JP5277431B2 - 蛍光色素含有ナノシリカ粒子およびその調製方法 - Google Patents
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(I)蛍光色素含有ナノシリカ粒子の調製方法
(I-1).下記の工程(a)〜(d)を有する、蛍光色素含有ナノシリカ粒子の調製方法;
(a)ナノシリカ粒子(1)の表面に、そのOH基を介して蛍光色素結合基を導入する工程、
(b)上記工程で得られたナノシリカ粒子(2)に、蛍光色素分子を有する化合物(3)を反応させて、ナノシリカ粒子の表面に蛍光色素を結合させる工程、
(c)上記工程で得られた蛍光色素結合ナノシリカ粒子(4)に、シリカ化合物(5)を反応させて、当該ナノシリカ粒子(4)表面に上記シリカ化合物(5)を導入する工程、および
(d)上記工程で得られたナノシリカ粒子(6)にシラン化合物(7)を反応させて、当該ナノシリカ粒子(6)の表面にシリカ皮膜を形成する工程。
(I-2).上記「蛍光色素分子を有する化合物(3)」としてエステル結合(-CO-O-)を介して蛍光色素分子とスクシンイミドとが結合してなるスクシンイミジルエステル化合物(3)」、
上記「シリカ化合物(5)」として「トリアルコキシシリル基を有するシリカ化合物(5)」、および
上記「シラン化合物(7)」として「テトラアルコキシシラン(7)」を用いる、
(I-1)に記載する蛍光色素含有ナノシリカ粒子の調製方法。
(I-3).上記(a)の工程の後に、下記の工程(a’)を有し、次いで当該工程(a’)で得られたナノシリカ粒子(2’)に対して上記工程(b)を行う、(I-1)または(I-2)に記載する蛍光色素含有ナノシリカ粒子の調製方法:
(a’) 蛍光色素結合基と結合する化合物(8)を、上記工程(a)で得られたナノシリカ粒子(2)と反応させて、当該ナノシリカ粒子(2)表面の蛍光色素結合基の一部を保護する工程。
(I-4).蛍光色素結合基が、アミノ基、カルボキシル基、イソチオシアネート基またはエステル基である、(I-1)乃至(I-3)のいずれかに記載する蛍光色素含有ナノシリカ粒子の調製方法。
(II-1).ナノシリカ粒子に蛍光色素分子が結合した蛍光色素含有ナノシリカ粒子であって、
前記ナノシリカ粒子の粒径が20nm以上、30nm未満であり、且つ、
前記ナノシリカ粒子1粒子に対して、100分子以上の蛍光色素分子が結合していることを特徴とする蛍光色素含有ナノシリカ粒子。
(II-2).ナノシリカ粒子に蛍光色素分子が結合した蛍光色素含有ナノシリカ粒子であって、
前記ナノシリカ粒子の粒形が10nm以上、20nm未満であり、且つ
前記ナノシリカ粒子1粒子に対して、50分子以上の蛍光色素分子が結合していることを特徴とする蛍光色素含有ナノシリカ粒子。
(II-3).ナノシリカ粒子に蛍光色素分子が結合した蛍光色素含有ナノシリカ粒子であって、
前記ナノシリカ粒子の粒径が10nm未満であり、且つ、
前記ナノシリカ粒子1粒子に対して、2分子以上の蛍光色素分子が結合していることを特徴とする蛍光色素含有ナノシリカ粒子。
(II-4).ナノシリカ粒子に蛍光色素分子が結合した蛍光色素含有ナノシリカ粒子であって、
その分散水溶液での蛍光強度が、当該ナノシリカ粒子に結合している前記蛍光色素分子の濃度と同じ濃度で、前記ナノシリカ粒子に結合していない遊離の蛍光色素分子が分散している水溶液での蛍光強度よりも高いことを特徴とする蛍光色素含有ナノシリカ粒子。
(II-5).ナノシリカ粒子に結合している蛍光色素分子がさらにシリカ層で覆われてなるものである、(II-1)乃至(II-4)のいずれかに記載する蛍光色素含有ナノシリカ粒子。
(II-6).上記(I-1)乃至(I-4)のいずれかの方法によって調製されるものである、(II-1)乃至(II-5)のいずれかに記載する蛍光色素含有ナノシリカ粒子。
本発明の蛍光色素含有ナノシリカ粒子の調製方法は、核となるナノシリカ粒子(1)を原料として用いる方法であって、下記(a)〜(d)の工程を有することを特徴とする。
(a)ナノシリカ粒子(1)の表面に、そのOH基を介して蛍光色素結合基を導入する工程、
(b)上記工程で得られたナノシリカ粒子(2)に、蛍光色素分子を有する化合物(3)を反応させて、ナノシリカ粒子の表面に蛍光色素を結合させる工程、
(c)上記工程で得られた蛍光色素結合ナノシリカ粒子(4)に、シリカ化合物(5)を反応させて、当該蛍光色素結合ナノシリカ粒子(4)表面の、蛍光色素と結合していない蛍光色素結合基に上記シリカ化合物(5)を導入する工程、および
(d)上記工程で得られたナノシリカ粒子(6)に、シラン化合物(7)を反応させて、当該ナノシリカ粒子(6)の表面にシリカ皮膜を形成する工程。
本発明の蛍光色素含有ナノシリカ粒子の調製において原料として使用するナノシリカ粒子(1)は、その粒径(直径)を特に制限するものではない。粒径(直径)100nm以下、好ましくは50nm以下、より好ましくは30nm以下、さらに好ましくは20nm以下、とくに好ましくは10nm以下といった微小な蛍光色素含有ナノシリカ粒子を調製するという本発明の目的から、通常30nm未満、好ましくは20nm未満、より好ましくは10nm未満、さらに好ましくは9nm以下、8nm以下、5nm以下、とくに好ましくは3nm以下を挙げることができる。
工程(b)は、上記工程(a)で調製された、表面に蛍光色素結合基を有するナノシリカ粒子(2)に、蛍光色素分子を有する化合物(3)を反応させて、ナノシリカ粒子の表面に蛍光色素を結合させる工程である。
具体的には、上記Rとしては、上記式に示すように、側鎖として-COOR’基(R’は水素原子または任意の基を意味する)を結合することによってカルボン酸またはその誘導体を形成するものを挙げることができる。上記において化合物(0)として示されるカルボン酸またはその誘導体としては、例えば、5-カルボキシ-フルオレセイン、6-カルボキシ-フルオレセイン、5(6)-カルボキシ-フルオレセイン、6-カルボキシ-2’,4,4’,5’,7,7’-ヘキサクロロフルオレセイン、6-カルボキシ-2’,4,7,7’-テトラクロロフルオレセイン、6-カルボキシ-4’,5’-ジクロロ-2’,7’-ジメトキシフルオレセイン、5-カルボキシ-ローダミン、6-カルボキシ-ローダミン、5(6)-カルボキシ-ローダミン、Alexa Fluor 350 カルボン酸、Alexa Fluor 405 カルボン酸、Alexa Fluor 430 カルボン酸、Alexa Fluor 488 カルボン酸、Alexa Fluor 500カルボン酸、Alexa Fluor 514カルボン酸、Alexa Fluor 532 カルボン酸、Alexa Fluor 546カルボン酸、Alexa Fluor 555カルボン酸、Alexa Fluor 568 カルボン酸、Alexa Fluor 594 カルボン酸、Alexa Fluor 610 カルボン酸、Alexa Fluor 633カルボン酸、Alexa Fluor 647カルボン酸、Alexa Fluor 660カルボン酸、Alexa Fluor 680 カルボン酸、Alexa Fluor 700 カルボン酸、Alexa Fluor 750 カルボン酸、Alexa Fluor 790カルボン酸、等を挙げることができる。好ましくは赤色色素である5-カルボキシ-ローダミン、6-カルボキシ-ローダミン、5(6)-カルボキシ-ローダミンである。
工程(c)は、上記工程(b)で調製された蛍光色素結合ナノシリカ粒子(4)にシリカ化合物(5)を反応させる工程である。かかる処理によって、当該蛍光色素結合ナノシリカ粒子(4)の表面の、蛍光色素と反応していない蛍光色素結合基〔アミノ基(-NH2)、カルボキシル基(-COOH)、イソチオシアネート基(-N=C=S)またはエステル基(-COOR)〕に、上記シリカ化合物(5)を導入することができる。なお、当該シリカ化合物(5)としては、トリアルコキシシリル基〔-Si(OR)3〕を有するシリカ化合物(5)、ケイ酸ナトリウム水溶液(〜27%SiO2)、および3-(トリメトキシシリル)プロピルメタクリレートを挙げることができる。
工程(d)は、上記工程(c)で調製されたナノシリカ粒子(6)の表面に形成されたシリル基、特に好ましくはトリアルコキシシリル基〔-Si(OR)3〕に、シラン化合物(7)を反応させる工程である。かかるシラン化合物(7)として、好適には、3-(トリメトキシシリル)プロピルメタクリレート、およびテトラアルコキシシラン〔Si(OR)4〕を挙げることができ、この場合の反応を下式に示す。なお、ここでテトラアルコキシシラン(7)としては、好ましくはテトラエトキシシラン(TEOS)を挙げることができる。
本発明は、高い蛍光強度を有する蛍光色素含有ナノシリカ粒子を提供する。かかる蛍光色素含有ナノシリカ粒子は、核となるナノシリカ粒子(便宜上、以下「核粒子」という)に蛍光色素分子が結合してなるものである。さらに、本発明の蛍光色素含有ナノシリカ粒子は、当該核粒子に結合した蛍光色素分子がさらにシリカ層で覆われてなることを特徴とする。
CNS:3-チオシアナトプロピルトリエトキシシラン
APS:アミノプロピルエトキシシラン
TEOS:テトラエトキシシラン
YM100:ろ過膜アミコンYM100(分画分子量100kDa)(日本ミリポア社製)
YM10:ろ過膜アミコンYM10(分画分子量10kDa)(日本ミリポア社製)
DMSO:ジメチルスルホキシド(dimethyl sulfoxide)
HS-30:核粒子として使用した粒径7nmのナノシリカ粒子(LUDOX HS-30 colloidal silica、30%懸濁液)
HS-40:核粒子として使用した粒径12nmのナノシリカ粒子(LUDOX HS-40 colloidal silica、40%懸濁液)
TM-50:核粒子として使用した粒径22nmのナノシリカ粒子(LUDOX TM-50 colloidal silica、50%懸濁液)
WSCI:1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide, hydrochloride
NHS:N-hydroxy-succinimide
実施例1
(1)蛍光色素含有ナノシリカ粒子の調製
市販のナノシリカ粒子の懸濁液〔(1)粒径7nm:LUDOX HS-30 colloidal silica、30%懸濁液、(2)粒径12nm:LUDOX HS-40 colloidal silica、40%懸濁液、(3)粒径22nm:LUDOX TM-50 colloidal silica、50%懸濁液〕を10倍希釈した水溶液を1μl採取し、蒸留水1mlに加えた後、珪酸ナトリウム水溶液〔NaSixO2-x(0.54% SiO2)水溶液〕を10〜100μl加えて、約60℃で混合撹拌処理して、ナノシリカ粒子の表面を活性化した。このナノシリカ粒子含有溶液に、3-チオシアナトプロピルトリエトキシシラン(CNS)とアミノプロピルエトキシシラン(APS)との混合液1μL(CNSとAPSを体積比1:1の割合で混合した溶液20μLとDMSO 200μlとの混合液220μLの1μL)を加えて、スペーサー溶液10μLを加えて撹拌し、約60℃の条件で10分〜1時間混合撹拌して反応させた。なお、スペーサー溶液として、安息香酸3.7mg、WSCI 1mg、NHS 3.7mg、およびAPS 1.8μlをDMSO 1mlに加えて室温で1時間撹拌反応させて調製した安息香酸シリケート(=スペーサー)を含む溶液を用いた。
(2-1) (1)粒径7nmのナノシリカ粒子(HS-30)、(2)粒径12nmのナノシリカ粒子(HS-40)、および(3)粒径22nmのナノシリカ粒子(TM-50)を原料として上記で調製した、ローダミン含有ナノシリカ粒子(粒径30nm以下、および粒径10nm以下)について、それを水に分散させた水溶液(水分散液)を調製し、(a)当該水分散液中のローダミン含有ナノシリカ粒子の濃度([SiO2]p)、(b) 当該水分散液中のローダミンの濃度([Rhodamin])、(c) ローダミン含有ナノシリカ粒子1粒子あたりのローダミン色素分子の数、および(d)当該粒子濃度における蛍光強度を測定した。なお、(d)蛍光強度は下記のようにして測定し、これからLambert-Beerの法則から(b) 当該水分散液中のローダミンの濃度([Rhodamin])を算出して、前述する式(1)に従って(c)ローダミン含有ナノシリカ粒子1粒子あたりのローダミン色素分子の数を求めた。
容器に、蛍光色素含有ナノシリカ粒子の分散水溶液を0.1ml採取して、蛍光分光光度計(島津RF5300PC)を用いて蛍光スペクトルを測定し(測定条件:SLIT(EX/EM)=1.5NM/1.5NM, Low sensitivity)、その最大ピークの蛍光強度を求める。なお、蛍光強度は、上記蛍光分光光度計に限らず、1μL蛍光スペクトロメーター(例えば、ナノドロップ社製ND-3300)を用いて測定することもできる。この場合、被験試料として蛍光色素含有ナノシリカ粒子の分散水溶液1μLを用いる。
に増加した。このことから、成人胸腺細胞に本発明の蛍光色素含有ナノシリカ粒子が吸着し、濃縮された結果、蛍光強度が増加したと考えられた。
(1)蛍光色素含有ナノシリカ粒子の調製
粒径約3nmのナノシリカ粒子および粒径22nmのナノシリカ粒子をそれぞれ原料とし、蛍光色素として上記実施例1で使用したローダミンに代えて、フルオレセイン、DY485、DY521(以上、DYOMICS社)またはAlexa647(Molecular Probes社)を用いて、実施例1の方法に従って、同様に反応させて、蛍光色素含有ナノシリカ粒子を調製した。なお、DY485およびDY521の化学式を下式に示す。
斯くして得られた、蛍光色素含有ナノシリカ粒子の特性(1粒子あたりの蛍光色素の分子数、蛍光強度など)を実施例1の方法に従って求めた。結果を表5に示す。
市販のナノシリカ粒子の懸濁液〔(1)粒径7nm:LUDOX HS-30 colloidal silica、30%懸濁液、(2)粒径12nm:LUDOX HS-40 colloidal silica、40%懸濁液、(3)粒径22nm:LUDOX TM-50 colloidal silica、50%懸濁液〕を10倍希釈した水溶液を1μl採取し、蒸留水900μLまたは1mlに加えた後、珪酸ナトリウム水溶液〔NaSixO2-x(0.54% SiO2)水溶液〕を10〜100μl, 1μLスペーサー溶液10μLを加えて撹拌し、室温で混合撹拌処理して、ナノシリカ粒子の表面を活性化した。なお、スペーサー溶液として、安息香酸3.7mg、WSCI 1mg、NHS 3.7mg、およびAPS 1.8μlをDMSO 1mlに加えて室温で1時間撹拌反応させて調製した安息香酸シリケート(=スペーサー)を含む溶液を用いた。次いで、これにアミノプロピルエトキシシラン(APS)を1μlと3-Thiocyanato propyl triethoxy silane (CNS)を2μl加えてから、室温の条件で10分〜1時間混合撹拌して反応させた。
ローダミン含有ナノシリカ粒子1粒子中に含まれるローダミンの分子数([Rhodamin]/[SiO 2 ]p)
No.73’(原料HS-30使用):2
No.75’(原料HS-40使用):12
No.76’(原料TM-50使用):190。
上記実施例3で調製したローダミン含有ナノシリカ粒子No.73’(原料HS-30使用)について、(1)粒径、および(2)水分散液中での蛍光寿命を評価した。
(株)東レリサーチセンター形態科学研究部に依頼して、ローダミン含有ナノシリカ粒子No.73’(原料HS-30使用)の透過電子顕微鏡像(TEM像)を得るとともに、TEM像をネガティブ染色(PTA(リンタングステン酸)染色)した。その結果を、図7に示す。図7からわかるように、粒子が多くの分岐をもち、数珠状に連なって凝集しているのが観察された。一次粒子径は約5nm〜13nmであり、不定形であった。次いで、得られたTEM像について、目視で粒子を判別し、粒度分布を分析した。結果を図8に示す。一次粒子径は、8.2±0.5 nm (n=146)であった。
(株)東レリサーチセンターに依頼して、ローダミン含有ナノシリカ粒子No.73’(原料HS-30使用)の水分散液の蛍光寿命を測定した〔測定装置:NAES-1100時間分解分光光度計(堀場製作所)、励起波長550nm、積算時間6時間〕。結果を図9に示す。
市販のナノシリカ粒子の懸濁液〔(1)粒径7nm:LUDOX HS-30 colloidal silica、30%懸濁液、(2)粒径12nm:LUDOX HS-40 colloidal silica、40%懸濁液、(3)粒径22nm:LUDOX TM-50 colloidal silica、50%懸濁液〕を10倍希釈した水溶液を1μl採取し、これに10mMのクエン酸10μl、5μl、10μl、または100μlを加え、蒸留水900μLまたは1mlに加えた後、珪酸ナトリウム水溶液〔NaSixO2-x(0.54% SiO2)水溶液〕を10〜100μl ,1μLスペーサー溶液10μLを加えて撹拌し、室温で混合撹拌処理して、ナノシリカ粒子の表面を活性化した。なお、スペーサー溶液として、安息香酸3.7mg、WSCI 1mg、NHS 3.7mg、およびAPS 1.8μlをDMSO 1mlに加えて室温で1時間撹拌反応させて調製した安息香酸シリケート(=スペーサー)を含む溶液を用いた。次いで、これにアミノプロピルエトキシシラン(APS)を1μlと3-Thiocyanato propyl triethoxy silane (CNS)を2μl加えてから、室温の条件で10分〜1時間混合撹拌して反応させた。
2.0mgの5(6)-Carboxy-fluorecein-N-hydroxy succinimide ester (FLUOS, Roche Co. Ltd.)を1.5mlのDMSOに溶解した溶液から10μLを採取して、フルオレセイン含有ナノシリカ粒子の調製に用いた。まず、1μLのナノシリカ粒子の懸濁液〔粒径7nm:LUDOX HS-30 colloidal silica、1/10希釈〕に1mLの蒸留水を加えて混合した後、珪酸ナトリウム水溶液(NaSixO2-x(0.54wt%のSiO2)水溶液)10μL、APSとCNSの混合溶液(10μL+10μL in 200μL DMSO)1μL、スペーサー溶液10μLを加えて撹拌し、約60℃で15分加熱しながらさらに撹拌混合した。なお、スペーサー溶液として、安息香酸3.7mg、WSC 1mg、NHS 3.7mg、およびAPS 1.8μlをDMSO 1mlに加えて室温で1時間撹拌反応させて調製した安息香酸シリケート(=スペーサー)を含む溶液を用いた。
ローダミン含有シリカ化合物の調製、及びこれを用いたナノシリカ粒子〔ローダミン含有ナノシリカ粒子〕(化学結合型)の調製
(1)ローダミン含有シリカ化合物(化学結合型)の調製
下式に従って、ローダミン含有シリカ化合物を調製した。
具体的には、まずスクシンイミジルエステル化合物として、エステル結合を介してローダミンとスクシンイミドが結合してなる5-carboxyltetramethylrhodamin succinimidyl ester(9)(Molecular Probes社製)約5mgを、1mlのDMSO溶液に溶解した後、アミノ基を有するシリカ化合物として3-(アミノプロピル)トリエトキシシラン(APS)(2) を、上記スクシンイミジルエステル化合物(9)と等モルになるように約1.2μl加えて、約1時間スターラーピースを用いて攪拌して反応させて、スクシンイミジルエステル化合物(9)のカルボニル基とシリカ化合物(2)のアミノ基がアミド結合してなるローダミン(標識分子)含有シリカ化合物(10)を調製した。
下式に従って、ローダミン含有シリカ化合物(10)からローダミン含有ナノシリカ粒子(12)を調製した。
具体的には、上記で得られた反応溶液〔ローダミン含有シリカ化合物(10)〕のDMSO溶液0.05mlに、テトラエトキシシラン(TEOS)0.05ml、水1ml及びエタノール3.95mlを加えて(エタノール:水=4:1、容量比)、これに約30%のアンモニア水0.1mlを加えて、一日撹拌しながら室温条件下に放置した。得られた溶液(反応終了液)を、限外ろ過装置〔アミコン(登録商標)攪拌式セル〕(フィルター;UFディスクYM100ウルトラセルRC100K NMWL)(販売会社:MILLIPORE)〔Nominal Molecular Weight Limit(NMWL):100 kDa〕を使用してろ過し、蒸留水を使用したろ過洗浄を数回繰り返して、ローダミン含有ナノシリカ粒子(11)(粒径20nm)を調製した。さらにこのろ液をさらにYM-10でろ過洗浄して、粒径10nm程度のローダミン含有ナノシリカ粒子を調製した。
Claims (9)
- 下記の工程(a)〜(d)を、(a),(b),(c)及び(d)、または(a),(c),(b)及び(d)の順にて実施する、蛍光色素含有ナノシリカ粒子の調製方法;
(a)ナノシリカ粒子(1)の表面に、そのOH基を介して蛍光色素結合基を導入する工程、
(b)工程(a)または(c)で得られたナノシリカ粒子(2)に、蛍光色素分子を有する化合物(3)を反応させて、ナノシリカ粒子の表面に蛍光色素を結合させる工程、
(c)工程(b)または(a)で得られた蛍光色素結合ナノシリカ粒子(4)またはナノシリカ粒子(2)に、トリアルコキシシリル基を有するシリカ化合物(5)を反応させて、当該ナノシリカ粒子(4)または(2)の表面に上記シリカ化合物(5)を導入する工程、および
(d)工程(a),(b)及び(c)または(a),(c)及び(b)で得られたナノシリカ粒子(6)にテトラアルコキシシラン(7)を反応させて、当該ナノシリカ粒子(6)の表面にシリカ皮膜を形成する工程。 - 上記「蛍光色素分子を有する化合物(3)」として「エステル結合(-CO-O-)を介して蛍光色素分子とスクシンイミドとが結合してなるスクシンイミジルエステル化合物(3)」及び上記「トリアルコキシシリル基を有するシリカ化合物(5)」として3−チオシアナトプロピルトリエトキシシランまたはアミノプロピルトリエトキシシランの少なくとも一方を用いる、
請求項1に記載する蛍光色素含有ナノシリカ粒子の調製方法。 - 上記工程(a)または工程(a)及び(c)の後に、下記の工程(a’)を有し、次いで当該工程(a’)で得られたナノシリカ粒子(2’)に対して上記工程(b)を行う、請求項1または2に記載する蛍光色素含有ナノシリカ粒子の調製方法:
(a’) 蛍光色素結合基と結合する化合物(8)を、上記工程(a)または工程(a)及び(c)で得られたナノシリカ粒子(2)と反応させて、当該ナノシリカ粒子(2)表面の蛍光色素結合基の一部を保護する工程。 - 蛍光色素結合基が、アミノ基、カルボキシル基、イソチオシアネート基またはエステル基である、請求項1乃至3のいずれかに記載する蛍光色素含有ナノシリカ粒子の調製方法。
- ナノシリカ粒子に蛍光色素分子が結合し、さらに当該蛍光色素分子がシリカ層で覆われてなる蛍光色素含有ナノシリカ粒子であって、
前記ナノシリカ粒子の粒径が20nm以上、30nm未満であり、且つ、
前記ナノシリカ粒子1粒子に対して、100分子以上の蛍光色素分子が結合していることを特徴とする蛍光色素含有ナノシリカ粒子。 - ナノシリカ粒子に蛍光色素分子が結合し、さらに当該蛍光色素分子がシリカ層で覆われてなる蛍光色素含有ナノシリカ粒子であって、
前記ナノシリカ粒子の粒径が10nm以上、20nm未満であり、且つ
前記ナノシリカ粒子1粒子に対して、50分子以上の蛍光色素分子が結合していることを特徴とする蛍光色素含有ナノシリカ粒子。 - ナノシリカ粒子に蛍光色素分子が結合し、さらに当該蛍光色素分子がシリカ層で覆われてなる蛍光色素含有ナノシリカ粒子であって、
前記ナノシリカ粒子の粒径が10nm未満であり、且つ、
前記ナノシリカ粒子1粒子に対して、2分子以上の蛍光色素分子が結合していることを特徴とする蛍光色素含有ナノシリカ粒子。 - ナノシリカ粒子に蛍光色素分子が結合し、さらに当該蛍光色素分子がシリカ層で覆われてなる蛍光色素含有ナノシリカ粒子であって、
その分散水溶液での蛍光強度が、当該ナノシリカ粒子に結合している前記蛍光色素分子の濃度と同じ濃度で、前記ナノシリカ粒子に結合していない遊離の蛍光色素分子が分散している水溶液での蛍光強度よりも高いことを特徴とする蛍光色素含有ナノシリカ粒子。 - 請求項1乃至4のいずれかに記載する調製方法を用いて得られる蛍光色素含有ナノシリカ粒子である、請求項5乃至8のいずれかに記載する蛍光色素含有ナノシリカ粒子。
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