JP5298858B2 - 上皮性卵巣癌の組織型識別マーカー、及びそれを用いた組織型に基づく上皮性卵巣癌の罹患の識別法 - Google Patents
上皮性卵巣癌の組織型識別マーカー、及びそれを用いた組織型に基づく上皮性卵巣癌の罹患の識別法 Download PDFInfo
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Description
発明の目的
一口に卵巣腫瘍といっても、組織病理学的には、その形態、発生部位などに応じて細かく分類区別され、その数は良性のものを含めると30種類以上に及ぶ。これまでの卵巣癌腫瘍マーカー探索においては、上皮性卵巣癌の組織型はあまり考慮に入れられていなかったのが実情である。しかしながら実際は組織型によって抗がん剤耐性やCA-125感度、転移性などが異なっている。従って、組織型は治療方法の選択を大きく左右するものである。
本発明者らは、組織型判断を起点としたバイオマーカー検索という新しい着眼点を見出した。本発明者らは、組織病理学的観点から正確な組織型診断がなされた上皮性卵巣癌臨床組織検体を用い、組織型間の発現変動を調べるという新しい観点に基づいて、上皮性卵巣癌のプロファイリングを行った。
下記(1)〜(15)は、組織型に基づいて上皮性卵巣癌の罹患を識別する方法である。本発明の方法では、上皮性卵巣癌の特定の組織型において特異的な発現傾向を示す生体分子を組織型識別マーカーとし、その発現量を調べることによって組織型を決定することを含む。
上皮性卵巣癌の特定の組織型において特異的に発現亢進を示す生体分子群から選ばれる少なくとも1つ、及び/又は
上皮性卵巣癌の特定の組織型において特異的に発現抑制を示す生体分子群から選ばれる少なくとも1つ
についての検出処理に供し、
前記タンパク質の有意な検出の有無を調べ、組織型を識別することを含む、組織型に基づく上皮性卵巣癌の罹患の識別法。
組織型の確定診断がなされた上皮性卵巣癌患者に由来する試料を、複数の組織型について用意し、
前記試料中に発現している生体分子の定量を、前記複数の組織型それぞれについて行い、
前記試料中に発現している生体分子から、特定の組織型における定量値が、他の組織型における定量値に対して有意な変動量をもって増加している生体分子、及び有意な変動量をもって減少している生体分子を絞り込むこと、
を含むプロファイリングによって見出されたものである、(1)に記載の組織型に基づく上皮性卵巣癌の罹患の識別法。
前記上皮性卵巣癌の特定の組織型において特異的に発現抑制を示す生体分子群は、粘液性線型のみにおいて発現抑制を示すタンパク質M(-)、漿液性腺型のみにおいて発現抑制を示すタンパク質S(-)、類内膜型のみにおいて発現抑制を示すタンパク質E(-)、及び、明細胞型のみにおいて発現抑制を示すタンパク質C(-)を含み、
上記タンパク質C(+)、E(+)、S(+)、M(+)、CS(+)、CM(+)、ES(+)、SM(+)、CE(+)、EM(+)、M(-)、S(-)、E(-)、及びC(-)から任意に選ばれる複数のタンパク質についての検出結果を組み合わせる、(1)又は(2)に記載の組織型に基づく上皮性卵巣癌の罹患の識別法。
Acid ceramidase precursor、
Alpha crystallin B chain、
Annexin A1 (Annexin-1)、
Annexin A4 (Annexin-4)、
Carbonic anhydrase 1、
Catechol O-methyltransferase、
Cellular retinoic acid-binding protein 1、
Cystathionine gamma-lyase、
Endoplasmic reticulum protein ERp29 precursor、
Ferritin heavy chain、
Glutathione peroxidase 3 precursor、
Guanine deaminase、
Laminin subunit beta-1 precursor (Laminin B1 chain)、
Laminin subunit gamma-1 precursor (Laminin B2 chain)、
L-lactate dehydrogenase B chain、
Low molecular weight phosphotyrosine protein phosphatase、
Methylcrotonoyl-CoA carboxylase beta chain, mitochondrial precursor、
Nicotinamide N-methyltransferase、
Peroxiredoxin-2、
Peroxiredoxin-6 、
Phosphomannomutase 2、
Phosphoserine aminotransferase、
Protein SET、
Purine nucleoside phosphorylase、
Pyridoxal kinase、
Serum amyloid P-component precursor、
SPRY domain-containing protein 4、
Superoxide dismutase [Mn], mitochondrial precursor、
Synaptic vesicle membrane protein VAT-1 homolog、
Thioredoxin domain-containing protein 12 precursor、
Transaldolase、
Triosephosphate isomerase、
Tryptophanyl-tRNA synthetase, cytoplasmic、及び
Uncharacterized protein C7orf24
からなる群から選ばれる、(3)に記載の組織型に基づく上皮性卵巣癌の罹患の識別法。
ASRGL1 protein、及び
Parvalbumin alpha
からなる群から選ばれる、(3)又は(4)に記載の組織型に基づく上皮性卵巣癌の罹患の識別法。
Astrocytic phosphoprotein PEA-15、
c-Myc-responsive protein Rcl、
Cyclin-dependent kinase inhibitor 2A、
F-actin capping protein subunit alpha-1、
Gamma-synuclein (Breast cancer-specific gene 1 protein)、
Glyoxalase domain-containing protein 4、
Ras-related protein Rab-2A、
Replication protein A 32 kDa subunit、
S100 calcium-binding protein A13、
Small ubiquitin-related modifier 2 precursor (SUMO-2)、及び
Ubiquinol-cytochrome c reductase complex 11 kDa protein, mitochondrial precursorからなる群から選ばれる、(3)〜(5)のいずれかに記載の組織型に基づく上皮性卵巣癌の罹患の識別法。
Fatty acid-binding protein, liver、
Serpin B5 precursor (Maspin)、
Thioredoxin (ATL-derived factor)、及び
Transgelin-2
からなる群から選ばれる、(3)〜(6)のいずれかに記載の組織型に基づく上皮性卵巣癌の罹患の識別法。
6-phosphogluconolactonase、及び
Ubiquinol-cytochrome-c reductase complex core protein I, mitochondrial precursor
からなる群から選ばれる、(3)〜(7)のいずれかに記載の組織型に基づく上皮性卵巣癌の罹患の識別法。
Carbonic anhydrase 2、
Delta(3,5)-Delta(2,4)-dienoyl-CoA isomerase、
Thiosulfate sulfurtransferase、及び
Annexin A4 (Annexin-4)
からなる群から選ばれる、(3)〜(8)のいずれかに記載の組織型に基づく上皮性卵巣癌の罹患の識別法。
Rho GDP-dissociation inhibitor 2、及び
Transgelin
からなる群から選ばれる、(3)〜(9)のいずれかに記載の組織型に基づく上皮性卵巣癌の罹患の識別法。
Barrier-to-autointegration factor、
Cellular retinoic acid-binding protein 2、
S100 calcium-binding protein A11、
S100 calcium-binding protein A4、
S100 calcium-binding protein A6、
Selenium-binding protein 1、及び
Transgelin-2
からなる群から選ばれる、(3)〜(10)のいずれかに記載の組織型に基づく上皮性卵巣癌の罹患の識別法。
Calcyphosin、及び
Fibrinogen beta chain precursor
からなる群から選ばれる、(3)〜(11)のいずれかに記載の組織型に基づく上皮性卵巣癌の罹患の識別法。
Haloacid dehalogenase-like hydrolase domain-containing protein 2である、(1)〜(12)のいずれかに記載の組織型に基づく上皮性卵巣癌の罹患の識別法。
Bis(5'-nucleosyl)-tetraphosphatase [asymmetrical]、
Chloride intracellular channel protein 1、及び
Monoamine-sulfating phenol sulfotransferase
からなる群から選ばれる、(3)〜(13)のいずれかに記載の組織型に基づく上皮性卵巣癌の罹患の識別法。
Acyl-CoA-binding protein、
Coactosin-like protein、
SH3 domain-binding glutamic acid-rich-like protein、
Transgelin、及び
Uncharacterized protein C6orf115
からなる群から選ばれる、(3)〜(14)のいずれかに記載の組織型に基づく上皮性卵巣癌の罹患の識別法。
このうち、(16)〜(19)のように、1つの組織型のみについて特異的なタンパク質は、その組織型の卵巣癌の早期診断マーカーとなりうる。(16)は、明細胞癌の腫瘍マーカー、(17)は、類内膜型癌の腫瘍マーカー、(18)は、漿液性腺癌の腫瘍マーカー、(19)は、粘液性腺癌の腫瘍マーカーである。
Acid ceramidase precursor、
Alpha crystallin B chain、
Annexin A1 (Annexin-1)、
Annexin A4 (Annexin-4)、
Carbonic anhydrase 1、
Catechol O-methyltransferase、
Cellular retinoic acid-binding protein 1、
Cystathionine gamma-lyase、
Endoplasmic reticulum protein ERp29 precursor、
Ferritin heavy chain、
Glutathione peroxidase 3 precursor、
Guanine deaminase、
Laminin subunit beta-1 precursor (Laminin B1 chain)、
Laminin subunit gamma-1 precursor (Laminin B2 chain)、
L-lactate dehydrogenase B chain、
Low molecular weight phosphotyrosine protein phosphatase、
Methylcrotonoyl-CoA carboxylase beta chain, mitochondrial precursor、
Nicotinamide N-methyltransferase、
Peroxiredoxin-2、
Peroxiredoxin-6 、
Phosphomannomutase 2、
Phosphoserine aminotransferase、
Protein SET、
Purine nucleoside phosphorylase、
Pyridoxal kinase、
Serum amyloid P-component precursor、
SPRY domain-containing protein 4、
Superoxide dismutase [Mn], mitochondrial precursor、
Synaptic vesicle membrane protein VAT-1 homolog、
Thioredoxin domain-containing protein 12 precursor、
Transaldolase、
Triosephosphate isomerase、
Tryptophanyl-tRNA synthetase, cytoplasmic、及び
Uncharacterized protein C7orf24
からなる群から選ばれる少なくとも1種のタンパク質を含む、上皮性卵巣癌の組織型識別マーカー。
ASRGL1 protein、及び
Parvalbumin alpha
からなる群から選ばれる少なくとも1種のタンパク質を含む、上皮性卵巣癌の組織型識別マーカー。
Astrocytic phosphoprotein PEA-15、
c-Myc-responsive protein Rcl、
Cyclin-dependent kinase inhibitor 2A、
F-actin capping protein subunit alpha-1、
Gamma-synuclein (Breast cancer-specific gene 1 protein)、
Glyoxalase domain-containing protein 4、
Ras-related protein Rab-2A、
Replication protein A 32 kDa subunit、
S100 calcium-binding protein A13、
Small ubiquitin-related modifier 2 precursor (SUMO-2)、及び
Ubiquinol-cytochrome c reductase complex 11 kDa protein, mitochondrial precursor
からなる群から選ばれる少なくとも1種のタンパク質を含む、上皮性卵巣癌の組織型識別マーカー。
Fatty acid-binding protein, liver、
Serpin B5 precursor (Maspin)、
Thioredoxin (ATL-derived factor)、及び
Transgelin-2
からなる群から選ばれる少なくとも1種のタンパク質を含む、上皮性卵巣癌の組織型識別マーカー。
6-phosphogluconolactonase、及び
Ubiquinol-cytochrome-c reductase complex core protein I, mitochondrial precursor
と;
明細胞型と粘液性腺型とにおいて特異的に発現亢進を示すタンパク質CM(+)として、
Carbonic anhydrase 2、
Delta(3,5)-Delta(2,4)-dienoyl-CoA isomerase、
Thiosulfate sulfurtransferase、及び
Annexin A4 (Annexin-4)
と;
類内膜型と漿液性腺型とにおいて特異的に発現亢進を示すタンパク質ES(+)として、
Rho GDP-dissociation inhibitor 2、及び
Transgelin
と;
漿液性腺型と粘液性腺型とにおいて特異的に発現亢進を示すタンパク質SM(+)として、
Barrier-to-autointegration factor、
Cellular retinoic acid-binding protein 2、
S100 calcium-binding protein A11、
S100 calcium-binding protein A4、
S100 calcium-binding protein A6、
Selenium-binding protein 1、及び
Transgelin-2
と;
明細胞型と類内膜型とにおいて特異的に発現亢進を示すタンパク質CE(+)として、
Calcyphosin、及び
Fibrinogen beta chain precursor
と;
からなる群から選ばれる少なくとも1種のタンパク質を含む、上皮性卵巣癌の組織型識別マーカー。
Haloacid dehalogenase-like hydrolase domain-containing protein 2を含む、上皮性卵巣癌の組織型識別マーカー。
Bis(5'-nucleosyl)-tetraphosphatase [asymmetrical]、
Chloride intracellular channel protein 1、及び
Monoamine-sulfating phenol sulfotransferase
からなる群から選ばれる少なくとも1つのタンパク質を含む、上皮性卵巣癌の組織型識別マーカー。
Acyl-CoA-binding protein、
Coactosin-like protein、
SH3 domain-binding glutamic acid-rich-like protein、
Transgelin、及び
Uncharacterized protein C6orf115
からなる群から選ばれる少なくとも1つのタンパク質を含む、上皮性卵巣癌の組織型識別マーカー。
本発明の方法において、上皮性卵巣癌の罹患を識別すべき対象となる個人に由来する試料としては、特に限定されない。例えば、細胞、組織、組織抽出物、体液などが挙げられる。細胞や組織には、組織生検材料(具体的には術摘した組織など)や、検死解剖材料などが含まれる。組織抽出物とは、当業者に公知の方法によってホモジネート又は可溶化された組織をいう。体液としては、血液、腹水、尿、及び体分泌物などが含まれる。血液としては、全血、血漿、血清などが含まれる。これら試料が保管されたものである場合、保管環境としては、原則−80℃以下、好ましくは液体窒素を用いた低温環境である。
本発明においては、上皮性卵巣癌を解析ターゲットとする。上記のような試料中において、組織型識別マーカーのレベルを定量し、当該マーカーが有意な量で検出されたか否かを調べる。その結果に基づいて、上皮性卵巣癌の組織型を判断する。本発明の組織型識別マーカーは、上皮性卵巣癌の特定の組織型において特異的な発現傾向(すなわち、発現亢進又は発現抑制の傾向)を示す生体分子である。
このような生体分子は、組織型の確定診断がなされた上皮性卵巣癌患者に由来する試料から、発現プロファイリングを行うことによって見出される。そもそも、組織型識別マーカーを用いて組織型を判断するという本発明の基本的概念は、本発明者らによる上皮性卵巣癌のプロファイリングの結果、特定の組織型において特異的な発現傾向を示す分子の存在が明らかになったという事実によってもたらされたものである。
組織病理学的観点から、明細胞型、類内膜型、漿液性腺型、及び粘液性腺型の組織型診断が正確になされた卵巣癌臨床組織検体を用い、それぞれの検体について、発現しているタンパク質を二次元電気泳動法により単離し、染色による定量と、マスフィンガープリンティング分析による同定とを行った。そして、組織型間における変動解析においては、単離された各タンパク質スポットをサンプル間でマッチングさせ、その定量値を集計し、各組織型における平均発現レベルが他の組織型と比べて有意に差があるかどうかをT検定にて評価した。スクリーニングのカットオフ値を「P値<0.005」又は「P値<0.05で3倍以上の発現差」に設定し、基準を満たす変動タンパク質を絞り込み、各組織型を特徴づける発現プロファイルとした。
発現パターンのモデルは、発現プロファイルを構成すべきタンパク質として絞り込むべきタンパク質が有する特徴的な発現パターンを表したものである。すなわち、どの組織型において特異的な発現を示し、どの程度の発現の特異性を有している(すなわち、ある組織型の発現量が他の組織型の発現量に対してどの程度の増加又は減少を示す)ものを絞り込むかという基準を表す。好ましくは、分類された複数種の発現パターンを用意する。
<1>明細胞型のみにおいて特異的に発現亢進を示すタンパク質C(+)
<2>類内膜型のみにおいて特異的に発現亢進を示すタンパク質E(+)
<3>漿液性腺型のみにおいて特異的に発現亢進を示すタンパク質S(+)
<4>粘液性腺型のみにおいて特異的に発現亢進を示すタンパク質M(+)
<5>明細胞型と漿液性型とにおいて特異的に発現亢進を示すタンパク質CS(+)
<6>明細胞型と粘液性腺型とにおいて特異的に発現亢進を示すタンパク質CM(+)
<7>類内膜型と漿液性腺型とにおいて特異的に発現亢進を示すタンパク質ES(+)
<8>漿液性腺型と粘液性腺型とにおいて特異的に発現亢進を示すタンパク質SM(+)
<9>明細胞型と類内膜型とにおいて特異的に発現亢進を示すタンパク質CE(+)
<10>類内膜型と粘液性腺型とにおいて特異的に発現亢進を示すタンパク質EM(+)
<11>粘液性線型のみにおいて発現抑制を示すタンパク質M(-)
<12>漿液性腺型のみにおいて発現抑制を示すタンパク質S(-)
<13>類内膜型のみにおいて発現抑制を示すタンパク質E(-)
<14>明細胞型のみにおいて発現抑制を示すタンパク質C(-)
本発明者らによるプロファイリングによると、以下に例示の80のタンパク質マーカーを含むタンパク質プロファイルが作成された。
Acid ceramidase precursor
Alpha crystallin B chain(2種)
Annexin A1 (Annexin-1)
Annexin A4 (Annexin-4)(2種)
Carbonic anhydrase 1
Catechol O-methyltransferase
Cellular retinoic acid-binding protein 1
Cystathionine gamma-lyase
Endoplasmic reticulum protein ERp29 precursor
Ferritin heavy chain
Glutathione peroxidase 3 precursor
Guanine deaminase
Laminin subunit beta-1 precursor (Laminin B1 chain)
Laminin subunit gamma-1 precursor (Laminin B2 chain)
L-lactate dehydrogenase B chain
Low molecular weight phosphotyrosine protein phosphatase
Methylcrotonoyl-CoA carboxylase beta chain, mitochondrial precursor
Nicotinamide N-methyltransferase
Peroxiredoxin-2
Peroxiredoxin-6
Phosphomannomutase 2
Phosphoserine aminotransferase(2種)
Protein SET
Purine nucleoside phosphorylase(2種)
Pyridoxal kinase
Serum amyloid P-component precursor
SPRY domain-containing protein 4
Superoxide dismutase [Mn], mitochondrial precursor
Synaptic vesicle membrane protein VAT-1 homolog
Thioredoxin domain-containing protein 12 precursor
Transaldolase
Triosephosphate isomerase
Tryptophanyl-tRNA synthetase, cytoplasmic
Uncharacterized protein C7orf24
(ただし、上記のC(+)マーカーのうち、少なくともAnnexin A4 (Annexin-4)は、翻訳後修飾の有無の区別がつく方法を用いてマーカー分子定量を行う場合に用いられる。)
ASRGL1 protein
Parvalbumin alpha
Astrocytic phosphoprotein PEA-15
c-Myc-responsive protein Rcl
Cyclin-dependent kinase inhibitor 2A
F-actin capping protein subunit alpha-1
Gamma-synuclein (Breast cancer-specific gene 1 protein)
Glyoxalase domain-containing protein 4
Ras-related protein Rab-2A
Replication protein A 32 kDa subunit
S100 calcium-binding protein A13
Small ubiquitin-related modifier 2 precursor (SUMO-2)
Ubiquinol-cytochrome c reductase complex 11 kDa protein, mitochondrial precursor
Fatty acid-binding protein, liver
Serpin B5 precursor (Maspin)
Thioredoxin (ATL-derived factor)
Transgelin-2
6-phosphogluconolactonase
Ubiquinol-cytochrome-c reductase complex core protein I, mitochondrial precursor
Carbonic anhydrase 2
Delta(3,5)-Delta(2,4)-dienoyl-CoA isomerase
Thiosulfate sulfurtransferase
Annexin A4 (Annexin-4)
(ただし、上記のCM(+)マーカーのうち、Annexin A4 (Annexin-4)は、翻訳後修飾の有無の区別がつかない方法を用いてマーカー分子定量を行う場合に用いられる。)
RhoGDP-dissociation inhibitor 2
Transgelin
Barrier-to-autointegration factor
Cellular retinoic acid-binding protein 2
S100 calcium-binding protein A11
S100 calcium-binding protein A4
S100 calcium-binding protein A6
Selenium-binding protein 1
Transgelin-2
Calcyphosin
Fibrinogen beta chain precursor
Haloacid dehalogenase-like hydrolase domain-containing protein 2
Bis(5'-nucleosyl)-tetraphosphatase [asymmetrical]
Chloride intracellular channel protein 1
Monoamine-sulfating phenol sulfotransferase
Acyl-CoA-binding protein
Coactosin-like protein
SH3 domain-binding glutamic acid-rich-like protein
Transgelin
Uncharacterized protein C6orf115
このため、本発明においては、翻訳後修飾の区別をすることができる方法を用いて検出処理を行う場合と、翻訳後修飾の区別をすることができない方法を用いて検出処理を行う場合とで、発現パターンが異なるものがある。上述のタンパク質のうち、例えばAnnexin A4 (Annexin-4)は、翻訳後修飾の区別をすることができる方法を用いた場合はC(+)マーカーとして用いることができ、翻訳後修飾の区別をすることができない方法を用いた場合はCM(+)マーカーとして用いることができる。
本発明の、組織型に基づく上皮性卵巣癌の組織型の罹患の識別は、上記のようなプロファイリングによって得られた組織型識別マーカーを用いて行う。上皮性卵巣癌の組織型として、明細胞型、類内膜型、漿液性腺型、粘液性腺型の識別を行うためには、組織型識別マーカーとして上述<1>〜<14>のような発現パターンを示す生体分子の少なくとも1つを、以下のように用いることができる。
上記発現パターン<1>〜<4>のように、特定の1つの組織型において特異的に発現亢進を示す生体分子の場合、例えば、C(+)が有意に検出された(すなわち発現亢進を示した)ことが分かれば、それのみをもって、明細胞癌に罹患していることの有力な指標となる。また、E(+)が有意に検出されたことが分かれば、それのみをもって、類内膜癌に罹患していることの有力な指標となる。S(+)及びM(+)についても、同様のことがいえる。なお、同じ発現パターンを示す異なる生体分子を組み合わせて用いても良い。
上記発現パターン<5>〜<10>のように、特定の複数の組織型において特異的に発現亢進を示す生体分子は、他の発現パターンを示す生体分子と組み合わせて用いられる。
例えば、CS(+)とCM(+)とについて発現量を調べ、その両方が有意に検出されなかったことが分かれば、その組み合わせをもって、類内膜癌に罹患していることの有力な指標となる。
対象となる個人に由来する試料は、組織型識別マーカーについての検出処理に供される。検出処理においては、マーカー分子の分離精製工程や同定工程を適宜含め、当該マーカー分子の有意な検出の有無の調査(すなわち量的解析)が行われる。
マーカー分子の分離精製法としては、特に限定されない。従って、当業者によって選択されるあらゆる技術を用いることができる。そのような技術としては、例えば、電気泳動、クロマトグラフィー(例えばイオン交換、アフィニティ、及びサイズ排除カラムクロマトグラフィーなど)、遠心分離、免疫沈降、溶解度差を利用した分離精製等が挙げられる。
マーカー分子の同定法としても、特に限定されない。従って、当業者によって選択されるあらゆる技術を用いることができる。そのような技術としては、ペプチドマスフィンガープリンティングなどの質量分析法を用いた方法が挙げられる。
マーカー分子の定量法としても、特に限定されない。従って、当業者によって選択されるあらゆる技術を用いることができる。そのような技術としては、例えば、各種染色法(蛍光、化学発光、発色による染色法を含む)による解析法、生体特異的親和性に基づく解析法、その他の定量解析法から任意に選ばれる。
有意な検出の有無は、サンプル中のマーカーの定量値と、当該マーカーの基準値とを比較することによって判断する。比較を行うための方法としては特に限定されない。相対比較を行う方法や、相関・近似解析が可能な方法を、当業者が適宜決定することができる。有意な検出の有無は量的解析によって調べられるため、上記のプロファイリングの変動解析において行われた方法に準じて行うことができる。
近似を数値化できる手法は、対象となるサンプルが組織型の混在したケースである場合にも対応しやすいという点で好ましい。
マーカーの基準値としては、当該マーカーの「各組織型に代表的な定量値」(具体的には各組織型における平均値)を採用することができる。
上記のプロファイリングにおいては、マーカー分子が、組織型間で相対的にどのような有意差をもって、絶対値としてどの程度のレベルで発現するかが、実際の定量により見出される。そして、そのように見出された、各組織型における発現量の絶対値が、「各組織型に代表的な定量値」としてプロファイルになる。
上記の方法は、プロファイルを利用して包括的に近似を求める方法であり、ある程度の数の複数のマーカーを用いて行われる。これに対し、用いることができるマーカーが少数(例えば1種〜5種)で、定量及び評価をそれぞれのマーカーについて単独で行う場合は、以下のように、マーカーの基準値として、閾値を利用する方法を採用することができる。
以下に、組織型に基づく上皮性卵巣癌の罹患の識別方法のより具体的な形態を挙げる。
[6−1.二次元電気泳動を用いた組織型の分子タイピング]
この方法は、術摘した癌組織に対して好ましく行うことができる。基本的には、本発明者らによって行われたプロファイリングの方法に準ずる。従って、自動化されたスキームで行われることが好ましい。このような方法においては摘出した癌組織を、−80℃以下、好ましくは液体窒素環境下で粉砕し、二次元電気泳動に供し、展開後のゲルを染色剤により可視化する。具体的なプロトコルは、当業者であれば容易に選択することができる。可視化されたスポットのうち、発現プロファイルを構成する全てのタンパク質について、スポット強度を定量する。これによって得られた定量値と、発現プロファイルにおいてデータベース化された「各組織型に代表的な定量値」(具体的には各組織型における平均値)とを比較し、統計解析によって検定を行う。具体的には、近似又は相関解析によって検定を行うことが好ましい。具体的には、t検定等が挙げられる。これにより、一番近似した組織型を決定する。
この方法は、術摘した癌組織に対して好ましく行うことができる。ELISA法の具体的なプロトコルは、当業者であれば容易に選択することができる。定量は、発現プロファイルを構成するタンパク質を抗原とし、その抗体を用いて簡便に行うことができる。発現プロファイルを構成するすべてのタンパク質について定量を行わなくとも良く、その中でも特異性の高いタンパク質、或いは挙動が安定しているタンパク質を適宜選択すればよい。選択する数としては、5〜10程度とすることができる。この場合も、上記の方法1と同様
、得られた定量値と、発現プロファイルにおいてデータベース化された「各組織型に代表的な定量値」(具体的には各組織型における平均値)とを比較し、統計解析によって検定を行う。
この方法は、術摘した癌組織の組織切片に対して好ましく行うことができる。組織切片としては、凍結切片、及びパラフィンやその他の包埋剤による包埋切片など、あらゆる形態の切片が許容される。免疫組織染色法の具体的なプロトコルは、当業者であれば容易に選択することができる。定量は、発現プロファイルを構成するタンパク質を抗原とし、その抗体を用いて簡便に行うことができる。発現プロファイルを構成するすべてのタンパク質について定量を行わなくとも良く、その中でも特異性の高いタンパク質、或いは挙動が安定しているタンパク質を適宜選択すればよい。選択する数としては、5〜30程度とすることができる。染色の度合いから、病理部分およびその組織型診断を行うことができる。プロファイルにおいてデータベース化された「各組織型に代表的な定量値」に対応する「代表的な染色像」を元に、目視或いは画像解析ツールなどにより、染色度合いが最も近似した組織型を決定する。
この方法は、上記の方法3に類するものである。方法3で挙げたような組織切片に対して好ましく行うことができる。MALDI-TOF質量分析器を用いて、組織切片上から直接的にマーカー分子を検出する。組織切片上のレーザーの照射位置と検出したマーカー分子の強度とを対応させ、マーカー分子の分布を画像として出力する。マーカー分子の強度から、病理部分およびその組織型診断を行うことができる。この場合も、上記の方法1と同様、得られたマーカー分子の定量値と、発現プロファイルにおいてデータベース化された「各組織型に代表的な定量値」(具体的には各組織型における平均値)とを比較し、統計解析によって検定を行う。
この方法は、採取可能な体液に対して好ましく行われる。体液としては、血液、腹水などが代表的なものとして挙げられる。この方法においては、発現プロファイルを構成するタンパク質のうち、体液中からも検出が可能であること;検出した分子が癌組織由来であること;及び癌組織での発現量と体液からの検出量が相関するものであること、の3つの条件を満たすタンパク質をマーカーとし、それに対する抗体を用いて定量を行う。この場合も、上記の方法1と同様、得られたマーカー分子の定量値と、発現プロファイルにおいてデータベース化された「各組織型に代表的な定量値」(具体的には各組織型における平均値)とを比較し、統計解析によって検定を行う。
この方法は、上記の方法5に類するものである。方法5で挙げたような体液に対して好ましく行われる。上記5において用いられるマーカー分子を抗原とした抗体を担体(好ましくはビーズ)に固定し、免疫沈降によりマーカー分子を濃縮する。濃縮された分子をビーズごとMALDI-TOF質量分析に供し、定量的に検出する。この場合も、上記の方法1と同様、得られたマーカー分子の定量値と、発現プロファイルにおいてデータベース化された「各組織型に代表的な定量値」(具体的には各組織型における平均値)とを比較し、統計解析によって検定を行う。
本発明の方法は、本発明の腫瘍マーカーを単独で測定してもよいし、他のいかなる腫瘍マーカー(例えばCA-125やCA-19-9など)と組み合わせて測定しても良い。従って、本発明の方法は、本発明の腫瘍マーカーのレベルと同様に他の腫瘍マーカーのレベルを測定する工程を含んでいてよい。
本発明の組織型識別用マーカーのうち、特定の1つの組織型の上皮性卵巣癌に罹患している癌患者体内で発現量が多いタンパク質を含む腫瘍マーカーを用いることによって、特定の組織型の癌を処理するための薬剤組成物が提供されうる。
患者から切除され、組織病理学的観点から正確に組織型診断が下された上皮性卵巣癌の病理組織(4組織型41検体:明細胞癌13検体、類内膜癌11検体、漿液性腺癌11検体、粘液性腺癌6検体)を用いたプロファイリングを行った。
切除された病理組織(液体窒素中で保管しておいたもの)を、液体窒素存在下で適切なサイズの破片に破砕した。破砕された組織検体を、スクリューキャップつきのマイクロチューブに移し、約5倍重量のLysis buffer(50 mM HEPES-NaOH pH 7.5, 100 mM NaCl, 2% CHAPS, 1% Triton X-100)中に懸濁させた。縣濁液のままBradford法にて濃度を定量し、タンパク質300μg分の検体をトリクロロ酢酸沈殿にて脱塩処理し、二次元電気泳動用の試料とした。
洗浄された沈殿を、一次元目の等電点電気泳動用バッファ(6 M urea, 2 M thiourea, 3 % CHAPS, 1 % Triton X-100、0.5% IPGバッファ、及び1.2% DeStreak Reagent)を250μl添加して再可溶化し。また、その一次元目等電点電気泳動用バッファを用いて、Immobiline DryStrip, pH 3-10 NL, 13cm (GE Healthcare)を6時間かけて膨潤させた。膨潤されたストリップゲルに対して、50V - 4時間、150V - 1時間、及び5000V - 17.5時間の条件で等電点電気泳動を行った。
泳動後のストリップゲルを一旦-80℃で保存した後、平衡化バッファ(375 mM Tris-HCl pH 8.8, 6 M urea, 2 % SDS, 20 % glycerol)にて30分間平衡化し、二次元目のゲル(tris-HCl 10-18 % グラジエント, 13 cm x 13 cm, 1 mm 厚)上部にアプライして、ダイフロントがゲル端に到達するまで定電流で二次元目方向へ泳動を行った。
電気泳動後のゲルは、CBB-G250を含んだ染色剤により可視化した。
プロジェクトマネジメント、二次元電気泳動、PMFマネジメント、及びデータベースサーチの工程を経て、サンプル情報、二次元画像解析ソフトウェアにて数値化した10219のスポットに関する情報(ゲル画像、及びゲル上のスポット位置情報)、MSスペクトルデータ、及びデータベース検索結果)を、インハウスデータサーバ(SOLPHI、島津製作所から販売)にインポートした。その結果、11検体について、スポットに関する全ての必要な情報が視覚的にリンクされた統合2Dマップを得た。この統合2Dマップは後のデータマイニングに有用である。
分子的な手法を用いて未知の卵巣癌組織の組織型を診断する場合において、上述した80のマーカー候補のうちどの分子が決定的な役割を果たすのかを絞りこむため、統計解析ソフトSPSS(SPSS Inc.)を利用し、決定木を用いた分類予測モデルを構築した。従属変数は4種の組織型を、独立変数はマーカー候補80スポット分の定量値を3段階(低発現、高発現、特に高発現)にスケール化して用いた。スケール化する際の基準値は、プロファイルにより求められた各マーカー候補の発現パターンと平均定量値をベースに、適宜決定された。
実施例1で二次元電気泳動に供されたものと同じ組織抽出物(粘液性腺癌1検体除く)を用いて、ウェスタンブロッティングによる定量的検出を行った。抗体は、抗Annexin-A4 (D-2, Santa Cruz Biotechnology)、抗Maspin precursor (G167-70, BD Transduction Laboratories)、抗Cellular retinoic acid-binding protein 2 (Bethyl Laboratories)及び抗Phosphoserine aminotransferase (Proteintech Group Inc.)が用いられた。
Annexin-A4 CM+(P<0.0001)
Maspin precursor M+(P<0.0001)
Cellular retinoic acid-binding protein 2 S+(P<0.0001)
Phosphoserine aminotransferase C+ (P<0.0001)
で、それぞれ14パターン中最も低いP値が得られた。さらに、ウェスタンブロッティングでの定量値を二次元電気泳動での定量値と同じスケールにのせ、図7−10(前述)において三角でプロットして示した。各タンパク質の、各サンプルにおける2つの定量値の相関係数は、それぞれr=0.5以上でありP<0.001水準で有意であった。これにより、実施例1におけるタンパク質の同定結果及び発現量比が裏付けられた。
Claims (4)
- 対象となる個人の明細胞型上皮性卵巣癌の識別を補助する方法であって、
対象となる個人に由来する卵巣がん組織サンプルをAnnexin A4 の検出に供し、
明細胞型、類内膜型、漿液性腺型及び粘液性腺型の各卵巣がん組織型の基準値と比較してAnnexin A4 が発現亢進しているか否かを決定し、
Annexin A4 が発現亢進している場合に、卵巣がん組織サンプルが明細胞型であると識別することを含む方法。 - 対象となる個人の粘液性腺型上皮性卵巣癌の識別を補助する方法であって、
対象となる個人に由来する卵巣がん組織サンプルをMaspin precursor の検出に供し、
明細胞型、類内膜型、漿液性腺型及び粘液性腺型の各卵巣がん組織型の基準値と比較してMaspin precursorが発現亢進しているか否かを決定し、
Maspin precursorが発現亢進している場合に、卵巣がん組織サンプルが粘液性腺型であると識別することを含む方法。 - 対象となる個人の漿液性腺型又は粘液性腺型上皮性卵巣癌の識別を補助する方法であって、
対象となる個人に由来する卵巣がん組織サンプルをCellular retinoic acid-binding protein 2の検出に供し、
明細胞型、類内膜型、漿液性腺型及び粘液性腺型の各卵巣がん組織型の基準値と比較してCellular retinoic acid-binding protein 2が発現亢進しているか否かを決定し、
Cellular retinoic acid-binding protein 2が発現亢進している場合に、卵巣がん組織サンプルが漿液性腺型又は粘液性腺型であると識別することを含む方法。 - 対象となる個人の明細胞型上皮性卵巣癌の識別を補助する方法であって、
対象となる個人に由来する卵巣がん組織サンプルをPhosphoserine aminotransferase の検出に供し、
明細胞型、類内膜型、漿液腺型及び粘液性型の各卵巣がん組織型の基準値と比較してPhosphoserine aminotransferaseが発現亢進しているか否かを決定し、
Phosphoserine aminotransferaseが発現亢進している場合に、卵巣がん組織サンプルが明細胞型であると識別することを含む方法。
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JPN6008012813; J Proteome Res., 2006, Vol.5, No.5, p.1082-1090. * |
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JPN6008012815; 山形県立病院医学雑誌, 2005, Vol.39, No.2, p.128-130. * |
JPN6008012817; 日本産婦人科学会雑誌, 2007.02.01発行, Vol.59, No.2, p.409(P1-181) * |
JPN6008012819; Genome Inform., 2002, Vol.13, p.51-60. * |
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