JP5252737B2 - Method for measuring sterilization rate and system for measuring sterilization rate - Google Patents
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Description
本発明は、除菌率の測定方法及び除菌率測定システムに関し、より詳細には、例えば、エアーシャワー装置、エアースプレーなどによる各種の除菌装置、除菌手段による除菌効果を評価する際に、実情に即した実験モデルを作成して、除菌効果を評価することが可能な除菌率の測定方法及び前記除菌率の測定方法を好適に実施することができる除菌率測定システムに関する。なお、例えば、除菌装置などによる除菌効果を評価するに当たり、実情に即した実験モデルを作成することができる菌類の定植方法及び該定植方法により定植された菌類の回収率を好適に評価することができる菌類の定植・回収率の測定方法、更に、前記菌類の定植方法を好適に実施することができる菌類定植システムにも関する。 The present invention relates to a sterilization rate measurement method and a sterilization rate measurement system, and more specifically, for example, when evaluating the sterilization effect of various sterilization devices such as an air shower device and an air spray, and sterilization means. In addition, a sterilization rate measuring method capable of creating an experimental model in accordance with the actual situation and evaluating the sterilization effect, and a sterilization rate measuring system capable of suitably implementing the sterilization rate measuring method About. For example, when evaluating the sterilization effect by a sterilization device, etc., the fungus planting method capable of creating an experimental model in accordance with the actual situation and the recovery rate of fungi planted by the planting method are preferably evaluated. The present invention also relates to a method for measuring fungal planting / recovery, and a fungus planting system that can suitably implement the fungal planting method.
近年、同じ衛生水を使用した場合であっても、例えば、除菌装置の構成の違いなどによる除菌処理方法の相違による除菌効果の相違を評価することができる技術の開発が望まれるようになってきた。そしてまた、より現実に近い状態で除菌効果を評価することができる技術の開発も望まれていた。従来より、布のような通気性を有する培地に菌類を定植する手段は、特に確立されてなく、例えば、工業規格試験のＪＩＳ Ｌ １９１２には、マスクなどの細菌バリアー性を調べるために、通気性を有する不織布を通り抜ける細菌をトリプトソイ培地が入ったシャーレに受け止め、通気性を有しないシャーレトリプトソイ寒天培地に抵触し、培養することにより不織布の細菌バリアー製を調べる方法が記載されているが、通気性を有する培地に菌類を定植する手段は記載されていない。また、例えば、特許文献１には、通気性を有する基材に金属と除菌液を塗布し、除菌フィルタを製造することが記載されているが、通気性を有する培地に菌類を定植するという発想は、何ら示唆されていない。
In recent years, even when the same sanitized water is used, it is desired to develop a technique that can evaluate the difference in the sterilization effect due to the difference in the sterilization treatment method due to the difference in the configuration of the sterilization apparatus, for example. It has become. In addition, development of a technique capable of evaluating the sterilization effect in a more realistic state has been desired. Conventionally, means for planting fungi in a medium having air permeability such as cloth has not been established. For example, in JIS L 1912 of the industry standard test, in order to examine bacterial barrier properties such as a mask, aeration Although the bacteria that pass through the non-woven fabric having the property are received in the petri dish containing the tryptic soy medium, the method of examining the non-woven bacterial barrier by culturing the non-breathable petri dish tryptic soy agar medium is described, No means for planting fungi on the medium with air permeability is described. Further, for example,
また、例えば、特許文献２には、オゾンエアーシャワー装置による除塵除菌処理の前後における被験者の手の甲に付着している一般生菌を測定することが記載されている。更に、イオン発生素子及び除菌方法に関する特許文献３には、イオン発生素子による除菌効果を評価するために、チャンバ内の空気中の枯草菌芽胞を捕集し、枯草菌芽胞の空気中浮遊生菌数の経時的変化を測定することが記載されている。そして、特許文献４には、除菌マットによる除菌率を測定するために、除菌マットを踏む前と踏んだ後での被験者の靴底をＲｅｐｌｉｃａ ｐｌａｔｅｒ（登録商標）で押し付けた後、Ｒｅｐｌｉｃａ ｐｌａｔｅｒを寒天培地に圧着し、培養後のコロニー数を測定して除菌率を算出して履物からの除菌率を測定することが記載されている。
Further, for example,
しかしながら、いずれにも菌類が付着した衣服を着た被除菌者に除菌処理をするというような実際に除菌装置が使用されたり、除菌手段が施される状態を想定し、布などのように通気性を有する培地に菌類を定植して被検体とするという発想、更に、このような被検体に除菌処理をし、処理後の除菌率を測定して除菌装置による除菌効果を評価するという発想は、何ら示唆されていない。 However, it is assumed that a disinfection device is actually used such as disinfecting a sterilized person wearing a garment with fungi attached to it, or a disinfection means is applied, such as cloth The idea of planting fungi in an air-permeable medium as described above to make specimens, and further sterilizing such specimens, measuring the sterilization rate after treatment, and removing them with a sterilization device There is no suggestion of the idea of evaluating the fungal effect.
本発明は、上記事情に鑑みなされたもので、例えば、エアーシャワー装置、エアースプレーなどによる各種の除菌装置、除菌手段による除菌効果を評価する際に、菌類が付着した衣服を着た被除菌者に除菌処理をするというような実際に除菌処理が施される状態を想定した被検体を作成することができ、実情に即した実験モデルによって除菌効果を評価することが可能な除菌率の測定方法及び除菌率測定システムを提供することを目的とする。また、合わせて上述したような菌類の定植方法、菌類の定植・回収率の測定方法、菌類定植システムも提供する。 The present invention has been made in view of the above circumstances. For example, various sterilization devices using an air shower device, air spray, etc., and when sterilizing effects by sterilization means are evaluated, clothes to which fungi are attached are worn. It is possible to create a specimen that assumes a state in which sterilization processing is actually performed, such as sterilization processing for a sterilized person, and to evaluate the sterilization effect by an experimental model according to the actual situation An object of the present invention is to provide a method for measuring a sterilization rate and a system for measuring a sterilization rate. In addition, a fungus planting method, a fungus planting / recovery measuring method, and a fungus planting system as described above are also provided.
即ち、本発明は、（１）菌類を所定菌数となるように含んだ菌液を圧縮空気により霧化して通気性を有する定植用培地に噴霧し、該定植用培地に菌類を定植する菌類定植工程と、菌類定植工程によって定植用培地に定植した定植菌数を求める定植菌数測定工程と、菌類を定植した定植用培地を除菌する除菌処理工程と、除菌処理後の定植用培地に残存する菌類を定植用培地から回収する残存菌類回収工程と、残存菌類回収工程によって定植用培地から回収した菌類を培養用培地に塗布し、培養後の菌数を測定する残存菌数測定工程と、を備え、定植菌数と残存菌数とから除菌率を求めることを特徴とする除菌率の測定方法、（２）圧力発生手段と、ジェットノズルと、圧力発生手段により発生した圧力をジェットノズルに搬送する圧力搬送手段と、前記菌類を含んだ液である菌液を保存する菌液保存手段と、該菌液保存手段から前記菌液をジェットノズルに搬送する菌液搬送手段とを備え、前記ジェットノズルから前記菌液を噴出する圧縮空気霧化装置と、通気性を有し、前記ジェットノズルから前記菌液が噴霧される定植用培地と、該定植用培地を前記圧縮空気霧化装置から所定距離離間した位置で固定する枠体と重量測定手段とを備えた培地固定具と、を備え、通気性を有する培地に菌類を定植させる菌類定植システムと、菌類が定植された定植用培地を除菌する除菌装置と、除菌された前記定植用培地から残存する菌類を洗い出して回収する菌類回収装置と、回収した菌類を含む回収菌液を培養用培地に塗布する回収菌液塗布装置と、回収した菌類を培養する恒温槽と、前記培養用培地で培養された菌類の菌数を計測するためのコロニーカウンターとを備えた残存菌数測定システムとを、備えたことを特徴とする除菌率測定システムを提供する。なお、菌類を含んだ菌液を圧縮空気により霧化し、通気性を有する定植用培地に噴霧して、該定植用培地に菌類を定植することを特徴とする菌類の定植方法、菌類を通気性を有する定植用培地に定植した後、定植用培地から回収した菌数の比率を測定する菌類の定植・回収率の測定方法であって、菌類を所定菌数となるように含んだ菌液を上記菌類の定植方法により定植用培地に菌類を定植する菌類定植工程と、菌類定植工程によって定植用培地に付着した菌液の量を測定し、該測定値と菌液に含有された所定菌数とから定植用培地に定植した定植菌数を求める定植菌数測定工程と、定植用培地に定植した菌類を定植用培地から回収する定植菌類回収工程と、定植菌類回収工程によって定植用培地から回収した菌類を培養用培地に塗布し、培養後の菌数を測定する回収菌数測定工程と、を備え、定植菌数と回収菌数とから定植用培地に定植した菌類の定植・回収率を求めることを特徴とする菌類の定植・回収率の測定方法、通気性を有する培地に菌類を定植させる菌類定植システムであって、圧力発生手段と、ジェットノズルと、圧力発生手段により発生した圧力をジェットノズルに搬送する圧力搬送手段と、菌類を含んだ液である菌液を保存する菌液保存手段と、菌液保存手段から菌液をジェットノズルに搬送する菌液搬送手段とを備え、ジェットノズルから菌液を噴出する圧縮空気霧化装置と、通気性を有し、ジェットノズルから菌液が噴霧される定植用培地と、該定植用培地を圧縮空気霧化装置から所定距離離間した位置で固定する枠体と重量測定手段とを備えた培地固定具とを備えたことを特徴とする菌類定植システムも提供する。 That is, the present invention is (1) a fungus in which a bacterial solution containing fungi so as to have a predetermined number of bacteria is atomized with compressed air and sprayed onto a planting medium having air permeability, and the fungus is planted on the planting medium. A fixed planting step, a fixed inoculum count measuring step for determining the number of planted plants that have been planted in a planting medium by a fungus planting step, a sterilization processing step for sterilizing a planting medium in which fungi have been planted, and for planting after sterilization processing Remaining fungus recovery process for recovering fungi remaining in the medium from the planting medium, and applying the fungus recovered from the planting medium in the residual fungus recovery process to the culture medium and measuring the number of remaining bacteria And a sterilization rate measuring method characterized in that the sterilization rate is obtained from the fixed plant count and the remaining microbial count, (2) generated by a pressure generating means, a jet nozzle, and a pressure generating means Pressure transfer hand that transfers pressure to the jet nozzle And a bacterial solution storage means for storing a bacterial solution that is a liquid containing the fungus, and a bacterial solution transporting means for transporting the bacterial solution from the bacterial solution storage means to a jet nozzle, and the fungus from the jet nozzle A compressed air atomizing device for ejecting liquid, a planting medium having air permeability and sprayed with the bacterial liquid from the jet nozzle, and a position at which the planting medium is spaced apart from the compressed air atomizing device by a predetermined distance And a medium fixing device having a frame fixing means and a weight measuring means, and a fungus planting system for planting fungi in a medium having air permeability, and a sterilization of a planting medium in which fungi are planted An apparatus, a fungus recovery apparatus for washing and recovering remaining fungi from the sterilized planting medium, a recovered fungus application apparatus for applying a recovered fungus liquid containing the recovered fungi to the culture medium, and recovered fungi A constant temperature bath for culturing The remaining number of bacteria measurement system comprising a colony counter for measuring the number of bacteria in the cultured fungus by Yoyo medium, provides a eradication rate measuring system characterized by comprising. In addition, the fungus-containing planting method, wherein the fungus-containing fungus solution is atomized with compressed air, sprayed onto a planting medium having air permeability, and the fungus is planted on the planting medium, A method for measuring the ratio of the number of bacteria collected from a planting medium after being planted in a planting medium having The fungus planting step for planting fungi in the planting medium by the above-mentioned fungus planting method, the amount of the bacterial solution adhering to the planting medium by the fungus planting step is measured, and the measured value and the predetermined number of bacteria contained in the bacterial solution The fixed plant count measurement process to determine the number of planted plants that have been planted in the planting medium from the above, the plant-fixing fungus recovery process for recovering the fungi planted in the planting medium from the planting medium, and the plant-collecting fungus recovery process to recover from the planting medium Apply the fungi to the culture medium And a recovery count of the fungus, and a fixed planting / recovery rate of the fungus that has been planted in the planting medium from the fixed plant count and the recovered bacterial count. Rate measuring method, fungus planting system for planting fungi in a culture medium having air permeability, pressure generating means, jet nozzle, pressure conveying means for conveying pressure generated by pressure generating means to jet nozzle, fungi Compressed air atomization that includes a bacterial solution storage means for storing a bacterial solution that contains liquid and a bacterial solution transfer means for transferring the bacterial solution from the bacterial solution storage means to a jet nozzle, and jets the bacterial solution from the jet nozzle An apparatus, a planting medium having air permeability and sprayed with a bacterial solution from a jet nozzle, a frame for fixing the planting medium at a predetermined distance from the compressed air atomization apparatus, and weight measuring means Medium fixture provided Also provided fungi planting system characterized by comprising a.
ここで、本発明の上記（１）除菌率の測定方法及び上記菌類の定植方法において、圧力発生手段と、ジェットノズルと、圧力発生手段により発生した圧力をジェットノズルに搬送する圧力搬送手段と、菌類を含んだ液である菌液を保存する菌液保存手段と、菌液保存手段から菌液をジェットノズルに搬送する菌液搬送手段とを備え、ジェットノズルから菌液を噴出する圧縮空気霧化装置によって、菌液を霧化して培地に噴霧すると、より好適である。また、圧力発生手段による圧力が１．２〜１０ｋｇ／ｃｍ２であったり、培地に噴霧される菌液の噴霧量が１〜５０ｍｌ／分であったり、菌液に含まれる菌類の所定菌数が４×１０４〜１×１０６個／ｇであったり、ジェットノズルの口径が０．０５〜０．５ｍｍであったり、定植用培地が、天然繊維，合成繊維又は半合成繊維からなる織物，編み物又は不織布、シート状の寒天、又は寒天を含浸した天然繊維，合成繊維又は半合成繊維からなる織物，編み物又は不織布から選ばれる一種であったりしても、更に好適である。また、本発明の上記（１）除菌率の測定方法の場合、定植菌数測定工程により求められる定植菌数は、定植用培地に付着した菌液の量を測定し、その測定値と菌液に含有された所定菌数とから求められる数値であってもよく、又は、定植用培地に定植した菌類を定植用培地から回収し、回収した菌類を標準寒天培地に塗布し、１〜１００時間培養後の菌数を計測することによって求められるものであってもよい。更に、菌類を定植用培地から回収する方法としては、菌類を、ストマッカー処理により定植用培地から洗い出して回収する方法が、より好適である。また、除菌率の測定方法の除菌処理工程が、除菌剤を圧縮空気により霧化する圧縮空気霧化装置、除菌剤を超音波振動子により霧化する超音波霧化装置又は手動ポンプ式のスプレー容器に除菌剤を収容して微粒子化するスプレー装置によって、定植用培地に除菌剤を付着させるか、又は、定植用培地を除菌された空気に接触又は該空気中に載置することによるものであっても、より好適である。更に、本発明の上記（１）除菌率の測定方法及び上記菌類の定植・回収率の測定方法の場合、残存菌類回収工程又は定植菌類回収工程において、菌類を、ストマッカー処理により定植用培地から洗い出して回収するものであったり、残存菌数測定工程又は回収菌数測定工程において、培養用培地が標準寒天培地であり、１〜１００時間培養後の菌数を測定するものであったりすると、更に好適である。また更に、上記菌類の定植・回収率の測定方法の場合、菌類定植工程において、予め除菌処理を施した定植用培地に菌類を定植すると、より好適であり、本発明の上記（２）除菌率測定システム及び上記菌類定植システムにおいて、重量測定手段が、菌液に含まれる菌類の所定菌数と、定植用培地に付着した菌液重量とから、定植用培地に定植された定植菌数を算出する定植菌数測定手段を備えたものであると、より好適である。 Here, in the (1) method for measuring the sterilization rate and the method for planting the fungi of the present invention, a pressure generating means, a jet nozzle, and a pressure conveying means for conveying the pressure generated by the pressure generating means to the jet nozzle; Compressed air that has fungus solution storage means for storing a fungus-containing liquid and fungus solution transport means for transporting the fungus solution from the fungus solution storage means to a jet nozzle, and jets the fungus liquid from the jet nozzle It is more preferable that the bacterial solution is atomized and sprayed onto the culture medium using an atomizer. Moreover, the pressure by a pressure generation means is 1.2-10 kg / cm < 2 >, the spray amount of the fungus liquid sprayed on a culture medium is 1-50 ml / min, or the predetermined number of fungi contained in a fungus liquid 4 × 10 4 to 1 × 10 6 pieces / g, the diameter of the jet nozzle is 0.05 to 0.5 mm, and the planting medium is made of natural fibers, synthetic fibers or semi-synthetic fibers Further, it may be one kind selected from knitted or non-woven fabric, sheet-shaped agar, or woven fabric, knitted fabric or non-woven fabric made of natural fiber, synthetic fiber or semi-synthetic fiber impregnated with agar. Moreover, in the case of the above-mentioned (1) method for measuring the sterilization rate of the present invention, the fixed inoculum count determined by the fixed inoculum count measurement step is determined by measuring the amount of the bacterial solution adhering to the medium for planting, and the measured value and the fungus. It may be a numerical value obtained from the predetermined number of bacteria contained in the liquid, or the fungus planted in the planting medium is recovered from the planting medium, and the recovered fungus is applied to a standard agar medium, and 1-100 What is calculated | required by measuring the number of bacteria after time culture | cultivation may be used. Furthermore, as a method for recovering the fungi from the planting medium, a method of washing and recovering the fungi from the planting medium by stomacher treatment is more preferable. In addition, the sterilization treatment step of the method for measuring the sterilization rate may include a compressed air atomizing device that atomizes the sterilizing agent with compressed air, an ultrasonic atomizing device that atomizes the sterilizing agent with an ultrasonic vibrator, or manual operation. Use a spray device that contains a disinfectant in a pump-type spray container to atomize it, and attach the disinfectant to the planting medium, or contact the planting medium with the sterilized air or in the air. Even if it is based on mounting, it is more suitable. Furthermore, the case (1) Measurement method of planting and recovery rate measuring method and the fungi eradication rate of the present invention, the remaining fungus recovery process or planting fungal recovery step, fungi, from planting medium by Stomacher treatment When washing out and recovering, or in the residual bacterial count measurement step or the recovered bacterial count measurement step, the culture medium is a standard agar medium, and the bacterial count after 1 to 100 hours of culture is measured, Further preferred. Furthermore, when the measuring method of planting and recovery rate of the fungus, the fungus planting step, when planted fungus planting medium which has been subjected to pre-sterilization process is more preferable, the invention described above (2) except In the fungus rate measurement system and the fungus planting system, the weight measuring means uses the predetermined number of fungi contained in the bacterial solution and the weight of the fungus attached to the planting medium, and the number of planted plants that have been planted in the planting medium. It is more preferable to have a fixed inoculum count measuring means for calculating.
本発明の除菌率の測定方法によれば、例えば、エアーシャワー装置、エアースプレーなどによる各種の除菌装置、除菌手段による除菌効果を評価する際に、菌類が付着した衣服を着た被除菌者に除菌処理をするというような実際に装置が使用されたり、除菌手段が講じられたりする状態を想定した被検体を作成することができ、実情に即した実験モデルによって除菌効果を評価することが可能となる。また、本発明の除菌率測定システムによれば上記除菌率の測定方法を好適に実施することができる。なお、上記菌類の定植方法によれば、各種の除菌装置、除菌手段による除菌効果を評価する際に、実際に装置が使用されたり、手段が講じられたりする状態を想定した被検体を作成することが可能となり、上記菌類の定植・回収率の測定方法によれば、例えば、予め除菌手段を講じた定植用培地に菌類の定植を行うことにより、前記除菌手段の効果を明らかにすることも可能となり、上記菌類定植システムによれば上記菌類の定植方法を好適に実施することができる。 According to the method for measuring the sterilization rate of the present invention, for example, various sterilization devices using an air shower device, air spray, etc., when evaluating the sterilization effect by the sterilization means, a garment with fungi attached is worn. It is possible to create a specimen assuming that the device is actually used, such as sterilizing the person to be sterilized, or taking sterilization measures, and removed by an experimental model that matches the actual situation. It is possible to evaluate the fungus effect. Moreover, according to the sterilization rate measuring system of the present invention, the method for measuring the sterilization rate can be suitably implemented. In addition, according to the above-mentioned fungal planting method, when evaluating the sterilization effect of various sterilization devices and sterilization means, the subject is assumed to be in the state where the device is actually used or the measures are taken possible to create a Do Ri, according to the measuring method of planting and recovery rate of the fungi, for example, by performing the planting of fungus planting medium was taken pre-filtering unit, the filtering unit Ri possible and Do to clarify the effect, Ru can be performed suitably the planting method of the fungus according to the fungus planting system.
以下、本発明の（１）除菌率の測定方法をより詳細に説明する。本発明の（１）除菌率の測定方法は、菌類定植工程、定植菌数測定工程、除菌処理工程、残存菌類回収工程、残存菌数測定工程を備え、定植菌数測定工程によって得られた定植菌数と残存菌数測定工程によって計測した残存菌数とから除菌率を求めるものであり、これによって、除菌処理による除菌効果を評価しようとする方法である。ここで、本発明の除菌率の測定方法の場合、定植菌数は、第１の定植菌数測定工程、即ち、培地に付着した菌液の量を測定し、その測定値と菌液に含有された所定菌数とから求められる数値であってもよく、又は、第２の定植菌数測定工程、即ち、培地に定植した菌類を培地から回収し、回収した菌類を標準寒天培地に塗布し、１〜１００時間培養後の菌数を計測することによって求められるものであってもよい。 Hereinafter, (1) the method for measuring the sterilization rate of the present invention will be described in more detail. (1) The method for measuring the sterilization rate of the present invention comprises a fungus planting step, a fixed plant count measurement step, a sterilization treatment step, a residual fungus collection step, and a residual fungus count measurement step, and is obtained by the fixed plant count measurement step. In this method, the sterilization rate is obtained from the fixed plant count and the remaining microbial count measured in the residual microbial count measurement step, and this is a method for evaluating the sterilization effect by the sterilization treatment. Here, in the case of the method for measuring the sterilization rate of the present invention, the fixed inoculum count is the first fixed inoculum count measurement step, that is, the amount of the bacterial liquid adhering to the medium is measured, and the measured value and the bacterial liquid are used. It may be a numerical value obtained from the predetermined number of contained bacteria, or the second fixed planting number measuring step, that is, the fungus planted in the medium is recovered from the medium, and the recovered fungus is applied to the standard agar medium. However, it may be obtained by measuring the number of bacteria after culturing for 1 to 100 hours.
即ち、本発明の除菌率の測定方法の定植菌数測定工程において、第１の定植菌数測定工程により、即ち、定植用培地に付着した菌液の量を測定し、その測定値と菌液に含有された所定菌数とから求められる数値を例えば「重量定植菌数」とし、第２の定植菌数測定工程、即ち、定植用培地に定植した菌類を定植用培地から回収し、回収した菌類を標準寒天培地に塗布し、１〜１００時間培養後の菌数を計測することによって求められる数値を「回収定植菌数」とし、これらの値を後述する実施例に記載する方法で繰り返し実験により１×１０５個／ｇ〜３×１０５個／ｇの菌類を含む菌液について重量定植菌数と回収定植菌数とを求めたところ、回収定植菌数÷重量定植菌数×１００＝８８．５±０．６％、相関係数は０．９９６となり、良好な正の相関が得られた（後述する図５のグラフ参照）。また、再現性も確認された。従って、本発明の除菌率の測定方法によって、例えば、各種除菌装置、除菌手段の除菌効果を評価するのであれば、重量定植菌数と各装置等による除菌後の残存菌数とから相対的な除菌率（相対除菌率）を比較することによって評価をすることができる。一方、例えば、ある特定の除菌装置等による除菌効果を評価するのであれば、例えば、菌類を定植する培地を複数用意し、菌類を定植した培地を二つのグループに分け、一方のグループは菌類を培地から回収し、回収した菌類を標準寒天培地に塗布し、１〜１００時間培養後の菌数を計測することによって回収定植菌数を求め、他方のグループは除菌処理を行って残存菌数を求め、回収定植菌数の平均値と特定の除菌装置による除菌後の残存菌数の平均値とから絶対的な除菌率（絶対除菌率）を求めることによって特定の除菌装置による除菌効果を評価することができる。 That is, in the fixed inoculum count measurement step of the method for measuring the sterilization rate of the present invention, the first fixed inoculum count measurement step, that is, the amount of the bacterial solution adhering to the planting medium is measured, and the measured value and the fungus are measured. The numerical value obtained from the predetermined number of bacteria contained in the liquid is, for example, “weight fixed inoculation number”, and the second fixed inoculation number measurement step, that is, the fungi that have been planted in the planting medium are collected from the planting medium and collected. The obtained fungi are applied to a standard agar medium, and the numerical value obtained by measuring the number of bacteria after culturing for 1 to 100 hours is defined as “recovered fixed inoculum number”, and these values are repeated by the method described in the examples described later. When the weight-fixed inoculum number and the recovered fixed inoculum number were determined for the bacterial solution containing 1 × 10 5 cells / g to 3 × 10 5 cells / g fungus by experiment, the recovered fixed inoculum number / weight inoculated cell count × 100 = 88.5 ± 0.6%, correlation coefficient is 0.996, good Positive correlation was obtained (see the graph of FIG. 5 described later). In addition, reproducibility was also confirmed. Therefore, for example, if the sterilization effect of various sterilization devices and sterilization means is evaluated by the method for measuring the sterilization rate of the present invention, the number of weight-fixed inoculums and the number of remaining bacteria after sterilization by each device, etc. Evaluation can be made by comparing the relative sterilization rate (relative sterilization rate). On the other hand, for example, to evaluate the sterilization effect by a specific sterilization device, for example, prepare a plurality of mediums for planting fungi, divide the medium for planting fungi into two groups, one group is The fungi are recovered from the medium, the recovered fungi are applied to a standard agar medium, and the number of recovered fixed inoculums is obtained by measuring the number of bacteria after culturing for 1 to 100 hours. The other group remains after sterilization treatment Determine the number of bacteria and calculate the absolute sterilization rate (absolute sterilization rate) from the average number of recovered fixed inoculums and the average number of remaining bacteria after sterilization using a specific sterilization device. The sterilization effect by the microbial device can be evaluated.
本発明の（１）除菌率の測定方法の菌類定植工程、上記菌類の定植方法及び上記菌類の定植・回収率の測定方法の菌類定植工程は、菌類を所定菌数となるように含んだ菌液を圧縮空気により霧化して通気性を有する培地に噴霧し、該培地に菌類を定植するものである。ここで、菌類としては、その種類が特に制限されるものではないが、取り扱い易さや安全性などを考慮すれば、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ等の大腸菌、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ等の黄色ブドウ球菌、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ等の緑膿菌などが好適であり、これらの中でも特にＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ等の大腸菌がより好適である。また、菌液は、含有する菌数が特に制限されるものではないが、４×１０４〜１×１０６個／ｇであると好適であり、より好適には１×１０５〜１×１０６個／ｇ、更に好適には１×１０５〜５×１０５個／ｇである。菌液に含まれる菌数が少なすぎると、例えば、除菌処理後の菌の回収が困難となる場合があり、多すぎると、バラツキが生じる場合がある。なお、菌液を調製する液としては、菌数を保持することを考慮すれば、ＮＢ５００（ニュートリエントブロスの５００倍希釈純水溶液）、生理食塩水などが好ましい。 Fungi planting step of the method of measuring (1) eradication rate of the present invention, fungus planting step of the method of measuring the planting-recovery of planting methods and the fungi of the fungal contained so as fungi and certain bacteria number The bacterial solution is atomized with compressed air and sprayed onto a medium having air permeability, and fungi are planted on the medium. Here, the type of fungi is not particularly limited, but considering ease of handling and safety, Escherichia coli and other Escherichia coli, Staphylococcus aureus and other Staphylococcus, and Pseudomonas aeruginosa and other green pus. Bacteria and the like are preferred, and among these, Escherichia coli and other E. coli are more preferred. In addition, the number of bacteria contained in the bacterial solution is not particularly limited, but is preferably 4 × 10 4 to 1 × 10 6 / g, and more preferably 1 × 10 5 to 1 ×. 10 6 pieces / g, more preferably 1 × 10 5 to 5 × 10 5 pieces / g. If the number of bacteria contained in the bacterial solution is too small, for example, it may be difficult to recover the bacteria after the sterilization treatment, and if too large, variation may occur. In view of maintaining the number of bacteria, NB500 (500-fold diluted pure aqueous solution of nutritive broth), physiological saline, and the like are preferable as the liquid for preparing the bacterial solution.
菌類を定植する定植用培地としては、通気性を有するものであれば、その種類は特に制限されるものではないが、天然繊維，合成繊維又は半合成繊維からなる織物，編み物又は不織布、シート状の寒天、又は寒天を含浸した天然繊維，合成繊維又は半合成繊維からなる織物，編み物又は不織布から選ばれるものであると、より好適である。ここで、天然繊維，合成繊維又は半合成繊維からなる織物，編み物又は不織布としては、市販のものを好適に使用することができ、シート状の寒天としては、例えば、天草などの寒天原料から得た粘液を、角寒天、細寒天などと同様にして、凍結脱水後の形状がシート状となるようにすることによって製造することができる。また、寒天を含浸した天然繊維，合成繊維又は半合成繊維からなる織物，編み物又は不織布は、例えば、市販の天然繊維，合成繊維又は半合成繊維からなる織物，編み物又は不織布を天草などの寒天原料から得た寒天粘液を必要に応じて適宜濃度に希釈した液中に適宜時間浸し、その後、引き上げて乾燥、又は凍結脱水することによって製造することができる。なお、定植用培地の大きさ、形状は、特に制限されるものではなく、除菌処理の対象と該対象に対する除菌手段などを考慮して適宜選定することができるが、定植用培地が平面として利用できる場合、面積が２５ｍｍ２〜２５００００ｍｍ２の正方形、長方形、円形などが好適であり、より好ましくは２５００ｍｍ２〜９００００ｍｍ２の正方形、長方形、円形など、更に好ましくは１００００ｍｍ２〜４００００ｍｍ２の正方形、長方形、円形などである。面積が小さすぎると、定植量が少なくなり、菌液の測定精度が下がる場合があり、面積が大きすぎると、菌液のつく量が全体の重量に対し少なくなるため、菌液の測定精度が下がると共に、回収が難しくなる場合がある。なお、定植用培地の形状としては、衣類などのように３次元立体形状を形成し得るものも用いることができ、この場合、人体形状を模擬した培地固定具に固定し、菌類を定植することもできる。この際、培地固定具を回転することにより、全周方向に菌類を定植することも可能となる。また、定植用培地の形状として衣類などを用いる場合には、菌類の定植前、若しくは定植後に衣類などを裁断することにより、重量の測定や菌類の回収を手際よく行うことも可能である。 The planting medium for planting fungi is not particularly limited as long as it has air permeability, but is woven, knitted or non-woven fabric made of natural fiber, synthetic fiber or semi-synthetic fiber, sheet-like It is more preferable that the agar is selected from woven fabric, knitted fabric or nonwoven fabric made of natural fiber, synthetic fiber or semi-synthetic fiber impregnated with agar. Here, as a woven fabric, a knitted fabric or a non-woven fabric made of natural fibers, synthetic fibers or semi-synthetic fibers, commercially available products can be suitably used. As the sheet-shaped agar, for example, it can be obtained from an agar raw material such as Amakusa. The mucus can be produced by making the shape after freeze dehydration into a sheet shape in the same manner as Kaku Agar and Fine Agar. In addition, a woven fabric, knitted fabric or nonwoven fabric made of natural fiber, synthetic fiber or semi-synthetic fiber impregnated with agar is, for example, a woven fabric, knitted fabric or nonwoven fabric made of commercially available natural fiber, synthetic fiber or semi-synthetic fiber, agar raw material such as Amakusa It can be produced by immersing the agar mucus obtained from the above in a solution diluted to an appropriate concentration as needed, and then pulling it up and drying or freeze-dehydrating. The size and shape of the planting medium are not particularly limited, and can be appropriately selected in consideration of the sterilization treatment target and the sterilization means for the target. if available as an area of the 25mm 2 ~250000mm 2 square, rectangular, a like circular preferred, more preferably 2500mm 2 ~90000mm 2 of square, rectangular, circular, etc., more preferably square 10000mm 2 ~40000mm 2 , Rectangle, circle, etc. If the area is too small, the amount of planting may be reduced and the measurement accuracy of the bacterial solution may be reduced. If the area is too large, the amount of the bacterial solution attached will be less than the total weight, so the measurement accuracy of the bacterial solution will be reduced. As it falls, it can be difficult to recover. In addition, as the shape of the planting medium, one that can form a three-dimensional solid shape, such as clothing, can be used. In this case, the medium is fixed to a medium fixing device that simulates the human body shape and the fungus is planted. You can also. At this time, by rotating the culture medium fixing tool, it is possible to plant fungi in the entire circumferential direction. In addition, when clothing or the like is used as the shape of the medium for planting, it is possible to measure the weight and collect the fungus by cutting the clothing before or after the planting of the fungus.
本発明の（１）除菌率の測定方法の菌類定植工程、上記菌類の定植方法及び上記菌類の定植・回収率の測定方法の菌類定植工程において、菌液を圧縮空気により霧化する手段としては、圧力発生手段と、ジェットノズルと、圧力発生手段により発生した圧力をジェットノズルに搬送する圧力搬送手段と、菌類を含んだ液である菌液を保存する菌液保存手段と、菌液保存手段から菌液をジェットノズルに搬送する菌液搬送手段とを備え、ジェットノズルから菌液を噴出する圧縮空気霧化装置が好適である。以下、図面を参照して菌類定植工程において好適に使用される圧縮空気霧化装置をより詳細に説明する。図１は、圧縮空気霧化装置の一構成例を説明するために圧縮空気霧化装置の一部の縦断面を拡大して示した一部概略縦断面図である。図中１は、圧縮空気霧化装置本体であり、略ペンシル状の形態をなしており、この圧縮空気霧化装置本体１の先端部にはジェットノズル２が設けられており、このジェットノズル２を開閉させるニードル３が圧縮空気霧化装置本体１の軸芯部に沿ってスライド自在に挿入されており、ニードル３は、その後端部に取り付けられたニードル調整器４により軸芯方向にスライドして、ジェットノズル２から図示しない圧力発生手段により発生した圧力（圧縮空気）を搬送する通気路（圧力搬送手段）５を通じて圧縮空気を噴出させると共に、圧縮空気霧化装置本体１の先端部から後方に向かって長さ方向中央部付近まで開設された菌液流路（菌液搬送手段）６を通じて、菌液流路６の後端部上側に菌液７が供給可能となるように取り付けられた菌液容器（菌液保存手段）８から供給される菌液７を噴出して、菌液７を霧化するように構成されている。通気路５は、圧縮空気が供給可能となるように図示しない圧力発生手段に接続されており、空気弁９の開閉によって、圧力調整器１０により圧力調整された圧縮空気がジェットノズル２まで搬送される。一方、菌液容器（菌液保存手段）８に保存されている菌液７は、菌液流路（菌液搬送手段）６を通り、ニードル調整器４により、流量を調整され、ジェットノズル２まで搬送されている圧縮空気によりジェットノズル２から噴霧される。
Fungi planting step of the method of measuring (1) eradication rate of the present invention, in the fungus planting step of the method of measuring the planting-recovery of planting methods and the fungi of the Fungi, as a means for atomizing with compressed air bacterial suspension The pressure generating means, the jet nozzle, the pressure conveying means for conveying the pressure generated by the pressure generating means to the jet nozzle, the fungus liquid storing means for storing the fungus liquid containing the fungus, and the fungus liquid storage A compressed air atomizing device that includes a bacteria solution conveying means for conveying the bacteria solution from the means to the jet nozzle and ejects the bacteria solution from the jet nozzle is suitable. Hereinafter, the compressed air atomizer suitably used in the fungus planting process will be described in more detail with reference to the drawings. FIG. 1 is a partially schematic longitudinal sectional view showing an enlarged part of a longitudinal section of the compressed air atomizing device in order to explain one configuration example of the compressed air atomizing device. In the figure,
このような構成を有する装置としては、圧力発生手段として、コンプレッサー、ポンプなどを連結したエアーブラシ、射出ノズルなどを利用することができる。そして、このような圧縮空気霧化装置を利用し、定植用培地として上述したような織物、編み物、不織布などを利用する場合、図２に示す菌類の定植システムＡを利用すると、より好適である。この定植システムＡは、エアーブラシ（圧縮空気霧化装置本体）１にコンプレッサー（圧力発生手段）１２を連結した圧縮空気霧化装置１１と、定植用培地１３と、定植用培地１３をエアーブラシ（圧縮空気霧化装置本体）１のジェットノズルの先端部から所定距離離間した位置に固定する枠体１４と秤（重力測定手段）１５を備えた培地固定具Ｂを備えたものである。ここで、培地固定具Ｂは、定植用培地１３をアクリル材などにより作成した枠体１４に固定することができれば、その構成が特に制限されるものではないが、枠体１４を秤（重力測定手段）１５上に支持、載置する支柱１６と台座１７（図３参照）を備え、枠体１４に定植用培地１３を定植に用いる圧力（風力）によりなびかないように画鋲やクリップを利用して固定、取り付けるように構成されていると、より好適である。このシステムＡの場合、圧縮空気霧化装置１１と培地固定具Ｂは、実験台Ｃの上に載置してある。なお、定植用培地とジェットノズルの先端部との離間距離は、菌類の定植面積と定植する菌液の量などを考慮して適宜選定することができるが、５０〜１０００ｍｍが好適であり、より好ましくは１００〜７００ｍｍ、更に好ましくは２００〜５００ｍｍである。
As an apparatus having such a configuration, an air brush, an injection nozzle, or the like connected with a compressor, a pump, or the like can be used as the pressure generating means. And when using such a compressed air atomization apparatus and using the textiles, knitting, nonwoven fabric, etc. which were mentioned above as a planting culture medium, it is more suitable if the fungus planting system A shown in FIG. 2 is utilized. . This planting system A includes a compressed
ここで、上記のような圧縮空気霧化装置を利用する場合、圧力発生手段による圧力が１．２〜１０ｋｇ／ｃｍ２であると、好適であり、より好ましくは１．５〜７ｋｇ／ｃｍ２、更に好ましくは２〜７ｋｇ／ｃｍ２である。圧力が低すぎると、噴霧液の平均粒径が大きくなり、定植用培地への均一な定植が困難となる場合があり、圧力が高すぎると、菌にかかる圧力が高くなることや菌の定植時に菌が定植用培地に接触し、死滅することにより、回収率が低下したり、定植用培地にかかる圧力が高くなることにより、均一な培地への定植が困難となる場合がある。また、ジェットノズルの口径が０．０５〜０．５ｍｍであると、好適であり、より好ましくは０．１〜０．４ｍｍ、更に好ましくは０．１５〜０．３５ｍｍである。ジェットノズルの口径が小さすぎると、微細なゴミが存在するだけでもノズルがつまることにより、菌液が適正に霧化し難くなる場合があり、ジェットノズルの口径が大きすぎると、ノズルから霧化される菌液の平均粒径が大きくなり、定植用培地に対し均一に定植することが難しくなる場合がある。 Here, when using the compressed air atomizer as described above, it is preferable that the pressure generated by the pressure generating means is 1.2 to 10 kg / cm 2 , and more preferably 1.5 to 7 kg / cm 2. More preferably, it is 2-7 kg / cm 2 . If the pressure is too low, the average particle size of the spray solution may increase, and it may be difficult to achieve uniform planting in the planting medium. If the pressure is too high, the pressure applied to the bacteria may increase, Occasionally, the bacteria come into contact with the planting medium and die, so that the recovery rate may decrease, or the pressure applied to the planting medium may increase, and it may be difficult to plant a uniform medium. Moreover, it is suitable in the aperture diameter of a jet nozzle being 0.05-0.5 mm, More preferably, it is 0.1-0.4 mm, More preferably, it is 0.15-0.35 mm. If the diameter of the jet nozzle is too small, the microbe may not be atomized properly due to clogging even if fine dust is present, and if the diameter of the jet nozzle is too large, it will be atomized from the nozzle. In some cases, the average particle size of the bacterial solution becomes large, and it becomes difficult to plant uniformly in the medium for planting.
また、本発明の（１）除菌率の測定方法の菌類定植工程、上記菌類の定植方法及び上記菌類の定植・回収率の測定方法の菌類定植工程において、定植用培地に噴霧される菌液の噴霧量は、特に制限されるものではないが、１〜５０ｍｌ／分であると、好適であり、より好ましくは５〜３０ｍｌ／分、更に好ましくは１０〜２０ｍｌ／分である。噴霧量が少なすぎると、定植にバラツキが生じ易くなる場合があり、多すぎると、菌液が定植用培地から流れ落ち易くなる場合がある。なお、噴霧される菌液の平均粒径が定植用培地の孔径より小さいと、菌液は定植用培地をすり抜けてしまい、定植用培地に定植され難くなる可能性があることを考慮すると、噴出された菌液の平均粒径が定植用培地の孔径以上の径を有するものであれば、菌液の定植効率をより向上させることが可能となると考えられる。噴霧される菌液の平均粒径の測定方法としては、定植用培地の直前の菌液の粒径をレーザー装置で測定したり、定植用培地の直前の菌液の噴霧粒子を高性能カメラで撮影し、その平均粒径を計測する方法などが挙げられる。また、定植用培地の孔径の測定方法としては、定植用培地を顕微鏡で観察する方法などが挙げられる。 Moreover, fungi planting step of the method of measuring (1) eradication rate of the present invention, in the fungus planting step of the method of measuring the planting-recovery of planting methods and the fungi of the fungal, bacterial liquid to be sprayed in the planting medium The spray amount is not particularly limited, but is preferably 1 to 50 ml / min, more preferably 5 to 30 ml / min, and further preferably 10 to 20 ml / min. If the spraying amount is too small, there may be cases where the planting tends to vary, and if it is too much, the bacterial solution may easily flow down from the planting medium. If the average particle size of the sprayed bacterial solution is smaller than the pore diameter of the planting medium, the bacterial solution will slip through the planting medium and may be difficult to plant in the planting medium. If the average particle size of the fungus solution is larger than the pore size of the planting medium, it is considered that the planting efficiency of the fungus solution can be further improved. To measure the average particle size of the sprayed bacterial solution, the particle size of the bacterial solution immediately before the planting medium can be measured with a laser device, or the sprayed particles of the bacterial solution immediately before the planting medium can be measured with a high-performance camera. A method of photographing and measuring the average particle diameter is included. Examples of the method for measuring the pore diameter of the planting medium include a method of observing the planting medium with a microscope.
次に、本発明の（１）除菌率の測定方法の定植菌数測定工程について詳述する。上述したように、本発明の（１）除菌率の測定方法の定植菌数測定工程において、定植菌数は、第１の定植菌数測定工程により求められる重量定植菌数であってもよく、又は、第２の定植菌数測定工程により求められる回収定植菌数であってもよい。本発明の（１）除菌率の測定方法の定植菌数測定工程において、第１の定植菌数測定工程により重量定植菌数を求める場合、その工程は、上記菌類の定植・回収率の測定方法の定植菌数測定工程と同様であり、菌類定植工程によって培地に付着した菌液の量を測定し、その測定値と菌液に含有された所定菌数とから重量定植菌数を求めることができる。より具体的には、秤などの重量測定装置を利用して、菌液を噴霧する前後の培地の重量を測定し、噴霧後の重量増加分を噴霧により培地に付着した重量（噴霧重量）とし、（噴霧重量）×（菌液に含有された所定菌数）＝重量定植菌数とすることによって、算出することができる。この重量定植菌数が、本発明の（１）除菌率の測定方法の第１の定植菌数測定工程により求められる（重量）定植菌数、上記菌類の定植・回収率の測定方法の定植菌数測定工程により求められる定植菌数である。 Next, the fixed inoculum count measurement step of the method for measuring the (1) sterilization rate of the present invention will be described in detail. As described above, in the constant inoculation count measurement step of the method for measuring the sterilization rate of the present invention (1), the constant inoculation count may be the weight fixed inoculation count obtained in the first constant inoculation count measurement step. Alternatively, the number of recovered fixed inoculums obtained by the second constant inoculum number measuring step may be used. In planting number of bacteria measuring step of the measuring method of (1) eradication rate of the present invention, when the first determining the weight planting number of bacteria by planting bacterial count measuring step, the process is the measurement of the planting and recovery rate of the fungi This is the same as the method for measuring the number of inoculated bacteria in the method. Measure the amount of the bacterial solution adhering to the medium by the fungal planting step, and obtain the weight-inoculated number of bacteria from the measured value and the predetermined number of bacteria contained in the bacterial solution. Can do. More specifically, the weight of the medium before and after spraying the bacterial solution is measured using a weight measuring device such as a scale, and the weight increase after spraying is defined as the weight attached to the medium by spraying (spray weight). , (Spray weight) × (predetermined number of bacteria contained in the bacterial solution) = weight fixed number of inoculated bacteria. The weight planting bacteria count, planting of the first obtained by planting cell count measuring step (by weight) planting number of bacteria, the measuring method of planting and recovery rate of the fungi (1) Measurement method of eradication rate of the present invention It is the fixed inoculation number calculated | required by a microbe count measurement process.
一方、本発明の（１）除菌率の測定方法の定植菌数測定工程において、第２の定植菌数測定工程により回収定植菌数を求める場合、その工程は、上記菌類の定植・回収率の測定方法の定植菌類回収工程と回収菌数測定工程と同様であり、定植用培地に定植した菌類を定植用培地から回収し（定植菌類回収工程）、回収した菌類を標準寒天培地に塗布し、１〜１００時間培養後の菌数を計測することによって回収定植菌数を求めることができる。回収定植菌数の場合、菌類を定植用培地から回収する手段としては、ストマッカー処理により培地から洗い出して回収する方法がより好適である。より具体的には、例えば、定植用培地を培地固定具を使用して固定していた場合には、培地固定具から取り外し、市販されているストマッカー袋に定植用培地の重量に合わせて適宜量（例えば、定植用培地重量の５〜３０倍量）の生理食塩水などと共に入れ、このストマッカー袋をストマッカーに取り付け、例えば、６０秒間程度のストマッカー処理を行う。この処理後の回収液を培地から回収した菌類とし、必要に応じて１〜１００倍程度に生理食塩水などにより希釈し、スパイラルプレーターなどの菌液塗布装置により前記希釈した塗布用菌液を標準寒天培地に塗布して、恒温槽の培養温度を３７±２℃とし、１〜１００時間、より好ましくは２〜６０時間、更に好ましくは１０〜５０時間培養した後、コロニーカウンターで寒天培地を観察し、菌数を計測することによって、回収定植菌数を求める。この回収定植菌数が、（１）除菌率の測定方法の第２の定植菌数測定工程により求められる（回収）定植菌数であり、上記菌類の定植・回収率の測定方法の定植菌類回収工程、回収菌数測定工程により求められる回収菌数である。そして、上記菌類の定植・回収率の測定方法の場合、上述した定植菌数と回収菌数とから培地に定植した菌類の定植・回収率を求めるものであり、より具体的には、回収菌数÷定植菌数×１００＝定植・回収率（％）により、培地に定植した菌類の定植・回収率を算出することができる。 On the other hand, in planting number of bacteria measuring step of the measuring method of (1) eradication rate of the present invention, if the second planting cell count measuring step seek to recover planting number of bacteria, the process is, planting and recovery rate of the fungi This is the same as the fixed plant inoculation recovery process and the recovery bacteria count measurement process in the measurement method. Collect the fungus that has been planted in the planting medium from the planting medium (constant plant fungus recovery process), and apply the recovered fungus to the standard agar medium. The number of recovered fixed inoculums can be determined by measuring the number of bacteria after culturing for 1 to 100 hours. In the case of the recovered fixed plant count, as a means for recovering the fungus from the fixed planting medium, a method of washing and recovering the fungus from the medium by a stomacher treatment is more preferable. More specifically, for example, when the planting medium is fixed using a medium fixing tool, the medium is removed from the medium fixing tool, and an appropriate amount is set in a commercially available stomacher bag according to the weight of the planting medium. It is put together with a physiological saline (for example, 5 to 30 times the weight of the medium for planting), this stomacher bag is attached to the stomacher, and the stomacher treatment is performed for about 60 seconds, for example. The recovered liquid after this treatment is a fungus recovered from the culture medium, diluted with physiological saline or the like about 1 to 100 times as necessary, and the diluted bacterial liquid for application is applied by a bacterial liquid application device such as a spiral plater. After applying to a standard agar medium and setting the culture temperature of the thermostat to 37 ± 2 ° C. and culturing for 1 to 100 hours, more preferably 2 to 60 hours, and even more preferably 10 to 50 hours, By observing and counting the number of bacteria, the number of recovered fixed inoculums is determined. This recovered fixed inoculum count is the (recovered) fixed inoculum count determined by the second fixed inoculum count measuring step of (1) the method of measuring the sterilization rate, and the fixed inoculum of the above-mentioned fungal fixed planting / recovery rate measuring method. This is the number of recovered bacteria determined by the recovery process and the recovered bacteria count measurement process. When the measurement method of planting and recovery rate of the fungus, which seek planting-recovery of fungi were planted in the medium from the planting number of bacteria as described above the number of bacteria recovered and, more specifically, recovered bacteria It is possible to calculate the fixed planting / recovery rate of the fungi planted in the medium by the following formula: number / number of fixed planting × 100 = fixed planting / recovery rate (%).
ここで、上記菌類の定植・回収率の測定方法の場合、菌類定植工程において、予め除菌処理を施した定植用培地に菌類を定植すると、定植用培地に予め施すことができる除菌手段の除菌効率を評価することが可能となる。即ち、定植用培地として、予め除菌処理を施した定植用培地と除菌処理を施していない定植用培地を用意し、これらに定植した菌類の定植・回収率を比較することによって、除菌手段を施した定植用培地の残存菌数と、除菌処理を施さない定植用培地の残存菌数とを比較することができ、予め定植用培地に施した除菌処理、除菌手段による除菌効果の評価を行うことができる。より具体的には、例えば、銀イオンを含浸させたウール１００％の布（織物）を除菌処理を施した定植用培地とし、含浸処理をしないウール１００％の布（織物）を未処理の定植用培地とし、同条件の菌類の定植・回収率の測定方法によって、除菌処理を施した定植用培地と未処理の定植用培地の定植・回収率をそれぞれ求め、これらの値を比較することによって、銀イオンの含浸処理による除菌効果を評価することができる。 Here, if the method of measuring the planting and recovery rate of the fungus, the fungus planting step, when planted fungus planting medium which has been subjected to pre-sterilization process, the sterilization unit may be applied in advance to the planting medium It becomes possible to evaluate the sterilization efficiency. That is, as a fixed planting medium, a fixed planting medium that has been sterilized in advance and a fixed planting medium that has not been sterilized are prepared, and by comparing the fixed planting / recovery rate of the fungi planted in these, It is possible to compare the number of remaining bacteria in the fixed planting medium with the means and the number of remaining bacteria in the fixed planting medium without the sterilization treatment. Evaluation of fungal effect can be performed. More specifically, for example, a 100% wool cloth (woven fabric) impregnated with silver ions is used as a planting medium subjected to sterilization treatment, and a 100% wool cloth (woven fabric) that is not impregnated is untreated. Determine the planting / recovery rate of the sterilized planting medium and the untreated planting medium using the method for measuring the planting / recovery rate of fungi under the same conditions, and compare these values. Thus, the sterilization effect by the silver ion impregnation treatment can be evaluated.
本発明の（１）除菌率の測定方法の除菌処理工程について詳述すると、この除菌処理工程には、菌類を定植した定植用培地に除菌剤を付着させて培地を除菌する方法と、菌類を定植した定植用培地を除菌された空気に接触させたり、除菌された空気中に菌類を定植した定植用培地を載置する方法と、イオン性微粒子を噴霧する装置により除菌する方法とがある。ここで、除菌処理の方法は、特に制限されるものではないが、例えば、菌類を定植した定植用培地に除菌剤を付着させて培地を除菌する除菌方法としては、エアーシャワー装置、エアースプレーなどの除菌装置による除菌効果を評価することを想定すると、除菌剤を圧縮空気により霧化して噴霧する圧縮空気方式の霧化装置、より具体的には、コンプレッサー付のエアーブラシ、射出ノズル等の圧縮空気霧化装置、超音波振動子により霧化する超音波方式の霧化装置、より具体的には、除菌機能付きの加湿器、除菌機能付きの湿度調整器等の超音波霧化装置、手動ポンプ式のスプレー容器に除菌剤を収容して微粒子化するスプレー装置などの各種除菌装置によって、定植用培地に除菌剤を付着させる除菌方法を挙げることができる。一方、除菌された空気に菌類を定植した定植用培地を接触させたり、除菌された空気中に菌類を定植した定植用培地を載置する除菌方法、除菌手段としては、イオン性微粒子を噴霧する装置により除菌を行った空気に接触させたり、紫外線により滅菌した空間に載置する除菌方法などを挙げることができる。 The sterilization treatment step of the measurement method of (1) sterilization rate of the present invention will be described in detail. In this sterilization treatment step, a sterilizing agent is attached to a planting medium in which fungi are planted, and the medium is sterilized. A method, a method of placing a planting medium in which fungi are planted in contact with sterilized air, or a method of placing a planting medium in which bacteria are planted in sterilized air, and a device for spraying ionic microparticles. There is a method of sterilization. Here, the method of the sterilization treatment is not particularly limited. For example, as a sterilization method of sterilizing a culture medium by attaching a sterilization agent to a planting medium in which fungi are planted, an air shower device is used. Assuming that the sterilizing effect of a sterilizing device such as an air spray is evaluated, a compressed air type atomizing device that atomizes and sprays a sterilizing agent with compressed air, more specifically, air with a compressor. Compressed air atomizers such as brushes and injection nozzles, ultrasonic atomizers that atomize with ultrasonic transducers, more specifically, humidifiers with a sterilization function, humidity controllers with a sterilization function Examples of sterilization methods for attaching a sterilizing agent to a medium for planting by various sterilizing devices such as an ultrasonic atomizer such as a spray device that contains a sterilizing agent in a manual pump type spray container be able to. On the other hand, as a sterilization method or sterilization means, a fixed culture medium in which fungi are planted in contact with sterilized air or a fixed culture medium in which fungi are planted in sterilized air is placed. Examples thereof include a method of sterilizing by contacting with air sterilized by an apparatus for spraying fine particles or placing in a space sterilized by ultraviolet rays.
本発明の（１）除菌率の測定方法の残存菌類回収工程は、除菌処理後の培地に残存する菌類を培地から回収するものであり、残存菌数測定工程は、残存菌類回収工程によって培地から回収した菌類を培養用培地に塗布し、培養後の菌数を測定するものであり、これらの工程の具体的な方法は、上述した（１）除菌率の測定方法の第２の定植菌数測定工程、上記菌類の定植・回収率の測定方法の定植菌類回収工程と回収菌数測定工程と同様であり、残存菌類回収工程において、菌類を、ストマッカー処理により培地から洗い出して回収するとより好適であることも同様である。また、この工程においても、培養用培地が標準寒天培地であると、種々の微生物の増殖がし易いことから、より好適であり、培養時間も１〜１００時間、より好ましくは２〜６０時間、更に好ましくは１０〜５０時間であると、より好適である。 The remaining fungus recovery step of the method for measuring the sterilization rate of the present invention is to recover fungi remaining in the culture medium after the sterilization treatment from the medium. The fungus recovered from the medium is applied to the culture medium and the number of bacteria after the cultivation is measured. The specific method of these steps is the second method of (1) measuring the sterilization rate described above. It is the same as the fixed fungus recovery process and the recovered fungus count measurement process in the fixed fungus count measurement process, the method for measuring the fixed planting / recovery rate of the above fungi, and in the residual fungus recovery process, the fungi are washed and recovered from the medium by the stomacher treatment. The same is true for being more suitable. Also in this step, it is more preferable that the culture medium is a standard agar medium because various microorganisms can easily grow. The culture time is also 1 to 100 hours, more preferably 2 to 60 hours. More preferably, it is more suitable for 10 to 50 hours.
そして、本発明の（１）除菌率の測定方法は、上述したように、重量定植菌数と除菌後の残存菌数とから相対的な除菌率（相対除菌率）、より具体的には、（重量定植菌数−残存菌数）÷重量定植菌数×１００＝相対除菌率（％）によって、相対的な除菌率を算出することができ、例えば、各種除菌装置の方式、除菌手段を想定した除菌処理後の相対除菌率を求め、これらの値を比較することにより、各種除菌装置、除菌手段の除菌効果を評価することができる。一方、回収定植菌数と除菌後の残存菌数とから絶対的な除菌率（絶対除菌率）、より具体的には、（回収定植菌数−残存菌数）÷回収定植菌数×１００＝絶対除菌率（％）によって、絶対的な除菌率を算出することができ、例えば、菌類を定植する培地を複数用意し、菌類を定植した培地を二つのグループに分け、一方のグループから回収定植菌数を求め、他方のグループは特定の除菌装置の方式、除菌手段を想定した除菌処理を行って残存菌数を求め、回収定植菌数の平均値と特定の除菌装置、除菌手段による除菌後の残存菌数の平均値とから絶対的な除菌率（絶対除菌率）を求めることによって特定の除菌装置、除菌手段による除菌効果を評価することができる。 And, as described above, (1) the method for measuring the sterilization rate of the present invention is a relative sterilization rate (relative sterilization rate) from the weight-fixed number of bacteria and the number of remaining bacteria after sterilization, more specifically. Specifically, the relative sterilization rate can be calculated by (weight constant inoculation number−remaining cell number) ÷ weight constant inoculation number × 100 = relative sterilization rate (%). For example, various sterilization devices The relative sterilization rate after the sterilization treatment assuming the above-mentioned method and sterilization means is obtained, and the sterilization effect of various sterilization devices and sterilization means can be evaluated by comparing these values. On the other hand, the absolute sterilization rate (absolute sterilization rate) from the recovered fixed inoculum count and the residual microbial count after sterilization, more specifically, (recovered fixed inoculum count-remaining microbial count) ÷ recovered fixed inoculum count X100 = Absolute sterilization rate (%) can be used to calculate the absolute sterilization rate. For example, a plurality of mediums for planting fungi are prepared, and the medium for planting fungi is divided into two groups. The number of recovered fixed inoculations is calculated from the group of the other group, the other group performs the sterilization treatment assuming the method of the specific sterilization device and the sterilization means, determines the number of remaining bacteria, By determining the absolute sterilization rate (absolute sterilization rate) from the average number of remaining bacteria after sterilization by the sterilization device and sterilization means, the sterilization effect by the specific sterilization device and sterilization means Can be evaluated.
本発明の上記（１）除菌率の測定方法、上記菌類の定植方法及び上記菌類の定植・回収率の測定方法において、菌液を定植用培地に噴霧して、定植用培地に菌類を定植する際に使用する装置、システムは特に制限されるものではないが、本発明の（２）除菌率測定システムにおける菌類の定植システムを利用すると、好適である。本発明の定植システムは、上述した圧縮空気霧化装置と通気性を有する培地と培地固定具を備えたものであり、これらは、本発明の方法の説明において上述した通りである。 In the (1) method for measuring the sterilization rate, the method for planting the fungi, and the method for measuring the planting / recovery rate of the fungi of the present invention, the fungus solution is sprayed on the planting medium, and the fungus is planted on the planting medium. Although the apparatus and system used in doing so are not particularly limited, it is preferable to use the fungus planting system in the ( 2 ) sterilization rate measuring system of the present invention. The planting system of the present invention includes the above-described compressed air atomizer, a medium having air permeability, and a medium fixing tool, and these are as described above in the description of the method of the present invention.
ここで、本発明の（２）除菌率測定システム及び上記菌類定植システムの培地固定具の枠体としては、菌類を定植し難く、且つ定植用培地の通気性を妨げない構造からなるものであり、枠体を構成する構造部材は、除菌効果を有さないことが望ましく、このような材質としては、例えば、アクリル樹脂、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）樹脂、ポリプロピレン樹脂などが挙げられる。そして、本発明の培地固定具は、更に、重量測定手段を備えたものであり、更に、重量測定手段が、菌液に含まれる菌類の所定菌数と、定植用培地に付着した菌液重量とから、定植用培地に定植された定植菌数を算出する定植菌数測定手段を備えたものであると、より好適である。以下、図面を参照して本発明の培地固定具について、より詳細に説明する。図３は、本発明の培地固定具の構成例を説明する培地固定具の概略側面図であり、図４は、該培地固定具の概略正面図である。上述したように、培地固定具Ｂは、秤（重量測定手段）１５の上に枠体１４が支柱１６、台座１７を介して載置されている。そして、秤１５には、定植菌液量表示部１８、定植菌数表示部１９、菌液に含まれる菌類の所定菌数を入力する図示しない入力手段（図示せず）、定植用培地１３を固定した培地固定具本体（枠体１４、支柱１６、台座１７）の菌液噴霧前後の重量差から定植用培地１３に付着した菌液重量を算出する図示しない付着菌液重量算出手段（付着菌液重量算出プログラム）、入力された所定菌数と付着菌液重量とから定植用培地１３に定植された定植菌数を算出する図示しない定植菌数測定手段（定植菌数算出プログラム）を備えている。そして、定植菌液量表示部１８には、付着菌液重量算出手段により算出された定植用培地１３に付着した菌液重量が表示され、定植菌数表示部１９には、定植菌数測定手段により算出された定植菌数が表示されるように構成されている。なお、秤１５には、図示しない重量表示部を設けて、定植用培地１３を固定した培地固定具本体の重量の測定結果も表示するようにすることもできる。
Here, ( 2 ) the sterilization rate measuring system of the present invention and the frame of the medium fixing device of the above-mentioned fungus planting system have a structure that makes it difficult to plant fungi and does not impair the air permeability of the planting medium. In addition, it is desirable that the structural member constituting the frame body does not have a sterilizing effect, and examples of such a material include acrylic resin, polyethylene terephthalate (PET) resin, and polypropylene resin. The culture medium fixing device of the present invention further includes a weight measuring unit, and the weight measuring unit further includes a predetermined number of fungi contained in the bacterial solution and the weight of the bacterial solution attached to the planting medium. From the above, it is more preferable to have a fixed inoculum count measuring means for calculating the number of inoculated plants that have been planted in the planting medium. Hereinafter, the culture medium fixture of the present invention will be described in more detail with reference to the drawings. FIG. 3 is a schematic side view of the culture medium fixing device for explaining a configuration example of the culture medium fixing tool of the present invention, and FIG. 4 is a schematic front view of the culture medium fixing tool. As described above, in the culture medium fixture B, the
本発明の（１）除菌率の測定方法において、各工程を実施する装置、システムは特に制限されるものではないが、本発明の（２）除菌率測定システムを利用すると、各工程をより好適に実施することができる。本発明の（２）除菌率測定システムは、上記菌類定植システム、菌類が定植された定植用培地を除菌する除菌装置、除菌された定植用培地から残存する菌類を洗い出して回収する菌類回収装置（ストマッカー袋、ストマッカー）と、回収した菌類を培養する培養用培地と、回収した菌類を含む回収菌液を培養用培地に塗布する回収菌液塗布装置と、回収した菌類を培養する恒温槽と、培養用培地で培養された菌類の菌数を計測するためのコロニーカウンターを備えた残存菌類測定システムを備えたものであり、これらの詳細は、本発明の測定方法の説明において上述した通りである。 In the (1) sterilization rate measurement method of the present invention, the apparatus and system for carrying out each step are not particularly limited. However, when the ( 2 ) sterilization rate measurement system of the present invention is used, each step is performed. It can implement more suitably. The ( 2 ) sterilization rate measuring system of the present invention includes the above fungus planting system, a sterilization apparatus for sterilizing a planting medium in which fungi are planted, and washing and collecting remaining fungi from the sterilized planting medium. A fungus recovery device (stomacker bag, stomacher), a culture medium for culturing the recovered fungi, a recovered fungus application device for applying a recovered fungus solution containing the recovered fungi to the culture medium, and culturing the recovered fungi A thermostat and a residual fungus measurement system provided with a colony counter for measuring the number of fungi cultured in a culture medium, the details of which are described above in the description of the measurement method of the present invention. That's right.
なお、本発明は、上記構成に限定されるものではなく、本発明の要旨を逸脱しない範囲で種々変更することができる。 In addition, this invention is not limited to the said structure, A various change can be made in the range which does not deviate from the summary of this invention.
以下、実施例及び比較例を示して本発明をより具体的に説明するが、本発明は、下記実施例に限定されるものではない。 EXAMPLES Hereinafter, although an Example and a comparative example are shown and this invention is demonstrated more concretely, this invention is not limited to the following Example.
［実施例１〜６］
＜実験装置及び試料＞
圧縮空気霧化装置：ＩＷＡＴＡ社製コンプレッサー（ＩＳ−８００Ｊ）
ＩＷＡＴＡ社製エアーブラシ（ＨＰ−ＣＰ）、ノズル口径０．３ｍｍ
菌液：大腸菌：Ｅ．ｃｏｌｉ ＮＢＲＣ３９７２（前培養を３回行った菌体を利用）を下記表１に示す噴霧菌数となるように生理食塩水を用いて調製
定植用培地：１５０ｍｍ×１５０ｍｍの布（財団法人日本規格協会 ＪＩＳ染色堅ろう度試験用単一繊維布 毛）を１２１℃、１５分間のオートクレーブ後、５０℃で８時間乾燥することにより殺菌
[Examples 1 to 6]
<Experimental equipment and sample>
Compressed air atomizer: IWATA compressor (IS-800J)
IWATA air brush (HP-CP), nozzle diameter 0.3mm
Bacterial fluid: E. coli: E. coli. E. coli NBRC 3972 (using cells that had been pre-cultured 3 times) was prepared using physiological saline so that the number of sprayed bacteria shown in Table 1 below was established. Planting medium: 150 mm × 150 mm cloth (Japan Standards Association) JIS dyeing fastness test single fiber cloth (hair) is autoclaved at 121 ° C for 15 minutes and then sterilized by drying at 50 ° C for 8 hours.
＜測定方法＞
（１）図２に示す圧縮空気霧化装置１１（図中、１はエアーブラシ、１２はコンプレッサー）を用いて、定植用培地１３をエアーブラシ１の先端部から４００ｍｍ離した位置でアクリル製の正方形の枠体１４（一辺の長さが１５０ｍｍ、枠の幅１０ｍｍ、厚さ１０ｍｍ）に展張した定植システムＡを用いて菌液５ｍｌを噴霧した。このときのコンプレッサー１２の圧力は、３．５ｋｇ／ｃｍ２とした。定植用培地における塗布形状を別途測定したところ、直径約１８０ｍｍの円形であり、面積は２５，４５０ｍｍ２となった。
（２）噴霧前後の布の重量を秤により測定し、菌液噴霧による重量増加を確認した。
（３）菌液を噴霧した布を培地固定具から外し、ストマッカー袋にいれ、５０ｍｌ生理食塩水を加えてストマッカー（インターラブ社製）に取り付け、６０秒間ストマッカー処理を行って菌を洗い出し、その後、１０倍程度に希釈して、菌液塗布装置（株式会社ＧＳＩクレオス製スパイラルプレーター ＥＤＤＹ ＪＥＴ）を用い、標準寒天培地に塗布した。培養温度３７℃で４８時間培養後の菌数（以下、回収定植菌数）をコロニーカウンターを用いて計数した。
（４）噴霧菌数と重量増加から重量定植菌数を算出した。
上記の結果を下記表１及び図５に示す。図５に示すグラフは、重量定植菌数と回収定植菌数との相関性を示すものであり、各実験結果をプロットすると共に、これらの値から最小二乗法により計算して求めた関係式、相関係数及び検量線を示した。
<Measurement method>
(1) Using the
(2) The weight of the cloth before and after spraying was measured with a scale, and an increase in weight due to the spraying of the bacterial solution was confirmed.
(3) Remove the cloth sprayed with the bacterial solution from the medium fixture, put it in a stomacher bag, add 50 ml of physiological saline, attach it to the stomacher (manufactured by Interlab), perform the stomacher treatment for 60 seconds to wash out the bacteria, It diluted about 10 times, and it apply | coated to the standard agar medium using the fungus liquid application | coating apparatus (GSI Creos Co., Ltd. spiral plater EDDY JET). The number of bacteria after culturing at a culture temperature of 37 ° C. for 48 hours (hereinafter, the number of recovered inoculated bacteria) was counted using a colony counter.
(4) The weight fixed inoculation number was calculated from the number of spray bacteria and the increase in weight.
The above results are shown in Table 1 and FIG. The graph shown in FIG. 5 shows the correlation between the number of weight-fixed inoculations and the number of recovered fixed-inoculations, plotting the results of each experiment, and the relational expression obtained by calculating from these values by the least square method, The correlation coefficient and calibration curve are shown.
上記結果によれば、重量定植菌数が５×１０４〜２×１０５個の範囲で、重量定植菌数と回収定植菌数とが良好な正の相関性を示すことが認められた。 According to the above results, it was confirmed that the number of weight-fixed inoculums and the number of recovered fixed-plants showed a positive correlation in a range of 5 × 10 4 to 2 × 10 5
［実施例７〜１０］
＜実験装置及び試料＞
圧縮空気霧化装置：ＩＷＡＴＡ社製コンプレッサー（ＩＳ−８００Ｊ）
ＩＷＡＴＡ社製エアーブラシ（ＨＰ−ＣＰ）、ノズル口径０．３ｍｍ
菌液：大腸菌：Ｅ．ｃｏｌｉ ＮＢＲＣ３９７２（前培養を３回行った菌体を利用）を下記表２に示す噴霧菌数となるように生理食塩水を用いて調製
定植用培地：１５０ｍｍ×１５０ｍｍの布（財団法人日本規格協会 ＪＩＳ染色堅ろう度試験用単一繊維布 毛）を１２１℃、１５分間のオートクレーブ後、５０℃で８時間乾燥することにより殺菌
[Examples 7 to 10]
<Experimental equipment and sample>
Compressed air atomizer: IWATA compressor (IS-800J)
IWATA air brush (HP-CP), nozzle diameter 0.3mm
Bacterial fluid: E. coli: E. coli. E. coli NBRC 3972 (using cells that had been pre-cultured 3 times) was prepared using physiological saline so that the number of spray bacteria shown in Table 2 below was established. Planting medium: 150 mm × 150 mm cloth (Japan Standards Association) JIS dyeing fastness test single fiber cloth (hair) is autoclaved at 121 ° C for 15 minutes and then sterilized by drying at 50 ° C for 8 hours.
＜測定方法＞
（１）上記実験例と同じように図２に示す定植システムＡを用いて菌液５ｍｌを噴霧した。このときのコンプレッサー１２の圧力は、３．５ｋｇ／ｃｍ２とした。定植用培地における塗布形状を別途測定したところ、直径約１８０ｍｍの円形であり、面積は２５，４５０ｍｍ２となった。
（２）噴霧前後の布の重量を秤１５により測定し、菌液噴霧による重量増加を確認した。
（３）菌液を噴霧した布を培地固定具から外し、ストマッカー袋にいれ、５０ｍｌ生理食塩水を加えてストマッカー（インターラブ社製）に取り付け、６０秒間ストマッカー処理を行って菌を洗い出し、その後、１０倍程度に希釈して、菌液塗布装置（株式会社ＧＳＩクレオス製スパイラルプレーター ＥＤＤＹ ＪＥＴ）を用い、標準寒天培地に塗布した。培養温度３７℃で４８時間培養後の菌数（以下、回収定植菌数）をコロニーカウンターを用いて計数した。
（４）噴霧菌数と重量増加から算出（噴霧菌数×重量増加）した重量定植菌数に対する回収定植菌数の割合を算出して、定植・回収率とした。
上記の結果を下記表２に示す。
<Measurement method>
(1) 5 ml of the bacterial solution was sprayed using the planting system A shown in FIG. The pressure of the
(2) The weight of the cloth before and after spraying was measured with a
(3) Remove the cloth sprayed with the bacterial solution from the medium fixture, put it in a stomacher bag, add 50 ml of physiological saline, attach it to the stomacher (manufactured by Interlab), perform the stomacher treatment for 60 seconds to wash out the bacteria, It diluted about 10 times, and it apply | coated to the standard agar medium using the fungus liquid application | coating apparatus (GSI Creos Co., Ltd. spiral plater EDDY JET). The number of bacteria after culturing at a culture temperature of 37 ° C. for 48 hours (hereinafter, the number of recovered inoculated bacteria) was counted using a colony counter.
(4) The ratio of the number of recovered fixed inoculums to the number of fixed inoculated bacteria calculated from the number of sprayed bacteria and the increase in weight (the number of sprayed bacteria x the increase in weight) was calculated as the fixed planting / recovery rate.
The results are shown in Table 2 below.
上記表２の結果によれば、本発明における菌類定植工程、上記菌類の定植方法において、定植・回収された菌数は、噴霧菌数に関係なく、ほぼ一定の数値を与えることが認められた。上記表２に示した実施例は、それぞれ異なった日時に行っており、本発明における菌類定植工程、上記菌類の定植方法が高い再現性があることが認められた。 According to the results of Table 2 above, in the fungus planting step and the fungus planting method of the present invention, it was confirmed that the number of planted and recovered bacteria gave a substantially constant value regardless of the number of sprayed bacteria. . The examples shown in Table 2 were performed at different dates, and it was confirmed that the fungus planting step and the fungus planting method in the present invention had high reproducibility.
［実施例１１〜１５及び比較例１〜３］
＜実験装置及び試料＞
圧縮空気霧化装置：ＩＷＡＴＡ社製コンプレッサー（ＩＳ−８００Ｊ）
ＩＷＡＴＡ社製エアーブラシ（ＨＰ−ＣＰ）、ノズル口径０．３ｍｍ
菌液：大腸菌：Ｅ．ｃｏｌｉ ＮＢＲＣ３９７２（前培養を３回行った菌体を利用）
２．９０×１０５個／ｇに調製
定植用培地：布（財団法人日本規格協会 ＪＩＳ染色堅ろう度試験用単一繊維布 毛）
１５０ｍｍ×１５０ｍｍ、殺菌は１２１℃、１５分間のオートクレーブ後、５０℃で８時間乾燥することにより行った。
除菌剤：安全環境研究所社製衛生水：弱酸性次亜塩素酸水、「アミスティー」（登録商標）。除菌剤濃度は、商品に表記された弱酸性次亜塩素酸濃度２００ｐｐｍという記載に基づき、弱酸性次亜塩素酸濃度が下記表３に示す濃度となるように精製水で希釈して実験に供した。
[Examples 11 to 15 and Comparative Examples 1 to 3]
<Experimental equipment and sample>
Compressed air atomizer: IWATA compressor (IS-800J)
IWATA air brush (HP-CP), nozzle diameter 0.3mm
Bacterial fluid: E. coli: E. coli. E. coli NBRC3972 (using cells that had been pre-cultured 3 times)
2. 90 × 10 5 pieces / g prepared planting medium: cloth (single fiber cloth for JIS dyeing fastness test)
Sterilization was performed by autoclaving at 121 ° C. for 15 minutes and then drying at 50 ° C. for 8 hours.
Disinfectant: Sanitary water manufactured by Safety and Environmental Research Institute, Inc .: Weakly acidic hypochlorous acid water, “Amisty” (registered trademark). The disinfectant concentration is based on the description of weakly acidic hypochlorous acid concentration of 200 ppm indicated on the product, and diluted with purified water so that the weakly acidic hypochlorous acid concentration becomes the concentration shown in Table 3 below. Provided.
実施例１１〜１４として、前記実施例の大腸菌の布への定植方法と同様の条件で布に菌液を噴霧し、噴霧後の布の重量増加（噴霧重量）と噴霧した菌液中の菌数から定植菌数（重量定植菌数）を算出した。この布に対して、下記表３に示す除菌剤濃度に調製した除菌剤を用いて、下記表３に示す除菌方法により除菌処理を行った。なお、表３の除菌方法としてジェットノズルと記載した例は、除菌剤の噴霧量を５ｍｌとし、前記実施例の大腸菌の布への定植方法と同様の定植システムを用いて同様の条件で布に噴霧した。超音波霧化装置については、安全環境研究所製ＵＤ−２００ ＩＩＩ超音波霧化器を使用し、１００ｍｌ／時間の噴霧条件によって布に噴霧した。除菌処理後の布は、前記実施例に記載した定植・回収率の測定方法と同様にストマッカー袋にいれ、５０ｍｌの生理食塩水とともにストマッカー処理を行って菌を洗い出し、その後、１０倍程度に希釈して標準寒天培地に塗布した。温度３７℃で４８時間培養後の回収菌数（残存菌数）をコロニーカウンターにより計数した。また、（重量定植菌数−残存菌数）÷重量定植菌数×１００＝除菌率（％）により、除菌率を算出した。これらの結果を下記表３に併記する。 As Examples 11-14, the fungus liquid was sprayed on the cloth under the same conditions as the method for planting Escherichia coli on the cloth of the previous example, the weight of the cloth after spraying (spray weight) and the bacteria in the sprayed fungus liquid The fixed inoculation number (weight fixed inoculation number) was calculated from the number. The cloth was sterilized by the sterilization method shown in Table 3 below using the sterilizing agent prepared in the concentration of the sterilizing agent shown in Table 3 below. In addition, in the example described as jet nozzle as the sterilization method in Table 3, the spray amount of the sterilization agent is 5 ml, and the same conditions are used by using the same planting system as the planting method of E. coli on the cloth of the above example. Sprayed on cloth. For the ultrasonic atomizer, a UD-200 III ultrasonic atomizer manufactured by National Institute for Safety and Environment was used and sprayed onto the cloth under a spraying condition of 100 ml / hour. The cloth after the sterilization treatment is put in a stomacher bag in the same manner as the method for measuring the fixed planting / recovery described in the above example, and the bacteria are washed out by performing the stomacher treatment with 50 ml of physiological saline, and then about 10 times. Diluted and applied to standard agar medium. The number of recovered bacteria (number of remaining bacteria) after culturing at a temperature of 37 ° C. for 48 hours was counted with a colony counter. Moreover, the sterilization rate was calculated by (weight constant inoculation number−remaining cell number) ÷ weight constant inoculation number × 100 = eradication rate (%). These results are also shown in Table 3 below.
実施例１５として、前記実施例の大腸菌の布への定植方法と同様の条件で銀イオンを２０ｐｐｍ含む溶液（有限会社ラヴァストーリー社製、商品名：ナノアグラ）２０ｍｌに布を浸し、乾燥した後、菌液を噴霧し、噴霧後の布の重量増加（噴霧重量）と噴霧した菌液中の菌数から定植菌数（重量定植菌数）を算出した。菌液を噴霧した布は、前記実施例に記載した定植・回収率の測定方法と同様にストマッカー袋にいれ、５０ｍｌの生理食塩水とともにストマッカー処理を行って菌を洗い出し、その後、１０倍程度に希釈して標準寒天培地に塗布した。温度３７℃で４８時間培養後の回収菌数（残存菌数）をコロニーカウンターにより計数した。また、（重量定植菌数−残存菌数）÷重量定植菌数×１００＝除菌率（％）により、除菌率を算出した。この結果を下記表３に併記する。 As Example 15, the cloth was immersed in 20 ml of a solution containing 20 ppm of silver ions under the same conditions as the method for planting Escherichia coli on the cloth of the above Example (product name: Nano Agra), and dried. The bacterial solution was sprayed, and the fixed plant count (weight fixed plant count) was calculated from the weight increase of the cloth after spraying (spray weight) and the number of bacteria in the sprayed bacterial solution. The cloth sprayed with the fungus solution is put into a stomacher bag in the same manner as the method for measuring the fixed planting / recovery rate described in the above example, and the stomacher treatment is performed with 50 ml of physiological saline to wash out the bacteria. Diluted and applied to standard agar medium. The number of recovered bacteria (number of remaining bacteria) after culturing at a temperature of 37 ° C. for 48 hours was counted with a colony counter. Moreover, the sterilization rate was calculated by (weight constant inoculation number−remaining cell number) ÷ weight constant inoculation number × 100 = eradication rate (%). The results are also shown in Table 3 below.
次に比較例として、通気性を有しない培地としてシャーレ寒天培地を用い、菌液塗布装置を用いて標準寒天培地に上記大腸菌を定植し、比較例１については、温度３７℃で４８時間培養後の回収菌数を計数した。比較例２、３については、大腸菌を定植した培地に対して、前記実施例と同様に下記表３に示す除菌剤濃度に調整した除菌剤を用いて下記表３に示す除菌方法により除菌処理を行い、温度３７℃で４８時間培養後の回収菌数を計数した。比較例１の回収個数に対する比較例２、３の回収菌数の割合を算出して、除菌率とした。結果を下記表３に併記する。 Next, as a comparative example, a petri dish agar medium is used as a non-breathable medium, and the above-mentioned E. coli is planted on a standard agar medium using a bacterial solution coating apparatus. In Comparative Example 1, the culture is performed at a temperature of 37 ° C. for 48 hours. The number of recovered bacteria was counted. For Comparative Examples 2 and 3, using the disinfectant adjusted to the disinfectant concentration shown in Table 3 below in the same manner as in the above Example for the medium in which E. coli was planted, the disinfecting method shown in Table 3 below was used. Bacteria-removing treatment was performed, and the number of recovered bacteria after culturing at a temperature of 37 ° C. for 48 hours was counted. The ratio of the number of recovered bacteria in Comparative Examples 2 and 3 to the number of recovered cells in Comparative Example 1 was calculated and used as the sterilization rate. The results are also shown in Table 3 below.
上記表３の結果によれば、本発明の菌類定植工程、上記菌類の定植方法を用いた通気性を有する定植用培地への菌類の定植と、前記菌類を定植された定植用培地への除菌手段による除菌により、前記除菌手段の検証（ここでは、除菌率９４％以上）を行えることが確認された。更にまた、除菌手段に用いる除菌剤濃度を変えた場合、高い除菌効果が見込まれる除菌剤濃度の高い実施例において、除菌剤濃度の低い実施例よりも高い除菌率が得られることが確認された。同じ除菌手段による同様の除菌を行った場合、従来用いられている通気性を持たないシャーレ寒天培地においては、除菌率が１０％程度と比較的低かった。これらのことから、本発明の菌類定植工程、上記菌類の定植方法は、除菌率の測定方法としても有用であることが示された。 According to the results of Table 3 above, the fungus planting step of the present invention, the planting of the fungus into the planting medium having air permeability using the fungus planting method, and the removal of the fungus into the planting medium in which the fungus has been planted It was confirmed that the sterilization means can be verified (in this case, the sterilization rate is 94% or more) by sterilization by the microbial means. Furthermore, when the concentration of the disinfectant used for the disinfecting means is changed, a higher disinfecting rate is obtained in the example having a high disinfectant concentration that is expected to have a high disinfecting effect than in the example having a low disinfectant concentration. It was confirmed that When similar sterilization was carried out by the same sterilization means, the sterilization rate of the conventional petri dish agar medium without air permeability was relatively low at about 10%. From these, it was shown that the fungus planting step of the present invention and the fungus planting method are also useful as a method for measuring the sterilization rate.
［実施例１６〜１９］
実施例１６、１７は、それぞれ菌類を定植した定植用培地（布）をデシケータ内（湿度５５％、温度２７℃）に２４時間放置した以外は、上記実施例７（噴霧菌数２．９０×１０５個／ｇ）と同様にして、重量定植菌数（定植処理後）、回収定植菌数（デシケータ内放置後）、定植・回収率を求め、実施例１８、１９は、それぞれ実施例１６、１７と同様にデシケータ内に放置した定植用培地に上記実施例１１と除菌剤濃度を１９２ｐｐｍとした以外は同様の除菌処理を施し、同様にして残存菌数（デシケータ内放置、除菌処理後）を求め、実施例１６、１７の回収定植菌数の平均値とそれぞれの残存菌数とから除菌率を求めた。結果を下記表４に示す。
[Examples 16 to 19]
Examples 16 and 17 were the same as in Example 7 (sprayed bacteria count 2.90 ×) except that the planting medium (cloth) in which the fungi were planted was left in a desiccator (humidity 55%, temperature 27 ° C.) for 24 hours. 10 5 pieces / g), the number of fixed planted weights (after planting treatment), the number of recovered planted plants (after leaving in a desiccator), and the fixed planting / recovery rate were obtained. As in Example 17, the planting medium left in the desiccator was subjected to the same sterilization treatment except that the concentration of the sterilizing agent was changed to 192 ppm as in Example 11 above. After the treatment, the sterilization rate was determined from the average value of the recovered fixed inoculum numbers of Examples 16 and 17 and the number of each remaining bacteria. The results are shown in Table 4 below.
上記の結果によれば、本発明の方法において定植用培地に付着した菌類の個数が１０のオーダ程度の少ない個数であっても、定植用培地から再現性良く回収して菌数を測定することができ、また、定植用培地に付着した菌類が２００個程度の少ない個数であっても、除菌率を測定して、除菌効果を評価することができることが認められた。 According to the above results, even if the number of fungi adhering to the planting medium in the method of the present invention is a small number on the order of 10, the number of bacteria can be recovered from the planting medium with good reproducibility and measured. In addition, even when the number of fungi attached to the medium for planting was as small as about 200, it was found that the sterilization effect can be measured to evaluate the sterilization effect.
Ａ 菌類定植システム
Ｂ 培地固定具
１ 圧縮空気霧化装置本体
２ ジェットノズル
５ 通気路（圧力搬送手段）
６ 菌液流路（菌液搬送手段）
７ 菌液
８ 菌液容器（菌液保存手段）
１１ 圧縮空気霧化装置
１２ コンプレッサー(圧力発生手段)
１３ 定植用培地
１４ 枠体
１５ 秤（重量測定手段）
A Fungal planting system
6 Bacterial fluid flow path (bacterial fluid transport means)
7
11
13 Medium for planting 14
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