用。
  30. 増殖性疾患ががん又は白血病である、請求項２９に記載の使用。
  31. 増殖性疾患が、糸球体腎炎、関節リウマチ、乾癬又は慢性閉塞性肺疾患である、請求項２９に記載の使用。
  32. ウイルス性疾患を治療するための薬物の調製における、請求項１〜２７のいずれかに記載の化合物の使用。
  33. ウイルス性疾患が、ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）、単純ヘルペスウイルス１型（ＨＳＶ−１）、ヒト免疫不全ウイルス１型（ＨＩＶ−１）、及び水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）から選択される、請求項３２に記載の使用。
  34. ＣＮＳ障害を治療するための薬物の調製における、請求項１〜２７のいずれかに記載の化合物の使用。
  35. ＣＮＳ障害が、アルツハイマー病又は双極性障害である、請求項３４に記載の使用。
  36. 脱毛症を治療するための薬物の調製における、請求項１〜２７のいずれかに記載の化合物の使用。
  37. 脳卒中を治療するための薬物の調製における、請求項１〜２７のいずれかに記載の化合物の使用。
  38. 糖尿病を治療するための薬物の調製における、請求項１〜２７のいずれかに記載の化合物の使用。
  39. 糖尿病がII型糖尿病である、請求項３８に記載の使用。
  40. 神経変性疾患を治療するための薬物の調製における、請求項１〜２７のいずれかに記載の化合物の使用。
  41. 神経変性疾患がニューロンアポトーシスである、請求項４０に記載の使用。
  42. サイクリン依存性キナーゼ、オーロラキナーゼ、ＧＳＫ及びＰＬＫ酵素の１又は複数を阻害することができる、さらなる候補化合物を同定するためのアッセイにおける、請求項１〜２７のいずれかに記載の化合物の使用（ただし、ヒトを対象としたアッセイを除く）。
  43. アッセイが競合的結合アッセイである、請求項４２に記載の使用（ただし、ヒトを対象としたアッセイを除く）。
  44. 医薬に含有させて使用するための、請求項１〜２７のいずれかに記載の化合物。
  45. 増殖性疾患、ウイルス性疾患、神経変性疾患、ＣＮＳ障害、糖尿病、脱毛症及び脳卒中から選択される疾患を治療するための、請求項１〜２７のいずれかに記載の化合物。
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