JP5330996B2 - ヒト骨膜培養方法 - Google Patents
ヒト骨膜培養方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP5330996B2 JP5330996B2 JP2009529083A JP2009529083A JP5330996B2 JP 5330996 B2 JP5330996 B2 JP 5330996B2 JP 2009529083 A JP2009529083 A JP 2009529083A JP 2009529083 A JP2009529083 A JP 2009529083A JP 5330996 B2 JP5330996 B2 JP 5330996B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- culture
- periosteum
- growth factor
- platelet
- rich plasma
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
- A61L27/3604—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix characterised by the human or animal origin of the biological material, e.g. hair, fascia, fish scales, silk, shellac, pericardium, pleura, renal tissue, amniotic membrane, parenchymal tissue, fetal tissue, muscle tissue, fat tissue, enamel
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
- A61L27/38—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells
- A61L27/3839—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells characterised by the site of application in the body
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
- A61L27/38—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells
- A61L27/3895—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells using specific culture conditions, e.g. stimulating differentiation of stem cells, pulsatile flow conditions
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
- C12N5/0654—Osteocytes, Osteoblasts, Odontocytes; Bones, Teeth
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/70—Undefined extracts
- C12N2500/80—Undefined extracts from animals
- C12N2500/84—Undefined extracts from animals from mammals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/10—Growth factors
- C12N2501/115—Basic fibroblast growth factor (bFGF, FGF-2)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/10—Growth factors
- C12N2501/15—Transforming growth factor beta (TGF-β)
Description
(生命倫理)
ヒト由来歯根膜細胞を使用するに当たって、新潟大学医歯学総合病院の倫理規定に基づき作成した実験計画を新潟大学歯学部倫理委員会で承認を受けた(平成17年5月9日、平成18年6月22日)。さらに、インフォームドコンセントにより、その都度、患者に対して歯根膜組織からの歯根膜細胞の採取と実験への供与について説明し、同意を得られることを前提とした。
採取した骨膜片は原法にしたがって、培地で湿したガーゼの上に載せ、無菌的に培養室に運び、クリーンベンチ内で以降の操作を行った。VersaLyse Lysing Solution(商標、ベックマン コールター株式会社)で最長3分間赤血球溶解処理を行った。PBSで3回洗浄してから、100mm径ディッシュ(TPP、#93100)の中央に静置した。その後、CO2インキュベータ内で20−30分間程度インキュベートし、過剰な水分を蒸発させた後、骨膜片をディッシュに接着させた。
骨膜片を採取したのと同じ患者から採取した血液から多血小板血漿分画を採取した。患者から採血した新鮮な全血をクエン酸及びブドウ糖を含む抗凝固剤を添加した10mL遠心管に分注し、最短径約57mm、最長径約140mmのスウィングバケット型ロータで2,400rpm、10分間遠心した。遠心分離すると、赤血球が沈殿し、上清の血漿との間に血小板が集まった。次に、血小板及び血漿を別の10mL遠心管に移して3,600rpm、15分間遠心して、血小板を沈殿させ、最少量の血漿中に懸濁して回収した分画を多血小板血漿として使用した。これを10−20μLだけ骨膜片の表面に滴下し、20−30分インキュベートした。多血小板血漿がややゲル状に凝固した後、第1培養液として多血小板血漿を0.5%、ペニシリンGカリウム塩を100単位/mL、ストレプトマイシンを0.1mg/mL、アムホテリシンBを0.25μg/mL(Antibiotic−Antimycotic(100x)liquid(#15240−062、インビトロジェン株式会社)を100倍希釈して使用)、ビタミンCを25μg/mL、オーストラリア産ウシ胎児血清を10%含むメディウム199培養液を5mL添加した。
を用いた。条件(A)は、前記培養ディッシュ上の骨膜片の表面に前記患者の多血小板血漿を滴下して骨膜片の表面を覆うように凝固させること(以下、「PRPコーティング」という。)を行わずに、多血小板血漿もいかなる成長因子も含まない第1培養液を添加する条件(以下、「control」という。)であった。条件(B)は、PRPコーティングを行わずに、5ng/mLの塩基性繊維芽細胞成長因子(Recombinant Human FGF−basic(#100−18B)、PeproTech Inc.、免疫生物研究所)を添加した第1培養液を添加する条件(以下、「bFGF」という。)であった。条件(C)は、PRPコーティングを行わずに、1ng/mLのトランスフォーミング成長因子ベータ(TGFβ1、R&D Systems)を含む第1培養液を添加する条件(以下、「TGFβ1」という。)であった。条件(D)は、PRPコーティングを行い、多血小板血漿もいかなる成長因子も含まない第1培養液を添加する条件(以下、「PRP」という。)であった。条件(E)は、PRPコーティングを行い、5ng/mLの塩基性繊維芽細胞成長因子を含む第1培養液を添加する条件(以下、「PRP+bFGF」という。)であった。条件(F)は、PRPコーティングを行い、1ng/mLのトランスフォーミング成長因子ベータ1を含む第1培養液を添加する条件(以下、「PRP+TGFβ1」という。)であった。
培養液は1週間に2回交換した。100mm径の培養ディッシュに添加する培養液の体積は、培養開始時は5mLであったが、最初の培養液交換以降は10mLに増やした。培養開始第7日に第1培養液から第2培養液として、5−10mg/mLの塩基性繊維芽細胞成長因子(Recombinant Human FGF−basic(#100−18B)、PeproTech Inc.、免疫生物研究所)、ペニシリンGカリウム塩を100単位/mL、ストレプトマイシンを0.1mg/mL、アムホテリシンBを0.25μg/mL(Antibiotic−Antimycotic(100x)liquid(#15240−062、インビトロジェン株式会社)を100倍希釈して使用)、ビタミンCを25μg/mL、オーストラリア産ウシ胎児血清を10%含むメディウム199培養液に切り替えた。その後、培養開始第21日目に第2培養液から、第3培養液として、デキサメタゾンを10nM、ビタミンCを25μg/mL、β−グリセロリン酸を2mM、ペニシリンGカリウム塩を100単位/mL、ストレプトマイシンを0.1mg/mL、アムホテリシンBを0.25μg/mL(Antibiotic−Antimycotic(100x)liquid(#15240−062、インビトロジェン株式会社)を100倍希釈して使用)、オーストラリア産ウシ胎児血清を10%含むメディウム199培養液に切り替えた。
細胞のALP活性は、10%中性ホルマリン固定の後、市販のキット(アルホス染色キット、武藤化学)を用いて検出した。簡潔には、培養ディッシュをPBSでリンスした後、ホルマリン固定し、基質としてナフトールAS−MXホスフェート、ジアゾニウム塩としてファーストブルーRR塩を用いて酵素反応を行わせ、不溶性の青色の反応産物によって酵素の局在を検出した。なお、細胞は1%サフラニン0で赤紫色に後染色した。
(1)骨膜片からの細胞遊走
図2は培養5日目の骨膜片からの細胞遊走を示す位相差顕微鏡写真である。右は、本発明の骨膜培養方法にしたがって、赤血球溶解処理及び多血小板血漿によるコーティング処理を施した骨膜片を多血小板血漿を0.5%含む第1培養液で培養した結果の位相差顕微鏡写真であり、骨膜片の周辺全体から細胞の遊走がみられ、骨膜片から1mm以上の距離の移動が観察された。左は、赤血球溶解処理及び多血小板血漿によるコーティング処理をともに施さない対照実験の骨膜片を多血小板血漿を含まない培養液で培養した結果の位相差顕微鏡写真であり、骨膜片の周辺の一部のみから細胞の遊走はみられず、0.1ないし0.2mmの距離の移動しか観察されなかった。
図3はさまざまな培養条件下での培養5日目の骨膜片からの細胞遊走を示す位相差顕微鏡写真である。左上段は条件(A)、右上段は条件(B)、左中段は条件(C)、右中段は条件(D)、左下段は条件(E)、右下段は条件(F)でそれぞれ5日間培養した骨膜片の培養である。前記骨膜片にPRPコーティングを施して成長因子を含まない第1培養液で培養した場合(条件(D)、図3右中段)には図2と同様に活発な細胞遊走がみられたが、PRPコーティングを施さないときには、塩基性繊維芽細胞成長因子を添加した第1培養液で培養した場合(条件(B)、図3右上段)でも、トランスフォーミング成長因子ベータ1を添加した第1培養液で培養した場合(条件(C)、図3左中段)でも、成長因子を含まない第1培養液で培養した対照実験(条件(A)、図3左上段)と同様で、ほとんど細胞遊走がみられなかった。PRPコーティングを施すときには、塩基性繊維芽細胞成長因子を添加した第1培養液で培養した場合(条件(E)、図3左下段)には、成長因子を含まない第1培養液で培養した場合(条件(D)、図3右中段)に比べて細胞遊走がほぼ同程度であった。逆に、トランスフォーミング成長因子ベータ1を添加した第1培養液で培養した場合(条件(F)、図3左下段)には、成長因子を含まない第1培養液で培養した場合(条件(D)、図3右中段)に比べて細胞遊走が促進された。これらの実験結果から、本発明のヒト骨膜培養方法における前記培養ディッシュ上の骨膜片の表面に前記患者の多血小板血漿を滴下して骨膜片の表面を覆うように凝固させるステップ(PRPコーティング)は、塩基性繊維芽細胞成長因子又はトランスフォーミング成長因子ベータを含む培養液では置換できないことが明らかになった。また、PRPコーティングを施す場合に、さらに塩基性繊維芽細胞成長因子を添加しても細胞遊走を促進することはないが、さらにトランスフォーミング成長因子ベータ1を添加すると、成長因子を含まない培養液の場合よりも細胞遊走を促進することがわかった。
図4は培養15日目の骨膜片細胞の増殖を示す位相差顕微鏡写真である。右は、本発明の骨膜培養方法にしたがって、赤血球溶解処理及び多血小板血漿によるコーティング処理を施した骨膜片を1週間多血小板血漿を0.5%含む第1培養液で培養した後、塩基性繊維芽細胞成長因子を10ng/mL含む第2培養液に切り替えてさらに8日間培養した結果の位相差顕微鏡写真であり、顕著な細胞増殖が観察された。左は、赤血球溶解処理及び多血小板血漿によるコーティング処理をともに施さない対照実験の骨膜片をサプリメントを含まない培養液で15日間培養した結果の位相差顕微鏡写真であり、細胞の遊走及び増殖は低調であった。
図5は培養27日目に固定、染色した培養骨膜シートのアルカリ性ホスファターゼ発現を示す写真である。薄灰色は細胞を示し、濃灰色はアルカリ性ホスファターゼ活性の検出された部分を示す。右は本発明の骨膜培養方法にしたがって、赤血球溶解処理及び多血小板血漿によるコーティング処理を施した骨膜片を多血小板血漿を0.5%含む第1培養液で1週間培養した後、塩基性繊維芽細胞成長因子を10ng/mL含む第2培養液に切り替えて2週間培養し、その後、デキサメタゾンを10nM、ビタミンCを25μg/mL、β−グリセロリン酸を2mM含む第3培養液に切り替えて5日間培養した培養ディッシュの染色結果である。顕著な細胞増殖と強いアルカリ性ホスファターゼ活性が認められた。左は、赤血球溶解処理及び多血小板血漿によるコーティング処理をともに施さない対照実験の骨膜片をサプリメントを含まない培養液で27日間培養した培養ディッシュの染色結果である。アルカリ性ホスファターゼ活性はわずかしか認められなかった。
Claims (3)
- (1)患者から採取した骨膜片に赤血球溶解処理を施し、生理食塩水で洗浄して、乾燥した培養ディッシュに戴置するステップと、
(2)前記培養ディッシュ上の骨膜片の表面に前記患者の多血小板血漿を滴下して骨膜片の表面を覆うように凝固させるステップと、
(3)トランスフォーミング成長因子ベータ1、トランスフォーミング成長因子ベータ2及びトランスフォーミング成長因子ベータ3からなるグループから選択される少なくとも1種類のトランスフォーミング成長因子ベータを含む第1培養液を前記培養ディッシュに添加して培養するステップと、
(4)前記ステップ(3)の後、塩基性繊維芽細胞成長因子を含むが前記多血小板血漿は含まない第2培養液で培養するステップとを含むことを特徴とするヒト骨膜培養方法。 - 前記トランスフォーミング成長因子ベータはトランスフォーミング成長因子ベータ1であることを特徴とする、請求項1に記載のヒト骨膜培養方法。
- (5)前記ステップ(4)の後、デキサメタゾン、ビタミンC及びβ−グリセロリン酸からなる骨芽細胞分化誘導剤を含む第3培養液で培養するステップを含むことを特徴とする請求項1又は2に記載のヒト骨膜培養方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2009529083A JP5330996B2 (ja) | 2007-08-23 | 2008-08-22 | ヒト骨膜培養方法 |
Applications Claiming Priority (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2007217340 | 2007-08-23 | ||
JP2007217340 | 2007-08-23 | ||
PCT/JP2008/065050 WO2009025374A1 (ja) | 2007-08-23 | 2008-08-22 | ヒト骨膜培養方法 |
JP2009529083A JP5330996B2 (ja) | 2007-08-23 | 2008-08-22 | ヒト骨膜培養方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2009025374A1 JPWO2009025374A1 (ja) | 2010-11-25 |
JP5330996B2 true JP5330996B2 (ja) | 2013-10-30 |
Family
ID=40378274
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2009529083A Active JP5330996B2 (ja) | 2007-08-23 | 2008-08-22 | ヒト骨膜培養方法 |
Country Status (3)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US8420392B2 (ja) |
JP (1) | JP5330996B2 (ja) |
WO (1) | WO2009025374A1 (ja) |
Families Citing this family (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP2404623B1 (en) * | 2009-03-06 | 2018-01-10 | Niigata University | Bone tissue regeneration with calcified substance produced by cultured cells |
US10130736B1 (en) | 2010-05-14 | 2018-11-20 | Musculoskeletal Transplant Foundation | Tissue-derived tissuegenic implants, and methods of fabricating and using same |
US8883210B1 (en) | 2010-05-14 | 2014-11-11 | Musculoskeletal Transplant Foundation | Tissue-derived tissuegenic implants, and methods of fabricating and using same |
US9352003B1 (en) | 2010-05-14 | 2016-05-31 | Musculoskeletal Transplant Foundation | Tissue-derived tissuegenic implants, and methods of fabricating and using same |
US10531957B2 (en) | 2015-05-21 | 2020-01-14 | Musculoskeletal Transplant Foundation | Modified demineralized cortical bone fibers |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2003052365A (ja) * | 2001-08-20 | 2003-02-25 | Japan Science & Technology Corp | 哺乳動物からの間葉系幹細胞の分離及びその利用方法 |
JP2005205074A (ja) * | 2004-01-26 | 2005-08-04 | Olympus Corp | 培養骨の製造方法 |
JP2007512814A (ja) * | 2003-11-24 | 2007-05-24 | ノースウエスト バイオセラピューティクス,インコーポレイティド | 接線流れ濾過デバイス、および幹細胞富化のための方法 |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1330752C (zh) * | 1997-01-24 | 2007-08-08 | 旭化成医疗株式会社 | 细胞分离方法 |
JP2003055237A (ja) | 2001-08-15 | 2003-02-26 | Japan Science & Technology Corp | 骨再生促進剤 |
JP2004201799A (ja) * | 2002-12-24 | 2004-07-22 | Niigata Tlo:Kk | 口腔用骨欠損複合型骨移植材及び歯周治療法 |
JP2006289062A (ja) | 2005-03-18 | 2006-10-26 | Pentax Corp | 肥大化能を有する軟骨細胞と足場を用いた骨補填材料 |
JP2008212265A (ja) | 2007-03-01 | 2008-09-18 | Niigata Univ | 培養人工骨及びその作製方法 |
JP2008295420A (ja) | 2007-06-04 | 2008-12-11 | Niigata Univ | ヒト歯根膜細胞株、この細胞株から分化した造骨細胞およびこの造骨細胞から作製した人工骨 |
-
2008
- 2008-08-22 WO PCT/JP2008/065050 patent/WO2009025374A1/ja active Application Filing
- 2008-08-22 US US12/674,609 patent/US8420392B2/en active Active
- 2008-08-22 JP JP2009529083A patent/JP5330996B2/ja active Active
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2003052365A (ja) * | 2001-08-20 | 2003-02-25 | Japan Science & Technology Corp | 哺乳動物からの間葉系幹細胞の分離及びその利用方法 |
JP2007512814A (ja) * | 2003-11-24 | 2007-05-24 | ノースウエスト バイオセラピューティクス,インコーポレイティド | 接線流れ濾過デバイス、および幹細胞富化のための方法 |
JP2005205074A (ja) * | 2004-01-26 | 2005-08-04 | Olympus Corp | 培養骨の製造方法 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
JPN6013033193; 上田 実 編, ティッシュ・エンジニアリング, 初版, 1999, p.137-139 * |
JPN6013033194; 日本整形外科学会雑誌, 2002, Vol.76, No.8, p.S1106 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US8420392B2 (en) | 2013-04-16 |
JPWO2009025374A1 (ja) | 2010-11-25 |
WO2009025374A1 (ja) | 2009-02-26 |
US20110045588A1 (en) | 2011-02-24 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Varela et al. | Injectable platelet rich fibrin: cell content, morphological, and protein characterization | |
Chevallier et al. | Osteoblastic differentiation of human mesenchymal stem cells with platelet lysate | |
Zaky et al. | Platelet lysate favours in vitro expansion of human bone marrow stromal cells for bone and cartilage engineering | |
Xu et al. | Combination of platelet‐rich plasma within periodontal ligament stem cell sheets enhances cell differentiation and matrix production | |
US10526581B2 (en) | Modulation of cardiac stem-progenitor cell differentiation, assays and uses thereof | |
Polchow et al. | Cryopreservation of human vascular umbilical cord cells under good manufacturing practice conditions for future cell banks | |
Shahdadfar et al. | Ex vivo expanded autologous limbal epithelial cells on amniotic membrane using a culture medium with human serum as single supplement | |
US10676718B2 (en) | Maintenance and propagation of mesenchymal stem cells | |
CN104204193A (zh) | 间充质干细胞的培养 | |
KR20080109726A (ko) | 골수 줄기 세포(bmsc)의 골 분화 방법 및 이의 용도 | |
JP5330996B2 (ja) | ヒト骨膜培養方法 | |
AU2014315919B2 (en) | Method for culturing mesenchymal stem cells according to cell size | |
JPWO2005090550A1 (ja) | 幹細胞の増殖法 | |
AU2021277734B2 (en) | Cell culture media compositions for primary cells | |
CZ301148B6 (cs) | Zpusob pestování lidských mezenchymových kmenových bunek, zejména pro lécbu nehojících se fraktur, a bioreaktor k provádení tohoto zpusobu | |
Fu et al. | Laminin-modified dental pulp extracellular matrix for dental pulp regeneration | |
KR101503939B1 (ko) | 연골 세포 조제 방법 | |
Muraki et al. | Technical report: Assessment of viability and osteogenic ability of human mesenchymal stem cells after being stored in suspension for clinical transplantation | |
CN102858957A (zh) | 用于神经组织再生的植入组合物、其生产方法及用途 | |
WO2009080794A1 (en) | Method for preparing cell-specific extracellular matrices | |
Jakfar et al. | New design to remove leukocytes from platelet-rich plasma (PRP) based on cell dimension rather than density | |
Hernandez et al. | Human endothelial cell cultures from progenitor cells obtained by leukapheresis | |
Karlsson et al. | Human dermal fibroblasts: a potential cell source for endothelialization of vascular grafts | |
Kumazawa et al. | Osteogenic potential, multipotency, and cytogenetic safety of human bone tissue-derived mesenchymal stromal cells (hBT-MSCs) after long-term cryopreservation | |
CN101085983A (zh) | 自体干细胞、由其转化而成的目标细胞及其用途 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20110623 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20130709 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20130726 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5330996 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |