JP5109128B2 - 植物の分化・生長を制御する遺伝子、並びにその利用 - Google Patents
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Description
Davies, P. J., Plant Hormones (Kluwer Academic, Dordrecht, Netherlands, 1995) Ikeda, A. et al., Plant Cell. 13, 999-1010 (2001) Itoh, H. et al., Plant Cell 14, 57-70 (2002) Sasaki, A. et al., Science 299, 1896-1898 (2003) Peng, J. et al., Genes Dev. 11, 3194-3205 (1997) Silverstone, A. L. et al., Plant Cell 2, 155-169 (1998) Gubler, F. et al., Plant Physiol. 129, 191-200 (2002) Itoh, H. et al., Trends Plant Sci. 8, 492-497 (2003) McGinnis, K. M. et al., Plant Cell. 15, 1120-1130 (2003) Lovegrove, A. et al., Plant J. 15, 311-320 (1998) Nakajima, M. et al., Biochem. Biophys. Res. Comm. 241, 782-786 (1997)
〔1〕以下の(a)から(c)のいずれかに記載の蛋白質、
(a)配列番号:2、5、7、または9に記載のアミノ酸配列を含む蛋白質、
(b)配列番号:2、5、7、または9に記載のアミノ酸配列において1または複数のアミノ酸が置換、欠失、および/または挿入されたアミノ酸配列を含み、ジベレリンと結合する活性を有する蛋白質、
(c)配列番号:1、4、6、または8に記載の塩基配列および/またはその相補配列からなる核酸から調製したプローブとストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸がコードする蛋白質であって、ジベレリンと結合する活性を有する蛋白質、
〔2〕以下の(a)から(c)のいずれかに記載の蛋白質である、〔1〕に記載の蛋白質、
(a)配列番号:2に記載のアミノ酸配列を含む蛋白質、
(b)配列番号:2に記載のアミノ酸配列において1または複数のアミノ酸が置換、欠失、および/または挿入されたアミノ酸配列を含み、ジベレリンと結合する活性を有する蛋白質、
(c)配列番号:1に記載の塩基配列および/またはその相補配列からなる核酸から調製したプローブとストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸がコードする蛋白質であって、ジベレリンと結合する活性を有する蛋白質、
〔3〕配列番号:2、5、7、または9に記載のアミノ酸配列を含む、〔1〕または〔2〕に記載の蛋白質、
〔4〕配列番号:2に記載のアミノ酸配列を含む、〔2〕に記載の蛋白質、
〔5〕単子葉植物の蛋白質である、〔1〕から〔4〕のいずれかに記載の蛋白質、
〔6〕〔1〕から〔5〕のいずれかに記載の蛋白質をコードする核酸、
〔7〕〔6〕に記載の核酸を含むベクター、
〔8〕〔6〕に記載の核酸が導入された形質転換細胞、
〔9〕ジベレリン感受性が上昇した植物細胞である、〔8〕に記載の形質転換細胞、
〔10〕〔6〕に記載の核酸が導入された形質転換植物体であって、ジベレリン感受性が上昇した植物体、
〔11〕単子葉植物である、〔10〕に記載の形質転換植物体、
〔12〕〔10〕または〔11〕に記載の形質転換植物体の繁殖材料、
〔13〕〔1〕から〔5〕のいずれかに記載の蛋白質に結合する抗体またはその抗原結合断片を含むポリペプチド、
〔14〕〔1〕から〔5〕のいずれかに記載の蛋白質の発現を抑制する核酸を発現するベクター、
〔15〕〔14〕に記載のベクターが導入された形質転換細胞、
〔16〕ジベレリン感受性が低下した植物細胞である、〔15〕に記載の形質転換細胞、
〔17〕〔14〕に記載のベクターが導入された形質転換植物体であって、ジベレリン感受性が低下した植物体、
〔18〕単子葉植物である、〔17〕に記載の形質転換植物体、
〔19〕〔17〕または〔18〕に記載の形質転換植物体の繁殖材料、
〔20〕ジベレリン感受性を上昇または低下させる方法であって、〔1〕から〔5〕のいずれかに記載の蛋白質の発現を、それぞれ上昇または低下させる工程を含む方法、
〔21〕ジベレリン高または低感受性植物体の製造方法であって、〔1〕から〔5〕のいずれかに記載の蛋白質の発現を、それぞれ上昇または低下させた植物細胞から植物体を再生させる工程を含む方法、
〔22〕ジベレリン応答性のアッセイ方法であって、〔1〕から〔5〕のいずれかに記載の蛋白質の発現を上昇または低下させた植物細胞または植物体にジベレリンを接触させる工程、および該細胞または該植物体のジベレリン応答を検出する工程、を含む方法、
〔23〕ジベレリン応答性のアッセイ方法であって、〔1〕から〔5〕のいずれかに記載の蛋白質の発現を上昇または低下させた植物細胞または植物体に被験化合物を接触させる工程、および該細胞または該植物体のジベレリン応答を検出する工程、を含む方法、
〔24〕ジベレリンを接触させる工程をさらに含む、〔23〕に記載の方法、
〔25〕ジベレリン応答を制御する化合物の選択方法であって、
(a)〔1〕から〔5〕のいずれかに記載の蛋白質の発現を上昇または低下させた植物細胞または植物体に被験化合物を接触させる工程、
(b)該細胞または植物体のジベレリン応答を検出する工程、
(c)ジベレリン応答を上昇または低下させる化合物を選択する工程、を含む方法、
〔26〕工程(a)をジベレリン存在下で行う、〔25〕に記載の方法、
〔27〕〔1〕から〔5〕のいずれかに記載の蛋白質およびジベレリンを接触させる工程を含む、該蛋白質およびジベレリンを結合させる方法、
〔28〕ジベレリンの結合を検出する方法であって、〔1〕から〔5〕のいずれかに記載の蛋白質にジベレリンを接触させる工程、および該蛋白質とジベレリンとの結合を検出する工程、を含む方法、
〔29〕ジベレリンと〔1〕から〔5〕のいずれかに記載の蛋白質との相互作用を制御する化合物のアッセイ方法であって、
(a)被験化合物、ジベレリン、および該蛋白質を接触させる工程、および
(b)ジベレリンと該蛋白質との結合を検出する工程、を含む方法、
〔30〕ジベレリンと〔1〕から〔5〕のいずれかに記載の蛋白質との相互作用を阻害する化合物の選択方法であって、
(a)被験化合物、ジベレリン、および該蛋白質を接触させる工程、
(b)ジベレリンと該蛋白質との結合を検出する工程、および
(c)該結合を阻害する化合物を選択する工程、を含む方法、
〔31〕〔1〕から〔5〕のいずれかに記載の蛋白質およびDELLA蛋白質を接触させる工程を含む、これらの蛋白質を結合させる方法、
〔32〕〔1〕から〔5〕のいずれかに記載の蛋白質およびジベレリンを含む複合体、
〔33〕〔1〕から〔5〕のいずれかに記載の蛋白質およびDELLA蛋白質を含む複合体、
〔34〕DELLA蛋白質をさらに含む、〔32〕に記載の複合体、に関する。
以下の実施例で、イネ品種 Oryza sativa L. cv. Taichung 65, japonica (変異体が由来する元々の系統) および4つのgid1変異アレル(gid1-1 から gid1-4)およびslender rice1 (slr1-1)(Ikeda, A. et al., Plant Cell. 13, 999-1010 (2001))を例示として用いた。gid1変異アレルは以下の変異原に起因する;N-methyl-N-nitrosourea (gid1-1)、細胞培養 (gid1-2 およびgid1-4)、およびγ線 (gid1-3)。全てのイネ植物は温室で30℃(昼)および24℃(夜)で生育させた。
イネの第二葉鞘の伸長および無胚半切種子(embryoless half seeds)のαアミラーゼ誘導におけるGA応答性試験は、(Ueguchi-Tanaka, M. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA , 97, 11638-11643 (2000))に記載された方法で実施した。
組み換えイネGID1蛋白質の産生のため、野生型および変異型GID1の全長cDNAに対応するDNA配列をPCRにより増幅した。変異を持つものと持たないGID1 cDNA配列をpGEX-4T (Pharmacia) に挿入した。相補(complementation)試験では、BACクローンからのイネゲノムDNAをPstIで消化し、GID1配列の全長をカバーする6.7 kbのDNA断片を単離してpBluescript (R) ベクターにクローニングした。この断片を平滑末端化して、ハイグロマイシン耐性のバイナリーベクター pGI-Hm12 (Hm-2を改変;Sato, Y. et al., Plant Mol. Biol., 1998, 38:983-998) のSmaIサイトに挿入した。SLR1プロモーター - SLR1 - GFPの構築は、以前記載されている(Itoh, H. et al., Plant Cell 14, 57-70 (2002))。これらの構築物は、(Hiei, Y. et al., Plant J. 6, 270-282 (1994))に記載のように、Agrobacterium tumefaciensを介した形質転換によりイネ細胞に導入した。
イネの内在性GAの定量解析は、以前記載したように、ガスクロマトグラフィー選択イオンモニタリング(gas chromatography-selected ion monitoring)により行った(Kobayashi, M. et al., Biosci. Biotechnol. Biochem. 59, 1969-1970 (1995))。RNAゲルブロット解析およびウェスタンブロット解析は以前の記載のように行った(Itoh, H. et al., Plant Cell 14, 57-70 (2002))。
ジベレリン結合アッセイでは、[1,2,16,17-3H4]16,17-dihydro-GA4 を標識GA4として用いた。インビトロでのGA結合アッセイは以前の方法に改良を加えて行った(Nakajima, M. et al., Biochem. Biophys. Res. Comm. 241, 782-786 (1997))。精製した組み換えGID1蛋白質 (400 pmol) を300μlの結合バッファー [20 mM Tris-HCl (pH7.6), 5 mM 2-mercaptoethanol, および0.1 M NaCl] に溶解し、非標識GA4の非存在下 (全結合) または833倍過剰量の非標識GA4 の存在下(非特異的結合) で、100μlの3H 4 -16,17-dihydroGA4 (6 pmol) と、25℃で2時間インキュベートした。その後、0.1 mlの反応混合液をNAP-5 カラム (Amersham Biosciences, Piscataway, NJ) にかけた。結合バッファーによる溶出液 (0.6 ml) を捨てた後、続く溶出液 (0.2 ml) を回収し、その放射活性を測定した。全結合量から非特異的結合量を差し引いて、置換可能なGA結合部位数を反映する特異的結合活性を算出した。他のGAについても、上記と同様に実施することができる。
ジベレリン知覚に関与する遺伝子を単離するため、イネのGA非感受性矮性変異体 (gid) をスクリーニングし、幾つかのgid変異を異なる遺伝子座で同定した。その中の1つの変異体であるgid1-1は、イネでこれまで知られているGA関連変異体(Sasaki, A. et al., Science 299, 1896-1898 (2003); Itoh, H et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 98, 8909-8914 (2001); Sakamoto, T. et al., Plant Physiol. 134, 1642-1653 (2004))の典型的な表現型である重篤な矮性化と葉身の拡大および緑暗色化を示した(図1a)。この変異は劣性で遺伝し、稔性を持つ花は発生しなかったため、ヘテロ接合体植物として維持した。このgid1植物は、調べた限りどんなGA応答性も示さなかった。野生型植物(WT)では、第2葉鞘の伸長は10-8 M以上のGA3で促進されたが、gid1-1では全く促進されなかった(図1b)。また、野生型の種子では10-9 M以上のGA3でαアミラーゼ活性の誘導が起きたが、gid1-1の種子では起きなかった(図1c)。野生型では、GA3による、GA生合成遺伝子(Thornton, T. M. et al., Trends Plant Sci. 4, 424-428 (1999))SD1/OsGA20ox2(Sasaki, A. et al., Nature 416, 701-702 (2002))の発現のネガティブフィードバックが観察されたが、gid1-1では観察されず、高レベルのSD1 mRNAが蓄積した(図1d)。また、内在性のGAsレベルを測定したところ、gid1-1は野生型に比べ約120倍のGA1 を蓄積していることが判明した(図1e)。これらの結果は全て、gid1-1 がGA非感受性変異体であることを実証している。
GID1の分子機能を解明するため、ポジショナルクローニングによりGID1遺伝子を単離し、4種の変異アレルにおける変異部位を決定した(図2)。予想されたGID遺伝子は1つのイントロンと2つのエクソンを含み、354アミノ酸残基のポリペプチドをコードしている(図2bおよび図3a)。この遺伝子の全長cDNAの配列の解析により、エクソン領域の予想は正確であり、この遺伝子は実際に転写されることが確認された。GID遺伝子の全領域をカバーする6.7 kbのPstI断片をgid1-1 に導入したところ、表現形は正常型に回復することが判明した。
gid1においてGAによるSLR1分解が起きなくなることから(図1f)、本発明者らは、GID1は、GID2のようにSLR1自体の分解に関与しているか、あるいはGAシグナル伝達においてSLR1よりも上流で機能している可能性があると考えた。gid1と他のGA関連変異体の間で表現型を正確に比較したところ、gid1の表現型は、gid2(Sasaki, A. et al., Science 299, 1896-1898 (2003))およびΔDELLA型の優性GA-insensitive dwarf mutants(Itoh, H. et al., Plant Cell 14, 57-70 (2002))などのGA非感受性変異体よりもむしろ、cps(Sakamoto, T. et al., Plant Physiol. 134, 1642-1653 (2004))およびkao(Sakamoto, T. et al., Plant Physiol. 134, 1642-1653 (2004))などのGA欠損変異体の重篤なアレルの方により類似していることが分かった。gid1のこの表現型の特性に基づき、本発明者らは、GID1はGA知覚に関与していると予想した。この可能性を確かめるため、本発明者らは、非平衡ゲルろ過法(Nakajima, M. et al., Biochem. Biophys. Res. Comm. 241, 782-786 (1997))を用いてGID1 と放射性同位元素で標識したGAとの相互作用を直接的に調べた。期待した通り、GID1はトリチウム化GA4 誘導体(3H4-16, 17-dihydroGA4)に対する結合活性を示し、ほとんどの結合は過剰量の非標識 GA4 により置換可能であった。結合が置換可能であったことは、この結合はGA特異的であることを示している。一方、熱変性させたGID1や、組み換えGID2、イネGAシグナル伝達分子の他のメンバーは、いかなる特異的結合活性をも示さなかった。次に、GID1のリガンド特異性をトリチウム化GA4 誘導体および様々なGAの間の競合により試験した。表1に、GID1へのトリチウム化GA4 誘導体の結合の50%阻害に必要な各GAの濃度(IC50)を示す。GID1は、GA4、16,17-dihydroGA4、GA1、およびGA3などの生物活性のあるGAsに高親和性を示したが、生物活性のないGAsにはほとんどまたは全く親和性を示さなかった。これらの各GAのIC50 値は、それぞれの生理学的活性とよく一致している。
[生物活性のあるGA (GA4、16,17-dihydroGA4、GA1、およびGA3)、弱い活性のあるGA (GA35およびGA37)、および不活性のGA (GA4 methyl ester、3-epi-GA4、GA9、およびGA51) を試験した。**:IC50は50%阻害に必要な濃度を表す。またRel%は相対値 (%) を表す]
GID1がGA受容体として働くならば、GID1過剰発現体はGA高感受性(hypersensitive)の表現型を示すことが予想される。そこで、イネアクチン遺伝子の強力なプロモーターの制御下でGID1を過剰発現するトランスジェニックイネ植物を作製した。GID1過剰発現体は、野生型に比べ、高い草丈、薄緑色で長い葉身、分蘗の減少、枯死率の減少を示し、これらは全てGA過剰投与時の表現型に一致する(図4e)。過剰発現体の第二葉鞘の伸長におけるGA応答性は、野生型に比べほぼ100倍高かった(図4f)。
遺伝子配列データベースの検索により、上記で同定したイネGID1(OsGID1)蛋白質のアミノ酸配列と類似する蛋白質をコードする複数の遺伝子をアラビドプシスから見い出した。図5は、OsGID1、およびOsGID1と類似性が高い10のアラビドプシス遺伝子がコードする導出アミノ酸配列のアライメントを示している。2つのイネgid1変異体(図2bおよび図3a)から、Gly-196とArg-251の2つのアミノ酸残基がGAの相互作用に必須であると考えられるが、このうち、Gly残基は図5にリストされた全ての遺伝子に存在するが、Arg残基は上位3つの遺伝子にしか存在しない。このことから、これら3つの候補はOsGID1と同様GA結合活性を有しており、残りは有していないことが示唆された。
上記で同定した3つのAtGID1のGA結合のカイネティクス、リガンド選択性、およびpH依存性を、トリチウム化GA4誘導体 16,17-dihydro-GA4を用いて調べた。16,17-Dihydro-GA4には、C-16位の配置により化学的に2つのアイソフォームが存在するが、2つのアイソフォームともAtGID1に対して同等に結合できた。アラビドプシスのGA欠損変異体ga1-3の発芽において、16,17-dihydro-GA4はGA4の約1/10の生理学的効果を有していた(図8)。まず、過剰量の非標識GA4を添加後の、トリチウム化16,17-dihydro-GA4の各AtGID1との会合の経時特性を、インキュベーション時間および解離時間を様々に変えながら調べた。図9A〜Cの挿入図に示されているように、AtGID1a複合体からのGAの解離はAtGID1b複合体からの解離よりも遅い一方で、AtGID1bのGAとの会合はAtGID1aのそれよりも速く起こった。これに対して、AtGID1cのGAの会合はAtGID1bのそれよりも遅い一方で、AtGID1c複合体とAtGID1b複合体からのGAの解離には、明確な違いはなかった。さらに、様々な濃度のGAの平衡条件で、各AtGID1のGA結合のカイネティクスを解析したところ、AtGID1bの16,17-dihydro-GA4に対する親和性(Kd = 4.8x10-7 M)は、AtGID1a (Kd = 2.0x10-6 M) および AtGID1c (Kd = 1.9x10-6 M) のそれらよりも4倍高いことが判明した(図9A〜C)。
[各GAの作用の評価にIC50値 (M) を採用した。各値は少なくとも2つの測定の平均を表す。GA4 の値を100 (%) とした各GAの相対値を括弧中に示した。H2-GA4, 16,17-dihydro-GA4; GA4-Me, GA4のメチルエステル。]
アラビドプシスは5つのDELLA蛋白質(RGA, GAI, RGL1, RGL2, および RGL3。AtDELLAと総称; Fleet, C.M., and Sun, T.-P. (2005) Curr. Opin. Plant Biol., 8, 77-85;Dill, A., and Sun, T. (2001) Genetics, 159, 777-785)を持つことから、GID1/DELLA蛋白質の組み合わせは15通りが考えられる。そこで酵母Twoハイブリッド (Y2H) 系を用いて、AtGID1-AtDELLAのポジティブな相互作用を検証する2つの実験を行った。最初の実験(アッセイA)では、ポジティブクローンのみが生き残る限定培地を用いた生存コロニーのアッセイを行い、第二の実験(アッセイB)では、AtGID1-AtDELLAの相互作用に対するレポーター遺伝子の産物としてβ-ガラクトシダーゼ活性を測定した。
AtGID1がin vivoにおいてイネGID1 (OsGID1) と同じ機能を有していることを証明するため、各AtGID1遺伝子をAct1の構成的プロモーターの制御下で過剰発現する形質転換体を、イネgid1-1のバックグランドで作製した。具体的には、両端に適当な制限酵素部位 (AtGID1a/cはSmaI部位、AtGID1bはXbaIおよびSmaI部位) を含むAtGID1の全長cDNAをPCRにより調製し、イネアクチンプロモーター (pAct1) およびNOSターミネーターを含むバイナリーベクター (Sentoku, N. et al. (2000) Develop. Biol., 220, 358-364) に挿入した。挿入を確認した後、アグロバクテリウムを介した形質転換によりpAct1-AtGID1断片をイネgid1-1 植物に導入した。
半定量RT-PCRにより、アラビドプシスの様々な器官、具体的には約10 cmの草丈の植物(発芽から40-45日後)の茎 (stems)、花 (flowers)、長角果 (silique)、葉 (leaf)、根 (root)、および浸種した種子 (imbibed seed) におけるAtGID1遺伝子の発現を解析した。全RNAの調製およびRT-PCRは、表3に示した特異的プライマーを用いてKim et al. (Kim, Y.-C. et al. (2005) Plant Cell Physiol., 46, 1317-1325) に従って実施した。上記の発現ベクターに対するプライマーの特異性については確認されている。試行実験により、可視化された各産物の量が一定のダイナミックレンジ内になるように、2サイクルのインターバルで異なるPCRサイクル数を用いて、各遺伝子の適当なPCRサイクル数を決定した。実験は独立に少なくとも2回行い、各回において同様の結果を得た。
────────────────────────────────
AtGID1a, Fwd; 5'-CAGATCAAGAGCAACCTCCTAG-3' (配列番号:17)
AtGID1a, Rev; 5'-CCACAGGCAATACATTCACCTGTGTG-3' (配列番号:18)
AtGID1b, Fwd; 5'-GAACCCTCGAGCTAACCAAACCTCTC-3' (配列番号:19)
AtGID1b, Rev; 5'-GGAGTAAGAAGCACAGGACTTGACTTGC-3' (配列番号:20)
AtGID1c, Fwd; 5'-CTGGCACTTCACCAAGTATTACTG-3' (配列番号:21)
AtGID1c, Rev; 5'-GCCAATAGTGGCTTGCTCCAAG-3' (配列番号:22)
OsActin, Fwd; 5'-TCCATCTTGGCATCTCTCAG-3' (配列番号:23)
OsActin, Rev; 5'-GTACCCTCATCAGGCATCTG-3' (配列番号:24)
AtActin, Fwd; 5'-CGTGTGTGACAATGGTACCGGTATGG-3' (配列番号:25)
AtActin, Rev; 5'-CTGTGAACGATTCCTGGACCTGCCTC-3' (配列番号:26)
────────────────────────────────
(Fwd, フォワードプライマー; Rev, リバースプライマー)
Claims (31)
- 以下の(a)から(c)のいずれかに記載の蛋白質からなるジベレリン結合剤。
(a)配列番号:2、5、7、または9に記載のアミノ酸配列を含む蛋白質。
(b)配列番号:2、5、7、または9に記載のアミノ酸配列において1または複数のアミノ酸が置換、欠失、および/または挿入されたアミノ酸配列を含み、ジベレリンと結合する活性を有する蛋白質。
(c)配列番号:1、4、6、または、配列番号:9のアミノ酸配列をコードするアラビドプシスゲノムイニシアチブジーン(AGI)コードAt5g27320で特定される遺伝子の塩基配列および/またはその相補配列からなる核酸と、5×SSC、7%(W/V) SDS、100μg/ml 変性サケ精子DNA、5×デンハルト液を含む溶液中、60℃でハイブリダイゼーションを行い、その後65℃で0.1×SSC中、振蘯しながら2時間洗浄する条件下でハイブリダイズする核酸がコードする蛋白質であって、ジベレリンと結合する活性を有する蛋白質。 - 以下の(a)から(c)のいずれかに記載の蛋白質。
(a)配列番号:2に記載のアミノ酸配列を含む蛋白質。
(b)配列番号:2に記載のアミノ酸配列において1または複数のアミノ酸が置換、欠失、および/または挿入されたアミノ酸配列を含み、ジベレリンと結合する活性を有する蛋白質。
(c)配列番号:1に記載の塩基配列および/またはその相補配列からなる核酸と、5×SSC、7%(W/V) SDS、100μg/ml 変性サケ精子DNA、5×デンハルト液を含む溶液中、60℃でハイブリダイゼーションを行い、その後65℃で0.1×SSC中、振蘯しながら2時間洗浄する条件下でハイブリダイズする核酸がコードする蛋白質であって、ジベレリンと結合する活性を有する蛋白質。 - 配列番号:2、5、7、または9に記載のアミノ酸配列を含む蛋白質からなる、請求項1に記載のジベレリン結合剤。
- 配列番号:2に記載のアミノ酸配列を含む、請求項2に記載の蛋白質。
- 単子葉植物の蛋白質である、請求項2に記載の蛋白質。
- 請求項1(a)〜(c)のいずれかに記載の蛋白質をコードする核酸の、請求項1に記載のジベレリン結合剤の製造における使用。
- 請求項2または4に記載の蛋白質をコードする核酸。
- 請求項7に記載の核酸を含むベクター。
- 請求項7に記載の核酸が導入された形質転換細胞。
- ジベレリン感受性が上昇した植物細胞である、請求項9に記載の形質転換細胞。
- 請求項7に記載の核酸が導入された形質転換植物体であって、ジベレリン感受性が上昇した植物体。
- 単子葉植物である、請求項11に記載の形質転換植物体。
- 請求項11に記載の形質転換植物体の繁殖材料。
- 請求項2に記載の蛋白質に結合する抗体またはその抗原結合断片を含むポリペプチド。
- 請求項2に記載の蛋白質の発現を抑制する核酸を発現するベクター。
- 請求項15に記載のベクターが導入された形質転換細胞。
- ジベレリン感受性が低下した植物細胞である、請求項16に記載の形質転換細胞。
- 請求項15に記載のベクターが導入された形質転換植物体であって、ジベレリン感受性が低下した植物体。
- 単子葉植物である、請求項18に記載の形質転換植物体。
- 請求項18に記載の形質転換植物体の繁殖材料。
- ジベレリン感受性を上昇または低下させる方法であって、以下の(a)から(c)のいずれかに記載の蛋白質の発現を、それぞれ上昇または低下させる工程を含む方法。
(a)配列番号:2、5、7、または9に記載のアミノ酸配列を含む蛋白質。
(b)配列番号:2、5、7、または9に記載のアミノ酸配列において1または複数のアミノ酸が置換、欠失、および/または挿入されたアミノ酸配列を含み、ジベレリンと結合する活性を有する蛋白質。
(c)配列番号:1、4、6、または、アラビドプシスゲノムイニシアチブジーン(AGI)コードAt5g27320で特定される配列番号:9のアミノ酸配列をコードする遺伝子の塩基配列および/またはその相補配列からなる核酸と、5×SSC、7%(W/V) SDS、100μg/ml 変性サケ精子DNA、5×デンハルト液を含む溶液中、60℃でハイブリダイゼーションを行い、その後65℃で0.1×SSC中、振蘯しながら2時間洗浄する条件下でハイブリダイズする核酸がコードする蛋白質であって、ジベレリンと結合する活性を有する蛋白質。 - ジベレリン高または低感受性植物体の製造方法であって、請求項21の(a)から(c)のいずれかに記載の蛋白質の発現を、それぞれ上昇または低下させた植物細胞から植物体を再生させる工程を含む方法。
- ジベレリン応答性のアッセイ方法であって、請求項21の(a)から(c)のいずれかに記載の蛋白質の発現を上昇または低下させた植物細胞または植物体にジベレリンを接触させる工程、および該細胞または該植物体のジベレリン応答を検出する工程、を含む方法。
- ジベレリン応答性のアッセイ方法であって、請求項21の(a)から(c)のいずれかに記載の蛋白質の発現を上昇または低下させた植物細胞または植物体に被験化合物を接触させる工程、および該細胞または該植物体のジベレリン応答を検出する工程、を含む方法。
- ジベレリンを接触させる工程をさらに含む、請求項24に記載の方法。
- ジベレリン応答を制御する化合物の選択方法であって、
(a)請求項21の(a)から(c)のいずれかに記載の蛋白質の発現を上昇または低下させた植物細胞または植物体に被験化合物を接触させる工程、
(b)該細胞または植物体のジベレリン応答を検出する工程、
(c)ジベレリン応答を上昇または低下させる化合物を選択する工程、を含む方法。 - 工程(a)をジベレリン存在下で行う、請求項26に記載の方法。
- 請求項21の(a)から(c)のいずれかに記載の蛋白質およびジベレリンを接触させる工程を含む、該蛋白質およびジベレリンを結合させる方法。
- ジベレリンの結合を検出する方法であって、請求項21の(a)から(c)のいずれかに記載の蛋白質にジベレリンを接触させる工程、および該蛋白質とジベレリンとの結合を検出する工程、を含む方法。
- ジベレリンと請求項21の(a)から(c)のいずれかに記載の蛋白質との相互作用を制御する化合物のアッセイ方法であって、
(a)被験化合物、ジベレリン、および該蛋白質を接触させる工程、および
(b)ジベレリンと該蛋白質との結合を検出する工程、を含む方法。 - ジベレリンと請求項21の(a)から(c)のいずれかに記載の蛋白質との相互作用を阻害する化合物の選択方法であって、
(a)被験化合物、ジベレリン、および該蛋白質を接触させる工程、
(b)ジベレリンと該蛋白質との結合を検出する工程、および
(c)該結合を阻害する化合物を選択する工程、を含む方法。
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